CN101955895B

CN101955895B - 玫瑰杆菌及其在制备琼胶寡糖中的应用

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Publication number: CN101955895B
Application number: CN2010101086073A
Authority: CN
Inventors: 梅建凤; 应国清; 刘美英; 王鸿; 易喻; 陈建澍
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2010-02-09
Filing date: 2010-02-09
Publication date: 2012-05-23
Anticipated expiration: 2030-02-09
Also published as: CN101955895A

Abstract

本发明提供了一株新的琼胶酶产生菌株——玫瑰杆菌(Roseobactersp.)zjut，及其在制备琼胶寡糖中的应用。所述玫瑰杆菌zjut保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC No：M209292，保藏日期2009年12月3日。本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明的玫瑰杆菌zjut营养要求简单、容易培养；(2)玫瑰杆菌zjut产生的琼胶酶为胞外酶，分离纯化方便，无需细胞破碎；(3)玫瑰杆菌zjut产琼胶酶活性高，在优选的条件下，未经分离纯化的粗酶液活力可达215.8U/mL；(4)玫瑰杆菌zjut产琼胶酶降解琼胶需要的反应条件温和，作用时间较短；(5)本发明中的琼胶酶稳定性好，该琼胶酶在温度低于4℃的冰箱中保存7d，酶活力基本无损失(失活率≤5％)。

Description

玫瑰杆菌及其在制备琼胶寡糖中的应用

(一)技术领域

本发明涉及一株新的琼胶酶产生菌株——玫瑰杆菌(Roseobacter sp.)zjut，及其在制备琼胶寡糖中的应用。

(二)背景技术

琼胶(agar)是一种从海洋红藻中提取得到的多糖，其在食品、医药卫生等行业已有悠久的应用历史，但由于琼胶黏度高，水溶性低，不易被吸收，因此在医药工业中的应用受到很大的限制。琼胶寡糖(agaro-oligosaccharide)就是琼胶多糖经降解后聚合度为2～10的低聚糖，又称琼胶低聚糖，主要由琼二糖的重复单位连接而成，因水溶性好，有利于人体吸收，其在医药领域的应用价值便有显著提高。研究表明，琼胶寡糖具有良好的抗癌、抗氧化、抗炎及抗病毒等生理活性，是一种极具开发潜力的低聚糖。与琼胶的化学降解相比，琼胶酶降解琼胶生成琼胶寡糖，具有特异性强，可选择性地切断特定化学键，从而制得特定聚合度的寡聚糖，并且具有反应条件温和，降解过程易于控制，无副反应，环境污染少等优点，在制备琼胶寡糖中具有明显的优势。除了制备琼胶寡糖之外，琼胶酶还可用作工具酶，用于回收琼脂糖凝胶中的DNA或RNA、海藻多糖结构的研究等。近年来，我国对利用琼胶酶降解制备寡糖开展了较多的研究，但未见利用琼胶酶降解琼胶制备活性寡糖投入工业化生产的报道，关键就在于缺乏酶活力高的菌株，因此筛选并获得高产琼胶酶产生菌具有重要的理论意义和应用价值。

(三)发明内容

本发明提供一株新的琼胶酶产生菌——玫瑰杆菌(Roseobacter sp.)zjut，及其在制备琼胶寡糖中的应用，较好地克服现有微生物发酵生产琼胶酶中的培养基成本高、发酵周期长和酶活性低的缺点。

本发明采用的技术方案是：

一株琼胶酶产生菌——玫瑰杆菌(Roseobacter sp.)zjut，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号：CCTCC No：M 209292，保藏日期2009年12月3日。

所述玫瑰杆菌zjut的菌落特征如下：涂布或划线接种于平板培养基上生长迅速，28℃培养48h后长出圆形、湿润、乳白色、直径约0.3～0.5cm的菌落，并且在固体平板培养基菌落处形成凹陷；所述玫瑰杆菌zjut的菌体特征如下：短杆菌，两端钝圆，大小为0.5～0.7μm×0.g～2.4μm；所述的玫瑰杆菌zjut的生理生化特性如下：革兰氏染色阴性；氧化酶、过氧化氢酶、D-核糖、蔗糖、柠檬酸盐和L-丝氨酸阳性；N-乙酰葡萄糖胺、丙二酸盐、乙酸盐、D-甘露醇、L-丙氨酸、D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、麦芽糖、丙酸盐、辛二酸盐、L-脯氨酸为阴性。

