CN1323697C - 一种治疗耳聋耳鸣的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗耳聋耳鸣的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。该药物组合物由丹参、骨碎补、石菖蒲和人工麝香组成，该药物组合物能够制成片剂、软胶囊剂、胶囊剂、缓释剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液体制剂或冻干粉针剂等临床或药学上可接受的剂型。同时本发明公开了该药物组合物的一种制备方法、丹参、石菖蒲的薄层鉴别、人工麝香的气相色谱鉴别及丹参的含量测定方法。

Description

一种治疗耳聋耳鸣的中药组合物及其制备方法

发明领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法和质量控制方法，特别涉及一种治疗耳聋耳鸣的药物组合物及其制备方法和质量控制方法。

背景技术

感音神经性耳聋是一类较为常见的疾病，其基本临床特征为气导、骨导听力同时下降，病变位于耳蜗、听神经或中枢。据病因可分为先天性耳聋、遗传性耳聋、老年性聋、感染性耳聋、中毒性耳聋、突发性耳聋、噪声性耳聋等多种类型。其中以药物中毒性耳聋、突发性耳聋、老年性聋发病率最高。该病发病率逐年有所增加，1万人中约有10.7人发病，占耳鼻咽喉科初诊病例的2％，两耳发病率约占4％，其中一半两耳同时发病。也有报告感音神经性耳聋发病率高达17％者，且性别、左右侧发病率无明显差异，有随年龄增加发病率增加的趋势，患病年龄在40岁或40岁以上者约占3/4。

老年性聋一般是双耳对称性渐进性的听力下降，精神倦怠，劳累时听力更差，同时常伴有双耳高调耳鸣等，对高声吵闹十分烦躁。该病患者与周围环境交往困难，由此引起的思想压力和不良的精神状态往往使其感到自卑和孤独。所以研发针对老年性聋的无毒副作用、能改善临床症状、价格低廉的治疗药物有较大市场价值，且在保障老年身体健康、提高老人生活质量、解决日益增长的老年问题等方面有着较大的社会意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种治疗耳聋耳鸣的药物组合物及其制备方法，本发明另一目的在于提供该药物组合物制剂的质量控制方法。

本发明目的是通过如下技术方案实现：

本发明是通过如下原料组成：

丹参1450-1550重量份        骨碎补950-1050重量份

石菖蒲450-550重量份        人工麝香1-2重量份

上述原料药的最佳配比如下：

丹参1450重量份         骨碎补1050重量份

石菖蒲450重量份        人工麝香2重量份

上述原料药的最佳配比如下：

丹参1550重量份         骨碎补950重量份

石菖蒲550重量份        人工麝香1重量份

上述原料药的最佳配比如下：

丹参1500重量份         骨碎补1000重量份

石菖蒲500重量份        人工麝香1.5重量份

上述药物组合物能够制成片剂、软胶囊剂、胶囊剂、缓释剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液体制剂或冻干粉针剂等各种剂型。

本发明具体制备工艺如下：

以上四味，取丹参、骨碎补加50-80％乙醇加热回流提取三次，第一次加6-9倍药材量，提取1-2小时；第二次加4-7倍药材量，提取0.5-1.5小时；第三次加3-5倍药材量，提取20-50分钟，合并药液，滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度约60℃时为1.10的清膏，备用；石菖蒲加8-12倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油5-8小时，收集挥发油，药液滤过，滤液备用；所得挥发油用7-9倍量β-环糊精，加入13-17倍量于β-环糊精的水，室温超声包合30-50分钟，抽滤，40℃干燥3-5小时，研磨，过100目筛，备用；石菖蒲药渣合并丹参、骨碎补醇提后药渣，加水煎煮1-3次，每次加6-10倍药材量，提取0.5-1.5小时，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min速度离心，取上清液减压浓缩至相对密度60℃时为1.10-1.15的清膏；合并以上两种清膏，在进风温度170～180℃，出风温度90～100℃的条件下喷雾干燥；收集干浸膏粉末，再加入原料人工麝香、及辅料糊精50-60重量份、β-环糊精包合物和蛋白糖15-25重量份，混匀，加常规辅料制成各种剂型。

本发明的质量控制方法包括鉴别方法和/或含量测定方法，其中鉴别方法包括如下方法中一种或几种：

A.取本药物组合物制剂日服用剂量的3/10，研细，加30～60℃的石油醚45-55ml，超声提取20-40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮II_A对照品，加乙醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17-19∶1-3的苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；

B.取本药物组合物制剂日服用剂量的1/2，研细，加60～90℃石油醚45-55ml，振荡数分钟后超声20-40分钟，滤过，滤液挥干石油醚，残渣加60～90℃的石油醚2ml溶解，作为供试品溶液；另取石菖蒲对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-9∶1-4的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C.取本药物组合物制剂日服用剂量的2倍，研细，加乙醚45-55ml，浸泡过夜，超声处理10-20分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取麝香酮对照品加乙醚制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法试验，柱长为2m，以50％苯基甲基硅酮为固定相，涂布浓度为2％，柱温为210℃；分别取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪；供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

质量控制方法中的含量测定方法如下：

色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4-5∶160∶1-2的乙腈-水-醋酸为流动相；检测波长为200-400nm；理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本药物组合物制剂日服用剂量的3％，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入60％甲醇25ml，称定重量，密塞，超声或回流提取10-40分钟，放置至室温后补足重量，摇匀，滤过，收集续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入色谱仪，测定，即得；

