TW521997B - Dietary supplementation with, and methods for preparation of yeast-derived selenium salts - Google Patents

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經濟部中央標準局員工消費合作社印^ 521997 A7 B7 五、發明説明（1 ) 本發明的背景 相關申請的前後參照 此申請案是美國專利申請序號08/719 ，572 (於1996年，9月25日提出）的部分連續申請案， 該申請案在此全部倂入做爲參考。 1 .本發明的領域 本發明關於人類飮食添加物的領域，特別是有關於含 有衍生自酵母之有機硒複合物的改良補充物。 2 ·背景· 適量之重金屬的生理同化作用對人體健康而言是必須 的。若是不能消化及吸收必須量的此類金屬可導致身體代 謝功能的不良作用，並導致不同的疾病和障礙。 美國食品藥物管理局（F DA )已對許多種傳統上的 營養素（如：維生素及礦物質）建立一套建立的每日攝取 量（RDA)，這些物質也許可大量攝取而不影響到身體 健康。然而，對於某些必須營養素（如：某些金屬營養素 ，如：硒）而言，若大量攝取消化則會有相反的健康走向 。爲了獲得此類組成物所提供之生理學上所需要的裨益， 必須先平衡對此類化合物之最低量需求，並且必須小心不 要過量攝取而達到毒性臨界點。所以，若攝取低量的這些 化合物，可提供重要的營養裨益，然而，當其量太高時， 可能無法得到營養利益並且存在潛在的毒性效果。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 1---.------•裝-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 d 521997 A7 B7 五、發明説明（2 ) 目前發現’對硒的每日劑量而言，其營養上的有利量 是很少的。營養上需要的硒量已由FDA (見1 9 9 4年 1 月，21C.F.R.101.9CC) (8) ( i v ))確立。FDA所採用的硒的每日攝取量參考値（ RD I s )爲7 0微克。而每日攝取6 0 0微克的硒仍是 安全的〔菲立斯G · Μ ·洛伊德等人著，應用臨床生化， 26:83—88(1989)〕，大約在此劑量時，谷 胱甘肽還原酶可在肝臟和紅血球處將硒谷胱甘肽轉換成硒 化氫，且其排泄量最大。因此，在此劑量時身體可以安全 地代謝並排泄硒。 人類和動物可以代謝無機和有機形式的硒，並且將非 甲基化的硒轉化成一或二或三甲基化的衍生物，其中以一 甲基化的衍生物最毒〔貝德瓦，R · S ·等人著，醫學假 說，41 (2) ·: 150-159 (1993 年 8 月）〕 〇 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 從攝取低量的硒可產生幾種潛在的健康裨益。例如， 已知：低濃度的硒化鈉（一種無機形式的硒）與釩共同作 用可改良對葡萄糖的耐受性並增加由葡萄糖所誘發的胰島 素釋出。然而，高濃度的硒化鈉會有相反的效果〔福辛， C ·等人著，肥胖及相關的代謝疾病的國際期刊，1 9 ( 7) ·· 458 〜463(1995)〕。 另外，一般相信：硒可降低某些癌症的危險，這主要 是因爲它可做爲一種強抗氧化劑〔梭惹，G ·癌症的無機 及營養觀點，ρ . 3 3 0 (紐約：普來能出版社（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） _ 5 · 521997 A7 B7 五、發明説明（3 ) 1 9 7 8 ))。一般相信，如硒類的自由基抗氧化劑 ''淸 道夫〃可與氧化劑作用，如此一來氧化劑就不能形成氧化 的低密度脂蛋白（〇 — LDL) ’因此’可降低血管中動 脈斑塊沈積的危險性。動脈斑塊主要是由氧化的低密度脂 蛋白（〇一 LDL)所形成的沈澱物質。已知：在動脈內 形成〇 - L D L形式的斑塊是造成局部心臟疾病的因素。 許多自由基氧化劑是來自自然發生的來源’如：太陽曝晒 、某些養份的代謝及運動，這些氧化劑會將低密度脂蛋白 (LDL )氧化成它的有毒形式。因此，一般相信，如硒 之類之類的自由基 '"淸道夫〃可與這些氧化劑反應’如此 它們才不會形成〇- LDL，因此’可降低動脈斑塊沈積 在血管的危險性。