CN1325444A - 经过特异性灭活丁子香酚和阿魏酸分解代谢的基因构建制备取代酚的生产菌株 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及转化的和/或诱变的单或多细胞生物体,其特征在于,丁子香酚和/或阿魏酸代谢的酶被灭活,使得中间产物松柏醛,松柏醇,阿魏酸,香草醛和/或香草酸被积累。

Description

经过特异性灭活丁子香酚和阿魏酸分解代谢的 基因构建制备取代酚的生产菌株
本发明涉及生产菌株的构建且涉及制备取代的甲氧基苯酚，特别是香草醛的方法。
DE-A4227076(制备取代的甲氧基苯酚的方法，及适用于该目的的微生物)描述了使用一种新的假单胞菌属种类制备取代的甲氧基苯酚。在该文中起始材料是丁子香酚且产物是阿魏酸、香草酸、松柏醇和松柏醛。
由Rosazza等撰写(阿魏酸：一种丰富的芳香族天然产物：J.Ind.Microbiol.15:457-471)的使用阿魏酸可能的生物转化的综述也于1995年出版。
在EP-A0845532中描述了来自假单胞菌属种类的合成松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草酸和香草醛的基因和酶。
英国Norwich郡食品研究所在WO97/35999中描述了将反式-阿魏酸转化成反式-阿魏酰-SCoA酯并随后转化成香草醛的酶及裂解该酯的基因。1998年，该专利的内容以科技文献的形式出版(Gasson等，1998，阿魏酸代谢成香草醛。生物学化学杂志，273:4163-4170:Narbad和Gasson 1998。在新分离的荧光假单胞菌菌株中使用新的CoA-依赖型途径经香草醛代谢阿魏酸。微生物学，144:1397-1405)。
DE-A-19532317描述了使用拟无枝酸菌属种类经发酵从阿魏酸以高产量获得香草醛。
已知方法的缺点在于它们仅能获得极低产量的香草醛或者使用相当昂贵的起始化合物。尽管最后提到的方法(DE-A19532317)确实实现了高产量，但使用假单胞菌属种类HR199和拟无枝酸菌属种类HR167将丁子香酚生物转化成香草醛需要进行2步发酵，因此导致相当昂贵和费时。
因此本发明的目的是构建能以一步方法相当廉价地将原材料丁子香酚转化成香草醛的生物。
借助于构建单细胞的生产菌株或多细胞的生物实现该目的，该菌株的特征在于丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢的酶被灭活使得积累中间产物松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草醛和/或香草酸。
该生产菌株可以是单细胞或多细胞。因此，本发明涉及微生物，植物或动物。而且也可使用从生产品种获得的提取物。根据本发明，优选使用单细胞生物。这些所述的生物可以是微生物或动物或植物细胞。根据本发明，特别优选使用真菌和细菌。最优选的是细菌种类。在其丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢被改变后特别可使用的细菌是红球菌属，假单胞菌属和埃希氏杆菌属的种类。
在最简单的情况下，已知的常规微生物学方法可用于分离根据本发明使用的生物。
因此，可使用酶抑制剂改变丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢中涉及的蛋白质的酶活性。而且，经过突变编码这些蛋白质的基因可改变丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢中涉及的蛋白质的酶活性。该突变可借助于传统方法以随机方式产生，例如经过使用紫外照射或诱导突变的化学剂。
诸如缺失，插入和/或核苷酸交换的重组DNA方法同样适合于分离新生物。因此，例如可使用其它的DNA元件(Ω元件)灭活该生物的基因。合适的载体可用于以改变和/或灭活的基因结构取代完整基因。在本文中，待灭活的基因，和用于灭活的DNA元件可借助于传统克隆技术或借助于聚合酶链式反应(PCR)获得。
例如，在本发明的一个可能的实施方案中，可经过插入Ω元件或导入缺失进入合适的基因中来改变丁子香酚分解代谢和阿魏酸分解代谢。在本文中，可使用上述重组DNA方法灭活编码脱氢酶，合成酶，水合酶-醛缩酶，硫解酶或脱甲基酶的基因的功能以便阻断相关酶的生产。优选的是，该基因是编码松柏醇脱氢酶，松柏醛脱氢酶，阿魏酰CoA合成酶，烯酰CoA水合酶-醛缩酶，β-酮硫解酶，香草醛脱氢酶或香草酸脱甲基酶的基因。非常特别优选的是编码在EP-A0845532中限定的氨基酸序列的基因和/或编码其等位变异体的核苷酸序列。
因此本发明还涉及制备转化生物和突变体的基因结构。
优选采用编码脱氢酶，合成酶，水合酶-醛缩酶，硫解酶或脱甲基酶的核苷酸序列被灭活的基因结构来分离该生物和突变体。特别优选的是编码松柏醇脱氢酶，松柏醛脱氢酶，阿魏酰CoA合成酶，烯酰CoA水合酶-醛缩酶，β-酮硫解酶，香草醛脱氢酶或香草酸脱甲基酶的核苷酸序列被灭活的基因结构。极其优选的基因结构表现为图1a至1r给出的结构，具有图2a至2r所示的核苷酸序列和/或编码其等位变异体的核苷酸序列。在本文中，特别优选的是核苷酸序列1至18。
本发明还包含这些基因结构的部分序列及其功能等同物。功能等同物的意思应理解为该DNA的衍生物，其中个别的核苷酸碱基被交换(摆动交换(Wobbel austausche))而不改变其功能。在蛋白质水平上也可交换氨基酸而不导致其功能改变。
在该基因结构的上游和/或下游可插入一个或多个DNA序列。经过克隆该基因结构，可获得适用于转化和/或转染生物和/或适用于接合转移进生物的质粒或载体。
本发明还涉及用于制备根据本发明转化的生物和突变体的质粒和/或载体。因而这些生物和突变体含有所述的基因结构。因此本发明还涉及含有所说质粒和/或载体的生物。
质粒和/或载体的性质取决于其应用的对象。例如，为了用以Ω元件灭活的基因取代假单胞菌中丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢的完整基因，所需的载体一方面可转移进假单胞菌中(经接合可转移的质粒)，但另一方面不能在这些生物中复制，因此在假单胞菌中是不稳定的(所谓的自杀质粒)。借助于该质粒系统转移进假单胞菌的DNA片段只有当它们经同源重组整合进细菌细胞基因组中时才能保留。
所述的基因结构，载体和质粒可用于制备不同的转化生物或突变体。所说的基因结构可用于以改变的和/或灭活的基因结构取代完整的核酸序列。在这种可经转化或转染或接合获得的细胞中，用改变的和/或灭活的基因结构经同源重组取代完整的基因，因此所得的细胞最终在其基因组中仅具有改变的和/或灭活的基因结构。以这种方式，根据本发明优选可改变和/或灭活基因，以便有关生物能产生松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草醛和/或香草酸。
在DE-A4227076和EP-A0845532中详细描述的菌株假单胞菌属种类HR199(DSM7063)的突变体是根据本发明以这种方式构建的生产菌株的例子，其中相应的基因结构特别是来自图1a至1r与图2a至2r：
1．假单胞菌属种类HR199calAΩKm，含有ΩKm-灭活的calA基因代替编码松柏醇脱氢酶的完整calA基因(图1a；图2a)。
2．假单胞菌属种类HR199calAΩGm，含有ΩGm灭活的calA基因代替编码松柏醇脱氢酶的完整calA基因(图1b；图2b)。
3．假单胞菌属种类HR199calAΔ，含有缺失灭活的calA基因代替编码松柏醇脱氢酶的完整calA基因(图1c；图2c)。
4．假单胞菌属种类HR199calBΩKm，含有ΩKm灭活的calB基因代替编码松柏醛脱氢酶的完整calB基因(图1d；图2d)。
5．假单胞菌属种类HR199calBΩGm，含有ΩGm-灭活的calB基因代替编码松柏醛脱氢酶的完整calB基因(图1e；图2e)。
6．假单胞菌属种类HR199calBΔ，含有缺失灭活的calB基因代替编码松柏醛脱氢酶的完整calB基因(图1f；图2f)。
7．假单胞菌属种类HR199fcsΩKm，含有ΩKm-灭活的fcs基因代替编码阿魏酰CoA合成酶的完整fcs基因(图1g；图2g)。
8．假单胞菌属种类HR199fcsΩGm，含有ΩGm灭活的fcs基因代替编码阿魏酰-CoA合成酶的完整fcs基因(图1h；图2h)。
9．假单胞菌属种类HR199fcsΔ，含有缺失灭活的fcs基因代替编码阿魏酰CoA合成酶的完整fcs基因(图1i；图2i)。
10．假单胞菌属种类HR199echΩKm，含有ΩKm灭活的ech基因代替编码烯酰-CoA水合酶-醛缩酶的完整ech基因(图1j；图2j)。
11．假单胞菌属种类HR199echΩGm，含有ΩGm灭活的ech基因代替编码烯酰-CoA水合酶-醛缩酶的完整ech基因(图1k；图2k)。
12．假单胞菌属种类HR199echΔ，含有缺失灭活的ech基因代替编码烯酰-CoA水合酶-醛缩酶的完整ech基因(图11；图21)。
13．假单胞菌属种类HR199aatΩKm，含有ΩKm-灭活的aat基因代替编码β-酮硫解酶的完整aat基因(图1m，图2m)。
14．假单胞菌属种类HR199aatΩGm，含有ΩGm-灭活的aat基因代替编码β-酮硫解酶的完整aat基因(图1n；图2n)。
15．假单胞菌属种类HR199aatΔ，含有缺失灭活的aat基因代替编码β-酮硫解酶的完整aat基因(图10；20)。
16．假单胞菌属种类HR199vdhΩKm，含有ΩKm-灭活的vdh基因代替编码香草醛脱氢酶的完整vdh基因(图1p；图2p)。
17．假单胞菌属种类HR199vdhΩGm，含有ΩGm-灭活的vdh基因代替编码香草醛脱氢酶的完整vdh基因(图1q；图2q)。
18．假单胞菌属种类HR199vdhΔ，含有缺失灭活的vdh基因代替编码香草醛脱氢酶的完整vdh基因(图1r；图2r)。
19．假单胞菌属种类HR199vdhBΩKm，含ΩKm灭活的vdhB基因代替编码香草醛脱氢酶Ⅱ的完整vdhB基因。
20．假单胞菌属种类HR199vdhBΩGm，含有ΩGm-灭活的vdhB基因代替编码香草醛脱氢酶Ⅱ的完整vdhB基因。
21．假单胞菌属种类HR199vdhBΔ，含有缺失灭活的vdhB基因代替编码香草醛脱氢酶Ⅱ的完整vdhB基因。
22．假单胞菌属种类HR199adHΩKm，含有ΩKm灭活的adh基因代替编码乙醇脱氢酶的完整adH基因。
23．假单胞菌属种类HR199adhΩGm，含有ΩGm-灭活的adh基因代替编码乙醇脱氢酶的完整adh基因。
24．假单胞菌属种类HR199adhΔ，含有缺失灭活的adh基因代替编码乙醇脱氢酶的完整adh基因。
25．假单胞菌属种类HR199vanAΩKm，含有ΩKm灭活的vanA基因代替编码香草酸脱甲基酶α-亚基的完整vanA基因。
26．假单胞菌属种类HR199vanAΩGm，含有ΩGm-灭活的vanA基因代替编码香草酸脱甲基酶α-亚基的完整vanA基因。
27．假单胞菌属种类HR199vanAΔ，含有缺失灭活的vanA基因代替编码香草酸脱甲基酶α-亚基的完整vanA基因。
28．假单胞菌属种类HR199vanBΩKm，含有ΩKm灭活的vanB基因代替编码香草酸脱甲基酶β-亚基的完整vanB基因。
29．假单胞菌属种类HR199vanBΩGm，含有ΩGm-灭活的vanB基因代替编码香草酸脱甲基酶β-亚基的完整vanB基因。
30．假单胞菌属种类HR199vanBΔ，含有缺失灭活的vanB基因代替编码香草酸脱甲基酶β-亚基的完整vanB基因。
本发明还涉及有机化合物的生物技术制备方法。特别是该方法可用于制备醇，醛和有机酸。后者优选是松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草醛和香草酸。
上述生物用于该新方法。特别优选的生物包括细菌，特别是假单胞菌属种类。具体地说，上述假单胞菌属种类优选用于下面的方法：
1．假单胞菌属种类HR199calAΩkm，假单胞菌属种类HR199calAΩGm和假单胞菌属种类HR199calAΔ用于从丁子香酚制备松柏醇。
2．假单胞菌属种类HR199calBΩKm，假单胞菌属种类HR199calBΩGm和假单胞菌属种类HR199calBΔ用于从丁子香酚或松柏醇制备松柏醛。
3．假单胞菌属种类HR199fcsΩKm，假单胞菌属种类HR199fcsΩGm，假单胞菌属种类HR199fcsΔ，假单胞菌属种类HR199echΩKm，假单胞菌属种类HR199echΩGm和假单胞菌属种类HR199echΔ用于从丁子香酚或松柏醇或松柏醛制备阿魏酸。
4．假单胞菌属种类HR199vdhΩKm，假单胞菌属种类HR199vdhΩGm，假单胞菌属种类HR199vdhΔ，假单胞菌属种类HR199vdhΩGmvdhBΩKm，假单胞菌属种类HR199vdhΩKmvdhBΩGm，假单胞菌属种类HR199vdhΔvdhBΩGm和假单胞菌属种类HR199vdKΔvdhBΩKm用于从丁子香酚或松柏醇或松柏醛或阿魏酸制备香草醛。
5．假单胞菌属种类HR199vanAΩKm，假单胞菌属种类HR199vanAΩGm，假单胞菌属种类HR199vanAΔ，假单胞菌属种类HR199vanBΩKm，假单胞菌属种类HR199vanBΩGm和假单胞菌属种类HR199vanBΔ用于从丁子香酚或松柏醇或松柏醛或阿魏酸或香草醛制备香草酸。
丁子香酚是优选的底物。然而，巴可加入其它底物或甚至用其它底物代替丁子香酚。
根据本发明采用的用于该生物的合适营养培养基是合成的，半合成的或复合培养基。这些培养基可包括含碳和含氮化合物，无机盐、其中包括合适的痕量元素和维生素。
合适的含碳化合物是碳水化合物，碳氢化合物或有机标准化学剂。可优选使用的化合物的例子是糖，醇或糖醇，有机酸或复合物混合物。
优选的糖是葡萄糖。可优选使用的有机酸是柠檬酸或乙酸。复合混合物的例子是麦芽提取物，酵母提取物，酪蛋白或酪蛋白水解产物。
无机化合物是合适的含氮物质。其例子有硝酸盐和铵盐。也可使用有机氮源。这些氮源包括酵母提取物，大豆粉、酪蛋白，酪蛋白水解物和玉米浆。
可使用的无机盐的例子是硫酸盐，硝酸盐，氯化物，碳酸盐和磷酸盐。所说的盐所含的金属优选是钠，钾，镁，锰，钙，锌和铁。
培养温度优选范围是50至100℃。特别优选的范围是从15至60℃，最优选22至37℃
培养基的pH优选是2至12。特别优选的范围是4至8。
原则上，技术人员已知的任何生物反应器均可用于实施该新方法。优先考虑的是适于浸没方法的任何装置。这意味着根据本发明可采用具有或不具有机械混合装置的容器。后者的例子是摇动装置，泡罩塔反应器或循环式反应器。前者优选包括所有已知的装配有任何设计的搅拌器的装置。
可连续或分批实施该新方法。达到最大产量所需的发酵时间取决于所用生物的具体特性。然而，原则上，发酵时间在2至200小时之间。
下面更详细地解释本发明，在提及的实施例中：
利用丁子香酚的菌株假单胞菌属种类HR199(DSM7063)的突变体是借助于插入Ω元件或导入缺失经特异性灭活丁子香酚分解代谢的基因以靶向方式产生的。采用的Ω元件是编码对抗生素卡那霉素(ΩKm)和庆大霉素(ΩGm)产生抗性的DNA片段。这些抗性基因是使用标准方法从Tn5和质粒pBBR 1MCS-5分离出的。编码松柏醇脱氢酶，松柏醛脱氢酶，阿魏酰-CoA合成酶，烯酰-CoA水合酶-醛缩酶，β-酮硫解酶，香草醛脱氢酶，乙醇脱氢酶，香草醛脱氢酶Ⅱ和香草酸脱甲基酶的基因calA,calB,fcs,ech,aat,vdh,adh,vdhB,vanA和vanB使用标准方法从菌株假单胞菌属种类HR199的基因组DNA分离出并克隆进pBluescript SK-。借助于用合适的限制性核酸内切酶消化，可从这些基因中去除DNA片段(缺失)或用Ω元件取代(插入)，导致各基因失活。以这种方式突变的基因重新克隆进可接合转移的载体中并随后导入菌株假单胞菌属种类HR199。使用合适的选择获得用新导入的失活基因取代了各有功能的野生型基因的转接合子(transkonju-ganten)。以这种方式获得的插入和缺失突变体现在仅具有各失活的基因。使用这一方法可获得仅具有一种缺陷基因的突变体以及用该方式灭活了几种基因的多重突变体。这些突变体可用于进行下列生物转化：
a)将丁子香酚转化为松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草醛和/或香草酸；
b)将松柏醇转化成松柏醛，阿魏酸，香草醛和/或香草酸；
c)将松柏醛转化成阿魏酸，香草醛和/或香草酸；
d)将阿魏酸转化成香草醛和/或香草酸，和
e)将香草醛转化成香草酸。
材料和方法
生长细菌的条件
大肠杆菌的菌株在37℃下在Luria-Bertani(LB)或M9无机培养基中繁殖(J.Sambrook,E.F.Fritsch和T.Maniatis,1989。分子克隆；实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版，纽约冷泉港)。假单胞菌属种类的菌株在营养肉汤(NB,0.8％,wt/vol)或无机培养基(MM)(H.G.Schlegel等，1961，微生物学报38:209-222)或HR无机培养基(HR-MM)(J.Rabenhorst,1996，应用微生物学及生物技术，46:470-474)中30℃下繁殖。阿魏酸，香草醛，香草酸和原儿荼酸溶于二甲基甲砜并加入到各培养基中以得到0.1％(wt/vol)的终浓度。丁子香酚可直接加入到培养基中以得到0.1％(vol/vol)的终浓度或加入到MM琼脂板盖的滤纸(圆形滤纸595,Schleicher &Schuell,Dassel，德国)上。繁殖假单胞菌属种类的转接合子和突变体时，分别使用终浓度为25μg/ml,100μg/ml和7.5μg/ml的四环素，卡那霉素和庆大霉素。
培养上清液中代谢中间产物的定性和定量检测。
用高压液相色谱(Knauer HPLC)直接或用双蒸水稀释后分析培养上清液。在Nucleosil 100 C18(7μm,250×4mm)上进行色谱。0.1％(vol/vol)甲酸和乙腈用作溶剂。用于洗脱物质的梯度过程如下：
00:00-06:30→26％乙腈
06:30-08:00→100％乙腈
08:00-12:00→100％乙腈
12:00-13:00→26％乙腈
13:00-18:00→26％乙腈
香草醛脱氢酶Ⅱ的纯化。
在4℃下进行纯化。
粗制提取物
将在丁子香酚中繁殖的假单胞菌属种类HRl99细胞在10mM磷酸钠缓冲液pH6.0中洗涤，然后重悬于相同缓冲液中并在1000psi的压力下通过弗氏压碎器(Amicon,silver Spring，美国马里兰州)2次破碎细胞。对细胞匀浆物进行超速离心(1h,100,000xg,4℃)，所得的粗提物的可溶性部分从上清液中获得。
在DEAE葡聚糖纤维素上进行阴离子交换色谱：
粗提物的可溶部分在10mM磷酸钠缓冲液，pH6.0中透析过夜。将透析产物上样到用10mM磷酸钠缓冲液pH6.0平衡过的DEAE-Sephacel柱(2.6cm×35cm，柱容器[BV]:186ml)上，其流速为0.8ml/分。用2倍BV的10mM磷酸钠缓冲液pH6.0冲洗柱。香草醛脱氢酶Ⅱ(VDHⅡ)用在10mM磷酸钠缓冲液pH6.0(750ml)中从0到400mM NaCl的线性盐梯度洗脱。收集10ml馏份。合并具有高VDHⅡ活性的馏份以形成DEAE合并液。
测定香草醛脱氢酶活性
使用光学酶试验在30℃下测定VDH活性。体积为1ml的反应混合物含0.1mmol磷酸钾(pH7.1),0.125μmol香草醛，0.5μmol NAD,1.2μmol丙酮酸(钠盐)，乳酸脱氢酶(IU；来自猪心)和酶溶液。在λ=340mm下监测香草醛的氧化(ε香草醛=11.6cm2/μmol)。酶活性以单位(U)表示，1U相应于每分钟转变1μmol香草醛的酶的量。使用Lowry等(O.H.Lowry.N.J.Rosebrough,A.L.Farr和R.J.Randall.1951，生物学化学杂志，193:265-275)的方法测定样品中的蛋白质浓度。
测定松柏醇脱氢酶活性
根据Jaeger等(E.L.Jaeger,Eggeling和H.Sahm,1981.普通微生物学.6:333-336)使用光学酶试验在30℃下测定CADH活性。体积为1ml的反应混合物含有0.2mmol tris/HCL(pH9.0),0.4μmol松柏醇，2μmol NAD,0.1mmol氨基脲和酶溶液。在λ=340nm下监测NAD的减少(ε=6.3cm2/μmol)。酶活性用单位(U)来表示，lU相应于每分钟转化1μmol底物的酶量。按Lowry等(0.H.Lowry,N.J.Rosebrough,A.L.Far和R.J.Randall,1951，生物学化学杂志，193:265-275)的方法测定样品中的蛋白质浓度。
测定松柏醛脱氢酶的活性
使用光学酶试验在30℃下测定CALDH活性。体积为1ml的反应混合物含有0.1mmol的tris/HCL(pH8.8),0.08μmol的松柏醛，2.7μmol的NAD和酶溶液。在λ=400nm下监测松柏醛氧化成阿魏酸(ε=34cm2/μmol)。酶活性以单位(U)表示，1U相应于每分钟转变1μmol底物的酶量。按Lowry等(O.H.Lowry,N.J.Rosebrough,A.L.Far和Randall,1951，生物学化学杂志，193:265-275)的方法测定样品中的蛋白质浓度。
测定阿魏酰CoA合成酶(阿魏酸硫激酶)活性。
使用Zenk等(Zenk等，1980，生物化学年鉴，101:182-187)改良的光学酶试验在30℃下测定FCS活性。体积为1ml的反应混合物含有0.09mmol的磷酸钾(pH7.0),2.1μmol的MgCl2,0.7μmol的阿魏酸，2μmol的ATP,0.4μmol的辅酶A和酶溶液。在λ=345nm下监测从阿魏酸形成CoA酯(ε=10cm2/μmol)。酶活性以单位(U)表示，1U相应于每分钟转化1μmol底物的酶量。使用Lowry等(O.H.Lowry,N.J.Rosebrough,A.L.Farr和R.J.Randall,1951，生物学化学杂志，193:265-275)的方法测定样品中的蛋白质浓度。
电泳方法
使用Stegemann等(Stegemann等，1973,Z.Naturforsch.28c:722-732)的方法在7.4％(wt/vol)聚丙烯酰胺凝胶中天然条件下或者使用Laemmli(Laemmli,U.K.1970，自然(伦敦)227:680-685)的方法在11.5％(wt/vol)聚丙烯酰胺凝胶中在变性条件下分离含蛋白质的提取物。Serva Blue R用于非特异性蛋白质染色。为了特异性染色松柏醇脱氢酶，松柏醛脱氢酶和香草醛脱氢酶，将凝胶在100mM KP缓冲液(pH7.0)中重新缓冲20分钟并随后在加入了0.08％(wt/vol)NAD,0.04％(wt/vol)对硝基蓝四唑氯，0.003％(wt/vol)吩嗪硫酸甲酯和1mM的各底物的相同缓冲液中30℃下温育直到看见相应的颜色带。
将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上转移到PVDF膜上。
使用半干快速印迹器具(B32/33,Biometra,Gttingen，德国)按照厂家说明将蛋白质从SDS-聚丙烯酰胺凝胶转移到PVDF膜(Waters-Millipore,Bedford,Mass,USA)上。
测定N端氨基酸序列
使用蛋白质肽测序仪(477A型，应用生物系统，Foster City,USA)和PTH分析仪按照厂商说明测定N-端氨基酸序列。
分离和操作DNA
使用Marmur的方法(J.Marmur,1961，分子生物学杂志，3:208-218)分离基因组DNA。使用标准方法(J.E.Sambrook,F.Fritsch和T.Maniatis,1989，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版，纽约冷泉港)分离和分析其它质粒DNA和/或DNA限制性片段。
转移DNA
使用Hanahan的方法(D.Hanahan,1983，分子生物学杂志，166:557-580)制备和转化感受态的大肠杆菌细胞。在含有质粒的大肠杆菌S17-1菌株(供体)和假单胞菌属种类菌株(受体)之间的接合质粒转移在NB琼脂板上按Friedrich等的方法(B.Friedrich等，1981，细菌学杂志，147:198-205)进行或借助于“微量互补法”在含0.5％(wt/vol)葡萄糖酸作碳源及25μg四环素/ml或100μg卡那霉素/ml的MM琼脂平板上进行。在这种情况下，将受体细胞以一个方向进行接种划线。5分钟后，将供体菌株的细胞进行接种划线，这些划线与受体接种划线相交叉。在30℃培养48h后，转接合子直接位于交叉点下方生长，而供体菌株和受体菌株都不能生长。
杂交实验
在0.8％(wt/vol)琼脂糖凝胶上在50mM tris-50mM硼酸-1.25mM EDTA缓冲液(pH8.5)中电泳分离DNA限制性酶切片段(J.E.Sambrook,F.Fritsch和T.Maniatis.1989，分子克隆：实验室手册。第2版，冷泉港实验室出版，纽约冷泉港)。将变性的DNA从凝胶转移到带正电的尼龙膜(孔经：0.45μm,PallFiltrationstechnik,Dreieich，德国)上，随后与生物素标记的或洋地黄毒苷标记的DNA探针的杂交，及这些DNA探针的制备均使用标准方法进行(J.E.Sambrook,F.Fritsch和T.Maniatis,1989，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，纽约冷泉港)。
DNA测序：
按Sanger等(Sanger等1977，美国科学院学报74:5463-5467)的双脱氧链终止法使用“LI-COR”DNA测序仪400L型(LI-COR公司，生物技术部，Lincdn,NE,USA)并使用“含7-脱氮-2-脱氧鸟苷三磷酸的热测序酶荧光标记的引物循环测序试剂盒”(Amersham生命科学，Amersham International pls.,Little Chalfont,Buckinghamshire，英国)“非放射活性”测定核苷酸序列，在每种情况按厂商说明书进行。
按Strauss等(E.C.Strauss等，1986，生物化学年鉴，154:353-360)的“引物跳跃方法”使用合成寡核苷酸进行测序。
化学试剂，生化试剂和酶
从C.F.Boehringer & Shne(Mannheim，德国)或从GIBCO/BRL(Eggenstein，德国)获得限制性酶，T4 DNA连接酶，λDNA和酶及光学酶试验的底物。[γ-32P]ATP来自Amersham/Buchler(Braunschweig，德国)。寡核苷酸从MWG-Btotech GmbH(Ebersberg，德国)获得。NA型琼脂糖从Pharmacia-LKB(Uppsala,Schweden)获得。所有其它的化学试剂来自Haarmann &Reimer(Holzminden，德国)，E.Merch AG(Darmstadt，德国)，FlukaChemie(Buchs，瑞士)，Serva Feinbiochemica(Heidelberg，德国)或Sigma Chemie(Deisenhofen，德国)。
实施例
实施例1
构建介导卡那霉素(ΩKm)或庆大霉素(ΩGm)抗性的Ω元件
为丁构建ΩKm元件，以制备规模分离2099bp的转座子Tn5的BglⅠ片段(E.A.Auerswald,G.Ludwig和H.Schaller.1981,ColdSpring Harb.Symp.Quant.Biol.45:107-113；E.Beck,G.Ludwig,E.A.Auerswald,B.Reiss和H.Schaller,1982，基因，19:327-336；P.Mazodier,P.Cossart,E.Giraud和F.Gasser,1985，核酸研究，13:195-205)。经过用Bal 31核酸酶处理将片段缩短到大约990bp。然后将这一仅含有卡那霉素抗性基因(编码氨基糖苷-3’-0-磷酸转移酶)的片段连接到SmaⅠ切割的pSKsym DNA(含对称结构的多克隆位点[SalⅠ,Hind Ⅲ,EcoRⅠ,SmaⅠ,EcoRⅠ,Hind Ⅲ,SalⅠ]的pBluescript SK-衍生物)上。可作为SmaⅠ片段，EcoRⅠ片段，HindⅢ片段或SalⅠ片段从所得的质粒中重新分离出ΩKm元件。
为了构建ΩGm元件，在制备规模上分离出质粒pBRIMCS-5的983bp EaeⅠ片段(M.E.Kovach,P.H.Elzer,D.S.Hill,G.T.Robertson,M.A.Farris,R.M.Roop和K.M.Peterson,1995，基因166:175-176)，然后用绿豆核酸酶处理(逐渐消化单链DNA分子末端)。然后将仅含庆大霉素抗性基因(编码庆大霉素-3-乙酰转移酶)的片段连接到SmaⅠ-裂解的pSKsym DNA(见上文)上。可作为SmaⅠ片段，EcoRⅠ片段，HindⅢ片段或SalⅠ片段从所得质粒重新分离出ΩGm元件。
实施例2
从假单胞菌属种类HRl99(DSM7063)克隆待插入Ω元件或缺失灭活的基因。
单独从大肠杆菌S17-1菌株DSM10439和DSM10440克隆fcs,ech,vdh和aat基因并使用质粒pE207和pE5-1(见EP-A-0845532)。从这些质粒在制备规模上分离所述片段并按如下所述处理：
为了克隆fcs基因，将来自质粒pE207的2350bp SalⅠ/EcoRⅠ片段和来自质粒pE5-1的3700bp EcoRⅠ/SalⅠ片段一起在pBluescript SK-中克隆使得2片段借助于EcoRⅠ端连接在一起。从所得的杂种质粒在制备规模上分离6050bp SalⅠ片段并经过用Bal 31核酸酶处理缩短到大约2480bp。PstⅠ连接子随后连接到该片段的末端，用PstⅠ消化后，将该片段克隆进pBluescript SK-(pSKfcs)。转化大肠杆菌XL1 blue后，所得的克隆表达fcs基因并表现出0.2U/mg蛋白质的Fcs活性。
为了克隆ech基因，在制备规模上从质粒pE 207分离3800bpHindⅢ/EcoRⅠ片段并经过用Bal 31核酸酶处理缩短到大约1470bp。然后，将EcoRⅠ连接子连接到该片段的末端，用EcoRⅠ消化后，将该片段克隆进pBluescript SK-(pSkech)。
为了克隆vdh基因，在制备规模上从质粒pE207分离2350bp的SalⅠ/EcoRⅠ片段。克隆进pBluescript SK-后，使用外切核酸酶Ⅲ/绿豆核酸酶系统将该片段在一端截短大约1530bp。然后将EcoRⅠ连接子连接到该片段的末端，用EcoRⅠ消化后，将该片段克隆进pBluescript SK-(pSKvdh)。转化大肠杆菌XL1 blue后，获得的克隆表达VDH基因且表现出0.01U/mg蛋白质的VDH活性。
为了克隆aat基因，在制备规模上从质粒pE5-1分离3700bpEcoRⅠ/SalⅠ片段并经过用Bal 31核酸酶处理缩短到大约1590bp。然然后将EcoRⅠ连接子连接到该片段的末端，用EcoRⅠ消化后，将该片段克隆进pBluescript SK-(pSKaat)。
实施例3
经过插入Ω元件或经过缺失这些基因的部分区域灭活上述基因。
用BssHⅡ消化含fcs基因的质粒pSKfcs，导致从fcs基因切割出1290bp的片段。随后重新连接，在pBluescript SK-中以克隆的形式(pSKfcsΔ)获得fcs基因的缺失衍生物(fcsΔ)(见图1i和2i)。另外，切除该片段后，将Ω元件ΩKm和ΩGm代替其连接进去。这样产生了fcs基因的Ω-灭活衍生物(fcsΩKm，见图1g和2g)及(fcsΩGm，见图1h和2h)，它们均在pBluescript SK-中以克隆的形式获得(pSKfcsΩKm和pSKfcsΩGm)。在其杂交质粒具有经缺失或经Ω元件插入而失活的fcs基因的大肠杆菌克隆粗提物中不可能检测到任何FCS活性。
用NruⅠ消化含ech基因的质粒pSKech，导致从ech基因切除了53bp的片段及430bp的片段。重新连接后，ech基因的缺失衍生物(echΔ，见图11和21)在pBluescript SK-中以克隆的形式获得(pSKechΔ)。另外，切除该片段后，将Ω元件ΩKm和ΩGm代替其连接进其中。结果产生ech基因的Ω-灭活衍生物(echΩKm和echΩGm)，它们在pBluescript SK-中以克隆的形式获得(pSKechΩKm和pSKechΩGm)。
用BssHⅡ消化含vdh基因的质粒pSKvdh，导致从vdh基因切除了210bp的片段。重新连接后，vdh基因的缺失衍生物(vdhΔ，见图10和20)以克隆的形式在pBluescript SK-(pSK vdhΔ)中获得。另外，切除该片段后，将Ω元件ΩKm和ΩGm代替其连接进入。结果产生vdh基因的Ω-灭活衍生物(vdhΩKm和vdhΩGm)，在pBluescript SK-中以克隆的形式获得(pSKvdhΩKm，见图1m和2m)及(pSKvdhΩGm，见图1n和2n)。在所得的大肠杆菌克隆的粗提物中不能检测到任何VDH活性，该克隆中的杂交质粒具有经缺失或Ω元件插入灭活的vdh基因。
用BssHⅡ消化含aat基因的质粒pSKaat，导致从aat基因中切除了59bp的片段。重新连接后，aat基因的缺失衍生物(aatΔ，见图1r和2r)在pBluescript SK-中以克隆的形式获得(pSKaatΔ)。另外，切除该片段后，将Ω元件ΩKm和ΩGm代替其连接进入其中。结果产生aat基因的Ω-灭活衍生物(aatΩKm，见图1p和2p)和(aatΩGm，见图1q和2q)，在pBluescript SK-中以克隆的形式获得(pSKaatΩKm和pSKaatΩGm)。
实施例4
将Ω元件灭活的基因亚克隆进可接合转移的“自杀质粒”pSUP202中。
为了用Ω-元件灭活的基因取代假单胞菌属种类HR199中的完整基因，需要一种载体，一方面该载体可转移进假单胞菌中(可接合转移的质粒)，另一方面它在这些细菌中不能复制，因此在假单胞菌中不稳定(“自杀质粒”)。使用这种质粒系统转移进假单胞菌中的DNA片段只有借助于同源重组(RecA-依赖性重组)整合进细菌细胞的基因组中才能保留。在这种情况下，使用“自杀质粒”pSUP202(Simon等，1983，见A.Piihler，细菌-植物相互作用的分子遗传学，SpringerVerlag,Berlin,Heidelberg，纽约，p98-106)。
用PstⅠ消化后，以质粒pSKfcsΩKm和pSKfcsΩGm分离灭活的基因fcsΩKm和fcsΩGm并连接到PstⅠ-裂解的pSUP202DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在分别还含卡那霉素或庆大霉素的含四环素LB培养基中进行选择。获得其杂交质粒(pSUPfcsΩKm)含灭活基因fcsΩKm的卡那霉素抗性转化子。庆大霉素抗性转化子的相应杂交质粒(pSUPfcsΩGm)含灭活的基因fcsΩGm。
EcoRⅠ消化后，从质粒pSKechΩKm和pSKechΩGm分离灭活的基因echΩKm和echΩGm并连接到EcoRⅠ裂解的pSUP202 DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在分别还含卡那霉素或庆大霉素的含四环素LB培养基上进行选择。获得其杂交质粒(pSUPechΩKm)含灭活基因echΩKm的卡那霉素抗性转化子。庆大霉素抗性转化子的相应杂交质粒(pSUPechΩGm)含灭活的基因echΩGm。
EcoRⅠ消化后，从质粒pSKvdhΩKm和pSKvdhΩGm分离灭活的基因vdhΩKm和vdhΩGm并连接到EcoRⅠ-裂解的pSUP202DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在分别还含卡那霉素或庆大霉素的含四环素LB培养基上进行选择。获得其杂交质粒(pSUPvdhΩKm)含灭活基因vdhΩKm的卡那霉素抗性转化子。庆大霉素抗性转化子的相应杂交换粒(pSUPvdhΩGm)含灭活基因vdhΩGm。
EcoRⅠ消化后，从质粒pSKaatΩKm和pSKaatΩGm分离灭活基因aatΩKm和aatΩGm并连接到EcoRⅠ裂解的pSUP202DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1中。在分别还含卡那霉素或庆大霉素的含四环素LB培养基上进行选择。获得其杂交质粒(pSUPaatΩKm)含灭活基因aatΩKm的卡那霉素抗性转化子。庆大霉素抗性转化子的相应杂交质粒(pSUPaatΩGm)含灭活的基因aatΩGm。
实施例5
将缺失灭活的基因亚克隆进具有“sacB选择系统”的可接合转移“自杀质粒”PHE55中
为了用缺失灭活的基因取代假单胞菌属种类HR199中的完整基因，需要具有在pSUP202的例子中已描述过的特性的载体。在缺失失活基因的情况下，由于不存在选择假单胞菌属种类HR199中基因成功取代的可能性，与Ω元件灭活基因相反，使用了另一选择系统。在“sacB选择系统”中，取代的缺失失活基因被克隆进一种质粒中，该质粒除抗生素抗性基因外还具有sacB基因。将该杂交质粒接合转移进假单胞菌后，在完整基因在基因组中所处的位点处经同源重组整合质粒(第一次交换)。这种产生的“杂基因型”菌株同时具有完整基因和缺失失活基因，且被pHE55 DNA将这些基因互相分隔开。这些菌株表现出由载体编码的抗性且也具有活性sacB基因。随后的目的是借助于第二次同源重组事件将pHE55 DNA与完整基因一起分离出基因组DNA(第二次交换)。这次重组事件产生的菌株仅具有失活的基因。而且，pHE55编码的抗生素抗性和sacB基因均已丢失。如果将菌株在含蔗糖的培养基上划线培养，见表达sacB基因的菌株的生长受抑制，因为该基因产物将蔗糖转变成聚合物，而该聚合物积累于细胞周质中。由于发生了第二次重组事件而不再携带sacB基因的细胞的生长因此不受抑制。为了具有在表型上选择缺失灭活基因整合的可能性，该基因不与完整基因交换，相反，使用的菌株待替换的基因已通过插入Ω元件而被“标记”。当发生成功替换时，所得的菌株丧失由Ω元件编码的抗生素抗性。
用PstⅠ消化后，从质粒pSKfcsΔ分离失活基因fcsΔ并连接到PstⅠ-裂解的pHE55 DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在含四环素的LB培养基上进行选择。获得四环素抗性转化子，其杂交质粒(pHEfcsΔ)含灭活基因fcsΔ。
用EcoRⅠ消化后，从质粒pSKechΔ分离失活基因echΔ并用绿豆核酸酶处理(产生钝末端)。将该片段连接到BamHⅠ-裂解的且用绿豆核酸酶处理的pHE55 DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在含四环素的LB培养基上进行选择。获得四环素抗性转化子，其杂交质粒(pHEechΔ)含有失活基因echΔ。