本药物组合物制剂按每日服用剂量计，含丹参素以丹参素钠C₉H₉O₅Na不得少于60.0mg。

本发明每日服用制剂相当于原生药量28.5-31.52g。

方中丹参为君药，其性苦、寒，《本草经疏》谓之入手足少阴、足厥阴，是心、脾、肝、肾、血分之药。具活血调血、祛瘀止痛、凉血消肿、养血安神益气功效。本方用丹参不仅取其活血化瘀之功，且因其性苦寒，还能抑制石菖蒲和麝香温燥之性。骨碎补为臣药，辅助丹参，发挥补肾功效。其性味苦温，入肝肾经。功能活血、补肾、止血。《本草汇言》中载以骨碎补为主药组方治“肾虚耳鸣耳聋，并牙齿浮动，疼痛难忍”。本方中应用骨碎补与丹参合用共奏活血祛瘀之功。综上，四味药相辅相成、紧扣病机，以现代剂型制成治疗肾虚血瘀型老年性聋的药物，不论从中医传统理论还是从现代药理研究来讲都具可行性。

本发明药物组合物的制备方法经过分离与纯化工艺研究、浓缩与干燥工艺研究、辅料的筛选、制剂处方量的确定、制剂成型工艺研究等试验，其中在β-环糊精包裹挥发油工艺研究中，β-CD与油的比例、加水量、超声时间为影响包合的主要因素，对每个因素，各取三个水平，进行正交试验，最佳工艺为1ml挥发油与8克β-环糊精，加200ml水，包合40分钟。据此条件，验证三次，包合率均值为85.40％，收得率均值为86.86％，与正交试验结果基本符合，说明挥发油的包合工艺条件稳定，具有重现性。

在质量控制方法的鉴别方法中：鉴别A为丹参的薄层鉴别，选用苯-乙酸乙酯(19∶1)或石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8∶3)为展开剂；试验结果：前一种展开系统所得色谱图中的特征斑点更明显，R_f值更为适中，且供试品色谱中，均检出丹参的主要特征斑点，且阴性无干扰；鉴别B为石菖蒲的薄层鉴别，选用石油醚-乙酸乙酯(7∶3)或正己烷-乙酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。试验结果：前一种展开系统所得色谱图中的特征斑点更明显，R_f值更为适中，且供试品色谱中，均检出石菖蒲的主要特征斑点，且阴性无干扰；鉴别C为人工麝香的气相色谱鉴别。麝香酮是人工麝香中的主要有效成分。资料显示麝香酮的检测方法有薄层色谱法和气相色谱法，根据实验结果制定了本法。根据麝香酮的溶解性及极性，同时为消除其它组分干扰，该方法中供试品溶液的制备选用乙醚为溶剂。实验结果显示，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，且阴性无干扰，经多次验证，表明切实可行。

本药物组合物具补肾化瘀，通窍聪耳功效，主要用于治疗老年性耳聋、耳鸣或对抗药物性耳聋、耳鸣引起的听力下降、耳鸣，或伴有腰痛乏力等症。用正常动物和疾病动物模型进行了补肾、化瘀及治疗耳聋的作用研究，结果证明：1.实验性衰老豚鼠经本药物组合物14.56g原药/kg/日、7.28g原药/kg/日、3.647g原药/kg/日治疗后，衰老豚鼠的听力有所提高，其ABR值明显下降。与D-半乳糖衰老模型组相比有显著差异(P＜0.01，P＜0.05)，显示本药物组合物有治疗因D-半乳糖造成豚鼠衰老和听力下降的作用。同时本药物组合物大、中剂量可使豚鼠的SOD活力明显升高，与D-半乳糖衰老模型组相比有显著差异(P＜0.05)，并使MDA明显降低，与D-半乳糖衰老模型组相比有显著性差异(P＜0.01)。说明本药物组合物有一定对抗D-半乳糖造成豚鼠衰老的作用。2.本药物组合物大剂量组豚鼠在连续40天肌注硫酸庆大霉素的同时，以14.56g原药/kg/日剂量进行预防治疗，结果其ABR值升高受到抑制，与模型组豚鼠的ABR值相比显著降低(P＜0.05)。表明本药物组合物对庆大霉素引起的动物听力下降有明显预防作用。3.本药物组合物大、中剂量能使实验性“血瘀”大鼠的全血粘度、血浆粘度和纤维蛋白原显著降低(P＜0.01，P＜0.05)。本药物组合物的小剂量能使“血瘀”型大鼠的全血粘度(高切、中切)明显降低、并能明显降低大鼠的红细胞压积(P＜0.05)。同时本药物组合物大、中剂量14.56克原药/公斤、7.28克原药/公斤可明显减轻大鼠体外循环聚乙烯管中手术线血栓湿重。表明有一定的活血化瘀作用。4.本药物组合物大剂量组能显著增加肾阳虚大鼠的体重及包皮腺脏器指数、睾丸指数、前列腺+精液囊指数，与模型组相比(P＜0.05)，中剂量也能显著增加前列腺+精液囊指数(P＜0.05)；本药物组合物大，中剂量与模型组相比，可显著缩短去势大鼠的阴茎受刺激勃起潜伏期(P＜0.01)，证明本药物组合物有一定补肾作用。实验证明，本药物组合物制剂具有对抗衰老造成的耳聋、耳鸣或对抗药物性耳聋、耳鸣的作用。同时有活血化瘀、补肾的作用。

