CN1277060A - 多元灵芝硒的生产方法 - Google Patents

Abstract

多元灵芝硒的生产方法属中医药学,真菌学,生命元素科学领域。本发明采用灵芝深层发酵工艺,添加定性定量的硒及系列元素(锌、铁、铜、碘、钴、铬、氟),利用灵芝菌丝体对多种元素有机络合,经发酵,离心分离,清洗、冷冻干燥,菌丝体自溶过程制成干品和水剂。其生产工艺工业水准高,以硒元素及灵芝为主导,系列元素配套组合准确合理,有机元素含量高,无机元素被清除,产品毒性低。制成品可为缺硒人群补充生物硒,并在肝、心血管疾病及肿瘤防治有确切的疗效。

Description

多元灵芝硒的生产方法

本发明系灵芝菌丝体经液体深层培养，生成富含生物硒及多种生物微量元素的灵芝菌丝体高纯度干品和水剂，本发明所涉及的是中医药学、真菌学、生命元素科学领域。

灵芝Gunoderma Lucidnm.味淡、性温，能补润虚寒，抉正固本。《神农本草经》记载：“主耳聋、利关节、保神、益精气、坚筋骨，好颜色”。《本草纲目》“久服、轻身不老延年”。现代多指标综合研究表明：灵芝深层发酵液与灵芝子实体含有相似的化学成份和药理作用。自然灵芝含硒元素0.5～2.0PPM。

硒是人体必需的微量元素之一。硒存在于肌体的多种功能蛋白酶。有机硒较之于无机硒更有利于人体的吸收和很好的安全性。硒化合物能清除脂质过氧自由基和羟自由基。硒可以影响癌细胞基因的表达和调控，在癌症高发区采用硒干预获得良好的防癌效果。我国从东北到西南有一覆盖15个省区的低硒地带。我国成人日摄硒平均26.62μg，成人正常日需量为50～200μg。

占人体总重量的0.05％的41种微量元素中，铁、锌、铜、锰、硒、铬、钴、氟、碘等是人体必需微量元素。美国和日本公布的这些元素的需要量(日需量)是：铁10～12mg，锌15mg，铜2～3mg，硒50～200μg，锰2.5～5mg，钴100μg，铬50～200μg，氟2.1～2.3mg，碘1.5mg。这些元素对人体的某些腺素和激素的合成，能量转换，生殖、生长、发育，大脑的思维与记忆，信息的传导，遗传密码的传递等各有其特殊功能。元素是唯一不能在人体内自行合成的最基本的营养素。元素在人体共存时不但有数量的关系，更重要的是有比例关系和复杂的相互作用，具体表现为协同作用和拮抗作用或二者兼而有之。

微量元素在中药的存在形式主要是和有机物形成络合物，灵芝菌丝体所含氨基酸，肽、蛋白质、核酸等可作为络合物的优良配体。灵芝菌丝体与硒元素及系列微量元素合成络合物，不仅丰富了中医中药，还为中药微量元素的研究提供了新的途径。

在公知的技术中，专利94115520.x使用微生物制备有机硒提取剂的方法，95105605.0微量元素的生物转化及酶化提取方法，96119695.5深层发酵法生产灵芝保健饮料，96107080.3富含多种微量元素的灵芝菌丝体及其生产方法，98113108.5灵芝10吨发酵罐工艺等技术，均说明了灵芝与硒元素、多种微量元素的转化，固体培养及深层液体发酵及具体的发酵工艺。其不足之处是：未充分发挥硒元素与灵芝菌丝体的主导作用，定量偏低，配套的系列微量元素未科学地定性定量，品种不明，用量不准，缺法依据：经深层发酵成熟的菌丝体含无机元素未被有效清除；深层发酵只有机械，物理指标而无具有综合效应的生物指标；缺乏将灵芝菌丝体溶解的有效方法。