相對的，已知：高密度脂蛋白（H D L )對身體具有有利的健康效果。已知，H D L爲一種較易 溶解形式的脂蛋白，且它的存在並不會促成動脈斑塊的形 成。因爲硒有降低〇-L D L濃度的功能且因此可增加體 內H D L的濃度，所以它可降低心臟血管疾病的可能性。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 最近，在對超過1 3 0 0個人的臨床硏究中發現到那 些每日攝取硒的人可減低他們罹患癌症的危險率近4 0% 。〔泰倫斯蒙馬尼，硏究顯示：硒可以對抗癌，洛杉磯時 報，1996年12月25日A1 ，Α29處〕。另外， 美國專利號4，599，234提出硒類（不管是有機或 無機形式）及/3 -胡蘿蔔素及一種羥基甲苯來源的組合可 顯著降低那些被餵食以致癌素的老鼠的死亡率，且這些效 果較僅給予老鼠硒或羥基甲苯或Θ -胡蘿蔔素的效果要好 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） _ 6 - 521997 A7 B7 五、發明説明（4 ) 。美國專利號4，564，634中提出一種以硒爲基礎 的抗腫瘤營養組合，其中所使用的硒化合物爲一種由金屬 硒與、'唐〃油（Tung oil) (9，1 1，1 3 —十八三嫌酸 )反應所製備得到的新穎形式的硒。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 自酵母衍生出來的硒的形式顯示出爲最不具毒性的硒 形式，因此它爲一種供人類攝取的較佳來源的硒組成物。 由酵母製造的硒是經生物合成的，這是在酵母中經由合倂 作用將無機的硒鹽轉換成有機形式。這些經生物合成的硒 衍生物物爲較佳的硒營養來源，這是因爲它們較不具毒性 且在哺乳動物體中較其無機的相對部分容易代謝。用來製 造含硒量增加的食物酵母（如：釀酒酵母或假絲酵母）的 方法已有報告。在乾燥後並餵食予老鼠時，這些含硒增加 的酵母可有效地預防肝臟性肝硬化（利德等人著，酵母技 術，AVI出版公司，康乃狄克州（1 9 7 3 ))。不幸 地，此種方法所製出的酵母其硒含量很低且有相當高的細 胞外無機硒濃度。美國專利號4，530，846中說明 一種用來製造含硒量增加的酵母，此方法所產生的酵母其 細胞內硒含量約爲1 0 0 0 p p m。利用此方法製造的酵 母是藉著一種牽涉到增量餵養該酵母培養的步驟來進行培 育的。 在本領域中還需要一種製造含硒量增加之酵母的方法 以製造出：（1)高生長率的含硒量增加的酵母；及（2 )具有高細胞內硒含量的含硒量增加的酵母。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 521997 A7 _ B7 五、發明説明（5 ) 本發明的摘要 本發明藉著提供一種製造高活性營養硒組成物的方法 來克服先前技藝的缺點，此方法中（1 )本發明之組成物 的硒來源是一種經生物合成的硒的自然形式；（2)經生 物合成的硒全部由人類系統代謝並且實質上不具毒性物質 ;及（3)本方法可以有效地實行且達到商業製造上重要 的需求。 因此，本發明的目的是提供一種用來製造經生物合成 的硒-酵母的方法，此種經生物合成的硒-酵母具有高度 硒活性及低毒性。 本發明的進一步目的是提供一種製造具有高營養價値 及低毒性的經生物合成的硒的方法。 本發明的另一個目的是提供一種改良的營養硒的合成 形式，也就是實質上類似於在含硒豐富的食物中所發現的 天然產生的硒複合物。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事^再填寫本頁j 提供一種用來製造含硒量增加的酵母的方法也是本發 明的另一個目的，此方法中用來代謝硒受質的酵母來源是 酵母種、包拉迪酵母 p Y 31 " (Saccharomyces boulardii sequela PY3 1 ) 0 ‘本發明還有一個進一步的目的是提供一種硒類的形式 此形式的硒對人體絕對沒有毒性。 本發明還有另一個目的是提供一種方法此方法藉著給 予由酵母衍生的硒來增進優良營養的健康。 本發明的進一步目的是提供營養補充品’這些營養補 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） · 8 - 521997 A 7 — B7 五、發明説明（6 ) 充品中合倂了利用這些方法所製造的含硒量增加的酵母。 