本发明所述玫瑰杆菌zjut由浙江省台州市三门县紫菜种植海域海水中分离和筛选得到野生菌株，再经紫外线照射和γ射线照射诱变处理获得。

野生菌株的分离方法为：在采集的海水中加入条状琼脂进行微生物富集培养，使得海水中能以琼胶为唯一碳源生长的微生物数量增加，再将富集培养物稀释后涂布于以琼胶为唯一碳源的平板培养基上，28℃培养至菌落数量不再增加，挑取周围形成明显凹陷的菌落至斜面培养基，并在培养皿底部作相应标记，再滴加卢戈氏碘液染色，测量菌落周围透明圈直径与菌落直径并计算其比值(HC值)，将HC值较大的菌落所接种的斜面置于28℃培养2d，将进一步摇瓶复筛。

用接种环分别挑取初筛的各个菌株新鲜斜面菌苔2环，接入液体产酶培养基中，28℃、200r/min振荡条件下发酵培养2d。将发酵液于4500r/min下离心15min后取上清液测酶活力，筛选出产酶活力最高的菌株。

所述的平板培养基和斜面培养基的组成相同，组成为：琼脂20g/L，NH₄Cl 1g/L，NaCl 25g/L，MgSO₄·7H₂O 5g/L，KCl 1g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，CaCl₂0.2g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，pH 6.8～7.2。

所述的摇瓶复筛产酶培养基组成为：琼脂2g/L，NaCl 25g/L，NH₄Cl1g/，MgSO₄·7H₂O 5g/L，KCl 1g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，CaCl₂0.2g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，pH 6.8-7.2。

紫外线和γ射线照射野生菌株诱变育种的条件为：紫外线照射的功率为15W，照射距离为30cm，照射时间为1～5min；γ射线的放射源为¹³⁷Cs，剂量率为281.2Gy/h，菌株离源中心距离为40cm，照射剂量为200～400Gy。

本发明经筛选获得的玫瑰杆菌zjut，具有稳定高产琼胶酶的生物性状，涂布或划线接种在平板培养基上生长迅速，28℃培养48h后长出圆形、湿润、乳白色、直径约0.3～0.5cm的菌落，并且在平板培养基菌落处形成凹陷；菌体为短杆菌，两端钝圆，大小为0.5～0.7μm×0.8～2.4μm；所述的玫瑰杆菌zjut生理生化特征如下表：

将所述的玫瑰杆菌zjut的16sRNA部分核苷酸序列与美国国立生物信息中心(National Center for Biotechnology Information USA，NCBI)的基因库中的微生物16sRNA序列比对，其序列与玫瑰杆菌属中的一些菌株，如Roseobacter sp.WHOI JT-01(ACCES SION：AY349459.2)和Roseobactersp.JL122(ACCESSION：EF512723.1)有99％的同源性，所述玫瑰杆菌zjut的16s rRNA的部分核苷酸序列如下：

AGGGGGCGGCAGACTACACATGCAAGTCGAGCGAGACCTTCGGGTCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACGTGCCCTTCTCTACGGAATAGTCCCGGGAAACTGGGTTTAATACCGTATACGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGAGAAGGATCGGCCCGCGTTAGATTAGGTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGCCTACGATCTATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTAGACAATGGGGGCAACCC TGATCTAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCTTAGGGTCGTAAAGCTCTTTCGCTGGGGAAGATAATGACTGTACCCAGTAAAGAAACCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGGTTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGCGGATTGGAAAGTTGGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCTCGGAACTGCCTCCAAAACTCCCAGTCTTGAGTTCGAGAGAGGTGAGTGGAACTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGATACTGACGCTGAGGTGCGAAAGTGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACCGTAAACGATGAATGCCAGTCGTCGGCAAGCATGCTTGTCGGTGACACACCTAACGGATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAACCCTTGACATCCTCGGACCGCCAGAGAGATCTGGTTTTCACTTCGGTGACCGAGTGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGGTTAAGTCCGGCAACGAGCGCAACCCACATCTTCAGTTGCCAGCAGTTCGGCTGGGCACTCTGGAGAAACTGCCCGTGATAAGCGGGAGGAAGGTGTGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCAGTGACAATGGGTTAATCCCAAAAAACTGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGTAACAGCATGACGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTCTACCCGACGACGCTGCGCTAACCTTCGGGGGGCAGGCGGCCACGGTAGGATCAGCGACTGGGGTGAAGTCGAAACAAGGAGCCCAAAGGCCCCA。

