CN1252835A - 添加了来源于酵母的硒盐的食品以及来源于酵母的硒盐的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明解决了作为人类食品的必须成分的非毒性形式的硒的需要。本发明提供了新型的含有硒的干燥酵母产物,以及生产这种干燥酵母产物的方法。该方法使用了具有高的生物活性但具有低的毒性的硒。本发明也提供了含有这种新的含有硒的干燥酵母产物的营养添加剂,和施用这些产物和添加物的方法,从而改善人类健康水平。

Description

添加了来源于酵母的硒盐的食品以及 来源于酵母的硒盐的制备方法
发明背景
本申请是1996年9月25日提交的序列号为No.08/719572的美国专利申请的部分继续申请，其全部内容引入本文作为参考。
1.发明所述领域
本发明涉及人类食品添加剂领域，更具体地说本发明涉及改良的含有来源于酵母的有机硒复合物的添加剂。
2.背景
适当量的重金属的生理同化对于人体健康来说是必须的。不能摄入和吸收需要量的这种金属可导致身体代谢过程的功能异常和各种疾病。
多种传统上的营养品，例如维生素和矿物质，可大量摄入而没有对健康产生负面的影响，对此美国食品和药品管理局(FDA)已经确定了每日推荐量。但是，对于某些营养品，例如一些金属营养品例如硒，高水平的摄入可对健康产生不利影响。为了得到所需要的这种组分生理上的好处，人们必须在对这种化合物最低量的需要防止由于过多摄入而产生毒性的需要之间进行平衡。因而，对于这些化合物，低剂量的摄入可带来显著的营养上的好处，而高剂量的摄入不具有营养上的好处，并且存在潜在的毒性。
现已经发现营养上有利的硒的每日摄入量很小。营养性的硒水品已由FDA确定(见21C.F.R.101.9(c)(8)(iv)，1994年1月)。FDA采用的参照每日摄入量(RDIs)硒为70毫克。据报道每日600毫克的硒剂量是安全的。[Ferris G.M.Lloyd，等，App.Clin.Biochem.，26：83-88(1989)]。在大约这个剂量时，在肝脏和红细胞中谷胱甘肽还原酶将硒代谷胱甘肽转化成硒化氢并最终被排泄出来。这样，在这一剂量下身体能够安全地代谢和排泄硒。
人类和动物可代谢无机和有机形式的硒，并可将非甲基化的硒转化成单或二或三甲基化的衍生物，其中单甲基化的衍生物毒性最强。[Bedwal，R.S.，等，Medical Hypotheses，41(2)：150-159(1993年8月)]。
硒的低水平摄入对健康具有几种潜在的好处。例如，已经了解硒酸钠(一种无机形式的硒)在低浓度时与钒共同作用，改善葡萄糖耐受和提高葡萄糖诱导的胰岛素释放的水平，而在高水平时这些效应是相反的。[Furnsinn，C.等，Inernational J.of Obesity and Related Metab.Dis.，19(7)：458-463(1995)]。
此外，硒被认为具有降低罗患某些癌症的风险，这主要是由于它具有强的抗氧化性能。[Schrauzer，G.Inorg.And Nutr.Aspects of Cancer，第330也(New York：Plenum Press(1978))]。自由基抗氧化剂“清除剂”例如硒被认为与氧化剂反应，从而使氧化剂不能参与氧化的低密度脂蛋白(O-LDL)的形成，这样降低了血管中动脉斑块的沉积的风险。动脉斑块是主要与氧化的低密度脂蛋白(O-LDL)形成的沉淀物质。动脉中以O-LDL形式的斑块的累集被认为是局部缺血心脏病的一个因素。自由基氧化剂，其中许多来自天然存在因素，例如日照、某些营养物质的代谢、锻炼，氧化低密度脂蛋白(LDL)成有害形式，O-LDL。因而，自由基“清除剂”例如硒被认为与氧化剂剂反应，从而使氧化剂不能参与氧化的低密度脂蛋白(O-LDL)的形成，这样降低了血管中动脉斑块的沉积的风险。相反，高密度脂蛋白(HDL)在身体中具有有益于健康的效应。HDL被认为是一种脂蛋白的更为可溶的形式，不知道其存在可显著促进动脉斑块的形成。由于硒具有降低身体中O-LDL水平的功能并且从而提高HDL的水平，因而也被认为能够降低心血管疾病发病的几率。