本發明另外還提供一種對人體絕對無毒性的形式的硒 ’當它做爲食物補充品時可降低人體對慢性疾病的感受性 〇 本發明的詳細敘述 本發明是關於下列幾點：一、利用硒化合物來培養酵 母’以產生具有高生物活性之含硒量增加的乾燥酵母產品 的方法，二、含有此種乾燥酵母產品的營養補充品，以及 5、利用這種乾燥酵母產品來補充人類飮食。 下述製備方法的步驟可用來製備含硒量增加的酵母製 品，此種製品具有高度細胞內含量的有機鍵結三價硒，而 此三價硒爲一種高度生物活性且無毒的形式： (1 )製備=種酵母生長營養素的水溶性混合物（水 溶性介質）； (2 )將硒鹽溶於溫的蒸餾水中，然後再將所產生的 硒溶液加以過濾以製備一種硒鹽水溶液； 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (3 )將硒水溶液加入酵母的生長營養素中並加以混 合，以形成一種硒生長混合物； (4 )將硒生長混合物加入活的酵母培養中（以增量 加入的方法較佳）以形成一種硒酵母生長溶液並一邊培養 一邊予以溫和搖動或攪拌； (5 )自硒酵母生長溶液中回收並濃縮該酵母細胞； (6 )沖淸該回收的酵母細胞以除去細胞外的硒；並 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -g - 521997 A7 B7 五、發明説明（7 ) 且 (7 )將淸洗好的酵母細胞進行高溫殺菌及/或將該 酵母加以乾燥。 * 本發明之第一項製備步驟中可以使用的生長介質包括 :2 5。白利（Brix)糖蜜（TCT，黃金海岸），38° 白利（Bdx )糖蜜〔TCT，黃金海岸〕，葡萄糖介質及馬 鈴薯右旋糖肉湯。另外，也可使用一種帶有較高之糖含量 的白利（Βπχ )糖蜜，如：7 9 °白利（Bnx ) 〔 T C Τ ， 黃金海岸〕，然後，以蒸餾水稀釋之，以形成一種低糖含 量的白利溶液。另外還有許多其它種生長介質可用來協助 酵母屬一族的酵母生長且這些介質可由內行人士很容易地 篩選出。在較佳的形式中 '可使用由不同之生長介質所組 成的混合物。 經濟部中央標準局員工消費合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 另外，可選擇性地將不同的維生素和礦物質加入該酵 母生長介質中。此類維生素和礦物質係選自本領域中已知 的種類來協助維持適當的酵母生長，這些種類包括，但不 侷限於：生物素，維生素B i，維生素Β 6，泛酸鈣、肌醇 、酮、硫酸酮、鋅、硫酸鋅、鐵及硫酸鐵。 在用來製造本發明之含硒量增加的酵母的方法中，其 第二步驟包括：將硒鹽溶於蒸餾水中以製備一種硒溶液並 將此硒溶液加以過濾。所使用的硒形式可爲一種無定形固 體或爲有機硒化合物。在較佳的形式中，所使用的硒可爲 亞硒酸鈉，所使用的過濾膜可爲一種醋酸，纖維素過濾膜 〔康寧科學公司〕。所產生的過濾好的硒溶液具有約 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） -1〇 - 521997 A7 B7 _ 五、發明説明（8 ) lOOppm至40000ppm之間的硒。 第一附加步驟則牽涉到將硒溶液加入酵母生長營養素 中（水溶性介質）以形成一種硒生長混合物。一旦將硒溶 液加入後，加入的硒和介質可藉著溫和搖動作用或攪拌來 加以混合，混合作用進行約1至3 0分鐘。 在第二附加步驟中，將硒生長混合物加入活酵母細胞 中以製成硒酵母生長溶液，其中的硒濃度約在1 0 〇 ppm至20000ppm之間，以約200ppm至 lOOOOppm較佳，最好的硒濃度是在25〇PPm 至1 5 0 0 p pm之間。第二附君步驟中以增量加入的方 法將硒生長混合物加入酵母培養中較佳。此第二附加步驟 以在一個p Η値控制在4 . 2至6 . 0間的環境下進行較 佳，且以4 · 5至5 · 3間更佳。此第二附加步驟以在約 2 0 °C至3 5 °C間的溫度下進行較佳，且以約2 8 °C至 3 2 °C間更合適。 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 在第二附加步驟中所使用的酵母以食物級或可食用酵 母較佳，且以 ''色拉迪酵母PY3 1〃爲最佳。