本发明还涉及所述的玫瑰杆菌zjut在发酵制备琼胶酶中的应用。所述的应用为：将玫瑰杆菌zjut菌种接种至以琼胶为唯一碳源的液体产酶培养基中，25～35℃培养45～55h，获得含有琼胶酶的发酵液。所得发酵液经过离心或过滤除去菌体的清液为粗酶液，可以直接应用于琼胶寡糖的制备；也可以按照常规生化方法进行酶的分离纯化，例如硫酸铵盐析、离子交换层析或凝胶过滤层析等方法，得到纯化后的琼胶酶应用于琼胶寡糖的制备。

所述菌株在产酶培养前，通常需要先经斜面培养活化，然后经种子培养、获得种子液再接入液体发酵培养基进行产酶培养。

所述的斜面培养基组成为：琼脂15～25g/L，酵母浸出粉3～5g/L，NaCl 10～25g/L，MgSO₄·7H₂O 4～6g/L；KCl 1～2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g/L，CaCl₂0.1～0.3g/L，NaH₂PO₄0.5～1.0g/L，溶剂为水，pH 6.8～7.2。

所述的液体种子培养基组成为：琼脂1～3g/L，酵母浸出粉3～6g/L，NaCl 10～25g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g/L，NaH₂PO₄0.5～1g/L，溶剂为水，pH 6.5～7.5。

所述的液体发酵培养基组成为：琼胶1～3g/L，NaNO₃2～5g/L，NaCl10～25g/L，NaH₂PO₄0.5～1g/L，MgSO₄·7H₂O 4～6g/L，KCl 1～2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g/L，CaCl₂0.1～0.3g/L，MnCl₂·4H₂O 0.1～0.2g/L，溶剂为水，pH 7～8。

具体的，所述应用方法如下：

(1)将玫瑰杆菌zjut菌种接种于斜面培养基，于25～30℃培养24～48h，得到活化后的玫瑰杆菌zjut菌种；所述的斜面培养基组成为：琼脂15～25g/L，酵母浸出粉3～5g/L，NaCl 10～25g/L， MgSO₄·7H₂O 4～6g/L；KCl 1～2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g/L，CaCl₂0.1～0.3g/L，NaH₂PO₄0.5～1.0g/L，溶剂为水，pH 6.8～7.2；

(2)将步骤(1)活化培养后玫瑰杆菌zjut菌体接种至液体种子培养基中，于25～35℃、150～250r/min振荡条件下培养16～24h，得到种子液；所述液体种子培养基组成为：琼脂1～3g/L，酵母浸出粉3～6g/L，NaCl 10～25g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g/L，NaH₂PO₄0.5～1.0g/L，溶剂为水，pH 6.8～7.2；

(3)将步骤(2)种子液以1％～10％的体积比的接种量，移种到液体产酶培养基中，于25～30℃、150～250r/min振荡条件下培养45～55h，得到含琼胶酶的发酵液；所述液体产酶培养基组成为：琼胶1～3g/L，NaNO₃2～5g/L，NaCl 10～25g/L，NaH₂PO₄0.5～1.0g/L，MgSO₄·7H₂O 4～6g/L，KCl 1～2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.03g/L，CaCl₂0.1～0.3g/L，MnCl₂·4H₂O 0.1～0.2g/L，溶剂为水，pH7～8；