下面实验例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1：石菖蒲挥发油提取工艺的研究试验

在挥发油提取过程中，加水量和提取时间是影响提油量的主要因素。故采用单因素考察法，对石菖蒲挥发油提取中水量和提取时间进行考察。

称取三份石菖蒲药材，每份均为100g，加水量分别为药材量的8倍，10倍，12倍，在相同条件下提取挥发油，测定1至8小时提取的挥发油量，结果见表1。

                     表1  加水量对挥发油收得量的影响

时间(小时)	1	2	3	4	5	6	7	8
									加水量
8倍10倍12倍										0.200.250.20	0.350.450.45	0.400.600.55	0.851.000.90	0.901.101.05	0.951.201.15	1.001.201.20	1.001.201.20

注：挥发油收得量单位为ml。

从上表可见，在相同条件下，加10倍量水所提挥发油的量比8倍及12倍均大。故选择加水量为药材的10倍。同时，提取6小时后，其挥发油基本提取完全。因此选择提取时间为6小时。

由以上试验结果可知，石菖蒲100g加水10倍量，水蒸气蒸馏法提取6小时，挥发油收油量约1.20ml。

实验例2：丹参与骨碎补醇提工艺的考察试验

乙醇回流提取的主要影响因素有乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数，对每个因素，各取三个水平，按L₉(3⁴)正交表安排试验。表头设计见表2。称取丹参120g，骨碎补80g，按所设正交试验条件提取。药液用400目滤布过滤，分别定容至相应量。

指标及测定方法：本药物组合物制剂的提取工艺中，丹参酮II_A含量是衡量醇提工艺效果的重要指标，丹参酮II_A含量越高，提取效果越好，可作为醇提工艺筛选的主要指标，权重系数定为0.6；但干膏收率作为选择剂型的参考指标，影响除杂方法的选择，是颗粒剂日服量、单服量及包装规格确定的重要参数。因此，必须以干膏收率作为评价指标之一，但其与疗效强度不成量效关系，故综合评价时权重系数应较小，以0.4为宜。照高效液相色谱法测定丹参酮II_A和干膏收率。

                        表2  醇提工艺的因素水平表

水平	因素
					A醇浓度(％)	B加醇量(倍)	C提取时间(小时)	D提取次数(次)
	123	506580	6810	0.51.01.5					123

                           表3  醇提工艺条件的正交试验表

序号	A	B	C	D	干膏收得率(％)	丹参酮IIA含量(mg/g)	综合评分
								123436789IjIIjIIIjSSj	1111222333165.70174.28194.54146.20	2123123123186.71168.02179.7959.53	3123231312145.39179.87209.26681.34	4123312231125.52202.07206.931390.12	X9.8724.2624.6016.1212.8114.7816.0011.488.39	Y0.37630.58130.99191.24610.74120.87851.66601.15110.9650	Z29.6060.3875.7271.0947.5255.6786.0260.1248.40

                    表4  水煎工艺因素水平表

水平	A加水量(倍)	B煎煮次数(次)	C煎煮时间(小时)
				123	1086	321	1.51.00.5

经方差分析可见，影响提取效果的顺序为：提取次数＞提取时间＞醇浓度＞加醇量，最佳醇提工艺条件为：A₃B₁C₃D₃，提取次数对醇提工艺有显著影响，醇浓度及提取时间无显著影响。从节约生产成本考虑，故调整工艺条件为：A₂B₁C₂D₃，即加6倍量的65％乙醇，提取3次，每次1.0小时，其中第一次加8倍量，提取1.5小时；第二次加6倍量，提取1小时；第三次加4倍量，提取0.5小时。

以此条件，验证三次，干膏收率均值为24.15％，丹参酮II_A含量均值为1.480mg/g，说明提取工艺条件基本稳定，具重现性。根据丹参药材中丹参酮II_A含量为2.027mg/g，可以计算出丹参药材乙醇提取转移率为73.01％。

实验例3：醇提后药渣与石菖蒲药渣共水煎煮工艺考察试验

水煎煮提取的主要影响因素有加水量、煎煮时间、煎煮次数三个因素，对每个因素各选三个水平，按L₉(3⁴)正交表安排试验。称取120g丹参与80g骨碎补，醇提后药渣加入石菖蒲40g(提油后)药渣，按正交试验条件进行水煎煮提取，药液以400目滤布滤过，收集滤液，浓缩并定容至相应量。

指标及测定方法：照高效液相色谱法测定丹参素和干膏收率结果经方差分析，影响提取效果的因素顺序为：煎煮时间＞加水量＞煎煮次数。煎煮时间对提取效果有显著影响，煎煮次数与加水量无显著影响，考虑节约时间和能源，便于生产操作，较佳提取工艺为：A₁B₂C₂，即煎煮2次，每次加10倍量的水，提取1.0小时。

以此条件，验证三次，结果干膏收率均值为10.71％，丹参素含量均值为5.1810mg/g，与正交试验结果基本符合，说明提取工艺条件基本稳定，具重现性。根据丹参药材中丹参素含量为7.5237mg/g，可以计算出丹参药材的水提转移率为68.68％。

实验例4：丹参含量测定的研究试验

本药物组合物的君药为丹参，丹参素为丹参的主要有效成分。为了控制实施例1颗粒剂内容物质量，选择丹参素作为控制实施例1颗粒剂内容物质量的指标成分。

测定波长的选择：精密称取丹参素钠对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得对照品溶液。以甲醇为空白，对照品溶液在200～400nm波长扫描，在280nm处有最大吸收。故选择280nm作为测定波长；