本发明的目的是：采用先进的液体深层发酵工艺，使用适应于本工艺的专用液体培养液，并添加硒元素，及系列微量元素，制取多元灵芝硒菌丝体干品和水剂、使之能为缺硒人群补充生物硒，并在肝、心血管疾病、肿瘤防治等方面具有确切疗效。

实现本发明的技术方案是：

1、灵芝菌株：5.56红灵芝(引自中国科学院微生物所菌种室)

2、培养液配方：

灵芝种子培养液配方：

葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氢钾，亚硒酸钠，PH自然。

灵芝菌丝体深层发酵液配方：

葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氢钾，PH5.5，

亚硒酸钠Sodium Selenite                    (Na₂SeO₃＝128.97)

硫酸亚铁Ferrous Sulfate                    (FeSO₄.7H₂O＝278.02)

硫酸锌Zinc Sulfate                         (ZnSO₄.7H₂O＝287.56)

硫酸铜Cnpric Sulfate                       (CnSO₄.5H₂O＝249.69)

硫酸锰Manganese Sulfate                    (MnSO₄.H₂O＝169.02)

碘化钾Potassium lodide                     (KI＝166.00)

铬酸钾Potassium chromate                   (K₂CrO₄＝194.19)

氯化钴Cobaltous chloride                   (COCL₂.6H₂O＝237.93)

氟硼酸钠Sodium fluoroborate                (NaBF₄＝109.82)

上述配方中硒及系列元素定性定量的标准是：易溶于水(或热水)、无毒、无腐蚀作用，硒元素含量相当于人体日需量100％，系列元素依据下列公式添加，其计算公式是：

例：

$=\frac{100\mathrm{\μg}\×100\%\×128.97}{1\×78.96}=163.4\mathrm{\μg}$

3、主要发酵设备：

三角瓶、旋转式摇床，一级种子罐，二级种子罐，10吨发酵罐。

空气过滤机、空压机、离心机。

4、多元灵芝硒深层发酵工艺流程：

灵芝斜面母种经摇床培养，进入一级种子发酵，再经二级种子发酵，进行发酵罐培养。合格发酵液经离心分离，清洗为纯菌丝体、冷冻干燥成干品，加无菌水加热菌丝体自溶后成水剂，即多元灵芝硒。

本发明同现有的技术相比其优点是：多元灵芝硒生产工艺水准高，能达到我国药品高效、优质、安全、稳定的技术要求；作为中药灵芝与硒及系列必需微量元素的有机络合可为我国中药宝库提供一类新的菌类药材及制剂；定性定量的硒及系列定性定量必需微量元素被灵芝菌丝体转化，既保证了灵芝与硒络合物的主导作用，也兼顾了系列微量元素复杂的协调作用，更保证了各种元素使用的准确性和科学性；未被转化的无机元素被有效地清除，保证了制剂的优质和低毒：即生物硒≥800PPM，生物硒及生物系列元素含量＞95％，无机硒及无机系列元素含量＜5％。

实施例1、多元灵芝硒的制备工艺

1灵芝斜面母种：5.65红灵芝

2液体种子的摇瓶培养

2.1种子培养液配方：

葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氢钾，亚硒酸钠，PH自然。

2.2装瓶：每瓶装量100毫升，玻璃株10粒，棉塞牛皮纸封口。

2.3灭菌：压力1.5kg/cm²，时间30分钟。

2.4接种：无菌接种，接入斜面母种。

2.5培养：静止培养，温度24°-26℃

震荡培养：温度26℃±2℃，摇床偏心距4cm，频率150-220转/分。

2.6合格种子液标准：清澈透明，菌丝小球1～2毫米，菌丝体干重10g/升。

3多元灵芝硒深层培养：

3.1培养液配方：

3.11种子液配方：同2.1

3.12菌丝体深层培养液配方：葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氢钾，亚硒酸钠，硫酸亚铁，硫酸锌，硫酸铜，硫酸锰，碘化钾，铬酸钾，氯化钴，氟硼酸钠。