(4)将步骤(3)含琼胶酶的发酵液于4℃条件下离心(4000～8000r/min，10～30min)或者过滤，分离除去菌体，所得清液即为琼胶酶粗酶液。

本发明还涉及所述的玫瑰杆菌zjut在水解琼胶制备琼胶寡糖中的应用。

具体的，所述的应用为：以玫瑰杆菌zjut经发酵培养获得的琼胶酶为催化剂，以琼胶为反应底物，在pH 7.0～8.0的缓冲液中、于30～50℃下进行水解反应，制得所述琼胶寡糖。

本发明中，琼胶酶的酶活力单位定义为：在一定的反应条件下，1min 产生1μg还原糖所需的酶量(mL)作为一个酶活力单位(U)。

本发明提供了产琼胶酶的玫瑰杆菌zjut，其有益效果主要体现在：(1)本发明的玫瑰杆菌zjut营养要求简单、容易培养；(2)玫瑰杆菌zjut产生的琼胶酶为胞外酶，分离纯化方便，无需细胞破碎操作；(3)玫瑰杆菌zjut产琼胶酶活性高，在优选的条件下，未经分离纯化的粗酶液活力可达215.8U/mL；(4)玫瑰杆菌zjut产琼胶酶降解琼胶需要的反应条件温和，作用时间较短；(5)本发明中的琼胶酶稳定性好，该琼胶酶在温度低于4℃的冰箱中保存7d，酶活力基本无损失(失活率≤5％)。

(四)附图说明

图1为平板培养基上玫瑰杆菌zjut的菌落形态；

图2为光学显微镜下玫瑰杆菌zjut的菌体形态。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：产琼胶酶微生物的富集、分离和筛选

在250mL三角瓶中加入50mL的天然海水和5g条状琼胶，三角瓶于28℃、200r/min的振荡摇床中培养，待培养液明显混浊后，移取培养液5mL至另一只加有5g琼胶和46mL海水的三角瓶中，重复上述培养过程，使得海水中能以琼胶为唯一碳源生长的微生物数量增加。将富集培养液用无菌水稀释后涂布于平板培养基上，培养皿于28℃的生化培养箱中培养至菌落数不再增加。观察平板上菌落形态，挑取周围形成明显凹陷的菌落至斜面培养基，并在培养皿底部作标记，滴加卢戈氏碘液染色。测量菌落周围透明圈直径与菌落直径并计算其比值(HC值)，将HC值较大的菌落所接种的斜面置于28℃培养2d，将进一步摇瓶复筛。

用接种环分别挑取初筛的各个菌株新鲜斜面菌苔2环，接入液体产酶培养基中，28℃、200r/min振荡条件下发酵培养2d。将发酵液于4500r/min下离心15min后取上清液测酶活力，筛选出产酶活力最高的菌株HS0326-601。

所述的平板培养基和斜面培养基的组成相同，组成如下：琼脂20g/L，NH₄Cl 1g/L，NaCl 25g/L，MgSO₄·7H₂O 5g/L，KCl 1g/L，FeSO₄·7H₂O0.02g/L，CaCl₂0.2g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，溶剂为水，pH 6.8～7.2。

所述的复筛培养基组成如下：琼脂2g/L，NaCl 25g/L，NH₄Cl 1g/L，MgSO₄·7H₂O 5g/L，KCl 1g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，CaCl₂0.2g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，溶剂为水，pH 6.8～7.2。

实施例2：高产琼胶酶菌株的诱变育种

对实施例1筛选得到的菌株HS0326-601用紫外线和γ射线照射诱变，筛选产琼胶酶活力有所提高的突变菌株。

紫外线照射诱变方法：将菌株HS0326-601斜面菌种活化后，挑取6环菌体到含50mL无菌人工海水的三角瓶中，室温振荡20～30min，制成菌悬液。在显微镜下用血球计数板对菌体计数，控制菌悬液细胞数为1×10⁸个/mL左右。在红光下，分别取2mL上述菌悬液、一枚无菌回形针至直径6cm的6只培养皿中，将培养皿置于磁力搅拌器上，在预热约20min的紫外灯下分别照射1～5min。取0.5mL上述照射处理后的菌液，作适当稀释后分别移取0.2mL涂布平板。以同样操作，做未经紫外线处理的菌液稀释涂平板作为对照，以计算致死率。用黑布包裹所有培养皿，28℃培养5d。选取致死率90％以上的培养皿，挑取其中的菌落，按实施例1所述的筛选方法，获得产琼胶酶活力有所提高的菌株HS5-19。