用EcoRⅠ消化后，从质粒pSKvdhΔ分离失活基因vdhΔ并用绿豆核酸酶处理。将该片段连接到BamHⅠ裂解的且用绿豆核酸酶处理过的pHE55 DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在含四环素的LB培养基上进行选择。获得四环素抗性转化子，其杂交质粒(pHEvdhΔ)含有灭活的基因vdhΔ。
用EcoRⅠ消化后，从质粒pSKaatΔ分离出灭活基因aatΔ并用绿豆核酸酶处理。将该片段连接到BamHⅠ裂解的并用绿豆核酸酶处理过的pHE55 DNA上。将连接混合物转化进大肠杆菌S17-1。在含四环素的LB培养基上进行选择。获得四环素抗性转化子，其杂交质粒(phEaatΔ)含有灭活的基因aatΔ。
实施例6
产生假单胞菌属种类HR199菌株的突变体，其中经过插入Ω-元件特异性灭活丁子香酚分解代谢基因。
在接合实验中菌株假单胞菌属种类HR199用作受体，其中下述含有pSUP202杂交质粒的菌株大肠杆菌S17-1用作供体。转接合子在含有相应于Ω元件之抗生素的含葡糖酸无机培养基上选择。可根据pSUP202-编码的四环素抗性区分“同基因子”(通过2次交换用Ω元件插入失活基因取代完整基因)和“杂基因子”(借助于单次交换将杂交质粒整合进基因组)转接合子。
将假单胞菌属种类HR199分别与大肠杆菌S17-1(pSUPfcsΩKm)和大肠杆菌S17-1(pSUPfcsΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199fcsΩKm和假单胞菌属种类HR199fcsΩGm。经过DNA测序证实完整fcs基因被ΩKm-灭活的或ΩGm-灭活的基因(分别为fcsΩKm和fcsΩGm)取代。
将假单胞菌属种类HR199分别与大肠杆菌S17-1(pSUPechΩKm)和大肠杆菌S17-1(pSUPechΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199echΩKm假单胞菌属种类HR199echΩGm。经过DNA测序证实完整的ech基因被ΩKm-灭活的或ΩGm-灭活的基因(分别为echΩkm和echΩGm)取代。
将假单胞菌属种类HR199分别与大肠杆菌S17-1(pSUPvdhΩKm)和大肠杆菌S17-1(pSUPvdhΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199vdhΩKm和假单胞菌属种类HR199vdhΩGm。经过DNA测序证实完整的vdh基因被ΩKm-灭活的或ΩGm-灭活的基因(分别为vdhΩKm和vdhΩGm)取代。
将假单胞菌属种类HR199分别与大肠杆菌S17-1(pSUPaatΩKm)和大肠杆菌S17-1(pSUPaatΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199aatΩKm和假单胞菌属种类HR199aatΩGm。经过DNA测序证实完整的aat基因被ΩKm-灭活的或ΩGm-灭活的基因(分别是aatΩKm和aatΩGm)取代。
将假单胞菌属种类HR199fcsΩ Km与大肠杆菌S17-1(pSUPvdhΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199fcsΩKm vdhΩGm。经过DNA测序证实完整的vdh基因被ΩGm灭活的基因(vdhΩGm)取代。
将假单胞菌属种类HR199vdhΩKm大肠杆菌S17-1(pSUPaatΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199vdh ΩKmaatΩGm。经过DNA测序证实完整的aat基因被ΩGm-灭活的基因(aatΩGm)取代。
将假单胞菌属种类HR199vdhΩ Km与大肠杆菌S17-1(pSUPechΩGm)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199vdhΩKmechΩGm。经过DNA测序证实完整的ech基因被ΩGm灭活的基因(echΩGm)取代。
实施例7
产生菌株假单胞菌属种类HR199的突变体，
其中经过缺失部分区域特异性灭活丁子香酚分解代谢的基因。
在接合实验中，菌株假单胞菌属种类HR199fcsΩKm，假单胞菌属种类HR199echΩKm，假单胞菌属种类HR199vdhΩKm和假单胞菌属种类HR199aatΩKm用作受体，下述含有pHE55杂交质粒的大肠杆菌S17-1菌株用作供体。在除四环素(pHE55编码的抗性)外还含有相应于Ω元件的抗生素的含葡糖酸无机培养基上选择“杂基因子”转接合子。在含蔗糖的无机培养基上划线培养后，获得的转接合子经第二次重组事件(第二次交换)删除了载体DNA。经过在不含抗生素或含有相应于Ω元件的抗生素的无机培养基中划线培养，可鉴定出用缺失灭活的基因(无抗生素抗性)取代了Ω元件灭活的基因的突变体。
将假单胞菌属种类HR199fcsΩKm与大肠杆菌S17-1(pHEfcsΔ)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199fcsΔ。经DNA测序证实ΩKm灭活的基因(fcsΩKm)被缺失灭活的基因(fcsΔ)取代。
将假单胞菌属种类HR199echΩKm与大肠杆菌S17-1(pHEechΔ)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199echΔ。经DNA测序证实ΩKm灭活的基因(echΩKm)被缺失灭活基因(echΔ)取代。
将假单胞菌属种类HR199vdhΩKm与大肠杆菌S17-1(pHEvdhΔ)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199vdhΔ。经DNA测序证实ΩKm灭活的基因(vdhΩKm)被缺失灭活的基因(vdhΔ)取代。
将假单胞菌属种类HR199aatΩKm与大肠杆菌S17-1(pHEaatΔ)接合后获得突变的假单胞菌属种类HR199aatΔ。经过DNA测序证实ΩKm-灭活的基因(aatΩKm)被缺失灭活的基因(aatΔ)取代。
实施例8
使用突变的假单胞菌属种类HR199vdhΩKm将丁子香酚生物转化成香草醛。
菌株假单胞菌属种类HR199vdhΩKm在50ml含6mM丁子香酚的HR-MM中繁殖到光密度为大约OD600nm=0.6。17小时后，在培养上清中可检测到2.9mM的香草醛，1.4mM阿魏酸和0.4mM香草酸。
实施例9
使用突变的假单胞菌属种类HR199vdhΩGmaatΩKm将丁子香酚生物转化成阿魏酸
菌株假单胞菌属种类HR199vdhΩGmaatΩkm在50ml含6mM丁子香酚的HR-MM中繁殖到光密度为大约OD600nm=0.6。18小时后，在培养上清中可检测到1.9mM香草醛，2.4mM阿魏酸和0.6mM香草酸。
实施例10
使用突变假单胞菌属种类HR199vdhΩGmaatΩKm将丁子香酚生物转化成松柏醇。
菌株假单胞菌属种类HR199vdhΩGmaatΩKm在50ml含60mM丁子香酚的HR-MM中繁殖到光密度大约为OD600nm=0.4。15小时后，在培养物上清中可检测到1.7mM松柏醇，1.4mM香草醛，1.4mM阿魏酸和0.2mM香草酸。
实施例11
使用突变的假单胞菌属种类HR199vdhΩKm在10 l发酵罐中从丁子香酚发酵生产天然香草醛。
用100ml培养了24小时的预培养物接种生产发酵罐，其中该预培养物在调至pH7.0且由12.5g甘油/l,10g酵母提取物/l和0.37g乙酸/l组成的培养基中在摇床(120rpm)上32℃繁殖过。发酵罐含有9.9 l下列组成的培养基：1.5g酵母提取物/l,1.6g KH2PO4/l,0.2g NaCl/l,0.2g MgSO4/l。用氢氧化钠溶液将pH调节至pH7.0。灭菌后，向培养基中加入4g丁子香酚。温度为32℃，通气为3NL/分，搅拌速度为600rpm。用氢氧化钠溶液将pH维持在pH6.5。
在接种后4小时，开始连续加入丁子香酚使得在65小时后发酵终止时，向培养物中加入了255g的丁子香酚。在发酵期间还加入40g酵母提取物。发酵终止时，丁子香酚的浓度为0.2g/l。香草醛的含量为2.6g/l。也存在3.4g的阿魏酸/l。
用诸如色谱，蒸馏和/或提取的已知物理方法分离以这种方式获得的香草醛并用于制备天然调味品。
附图的说明
图1a至1r：
分离生物和突变体的基因结构
cclA*：松柏醇脱氢酶的部分失活基因
calB*：松柏醛脱氢酶的部分失活基因
fcs*：阿魏酰-CoA合成酶的部分失活基因
ech*：烯酰-CoA水合酶-醛缩酶的部分失活基因
vdh*：香草醛脱氢酶的部分失活基因
aat*：β-酮硫解酶的部分失活基因
尽管标记“*”的限制性酶裂解位点用于构建，但它们在所得的构建体上不再具有功能。
图2a:calAΩKm基因结构的核苷酸序列
图2b:calAΩGm基因结构的核苷酸序列
图2c:calAΔ基因结构的核苷酸序列
图2d:calBΩKm基因结构的核苷酸序列
图2e:calBΩGm基因结构的核苷酸序列
图2f:calBΔ基因结构的核苷酸序列
图2g:fcsΩKm基因结构的核苷酸序列
图2h:fcsΩGm基因结构的核苷酸序列
图2i:fcsΔ基因结构的核苷酸序列
图2j:echΩKm基因结构的核苷酸序列
图2k:echΩGm基因结构的核苷酸序列
图2l:echΔ基因结构的核苷酸序列
图2m:vdhΩKm基因结构的核苷酸序列
图2n:vdhΩGm基因结构的核苷酸序列
图2o:vdhΔ基因结构的核苷酸序列
图2p:aatΩKm基因结构的核苷酸序列
图2q:aatΩGm基因结构的核苷酸序列
图2r:aatΔ基因结构的核苷酸序列
                           序列CTGCAGCCAG GGCTGAAAAG GAGGGATTCA GTGAGGTCAT GAAGGGAGGG GACGGCGCCT       60GGCTCCAATT GCTCGATGGC GCCGCGATTG AGTGTCTTGG GCGCGGTCTT GGAGAGTTCG      120GCTAGGGAGA TAAATTTGCT GGCCATGGTG GCGGCCCCTG ATGGGTTGGA TGATTTTCTG      180CATTCTGCAT CATGAAATTC ATGAAATCAT CACTTTTCGG GGGGTGGGTG CACGGGATTG      240AAGGTTGCTA GGAGAGTGCA TTGCTCGTAA GCCCAGGAAG CACGCGGGTT TCAGGATGGT      300GCATGGAAAT GGCATGAGCT TTGCTGGATA TGATTAGAGA CATTAACTAT TTTGGCGGAA      360TGGAAGCACG ATTCCTCGCC CGGTAGAGCG GTAACCGCGA CATTCAGGAC CGTAAAAAGG      420AAAGAGCATG CAA CTG ACC AAC AAG AAA ATC GTC GTC ACC GGA GTG TCC TCC     472
   Met Gln Leu Thr Asn Lys Lys Ile Val Val Thr Gly Val Ser Ser
     1               5                  10                  15GGT ATC GGT GCC GAA ACT GCC CGC GTT CTG CGC TCT CAC GGC GCC ACA        520Gly Ile Gly Ala Glu Thr Ala Arg Val Leu Arg Ser His Gly Ala Thr
              20                 25                  30GTG ATT GGC GTA GAT CGC AAC ATG CCG AGC CTG ACT CTG GAT GCT TTC        568Val Ile Gly Val Asp Arg Asn Met Pro Ser Leu Thr Leu Asp Ala Phe
         35                  40                  45GTT CAG GCT GAC CTG AGC CAT CCT GAA GGC ATC GAT AAG GCC ATC GGG        616Val Gln Ala Asp Leu Ser His Pro Glu Gly Ile Asp Lys Ala Ile
     50                  55                  60      62ACAGCAAGCG AACCGGAATT GCCAGCTGGG GCGCCCTCTG GTAAGGTTGG GAAGCCCTGC      676AAAGTAAACT GGATGGCTTT CTTGCCGCCA AGGATCTGAT GGCGCAGGGG ATCAAGATCT      736GATCAAGAGA CAGGATGAGG ATCGTTTCGC ATG ATT GAA CAA GAT GGA TTG CAC       790
                             Met Ile Glu Gln Asp Gly Leu His
                               1               5GCA GGT TCT CCG GCC GCT TGG GTG GAG AGG CTA TTC GGC TAT GAC TGG        838Ala Gly Ser Pro Ala Ala Trp Val Glu Arg Leu Phe Gly Tyr Asp Trp
 10                  15                  20GCA CAA CAG ACA ATC GGC TGC TCT GAT GCC GCC GTG TTC CGG CTG TCA        886Ala Gln Gln Thr Ile Gly Cys Ser Asp Ala Ala Val Phe Arg Leu Ser25                  30                  35                  40GCG CAG GGG CGC CCG GTT CTT TTT GTC AAG ACC GAC CTG TCC GGT GCC        934Ala Gln Gly Arg Pro Val Leu Phe Val Lys Thr Asp Leu Ser Gly Ala
             45                  50                  55CTG AAT GAA CTG CAG GAC GAG GCA GCG CGG CTA TCG TGG CTG GCC ACG        982Leu Asn Glu Leu Gln Asp Glu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Leu Ala Thr
         60                  65                  70ACG GGC GTT CCT TGC GCA GCT GTG CTC GAC GTT GTC ACT GAA GCG GGA       1030Thr Gly Val Pro Cys Ala Ala Val Leu Asp Val Val Thr Glu Ala Gly
     75                  80                  85AGG GAC TGG CTG CTA TTG GGC GAA GTG CCG GGG CAG GAT CTC CTG TCA       1078Arg Asp Trp Leu Leu Leu Gly Glu Val Pro Gly Gln Asp Leu Leu Ser
 90                  95                 100TCT CAC CTT GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC ATC ATG GCT GAT GCA ATG       1126Ser His Leu Ala Pro Ala Glu Lys Val Ser Ile Met Ala Asp Ala Met105                 110                 115                 120CGG CGG CTG CAT ACG CTT GAT CCG GCT ACC TGC CCA TTC GAC CAC CAA       1174Arg Arg Leu His Thr Leu Asp Pro Ala Thr Cys Pro Phe Asp His Gln
            125                 130                 135GCG AAA CAT CGC ATC GAG CGA GCA CGT ACT CGG ATG GAA GCC GGT CTT       1222Ala Lys His Arg Ile Glu Arg Ala Arg Thr Arg Met Glu Ala Gly Leu
        140                 145                 150GTC GAT CAG GAT GAT CTG GAC GAA GAG CAT CAG GGG CTC GCG CCA GCC       1270Val Asp Gln Asp Asp Leu Asp Glu Glu His Gln Gly Leu Ala Pro Ala
    155                 160                 165GAA CTG TTC GCC AGG CTC AAG GCG CGC ATG CCC GAC GGC GAG GAT CTC       1318Glu Leu Phe Ala Arg Leu Lys Ala Arg Met Pro Asp Gly Glu Asp Leu
170                 175                 180GTC GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG CCG AAT ATC ATG GTG GAA AAT       1366Val Val Thr His Gly Asp Ala Cys Leu Pro Asn Ile Met Val Glu Asn185                 190                 195                 200GGC CGC TTT TCT GGA TTC ATC GAC TGT GGC CGG CTG GGT GTG GCG GAC       1414Gly Arg Phe Ser Gly Phe Ile Asp Cys Gly Arg Leu Gly Val Ala Asp
            205                 210                 215CGC TAT CAG GAC ATA GCG TTG GCT ACC CGT GAT ATT GCT GAA GAG CTT       1462Arg Tyr Gln Asp Ile Ala Leu Ala Thr Arg Asp Ile Ala Glu Glu Leu
        220                 225                 230GGC GGC GAA TGG GCT GAC CGC TTC CTC GTG CTT TAC GGT ATC GCC GCT       1510Gly Gly Glu Trp Ala Asp Arg Phe Leu Val Leu Tyr Gly Ile Ala Ala
    235                 240                 245CCC GAT TCG CAG CGC ATC GCC TTC TAT CGC CTT CTT GAC GAG TTC TTC       1558Pro Asp Ser Gln Arg Ile Ala Phe Tyr Arg Leu Leu Asp Glu Phe Phe
250                 255                 260             264TGAGCGGGAC TCTGGGGTTC GAAATGACCG ACCAAGCGAC GCCCTG GCC GCG GTG        1613
                                               Ala Ala Val
                                               225ATT GCA TTC ATG TGT GCT GAG GAG TCA CGT TGG ATC AAC GGC ATA AAT       1661Ile Ala Phe Met Cys Ala Glu Glu Ser Arg Trp Ile Asn Gly Ile Asn
    230                 235                 240ATT CCA GTG GAC GGA GGT TTG GCA TCG ACC TAC GTG TAA GTTCGTGGAC        1710Ile Pro Val Asp Gly Gly Leu Ala Ser Thr Tyr Val
245                 250                 255GCCCTTTGCA CGCGCACTAT ATCTCTATGC AGCAGCTGAA AGCAGCTTTG GTTTTGATCG     1770GAGGTAGCGG GCGGAAAGGT GCAGAATGTC TAAATAATAA AGGATTCTTG TGAAGCTTTA     1830GTTGTCCGTA AACGAAAATA AAAATAAAGA GGAATGATAT GAAAGCAAGT AGATCAGTCT     1890GCACTTTCAA AATAGCTACC CTGGCAGGCG CCATTTATGC AGCGCTGCCA ATGTCAGCTG     1950CAAACTCGAT GCAGCTGGAT GTAGGTAGCT CGGATTGGAC GGTGCGTTGG GGACAACACC     2010CTCAAGTATA GCCTTGCCTC TCGCCTGAAT GAGCAAGACT CAAGTCTGAC AAATGCGCCG     2070ACTGTCAATG GTTATATCCG GATATTCAAA GTCAGGGTGA TCGTAACTTT GACCGGGGGC     2130TTGGTATCCA ATCGTCTCGA TATTCTGGCT GCAG                                 2164图2a：CTGCAGCCAG GGCTGAAAAG GAGGGATTCA GTGAGGTCAT GAAGGGAGGG GACGGCGCCT       60GGCTCCAATT GCTCGATGGC GCCGCGATTG AGTGTCTTGG GCGCGGTCTT GGAGAGTTCG      120GCTAGGGAGA TAAATTTGCT GGCCATGGTG GCGGCCCCTG ATGGGTTGGA TGATTTTCTG      180CATTCTGCAT CATGAAATTC ATGAAATCAT CACTTTTCGG GGGGTGGGTG CACGGGATTG      240AAGGTTGCTA GGAGAGTGCA TTGCTCGTAA GCCCAGGAAG CACGCGGGTT TCAGGATGGT      300GCATGGAAAT GGCATGAGCT TTGCTGGATA TGATTAGAGA CATTAACTAT TTTGGCGGAA      360TGGAAGCACG ATTCCTCGCC CGGTAGAGCG GTAACCGCGA CATTCAGGAC CGTAAAAAGG      420AAAGAGCATG CAA CTG ACC AAC AAG AAA ATC GTC GTC ACC GGA GTG TCC TCC     472
   Met Gln Leu Thr Asn Lys Lys Ile Val Val Thr Gly Val Ser Ser
     1               5                  10                  15GGT ATC GGT GCC GAA ACT GCC CGC GTT CTG CGC TCT CAC GGC GCC ACA        520Gly Ile Gly Ala Glu Thr Ala Arg Val Leu Arg Ser His Gly Ala Thr
             20                  25                  30GTG ATT GGC GTA GAT CGC AAC ATG CCG AGC CTG ACT CTG GAT GCT TTC        568Val Ile Gly Val Asp ArG Asn Met Pro Ser Leu Thr Leu Asp Ala Phe
         35                  40                  45GTT CAG GCT GAC CTG AGC CAT CCT GAGGGGAGAG GCGGTTTGCG TATTGGGCGC       622Val Gln Ala Asp Leu Ser His Pro
     50                  55ATGCATAAAA ACTGTTGTAA TTCATTAAGC ATTCTGCCGA CATGGAAGCC ATCACAAACG      682GCATGATGAA CCTGAATCGC CAGCGGCATC AGCACCTTGT CGCCTTGCGT ATAATATTTG      742CCCATGGACG CACACCGTGG AAACGGATGA AGGCACGAAC CCAGTTGACA TAAGCCTGTT      802CGGTTCGTAA ACTGTAATGC AAGTAGCGTA TGCGCTCACG CAACTGGTCC AGAACCTTGA      862CCGAACGCAG CGGTGGTAAC GGCGCAGTGG CGGTTTTCAT GGCTTGTTAT GACTGTTTTT      922TTGTACAGTC TATGCCTCGG GCATCCAAGC AGCAAGCGCG TTACGCCGTG GGTCGATGTT      982TGATGTTATG GAGCAGCAAC G ATG TTA CGC AGC AGC AAC GAT GTT ACG CAG       1033
                    Met Leu ArG Ser Ser Asn Asp Val Thr Gln
                      1               5                  10CAG GGC AGT CGC CCT AAA ACA AAG TTA GGT GGC TCA AGT ATG GGC ATC       1081Gln Gly Ser Arg Pro Lys Thr Lys Leu Gly Gly Ser Ser Met Gly Ile
             15                  20                  25ATT CGC ACA TGT AGG CTC GGC CCT GAC CAA GTC AAA TCC ATG CGG GCT       1129Ile Arg Thr Cys Arg Leu Gly Pro Asp Gln Val Lys Ser Met Arg Ala
         30                  35                  40GCT CTT GAT CTT TTC GGT CGT GAG TTC GGA GAC GTA GCC ACC TAC TCC       1177Ala Leu Asp Leu Phe Gly Arg Glu Phe Gly Asp Val Ala Thr Tyr Ser
     45                  50                  55CAA CAT CAG CCG GAC TCC GAT TAC CTC GGG AAC TTG CTC CGT AGT AAG       1225Gln His Gln Pro Asp Ser Asp Tyr Leu Gly Asn Leu Leu Arg Ser Lys
 60                  65                  70ACA TTC ATC GCG CTT GCT GCC TTC GAC CAA GAA GCG GTT GTT GGC GCT       1273Thr Phe Ile Ala Leu Ala Ala Phe Asp Gln Glu Ala Val Val Gly Ala75                  80                  85                  90CTC GCG GCT TAC GTT CTG CCC AGG TTT GAG CAG CCG CGT AGT GAG ATC       1321Leu Ala Ala Tyr Val Leu Pro Arg Phe Glu Gln Pro Arg Ser Glu Ile
             95                 100                 105TAT ATC TAT GAT CTC GCA GTC TCC GGC GAG CAC CGG AGG CAG GGC ATT       1369Tyr Ile Tyr Asp Leu Ala Val Ser Gly Glu His Arg Arg Gln Gly Ile
        110                 115                 120GCC ACC GCG CTC ATC AAT CTC CTC AAG CAT GAG GCC AAC GCG CTT GGT       1417Ala Thr Ala Leu Ile Asn Leu Leu Lys His Glu Ala Asn Ala Leu Gly
    125                 130                 135GCT TAT GTG ATC TAC GTG CAA GCA GAT TAC GGT GAC GAT CCC GCA GTG       1465Ala Tyr Val Ile Tyr Val Gln Ala Asp Tyr Gly Asp Asp Pro Ala Val
140                 145                 150GCT CTC TAT ACA AAG TTG GGC ATA CGG GAA GAA GTG ATG CAC TTT GAT       1513Ala Leu Tyr Thr Lys Leu Gly Ile Arg Glu Glu Val Met His Phe Asp155                 160                 165                 170ATC GAC CCA AGT ACC GCC ACC TAA CAATTCGTTC AAGCCGAGAT CGGCTTCCCT      1567Ile Asp Pro Ser Thr Ala Thr
            175     177G ATT GCA TTC ATG TGT GCT GAG GAG TCA CGT TGG ATC AAC GGC ATA AAT     1616Ile Ala Phe Met Cys Ala Glu Glu Ser Arg Trp Ile Asn Gly Ile Asn228     230                 235                 240ATT CCA GTG GAC GGA GGT TTG GCA TCG ACC TAC GTG TAA GTTCGTGGAC        1665Ile Pro Val Asp Gly Gly Leu Ala Ser Thr Tyr Val
245                 250                 255GCCCTTTGCA CGCGCACTAT ATCTCTATGC AGCAGCTGAA AGCAGCTTTG GTTTTGATCG     1725GAGGTAGCGG GCGGAAAGGT GCAGAATGTC TAAATAATAA AGGATTCTTG TGAAGCTTTA     1785GTTGTCCGTA AACGAAAATA AAAATAAAGA GGAATGATAT GAAAGCAAGT AGATCAGTCT     1845GCACTTTCAA AATAGCTACC CTGGCAGGCG CCATTTATGC AGCGCTGCCA ATGTCAGCTG     1905CAAACTCGAT GCAGCTGGAT GTAGGTAGCT CGGATTGGAC GGTGCGTTGG GGACAACACC     1965CTCAAGTATA GCCTTGCCTC TCGCCTGAAT GAGCAAGACT CAAGTCTGAC AAATGCGCCG     2025ACTGTCAATG GTTATATCCG GATATTCAAA GTCAGGGTGA TCGTAACTTT GACCGGGGGC     2085TTGGTATCCA ATCGTCTCGA TATTCTGGCT GCAG                                 2119图2b：CTGCAGCCAG GGCTGAAAAG GAGGGATTCA GTGAGGTCAT GAAGGGAGGG GACGGCGCCT       60GGCTCCAATT GCTCGATGGC GCCGCGATTG AGTGTCTTGG GCGCGGTCTT GGAGAGTTCG      120GCTAGGGAGA TAAATTTGCT GGCCATGGTG GCGGCCCCTG ATGGGTTGGA TGATTTTCTG      180CATTCTGCAT CATGAAATTC ATGAAATCAT CACTTTTCGG GGGGTGGGTG CACGGGATTG      240AAGGTTGCTA GGAGAGTGCA TTGCTCGTAA GCCCAGGAAG CACGCGGGTT TCAGGATGGT      300GCATGGAAAT GGCATGAGCT TTGCTGGATA TGATTAGAGA CATTAACTAT TTTGGCGGAA      360TGGAAGCACG ATTCCTCGCC CGGTAGAGCG GTAACCGCGA CATTCAGGAC CGTAAAAAGG      420AAAGAGCATG CAA CTG ACC AAC AAG AAA ATC GTC GTC ACC GGA GTG TCC TCC     472
   Met Gln Leu Thr Asn Lys Lys Ile Val Val Thr Gly Val Ser Ser
     1               5                  10                  15GGT ATC GGT GCC GAA ACT GCC CGC GTT CTG CGC TCT CAC GGC GCC ACA        520Gly Ile Gly Ala Glu Thr Ala Arg Val Leu Arg Ser His Gly Ala Thr
             20                  25                  30GTG ATT GGC GTA GAT CGC AAC ATG CCG AGC CTG ACT CTG GAT GCT TTC        568Val Ile Gly Val Asp Arg Asn Met Pro Ser Leu Thr Leu Asp Ala Phe
         35                  40                  45GTT CAG GCT GAC CTG AGC CAT CCT GAA GGC ATC GATC AAC GGC ATA AAT       617Val Gln Ala Asp Leu Ser His Pro Glu Gly Ile      Asn Gly Ile Asn
     50                  55          58      240ATT CCA GTG GAC GGA GGT TTG GCA TCG ACC TAC GTG TAA GTTCGTGGAC         666Ile Pro Val Asp Gly Gly Leu Ala Ser Thr Tyr Val