可用的其 它酵母包括釀酒酵母或串珠酵母。 如上述，本發明也可使用一種新近分離出並經純化的 酵母種一''包拉迪酵母ΡΥ31〃 。特別是，釀酒酵母及 >包拉迪酵母"爲同屬，且 ''包拉迪酵母〃被描述爲釀酒 酵母的異名〔伯奈特等人著，酵母：特徵和鑑定，劍橋大 學出版社（ 1 9 9 0)〕。更特別的是，該新穎的酵母種 ''包拉迪酵母〃可直粗的土壤樣本中分離出，並經培養後 $紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) 糾_ "" 521997 A7 ____B7 五、發明説明（9 ) 產生足夠做發展硏究及製造商業產品的量。此新穎之酵母 種已根據布達佩斯條約而存放在國際貯藏室中被指定爲 AT C C第7 4 3 6 6號。此新穎之酵母種描述於 1 9 9 6年9月2 5日提出之共同申請案序列號0 8/ 7 1 9，5 7 2 中。 特別是，用來分離此新穎之酵母種一 v'包拉迪酵母 PY3 1〃的方法包含了 ： (1 )鑑定出一個離鍺礦，最近的區域（即：在鍺礦 之1 0 0碼的範圍內）以收集土壤樣品。 (2 )在深度5至2 0公分處移出約2 0 0克土壤來 做爲樣品，且將樣品置於一無菌袋中運送； (3) 在三種可提供所有酵母生長之不同介質中培養 該活的物質，而這三種培養用的介質會選擇性地殺死細菌 而不會殺死酵母； (4) 自其它活的物質中分離出酵母，然後，重覆此 方法直至可在不再有細菌污染的情況下繼續培養酵母； 經濟部中央標準局員工消費合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (5 )選出並在培養基上重新劃線培養該酵母克隆， 並重覆此方法三次； (6 )選出最有活力的酵母克隆，將它置於一含鍺量 豐富的介質中； (7)讓選出之各個克隆在麥芽萃取瓊脂上或右旋糖 瓊脂上生長，並選出看來最強壯的克隆；及； (8 )將選出之酵母在1 一 2根斜瓊脂上於3 0°C下 培養約2天，然後將1 0 〇毫升之麥芽萃取肉湯移轉至培 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -12 - 521997 A7 B7 五、發明説明（10) 養的酵母上並繼續在約3 0°C下培養8至1 0小時，再將 5 0 0毫升之麥芽萃取肉湯加入培養的混合物中且將所產 生的混合物在約3 0 °C下培養6至1 4小時。 在第二附加步驟中，硒酵母生長溶液經過溫育以誘發 酵母的生長。這段溫育期約爲5至7 5小時，可伴隨著約 2 0 〇 r pm的搖動或攪拌，溫育期以約1 5至6 0小時 較佳，且以約2 0小時最佳。此溫育溫度約在2 5 °C至 3 0 °C間，以約3 0 °C較佳。 然後，藉著將硒酵母生長溶液進行離心以自硒酵母生 長溶液中分離出酵母細胞。在較佳的形式中，離心步驟約 在3900rpm處進行。 然後，沖洗該分離出的酵母細胞，以移除細胞外的硒 。此沖洗步驟可以水溶性溶劑（如：隨意地含有如 E D T A之類的螫合劑的緩衍水溶液）沖洗該分離出的酵 母細胞2次至20次。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 最後，將該酵母細胞以低溫滅菌及/或乾燥後製成一 種乾燥的酵母產品。低溫滅菌步驟可在約3 0 °C和1 1 0 °C間進行，以6 0 °C較佳。所產生的乾燥酵母產品含有約 300ppm至6000ppm的細胞內硒。 本發明也關於使用該種乾燥的含硒量增加的酵母產品 來做爲飮食補充物。爲了製備用來做爲飮食補充物之本發 明的酵母組成物，該乾燥的酵母產品可根據傳統製做化合 物的技術與適當之載體合倂，來做爲緊密混合物中的活性 成分。此載體可根據所要製備之用來給予的形式（如：口 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 521997 A7 B7 _ 五、發明説明（11) 服，舌下，鼻腔或腸胃道）而有很多不同的種類。 在製備口服配方形式的組成物時，可使用任何平常的 藥學介質。在口服液製品方面（如：懸浮液、酏劑、及溶 液）可使用的介質有，例如：水、油類、醇類、調味劑、 防腐劑、調色劑及此類物。可用來製備口服固體物（如： 粉末、膠束、藥九、及錠片）的載體有··澱粉、糖類、稀 釋劑、顆粒化作用劑、潤滑劑、接合劑、分散劑及此類物 。