流动相的选择：研究中选择了流动相①甲醇-0.5％冰醋酸(20∶80)②乙腈-水-冰醋酸(5∶160∶1)，③甲醇-0.5％冰醋酸(12∶88)。在①、③条件下，丹参素钠保留时间均太短，分离不好；在②条件下，丹参素钠分离较好，大于1.5，理论塔板数按丹参素钠峰计算不低于3000，出峰时间(t＝11.998min)合适，阴性无干扰，故选用乙腈-水-冰醋酸(5∶160∶1)为流动相。

线性范围的考察，试验结果表明，在0.28～1.40μg范围内，丹参素峰面积与进样量有良好的线性关系。

实验例5：质量控制方法中含量测定的提取溶剂考察试验

取本药物组合物制剂(颗粒剂)数袋，研细，取3份，每份约0.3克，分别加入70％乙醇，甲醇，60％甲醇25ml，称定重量，超声提取30分钟，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，离心，上清液作为供试品溶液。按上述色谱条件，精密吸取对照品溶液(0.084mg/ml)及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积值。计算每克样品中丹参素的含量，结果见表6：

            表6  不同提取溶剂中丹参素的含量

提取溶剂	取样量(g)	丹参素含量(mg/g)
			70％乙醇甲醇60％甲醇	0.32340.32300.3227	不能分离5.06617.5259

试验结果表明，60％甲醇作提取溶剂比70％乙醇作溶剂分离效果好，比甲醇提取完全，因此选择60％甲醇作提取溶剂。

实验例6：质量控制中含量测定供试品溶液的提取方法的考察

取本药物组合物制剂(颗粒剂)约0.35克，2份，精密称定，加入60％甲醇25ml，称定重量，分别回流，超声提取30分钟，放冷，称定重量，以60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，为供试品溶液。按上述色谱条件，精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪记录峰面积值。计算每克样品中丹参素的含量，结果如表7：

                表7  不同提取方法中丹参素含量

提取方法	取样量(g)	峰面积值	丹参素含量(mg/g)
				回流超声	0.34870.3540	823210836063	7.52507.5283

结果表明，回流与超声提取对丹参素含量影响不大，故选择操作简便易行的超声提取法。

实验例7：质量控制中含量测定供试品溶液的提取时间的考察

取本药物组合物制剂(颗粒剂)约0.33克，4份，精密称定，加入60％甲醇25ml，称定重量，分别超声提取10，20，30，40分钟，放冷，称定重量，以60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，离心，上清液作为供试品溶液。按上述色谱条件，精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪记录峰面积值。计算每克样品丹参素的含量，结果见表8：

              表8  不同提取时间的丹参素含量

提取时间(min)	取样量(g)	峰面积值	丹参素含量(mg/g)
				10203040	0.33300.33250.33220.3371	722508726254784228796075	6.81136.96297.52427.5285

结果表明，丹参素含量随提取时间而增加，当提取30分钟时已近提取完全。故确定超声提取时间为30分钟。

实验例8：本药物组合物颗粒剂对实验性衰老豚鼠听力的作用

D-半乳糖模型组豚鼠在连续40天皮下注射D-半乳糖50mg/kg/日后，造成其ABR值明显升高，说明对豚鼠听力造成了一定影响。而分别用本药物组合物颗粒剂10.4g原药/kg/日、5.2g原药/kg/日、2.6g原药/kg/日治疗后，本药物组合物颗粒剂大、中、小剂量组豚鼠的听力有所提高，其ABR值也明显下降。与D-半乳糖组相比有显著差异(P＜0.01，P＜0.05)，显示本药物组合物颗粒剂有治疗因D-半乳糖造成豚鼠衰老和听力下降的作用。

表9  本药物组合物颗粒剂对实验性衰老豚鼠ABR阈值的影响( x±s)

组别	剂量(克原药/公斤)	动物数(只)	ABR阈值(dB)
				生理盐水对照组	-	10	5.00±2.36**
D-半乳糖模型组	-	10	38.50±3.37
				本药物组合物颗粒剂大剂量组	10.4	10	15.00±5.27**
本药物组合物颗粒剂中剂量组	5.2	10	25.00±7.82**
				本药物组合物颗粒剂小剂量组	2.6	10	33.00±4.83*
耳聋左慈丸对照组	2.1	10	15.50±4.38**

注：与模型组相比“*”P＜0.05；“**”P＜0.01；“***”P＜0.001；

模型组豚鼠SOD活力有所下降，MDA升高，说明D-半乳糖造成了豚鼠的衰老，而本药物组合物颗粒剂能升高SOD活力，降低MDA，尤其本药物组合物颗粒剂大、中剂量组豚鼠的SOD活力明显升高，与D-半乳糖衰老模型组相比有显著差异(P＜0.05)；本药物组合物颗粒剂大、中、小剂量可使MDA明显降低，与D-半乳糖衰老模型组相比有显著性差异(P＜0.001)。说明本药物组合物颗粒剂有一定对抗D-半乳糖造成豚鼠衰老的作用。

表10  对实验性老年性耳聋豚鼠SOD和MDA含量的影响( x±s)