紫外灯的功率15W，照射距离为30cm。

γ射线照射诱变方法：按紫外线照射诱变中的方法制备菌株HS5-19的菌悬液。分别取5mL上述菌悬液装入4支无菌试管中，再分别用0Gy、200Gy、400Gy、600Gy剂量的γ射线对试管中的菌悬液进行辐射。各取0.5mL上述经照射后的菌液，作适当稀释后分别移取0.2mL涂布平板，28℃培养4～5d后按实施例1所述的筛选方法，获得产琼胶酶活力有所提高的菌株HS519-211。

γ射线的放射源为¹³⁷Cs，剂量率为281.2Gy/h，菌株离源中心距离为40cm，照射剂量为200～400Gy。

所述的平板培养基、斜面培养基和产酶培养基组成均与实施例1相同。

对诱变后获得的菌株HS519-211进行形态学特征、生理生化特征试验，以及16sRNA的PCR产物核苷酸序列比对，将其命名为玫瑰杆菌(Roseobacter sp.)zjut，提交中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCCNo：M 209292，保藏日期2009年12月3日。

实施例3：玫瑰杆菌zjut发酵制备琼胶酶的方法

以玫瑰杆菌zjut为菌种，经过培养基组成和发酵条件优化后，琼胶酶的制备方法如下：

(1)将冷冻干燥或试管斜面保藏的玫瑰杆菌zjut菌种接种于斜面培养基，斜面于28℃生化培养箱中培养36h。所述的斜面培养基组成为：琼脂20g/L，酵母浸出粉5g/L，NaCl 20g/L，MgSO₄·7H₂O 5g/L；KCl1g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，CaCl₂0.2g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，溶剂为水，pH 7.0。

(2)用接种环挑去步骤(1)活化培养后玫瑰杆菌zjut菌体至液体种子培养基中，液体种子培养基于28℃、200r/min振荡条件下培养24h，得到种子液(稀释5倍OD₆₂₀＝0.882)；所述液体种子培养基组成为：琼脂2g/L，酵母浸出粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 20g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，溶剂为水，pH 7.2；

(3)步骤(2)种子液以9％的体积比接种量接至液体发酵培养基，30℃、250r/min振荡条件下培养45h，得到含琼胶酶的发酵液；所述液体发酵培养基组成为：琼胶2.5g/L，NaNO₃4g/L，NaCl 15g/L，NaH₂PO₄0.6g/L，MgSO₄·7H₂O 5g/L，KCl 1g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02g/L，CaCl₂0.2g/L，MnCl₂·4H₂O 0.15g/L，溶剂为水，pH 7.5。

(4)将步骤(3)的含琼胶酶发酵液于离心杯中，5000r/min、4℃条件下离心20min，倾倒出上层清液，弃去沉淀物，所得清液即为琼胶酶粗酶液，琼胶酶活力可达215.8U/mL。

实施例4：琼胶寡糖的制备

用pH＝7.0、浓度为0.2mol/L的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液配制3g/L的琼胶底物溶液(加热溶解)，250mL三角瓶中装40mL琼胶底物溶液，加入2mL实施例3琼胶酶粗酶液，三角瓶用保鲜膜封口后于45℃、200r/min振荡条件下酶解反应120min，可得未经分离纯化的琼胶寡糖。用3，5-二硝基水杨酸法测定，以葡萄糖为标准曲线，此条件下可产生还原糖的浓度达476.9mg/L。如按聚合度为2的琼胶寡糖计算，寡糖的得率可达80％以上。

SEQUENCE LISTING

<110>浙江工业大学

<120>玫瑰杆菌zjut及其在制备琼胶寡糖中的应用

<130>

<160>1

<170>Patentln version 3.4

<210>1

<211>1405

<212>DNA

<213>Roseobacter sp.