也可使用控制釋放的形式，由於它們便於給予，因此， 在錠片、藥九、及膠束等代表方便的口服劑量單位形式中 很顯然地使用了藥學載體。如需要時，錠片可利用標準技 術做成有糖衣包膜或腸衣包膜的錠片。 在腸胃道外的製品方面，載體通常含有無菌水（雖然 也包括其它成分），如：增加溶解度或保存等目的用的無 菌水。也可製備成注射用懸浮液，在此種製品中可使用的 有適當的液體載體，懸浮劑、佐劑、及此類物。 經濟部中央標準局員工消費合作社印1Ϊ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 當經由腸胃道給予時，本發明組成物的有效量一般爲 約1毫克乾燥酵母/組成物劑量至2 0 0毫克乾燥酵母/ 組成物劑量（每7 5公斤體重使用1劑量）。較佳的量是 約1 0毫克乾燥酵母/組成物劑量至5 0毫克乾燥酵母/ 組成物劑量間，最佳的劑量約爲2 0毫克乾燥酵母/組成 物劑量。此組成物之劑量規定換算成硒量，則爲約1微克 /劑量至2 0 0微克/劑量的硒，以1 0微克/劑量至約 5 0微克/劑量較佳，最佳硒量爲2 0微克/劑量。當本 發明之組成物是經由口服給予時，其有效量一般約同於經 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -14 · 521997 A7 _一 _B7_ 五、發明説明（12) 腸胃道外給予之產品。在此濃度的組成物的活性特別適合 製成經由口服給予的錠片配方。對人類來說，上述劑量規 定範圍可在不同的給藥週期中給予，如：自每日給予至一 週至少給予五次。然而，最主要地是要根據使用者的特殊 需要來決定劑量控制。人類較適合的劑量控制爲每日1〜 2劑量。 下述實施例僅用來說明而非限制本發明的任一形式。 實施例1 依下述方法製備生長介質。將79°白利糖蜜 1 000克（來自TCT，黃金海岸）以蒸餾水稀釋成1 升’以產生一種3 2 °白利溶液。然後，將4 · 1 2克之 KC 1加入其中，再加入4 · 1 2克之MgS〇4 · 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 7H2 0及44 ·· 4克之ΝΗ4ΗΡ〇4，再將所產生的混 合物攪拌均勻。在此混合物中加入足夠的水使最後的體積 成爲2升，如此，可製得一種3 2 °白利糖蜜。利用白利 折射計〔卡爾一帕馬儀器公司，RH1 3 — 3 2ATC〕 來測試此混合物中的糖量，並以H C 1或N a Ο Η將最後 的PH値調至5 · 0，然後將此溶液在10 5 t下進行高 壓滅菌1 5分鐘。 依下述方法製備一種硒酸鈉貯藏溶液。在周圍溫度下 ’將9·〇克之硒酸鈉加入300毫升的蒸餾水中並將所 產生的溶液在周圍溫度下保持1小時，然後，經由醋酸纖 維素過濾膜〔康寧科學公司〕加以過濾。 -15- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 521997 A7 B7 五、發明説明（13) 將6 0毫升之貯藏硒溶液加入1 3 0 0毫升的3 2° 白利糖蜜混合物（p Η 5 · 0 7 )和3 1 4 0毫升的水中 以製成硒生長混合物。 依下述方法製備酵母培養。將一根钭瓊脂的酵母在 30 t：下溫育二天，然後，該酵母於30°下，在200 毫升的麥芽萃取物中生長，在2 0 0 r pm下，搖動8小 時後，再將3 0 0毫升之麥芽萃取物加入其中，接著，將 所產生的混合物在3 0°C，一邊搖動，一邊溫育一整晚。 依下述方法培養酵母。將5 0 0毫升之 ''色拉迪酵母 PY 3 1〃溶液溶於5 0 0毫升的蒸餾水中並將它置於一 個7升的發酵儀器中〔拜爾弗路2 0 0 0，新布朗斯維克 〕，於500rpm處加以攪拌。將4500毫升之硒生 長混合物加入酵母培養中，加入時周圍環境的空氣流速約 爲2至5升/分·，溫度爲3 0 t，加入時間約6小時。全 部加完後將所產生的懸浮液繼續攪拌1 5小時。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 然後，將所產生的硒酵母生長溶液在3 0 0 0 r pm 處’離心1 0分鐘，並以全部體積爲8升的水沖洗所產生 的酵母乳狀物（分離出的酵母細胞）五次。 