组别	剂量(克原药/公斤)	动物数(只)	SOD(μg/ml)	MDA(nmol/ml)
					生理盐水对照组	-	10	109.18±10.06***	8.21±0.37***
D-半乳糖衰老模型组	-	10	83.14±1.64	10.02±0.71
					本药物组合物颗粒剂大剂量组	10.4	10	94.54±4.48***	7.50±0.30***
本药物组合物颗粒剂中剂量组	5.2	10	90.06±4.04*	7.87±0.45***
					本药物组合物颗粒剂小剂量组	2.6	10	84.96±4.08	8.46±0.19***
耳聋左慈丸阳性对照组	2.1	10	102.97±5.64***	7 42±0.18***

注：与模型组相比“*”P＜0.05；“**”P＜0.01；“***”P＜0.001；

实验例9：本药物组合物颗粒剂对“血瘀”大鼠血液流变学的影响

取健康老年大鼠，雌雄各半，体重(440～480)g，随机分为6组，随机分为正常对照组、血瘀模型组、复方丹参对照组和本药物组合物颗粒剂高、中、低剂量组，每组10只。本药物组合物颗粒剂高、中、低剂量组每日灌服本药物组合物颗粒剂混悬液1ml/100gBW。其高、中、低剂量分别为12.48g原药/kg/日、6.24g原药/kg/日、3.12g原药/kg/日。复方丹参阳性药物对照组豚鼠灌服同体积的复方丹参7.28g原药/kg/日。正常对照组、血瘀模型组灌服同体积的自来水。ig每天1次，连续给药7d。除正常对照组外，各组大鼠于末次给药1h后sc 0.8mg/kg/日肾上腺素注射液，间隔6h后再注射1次，其间将大鼠放入冰水刺激5min，禁食。于次日晨所有各组大鼠用10％乌拉坦ip麻醉，颈动脉采血4mL，加入肝素抗凝管中，测定全血比粘度(高切)、全血比粘度(中切)、全血比粘度(低切)、血浆粘度、红细胞压积、纤维蛋白原等流变学指标。结果见表11。

 表11  对“血瘀”大鼠血液流变学指标的影响( x±s)

组别	剂量(g原药/kg)	全血比粘度(η6)			血浆粘度
						高切	中切	低切
		正常对照组	-	6.80±1.11**					11.68±2.81**	20.56±4.17**	1.59±0.10**
血瘀模型组	-				8.40±0.73△△	16.81±2.46△△	35.20±10.54△△	1.80±0.15△△
		大剂量组	12.48	6.29±0.87**					11.68±2.57**	19.82±3.41**	1.58±0.17**
中剂量组	6.24				7.14±0.67**	11.16±2.42**	20.85±4.34**	1.66±0.11*
		小剂量组	3.12	7.52±0.75*					13.78±3.07*	26.52±5.57	1.76±0.12
复方丹参对照组	7.28				6.99±1.17*	11.75±3.24*	20.54±3.96*	1.65±0.17**

与对照组相比：“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01；

与模型组相比：“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。

表11  本药物组合物颗粒剂对“血瘀”大鼠血液流变学指标的影响( x±s)

组别	剂量(g原药/kg)	红细胞压积(HCT)	纤维蛋白原
				正常对照组	-	41.29±4.51**	2.87±0.79**
血瘀模型组	-	47.55±4.53△△	4.38±0.57△△
				大剂量组	12.48	39.78±3.19**	3.77±0.39**
中剂量组	6.24	39.54±3.22**	3.81±0.50*
				小剂量组	3.12	40.86±4.02*	4.01±0.61
复方丹参对照组	7.28	38.91±3.64**	3.66±0.44**

与对照组相比：“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01；

与模型组相比：“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。

可以看出本药物组合物颗粒剂大、中剂量能使实验性“血瘀”型大鼠的全血粘度、血浆粘度、纤维蛋白原显著降低(P＜0.01，P＜0.05)。本药物组合物颗粒剂大剂量能使“血瘀”型大鼠的全血粘度(高切、中切)明显降低、并使能明显降低大鼠的红细胞压积(P＜0.05)。表明有一定的活血化瘀作用。

实验例10：本药物组合物颗粒剂抗大鼠血栓实验

取健康老年大鼠，雌雄各半，体重(440～480)g，随机分为正常对照组、复方丹参对照组和本药物组合物颗粒剂高、中、低剂量组，每组10只。本药物组合物颗粒剂高、中、低剂量组每日灌服本药物组合物颗粒剂混悬液1ml/100gBW。其高、中、低剂量分别为12.48g原药/kg/日、6.24g原药/kg/日、3.12g原药/kg/日。复方丹参阳性药物对照组豚鼠灌服同体积的复方丹参7.28g原药/kg/日。正常对照组、血瘀模型组灌服同体积的自来水。ig每天1次，连续给药7d。各组大鼠均每日灌胃给药1次，连续7天，末次药后30min，以10％乌拉坦1ml/100g腹腔麻醉，仰位固定于大鼠手术台上，实施手术。弯剪剪去颈部位毛，正中切开颈部皮肤，钝剥离分离右颈总动脉及左颈外静脉，将事先充满肝素生理盐水(50U/ml)的聚乙烯管(分三段连结，在中段放人长6cm的4号手术线)的一端插入左颈外静脉后，从聚乙烯管注入肝素50U/kg，夹住管壁，将右颈总动脉近心端以止血夹阻断血流，眼科剪剪一“△”口，将聚乙烯管另一端插入右颈总动脉，结扎，5min后打开止血夹开放血流，血液从右颈总动脉经聚乙烯管返回左颈外静脉，开放血流15min后，中断血流，迅速取下聚乙烯管，取出手术线，分析天平称重，以总重量减去线重即血栓湿重N。实验结果表12。