<400>1

agggggcggc agactacaca tgcaagtcga gcgagacctt cgggtctagc ggcggacggg 60

tgagtaacgc gtgggaacgt gcccttctct acggaatagt cccgggaaac tgggtttaat 120

accgtatacg cccttcgggg gaaagattta tcggagaagg atcggcccgc gttagattag 180

gtagttggtg gggtaatggc ctaccaagcc tacgatctat agctggtttg agaggatgat 240

cagccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatct 300

tagacaatgg gggcaaccct gatctagcca tgccgcgtga gtgatgaagg ccttagggtc 360

gtaaagctct ttcgctgggg aagataatga ctgtacccag taaagaaacc ccggctaact 420

ccgtgccagc agccgcggta atacggaggg ggttagcgtt gttcggaatt actgggcgta 480

aagcgcgcgt aggcggattg gaaagttggg ggtgaaatcc cggggctcaa cctcggaact 540

gcctccaaaa ctcccagtct tgagttcgag agaggtgagt ggaactccga gtgtagaggt 600

gaaattcgta gatattcgga agaacaccag tggcgaaggc ggctcactgg ctcgatactg 660

acgctgaggt gcgaaagtgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacaccg 720

taaacgatga atgccagtcg tcggcaagca tgcttgtcgg tgacacacct aacggattaa 780

gcattccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ttaaaactca aaggaattga cgggggcccg 840

cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg cagaacctta ccaacccttg 900

acatcctcgg accgccagag agatctggtt ttcacttcgg tgaccgagtg acaggtgctg 960

catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttcggttaa gtccggcaac gagcgcaacc 1020

cacatcttca gttgccagca gttcggctgg gcactctgga gaaactgccc gtgataagcg 1080

ggaggaaggt gtggatgacg tcaagtcctc atggccctta cgggttgggc tacacacgtg 1140

ctacaatggc agtgacaatg ggttaatccc aaaaaactgt ctcagttcgg attggggtct 1200

gcaactcgac cccatgaagt cggaatcgct agtaatcgcg taacagcatg acgcggtgaa 1260

tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcacaccatg ggagttggtt ctacccgacg 1320

acgctgcgct aaccttcggg gggcaggcgg ccacggtagg atcagcgact ggggtgaagt 1380

cgaaacaagg agcccaaagg cccca 1405

Claims

1.一株琼胶酶产生菌——玫瑰杆菌(Roseobacter sp.)zjut，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，430072，保藏编号：CCTCC No：M 209292，保藏日期2009年12月3日。

2.如权利要求1所述的玫瑰杆菌zjut，其特征在于：所述玫瑰杆菌zjut的菌落特征如下：涂布或划线接种于平板培养基上生长迅速，28℃培养48h后长出圆形、湿润、乳白色、直径约0.3～0.5cm的菌落，并且在固体平板培养基菌落处形成凹陷；所述玫瑰杆菌zjut的菌体特征如下：短杆菌，两端钝圆，大小为0.5～0.7μm×0.8～2.4μm；所述的玫瑰杆菌zjut的生理生化特性如下：革兰氏染色阴性；氧化酶、过氧化氢酶、D-核糖、蔗糖、柠檬酸盐和L-丝氨酸阳性；N-乙酰葡萄糖胺、丙二酸盐、乙酸盐、D-甘露醇、L-丙氨酸、D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、麦芽糖、丙酸盐、辛二酸盐、L-脯氨酸为阴性。

3.如权利要求1所述的玫瑰杆菌zjut，其特征在于所述玫瑰杆菌zjut的16s rRNA的部分核苷酸序列如下：AGGGGGCGGCAGACTACACATGCAAGTCGAGCGAGACCTTCGGGTCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACGTGCCCTTCTCTACGGAATAGTCCCGGGAAACTGGGTTTAATACCGTATACGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGAGAAGGATCGGCCCGCGTTAGATTAGGTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGCCTACGATCTATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTAGACAATGGGGGCAACCCTGATCTAGCCA