245                 250                 255GCCCTTTGCA CGCGCACTAT ATCTCTATGC AGCAGCTGAA AGCAGCTTTG GTTTTGATCG      726GAGGTAGCGG GCGGAAAGGT GCAGAATGTC TAAATAATAA AGGATTCTTG TGAAGCTTTA      786GTTGTCCGTA AACGAAAATA AAAATAAAGA GGAATGATAT GAAAGCAAGT AGATCAGTCT      846GCACTTTCAA AATAGCTACC CTGGCAGGCG CCATTTATGC AGCGCTGCCA ATGTCAGCTG      906CAAACTCGAT GCAGCTGGAT GTAGGTAGCT CGGATTGGAC GGTGCGTTGG GGACAACACC      966CTCAAGTATA GCCTTGCCTC TCGCCTGAAT GAGCAAGACT CAAGTCTGAC AAATGCGCCG     1026ACTGTCAATG GTTATATCCG GATATTCAAA GTCAGGGTGA TCGTAACTTT GACCGGGGGC     1086TTGGTATCCA ATCGTCTCGA TATTCTGGCT GCAG                                 1120图2c：GAATTCCGCG TATCGCCCGG TTCTATCAGC GGGCCGCTTT CGAAAGTCAT GGTGTTAGCC        60GGTAGGGTCT TTTTCTTGGC CATGCTTGTT GCCTGAACCT TCGTTGACAT AGGGCAGAGG       120TGCGTTTGCC GCTTCGCTTC GCGATGAACC GCATCGAGAT GCTGAGGTCA GGATTTTTCC       180TTAACTCGCG TAAGCATTCT GTCATTTTTT TGGTGGCTTT GAACAGCCTG ATGAAAGGTG       240GTCTCGCCCT TTGAGGCCGA TTCTTGGGCG CTTGGCGGCG TCGAAGCGAT GCTCCACTAC       300CGATTAAGAT AATTAAAATA AGGAAACCGC ATGGTTTCTT ATGTGAATTT GTCTGGCATA       360CTCCAGCTCA AGGGCAATTT TTGGGCTATT GGCTGAGCAG TTGCCTCTAT ATGGTTATTC       420AGAATAACAA TTGACTCCTC AGGAGGTCAG CG ATG AGC ATT CTT GGT TTG AAT         473
                                Met Ser Ile Leu Gly Leu Asn
                                  1               5GGT GCC CCG GTC GGA GCT GAG CAG CTG GGC TCG GCT CTT GAT CGC ATG         521Gly Ala Pro Val Gly Ala Glu Gln Leu Gly Ser Ala Leu Asp Arg Met
     10                  15                  20AAG AAG GCG CAC CTG GAG CAG GGG CCT GCA AAC TTG GAG CTG CGT CTG         569Lys Lys Ala His Leu Glu Gln Gly Pro Ala Asn Leu Glu Leu ArG Leu
 25                  30                  35AGT AGG CTG GAT CGT GCG ATT GCA ATG CTT CTG GAA AAT CGT GAA GCA         617Ser Arg Leu Asp Arg Ala Ile Ala Met Leu Leu Glu Asn Arg Glu Ala40                  45                  50                  55ATT GCC GAC GCG GTT TCT GCT GAC TTT GGC AAT CGC AGC CGT GAG CAA         665Ile Ala Asp Ala Val Ser Ala Asp Phe Gly Asn Arg Ser Arg Glu Gln
             60                  65                  70ACA CTG CTT TGC GAC ATT GCT GGC TCG GTG GCA AGC CTG AAG GAT AGC         713Thr Leu Leu Cys Asp Ile Ala Gly Ser Val Ala Ser Leu Lys Asp Ser
         75                  80                  85CGC GAG CAC GTG GCC AAA TGG ATG GAG CCC GAA CAT CAC AAG GCG ATG         761ArG Glu His Val Ala Lys Trp Met Glu Pro Glu His His Lys Ala Met
     90                  95                 100TTT CCA GGG GCG GAG GCA CGC GTT GAG TTT CAG CCG CTG GGT GTC GTT         809Phe Pro Gly Ala Glu Ala Arg Val Glu Phe Gln Pro Leu Gly Val Val
105                 110                 115GGG GTC ATT AGT CCC TGG AAC TTC CCT ATC GTA CTG GCC TTT GGG CCG         857Gly Val Ile Ser Pro Trp Asn Phe Pro Ile Val Leu Ala Phe Gly Pro120                 125                 130                 135CTG GCC GGC ATA TTC GCA GCA GGT AAT CGC GCC ATG CTC AAG CCG TCC         905Leu Ala Gly Ile Phe Ala Ala Gly Asn Arg Ala Met Leu Lys Pro Ser
            140                 145                 150GAG CTT ACC CCG CGG ACT TCT GCC CTG CTT GCG GAG CTA ATT GCT CGT         953Glu Leu Thr Pro Arg Thr Ser Ala Leu Leu Ala Glu Leu Ile Ala Arg
        155                 160                 165TAC TTC GAT GAA ACT GAG CTG ACT ACA GTG CTG GGC GAC GCT GAA GTC      1001Tyr Phe Asp Glu Thr Glu Leu Thr Thr Val Leu Gly Asp Ala Glu Val
   170                 175                 180GGT GCG CTG TTC AGT GCT CAG CCT TTC GAT CAT CTG ATC TTC ACC GGC      1049Gly Ala Leu Phe Ser Ala Gln Pro Phe Asp His Leu Ile Phe Thr Gly
185                 190                 195GGC ACT GCC GTG GCC AAG CAC ATC ATG CGT GCC GCG GCG GAT AAC CTA      1097Gly Thr Ala Val Ala Lys His Ile Met Arg Ala Ala Ala Asp Asn Leu200                 205                 210                 215GTG CCC GTT ACC CTG GAA TTG GGT GGC AAA TCG CCG GTG ATC GTT TCC      1145Val Pro Val Thr Leu Glu Leu Gly Gly Lys Ser Pro Val Ile Val Ser
            220                 225                 230CGC AGT GCA GAT ATG GCG GAC GTT GCA CAA CGG GTG TTG ACG GTG AAA      1193Arg Ser Ala Asp Met Ala Asp Val Ala Gln ArG Val Leu Thr Val Lys
        235                 240                 245ACC TTC AAT GCC GGG CAA ATC TGT CTG GCA CCG GAC TAT GTG CTG CTG      1241Thr Phe Asn Ala Gly Gln Ile Cys Leu Ala Pro Asp Tyr Val Leu Leu
    250                 255                 260CCG GAA GGGACAGCAA GCGAACCGGA ATTGCCAGCT GGGGCGCCCT CTGGTAAGGT       1297Pro Glu
265TGGGAAGCCC TGCAAAGTAA ACTGGATGGC TTTCTTGCCG CCAAGGATCT GATGGCGCAG    1357GGGATCAAGA TCTGATCAAG AGACAGGATG AGGATCGTTT CGC ATG ATT GAA CAA      1412
                                            Met Ile Glu Gln
                                              1GAT GGA TTG CAC GCA GGT TCT CCG GCC GCT TGG GTG GAG AGG CTA TTC      1460Asp Gly Leu His Ala Gly Ser Pro Ala Ala Trp Val Glu Arg Leu Phe5                  10                  15                  20GGC TAT GAC TGG GCA CAA CAG ACA ATC GGC TGC TCT GAT GCC GCC GTG      1508Gly Tyr Asp Trp Ala Gln Gln Thr Ile Gly Cys Ser Asp Ala Ala Val
             25                  30                  35TTC CGG CTG TCA GCG CAG GGG CGC CCG GTT CTT TTT GTC AAG ACC GAC      1556Phe Arg Leu Ser Ala Gln Gly Arg Pro Val Leu Phe Val Lys Thr Asp
         40                  45                  50CTG TCC GGT GCC CTG AAT GAA CTG CAG GAC GAG GCA GCG CGG CTA TCG      1604Leu Ser Gly Ala Leu Asn Glu Leu Gln Asp Glu Ala Ala Arg Leu Ser
     55                  60                  65TGG CTG GCC ACG ACG GGC GTT CCT TGC GCA GCT GTG CTC GAC GTT GTC      1652Trp Leu Ala Thr Thr Gly val Pro Cys Ala Ala Val Leu Asp Val Val
 70                  75                  80ACT GAA GCG GGA AGG GAC TGG CTG CTA TTG GGC GAA GTG CCG GGG CAG      1700Thr Glu Ala Gly Arg Asp Trp Leu Leu Leu Gly Glu Val Pro Gly Gln85                  90                  95                 100GAT CTC CTG TCA TCT CAC CTT GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC ATC ATG      1748Asp Leu Leu Ser Ser His Leu Ala Pro Ala Glu Lys Val Ser Ile Met
            105                 110                 115GCT GAT GCA ATG CGG CGG CTG CAT ACG CTT GAT CCG GCT ACC TGC CCA      1796Ala Asp Ala Met Arg Arg Leu His Thr Leu Asp Pro Ala Thr Cys Pro
        120                 125                 130TTC GAC CAC CAA GCG AAA CAT CGC ATC GAG CGA GCA CGT ACT CGG ATG      1844Phe Asp His Gln Ala Lys His Arg Ile Glu Arg Ala Arg Thr Arg Met
    135                 140                 145GAA GCC GGT CTT GTC GAT CAGGAT GAT CTG GAC GAA GAG CAT CAG GGG       1892Glu Ala Gly Leu Val Asp Gln Asp Asp Leu Asp Glu Glu His Gln Gly
150                 155                 160CTC GCG CCA GCC GAA CTG TTC GCC AGG CTC AAG GCG CGC ATG CCC GAC      1940Leu Ala Pro Ala Glu Leu Phe Ala Arg Leu Lys Ala Arg Met Pro Asp165                 170                 175                 180GGC GAG GAT CTC GTC GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG CCG AAT ATC      1988Gly Glu Asp Leu Val Val Thr His Gly Asp Ala Cys Leu Pro Asn Ile
            185                 190                 195ATG GTG GAA AAT GGC CGC TTT TCT GGA TTC ATC GAC TGT GGC CGG CTG      2036Met Val Glu Asn Gly Arg Phe Ser Gly Phe Ile Asp Cys Gly Arg Leu
        200                 205                 210GGT GTG GCG GAC CGC TAT CAG GAC ATA GCG TTG GCT ACC CGT GAT ATT      2084Gly Val Ala Asp Arg Tyr Gln Asp Ile Ala Leu Ala Thr Arg Asp Ile
    215                 220                 225GCT GAA GAG CTT GGC GGC GAA TGG GCT GAC CGC TTC CTC GTG CTT TAC      2132Ala Glu Glu Leu Gly Gly Glu Trp Ala Asp Arg Phe Leu Val Leu Tyr
230                 235                 240GGT ATC GCC GCT CCC GAT TCG CAG CGC ATC GCC TTC TAT CGC CTT CTT      2180Gly Ile Ala Ala Pro Asp Ser Gln Arg Ile Ala Phe Tyr Arg Leu Leu245                 250                 255                 260GAC GAG TTC TTC TGA GCGGGACTCT GGGGTTCGAA ATGACCGACC AAGCGACGCC      2235Asp Glu Phe Phe
        264CGC CAT GCC AAG CCT GTT CTC GTG CAA AGT CCT GTG GGT GAG TCG AAC      2283
His Ala Lys Pro Val Leu Val Gln Ser Pro Val Gly Glu Ser Asn
444 445                 450                 455TTG GCG ATG CGC GCA CCC TAC GGA GAA GCG ATC CAC GGA CTG CTC TCT      2331Leu Ala Met Arg Ala Pro Tyr Gly Glu Ala Ile His Gly Leu Leu Ser
460                 465                 470GTC CTC CTT TCA ACG GAG TGT TAG AACCGTTGGT AGTGGTTTTG GACGGGCCCA      2385Va1 Leu Leu Ser Thr Glu Cys475                 480 481GGAGCATGCG CTTCTGGGCC CGTTTCTTGA GTATTCATTG GATAGTCACG CGTGGTAGCT     2445TCGAGCCTGC ACAGCTGATG AGCACCCTGG AAGGCGCGCT GTACGCGGAC GACTGGGTTC     2505ATCTTCGCCA TTCATGACGG AACTCCGTTC CCCAGTACCG CGATGACTAT TTTGCCTCTT     2565CCGATGTCCG ATTCCACGCC GCCTGACGCT AAGCGGGGGC GGGGGCGCCC GCATCCCAGC     2625CCAGACAGCA ACAAATGAGT AGGCTCTTGG ATGCCGCGGC GGCTGAGATT GGTAACGGCA     2685ATTTCGTCAA TGTGACGATG GATTCGATTG CCCGTGCTGC CGGCGTCTCA AAAAAAACGC     2745TGTACGTCTT GGTGGCGAGC AAGGAAGAAC TCATTTCCCG GTTAGTGGCT CGAGACATGT     2805CCAACCTTGA GGAATTC                                                                        2822图2d：GAATTCCGCG TATCGCCCGG TTCTATCAGC GGGCCGCTTT CGAAAGTCAT GGTGTTAGCC      60GGTAGGGTCT TTTTCTTGGC CATGCTTGTT GCCTGAACCT TCGTTGACAT AGGGCAGAGG     120TGCGTTTGCC GCTTCGCTTC GCGATGAACC GCATCGAGAT GCTGAGGTCA GGATTTTTCC     180TTAACTCGCG TAAGCATTCT GTCATTTTTT TGGTGGCTTT GAACAGCCTG ATGAAAGGTG     240GTCTCGCCCT TTGAGGCCGA TTCTTGGGCG CTTGGCGGCG TCGAAGCGAT GCTCCACTAC     300CGATTAAGAT AATTAAAATA AGGAAACCGC ATGGTTTCTT ATGTGAATTT GTCTGGCATA     360CTCCAGCTCA AGGGCAATTT TTGGGCTATT GGCTGAGCAG TTGCCTCTAT ATGGTTATTC     420AGAATAACAA TTGACTCCTC AGGAGGTCAG CG ATG AGC ATT CTT GGT TTG AAT       473
                                Met Ser Ile Leu Gly Leu Asn
                                  1               5GGT GCC CCG GTC GGA GCT GAG CAG CTG GGC TCG GCT CTT GAT CGC ATG       521Gly Ala Pro Val Gly Ala Glu Gln Leu Gly Ser Ala Leu Asp ArG Met
     10                  15                  20AAG AAG GCG CAC CTG GAG CAG GGG CCT GCA AAC TTG GAG CTG CGT CTG       569Lys Lys Ala His Leu Glu Gln Gly Pro Ala Asn Leu Glu Leu Arg Leu
 25                  30                  35AGT AGG CTG GAT CGT GCG ATT GCA ATG CTT CTG GAA AAT CGT GAA GCA       617Ser Arg Leu Asp Arg Ala Ile Ala Met Leu Leu Glu Asn Arg Glu Ala40                  45                  50                  55ATT GCC GAC GCG GTT TCT GCT GAC TTT GGC AAT CGC AGC CGT GAG CAA       665Ile Ala Asp Ala Val Ser Ala Asp Phe Gly Asn Arg Ser Arg Glu Gln
             60                  65                  70ACA CTG CTT TGC GAC ATT GCT GGC TCG GTG GCA AGC CTG AAG GAT AGC       713Thr Leu Leu Cys Asp Ile Ala Gly Ser Val Ala Ser Leu Lys Asp Ser
         75                  80                  85CGC GAG CAC GTG GCC AAA TGG ATG GAG CCC GAA CAT CAC AAG GCG ATG       761Arg Glu His Val Ala Lys Trp Met Glu Pro Glu His His Lys Ala Met
     90                  95                 100TTT CCA GGG GCG GAG GCA CGC GTT GAG TTT CAG CCG CTG GGT GTC GTT       809Phe Pro Gly Ala Glu Ala Arg Val Glu Phe Gln Pro Leu Gly Val Val
105                 110                 115GGG GTC ATT AGT CCC TGG AAC TTC CCT ATC GTA CTG GCC TTT GGG CCG       857Gly Val Ile Ser Pro Trp Asn Phe Pro Ile Val Leu Ala Phe Gly Pro120                 125                 130                 135CTG GCC GGC ATA TTC GCA GCA GGT AAT CGC GCC ATG CTC AAG CCG TCC       905Leu Ala Gly Ile Phe Ala Ala Gly Asn Arg Ala Met Leu Lys Pro Ser
            140                 145                 150GAG CTT ACC CCG CGG ACT TCT GCC CTG CTT GCG GAG CTA ATT GCT CGT       953Glu Leu Thr Pro Arg Thr Ser Ala Leu Leu Ala Glu Leu Ile Ala Arg
        155                 160                 165TAC TTC GAT GAA ACT GAG CTG ACT ACA GTG CTG GGC GAC GCT GAA GTC       1001Tyr Phe Asp Glu Thr Glu Leu Thr Thr Val Leu Gly Asp Ala Glu Val
   170                  175                 180GGT GCG CTG TTC AGT GCT CAG CCT TTC GAT CAT CTG ATC TTC ACC GGC       1049Gly Ala Leu Phe Ser Ala Gln Pro Phe Asp His Leu Ile Phe Thr Gly
185                 190                 195GGC ACT GCC GTG GCC AAG CAC ATC ATG CGT GCC GCG GCG GAT AAC CTA       1097Gly Thr Ala Val Ala Lys His Ile Met Arg Ala Ala Ala Asp Asn Leu200                 205                 210                 215GTG CCC GTT ACC CTG GAA TTG GGT GGC AAA TCG CCG GTG ATC GTT TCC       1145Val Pro Val Thr Leu Glu Leu Gly Gly Lys Ser Pro Val Ile Val Ser
            220                 225                 230CGC AGT GCA GAT ATG GCG GAC GTT GCA CAA CGG GTG TTG ACG GTG AAA       1193Arg Ser Ala Asp Met Ala Asp Val Ala Gln Arg Val Leu Thr Val Lys
        235                 240                 245ACC TTC AAT GCC GGG CAA ATC TGT CTG GCA CCG GAC TAT GTG CTG GGG       1241Thr Phe Asn Ala Gly Gln Ile Cys Leu Ala Pro Asp Tyr Val Leu
    250                 255                 260     262GAGAGGCGGT TTGCGTATTG GGCGCATGCA TAAAAACTGT TGTAATTCAT TAAGCATTCT     1301GCCGACATGG AAGCCATCAC AAACGGCATG ATGAACCTGA ATCGCCAGCG GCATCAGCAC     1361CTTGTCGCCT TGCGTATAAT ATTTGCCCAT GGACGCACAC CGTGGAAACG GATGAAGGCA     1421CGAACCCAGT TGACATAAGC CTGTTCGGTT CGTAAACTGT AATGCAAGTA GCGTATGCGC     1481TCACGCAACT GGTCCAGAAC CTTGACCGAA CGCAGCGGTG GTAACGGCGC AGTGGCGGTT     1541TTCATGGCTT GTTATGACTG TTTTTTTGTA CAGTCTATGC CTCGGGCATC CAAGCAGCAA     1601GCGCGTTACG CCGTGGGTCG ATGTTTGATG TTATGGAGCA GCAACG ATG TTA CGC        1656
                                               Met Leu Arg
                                                 1AGC AGC AAC GAT GTT ACG CAG CAG GGC AGT CGC CCT AAA ACA AAG TTA       1704Ser Ser Asn Asp Val Thr Gln Gln Gly Ser Arg Pro Lys Thr Lys Leu
  5                  10                  15GGT GGC TCA AGT ATG GGC ATC ATT CGC ACA TGT AGG CTC GGC CCT GAC       1752Gly Gly Ser Ser Met Gly Ile Ile Arg Thr Cys Arg Leu Gly Pro Asp20                  25                  30                  35CAA GTC AAA TCC ATG CGG GCT GCT CTT GAT CTT TTC GGT CGT GAG TTC       1800Gln Val Lys Ser Met Arg Ala Ala Leu Asp Leu Phe Gly Arg Glu Phe
            40                   45                  50GGA GAC GTA GCC ACC TAC TCC CAA CAT CAG CCG GAC TCC GAT TAC CTC       1848Gly Asp Val Ala Thr Tyr Ser Gln His Gln Pro Asp Ser Asp Tyr Leu
         55                  60                  65GGG AAC TTG CTC CGT AGT AAG ACA TTC ATC GCG CTT GCT GCC TTC GAC       1896Gly Asn Leu Leu Arg Ser Lys Thr Phe Ile Ala Leu Ala Ala Phe Asp
     70                  75                  80CAA GAA GCG GTT GTT GGC GCT CTC GCG GCT TAC GTT CTG CCC AGG TTT       1944Gln Glu Ala Val Val Gly Ala Leu Ala Ala Tyr Val Leu Pro Arg Phe
 85                  90                  95GAG CAG CCG CGT AGT GAG ATC TAT ATC TAT GAT CTC GCA GTC TCC GGC       1992Glu Gln Pro Arg Ser Glu Ile Tyr Ile Tyr Asp Leu Ala Val Ser Gly100                     105             110                 115GAG CAC CGG AGG CAG GGC ATT GCC ACC GCG CTC ATC AAT CTC CTC AAG       2040Glu His Arg Arg Gln Gly Ile Ala Thr Ala Leu Ile Asn Leu Leu Lys
            120                 125                 130CAT GAG GCC AAC GCG CTT GGT GCT TAT GTG ATC TAC GTG CAA GCA GAT       2088His Glu Ala Asn Ala Leu Gly Ala Tyr Val Ile Tyr Val Gln Ala Asp
            135             140                 145TAC GGT GAC GAT CCC GCA GTG GCT CTC TAT ACA AAG TTG GGC ATA CGG       2136Tyr Gly Asp Asp Pro Ala Val Ala Leu Tyr Thr Lys Leu Gly Ile Arg
    150                 155                 160GAA GAA GTG ATG CAC TTT GAT ATC GAC CCA AGT ACC GCC ACC TAA CAA       2184Glu Glu Val Met His Phe Asp Ile Asp Pro Ser Thr Ala Thr
165                 170                 175     177TTCGTTCAAG CCGAGATCGG CTTCCCTG CAA AGT CCT GTG GGT GAG TCG AAC        2236
                           Gln Ser Pro Val Gly Glu Ser Asn
                           451             455TTG GCG ATG CGC GCA CCC TAC GGA GAA GCG ATC CAC GGA CTG CTC TCT       2284Leu Ala Met Arg Ala Pro Tyr Gly Glu Ala Ile His Gly Leu Leu Ser
460                 465                 470GTC CTC CTT TCA ACG GAG TGT TAG AACCGTTGGT AGTGGTTTTG GACGGGCCCA      2338Val Leu Leu Ser Thr Glu Cys475                 480 481GGAGCATGCG CTTCTGGGCC CGTTTCTTGA GTATTCATTG GATAGTCACG CGTGGTAGCT     2398TCGAGCCTGC ACAGCTGATG AGCACCCTGG AAGGCGCGCT GTACGCGGAC GACTGGGTTC     2458ATCTTCGCCA TTCATGACGG AACTCCGTTC CCCAGTACCG CGATGACTAT TTTGCCTCTT     2518CCGATGTCCG ATTCCACGCC GCCTGACGCT AAGCGGGGGC GGGGGCGCCC GCATCCCAGC     2578CCAGACAGCA ACAAATGAGT AGGCTCTTGG ATGCCGCGGC GGCTGAGATT GGTAACGGCA     2638ATTTCGTCAA TGTGACGATG GATTCGATTG CCCGTGCTGC CGGCGTCTCA AAAAAAACGC     2698TGTACGTCTT GGTGGCGAGC AAGGAAGAAC TCATTTCCCG GTTAGTGGCT CGAGACATGT     2758CCAACCTTGA GGAATTC                                                    2775图2e：GAATTCCGCG TATCGCCCGG TTCTATCAGC GGGCCGCTTT CGAAAGTCAT GGTGTTAGCC      60GGTAGGGTCT TTTTCTTGGC CATGCTTGTT GCCTGAACCT TCGTTGACAT AGGGCAGAGG     120TGCGTTTGCC GCTTCGCTTC GCGATGAACC GCATCGAGAT GCTGAGGTCA GGATTTTTCC     180TTAACTCGCG TAAGCATTCT GTCATTTTTT TGGTGGCTTT GAACAGCCTG ATGAAAGGTG     240GTCTCGCCCT TTGAGGCCGA TTCTTGGGCG CTTGGCGGCG TCGAAGCGAT GCTCCACTAC     300CGATTAAGAT AATTAAAATA AGGAAACCGC ATGGTTTCTT ATGTGAATTT GTCTGGCATA     360CTCCAGCTCA AGGGCAATTT TTGGGCTATT GGCTGAGCAG TTGCCTCTAT ATGGTTATTC     420AGAATAACAA TTGACTCCTC AGGAGGTCAG CG ATG AGC ATT CTT GGT TTG AAT       473
                                Met Ser Ile Leu Gly Leu Asn
                                  1               5GGT GCC CCG GTC GGA GCT GAG CAG CTG GGC TCG GCT CTT GAT CGC ATG       521Gly Ala Pro Val Gly Ala Glu Gln Leu Gly Ser Ala Leu Asp Arg Met
     10                  15                  20AAG AAG GCG CAC CTG GAG CAG GGG CCT GCA AAC TTG GAG CTG CGT CTG       569Lys Lys Ala His Leu Glu Gln Gly Pro Ala Asn Leu Glu Leu Arg Leu