3.2一、二级种子培养：

3.21定容：一级种子罐容积50升，定容35升，二级种子罐容积500升，定容350升。

3.22空消：温度135℃-140℃，压力2.5～2.8kg/cm²。

3.23实消：1.2kg/cm²，50～60分钟，恒温8分钟。

3.24降温：降至27℃，降压至0.5kg/cm²。

3.25接种：一级种子罐接入摇瓶种子1.8～2.5升。二级种罐接入一级种子35升。

3.26种子液发酵：罐温25°～28℃，罐压20～40KPa，揽拌速率110～140r/min，通气量1∶0.5，时间48小时

3.27质监标准：

O时：查杂菌，OD值(光密度)，初糖；

12、24、36、48小时：OD，残糖，PH；

48小时正常标准：PH5.OD值净长值0.5，耗糖1个单位。

3.3发酵罐发酵：

3.31定容：10吨发酵罐，定容7500升。

3.32空消：140℃、2.8kg/cm²，60分钟

3.33实消：50～60分钟、保温8分钟。

3.34降温：0.5kg/cm²，25℃。

3.35接种：二级种子750升

3.36培养：26℃±2℃，PH5.5，通风量1∶0.5(体积/体积/分)，发酵液温度升高时加大至1∶1，罐压10～30KPa，揽拌速率150～180r/min。

3.37质监标准：72小时后每隔12小时取样测糖、氮、PH、无菌度。

3.38放罐标准：PH.5，残糖2.5，氨态氮＜30毫克/毫升，菌球浓度1000-1500个/毫升。

4、发酵产品制取：

4.1离心分离：所分离的必须是经检验后的合格发酵液，离心速率2000～300rpm。

4.2菌丝体清洗：添加无菌水，比例1∶80，清洗之后，120目过滤、得菌丝体。

4.3菌丝体干品：冷冻干燥，无菌分装，常温贮藏。

4.4菌丝体水剂：添加1∶20无菌水，升温，菌丝体自溶。无菌灌装，0°-4℃贮藏。

Claims (8)

1、一种多元灵芝硒生产方法，其特征是在灵芝深层发酵液中添加定性定量硒制剂为主导，系列微量元素制剂为配组，利用灵芝菌丝体对无机元素的有机络合能力，制成多元灵芝硒菌丝体干品和水剂，其制品有机元素含量＞95％，无机元素含量＜5％。

2、按权利要求1所述，其特征是灵芝种子培养液配方为：葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氢钾，亚硒酸钠，PH自然。

3、按权利要求2所述其特征是灵芝菌丝体深层培养液配方为：葡萄糖，玉米粉，蛋白胨，磷酸二氢钾，PH5.5，亚硒酸钠，硫酸亚铁，硫酸锌，硫酸铜，硫酸锰，碘化钾，铬酸钾，氯化钴，氟硼酸钠。

4、按权利要求2其特征是灵芝菌丝体深层培养液元素制剂添加公式为：

5、按权利要求1所述其特征是硒及系列元素制剂定性定量的标准是：易溶于水(或热水)，无毒，无腐蚀作用，硒元素含量相当于人体日需量100％，系列元素含量，依据元素制剂添加量公式计算。

6、按权利要求1所述其特征是菌丝体清洗：将合格发酵液离心分离后，添加无菌水，清洗之后过滤。

7、按权利要求1所述其特征是菌丝体自溶：被清洗过滤后的菌丝体再添加20倍的无菌水，升温，菌丝体自深成水剂。

8、按权利要求1所述其特征是多元灵芝硒发酵过程质监标准为：摇瓶种子液质检标准：清澈透明、菌丝小球1～2毫米，菌丝体干重10g/升。一、二级种子培养液质监标准：0时，查杂菌、OD值、初糖。12、24、48小时：OD，初糖，PH。48小时正标准：PH5.0，净长值0.5，耗糖一个单位。10吨发酵罐质监标准：72小时后，每隔12小时取样测糖、氮、PH、无菌度：放罐标准：PH5，残糖，2.5，氨态氮＜30毫克/毫升，菌球浓度1000-1500个/毫升。