最近，一个对超过1300人的临床研究发现，每日补充硒的人将他们总的患癌症的风险降低近40％。[Terence Monmaney，Selenium May FightCancer，Study Shows，Los Angles Times，1996年12月25日，A1，A29]。此外，美国专利No.4599234公开了这样一个内容，即多种硒(不论是有机或无机形式)与β-胡萝卜素和一种羟基甲苯源的组合可显著降低饲喂致癌剂的小鼠的的死亡率，并且这些效应好于仅施用硒或β-胡萝卜素或羟基甲苯所观察到的效果。美国专利公开了一种具有抗肿瘤活性的基于硒的营养组合物，其中硒化合物是以一种新的硒形式使用的，这是通过将硒金属与桐油(9，11，13-十八烷基三烯酸)。
硒的酵母来源的形式已显示出是硒的最低毒性的形式，因而是一种优选的供人类使用的硒的来源。由酵母产生的硒是生物合成的，这是通过酵母将无机硒盐转化成有机形式的硒。这些生物合成的硒衍生物由于它们毒性较小以及与无机硒盐相比更容易被哺乳动物代谢，是较好的硒营养源。生产硒富集的食用酵母例如Saccharomuces cerevisiae或Candidautilis的方法已有报道。当干燥后饲喂大鼠时，这些硒富集的酵母可有效防止肝坏死。[Reed等，Yeast Tech.，AVI Publ.Co.，Conn.(1973)]。不幸的是，该方法产生的酵母具有低的硒含量以及相对高的无机硒的胞外浓度。美国专利No.4530846描述了一种生产硒富集酵母的方法，所产生的酵母具有约1000ppm的适度的胞内硒含量。该方法产生的酵母的培养使用一种涉及增量饲喂酵母培养物的方法。
现有技术中仍需要一种生产硒富集酵母的方法，该方法具有以下特点(1)硒富集酵母高的生长率；和(2)硒富集酵母具有高的胞内硒含量。
发明概述
本发明克服了现有技术的不足，提供了一种生产高活性营养硒的组合物的方法，其中，(1)本发明的组合物的硒源是天然形式的生物合成的硒；(2)该生物合成的硒可完全被人体代谢，并且基本上不含有有毒物质；和(3)该方法可有效地进行并满足对于商业生产很重要的一些要求。
因而，本发明的一个目的是提供一种制备具有高的硒活性和低的毒性的生物合成的硒酵母的方法。
本发明的另一个目的是提供一种用于生产具有高的营养价值和低的毒性的生物合成的硒的方法。
本发明的再一个目的是提供一种改良的合成形式的营养硒，它基本上类似于发现于富硒食品中的天然存在的硒复合物。
本发明的又一个目的是提供一种生产硒富集酵母的方法，其中，用于代谢硒底物的酵母源是酵母品系Saccharomyces boulardii sequelaPY31。
本发明的还一个目的是提供一种形式的硒，它基本上对人体不具有毒性。
本发明的又一个目的是提供施用酵母来源的硒的方法，以提高营养健康水平。
本发明的再一个目的是提供包含通过这些方法生产的硒富集酵母的营养添加剂。
本发明的还一个目的是提供一种形式的硒，它对人体基本上是无毒的，当被用作食品添加剂时，降低人体对慢性疾病的易感性。本发明详细描述
本发明涉及使用硒化合物培养酵母产生具有高的生物活性的干燥的硒富集酵母产物的方法，含有这种干燥酵母产物的营养添加剂，以及这种干燥酵母在人类食品添加剂中的应用。
用于制备硒富集酵母产物的方法包括如下步骤，该硒富集酵母产物具有高的胞内含量的有机结合的三价硒并且是以高生物活性和非毒性形式存在：
(1)制备酵母生长营养物的水混合物(含水培养基)；
(2)通过将硒盐溶解在温蒸馏水中然后将得到的硒溶液过滤制备硒盐在蒸馏水中的水溶液；
(3)将该硒溶液加入酵母生长营养物中并混合形成一种硒生长混合物；
(4)将该硒生长混合物加入，最好逐渐增加，活的酵母培养物中，形成一种硒酵母生长溶液，并在轻微摇动或搅拌下温浴；
(5)从硒酵母生长溶液中回收并浓缩酵母细胞；
(6)将回收的酵母细胞洗涤，除去胞外硒；和