 25                  30                  35AGT AGG CTG GAT CGT GCG ATT GCA ATG CTT CTG GAA AAT CGT GAA GCA       617Ser Arg Leu Asp Arg Ala Ile Ala Met Leu Leu Glu Asn Arg Glu Ala40                  45                  50                  55ATT GCC GAC GCG GTT TCT GCT GAC TTT GGC AAT CGC AGC CGT GAG CAA       665Ile Ala Asp Ala Val Ser Ala Asp Phe Gly Asn Arg Ser Arg Glu Gln
             60                  65                  70ACA CTG CTT TGC GAC ATT GCT GGC TCG GTG GCA AGC CTG AAG GAT AGC       713Thr Leu Leu Cys Asp Ile Ala Gly Ser Val Ala Ser Leu Lys Asp Ser
         75                  80                  85CGC GAG CAC GTG GCC AAA TGG ATG GAG CCC GAA CAT CAC AAG GCG ATG       761Arg Glu His Val Ala Lys Trp Met Glu Pro Glu His His Lys Ala Met
     90                  95                 100TTT CCA GGG GCG GAG GCA CGC GTT GAG TTT CAG CCG CTG GGT GTC GTT       809Phe Pro Gly Ala Glu Ala Arg Val Glu Phe Gln Pro Leu Gly Val Val
105                 110                 115GGG GTC ATT AGT CCC TGG AAC TTC CCT ATC GTA CTG GCC TTT GGG CCG       857Gly Val Ile Ser Pro Trp Asn Phe Pro Ile Val Leu Ala Phe Gly Pro120                 125                 130                 135CTG GCC GGC ATA TTC GCA GCA GGT AAT CGC GCC ATG CTC AAG CCG TCC       905Leu Ala Gly Ile Phe Ala Ala Gly Ash Arg Ala Met Leu Lys Pro Ser
            140                 145                 150GAG CTT ACC CCG CGG ACT TCT GCC CTG CTT GCG GAG CTA ATT GCT CGT       953Glu Leu Thr Pro Arg Thr Ser Ala Leu Leu Ala Glu Leu Ile Ala Arg
        155                 160                 165TAC TTC GAT GAA ACT GAG CTG ACT ACA GTG CTG GGC GAC GCT GAA GTC       1001Tyr Phe Asp Glu Thr Glu Leu Thr Thr Val Leu Gly Asp Ala Glu Val
   170                  175                 180GGT GCG CTG TTC AGT GCT CAG CCT TTC GAT CAT CTG ATC TTC ACC GGC       1049Gly Ala Leu Phe Ser Ala Gln Pro Phe Asp His Leu Ile Phe Thr Gly
185                 190                 195GGC ACT GCC GTG GCC AAG CAC ATC ATG CGT GCC GCG GCG GAT AAC CTA       1097Gly Thr Ala Val Ala Lys His Ile Met Arg Ala Ala Ala Asp Asn Leu200                 205                 210                 215GTG CCC GTT ACC CTG GAA TTG GGT GGC AAA TCG CCG GTG ATC GTT TCC       1145Val Pro Val Thr Leu Glu Leu Gly Gly Lys Ser Pro Val Ile Val Ser
            220                 225                 230CGC AGT GCA GAT ATG GCG GAC GTT GCA CAA CGG GTG TTG ACG GTG AAA       1193Arg Ser Ala Asp Met Ala Asp Val Ala Gln Arg Val Leu Thr Val Lys
        235                 240                 245ACC TTC AAT GCC GGG CAA ATC TGT CTG GCA CC GTG GGT GAG TCG AAC        1240Thr Phe Asn Ala Gly Gln Ile Cys Leu Ala    Val Gly Glu Ser Asn
    250                 255     257    454 455TTG GCG ATG CGC GCA CCC TAC GGA GAA GCG ATC CAC GGA CTG CTC TCT       1288Leu Ala Met ArG Ala Pro Tyr Gly Glu Ala Ile His Gly Leu Leu Ser
460                 465                 470GTC CTC CTT TCA ACG GAG TGT TAG AACCGTTGGT AGTGGTTTTG GACGGGCCCA      1342Val Leu Leu Ser Thr Glu Cys475                 480 481GGAGCATGCG CTTCTGGGCC CGTTTCTTGA GTATTCATTG GATAGTCACG CGTGGTAGCT     1402TCGAGCCTGC ACAGCTGATG AGCACCCTGG AAGGCGCGCT GTACGCGGAC GACTGGGTTC     1462ATCTTCGCCA TTCATGACGG AACTCCGTTC CCCAGTACCG CGATGACTAT TTTGCCTCTT     1522CCGATGTCCG ATTCCACGCC GCCTGACGCT AAGCGGGGGC GGGGGCGCCC GCATCCCAGC     1582CCAGACAGCA ACAAATGAGT AGGCTCTTGG ATGCCGCGGC GGCTGAGATT GGTAACGGCA     1642ATTTCGTCAA TGTGACGATG GATTCGATTG CCCGTGCTGC CGGCGTCTCA AAAAAAACGC     1702TGTACGTCTT GGTGGCGAGC AAGGAAGAAC TCATTTCCCG GTTAGTGGCT CGAGACATGT     1762CCAACCTTGA GGAATTC                                                                                                                                                 1779图2f：CTGCAGCCGA GCATCGATTG AGCACTTTAC CCAGCTGCGC TGGCTGACCA TTCAGAATGG       60CCCGCGGCAC TATCCAATCT AAATCGATCT TCGGGCGCCG CGGGCATCAT GCCCGCGGCG      120CTCGCCTCAT TTCAATCTCT AACTTGATAA AAACAGAGCT GTTCTCCGGT CTTGGTGGAT      180CAAGGCCAGT CGCGGAGAGT CTCGAAGAGG AGAGTACAGT GAACGCCGAG TCCACATTGC      240AACCGCAGGC ATCATCATGC TCTGCTCAGC CACGCTACCG CAGTGTGTCG ATTGGTCATC      300CTCCGGTTGA GGTTACGCAA GACGCTGGAG GTATTGTCCG G ATG CGT TCT CTC GAG      356
                                          Met Arg Ser Leu Glu
                                            1               5GCG CTT CTT CCC TTC CCG GGT CGA ATT CTT GAG CGT CTC GAG CAT TGG       404Ala Leu Leu Pro Phe Pro Gly Arg Ile Leu Glu Arh Leu glu His Trp
             10                  15                  20GCT AAG ACC CGT CCA GAA CAA ACC TGC GTT GCT GCC AGG GCG GCA AAT       452Ala Lys Thr Arg Pro Glu Gln Thr Cys Val Ala Ala Arg Ala Ala Asn
         25                  30                  35GGG GAA TGG CGT CGT ATC AGC TAC GCG GAA ATG TTC CAC AAC GTC CGC       500Gly Glu Trp Arg Arg Ile Ser Tyr Ala Glu Met Phe His Asn Val Arg
     40                  45                  50GCC ATC GCA CAG AGC TTG CTT CCT TAC GGA CTA TCG GCA GAG CGT CCG       548Ala Ile Ala Gln Ser Leu Leu Pro Tyr Gly Leu Ser Ala Glu Arg Pro
 55                  60                  65CTG CTT ATC GTC TCT GGA AAT GAC CTG GAA CAT CTT CAG CTG GCA TTT       596Leu Leu Ile Val Ser Gly Asn Asp Leu Glu His Leu Gln Leu Ala Phe70                  75                  80                  85GGG GCT ATG TAT GCG GGC ATT CCC TAT TGC CCG GTG TCT CCT GCT TAT       644Gly Ala Met Tyr Ala Gly Ile Pro Tyr Cys Pro Val Ser Pro Ala Tyr
             90                  95                  100TCA CTG CTG TCG CAA GAT TTG GCG AAG CTG CGT CAC ATC GTA GGT CTT       692Ser Leu Leu Ser Gln Asp Leu Ala Lys Leu Arg HisIle Val Gly Leu
        105                 110                115CTG CAA CCG GGA CTG GTC TTT GCT GCC GAT GCA GCA CCT TTC CAG GGG       740Leu Gln Pro Gly Leu Val Phe Ala Ala Asp Ala A la Pro Phe Gln
    120                 125                  130     132ACAGCAAGCG AACCGGAATT GCCAGCTGGG GCGCCCTCTG GTAAGGTTGG GAAGCCCTGC     800AAAGTAAACT GGATGGCTTT CTTGCCGCCA AGGATCTGAT GGCGCAGGGG ATCAAGATCT     860GATCAAGAGA CAGGATGAGG ATCGTTTCGC ATG ATT GAA CAA GAT GGA TTG CAC      914
                             Met Ile Glu Gln Asp Gly Leu His
                               1               5GCA GGT TCT CCG GCC GCT TGG GTG GAG AGG CTA TTC GGC TAT GAC TGG       962Ala Gly Ser Pro Ala Ala Trp Val Glu Arg Leu Phe Gly Tyr Asp Trp
 10                  15                  20GCA CAA CAG ACA ATC GGC TGC TCT GAT GCC GCC GTG TTC CGG CTG TCA       1010Ala Gln Gln Thr Ile Gly Cys Ser Asp Ala Ala Val Phe Arg Leu Ser25                  30                  35                  40GCG CAG GGG CGC CCG GTT CTT TTT GTC AAG ACC GAC CTG TCC GGT GCC       1058Ala Gln Gly Arg Pro Val Leu Phe Val Lys Thr Asp Leu Ser Gly Ala
             45                  50                  55CTG AAT GAA CTG CAG GAC GAG GCA GCG CGG CTA TCG TGG CTG GCC ACG       1106Leu Asn Glu Leu Gln Asp Glu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Leu Ala Thr
         60                  65                  70ACG GGC GTT CCT TGC GCA GCT GTG CTC GAC GTT GTC ACT GAA GCG GGA       1154Thr Gly Val Pro Cys Ala Ala Val Leu Asp Val Val Thr Glu Ala Gly
     75                  80                  85AGG GAC TGG CTG CTA TTG GGC GAA GTG CCG GGG CAG GAT CTC CTG TCA       1202Arg Asp Trp Leu Leu Leu Gly Glu Val Pro Gly Gln Asp Leu Leu Ser
 90                  95                 100TCT CAC CTT GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC ATC ATG GCT GAT GCA ATG       1250Ser His Leu Ala Pro Ala Glu Lys Val Ser Ile Met Ala Asp Ala Met105                 110                 115                 120CGG CGG CTG CAT ACG CTT GAT CCG GCT ACC TGC CCA TTC GAC CAC CAA       1298Arg Arg Leu His Thr Leu Asp Pro Ala Thr Cys Pro Phe Asp His Gln
            125                 130                 135GCG AAA CAT CGC ATC GAG CGA GCA CGT ACT CGG ATG GAA GCC GGT CTT       1346Ala Lys His Arg Ile Glu Arg Ala Arg Thr Arg Met Glu Ala Gly Leu
        140                 145                 150GTC GAT CAG GAT GAT CTG GAC GAA GAG CAT CAG GGG CTC GCG CCA GCC       1394Val Asp Gln Asp Asp Leu Asp Glu Glu His Gln Gly Leu Ala Pro Ala
    155                 160                 165GAA CTG TTC GCC AGG CTC AAG GCG CGC ATG CCC GAC GGC GAG GAT CTC       1442Glu Leu Phe Ala Arg Leu Lys Ala Arg Met Pro Asp Gly Glu Asp Leu
170                 175                 180GTC GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG CCG AAT ATC ATG GTG GAA AAT       1490Val Val Thr His Gly Asp Ala Cys Leu Pro ASn Ile Met Val Glu Asn185                 190                 195                 200GGC CGC TTT TCT GGA TTC ATC GAC TGT GGC CGG CTG GGT GTG GCG GAC       1538Gly Arg Phe Ser Gly Phe Ile Asp Cys Gly Arg Leu Gly Val Ala Asp
            205                 210                 215CGC TAT CAG GAC ATA GCG TTG GCT ACC CGT GAT ATT GCT GAA GAG CTT       1586Arg Tyr Gln Asp Ile Ala Leu Ala Thr Arg Asp Ile Ala Glu Glu Leu
        220                 225                 230GGC GGC GAA TGG GCT GAC CGC TTC CTC GTG CTT TAC GGT ATC GCC GCT       1634Gly Gly Glu Trp Ala Asp Arg Phe Leu Val Leu Tyr Gly Ile Ala Ala
    235                 240                 245CCC GAT TCG CAG CGC ATC GCC TTC TAT CGC CTT CTT GAC GAG TTC TTC       1682Pro Asp Ser Gln Arg Ile Ala Phe Tyr Arg Leu Leu Asp Glu Phe Phe
250                 255                 260             264TGAGCGGGAC TCTGGGGTTC GAAATGACCG ACCAAGCGAC GCCCCT GTT TTG CAA        1737
                                               Val Leu Gln
                                               563     565TGG CGG TCG GCG AAA GTT GAT GCG CTG TAT CGT GGT GAA GAT CAA TCC       1785Trp Arg Ser Ala Lys Val Asp Ala Leu Tyr Arg Gly Glu Asp Gln Ser
            570                 575                 580ATG CTG CGT GAC GAG GCC ACA CTG TGA GTTGGTCAGG GGGGGCTTAC             1832Met Leu Arg Asp Glu Ala Thr Leu
        585             589TCGGCGTTTT CCGACACTGC GTTGGTTGCG GCAGTGCGCA CCCCCTGGAT TGATTGCGGG     1892GGTGCCCTGT CGCTGGTGTC GCCTATCGAC TTAGGGGTAA AGGTCGCTCG CGAAGTTCTG     1952ATGCGTGCGT CGCTTGAACC ACAAATGGTC GATAGCGTAC TCGCAGGCTC TATGGCTCAA     2012GCAAGCTTTG ATGCTTACCT GCTCCCGCGG CACATTGGCT TGTACAGCGG TGTTCCCAAG     2072TCGGTTCCGG CCTTGGGGGT GCAGCGCATT TGCGGCACAG GCTTCGAACT GCTTCGGCAG     2132GCCGGCGAGC AGATTTCCCA AGGCGCTGAT CACGTGCTGT GTGTCGCGGG CTGCAG         2188图2g：CTGCAGCCGA GCATCGATTG AGCACTTTAC CCAGCTGCGC TGGCTGACCA TTCAGAATGG      60CCCGCGGCAC TATCCAATCT AAATCGATCT TCGGGCGCCG CGGGCATCAT GCCCGCGGCG     120CTCGCCTCAT TTCAATCTCT AACTTGATAA AAACAGAGCT GTTCTCCGGT CTTGGTGGAT     180CAAGGCCAGT CGCGGAGAGT CTCGAAGAGG AGAGTACAGT GAACGCCGAG TCCACATTGC     240AACCGCAGGC ATCATCATGC TCTGCTCAGC CACGCTACCG CAGTGTGTCG ATTGGTCATC     300CTCCGGTTGA GGTTACGCAA GACGCTGGAG GTATTGTCCG G ATG CGT TCT CTC GAG     356
                                          Met Arg Ser Leu Glu
                                            1               5GCG CTT CTT CCC TTC CCG GGT CGA ATT CTT GAG CGT CTC GAG CAT TGG       404Ala Leu Leu Pro Phe Pro Gly Arg Ile Leu Glu Arg Leu Glu His Trp
             10                  15                  20GCT AAG ACC CGT CCA GAA CAA ACC TGC GTT GCT GCC AGG GCG GCA AAT       452Ala Lys Thr Arg Pro Glu Gln Thr Cys Val Ala Ala Arg Ala Ala Asn
         25                  30                  35GGG GAA TGG CGT CGT ATC AGC TAC GCG GAA ATG TTC CAC AAC GTC CGC       500Gly Glu Trp Arg Arg Ile Ser Tyr Ala Glu Met Phe His Asn Val Arg
     40                  45                  50GCC ATC GCA CAG AGC TTG CTT CCT TAC GGA CTA TCG GCA GAG CGT CCG       548Ala Ile Ala Gln Ser Leu Leu Pro Tyr Gly Leu Ser Ala Glu Arg Pro
 55                  60                  65CTG CTT ATC GTC TCT GGA AAT GAC CTG GAA CAT CTT CAG CTG GCA TTT       596Leu Leu Ile Val Ser Gly Asn Asp Leu Glu His Leu Gln Leu Ala Phe70                  75                  80                  85GGG GCT ATG TAT GCG GGC ATT CCC TAT TGC CCG GTG TCT CCT GCT TAT       644Gly Ala Met Tyr Ala Gly Ile Pro Tyr Cys Pro Val Ser Pro Ala Tyr
             90                  95                 100TCA CTG CTG TCG CAA GAT TTG GCG AAG CTG CGT CAC ATC GTA GGT CTT       692Ser Leu Leu Ser Gln Asp Leu Ala Lys Leu Arg His Ile Val Gly Leu
        105                 110                 115CTG CAA CCG GGA CTG GTC TTT GCT GCC GAT GCA GCA CCT TTC CAG GGG       740Leu Gln Pro Gly Leu Val Phe Ala Ala Asp Ala Ala Pro Phe Gln
    120                 125                 130     132GAGAGGCGGT TTGCGTATTG GGCGCATGCA TAAAAACTGT TGTAATTCAT TAAGCATTCT     800GCCGACATGG AAGCCATCAC AAACGGCATG ATGAACCTGA ATCGCCAGCG GCATCAGCAC     860CTTGTCGCCT TGCGTATAAT ATTTGCCCAT GGACGCACAC CGTGGAAACG GATGAAGGCA     920CGAACCCAGT TGACATAAGC CTGTTCGGTT CGTAAACTGT AATGCAAGTA GCGTATGCGC     980TCACGCAACT GGTCCAGAAC CTTGACCGAA CGCAGCGGTG GTAACGGCGC AGTGGCGGTT    1040TTCATGGCTT GTTATGACTG TTTTTTTGTA CAGTCTATGC CTCGGGCATC CAAGCAGCAA    1100GCGCGTTACG CCGTGGGTCG ATGTTTGATG TTATGGAGCA GCAACG ATG TTA CGC        1155
                                               Met Leu Arg
                                                 1AGC AGC AAC GAT GTT ACG CAG CAG GGC AGT CGC CCT AAA ACA AAG TTA       1203Ser Ser Asn Asp Val Thr Gln Gln Gly Ser Arg Pro Lys Thr Lys Leu
  5                  10                  15GGT GGC TCA AGT ATG GGC ATC ATT CGC ACA TGT AGG CTC GGC CCT GAC       1251Gly Gly Ser Ser Met Gly Ile Ile Arg Thr Cys Arg Leu Gly Pro Asp20                  25                  30                  35CAA GTC AAA TCC ATG CGG GCT GCT CTT GAT CTT TTC GGT CGT GAG TTC       1299Gln Val Lys Ser Met Arg Ala Ala Leu Asp Leu Phe Gly Arg Glu Phe
             40                  45                  50GGA GAC GTA GCC ACC TAC TCC CAA CAT CAG CCG GAC TCC GAT TAC CTC       1347Gly Asp Val Ala Thr Tyr Ser Gln His Gln Pro Asp Ser Asp Tyr Leu
         55                  60                  65GGG AAC TTG CTC CGT AGT AAG ACA TTC ATC GCG CTT GCT GCC TTC GAC       1395Gly Asn Leu Leu Arg Ser Lys Thr Phe Ile Ala Leu Ala Ala Phe Asp
     70                  75                  80CAA GAA GCG GTT GTT GGC GCT CTC GCG GCT TAC GTT CTG CCC AGG TTT       1443Gln Glu Ala Val Val Gly Ala Leu Ala Ala Tyr Val Leu Pro Arg Phe
 85                  90                  95GAG CAG CCG CGT AGT GAG ATC TAT ATC TAT GAT CTC GCA GTC TCC GGC       1491Glu Gln Pro Arg Ser Glu Ile Tyr Ile Tyr Asp Leu Ala Val Ser Gly100                 105                 110                 115GAG CAC CGG AGG CAG GGC ATT GCC ACC GCG CTC ATC AAT CTC CTC AAG       1539Glu His Arg Arg Gln Gly Ile Ala Thr Ala Leu Ile Asn Leu Leu Lys
            120                 125                 130CAT GAG GCC AAC GCG CTT GGT GCT TAT GTG ATC TAC GTG CAA GCA GAT       1587His Glu Ala Asn Ala Leu Gly Ala Tyr Val Ile Tyr Val Gln Ala Asp
        135                 140                 145TAC GGT GAC GAT CCC GCA GTG GCT CTC TAT ACA AAG TTG GGC ATA CGG       1635Tyr Gly Asp Asp Pro Ala Val Ala Leu Tyr Thr Lys Leu Gly Ile Arg
    150                 155                 160GAA GAA GTG ATG CAC TTT GAT ATC GAC CCA AGT ACC GCC ACC TAA CAA       1683Glu Glu Val Met His Phe Asp Ile Asp Pro Ser Thr Ala Thr
165                 170                 175     177TTCGTTCAAG CCGAGATCGG CTTCCCCT GTT TTG CAA TGG CGG TCG GCG AAA        1735
                           Val Leu Gln Trp Arg Ser Ala Lys
                           563     565                 570GTT GAT GCG CTG TAT CGT GGT GAA GAT CAA TCC ATG CTG CGT GAC GAG       1783Val Asp Ala Leu Tyr Arg Gly Glu Asp Gln Ser Met Leu Arg Asp Glu
            575                 580                 585GCC ACA CTG TGA GTTGGTCAGG GGGGGCTTAC TCGGCGTTTT CCGACACTGC           1835Ala Thr Leu
    589GTTGGTTGCG GCAGTGCGCA CCCCCTGGAT TGATTGCGGG GGTGCCCTGT CGCTGGTGTC     1895GCCTATCGAC TTAGGGGTAA AGGTCGCTCG CGAAGTTCTG ATGCGTGCGT CGCTTGAACC     1955ACAAATGGTC GATAGCGTAC TCGCAGGCTC TATGGCTCAA GCAAGCTTTG ATGCTTACCT     2015GCTCCCGCGG CACATTGGCT TGTACAGCGG TGTTCCCAAG TCGGTTCCGG CCTTGGGGGT     2075GCAGCGCATT TGCGGCACAG GCTTCGAACT GCTTCGGCAG GCCGGCGAGC AGATTTCCCA     2135AGGCGCTGAT CACGTGCTGT GTGTCGCGGG CTGCAG                               2171图2h：CTGCAGCCGA GCATCGATTG AGCACTTTAC CCAGCTGCGC TGGCTGACCA TTCAGAATGG      60CCCGCGGCAC TATCCAATCT AAATCGATCT TCGGGCGCCG CGGGCATCAT GCCCGCGGCG     120CTCGCCTCAT TTCAATCTCT AACTTGATAA AAACAGAGCT GTTCTCCGGT CTTGGTGGAT     180CAAGGCCAGT CGCGGAGAGT CTCGAAGAGG AGAGTACAGT GAACGCCGAG TCCACATTGC     240AACCGCAGGC ATCATCATGC TCTGCTCAGC CACGCTACCG CAGTGTGTCG ATTGGTCATC     300CTCCGGTTGA GGTTACGCAA GACGCTGGAG GTATTGTCCG G ATG CGT TCT CTC GAG     356
                                          Met Arg Ser Leu Glu
                                          1                 5GCG CTT CTT CCC TTC CCG GGT CGA ATT CTT GAG CGT CTC GAG CAT TGG       404Ala Leu Leu Pro Phe Pro Gly Arg Ile Leu Glu Arg Leu Glu His Trp
             10                  15                  20GCT AAG ACC CGT CCA GAA CAA ACC TGC GTT GCT GCC AGG GCG GCA AAT       452Ala Lys Thr Arg Pro Glu Gln Thr Cys Val Ala Ala Arg Ala Ala Asn