將所產生的酵母細胞在低於8 0°C的環境下加以乾燥 直至水分含量爲2〜3 %。以原子吸收技術來測量該酵母 的硒含量，以產生含有硒1 8 3 9 p p m的酵母塊。 實施例2 重覆實施例1中所描述的方法以產生一酵母塊，其中 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） _ _ 521997 A7 ______Β7_ 五、發明説明（14) 所含有之硒量的最後濃度爲1 8 4 9 p pm。 實施例3 依下述方法製備酵母生長營養素。將25°白利糖蜜 (670克）〔TCT，黃金海岸〕以蒸餾水稀釋成1升 ’然後加入2·72克的KC1 ，接著再加入2·72克 的Mgs〇4. 7H2Q ，29 · 28 克的 ΝΗ4ΗΡ〇4 ’然後再加入足夠的水使最後體積爲2升，並將所產生的 Μ合物在周圍溫度下攪拌至均勻。以白利折射計〔卡爾帕 馬儀器公司，RH1 3_3 2ATC〕來測試糖含量，並 將最後的pH値調整爲5 · 0。將此溶液在10 5°C下高 壓滅菌1 5分鐘。 依下述方法製備硒酸鈉的貯藏溶液（3%)。在周圍 溫度下將9 . 0克之硒酸鈉加入3 0 0毫升的蒸餾水中並 將產生的混合物在周圍溫度下攪拌1小時，再將產生的硒 溶液經由醋酸纖維素過濾膜〔康寧科學公司〕加以過濾。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 依下述方法製備酵母培養。將一根斜瓊脂的酵母在 3 0°C下溫育2天，然後於3 0°C下，讓酵母在2 0 0毫 升的麥芽萃取物中生長並在2 0 0 r pm處搖動8小時， 接著，再將3 0 0毫升的麥芽萃取物加入其中，並將所產 生的混合物在3 0°C下一邊搖動，一邊溫育一整晚。 將13 · 2升之硒溶液（3%)加入3989毫升的 25°白利糖蜜和247毫升的水中以製備酵母生長混合 物並將此混合物搖動至均勻。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -17 - 521997 A7 B7 五、發明説明（15) 經由下述方法取得含硒量增加的酵母培養。在一個7 升的發酵儀器〔拜爾弗路（B1〇flow ) 2000，新布朗斯 維克〕（其中含有70毫升之經攪拌（500rpm)的 Sach、bonl、segu、P Y 3 1 酵母培養）中，於溫度 3 0 °C ，空氣流速約爲2至5 1 /分的環境下，將2升的酵母生 長營養素混合物一邊攪拌一邊加入該發酵儀器中，加入時 間超過8小時。在加完酵母生長營養素混合物後，將混合 物在約5 0 0 r p m處繼續攪拌5小時。然後，加入 3989毫升的25°白利糖蜜生長營養素和247毫升 的水，並將所產生的硒酵母生長溶液在2 0 0 P pm， 3 0 °C下搖動2 4小時。 將所產生的硒酵母生長溶液在3 9 0 0 r pm離心 1 0分鐘，移去上淸液後，將酵母細胞以1 0 0毫升的 EDTA (pH: 7 · 8)沖洗一次，以100毫升之 0 . 0 1 M Na2HP〇4緩衝液沖洗一次，以1〇〇毫 升之蒸餾水沖洗五次。 經濟部中央標率局員工消費合作社印^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將所產生的酵母乳狀物（分離出的酵母細胞）在真空 器中加以乾燥，然後以原子吸收技術測量酵母的硒含量以 產生含有4 8 5 7 p pm之硒的酵母塊。 實施例4 重複實施例3的方法以產生一乾燥的酵母塊，其中之 晒濃度爲4945ppm。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-18 521997 A7 B7 五、發明説明（16) 實施例5 將4 0 0克的葡萄糖一邊攪拌一邊加入2升的蒸餾水 中以製備一種2 0%的葡萄糖介質。然後再加入4 3克的 尿素，20克的Na2HP〇4，7 · 6克的MgS〇4 · 7H20，4 · 4克的KC 1 ，50克的檸檬酸鈉及10 克的酵母萃取物〔狄夫可，貝克多（DIFCO，Bacto)〕， 將所產生的酵母生長營養素加以混合，然後在1 〇 p s i 下將之高壓滅菌1 5分鐘。 以下述方法製備一種維生素混合物：將如下群體加入 1 0 0毫升的蒸餾水中：4毫克的固體生物素，8毫克的 維生素Bi，2 0 0毫克的維生素B6，1〇 〇毫克的泛酸 鈣’及2克的肌醇。