(7)将洗涤的酵母细胞灭菌和/或干燥。可用于本发明的第一制备步骤的生长培养基包括25°Brix糖蜜[TCT，Gold Coast]，38°Brix糖蜜[TCT，Gold Coast]，葡萄糖培养基，和土豆蔗糖液体培养基。此外，可使用具有较高糖含量的Brix糖蜜，例如79°Brix[TCT，Gold Coast]，然后用蒸馏水稀释，形成一种低糖含量的Brix溶液。也可使用已知可支持来自Saccharomyces科的酵母生长的许多其它的生长培养基，这可容易地由本领域的普通技术人员进行选择。在一种优选的形式中，可使用一种不同的生长培养基的混合物。
此外，在酵母生长培养基中可任选地加入各种维生素和矿物质。这些维生素和矿物质选自现有技术中已知的维生素和矿物质，以协助酵母适当地进行生长，包括但不限于生物素，维生素B1，维生素B6，泛酸钙，肌醇，铜，硫酸铜，锌，硫酸锌，铁，和硫酸铁。
本发明的用于生产硒富集酵母的方法的第二个制备步骤涉及硒溶液的制备，这是通过将硒盐溶解在蒸馏水中并将得到的硒溶液过滤来进行的。硒可以是无定型的固体形式或有机硒化合物形式。在优选的形式中可使用醋酸纤维素滤膜[Corning Scientific Co.]。所得到的硒溶液具有约100ppm至40000ppm的硒。
第一个加入步骤涉及将硒溶液加入酵母生长营养物(水培养基)中，形成一种硒生长混合物。在硒溶液加入之后，将硒和培养基通过轻微振荡或搅拌约1至30分钟进行混合。
在第二个加入步骤中，将硒生长混合物加入活的酵母细胞中，得到硒酵母生长溶液，它具有约100ppm至约20000ppm的硒，优选约200ppm至约10000ppm，更优选约250ppm至约1500ppm。第二个加入步骤优选涉及将硒生长混合物以逐渐增加的量加入酵母培养物中。该第二个加入步骤优选在pH被控制在约4.2至约6.0，更优选在约4.5至约5.3的条件下进行。该第二个加入步骤优选在约20℃至约35℃，更优选在约28℃至约32℃的温度下进行。
在第二个加入步骤中使用的酵母最好为一种食用级或可食用的酵母，优选Saccharomyces boulardii sequela PY31。其它的可使用的酵母包括Saccharomyces Cerevisae或者Saccharomyces Torula。
如上所述，本发明也可使用一种新近分离和纯化的酵母品系，Saccharomyces boulardii sequela Py31。具体地说，Saccharomyces cerevisiae和Saccharomyces boulardii sequela属于同一个属，并且，Saccharomycesboulardii sequela被描述为Saccharomyces cerevisiae的同名词。[Barnett等，Yeasts：Characteristics and Identification，Cambridge University Press(1990)]。特别是，新酵母品系Saccharomyces boulardii sequela可从原始土壤材料中分离，培养，产生大量的酵母供研究开发使用或制成商品。这种新品系的酵母，Saccharomyces boulardii sequela PY31，已按照布达佩斯条约在国际保藏单位进行了保藏，保藏号为ATCC No.74366。该新的酵母品系描述于1996年9月25日提交的序列号为08/719572的共同待审申请中。
具体地说，分离该新酵母品系，Saccharomyces boulardii sequelaPY31，的方法包括：
(1)确定一个用于搜集土壤样品的位点，该位点邻近锗矿(即距锗矿100码的范围内)；
(2)从5厘米至20厘米的深度取出200克对土壤进行取样，并使用灭菌袋运输该样品；
(3)将活体材料生长在三个不同的支持所有的酵母生长，并选择性地杀灭细菌而不杀灭酵母的培养基上；
(4)将酵母从其它的活体物质中分离出来，然后重复这一过程，直至酵母可在没有细菌污染物的条件下生长；
(5)选择并重新化线酵母集落，并将这一过程重复三次；
(6)选择在富含锗的培养基中的生长最具活力的酵母集落；
(7)将选择出的每一个集落生长在麦芽提取物琼脂糖或葡萄糖琼脂糖上，选出最强壮的集落；和，