         25                  30                  35GGG GAA TGG CGT CGT ATC AGC TAC GCG GAA ATG TTC CAC AAC GTC CGC       500Gly Glu Trp Arg Arg Ile Ser Tyr Ala Glu Met Phe His Asn Val Arg
     40                  45                  50GCC ATC GCA CAG AGC TTG CTT CCT TAC GGA CTA TCG GCA GAG CGT CCG       548Ala Ile Ala Gln Ser Leu Leu Pro Tyr Gly Leu Ser Ala Glu Arg Pro
 55                  60                  65CTG CTT ATC GTC TCT GGA AAT GAC CTG GAA CAT CTT CAG CTG GCA TTT       596Leu Leu Ile Val Ser Gly Asn Asp Leu Glu His Leu Gln Leu Ala Phe70                  75                  80                  85GGG GCT ATG TAT GCG GGC ATT CCC TAT TGC CCG GTG TCT CCT GCT TAT       644Gly Ala Met Tyr Ala Gly Ile Pro Tyr Cys Pro Val Ser Pro Ala Tyr
             90                  95                 100TCA CTG CTG TCG CAA GAT TTG GCG AAG CTG CGT CAC ATC GTA GGT CTT       692Ser Leu Leu Ser Gln Asp Leu Ala Lys Leu Arg His Ile Val Gly Leu
        105                 110                 115CTG CAA CCG GGA CTG GTC TTT GCT GCC GAT GCA GCA CCT TTC CAG CGC       740Leu Gln Pro Gly Leu Val Phe Ala Ala Asp Ala Ala Pro Phe Gln Arg
    120                 125                 130         133GCT GTT TTG CAA TGG CGG TCG GCG AAA GTT GAT GCG CTG TAT CGT GGT       788Ala Val Leu Gln Trp Arg Ser Ala Lys Val Asp Ala Leu Tyr Arg Gly562         565                 570                 575GAA GAT CAA TCC ATG CTG CGT GAC GAG GCC ACA CTG TGA GTTGGTCAGG        837Glu Asp Gln Ser Met Leu Arg Asp Glu Ala Thr Leu
    580                 585             589GGGGGCTTAC TCGGCGTTTT CCGACACTGC GTTGGTTGCG GCAGTGCGCA CCCCCTGGAT     897TGATTGCGGG GGTGCCCTGT CGCTGGTGTC GCCTATCGAC TTAGGGGTAA AGGTCGCTCG     957CGAAGTTCTG ATGCGTGCGT CGCTTGAACC ACAAATGGTC GATAGCGTAC TCGCAGGCTC     1017TATGGCTCAA GCAAGCTTTG ATGCTTACCT GCTCCCGCGG CACATTGGCT TGTACAGCGG     1077TGTTCCCAAG TCGGTTCCGG CCTTGGGGGT GCAGCGCATT TGCGGCACAG GCTTCGAACT     1137GCTTCGGCAG GCCGGCGAGC AGATTTCCCA AGGCGCTGAT CACGTGCTGT GTGTCGCGGG     1197CTGCAG                                                                1203图2i：GAATTCCCCT GGCGACGAAA GGGCGGCAGG CCGCATGGCC ACGGCTGGGC GGTAACTGAT      60GCTTGCGTTA ATCGTTAACC GTTTGAAATT CCTTGCCAAA TTTCGGCGAG AGAATCATGC     120GGGTACGCCT TTCCGTGCGC TTTGATCTGC GCTTCCGTGC CTTGAATCAG AAAAATAGTT     180AATTGACAGA ACTATAGGTT CGCAGTAGCT TTTGCTCACC CACCAAATCC ACAGCACTGG     240GGTGCACG ATG AAT AGC TAC GAT GGC CGT TGG TCT ACC GTT GAT GTG AAG      290
     Met Asn Ser Tyr Asp Gly Arg Trp Ser Thr Val Asp Val Lys
       1               5                  10GTT GAA GAA GGT ATC GCT TGG GTC ACG CTG AAC CGC CCG GAG AAG CGC       338Val Glu Glu Gly Ile Ala Trp Val Thr Leu Asn Arg Pro Glu Lys Arg15                  20                  25                  30AAC GCA ATG AGC CCA ACT CTC AAT CGA GAG ATG GTC GAG GTT CTG GAG       386Asn Ala Met Ser Pro Thr Leu Asn Arg Glu Met Val Glu Val Leu Glu
             35                  40                  45GTG CTG GAG CAG GAC GCA GAT GCT CGC GTG CTT GTT CTG ACT GGT GCA       434Val Leu Glu Gln Asp Ala Asp Ala Arg Val Leu Val Leu Thr Gly Ala
         50                  55                  60GGC GAA TCC TGG ACC GCG GGC ATG GAC CTG AAG GAG TAT TTC CGC GAG       482Gly Glu Ser Trp Thr Ala Gly Met Asp Leu Lys Glu Tyr Phe Arg Glu
     65                  70                  75ACC GAT GCT GGC CCC GAA ATT CTG CAA GAG AAG ATT CGT CGGGGACAGC        531Thr Asp Ala Gly Pro Glu Ile Leu Gln Glu Lys Ile Arg
 80                  85                  90  91AAGCGAACCG GAATTGCCAG CTGGGGCGCC CTCTGGTAAG GTTGGGAAGC CCTGCAAAGT     591AAACTGGATG GCTTTCTTGC CGCCAAGGAT CTGATGGCGC AGGGGATCAA GATCTGATCA     651AGAGACAGGA TGAGGATCGT TTCGC ATG ATT GAA CAA GAT GGA TTG CAC GCA       703
                        Met Ile Glu Gln Asp Gly Leu His Ala
                          1               5GGT TCT CCG GCC GCT TGG GTG GAG AGG CTA TTC GGC TAT GAC TGG GCA       751Gly Ser Pro Ala Ala Trp Val Glu Arg Leu Phe Gly Tyr Asp Trp Ala10                  15                  20                  25CAA CAG ACA ATC GGC TGC TCT GAT GCC GCC GTG TTC CGG CTG TCA GCG       799Gln Gln Thr Ile Gly Cys Ser Asp Ala Ala Val Phe Arg Leu Ser Ala
             30                  35                  40CAG GGG CGC CCG GTT CTT TTT GTC AAG ACC GAC CTG TCC GGT GCC CTG       847Gln Gly Arg Pro Val Leu Phe Val Lys Thr Asp Leu Ser Gly Ala Leu
         45                  50                  55AAT GAA CTG CAG GAC GAG GCA GCG CGG CTA TCG TGG CTG GCC ACG ACG       895ASn Glu Leu Gln Asp Glu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Leu Ala Thr Thr
     60                  65                  70GGC GTT CCT TGC GCA GCT GTG CTC GAC GTT GTC ACT GAA GCG GGA AGG        943Gly Val Pro Cys Ala Ala Val Leu Asp Val Val Thr Glu Ala Gly Arg
 75                  80                  85GAC TGG CTG CTA TTG GGC GAA GTG CCG GGG CAG GAT CTC CTG TCA TCT        991Asp Trp Leu Leu Leu Gly Glu Val Pro Gly Gln Asp Leu Leu Ser Ser90                  95                 100                 105CAC CTT GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC ATC ATG GCT GAT GCA ATG CGG       1039His Leu Ala Pro Ala Glu Lys Val Ser Ile Met Ala Asp Ala Met Arg
            110                 115                 120CGG CTG CAT ACG CTT GAT CCG GCT ACC TGC CCA TTC GAC CAC CAA GCG       1087Arg Leu His Thr Leu Asp Pro Ala Thr Cys Pro Phe Asp His Gln Ala
        125                 130                 135AAA CAT CGC ATC GAG CGA GCA CGT ACT CGG ATG GAA GCC GGT CTT GTC       1135Lys His Arg Ile Glu Arg Ala Arg Thr Arg Met Glu Ala Gly Leu Val
    140                 145                 150GAT CAG GAT GAT CTG GAC GAA GAG CAT CAG GGG CTC GCG CCA GCC GAA       1183Asp Gln Asp Asp Leu Asp Glu Glu His Gln Gly Leu Ala Pro Ala Glu
155                 160                 165CTG TTC GCC AGG CTC AAG GCG CGC ATG CCC GAC GGC GAG GAT CTC GTC       1231Leu Phe Ala Arg Leu Lys Ala Arg Met Pro Asp Gly Glu Asp Leu Val170                 175                 180                 185GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG CCG AAT ATC ATG GTG GAA AAT GGC       1279Val Thr His Gly Asp Ala Cys Leu Pro Asn Ile Met Val Glu Asn Gly
            190                 195                 200CGC TTT TCT GGA TTC ATC GAC TGT GGC CGG CTG GGT GTG GCG GAC CGC       1327Arg Phe Ser Gly Phe Ile Asp Cys Gly Arg Leu Gly Val Ala Asp Arg
        205                 210                 215TAT CAG GAC ATA GCG TTG GCT ACC CGT GAT ATT GCT GAA GAG CTT GGC       1375Tyr Gln Asp Ile Ala Leu Ala Thr Arg Asp Ile Ala Glu Glu Leu Gly
    220                 225                 230GGC GAA TGG GCT GAC CGC TTC CTC GTG CTT TAC GGT ATC GCC GCT CCC       1423Gly Glu Trp Ala Asp Arg Phe Leu Val Leu Tyr Gly Ile Ala Ala Pro
235                 240                 245GAT TCG CAG CGC ATC GCC TTC TAT CGC CTT CTT GAC GAG TTC TTC TGA       1471Asp Ser Gln Arg Ile Ala Phe Tyr Arg Leu Leu Asp Glu Phe Phe250                 255                 260             264GCGGGACTCT GGGGTTCGAA ATGACCGACC AAGCGACGCC CC GAG CAG GGC ATG        1525
                                           Glu Gln Gly Met
                                           255AAG CAG TTC CTT GAC GAG AAA AGC ATC AAG CCG GGC TTG CAG ACC TAC       1573Lys Gln Phe Leu Asp Glu Lys Ser Ile Lys Pro Gly Leu Gln Thr Tyr
260                 265                 270AAG CGC TGA TAAATGCGCC GGGGCCCTCG CTGCGCCCCC GGCCTTCCAA TAATGACAAT    1632Lys Arg275 276AATGAGGAGT GCCCAATGTT TCACGTGCCC CTGCTTATTG GTGGTAAGCC TTGTTCAGCA     1692TCTGATGAGC GCACCTTCGA GCGTCGTAGC CCGCTGACCG GAGAAGTGGT ATCGCGCGTC     1752GCTGCTGCCA GTTTGGAAGA TGCGGACGCC GCAGTGGCCG CTGCACAGGC TGCGTTTCCT     1812GAATGGGCGG CGCTTGCTCC GAGCGAACGC CGTGCCCGAC TGCTGCGAGC GGCGGATCTT     1872CTAGAGGACC GTTCTTCCGA GTTCACCGCC GCAGCGAGTG AAACTGGCGC AGCGGGAAAC     1932TGGTATGGGT TTAACGTTTA CCTGGCGGCG GGCATGTTGC GGGGAATTC                 1981图2j：GAATTCCCCT GGCGACGAAA GGGCGGCAGG CCGCATGGCC ACGGCTGGGC GGTAACTGAT      60GCTTGCGTTA ATCGTTAACC GTTTGAAATT CCTTGCCAAA TTTCGGCGAG AGAATCATGC     120GGGTACGCCT TTCCGTGCGC TTTGATCTGC GCTTCCGTGC CTTGAATCAG AAAAATAGTT     180AATTGACAGA ACTATAGGTT CGCAGTAGCT TTTGCTCACC CACCAAATCC ACAGCACTGG     240GGTGCACG ATG AAT AGC TAC GAT GGC CGT TGG TCT ACC GTT GAT GTG AAG      290
     Met Asn Ser Tyr Asp Gly Arg Trp Ser Thr Val Asp Val Lys
       1               5                  10GTT GAA GAA GGT ATC GCT TGG GTC ACG CTG AAC CGC CCG GAG AAG CGC       338Val Glu Glu Gly Ile Ala Trp val Thr Leu Asn Arg Pro Glu Lys Arg15                  20                  25                  30AAC GCA ATG AGC CCA ACT CTC AAT CGA GAG ATG GTC GAG GTT CTG GAG       386Asn Ala Met Ser Pro Thr Leu Asn Arg Glu Met Val Glu Val Leu Glu
             35                  40                  45GTG CTG GAG CAG GAC GCA GAT GCT CGC GTG CTT GTT CTG ACT GGT GCA       434Val Leu Glu Gln Asp Ala Asp Ala Arg Val Leu Val Leu Thr Gly Ala
         50                  55                  60GGC GAA TCC TGG ACC GCG GGC ATG GAC CTG AAG GAG TAT TTC CGC GAG       482Gly Glu Ser Trp Thr Ala Gly Met Asp Leu Lys Glu Tyr Phe Arg Glu
     65                  70                  75ACC GAT GCT GGC CCC GAA ATT CTG CAA GAG AAG ATT CGT CGGGGGAGAG        531Thr Asp Ala Gly Pro Glu Ile Leu Gln Glu Lys Ile Arg
 80                  85                  90  91GCGGTTTGCG TATTGGGCGC ATGCATAAAA ACTGTTGTAA TTCATTAAGC ATTCTGCCGA     591CATGGAAGCC ATCACAAACG GCATGATGAA CCTGAATCGC CAGCGGCATC AGCACCTTGT     651CGCCTTGCGT ATAATATTTG CCCATGGACG CACACCGTGG AAACGGATGA AGGCACGAAC     711CCAGTTGACA TAAGCCTGTT CGGTTCGTAA ACTGTAATGC AAGTAGCGTA TGCGCTCACG     771CAACTGGTCC AGAACCTTGA CCGAACGCAG CGGTGGTAAC GGCGCAGTGG CGGTTTTCAT     831GGCTTGTTAT GACTGTTTTT TTGTACAGTC TATGCCTCGG GCATCCAAGC AGCAAGCGCG     891TTACGCCGTG GGTCGATGTT TGATGTTATG GAGCAGCAAC G ATG TTA CGC AGC AGC     947
                                          Met Leu Arg Ser Ser
                                            1               5AAC GAT GTT ACG CAG CAG GGC AGT CGC CCT AAA ACA AAG TTA GGT GGC       995Asn Asp Val Thr Gln Gln Gly Ser Arg Pro Lys Thr Lys Leu Gly Gly
             10                  15                  20TCA AGT ATG GGC ATC ATT CGC ACA TGT AGG CTC GGC CCT GAC CAA GTC      1043Ser Ser Met Gly Ile Ile Arg Thr Cys Arg Leu Gly Pro Asp Gln Val
         25                  30                  35AAA TCC ATG CGG GCT GCT CTT GAT CTT TTC GGT CGT GAG TTC GGA GAC       1091Lys Ser Met Arg Ala Ala Leu Asp Leu Phe Gly Arg Glu Phe Gly Asp
     40                  45                  50GTA GCC ACC TAC TCC CAA CAT CAG CCG GAC TCC GAT TAC CTC GGG AAC       1139Val Ala Thr Tyr Ser Gln His Gln Pro Asp Ser Asp Tyr Leu Gly Asn
 55                  60                  65TTG CTC CGT AGT AAG ACA TTC ATC GCG CTT GCT GCC TTC GAC CAA GAA       1187Leu Leu Arg Ser Lys Thr Phe Ile Ala Leu Ala Ala Phe Asp Gln Glu70                  75                  80                  85GCG GTT GTT GGC GCT CTC GCG GCT TAC GTT CTG CCC AGG TTT GAG CAG       1235Ala Val Val Gly Ala Leu Ala Ala Tyr Val Leu Pro Arg Phe Glu Gln
             90                  95                 100CCG CGT AGT GAG ATC TAT ATC TAT GAT CTC GCA GTC TCC GGC GAG CAC       1283Pro Arg Ser Glu Ile Tyr Ile Tyr Asp Leu Ala Val Ser Gly Glu His
        105                 110                 115CGG AGG CAG GGC ATT GCC ACC GCG CTC ATC AAT CTC CTC AAG CAT GAG       1331Arg Arg Gln Gly Ile Ala Thr Ala Leu Ile Asn Leu Leu Lys His Glu
    120                 125                 130GCC AAC GCG CTT GGT GCT TAT GTG ATC TAC GTG CAA GCA GAT TAC GGT       1379Ala Asn Ala Leu Gly Ala Tyr Val Ile Tyr Val Gln Ala Asp Tyr Gly
135                 140                 145GAC GAT CCC GCA GTG GCT CTC TAT ACA AAG TTG GGC ATA CGG GAA GAA       1427Asp Asp Pro Ala Val Ala Leu Tyr Thr Lys Leu Gly Ile Arg Glu Glu150                 155                 160                 165GTG ATG CAC TTT GAT ATC GAC CCA AGT ACC GCC ACC TAA CAATTCGTTC        1476Val Met His Phe Asp Ile Asp Pro Ser Thr Ala Thr
            170                 175     177AAGCCGAGAT CGGCTTCCCC GAG CAG GGC ATG AAG CAG TTC CTT GAC GAG         1526
                  Glu Gln Gly Met Lys Gln Phe Leu Asp Glu
                  255                 260AAA AGC ATC AAG CCG GGC TTG CAG ACC TAC AAG CGC TGA TAAATGCGCC        1575Lys Ser Ile Lys Pro Gly Leu Gln Thr Tyr Lys Arg265                 270                 275 276GGGGCCCTCG CTGCGCCCCC GGCCTTCCAA TAATGACAAT AATGAGGAGT GCCCAATGTT     1635TCACGTGCCC CTGCTTATTG GTGGTAAGCC TTGTTCAGCA TCTGATGAGC GCACCTTCGA     1695GCGTCGTAGC CCGCTGACCG GAGAAGTGGT ATCGCGCGTC GCTGCTGCCA GTTTGGAAGA     1755TGCGGACGCC GCAGTGGCCG CTGCACAGGC TGCGTTTCCT GAATGGGCGG CGCTTGCTCC     1815GAGCGAACGC CGTGCCCGAC TGCTGCGAGC GGCGGATCTT CTAGAGGACC GTTCTTCCGA     1875GTTCACCGCC GCAGCGAGTG AAACTGGCGC AGCGGGAAAC TGGTATGGGT TTAACGTTTA     1935CCTGGCGGCG GGCATGTTGC GGGGAATTC                                       1964图2k：GAATTCCCCT GGCGACGAAA GGGCGGCAGG CCGCATGGCC ACGGCTGGGC GGTAACTGAT      60GCTTGCGTTA ATCGTTAACC GTTTGAAATT CCTTGCCAAA TTTCGGCGAG AGAATCATGC     120GGGTACGCCT TTCCGTGCGC TTTGATCTGC GCTTCCGTGC CTTGAATCAG AAAAATAGTT     180AATTGACAGA ACTATAGGTT CGCAGTAGCT TTTGCTCACC CACCAAATCC ACAGCACTGG     240GGTGCACG ATG AAT AGC TAC GAT GGC CGT TGG TCT ACC GTT GAT GTG AAG      290
     Met Asn Ser Tyr Asp Gly Arg Trp Ser Thr Val Asp Val Lys
       1               5                  10GTT GAA GAA GGT ATC GCT TGG GTC ACG CTG AAC CGC CCG GAG AAG CGC       338Val Glu Glu Gly Ile Ala Trp Val Thr Leu Asn Arg Pro Glu Lys Arg15                  20                  25                  30AAC GCA ATG AGC CCA ACT CTC AAT CGA GAG ATG GTC GAG GTT CTG GAG       386Asn Ala Met Ser Pro Thr Leu Asn Arg Glu Met Val Glu Val Leu Glu
             35                  40                  45GTG CTG GAG CAG GAC GCA GAT GCT CGC GTG CTT GTT CTG ACT GGT GCA       434Val Leu Glu Gln Asp Ala Asp Ala Arg Val Leu Val Leu Thr Gly Ala
         50                  55                  60GGC GAA TCC TGG ACC GCG GGC ATG GAC CTG AAG GAG TAT TTC CGC GAG       482Gly Glu Ser Trp Thr Ala Gly Met Asp Leu Lys Glu Tyr Phe Arg Glu
     65                  70                  75ACC GAT GCT GGC CCC GAA ATT CTG CAA GAG AAG ATT CGT CGC GAG CAG       530Thr Asp Ala Gly Pro Glu Ile Leu Gln Glu Lys Ile Arg Arg Glu Gln
 80                  85                  90      92 255GGC ATG AAG CAG TTC CTT GAC GAG AAA AGC ATC AAG CCG GGC TTG CAG       578Gly Met Lys Gln Phe Leu Asp Glu Lys Ser Ile Lys Pro Gly Leu Gln
        260                 265                 270ACC TAC AAG CGC TGA TAAATGCGCC GGGGCCCTCG CTGCGCCCCC GGCCTTCCAA       633Thr Tyr Lys Arg
    275 276TAATGACAAT AATGAGGAGT GCCCAATGTT TCACGTGCCC CTGCTTATTG GTGGTAAGCC     693TTGTTCAGCA TCTGATGAGC GCACCTTCGA GCGTCGTAGC CCGCTGACCG GAGAAGTGGT     753ATCGCGCGTC GCTGCTGCCA GTTTGGAAGA TGCGGACGCC GCAGTGGCCG CTGCACAGGC     813TGCGTTTCCT GAATGGGCGG CGCTTGCTCC GAGCGAACGC CGTGCCCGAC TGCTGCGAGC     873GGCGGATCTT CTAGAGGACC GTTCTTCCGA GTTCACCGCC GCAGCGAGTG AAACTGGCGC     933AGCGGGAAAC TGGTATGGGT TTAACGTTTA CCTGGCGGCG GGCATGTTGC GGGGAATTC      992图2l：GAATTCCAAT AATGACAATA ATGAGGAGTG CCCA ATG TTT CAC GTG CCC CTG CTT      55
                                  Met Phe His Val Pro Leu Leu
                                    1               5ATT GGT GGT AAG CCT TGT TCA GCA TCT GAT GAG CGC ACC TTC GAG CGT       103Ile Gly Gly Lys Pro Cys Ser Ala Ser Asp Glu Arg Thr Phe Glu Arg
     10                  15                  20CGT AGC CCG CTG ACC GGA GAA GTG GTA TCG CGC GTC GCT GCT GCC AGT       151Arg Ser Pro Leu Thr Gly Glu Val Val Ser Arg Val Ala Ala Ala Ser
 25                  30                  35TTG GAA GAT GCG GAC GCC GCA GTG GCC GCT GCA CAG GCT GCG TTT CCT       199Leu Glu Asp Ala Asp Ala Ala Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Phe Pro40                  45                  50                  55GAA TGG GCG GCG CTT GCT CCG AGC GAA CGC CGT GCC CGA CTG CTG CGA       247Glu Trp Ala Ala Leu Ala Pro Ser Glu Arg Arg Ala Arg Leu Leu Arg
             60                  65                  70GCG GCG GAT CTT CTA GAG GAC CGT TCT TCC GAG TTC ACC GCC GCA GCG       295Ala Ala Asp Leu Leu Glu Asp Arg Ser Ser Glu Phe Thr Ala Ala Ala
         75                  80                  85AGT GAA ACT GGC GCA GCG GGA AAC TGG TAT GGG TTT AAC GTT TAC CTG       343Ser Glu Thr Gly Ala Ala Gly Asn Trp Tyr Gly Phe Asn Val Tyr Leu
     90                  95                 100GCG GCG GGC ATG TTG CGG GAA GCC GCG GCC ATG ACC ACA CAG ATT CAG       391Ala Ala Gly Met Leu Arg Glu Ala Ala Ala Met Thr Thr Gln Ile Gln
105                 110                 115GGC GAT GTC ATT CCG TCC AAT GTG CCC GGT AGC TTT GCC ATG GCG GTT       439Gly Asp Val Ile Pro Ser Asn Val Pro Gly Ser Phe Ala Met Ala Val120                 125                 130                 135CGA CAG CCA TGT GGC GTG GTG CTC GGT ATT GCG CCT TGG AAT GCT CCG       487Arg Gln Pro Cys Gly Val Val Leu Gly Ile Ala Pro Trp Asn Ala Pro