                   表12  对大鼠体外血栓形成的影响( x±s)

组别	剂量(克原药/公斤)	动物数(只)	血栓湿重(mg)
				生理盐水对照组本药物组合物颗粒剂大剂量组本药物组合物颗粒剂中剂量组本药物组合物颗粒剂小剂量组复方丹参阳性对照组	-12.486.243.127.28	1010101010	10.16±1.907.13±2.05**8.21±1.09*8.82±1.834.7±1.10***

与对照组相比：“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。

结果可以看出，老年大鼠在连续七天灌服本药物组合物颗粒剂12.48克原药/公斤、6.24克原药/公斤后，可明显减轻大鼠体外循环聚乙烯管中手术线血栓湿重。与生理盐水正常对照组相比，本药物组合物颗粒剂大、中剂量组大鼠血栓湿重明显低于正常对照组大鼠，具有显著性差异(P＜0.01、P＜0.05)。说明本药物组合物颗粒剂大、中剂量有一定对抗老年大鼠血栓形成的作用。

实验例11：对肾阳虚大鼠的作用试验

雄性老年大鼠60只，体重440～480克，随机分为6组，分为空白对照组，肾阳虚模型组、本药物组合物颗粒剂大、中、小剂量组，生力雄丸组，各给药组按剂量灌胃给予药物，空白对照组及肾阳虚模型组，给予同体积的蒸馏水，连续10日，第11日起除空白对照组外，皮下注射氢化可的松25毫克/公斤一日一次。在皮下注射氢化可的松的同时照常灌胃给药，如此再连续10日，第21日处死大鼠，取包皮腺、睾丸、前列腺+精液囊、称重、计算脏器指数。

表13  本药物组合物颗粒剂对肾阳虚大鼠称重的影响( x±s)

组别	剂量(g原药/kg)	动物数(只)	体重(克)		增长值(克)
						给药前	给药后
			对照组模型组大剂量组中剂量组小剂量组生力雄丸组	--12.486.243.120.48				101010101010	459.3±5.38465.2±10.65463.3±8.11461.8±7.63461.2±6.68465.1±6.03	508.2±4.18495.5±7.00523.0±10.80***△△△516.2±7.86***504.9±12.71524.3±5.85***△△△	48.9±3.6030.3±4.8559.7±5.21***△△△54.4±5.30***43.7±9.14***59.2±3.29***△△△

与对照组相比：“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01；

与模型组相比：“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。

                        表14  对肾阳虚大鼠生殖系统脏器指数的影响( x±s)

组别	剂量(g原药/kg)	动物数(只)	包皮腺指数(克/100克)	睾丸指数(克/100克)	前列腺+精液囊指数(克/100克)
						对照组模型组大剂量组中剂量组小剂量组生力雄丸组	--12.486.243.120.48	101010101010	0.051±0.00300.031±0.0049△△△0.048±0.0065***0.036±0.0036**0.035±0.00230.047±0.0059***	0.934±0.04220.665±0.0389△△△0.787±0.0629***0.663±0.0430**0.693±0.03650.781±0.0515***	0.204±0.02450.167±0.0256△△△0.208±0.0284***0.202±0.0070***0.172±0.01180.2188±0.0128***

与对照组相比：“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01；

与模型组相比：“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。

本药物组合物颗粒剂大、中剂量组与模型组相比能显著增加肾阳虚大鼠的体重及包皮腺脏器指数、睾丸指数、前列腺+精液囊指数(P＜0.001，P＜0.01)，证明本药物组合物颗粒剂有一定补肾作用。

实验例12：对去势大鼠阴茎勃起功能作用试验

雄性大鼠经戊巴比妥钠(0.6％，75毫克)麻醉后局部消毒，摘除双侧睾丸。术后三日，将50只去势大鼠分为5组。去势大鼠模型组，每日灌喂蒸馏水0.5毫升/100克，本药物组合物颗粒剂大、中、小剂量组按剂量经灌胃给药的剂量为12.48克原药/公斤，6.24克原药/公斤，3.12克原药/公斤，生力雄丸组的剂量为0.48克/公斤，给药容积均为0.5毫升/100克，每日一次，连续给药20日。此外，同期另设正常对照组，将10只未去势大鼠同期饲养并灌喂蒸馏水0.5毫升/100克。给药后第21日将电剌激仪的电极放置于大鼠阴茎部位，施于局部电剌激，电流强度为5mA，记录从剌激开始至阴茎勃起时间(勃起潜伏期)，结果进行统计学处理。

        表15  对去势大鼠阴茎勃起功能的影响( x±s)

组别	剂量(g原药/kg)	动物数(只)	阴茎勃起潜伏期(秒)
				对照组模型组大剂量组中剂量组小剂量组生力雄丸	--12.486.243.120.48	101010101010	17.44±3.9324.80±4.08△△17.79±3.22**20.03±3.98*21.75±2.8918.68±5.77**