(8)将选择出的酵母在约30℃在1-2个斜面上生长约2天进行培养，然后将培养的酵母转移到约100mL的麦芽提取物液体培养基中，然后在约30℃温浴8-10小时，然后在该温浴的混合物中加入约500mL的麦芽提取物液体培养基，然后将得到的混合物在约30℃生长约6至约14小时。
本发明公开了一种这种新的酵母品系，Saccharomyces boulardiisequela PY31，按照本文描述的方法在制备硒富集酵母形式中的应用。
作为第二个加入步骤的一部分，将硒酵母生长溶液进行温浴，诱导酵母生长。该温浴可在振荡或在约200rpm搅拌下进行约5小时至约75小时，优选约15小时至约60小时，更优选约20小时。该温浴是在约25℃至约30℃，优选约30℃的温度下进行。
然后将酵母细胞通过离心硒酵母生长溶液并分离酵母细胞从硒酵母生长溶液中分离出来。在优选的方案中，该离心步骤可在约3900rpm下进行。
然后将分离的酵母细胞洗涤，除去胞外硒。该洗涤步骤可包括将分离的酵母细胞用水溶剂洗涤2至20次，该水溶剂为例如任选地含有螯合剂例如EDTA的缓冲水溶液。
最后，将酵母细胞灭菌和/或干燥，得到干燥的酵母产品。该灭菌步骤可在约30℃至约110℃，优选在约60℃的温度下进行。所得到的干燥酵母产品含有约300ppm至约6000ppm的胞内硒。
本发明也涉及该干燥的硒富集酵母产品作为食品添加剂的应用。为了制备用作食品添加剂的本发明的酵母组合物，将该干燥酵母产品作为活性组分按照常规组合技术与适当的载体进行亲密混合。根据施用途径例如口腔，舌下，鼻腔，或肠道外所需的制品形态，该载体可以是各种形式的。
在制备用于口服形式的组合物时，可使用任何一种通常的药物介质。对于口服液体制剂来说(例如悬浮液，酏剂，和溶液)，可使用含有例如水，油，醇类，调味剂，防腐剂，增色剂等的介质。可使用例如淀粉，糖，稀释剂，造粒剂，润滑剂，粘结剂，分散剂等的载体制备口服固体(例如，粉末，胶囊，丸剂和片剂)。也可使用缓释形式。由于便于施用，片剂，丸剂，和胶囊代表了优选的口服剂单元形式，在这种情况下可明显地使用固体药物载体。如果需要，片剂可通过标准技术进行糖包衣或肠包衣。
对于肠道外施用的产品，载体通常包括无菌水，虽然也可包括其它的组分，例如，用于协助溶解或用于贮存目的的组分。也可制备用于注射的悬浮液，在这种情况下可使用适当的液体载体，悬浮剂，佐剂，等。
本发明的组合物当肠道外以约1毫克干燥酵母/剂量(每约75公斤体重1剂量)至约200毫克/剂量的组合物施用时是有效的。优选量为约10毫克/剂量至约50毫克/剂量，更优选为约20毫克/剂量。这一剂量的组合物换算成硒的量为约1μg/剂量至约200μg/剂量，优选硒的量为约10μg/剂量至约50μg/剂量，更优选硒的量为约20μg/剂量。当口服施用时，本发明的组合物以与肠道外施用大约相同的量施用通常是有效的。在这一活性水平，该组合物特别适于被制成片剂用于口服施用。对于人类来说，上述剂量范围可在不同的期间施用，例如，每日施用至每周至少施用5次。但是，施用程式最终依赖于特定使用者的需要。对于人类来说，优选的施用程式为每天1-2次。
下述实施例仅是为了说明的目的，不以任何方式限定本发明的范围。实施例1
生长培养基的制备如下所述。将来自TCT，Gold Coast的79°Brix糖蜜(1000克)用蒸馏水稀释至1L，得到32°Brix溶液。然后，加入4.12克的KCl，然后是4.12克的MgSO4.7H2O，下面是44.4克的NH4HPO4，并将得到的混合物搅拌均匀。向该混合物中加入足量的水，使终体积为2L，从而成为32°Brix糖蜜。将该混合物通过使用Brix折射计(Cole-Palmer Instrument Co.，RH13-32ATC)测定其糖含量，用HCl或者NaOH将终pH调整至5.0。然后将该溶液在105℃高压灭菌15分钟。
硒酸钠的储备溶液的制备如下所述。在常温下向300mL的蒸馏水中加入9.0克的硒酸钠，并将得到的混合物在常温下保持1小时，然后通过醋酸纤维素膜过滤[Corning Scientific Co]。