            140                 145                 150GTA ATC CTT GGC GTA CGG GCT GTT GCG ATG CCG TTG GCA TGC GGC AAT       535Val Ile Leu Gly Val ArG Ala Val Ala Met Pro Leu Ala Cys Gly Asn
        155                 160                 165ACC GTG GTG TTG AAA AGC TCT GAG CTG AGT CCC TTT ACC CAT CGC CTG       583Thr Val Val Leu Lys Ser Ser Glu Leu Ser Pro phe Thr His Arg Leu
    170                 175                 180ATT GGT CAG GTG TTG CAT GAT GCT GGT CTG GGG GAT GGC GTG GTG AAT       631Ile Gly Gln Val Leu His Asp Ala Gly Leu Gly Asp Gly Val Val Asn
185                 190                 195GTC ATC AGC AAT GCC CCG CAA GAC GCT CCT GCG GTG GTG GAG CGA CTG       679Val Ile Ser Asn Ala Pro Gln Asp Ala Pro Ala Val Val Glu ArG Leu200                 205                 210                 215ATT GCA AAT CCT GCG GTA CGT CGA GTG AAC TTC ACC GGT TCG ACC CAC       727Ile Ala Asn Pro Ala Val Arg Arg Val Asn Phe Thr Gly Ser Thr His
            220                 225                 230GTT GGA CGG ATC ATT GGT GAG CTG TCT GCG CGT CAT CTG AAG CCT GCT       775Val Gly Arg Ile Ile Gly Glu Leu Ser Ala Arg His Leu Lys Pro Ala
        235                 240                 245GTG CTG GAA TTA GGT GGT AAG GCT CCG TTC TTG GTC TTG GAC GAT GCC       823Val Leu Glu Leu Gly Gly Lys Ala Pro Phe Leu Val Leu Asp Asp Ala
    250                 255                 260GAC CTC GAT GCG GCG GTC GAA GCG GCG GCC TTT GGT GCC TAC TTC AAT       871Asp Leu Asp Ala Ala Val Glu Ala Ala Ala Phe Gly Ala Tyr Phe Asn
265                 270                 275CAG GGT CAA ATC TGC ATG TCC ACT GAG CGT CTG ATT GTG ACA GCA GTC       919Gln Gly Gln Ile Cys Met Ser Thr Glu Arg Leu Ile Val Thr Ala Val280                 285                 290                 295GCA GAC GCC TTT GTT GAA AAG CTG GCG AGG AAG GTC GCC ACA CTG CGT       967Ala Asp Ala Phe Val Glu Lys Leu Ala Arg Lys Val Ala Thr Leu Arg
            300                 305                 310GCT GGC GAT CCT AAT GAT CCG CAA TCG GTC TTG GGT TCG TTG ATT GAT      1015Ala Gly Asp Pro Asn Asp Pro Gln Ser Val Leu Gly Ser Leu Ile Asp
        315                 320                 325GCC AAT GCA GGT CAA CGC ATC CAG GTT CTG GTC GAT GAT GCG CTC GGG      1063Ala Asn Ala Gly Gln Arg Ile Gln Val Leu Val Asp Asp Ala Leu
    330                 335                 340     342GACAGCAAGC GAACCGGAAT TGCCAGCTGG GGCGCCCTCT GGTAAGGTTG GGAAGCCCTG    1123CAAAGTAAAC TGGATGGCTT TCTTGCCGCC AAGGATCTGA TGGCGCAGGG GATCAAGATC    1183TGATCAAGAG ACAGGATGAG GATCGTTTCG C ATG ATT GAA CAA GAT GGA TTG       1235
                               Met Ile Glu Gln Asp Gly Leu
                                 1               5CAC GCA GGT TCT CCG GCC GCT TGG GTG GAG AGG CTA TTC GGC TAT GAC      1283His Ala Gly Ser Pro Ala Ala Trp Val Glu Arg Leu Phe Gly Tyr Asp
     10                  15                  20TGG GCA CAA CAG ACA ATC GGC TGC TCT GAT GCC GCC GTG TTC CGG CTG      1331Trp Ala Gln Gln Thr Ile Gly Cys Ser Asp Ala Ala Val Phe Arg Leu
 25                  30                  35TCA GCG CAG GGG CGC CCG GTT CTT TTT GTC AAG ACC GAC CTG TCC GGT      1379Ser Ala Gln Gly Arg Pro Val Leu Phe Val Lys Thr Asp Leu Ser Gly40                  45                  50                  55GCC CTG AAT GAA CTG CAG GAC GAG GCA GCG CGG CTA TCG TGG CTG GCC      1427Ala Leu Asn Glu Leu Gln Asp Glu Ala Ala Arg Leu Ser Trp Leu Ala
             60                  65                  70ACG ACG GGC GTT CCT TGC GCA GCT GTG CTC GAC GTT GTC ACT GAA GCG       1475Thr Thr Gly Val Pro Cys Ala Ala Val Leu Asp Val Val Thr Glu Ala
         75                  80                  85GGA AGG GAC TGG CTG CTA TTG GGC GAA GTG CCG GGG CAG GAT CTC CTG       1523Gly Arg Asp Trp Leu Leu Leu Gly Glu Val Pro Gly Gln Asp Leu Leu
     90                  95                 100TCA TCT CAC CTT GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC ATC ATG GCT GAT GCA       1571Ser Ser His Leu Ala Pro Ala Glu Lys Val Ser Ile Met Ala Asp Ala
105                 110                 115ATG CGG CGG CTG CAT ACG CTT GAT CCG GCT ACC TGC CCA TTC GAC CAC       1619Met Arg Arg Leu His Thr Leu Asp Pro Ala Thr Cys Pro Phe Asp His120                 125                 130                 135CAA GCG AAA CAT CGC ATC GAG CGA GCA CGT ACT CGG ATG GAA GCC GGT       1667Gln Ala Lys His Arg Ile Glu Arg Ala Arg Thr Arg Met Glu Ala Gly
            140                 145                 150CTT GTC GAT CAG GAT GAT CTG GAC GAA GAG CAT CAG GGG CTC GCG CCA       1715Leu Val Asp Gln Asp Asp Leu Asp Glu Glu His Gln Gly Leu Ala Pro
        155                 160                 165GCC GAA CTG TTC GCC AGG CTC AAG GCG CGC ATG CCC GAC GGC GAG GAT       1763Ala Glu Leu Phe Ala Arg Leu Lys Ala Arg Met Pro Asp Gly Glu Asp
    170                 175                 180CTC GTC GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG CCG AAT ATC ATG GTG GAA       1811Leu Val Val Thr His Gly Asp Ala Cys Leu Pro Asn Ile Met Val Glu
185                 190                 195AAT GGC CGC TTT TCT GGA TTC ATC GAC TGT GGC CGG CTG GGT GTG GCG       1859Asn Gly Arg Phe Ser Gly Phe Ile Asp Cys Gly Arg Leu Gly Val Ala200                 205                 210                 215GAC CGC TAT CAG GAC ATA GCG TTG GCT ACC CGT GAT ATT GCT GAA GAG       1907Asp Arg Tyr Gln Asp Ile Ala Leu Ala Thr Arg Asp Ile Ala Glu Glu
            220                 225                 230CTT GGC GGC GAA TGG GCT GAC CGC TTC CTC GTG CTT TAC GGT ATC GCC       1955Leu Gly Gly Glu Trp Ala Asp Arg Phe Leu Val Leu Tyr Gly Ile Ala
        235                 240                 245GCT CCC GAT TCG CAG CGC ATC GCC TTC TAT CGC CTT CTT GAC GAG TTC       2003Ala Pro Asp Ser Gln Arg Ile Ala Phe Tyr Arg Leu Leu Asp Glu Phe
    250                 255                 260TTC TGA GCGGGACTCT GGGGTTCGAAATGACCGACC AAGCGACGCC CG GCC CAG         2057phe                                                   Ala Gln264                                                   421CGC GTC GAT TCG GGC ATT TGC CAT ATC AAT GGA CCG ACT GTG CAT GAC       2105Arg Val Asp Ser Gly Ile Cys His Ile Asn Gly Pro Thr Val His Asp
    425                 430                 435GAG GCT CAG ATG CCA TTC GGT GGG GTG AAG TCC AGC GGC TAC GGC AGC       2153Glu Ala Gln Met Pro Phe Gly Gly Val Lys Ser Ser Gly Tyr Gly Ser
440                 445                 450TTC GGC AGT CGA GCA TCG ATT GAG CAC TTT ACC CAG CTG CGC TGG CTG       2201Phe Gly Ser Arg Ala Ser Ile Glu His Phe Thr Gln Leu Arg Trp Leu455                 460                 465                 470ACC ATT CAG AAT GGC CCG CGG CAC TAT CCA ATC TAA ATCGATCTTC            2247Thr Ile Gln Asn Gly Pro Arg His Tyr Pro Ile
            475                 480 481GGGCGCCGCG GGCATCATGC CCGCGGCGCT CGCCTCATTT CAATCTCTAA CTTGATAAAA     2307ACAGAGCTGT TCTCCGGTCT TGGTGGATCA AGGCCAGTCG CGGAGAGTCT CGAAGAGGAG     2367AGTACAGTGA ACGCCGAGTC CACATTGCAA CCGCAGGCAT CATCATGCTC TGCTCAGCCA     2427CGCTACCGCA GTGTGTCGAT TGGTCATCCT CCGGTTGAGG TTACGCAAGA CGCTGGAGGT     2487ATTGTCCGGA TGCGTTCTCT CGAGGCGCTT CTTCCCTTCC CGGGTGGAAT TC             2539图2m：GAATTCCAAT AATGACAATA ATGAGGAGTG CCCA ATG TTT CAC GTG CCC CTG CTT      55
                                  Met Phe His Val Pro Leu Leu
                                    1               5ATT GGT GGT AAG CCT TGT TCA GCA TCT GAT GAG CGC ACC TTC GAG CGT       103Ile Gly Gly Lys Pro Cys Ser Ala Ser Asp Glu Arg Thr Phe Glu Arg
     10                  15                  20CGT AGC CCG CTG ACC GGA GAA GTG GTA TCG CGC GTC GCT GCT GCC AGT       151Arg Ser Pro Leu Thr Gly Glu Val Val Ser Arg Val Ala Ala Ala Ser
 25                  30                  35TTG GAA GAT GCG GAC GCC GCA GTG GCC GCT GCA CAG GCT GCG TTT CCT       199Leu Glu Asp Ala Asp Ala Ala Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Phe Pro40                  45                  50                  55GAA TGG GCG GCG CTT GCT CCG AGC GAA CGC CGT GCC CGA CTG CTG CGA       247Glu Trp Ala Ala Leu Ala Pro Ser Glu Arg Arg Ala Arg Leu Leu Arg
             60                  65                  70GCG GCG GAT CTT CTA GAG GAC CGT TCT TCC GAG TTC ACC GCC GCA GCG       295Ala Ala Asp Leu Leu Glu Asp Arg Ser Ser Glu Phe Thr Ala Ala Ala
         75                  80                  85AGT GAA ACT GGC GCA GCG GGA AAC TGG TAT GGG TTT AAC GTT TAC CTG       343Ser Glu Thr Gly Ala Ala Gly Asn Trp Tyr Gly Phe Asn Val Tyr Leu
     90                  95                 100GCG GCG GGC ATG TTG CGG GAA GCC GCG GCC ATG ACC ACA CAG ATT CAG       391Ala Ala Gly Met Leu Arg Glu Ala Ala Ala Met Thr Thr Gln Ile Gln
105                 110                 115GGC GAT GTC ATT CCG TCC AAT GTG CCC GGT AGC TTT GCC ATG GCG GTT       439Gly Asp Val Ile Pro Ser Asn Val Pro Gly Ser Phe Ala Met Ala Val120                 125                 130                 135CGA CAG CCA TGT GGC GTG GTG CTC GGT ATT GCG CCT TGG AAT GCT CCG       487Arg Gln Pro Cys Gly Val Val Leu Gly Ile Ala Pro Trp Asn Ala Pro
            140                 145                 150GTA ATC CTT GGC GTA CGG GCT GTT GCG ATG CCG TTG GCA TGC GGC AAT       535Val Ile Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Met Pro Leu Ala Cys Gly Asn
        155                 160                 165ACC GTG GTG TTG AAA AGC TCT GAG CTG AGT CCC TTT ACC CAT CGC CTG       583Thr Val Val Leu Lys Ser Ser Glu Leu Ser Pro Phe Thr His Arg Leu
    170                 175                 180ATT GGT CAG GTG TTG CAT GAT GCT GGT CTG GGG GAT GGC GTG GTG AAT       631Ile Gly Gln Val Leu His Asp Ala Gly Leu Gly Asp Gly Val Val Asn
185                 190                 195GTC ATC AGC AAT GCC CCG CAA GAC GCT CCT GCG GTG GTG GAG CGA CTG       679Val Ile Ser Asn Ala Pro Gln Asp Ala Pro Ala Val Val Glu Arg Leu200                 205                 210                 215ATT GCA AAT CCT GCG GTA CGT CGA GTG AAC TTC ACC GGT TCG ACC CAC       727Ile Ala Asn Pro Ala Val Arg Arg Val Asn Phe Thr Gly Ser Thr His
            220                 225                 230GTT GGA CGG ATC ATT GGT GAG CTG TCT GCG CGT CAT CTG AAG CCT GCT       775Val Gly Arg Ile Ile Gly Glu Leu Ser Ala Arg His Leu Lys Pro Ala
        235                 240                 245GTG CTG GAA TTA GGT GGT AAG GCT CCG TTC TTG GTC TTG GAC GAT GCC       823Val Leu Glu Leu Gly Gly Lys Ala Pro Phe Leu Val Leu Asp Asp Ala
    250                 255                 260GAC CTC GAT GCG GCG GTC GAA GCG GCG GCC TTT GGT GCC TAC TTC AAT       871Asp Leu Asp Ala Ala Val Glu Ala Ala Ala Phe Gly Ala Tyr Phe Asn
265                 270                 275CAG GGT CAA ATC TGC ATG TCC ACT GAG CGT CTG ATT GTG ACA GCA GTC       919Gln Gly Gln Ile Cys Met Ser Thr Glu Arg Leu Ile Val Thr Ala Val280                 285                 290                 295GCA GAC GCC TTT GTT GAA AAG CTG GCG AGG AAG GTC GCC ACA CTG CGT       967Ala Asp Ala Phe Val Glu Lys Leu Ala Arg Lys Val Ala Thr Leu Arg
            300                 305                 310GCT GGC GAT CCT AAT GAT CCG CAA TCG GTC TTG GGT TCG TTG ATT GAT      1015Ala Gly Asp Pro Asn Asp Pro Gln Ser Val Leu Gly Ser Leu Ile Asp
        315                 320                 325GCC AAT GCA GGT CAA CGC ATC CAG GTGGGGAGAG GCGGTTTGCG TATTGGGCGC     1069Ala Asn Ala Gly Gln Arg Ile Gln
    330                 335ATGCATAAAA ACTGTTGTAA TTCATTAAGC ATTCTGCCGA CATGGAAGCC ATCACAAACG    1129GCATGATGAA CCTGAATCGC CAGCGGCATC AGCACCTTGT CGCCTTGCGT ATAATATTTG    1189CCCATGGACG CACACCGTGG AAACGGATGA AGGCACGAAC CCAGTTGACA TAAGCCTGTT    1249CGGTTCGTAA ACTGTAATGC AAGTAGCGTA TGCGCTCACG CAACTGGTCC AGAACCTTGA    1309CCGAACGCAG CGGTGGTAAC GGCGCAGTGG CGGTTTTCAT GGCTTGTTAT GACTGTTTTT    1369TTGTACAGTC TATGCCTCGG GCATCCAAGC AGCAAGCGCG TTACGCCGTG GGTCGATGTT    1429TGATGTTATG GAGCAGCAAC G ATG TTA CGC AGC AGC AAC GAT GTT ACG CAG      1480
                    Met Leu Arg Ser Ser Ash Asp Val Thr Gln
                      1               5                  10CAG GGC AGT CGC CCT AAA ACA AAG TTA GGT GGC TCA AGT ATG GGC ATC      1528Gln Gly Ser Arg Pro Lys Thr Lys Leu Gly Gly Ser Ser Met Gly Ile
             15                  20                  25ATT CGC ACA TGT AGG CTC GGC CCT GAC CAA GTC AAA TCC ATG CGG GCT      1576Ile Arg Thr Cys Arg Leu Gly Pro Asp Gln Val Lys Ser Met Arg Ala
         30                  35                  40GCT CTT GAT CTT TTC GGT CGT GAG TTC GGA GAC GTA GCC ACC TAC TCC       1624Ala Leu Asp Leu Phe Gly Arg Glu Phe Gly Asp Val Ala Thr Tyr Ser
     45                  50                  55CAA CAT CAG CCG GAC TCC GAT TAC CTC GGG AAC TTG CTC CGT AGT AAG       1672Gln His Gln Pro Asp Ser Asp Tyr Leu Gly Asn Leu Leu Arg Ser Lys
 60                  65                  70ACA TTC ATC GCG CTT GCT GCC TTC GAC CAA GAA GCG GTT GTT GGC GCT       1720Thr Phe Ile Ala Leu Ala Ala Phe Asp Gln Glu Ala Val Val Gly Ala75                  80                  85                  90CTC GCG GCT TAC GTT CTG CCC AGG TTT GAG CAG CCG CGT AGT GAG ATC       1768Leu Ala Ala Tyr Val Leu Pro Arg Phe Glu Gln Pro Arg Ser Glu Ile
             95                  100                105TAT ATC TAT GAT CTC GCA GTC TCC GGC GAG CAC CGG AGG CAG GGC ATT       1816Tyr Ile Tyr Asp Leu Ala Val Ser Gly Glu His Arg Arg Gln Gly Ile
        110                 115                 120GCC ACC GCG CTC ATC AAT CTC CTC AAG CAT GAG GCC AAC GCG CTT GGT       1864Ala Thr Ala Leu Ile Asn Leu Leu Lys His Glu Ala Asn Ala Leu Gly
    125                 130                 135GCT TAT GTG ATC TAC GTG CAA GCA GAT TAC GGT GAC GAT CCC GCA GTG       1912Ala Tyr Val Ile Tyr Val Gln Ala Asp Tyr Gly Asp Asp Pro Ala Val
140                 145                 150GCT CTC TAT ACA AAG TTG GGC ATA CGG GAA GAA GTG ATG CAC TTT GAT       1960Ala Leu Tyr Thr Lys Leu Gly Ile Arg Glu Glu Val Met His Phe Asp155                 160                 165                 170ATC GAC CCA AGT ACC GCC ACC TAA CAATTCGTTC AAGCCGAGAT CGGCTTCCCA      2014Ile Asp Pro Ser Thr Ala Thr
            175     177A TTG GCC CAG CGC GTC GAT TCG GGC ATT TGC CAT ATC AAT GGA CCG ACT     2063Leu Ala Gln Arg Val Asp Ser Gly Ile Cys His Ile Asn Gly Pro Thr420                 425                 430                 435GTG CAT GAC GAG GCT CAG ATG CCA TTC GGT GGG GTG AAG TCC AGC GGC       2111Val His Asp Glu Ala Gln Met Pro Phe Gly Gly Val Lys Ser Ser Gly
            440                 445                 450TAC GGC AGC TTC GGC AGT CGA GCA TCG ATT GAG CAC TTT ACC CAG CTG       2159Tyr Gly Ser Phe Gly Ser Arg Ala Ser Ile Glu His Phe Thr Gln Leu
        455                 460                 465CGC TGG CTG ACC ATT CAG AAT GGC CCG CGG CAC TAT CCA ATC TAA           2204Arg Trp Leu Thr Ile Gln Asn Gly Pro Arg His Tyr Pro Ile
    470                 475                 480 481ATCGATCTTC GGGCGCCGCG GGCATCATGC CCGCGGCGCT CGCCTCATTT CAATCTCTAA     2264CTTGATAAAA ACAGAGCTGT TCTCCGGTCT TGGTGGATCA AGGCCAGTCG CGGAGAGTCT     2324CGAAGAGGAG AGTACAGTGA ACGCCGAGTC CACATTGCAA CCGCAGGCAT CATCATGCTC     2384TGCTCAGCCA CGCTACCGCA GTGTGTCGAT TGGTCATCCT CCGGTTGAGG TTACGCAAGA     2444CGCTGGAGGT ATTGTCCGGA TGCGTTCTCT CGAGGCGCTT CTTCCCTTCC CGGGTGGAAT     2504TC                                                                    2506图2n：GAATTCCAAT AATGACAATA ATGAGGAGTG CCCA ATG TTT CAC GTG CCC CTG CTT      55
                                  Met Phe His Val Pro Leu Leu
                                    1               5ATT GGT GGT AAG CCT TGT TCA GCA TCT GAT GAG CGC ACC TTC GAG CGT       103Ile Gly Gly Lys Pro Cys Ser Ala Ser Asp Glu Arg Thr Phe Glu Arg
     10                  15                  20CGT AGC CCG CTG ACC GGA GAA GTG GTA TCG CGC GTC GCT GCT GCC AGT       151Arg Ser Pro Leu Thr Gly Glu Val Val Ser Arg Val Ala Ala Ala Ser
 25                  30                  35TTG GAA GAT GCG GAC GCC GCA GTG GCC GCT GCA CAG GCT GCG TTT CCT       199Leu Glu Asp Ala Asp Ala Ala Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Phe Pro40                  45                  50                  55GAA TGG GCG GCG CTT GCT CCG AGC GAA CGC CGT GCC CGA CTG CTG CGA       247Glu Trp Ala Ala Leu Ala Pro Ser Glu Arg Arg Ala Arg Leu Leu Arg
             60                  65                  70GCG GCG GAT CTT CTA GAG GAC CGT TCT TCC GAG TTC ACC GCC GCA GCG       295Ala Ala Asp Leu Leu Glu Asp Arg Ser Ser Glu Phe Thr Ala Ala Ala
         75                  80                  85AGT GAA ACT GGC GCA GCG GGA AAC TGG TAT GGG TTT AAC GTT TAC CTG       343Ser Glu Thr Gly Ala Ala Gly Asn Trp Tyr Gly Phe Asn Val Tyr Leu
     90                  95                 100GCG GCG GGC ATG TTG CGG GAA GCC GCG GCC ATG ACC ACA CAG ATT CAG       391Ala Ala Gly Met Leu Arg Glu Ala Ala Ala Met Thr Thr Gln Ile Gln
105                 110                 115GGC GAT GTC ATT CCG TCC AAT GTG CCC GGT AGC TTT GCC ATG GCG GTT       439Gly Asp Val Ile Pro Ser Asn Val Pro Gly Ser Phe Ala Met Ala Val120                 125                 130                 135CGA CAG CCA TGT GGC GTG GTG CTC GGT ATT GCG CCT TGG AAT GCT CCG       487Arg Gln Pro Cys Gly Val Val Leu Gly Ile Ala Pro Trp Asn Ala Pro