与对照组相比：“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01；

与模型组相比：“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。

可见本药物组合物颗粒剂大，中剂量与模型组相比，可显著缩短去势大鼠的阴茎受刺激勃起潜伏期(P＜0.01，P＜0.05)，显示该药有一定壮阳作用。

具体实施例如下：

实施例1：颗粒剂的制备

丹参1500g    骨碎补1000g    石菖蒲500g    人工麝香1.5g

以上四味，取丹参，骨碎补加65％乙醇加热回流提取三次，第一次加8倍药材量，提取1.5小时；第二次加6倍药材量，提取1小时；第三次加4倍药材量，提取0.5小时，合并药液，滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度约为1.10(60℃)的清膏，备用；石菖蒲加10倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，收集挥发油，药液滤过，滤液备用；所得挥发油用8倍量β-环糊精(即48g)，加入15倍量于β-环糊精的水，室温超声包合40分钟，抽滤，40℃干燥4小时，研磨，过100目筛，备用；石菖蒲药渣合并丹参、骨碎补醇提后药渣，加水煎煮两次，每次加10倍药材量，提取1小时，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min速度离心，取上清液减压浓缩至相对密度约为1.10(60℃)的清膏；合并以上两种清膏，在进风温度170～180℃，出风温度90～100℃的条件下喷雾干燥；收集干浸膏粉末，加入人工麝香、糊精53g、β-环糊精包合物和蛋白糖20g，混匀，在主压力4.5～5.5MPa，侧压力0.25MPa的条件下干法制粒，得干燥颗粒，整粒，分装，即得。

实施例2：胶囊的制备

取丹参1450g    骨碎补1050g    石菖蒲450g    人工麝香2g

制得的胶囊剂。每粒含内容物0.5g。口服，一次4粒，一日3次，耳聋、耳鸣患者服用，以8周为一疗程。

实施例3：片剂的制备

取丹参1550g    骨碎补950g    石菖蒲550g    人工麝香1g

制得的片剂，每片含内容物0.5g。口服，一次4片，一日3次。

实施例4：口服溶液的制备

取丹参1500g    骨碎补1000g    石菖蒲500g    人工麝香1.5g

加入溶剂、矫味剂、乳化剂等辅料，制成口服溶液，每支10ml。耳聋、耳鸣患者服用，一次10ml，一日2次。

实施例5：缓释片的制备

取丹参1550g    骨碎补950g    石菖蒲550g    人工麝香1g

加入辅料，制成缓释片，每片0.4g。耳聋、耳鸣患者服用，一次1片，一日1次。

实施例6：滴丸的制备

取丹参1450g    骨碎补1050g    石菖蒲450g    人工麝香2g

加入辅料，制成滴丸，每粒0.05g。耳聋、耳鸣患者服用，一次20粒，一日2次。

实施例7：质量控制中的鉴别方法

(1)取实施例1颗粒剂内容物3g，研细，加石油醚(30～60℃)50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮II_A对照品，加乙醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。

(2)取实施例1颗粒剂内容物5克，研细，加石油醚(60～90℃)50ml，振荡数分钟后超声30分钟，滤过，滤液挥干石油醚，残渣加石油醚(60～90℃)2ml溶解，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取实施例1颗粒剂内容物20g，研细，加乙醚50ml，浸泡12小时，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品加乙醚制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIE)试验，柱长为2m，以50％苯基甲基硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％，柱温为210℃。分别取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪。供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

实施例8：质量控制中的含量测定方法

色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水-醋酸(5∶160∶1)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取实施例2胶囊剂内容物约0.3g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入60％甲醇25ml，称定重量，密塞，超声提取30分钟，放置至室温后补足重量，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入色谱仪，测定，即得。

本胶囊剂每克含丹参素以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)计，不得少于12.0mg。

实施例9：质量控制方法

(1)取实施例3片剂2g，研细，加石油醚(30～60℃)50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮II_A对照品，加乙醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。

(2)取实施例3片剂3克，研细，加石油醚(60～90℃)50ml，振荡数分钟后超声30分钟，滤过，滤液挥干石油醚，残渣加石油醚(60～90℃)2ml溶解，作为供试品溶液。另取石菖蒲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取实施例3片剂12克，研细，加乙醚50ml，浸泡过夜，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取麝香酮对照品加乙醚制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法(《中国药典》2000版一部附录VIE)试验，柱长为2m，以50％苯基甲基硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％，柱温为210℃。分别取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪。供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水-醋酸(5∶160∶1)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取实施例4口服溶液1ml，置具塞锥形瓶中，加入60％甲醇25ml，称定重量，密塞，超声提取30分钟，放置至室温后补足重量，摇匀，滤过，收集续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入色谱仪，测定，即得。

实施例10：口服溶液每1ml含丹参素以丹参素钠(C₉H₉O₅Na)计，不得少于3.8mg。

Claims (14)

1、一种治疗耳聋耳鸣的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

丹参1450-1550重量份       骨碎补950-1050重量份

石菖蒲450-550重量份       人工麝香1-2重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

丹参1450重量份            骨碎补1050重量份

石菖蒲450重量份           人工麝香2重量份。

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

丹参1550重量份            骨碎补950重量份

石菖蒲550重量份           人工麝香1重量份。

4、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：

丹参1500重量份           骨碎补1000重量份

石菖蒲500重量份          人工麝香1.5重量份。

5、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物，其特征在于该组合物制成片剂、软胶囊剂、胶囊剂、缓释剂、颗粒剂、滴丸剂或口服液体制剂。