硒生长混合物是通过将60mL的储备硒溶液加入1300mL的32°Brix糖蜜混合物(pH5.07)和3140mL的水而制备的。
酵母培养物的制备如下所述。将一个斜面的酵母在30℃温浴两天，然后在30℃，在200mL的麦芽提取物中，在200rpm下振荡生长8小时，然后向其中加入300mL的麦芽提取物，并将得到的混合物在30℃在振荡条件下过夜温浴。
酵母的培养如下所述。将500mL的Saccharomyces boulardii sequelaPY31溶液溶解在500mL的蒸馏水中，并在500rpm在一个7L的发酵装置中[Bioflow 2000，New Brunswick]搅拌。在该酵母培养物中在气流为约2至约5L/分钟并在约6小时的期间内在约30℃加入4500mL的硒生长混合物。将得到的悬浮液再搅拌15小时。
然后将得到的硒酵母生长溶液在3900rpm离心10分钟，将得到的酵母膏(分离的酵母细胞)用总体积为8L的水洗涤5次。
将得到的酵母细胞在低于80℃的温度下干燥，直至达到水分含量为2-3％。使用原子吸收技术测定酵母的硒含量，结果为酵母团具有1839ppm的硒。实施例2
重复实施例1所述的方法，结果为酵母团中硒的终浓度为1849ppm。实施例3
酵母生长营养物的制备如下所述。将来自TCT，Gold Coast的25°Brix糖蜜(670克)用1L蒸馏水稀释，然后，加入2.72克的KCl，然后是2.72克的MgSO4.7H2O，下面是29.28克的NH4HPO4，然后向该混合物中加入足量的水，使终体积为2L，并将得到的混合物在常温下搅拌直至均匀。将该混合物通过使用Brix折射计(Cole-Palmer Instrument Co.，RH13-32ATC)测定其糖含量，将终pH调整至5.0。然后将该溶液在105℃高压灭菌15分钟。
硒酸钠的储备溶液(3％)的制备如下所述。在常温下向300mL的蒸馏水中加入9.0克的硒酸钠，并将得到的混合物在常温下搅拌1小时。将得到的硒溶液通过醋酸纤维素膜过滤[Corning Scientific Co]。
酵母培养物的制备如下所述。将一个斜面的酵母在30℃温浴两天，然后在30℃，在200mL的麦芽提取物中，在200rpm下振荡生长8小时，然后向其中加入300mL的麦芽提取物，并将得到的混合物在30℃在振荡条件下过夜温浴。
酵母生长混合物是通过将13.2L的硒溶液(3％)加入3989mL的25°Brix糖蜜和247mL水中，然后搅拌或振荡至均匀。
酵母的培养如下所述。在含有70mL搅拌的(500rpm)Saccharomycesboulardii sequela PY31的酵母培养物的一个7L的发酵装置中[Bioflow2000，New Brunswick]，在气流为约2至约5L/分钟并在约8小时的期间内在30℃加入2L的酵母生长营养物混合物。在酵母生长营养物混合物加入之后，将该混合物在约500rpm再搅拌5小时。然后，加入3989mL的25°Brix糖蜜生长营养物和247mL的水，并将得到的硒酵母生长溶液在200ppm在30℃振荡24小时。
将得到的硒酵母生长溶液在3900rpm离心10分钟，除去上清液，然后将酵母细胞用100mL的EDTA(pH＝7.8)洗涤一次，用100mL的0.01MNa2HPO4缓冲溶液洗涤一次，和用100mL的蒸馏水洗涤5次。
将得到的酵母膏(分离的酵母细胞)在真空中干燥，然后使用原子吸收技术测定酵母的硒含量，结果为酵母团具有4857ppm的硒。实施例4
重复实施例3所述的方法，结果为得到的最终干燥的酵母团中硒的浓度为4945ppm。实施例5
20％的葡萄糖培养基是通过将400克的葡萄糖在搅拌下加入2L的蒸馏水，随后加入43克的尿素，20克的Na2HPO4，7.6克的MgSO4.7H2O，4.4克的KCl，50克的柠檬酸钠，和10克的酵母提取物[DIFCO，Bacto]中制备的。将得到的酵母生长营养物混合，然后在10psi下高压灭菌15分钟。
维生素混合物的制备如下：将4mg固体生物素，8mg维生素B1，200mg维生素B6，100mg泛酸钙，和2克的肌醇加入100mL蒸馏水中，将得到的溶液搅拌均匀并通过一个25微米的醋酸纤维素滤膜(Watman)过滤。