            140                 145                 150GTA ATC CTT GGC GTA CGG GCT GTT GCG ATG CCG TTG GCA TGC GGC AAT       535Val Ile Leu Gly Val Arg Ala Val Ala Met Pro Leu Ala Cys Gly Ash
        155                 160                 165ACC GTG GTG TTG AAA AGC TCT GAG CTG AGT CCC TTT ACC CAT CGC CTG       583Thr Val Val Leu Lys Ser Ser Glu Leu Ser Pro Phe Thr His Arg Leu
    170                 175                 180ATT GGT CAG GTG TTG CAT GAT GCT GGT CTG GGG GAT GGC GTG GTG AAT       631Ile Gly Gln Val Leu His Asp Ala Gly Leu Gly Asp Gly Val Val Asn
185                 190                 195GTC ATC AGC AAT GCC CCG CAA GAC GCT CCT GCG GTG GTG GAG CGA CTG       679Val Ile Ser Asn Ala Pro Gln Asp Ala Pro Ala Val Val Glu Arg Leu200                 205                 210                 215ATT GCA AAT CCT GCG GTA CGT CGA GTG AAC TTC ACC GGT TCG ACC CAC       727Ile Ala Asn Pro Ala Val Arg Arg val Asn Phe Thr Gly Ser Thr His
            220                 225                 230GTT GGA CGG ATC ATT GGT GAG CTG TCT GCG CGT CAT CTG AAG CCT GCT       775Val Gly Arg Ile Ile Gly Glu Leu Ser Ala Arg His Leu Lys Pro Ala
        235                 240                 245GTG CTG GAA TTA GGT GGT AAG GCT CCG TTC TTG GTC TTG GAC GAT GCC       823Val Leu Glu Leu Gly Gly Lys Ala Pro Phe Leu Val Leu Asp Asp Ala
    250                 255                 260GAC CTC GAT GCG GCG GTC GAA GCG GCG GCC TTT GGT GCC TAC TTC AAT       871Asp Leu Asp Ala Ala Val Glu Ala Ala Ala Phe Gly Ala Tyr Phe Asn
265                 270                 275CAG GGT CAA ATC TGC ATG TCC ACT GAG CGT CTG ATT GTG ACA GCA GTC       919Gln Gly Gln Ile Cys Met Ser Thr Glu Arg Leu Ile Val Thr Ala Val280                 285                 290                 295GCA GAC GCC TTT GTT GAA AAG CTG GCG AGG AAG GTC GCC ACA CTG CGT       967Ala Asp Ala Phe Val Glu Lys Leu Ala Arg Lys Val Ala Thr Leu Arg
            300                 305                 310GCT GGC GAT CCT AAT GAT CCG CAA TCG GTC TTG GGT TCG TTG ATT GAT      1015Ala Gly Asp Pro Asn Asp Pro Gln Ser Val Leu Gly Ser Leu Ile Asp
        315                 320                 325GCC AAT GCA GGT CAA CGC ATC CAG GTT CTG GTC GAT GAT GCG CTC GCA      1063Ala Asn Ala Gly Gln ArG Ile Gln Val Leu Val Asp Asp Ala Leu Ala
    330                 335                 340AAA GGC GCG CAATGGAA TTG GCC CAG CGC GTC GAT TCG GGC ATT TGC CAT     1113Lys Gly Ala           Leu Ala Gln Arg Val Asp Ser Gly Ile Cys His
345 346           420                 425                 430ATC AAT GGA CCG ACT GTG CAT GAC GAG GCT CAG ATG CCA TTC GGT GGG      1161Ile Asn Gly Pro Thr Val His Asp Glu Ala Gln Met Pro Phe Gly Gly
            435                 440                 445GTG AAG TCC AGC GGC TAC GGC AGC TTC GGC AGT CGA GCA TCG ATT GAG      1209Val Lys Ser Ser Gly Tyr Gly Ser Phe Gly Ser Arg Ala Ser Ile Glu
        450                 455                 460CAC TTT ACC CAG CTG CGC TGG CTG ACC ATT CAG AAT GGC CCG CGG CAC      1257His Phe Thr Gln Leu Arg Trp Leu Thr Ile Gln Asn Gly Pro Arg His
    465                 470                 475TAT CCA ATC TAAATCGATCTTC GGGCGCCGCG GGCATCATGC CCGCGGCGCT           1309Tyr Pro Ile
480 481CGCCTCATTT CAATCTCTAA CTTGATAAAA ACAGAGCTGT TCTCCGGTCT TGGTGGATCA    1369AGGCCAGTCG CGGAGAGTCT CGAAGAGGAG AGTACAGTGA ACGCCGAGTC CACATTGCAA    1429CCGCAGGCAT CATCATGCTC TGCTCAGCCA CGCTACCGCA GTGTGTCGAT TGGTCATCCT     1489CCGGTTGAGG TTACGCAAGA CGCTGGAGGT ATTGTCCGGA TGCGTTCTCT CGAGGCGCTT     1549CTTCCCTTCC CGGGTGGAAT TC                                              1571图2o：GAATTCCGCG GTCGGCGAAA GTTGATGCGC TGTATCGTGG TGAAGATCAA TCCATGCTGC      60GTGACGAGGC CACACT GTG AGT TGG TCA GGG GGG GCT TAC TCG GCG TTT TCC     112
              Met Ser Trp Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ala Phe Ser
                1               5                  10GAC ACT GCG TTG GTT GCG GCA GTG CGC ACC CCC TGG ATT GAT TGC GGG       160Asp Thr Ala Leu Val Ala Ala Val Arg Thr Pro Trp Ile Asp Cys Gly
    15                  20                  25GGT GCC CTG TCG CTG GTG TCG CCT ATC GAC TTA GGG GTA AAG GTC GCT       208Gly Ala Leu Ser Leu Val Ser Pro Ile Asp Leu Gly Val Lys Val Ala
 30                  35                  40CGC GAA GTT CTG ATG CGT GCG TCG CTT GAA CCA CAA ATG GTC GAT AGC       256Arg Glu Val Leu Met Arg Ala Ser Leu Glu Pro Gln Met Val Asp Ser45                   50                  55                  60GTA CTC GCA GGC TCT ATG GCT CAA GCA AGC TTT GAT GCT TAC CTG CTC       304Val Leu Ala Gly Ser Met Ala Gln Ala Ser Phe Asp Ala Tyr Leu Leu
             65                  70                  75CCG CGG CAC ATT GGC TTG TAC AGC GGT GTT CCC AAG TCG GTT CCG GCC       352Pro Arg His Ile Gly Leu Tyr Ser Gly Val Pro Lys Ser Val Pro Ala
         80                  85                  90TTG GGG GTG CAG CGC ATT TGC GGC ACA GGC TTC GAA CTG CTT CGG CAG       400Leu Gly Val Gln Arg Ile Cys Gly Thr Gly Phe Glu Leu Leu Arg Gln
     95                 100                 105GCC GGC GAG CAG ATT TCC CAA GGC GCT GAT CAC GTG CTG TGT GTC GCG       448Ala Gly Glu Gln Ile Ser Gln Gly Ala Asp His Val Leu Cys Val Ala
110                 115                 120GCA GAG TCC ATG TCG CGT AAC CCC ATC GCG TCG TAT ACA CAC CGG GGC       496Ala Glu Ser Met Ser Arg Asn Pro Ile Ala Ser Tyr Thr His Arg Gly125                 130                 135                 140GGG TTC CGC CTC GGT GCG CCC GTT GAG TTC AAG GAT TTT TTG TGG GAG       544Gly Phe Arg Leu Gly Ala Pro Val Glu Phe Lys Asp Phe Leu Trp Glu
            145                 150                 155GCA TTG TTT GAT CCT GCT CCA GGA CTC GAC ATG ATC GCT ACC GCA GAA       592Ala Leu Phe Asp Pro Ala Pro Gly Leu Asp Met Ile Ala Thr Ala Glu
        160                 165                 170AAC CTG GGGACAGCAA GCGAACCGGA ATTGCCAGCT GGGGCGCCCT CTGGTAAGGT        648Asn Leu
174TGGGAAGCCC TGCAAAGTAA ACTGGATGGC TTTCTTGCCG CCAAGGATCT GATGGCGCAG     708GGGATCAAGA TCTGATCAAG AGACAGGATG AGGATCGTTT CGC ATG ATT GAA CAA       763
                                            Met Ile Glu Gln
                                              1GAT GGA TTG CAC GCA GGT TCT CCG GCC GCT TGG GTG GAG AGG CTA TTC       811Asp Gly Leu His Ala Gly Ser Pro Ala Ala Trp Val Glu Arg Leu Phe5                  10                  15                  20GGC TAT GAC TGG GCA CAA CAG ACA ATC GGC TGC TCT GAT GCC GCC GTG       859Gly Tyr Asp Trp Ala Gln Gln Thr Ile Gly Cys Ser Asp Ala Ala Val
             25                  30                  35TTC CGG CTG TCA GCG CAG GGG CGC CCG GTT CTT TTT GTC AAG ACC GAC       907Phe Arg Leu Ser Ala Gln Gly Arg Pro Val Leu Phe Val Lys Thr Asp
         40                  45                  50CTG TCC GGT GCC CTG AAT GAA CTG CAG GAC GAG GCA GCG CGG CTA TCG       955Leu Ser Gly Ala Leu Asn Glu Leu Gln Asp Glu Ala Ala Arg Leu Ser
     55                  60                  65TGG CTG GCC ACG ACG GGC GTT CCT TGC GCA GCT GTG CTC GAC GTT GTC      1003Trp Leu Ala Thr Thr Gly Val Pro Cys Ala Ala Val Leu Asp Val Val
 70                  75                  80ACT GAA GCG GGA AGG GAC TGG CTG CTA TTG GGC GAA GTG CCG GGG CAG      1051Thr Glu Ala Gly Arg Asp Trp Leu Leu Leu Gly Glu Val Pro Gly Gln85                  90                  95                 100GAT CTC CTG TCA TCT CAC CTT GCT CCT GCC GAG AAA GTA TCC ATC ATG      1099Asp Leu Leu Ser Ser His Leu Ala Pro Ala Glu Lys Val Ser Ile Met
            105                 110                 115GCT GAT GCA ATG CGG CGG CTG CAT ACG CTT GAT CCG GCT ACC TGC CCA      1147Ala Asp Ala Met Arg Arg Leu His Thr Leu Asp Pro Ala Thr Cys Pro
        120                 125                 130TTC GAC CAC CAA GCG AAA CAT CGC ATC GAG CGA GCA CGT ACT CGG ATG      1195Phe Asp His Gln Ala Lys His Arg Ile Glu Arg Ala Arg Thr Arg Met
    135                 140                 145GAA GCC GGT CTT GTC GAT CAG GAT GAT CTG GAC GAA GAG CAT CAG GGG      1243Glu Ala Gly Leu Val Asp Gln Asp Asp Leu Asp Glu Glu His Gln Gly
150                 155                 160CTC GCG CCA GCC GAA CTG TTC GCC AGG CTC AAG GCG CGC ATG CCC GAC      1291Leu Ala Pro Ala Glu Leu Phe Ala Arg Leu Lys Ala Arg Met Pro Asp165                 170                 175                 180GGC GAG GAT CTC GTC GTG ACC CAT GGC GAT GCC TGC TTG CCG AAT ATC      1339Gly Glu Asp Leu Val Val Thr His Gly Asp Ala Cys Leu Pro Asn Ile
            185                 190                 195ATG GTG GAA AAT GGC CGC TTT TCT GGA TTC ATC GAC TGT GGC CGG CTG      1387Met Val Glu Asn Gly Arg Phe Ser Gly Phe Ile Asp Cys Gly Arg Leu
        200                 205                 210GGT GTG GCG GAC CGC TAT CAG GAC ATA GCG TTG GCT ACC CGT GAT ATT      1435Gly Val Ala Asp Arg Tyr Gln Asp Ile Ala Leu Ala Thr Arg Asp Ile
    215                 220                 225GCT GAA GAG CTT GGC GGC GAA TGG GCT GAC CGC TTC CTC GTG CTT TAC       1483Ala Glu Glu Leu Gly Gly Glu Trp Ala Asp Arg Phe Leu Val Leu Tyr
230                 235                 240GGT ATC GCC GCT CCC GAT TCG CAG CGC ATC GCC TTC TAT CGC CTT CTT       1531Gly Ile Ala Ala Pro Asp Ser Gln Arg Ile Ala Phe Tyr Arg Leu Leu245                 250                 255                 260GAC GAG TTC TTC TGA GCGGGACTCT GGGGTTCGAA ATGACCGACC AAGCGACGCC       1586Asp Glu phe Phe
        264CA TTG AGG GCG CAA GAG GAG AAA TGG ATT GAC CAA GAG ATC GTG GCT        1633Leu Arg Ala Gln Glu Glu Lys Trp Ile Asp Gln Glu Ile Val Ala197         200                 205                 210GTT ACG GAT GAA CAG TTC GAT TTA GAG GGC TACAAC AGT CGA GCA ATT        1681Val Thr Asp Glu Gln Phe Asp Leu Glu Gly Tyr Asn Ser Arg Ala Ile
        215                 220                 225GAA CTG CCT CGG AAG GCA AAA TTG TTG ATC GTG ACA GTC ATC CGC GGC       1729Glu Leu Pro Arg Lys Ala Lys Leu Leu Ile Val Thr Val Ile Arg Gly
    230                 235                 240CTA GCA GTC TTT GAA GCC CTT TCC CGA TTG AAG CCT GTT CAT TCT GGC       1777Leu Ala Val Phe Glu Ala Leu Ser Arg Leu Lys Pro Val His Ser Gly
245                 250                 255GGG GTG CAG ACT GCG GGC AAC AGC TGT GCC GTA GTG GAC GGC GCC GCG       1825Gly Val Gln Thr Ala Gly Asn Ser Cys Ala Val Val Asp Gly Ala Ala260                 265                 270                 275GCG GCT TTG GTG GCT CGA GAG TCG TCT GCG ACA CAG CCG GTC TTG GCT       1873Ala Ala Leu Val Ala Arg Glu Ser Ser Ala Thr Gln Pro Val Leu Ala
            280                 285                 290AGG ATA CTG GCT ACC TCC GTA GTC GGG ATC GAG CCC GAG CAT ATG GGG       1921Arg Ile Leu Ala Thr Ser Val Val Gly Ile Glu Pro Glu His Met Gly
        295                 300                 305CTC GGC CCT GCG CCC GCG ATT CGC CTG CTG CTT GCG CGT AGT GAT CTT       1969Leu Gly Pro Ala Pro Ala Ile Arg Leu Leu Leu Ala Arg Ser Asp Leu
    310                 315                 320AGT TTG AGG GAT ATC GAC CTC TTT GAG ATA AAC GAG GCG CAG GCC GCC       2017Ser Leu Arg Asp Ile Asp Leu Phe Glu Ile Asn Glu Ala Gln Ala Ala
325                 330                 335CAA GTT CTA GCG GTA CAG CAT GAA TTG GGT ATT GAG CAC TCA AAA CTT       2065Gln Val Leu Ala Val Gln His Glu Leu Gly Ile Glu His Ser Lys Leu340                 345                 350                 355AAT ATT TGG GGC GGG GCC ATT GCA CTT GGA CAC CCG CTT GCC GCG ACC       2113Asn Ile Trp Gly Gly Ala Ile Ala Leu Gly His Pro Leu Ala Ala Thr
            360                 365                 370GGA TTG CGT CTC TGC ATG ACC CTC GCT CAC CAA TTG CAA GCT AAT AAC       2161Gly Leu Arg Leu Cys Met Thr Leu Ala His Gln Leu Gln Ala Asn Asn
        375                 380                 385TTT CGA TAT GGA ATT GCC TCG GCA TGC ATT GGT GGG GGA CAG GGG ATG       2209Phe Arg Tyr Gly Ile Ala Ser Ala Cys Ile Gly Gly Gly Gln Gly Met
    390                 395                 400GCG GTT CTT TTA GAG AAT CCC CAC TTC GGT TCG TCC TCT GCA CGA AGT       2257Ala Val Leu Leu Glu Asn Pro His Phe Gly Ser Ser Ser Ala Arg Ser
405                 410                 415TCG ATG ATT AAC AGA GTT GAC CAC TAT CCA CTG AGC TAA CGGGCATCTC        2306Ser Met Ile Asn Arg Val Asp His Tyr Pro Leu Ser420                 425                 430 431CTTTGTTGCT TTGAGGTGGC GCACGAAGGA GGGCTCGAAA ATCTCTGCTA AAAACAAGAA    2366GAAGGAACAG GGAACATGAT TAGTTTCGCT CGTATGGCAG AAAGTTTAGG AGTCCAGGCT    2426AAACTTGCCC TTGCCTTCGC ACTCGTATTA TGTGTCGGGC TGATTGTTAC CGGCACGGGT    2486TTCTACAGTG TACATACCTT GTCAGGGTTG GTGGGAATTC                          2526图2p：GAATTCCGCG GTCGGCGAAA GTTGATGCGC TGTATCGTGG TGAAGATCAA TCCATGCTGC      60GTGACGAGGC CACACT GTG AGT TGG TCA GGG GGG GCT TAC TCG GCG TTT TCC     112
              Met Ser Trp Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ala Phe Ser
                1               5                  10GAC ACT GCG TTG GTT GCG GCA GTG CGC ACC CCC TGG ATT GAT TGC GGG       160Asp Thr Ala Leu Val Ala Ala Val Arg Thr Pro Trp Ile Asp Cys Gly
     15                  20                  25GGT GCC CTG TCG CTG GTG TCG CCT ATC GAC TTA GGG GTA AAG GTC GCT       208Gly Ala Leu Ser Leu Val Ser Pro Ile Asp Leu Gly VaI Lys Val Ala
 30                  35                  40CGC GAA GTT CTG ATG CGT GCG TCG CTT GAA CCA CAA ATG GTC GAT AGC       256Arg Glu Val Leu Met Arg Ala Ser Leu Glu Pro Gln Met Val Asp Ser45                  50                  55                  60GTA CTC GCA GGC TCT ATG GCT CAA GCA AGC TTT GAT GCT TAC CTG CTC       304Val Leu Ala Gly Ser Met Ala Gln Ala Ser Phe Asp Ala Tyr Leu Leu
             65                  70                  75CCG CGG CAC ATT GGC TTG TAC AGC GGT GTT CCC AAG TCG GTT CCG GCC       352Pro Arg His Ile Gly Leu Tyr Ser Gly Val Pro Lys Ser Val Pro Ala
         80                  85                  90TTG GGG GTG CAG CGC ATT TGC GGC ACA GGC TTC GAA CTG CTT CGG CAG       400Leu Gly Val Gln Arg Ile Cys Gly Thr Gly Phe Glu Leu Leu Arg Gln
     95                 100                 105GCC GGC GAG CAG ATT TCC CAA GGC GCT GAT CAC GTG CTG TGT GTC GCG       448Ala Gly Glu Gln Ile Ser Gln Gly Ala Asp His Val Leu Cys Val Ala
110                 115                 120GCA GAG TCC ATG TCG CGT AAC CCC ATC GCG TCG TAT ACA CAC CGG GGC       496Ala Glu Ser Met Ser Arg Asn Pro Ile Ala Ser Tyr Thr His Arg Gly125                 130                 135                 140GGG TTC CGC CTC GGT GCG CCC GTT GAG TTC AAG GAT TTT TTG TGG GAG       544Gly Phe Arg Leu Gly Ala Pro Val Glu Phe Lys Asp Phe Leu Trp Glu
            145                 150                 155GCA TTG TTT GAT CCT GCT CCA GGA CTC GAC ATG ATC GCT ACC GCA GAA       592Ala Leu Phe Asp Pro Ala Pro Gly Leu Asp Met Ile Ala Thr Ala Glu
        160                 165                 170AAC CTG GGGGAGAGGC GGTTTGCGTA TTGGGCGCAT GCATAAAAAC TGTTGTAATT        648Asn Leu
174CATTAAGCAT TCTGCCGACA TGGAAGCCAT CACAAACGGC ATGATGAACC TGAATCGCCA     708GCGGCATCAG CACCTTGTCG CCTTGCGTAT AATATTTGCC CATGGACGCA CACCGTGGAA     768ACGGATGAAG GCACGAACCC AGTTGACATA AGCCTGTTCG GTTCGTAAAC TGTAATGCAA     828GTAGCGTATG CGCTCACGCA ACTGGTCCAG AACCTTGACC GAACGCAGCG GTGGTAACGG     888CGCAGTGGCG GTTTTCATGG CTTGTTATGA CTGTTTTTTT GTACAGTCTA TGCCTCGGGC      948ATCCAAGC AGCAAGCGCG TTACGCCGTG GGTCGATGTTTG ATGTTATGGA GCAGCAACG      1007ATG TTA CGC AGC AGC AAC GAT GTT ACG CAG CAG GGC AGT CGC CCT AAA       1055Met Leu Arg Ser Ser Asn Asp Val Thr Gln Gln Gly Ser Arg Pro Lys1               5                  10                  15ACA AAG TTA GGT GGC TCA AGT ATG GGC ATC ATT CGC ACA TGT AGG CTC       1103Thr Lys Leu Gly Gly Ser Ser Met Gly Ile Ile Arg Thr Cys Arg Leu
         20                  25                  30GGC CCT GAC CAA GTC AAA TCC ATG CGG GCT GCT CTT GAT CTT TTC GGT       1151Gly Pro Asp Gln Val Lys Ser Met Arg Ala Ala Leu Asp Leu Phe Gly
     35                  40                  45CGT GAG TTC GGA GAC GTA GCC ACC TAC TCC CAA CAT CAG CCG GAC TCC       1199Arg Glu Phe Gly Asp Val Ala Thr Tyr Ser Gln His Gln Pro Asp Ser
 50                  55                  60GAT TAC CTC GGG AAC TTG CTC CGT AGT AAG ACA TTC ATC GCG CTT GCT       1247Asp Tyr Leu Gly Asn Leu Leu Arg Ser Lys Thr Phe Ile Ala Leu Ala65                  70                  75                  80GCC TTC GAC CAA GAA GCG GTT GTT GGC GCT CTC GCG GCT TAC GTT CTG       1295Ala Phe Asp Gln Glu Ala Val Val Gly Ala Leu Ala Ala Tyr Val Leu
             85                  90                  95CCC AGG TTT GAG CAG CCG CGT AGT GAG ATC TAT ATC TAT GAT CTC GCA       1343Pro Arg Phe Glu Gln Pro Arg Ser Glu Ile Tyr Ile Tyr Asp Leu Ala
        100                 105                 110GTC TCC GGC GAG CAC CGG AGG CAG GGC ATT GCC ACC GCG CTC ATC AAT       1391Val Ser Gly Glu His Arg Arg Gln Gly Ile Ala Thr Ala Leu Ile Asn
    115                 120                 125CTC CTC AAG CAT GAG GCC AAC GCG CTT GGT GCT TAT GTG ATC TAC GTG       1439Leu Leu Lys His Glu Ala Asn Ala Leu Gly Ala Tyr Val Ile Tyr Val
130                 135                 140CAA GCA GAT TAC GGT GAC GAT CCC GCA GTG GCT CTC TAT ACA AAG TTG       1487Gln Ala Asp Tyr Gly Asp Asp Pro Ala Val Ala Leu Tyr Thr Lys Leu145                 150                 155                 160GGC ATA CGG GAA GAA GTG ATG CAC TTT GAT ATC GAC CCA AGT ACC GCC       1535Gly Ile Arg Glu Glu Val Met His Phe Asp Ile Asp Pro Ser Thr Ala