6、如权利要求5所述的药物组合物制剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：以上四味，取丹参、骨碎补加50-80％乙醇加热回流提取三次，第一次加6-9倍药材量，提取1-2小时；第二次加4-7倍药材量，提取0.5-1.5小时；第三次加3-5倍药材量，提取20-50分钟，合并药液，滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度60℃时为1.10的清膏，备用；石菖蒲加8-12倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油5-8小时，收集挥发油，药液滤过，滤液备用；所得挥发油用7-9倍量β-环糊精，加入13-17倍量于β-环糊精的水，室温超声包合30-50分钟，抽滤，40℃干燥3-5小时，研磨，过100目筛，备用；石菖蒲药渣合并丹参、骨碎补醇提后药渣，加水煎煮1-3次，每次加6-10倍药材量，提取0.5-1.5小时，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min速度离心，取上清液减压浓缩至相对密度60℃时为1.10-1.15的清膏；合并以上两种清膏，在进风温度170～180℃，出风温度90～100℃的条件下喷雾干燥；收集干浸膏粉末，加入人工麝香、糊精50-60重量份、β-环糊精包合物和蛋白糖15-25重量份，混匀，加常规辅料制成各种剂型。

7、如权利要求6所述的药物组合物制剂的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：以上四味，取丹参、骨碎补加65％乙醇加热回流提取三次，第一次加8倍药材量，提取1.5小时；第二次加6倍药材量，提取1小时；第三次加4倍药材量，提取0.5小时，合并药液，滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度60℃时为1.10的清膏，备用；石菖蒲加10倍量水，用水蒸气蒸馏法提取挥发油6小时，收集挥发油，药液滤过，滤液备用；所得挥发油用8倍量β-环糊精，加入15倍量于β-环糊精的水，室温超声包合40分钟，抽滤，40℃干燥4小时，研磨，过100目筛，备用；石菖蒲药渣合并丹参、骨碎补醇提后药渣，加水煎煮2次，每次加10倍药材量，提取1小时，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min速度离心，取上清液减压浓缩至相对密度60℃时为1.10-1.15的清膏；合并以上两种清膏，在进风温度170～180℃，出风温度90～100℃的条件下喷雾干燥；收集干浸膏粉末，加入人工麝香、糊精53重量份、β-环糊精包合物和蛋白糖20重量份，混匀，在主压力4.5～5.5MPa，侧压力0.25MPa的条件下干法制粒，得干燥颗粒，整粒，分装，即得。

8、如权利要求5所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

A.取本药物组合物制剂日服用剂量的3/10，研细，加30～60℃的石油醚45-55ml，超声提取20-40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加乙醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以17-19∶1-3的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；

B.取本药物组合物制剂日服用剂量的1/2，研细，加60～90℃石油醚45-55ml，振荡数分钟后超声20-40分钟，滤过，滤液挥干石油醚，残渣加60～90℃的石油醚2ml溶解，作为供试品溶液；另取石菖蒲对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6-9∶1-4的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C.取本药物组合物制剂日服用剂量的2倍，研细，加乙醚45-55ml，浸泡12小时，超声处理10-20分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取麝香酮对照品加乙醚制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法试验，柱长为2m，以50％苯基甲基硅酮为固定相，涂布浓度为2％，柱温为210℃；分别取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪；供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

9、如权利要求8所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种：

A.取本药物组合物制剂日服用剂量的3/10，研细，加30～60℃的石油醚50ml，超声提取30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取丹参酮IIA对照品，加乙醚制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以19∶1的苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点；

B.取本药物组合物制剂日服用剂量的1/2，研细，加60～90℃石油醚50ml，振荡数分钟后超声30分钟，滤过，滤液挥干石油醚，残渣加60～90℃的石油醚2ml溶解，作为供试品溶液；另取石菖蒲对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7∶3的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

C.取本药物组合物制剂日服用剂量的2倍，研细，加乙醚50ml，浸泡12小时，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液；另取麝香酮对照品加乙醚制成每ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照气相色谱法试验，柱长为2m，以50％苯基甲基硅酮为固定相，涂布浓度为2％，柱温为210℃；分别取对照品溶液和供试品溶液适量，注入气相色谱仪；供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰。

10、如权利要求8所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中还包括的含量测定为如下测定方法：

色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4-5∶160∶1-2的乙腈-水-醋酸为流动相；检测波长为200-400nm；理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本药物组合物制剂日服用剂量的3％，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入60％甲醇25ml，称定重量，密塞，超声或回流提取10-40分钟，放置至室温后补足重量，摇匀，滤过，收集续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入色谱仪，测定，即得；

本药物组合物制剂按每日服用剂量计，含丹参素以丹参素钠C₉H₉O₅Na不得少于60.0mg。

11、如权利要求10所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该方法中的含量测定为如下测定方法：

色谱条件与系统适用性：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，5∶160∶1的乙腈-水-醋酸为流动相；检测波长为280nm；理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本药物组合物制剂日服用剂量的3％，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入60％甲醇25ml，称定重量，密塞，超声提取30分钟，放置至室温后补足重量，摇匀，滤过，收集续滤液，即得；

测定法；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入色谱仪，测定，即得；

本药物组合物制剂按日服用剂量计，含丹参素以丹参素钠C₉H₉O₅Na不得少于60.0mg。

12、如权利要求1、2、3或4所述的药物组合物在制备治疗耳聋、耳鸣药物中的应用。

13、如权利要求12所述的药物组合物的应用，其特征在于所述耳聋、耳鸣是指老年性耳聋、耳鸣或药物性耳聋、耳鸣。

14、如权利要求13所述的药物组合物的应用，其特征在于所述的治疗耳聋、耳鸣是指具有抗衰老性耳聋耳鸣、预防药物性听力下降、活血化瘀或补肾作用。