矿物质溶液的制备如下：将0.5克的CuSO4.5H2O，8克的ZnSO4.7H2O，和3克的硫酸铁(Fe(SO4)2(NH4)2.6H2O)加入1L的蒸馏水中并搅拌均匀，然后在10psi下高压灭菌15分钟。
酵母生长营养混合物是通过将20mL的维生素溶液和2mL的矿物质溶液加入葡萄糖培养基中制备的。
酵母培养物的制备如下所述。将一个斜面的酵母在30℃温浴两天，然后在30℃，在200mL的麦芽提取物中，在200rpm下振荡生长8小时，然后向其中加入300mL的麦芽提取物，并将得到的混合物在30℃在振荡条件下过夜温浴。
硒富集酵母的培养是通过将50mL的3％硒酸那溶液(入以上实施例所述)加入2500mL的20％酵母生长营养物混合物中进行的。然后，将2L得到的混合物分离并在11小时的期间内在31℃缓慢加入500mL的Saccharomyces boulardii sequela PY31(ATCC No.74366)和2L蒸馏水的混合物中，该混合物已被混合均匀并已在10psi高压灭菌15分钟。然后将得到的硒酵母生长溶液在31℃再搅拌8小时。
如上文实施例1所述分离酵母，得到的酵母团含有684ppm的硒。
本发明的各种改变和变化包括在上述说明书中，并且对本领域普通技术人员来说是显而易见的。本发明覆盖干燥的酵母硒组合物和在后附的权利要求和它们的等同物的范围内为达到权利要求中所述的应用的使用方法的各种改变和变化。

Claims (16)

1.一种用于生产硒富集酵母产物的方法，包括以下步骤：
制备酵母生长营养物的混合物(含水培养基)；
通过将硒化合物溶解在蒸馏水中然后将得到的硒溶液过滤制备在蒸馏水中的硒溶液；
将该硒溶液加入酵母生长营养物中并混合形成一种硒生长混合物；
将该硒生长混合物加入活的酵母培养物中，形成一种硒酵母生长溶液，并在振荡下温浴；
从硒酵母生长溶液中回收并浓缩酵母细胞；
将回收的酵母细胞洗涤，除去胞外硒；和
将洗涤的酵母细胞干燥。
2.按照权利要求1所述的方法，其中，该酵母生长营养物选自Brix糖蜜，葡萄糖培养基，和土豆葡萄糖液体培养基。
3.按照权利要求1所述的方法，其中，第一个制备步骤包括使用不同的生长培养基的混合物制备酵母生长营养物的混合物。
4.按照权利要求1所述的方法，其中，第二个制备步骤包括在蒸馏水中溶解一种硒化合物，该硒化合物选自硒盐和有机硒化合物。
5.按照权利要求1所述的方法，其中，第二个制备步骤包括将约100ppm至约40000ppm的硒加入蒸馏水中并通过一种醋酸纤维素滤膜过滤。
6.按照权利要求1所述的方法，其中，第二个加入步骤包括以逐渐增加的方式将硒生长混合物加入活的酵母培养物。
7.按照权利要求1所述的方法，其中，第二个加入步骤中的酵母选自S.cerevisiae(Breweri s yeast)，S.Torula，S.uvarum，和Saccharomycesboulardii sequela PY31(ATCC No.74366)。
8.按照权利要求1所述的方法，其中，第二个加入步骤包括在约20℃至约30℃的轻微震荡。
9.按照权利要求1所述的方法，其中，第二个加入步骤包括温浴约5小时至约75小时。
10.按照权利要求1所述的方法，其中，回收和浓缩步骤包括离心。
11.按照权利要求1所述的方法，其中，洗涤步骤包括用缓冲水溶剂将分离的酵母细胞洗涤多次。
12.由权利要求1-11中任何一项所述的方法生产的硒酵母产物。
13.一种营养添加剂，包括与一种药物可接受的载体相混合的由权利要求1-11中任何一项所述的方法生产的硒酵母。
14.一种对人类食物添加营养物的方法，包括添加有效量的由权利要求1-11中任何一项所述的方法生产的硒酵母产物。
15.一种对人类食物添加营养物的方法，包括添加有效量的权利要求12的硒酵母产物。
16.一种对人类食物添加营养物的方法，包括添加有效量的权利要求13的营养添加剂。
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