            165                 170                 175ACC TAA CAATTCGTTC AAGCCGAGAT CGGCTTCCCA TTG AGG GCG CAA GAG GAG      1589Thr                                      Leu Arg Ala Gln Glu Glu177                                      197         200AAA TGG ATT GAC CAA GAG ATC GTG GCT GTT ACG GAT GAA CAG TTC GAT       1637Lys Trp Ile Asp Gln Glu Ile Val Ala Val Thr Asp Glu Gln Phe Asp
    205                 210                 215TTA GAG GGC TAC AAC AGT CGA GCA ATT GAA CTG CCT CGG AAG GCA AAA       1685Leu Glu Gly Tyr Asn Ser Arg Ala Ile Glu Leu Pro Arg Lys Ala Lys
220                 225                 230TTG TTG ATC GTG ACA GTC ATC CGC GGC CTA GCA GTC TTT GAA GCC CTT       1733Leu Leu Ile Val Thr Val Ile Arg Gly Leu Ala Val Phe Glu Ala Leu235                 240                 245                 250TCC CGA TTG AAG CCT GTT CAT TCT GGC GGG GTG CAG ACT GCG GGC AAC       1781Ser Arg Leu Lys Pro Val His Ser Gly Gly Val Gln Thr Ala Gly Asn
            255                 260                 265AGC TGT GCC GTA GTG GAC GGC GCC GCG GCG GCT TTG GTG GCT CGA GAG       1829Ser Cys Ala Val Val Asp Gly Ala Ala Ala Ala Leu Val Ala Arg Glu
            270             275                 280TCG TCT GCG ACA CAG CCG GTC TTG GCT AGG ATA CTG GCT ACC TCC GTA       1877Ser Ser Ala Thr Gln Pro Val Leu Ala Arg Ile Leu Ala Thr Ser Val
    285                 290                 295GTC GGG ATC GAG CCC GAG CAT ATG GGG CTC GGC CCT GCG CCC GCG ATT       1925Val Gly Ile Glu Pro Glu His Met Gly Leu Gly Pro Ala Pro Ala Ile
300                 305                 310CGC CTG CTG CTT GCG CGT AGT GAT CTT AGT TTG AGG GAT ATC GAC CTC       1973Arg Leu Leu Leu Ala Arg Ser Asp Leu Ser Leu Arg Asp Ile Asp Leu315                 320                 325                 330TTT GAG ATA AAC GAG GCG CAG GCC GCC CAA GTT CTA GCG GTA CAG CAT       2021Phe Glu Ile Asn Glu Ala Gln Ala Ala Gln Val Leu Ala Val Gln His
            335                 340                 345GAA TTG GGT ATT GAG CAC TCA AAA CTT AAT ATT TGG GGC GGG GCC ATT       2069Glu Leu Gly Ile Glu His Ser Lys Leu Asn Ile Trp Gly Gly Ala Ile
        350                 355                 360GCA CTT GGA CAC CCG CTT GCC GCG ACC GGA TTG CGT CTC TGC ATG ACC       2117Ala Leu Gly His Pro Leu Ala Ala Thr Gly Leu Arg Leu Cys Met Thr
    365                 370                 375CTC GCT CAC CAA TTG CAA GCT AAT AAC TTT CGA TAT GGA ATT GCC TCG       2165Leu Ala His Gln Leu Gln Ala Asn Asn Phe Arg Tyr Gly Ile Ala Ser
380                 385                 390GCA TGC ATT GGT GGG GGA CAG GGG ATG GCG GTT CTT TTA GAG AAT CCC       2213Ala Cys Ile Gly Gly Gly Gln Gly Met Ala Val Leu Leu Glu Asn Pro395                 400                 405                 410CAC TTC GGT TCG TCC TCT GCA CGA AGT TCG ATG ATT AAC AGA GTT GAC       2261His Phe Gly Ser Ser Ser Ala Arg Ser Ser Met Ile Asn ArG Val Asp
            415                 420                 425CAC TAT CCA CTG AGC TAA CGGGCATCTC CTTTGTTGCT TTGAGGTGGC              2309His Tyr Pro Leu Ser
        430 431GCACGAAGGA GGGCTCGAAA ATCTCTGCTA AAAACAAGAA GAAGGAACAG GGAACATGAT     2369TAGTTTCGCT CGTATGGCAG AAAGTTTAGG AGTCCAGGCT AAACTTGCCC TTGCCTTCGC     2429ACTCGTATTA TGTGTCGGGC TGATTGTTAC CGGCACGGGT TTCTACAGTG TACATACCTT     2489GTCAGGGTTG GTGGGAATTC                                                 2509图2q：GAATTCCGCG GTCGGCGAAA GTTGATGCGC TGTATCGTGG TGAAGATCAA TCCATGCTGC       60GTGACGAGGC CACACT GTG AGT TGG TCA GGG GGG GCT TAC TCG GCG TTT TCC      112
              Met Ser Trp Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ala Phe Ser
                1                5                 10GAC ACT GCG TTG GTT GCG GCA GTG CGC ACC CCC TGG ATT GAT TGC GGG        160Asp Thr Ala Leu Val Ala Ala Val Arg Thr Pro Trp Ile Asp Cys Gly
     15                  20                  25GGT GCC CTG TCG CTG GTG TCG CCT ATC GAC TTA GGG GTA AAG GTC GCT        208Gly Ala Leu Ser Leu Val Ser Pro Ile Asp Leu Gly Val Lys Val Ala
 30                  35                  40CGC GAA GTT CTG ATG CGT GCG TCG CTT GAA CCA CAA ATG GTC GAT AGC        256Arg Glu Val Leu Met Arg Ala Ser Leu Glu Pro Gln Met Val Asp Ser45                  50                  55                  60GTA CTC GCA GGC TCT ATG GCT CAA GCA AGC TTT GAT GCT TAC CTG CTC        304Val Leu Ala Gly Ser Met Ala Gln Ala Ser Phe Asp Ala Tyr Leu Leu
     65                          70                  75CCG CGG CAC ATT GGC TTG TAC AGC GGT GTT CCC AAG TCG GTT CCG GCC        352Pro Arg His Ile Gly Leu Tyr Ser Gly Val Pro Lys Ser Val Pro Ala
         80                  85                  90TTG GGG GTG CAG CGC ATT TGC GGC ACA GGC TTC GAA CTG CTT CGG CAG        400Leu Gly Val Gln Arg Ile Cys Gly Thr Gly Phe Glu Leu Leu Arg Gln
     95                 100                 105GCC GGC GAG CAG ATT TCC CAA GGC GCT GAT CAC GTG CTG TGT GTC GCG        448Ala Gly Glu Gln Ile Ser Gln Gly Ala Asp His Val Leu Cys Val Ala
110                 115                 120GCA GAG TCC ATG TCG CGT AAC CCC ATC GCG TCG TAT ACA CAC CGG GGC        496Ala Glu Ser Met Ser Arg Asn Pro Ile Ala Ser Tyr Thr His Arg Gly125                 130                 135                 140GGG TTC CGC CTC GGT GCG CCC GTT GAG TTC AAG GAT TTT TTG TGG GAG        544Gly Phe Arg Leu Gly Ala Pro Val Glu Phe Lys Asp Phe Leu Trp Glu
            145                 150                 155GCA TTG TTT GAT CCT GCT CCA GGA CTC GAC ATG ATC GCT ACC GCA GAA        592Ala Leu Phe Asp Pro Ala Pro Gly Leu Asp Met Ile Ala Thr Aia Glu
        160                 165                 170AAC CTG GCG CGC A TTG AGG GCG CAA GAG GAG AAA TGG ATT GAC CAA GAG      641Asn Leu Ala Arg   Leu Arg Ala Gln Glu Glu Lys Trp Ile Asp Gln Glu
    175 176   197         200                 205ATC GTG GCT GTT ACG GAT GAA CAG TTC GAT TTA GAG GGC TAC AAC AGT        689Ile Val Ala Val Thr Asp Glu Gln Phe Asp Leu Glu Gly Tyr Asn Ser
210                 215                 220CGA GCA ATT GAA CTG CCT CGG AAG GCA AAA TTG TTG ATC GTG ACA GTC        737Arg Ala Ile Glu Leu Pro Arg Lys Ala Lys Leu Leu Ile Val Thr Val225                 230                 235                 240ATC CGC GGC CTA GCA GTC TTT GAA GCC CTT TCC CGA TTG AAG CCT GTT       785Ile Arg Gly Leu Ala Val Phe Glu Ala Leu Ser Arg Leu Lys Pro Val
            245                 250                 255CAT TCT GGC GGG GTG CAG ACT GCG GGC AAC AGC TGT GCC GTA GTG GAC       833His Ser Gly Gly Val Gln Thr Ala Gly Asn Ser Cys Ala Val Val Asp
        260                 265                 270GGC GCC GCG GCG GCT TTG GTG GCT CGA GAG TCG TCT GCG ACA CAG CCG       881Gly Ala Ala Ala Ala Leu Val Ala Arg Glu Ser Ser Ala Thr Gln Pro
    275                 280                 285GTC TTG GCT AGG ATA CTG GCT ACC TCC GTA GTC GGG ATC GAG CCC GAG       929Val Leu Ala Arg Ile Leu Ala Thr Ser Val Val Gly Ile Glu Pro Glu
290                 295                 300CAT ATG GGG CTC GGC CCT GCG CCC GCG ATT CGC CTG CTG CTT GCG CGT       977His Met Gly Leu Gly Pro Ala Pro Ala Ile Arg Leu Leu Leu Ala Arg305                 310                 315                 320AGT GAT CTT AGT TTG AGG GAT ATC GAC CTC TTT GAG ATA AAC GAG GCG      1025Ser Asp Leu Ser Leu Arg Asp Ile Asp Leu Phe Glu Ile Asn Glu Ala
            325                 330                 335CAG GCC GCC CAA GTT CTA GCG GTA CAG CAT GAA TTG GGT ATT GAG CAC      1073Gln Ala Ala Gln Val Leu Ala Val Gln His Glu Leu Gly Ile Glu His
        340                 345                 350TCA AAA CTT AAT ATT TGG GGC GGG GCC ATT GCA CTT GGA CAC CCG CTT      1121Ser Lys Leu Asn Ile Trp Gly Gly Ala Ile Ala Leu Gly His Pro Leu
    355                 360                 365GCC GCG ACC GGA TTG CGT CTC TGC ATG ACC CTC GCT CAC CAA TTG CAA      1169Ala Ala Thr Gly Leu Arg Leu Cys Met Thr Leu Ala His Gln Leu Gln
370                 375                 380GCT AAT AAC TTT CGA TAT GGA ATT GCC TCG GCA TGC ATT GGT GGG GGA      1217Ala Asn Asn Phe Arg Tyr Gly Ile Ala Ser Ala Cys Ile Gly Gly Gly385                 390                 395                 400CAG GGG ATG GCG GTT CTT TTA GAG AAT CCC CAC TTC GGT TCG TCC TCT      1265Gln Gly Met Ala Val Leu Leu Glu Asn Pro His Phe Gly Ser Ser Ser
            405                 410                 415GCA CGA AGT TCG ATG ATT AAC AGA GTT GAC CAC TAT CCA CTG AGC TAA      1313Ala Arg Ser Ser Met Ile Asn Arg Val Asp His Tyr Pro Leu Ser
        420                 425                 430 431CGGGCATCTC CTTTGTTGCT TTGAGGTGGC GCACGAAGGA GGGCTCGAAA ATCTCTGCTA    1373AAAACAAGAA GAAGGAACAG GGAACATGAT TAGTTTCGCT CGTATGGCAG AAAGTTTAGG    1433AGTCCAGGCT AAACTTGCCC TTGCCTTCGC ACTCGTATTA TGTGTCGGGC TGATTGTTAC    1493CGGCACGGGT TTCTACAGTG TACATACCTT GTCAGGGTTG GTGGGAATTC               1543图2r：
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                            序列10GAATTCCCCT GGCGACGAAA GGGCGGCAGG CCGCATGGCC ACGGCTGGGC GGTAACTGAT      60GCTTGCGTTA ATCGTTAACC GTTTGAAATT CCTTGCCAAA TTTCGGCGAG AGAATCATGC     120GGGTACGCCT TTCCGTGCGC TTTGATCTGC GCTTCCGTGC CTTGAATCAG AAAAATAGTT     180AATTGACAGA ACTATAGGTT CGCAGTAGCT TTTGCTCACC CACCAAATCC ACAGCACTGG     240GGTGCACGAT GAATAGCTAC GATGGCCGTT GGTCTACCGT TGATGTGAAG GTTGAAGAAG     300GTATCGCTTG GGTCACGCTG AACCGCCCGG AGAAGCGCAA CGCAATGAGC CCAACTCTCA     360ATCGAGAGAT GGTCGAGGTT CTGGAGGTGC TGGAGCAGGA CGCAGATGCT CGCGTGCTTG     420TTCTGACTGG TGCAGGCGAA TCCTGGACCG CGGGCATGGA CCTGAAGGAG TATTTCCGCG     480AGACCGATGC TGGCCCCGAA ATTCTGCAAG AGAAGATTCG TCGGGGACAG CAAGCGAACC     540GGAATTGCCA GCTGGGGCGC CCTCTGGTAA GGTTGGGAAG CCCTGCAAAG TAAACTGGAT     600GGCTTTCTTG CCGCCAAGGA TCTGATGGCG CAGGGGATCA AGATCTGATC AAGAGACAGG     660ATGAGGATCG TTTCGCATGA TTGAACAAGA TGGATTGCAC GCAGGTTCTC CGGCCGCTTG     720GGTGGAGAGG CTATTCGGCT ATGACTGGGC ACAACAGACA ATCGGCTGCT CTGATGCCGC     780CGTGTTCCGG CTGTCAGCGC AGGGGCGCCC GGTTCTTTTT GTCAAGACCG ACCTGTCCGG     840TGCCCTGAAT GAACTGCAGG ACGAGGCAGC GCGGCTATCG TGGCTGGCCA CGACGGGCGT     900TCCTTGCGCA GCTGTGCTCG ACGTTGTCAC TGAAGCGGGA AGGGACTGGC TGCTATTGGG     960CGAAGTGCCG GGGCAGGATC TCCTGTCATC TCACCTTGCT CCTGCCGAGA AAGTATCCAT    1020CATGGCTGAT GCAATGCGGC GGCTGCATAC GCTTGATCCG GCTACCTGCC CATTCGACCA    1080CCAAGCGAAA CATCGCATCG AGCGAGCACG TACTCGGATG GAAGCCGGTC TTGTCGATCA    1140GGATGATCTG GACGAAGAGC ATCAGGGGCT CGCGCCAGCC GAACTGTTCG CCAGGCTCAA    1200GGCGCGCATG CCCGACGGCG AGGATCTCGT CGTGACCCAT GGCGATGCCT GCTTGCCGAA    1260TATCATGGTG GAAAATGGCC GCTTTTCTGG ATTCATCGAC TGTGGCCGGC TGGGTGTGGC    1320GGACCGCTAT CAGGACATAG CGTTGGCTAC CCGTGATATT GCTGAAGAGC TTGGCGGCGA    1380ATGGGCTGAC CGCTTCCTCG TGCTTTACGG TATCGCCGCT CCCGATTCGC AGCGCATCGC    1440CTTCTATCGC CTTCTTGACG AGTTCTTCTG AGCGGGACTC TGGGGTTCGA AATGACCGAC    1500CAAGCGACGC CCCGAGCAGG GCATGAAGCA GTTCCTTGAC GAGAAAAGCA TCAAGCCGGG    1560CTTGCAGACC TACAAGCGCT GATAAATGCG CCGGGGCCCT CGCTGCGCCC CCGGCCTTCC    1620AATAATGACA ATAATGAGGA GTGCCCAATG TTTCACGTGC CCCTGCTTAT TGGTGGTAAG    1680CCTTGTTCAG CATCTGATGA GCGCACCTTC GAGCGTCGTA GCCCGCTGAC CGGAGAAGTG    1740GTATCGCGCG TCGCTGCTGC CAGTTTGGAA GATGCGGACG CCGCAGTGGC CGCTGCACAG    1800GCTGCGTTTC CTGAATGGGC GGCGCTTGCT CCGAGCGAAC GCCGTGCCCG ACTGCTGCGA    1860GCGGCGGATC TTCTAGAGGA CCGTTCTTCC GAGTTCACCG CCGCAGCGAG TGAAACTGGC    1920GCAGCGGGAA ACTGGTATGG GTTTAACGTT TACCTGGCGG CGGGCATGTT GCGGGGAATT    1980C                                                                    1981
                            序列11GAATTCCCCT GGCGACGAAA GGGCGGCAGG CCGCATGGCC ACGGCTGGGC GGTAACTGAT      60GCTTGCGTTA ATCGTTAACC GTTTGAAATT CCTTGCCAAA TTTCGGCGAG AGAATCATGC     120GGGTACGCCT TTCCGTGCGC TTTGATCTGC GCTTCCGTGC CTTGAATCAG AAAAATAGTT     180AATTGACAGA ACTATAGGTT CGCAGTAGCT TTTGCTCACC CACCAAATCC ACAGCACTGG     240GGTGCACGAT GAATAGCTAC GATGGCCGTT GGTCTACCGT TGATGTGAAG GTTGAAGAAG     300GTATCGCTTG GGTCACGCTG AACCGCCCGG AGAAGCGCAA CGCAATGAGC CCAACTCTCA     360ATCGAGAGAT GGTCGAGGTT CTGGAGGTGC TGGAGCAGGA CGCAGATGCT CGCGTGCTTG     420TTCTGACTGG TGCAGGCGAA TCCTGGACCG CGGGCATGGA CCTGAAGGAG TATTTCCGCG     480AGACCGATGC TGGCCCCGAA ATTCTGCAAG AGAAGATTCG TCGGGGGAGA GGCGGTTTGC     540GTATTGGGCG CATGCATAAA AACTGTTGTA ATTCATTAAG CATTCTGCCG ACATGGAAGC     600CATCACAAAC GGCATGATGA ACCTGAATCG CCAGCGGCAT CAGCACCTTG TCGCCTTGCG     660TATAATATTT GCCCATGGAC GCACACCGTG GAAACGGATG AAGGCACGAA CCCAGTTGAC     720ATAAGCCTGT TCGGTTCGTA AACTGTAATG CAAGTAGCGT ATGCGCTCAC GCAACTGGTC     780CAGAACCTTG ACCGAACGCA GCGGTGGTAA CGGCGCAGTG GCGGTTTTCA TGGCTTGTTA     840TGACTGTTTT TTTGTACAGT CTATGCCTCG GGCATCCAAG CAGCAAGCGC GTTACGCCGT     900GGGTCGATGT TTGATGTTAT GGAGCAGCAA CGATGTTACG CAGCAGCAAC GATGTTACGC     960AGCAGGGCAG TCGCCCTAAA ACAAAGTTAG GTGGCTCAAG TATGGGCATC ATTCGCACAT    1020GTAGGCTCGG CCCTGACCAA GTCAAATCCA TGCGGGCTGC TCTTGATCTT TTCGGTCGTG    1080AGTTCGGAGA CGTAGCCACC TACTCCCAAC ATCAGCCGGA CTCCGATTAC CTCGGGAACT    1140TGCTCCGTAG TAAGACATTC ATCGCGCTTG CTGCCTTCGA CCAAGAAGCG GTTGTTGGCG    1200CTCTCGCGGC TTACGTTCTG CCCAGGTTTG AGCAGCCGCG TAGTGAGATC TATATCTATG    1260ATCTCGCAGT CTCCGGCGAG CACCGGAGGC AGGGCATTGC CACCGCGCTC ATCAATCTCC    1320TCAAGCATGA GGCCAACGCG CTTGGTGCTT ATGTGATCTA CGTGCAAGCA GATTACGGTG    1380ACGATCCCGC AGTGGCTCTC TATACAAAGT TGGGCATACG GGAAGAAGTG ATGCACTTTG    1440ATATCGACCC AAGTACCGCC ACCTAACAAT TCGTTCAAGC CGAGATCGGC TTCCCCGAGC    1500AGGGCATGAA GCAGTTCCTT GACGAGAAAA GCATCAAGCC GGGCTTGCAG ACCTACAAGC    1560GCTGATAAAT GCGCCGGGGC CCTCGCTGCG CCCCCGGCCT TCCAATAATG ACAATAATGA    1620GGAGTGCCCA ATGTTTCACG TGCCCCTGCT TATTGGTGGT AAGCCTTGTT CAGCATCTGA    1680TGAGCGCACC TTCGAGCGTC GTAGCCCGCT GACCGGAGAA GTGGTATCGC GCGTCGCTGC    1740TGCCAGTTTG GAAGATGCGG ACGCCGCAGT GGCCGCTGCA CAGGCTGCGT TTCCTGAATG    1800GGCGGCGCTT GCTCCGAGCG AACGCCGTGC CCGACTGCTG CGAGCGGCGG ATCTTCTAGA    1860GGACCGTTCT TCCGAGTTCA CCGCCGCAGC GAGTGAAACT GGCGCAGCGG GAAACTGGTA    1920TGGGTTTAAC GTTTACCTGG CGGCGGGCAT GTTGCGGGGA ATTC                     1964
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                            序列18GAATTCCGCG GTCGGCGAAA GTTGATGCGC TGTATCGTGG TGAAGATCAA TCCATGCTGC      60GTGACGAGGC CACACTGTGA GTTGGTCAGG GGGGGCTTAC TCGGCGTTTT CCGACACTGC     120GTTGGTTGCG GCAGTGCGCA CCCCCTGGAT TGATTGCGGG GGTGCCCTGT CGCTGGTGTC     180GCCTATCGAC TTAGGGGTAA AGGTCGCTCG CGAAGTTCTG ATGCGTGCGT CGCTTGAACC     240ACAAATGGTC GATAGCGTAC TCGCAGGCTC TATGGCTCAA GCAAGCTTTG ATGCTTACCT     300GCTCCCGCGG CACATTGGCT TGTACAGCGG TGTTCCCAAG TCGGTTCCGG CCTTGGGGGT     360GCAGCGCATT TGCGGCACAG GCTTCGAACT GCTTCGGCAG GCCGGCGAGC AGATTTCCCA     420AGGCGCTGAT CACGTGCTGT GTGTCGCGGC AGAGTCCATG TCGCGTAACC CCATCGCGTC     480GTATACACAC CGGGGCGGGT TCCGCCTCGG TGCGCCCGTT GAGTTCAAGG ATTTTTTGTG     540GGAGGCATTG TTTGATCCTG CTCCAGGACT CGACATGATC GCTACCGCAG AAAACCTGGC     600GCGCATTGAG GGCGCAAGAG GAGAAATGGA TTGACCAAGA GATCGTGGCT GTTACGGATG     660AACAGTTCGA TTTAGAGGGC TACAACAGTC GAGCAATTGA ACTGCCTCGG AAGGCAAAAT     720TGTTGATCGT GACAGTCATC CGCGGCCTAG CAGTCTTTGA AGCCCTTTCC CGATTGAAGC     780CTGTTCATTC TGGCGGGGTG CAGACTGCGG GCAACAGCTG TGCCGTAGTG GACGGCGCCG     840CGGCGGCTTT GGTGGCTCGA GAGTCGTCTG CGACACAGCC GGTCTTGGCT AGGATACTGG     900CTACCTCCGT AGTCGGGATC GAGCCCGAGC ATATGGGGCT CGGCCCTGCG CCCGCGATTC     960GCCTGCTGCT TGCGCGTAGT GATCTTAGTT TGAGGGATAT CGACCTCTTT GAGATAAACG    1020AGGCGCAGGC CGCCCAAGTT CTAGCGGTAC AGCATGAATT GGGTATTGAG CACTCAAAAC    1080TTAATATTTG GGGCGGGGCC ATTGCACTTG GACACCCGCT TGCCGCGACC GGATTGCGTC    1140TCTGCATGAC CCTCGCTCAC CAATTGCAAG CTAATAACTT TCGATATGGA ATTGCCTCGG    1200CATGCATTGG TGGGGGACAG GGGATGGCGG TTCTTTTAGA GAATCCCCAC TTCGGTTCGT    1260CCTCTGCACG AAGTTCGATG ATTAACAGAG TTGACCACTA TCCACTGAGC TAACGGGCAT    1320CTCCTTTGTT GCTTTGAGGT GGCGCACGAA GGAGGGCTCG AAAATCTCTG CTAAAAACAA    1380GAAGAAGGAA CAGGGAACAT GATTAGTTTC GCTCGTATGG CAGAAAGTTT AGGAGTCCAG    1440GCTAAACTTG CCCTTGCCTT CGCACTCGTA TTATGTGTCG GGCTGATTGT TACCGGCACG    1500GGTTTCTACA GTGTACATAC CTTGTCAGGG TTGGTGGGAA TTC                      1543

Claims (16)

1．转化的和/或诱变的单细胞或多细胞生物，其特征在于丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢的酶被灭活，使得中间产物松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草醛和/或香草酸积累。
2．根据权利要求1的生物，其特征在于经过在相应的基因插入Ω元件或导入缺失改变丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢。
3．根据权利要求1或2的生物，其特征在于编码松柏醇脱氢酶，松柏醛脱氢酶，阿魏酰-CoA合成酶，烯酰-CoA水合酶-醛缩酶，β-酮硫解酶，香草醛脱氢酶或香草酸脱甲基酶的一个或多个基因被改变和/或被灭活。
4．根据权利要求1-3之一的生物，其特征在于它是单细胞的，优选微生物或植物或动物细胞。
5．根据权利要求1-4之一的生物，其特征在于它是细菌，优选假单胞菌属种类。
6．编码松柏醇脱氢酶，松柏醛脱氢酶，阿魏酰-CoA合成酶，烯酰-CoA水合酶-醛缩酶，β-酮硫解酶，香草醛脱氢酶或香草酸脱甲基酶，或两个或多个该酶的核苷酸序列被改变和/或被灭活的基因结构。
7．具有图1a-1r所给序列的基因结构。
8．具有图2a-2r所给序列的基因结构。
9．含有至少一个根据权利要求6-8之一的基因结构的载体。
10．根据权利要求1-5之一的转化的生物，其特征在于它含有至少一个根据权利要求9的载体。
11．根据权利要求1-5之一的生物，其特征在于它含有整合进基因组中代替各完整基因的至少一个根据权利要求6-8之一的基因结构。
12．有机化合物，特别是醇，醛和有机酸的生物技术制备方法，其特征在于使用根据权利要求1-5或10-11之一的生物。
13．制备根据权利要求1-5之一的生物的方法，其特征在于借助于本身已知的微生物学培养方法实现改变丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢。
14．制备根据权利要求1-5或10-11之一的生物的方法，其特征在于借助于重组DNA方法实现改变丁子香酚和/或阿魏酸分解代谢，和/或灭活相应的基因。
15．根据权利要求1-5或10-11之一的生物在制备松柏醇，松柏醛，阿魏酸，香草醛和/或香草酸中的应用。
16．根据权利要求6-8之一的基因结构或根据权利要求9的载体在制备转化的和/或诱变的生物中的应用。
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