然後，將所產生的溶液攪拌均勻並經 由一 2 5微米醋酸纖維素過濾膜〔華特曼（Watman )〕加 以過濾。 · 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以下述方法製備一種礦物質溶液：將〇·5克之 CuS〇4· 5H2 0 ，8 克之 ZnS〇4· 7H2〇，及 3 克硫酸鐵（Fe (S〇4) 2 (NH4) 2· 6H2 0)加 入1升的蒸餾水中並將之攪拌均勻，然後，在1 〇 p s i 下進行高壓滅菌1 5分鐘。 將2 0毫升之維生素溶液和2毫升之礦物質溶液加入 葡萄糖介質中以製備一種酵母生長營養素混合物。 以下述方法製備酵母培養。將一根斜瓊脂的酵母在 3 0°C下溫育二天，然後讓此酵母在3 0°C下於2 0 0毫 升的麥芽萃取物中生長。於2 〇 0 r pm處搖動8小時後 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）-19 - 521997 A7 B7 五、發明説明（17) ，再將3 0 0毫升的麥芽萃取物加入其中，而所產生的混 合物則於3 0°C下，一邊搖動一邊溫育一整晚。 含硒量增加的酵母培養可利用下法取得：將5 0毫升 的3 %硒酸鈉溶液（如上述實施例中所說明的）加入 2 5 0 0毫升的2 0%酵母生長營養混合物中。接著，在 3 1°C下，將2升所產生的混合物分離出來並在超過1 1 小時的期間慢慢加於一由5 0 0毫升的包拉迪酵母P Y 31 (ATCC第74，3 6 6號）和2升的蒸餾水所構 成的均勻混合物上，接著，將此混合物在1 0 p s i下高 壓滅菌1 5分鐘。然後，將所產生的硒酵母生長溶液繼續 攪拌8小時。 接著依上述實施例1中所說明的方法將酵母分離出來 ，以產生含6 8 4 p pm之硒的酵母塊。 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明的許多改良和變化都包含在上述經鑑定的說明 中並希望這些內容對內行人士而言是淺顯易懂的。本發明 也意圖涵蓋乾燥的酵母硒組成物的改良和變化在內，並且 也涵蓋一種利用它們的方法來實現它們在附屬的申請專利 範圍中所申請專利的用途，本發明還涵蓋了它們的相等物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） .2〇

Claims (1)

1. 521997 々、申請專利範園 — 附件1 a : 第87.1 023 63號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國91年11月29日修正 1 · 一種用來製備含硒量增加的酵母製品的方法，它 包含下列步驟： 製備一種酵母生長營養素的混合物，包括礦物質與多 種維生素； 製備一種溶於蒸餾水中的硒溶液，這是藉著將硒化合 物溶於蒸餾水中，並將所產生的硒溶液加以過濾而製得的 將該硒溶液加入該酵母生長營養素中並加以混合以形 成一種硒生長混合物； 將該硒生長混合物加入活的酵母培養物中以形成一種 硒酵母生長溶液並在震動下溫育； 自該硒酵母生長溶液中回收並濃縮酵母細胞； 以含有緩衝劑與整合劑之溶液沖洗回收的酵母細胞以 去除細胞外硒； 將沖洗過的酵母細胞加以乾燥以得到細胞內硒含量爲 2 0 0 〇至大約5 0〇0 p p m之乾燥酵母塊；以及 將乾燥過的酵母細胞與可接受的藥學載體混合。 2 .如申請專利範圍第1項的方法，其中該酵母生長 營養素爲糖蜜生長介質、葡萄糖介質、或馬鈴薯右旋糖肉 汁。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 521997 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範« (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 3 ·如申請專利範圍第1項的方法，其中該第一製備 步驟包含利用一種不同生長介質的混合物來製備酵母生長 營養素的混合物。 4 ·如申請專利範圍第1項的方法，其中該第二製備 步驟包括將硒酸鈉溶於蒸餾水中。 5 .如申請專利範圍第1項的方法，其中該第二製備 步驟包含將約1 0 0 P P m至約4 0 0 0 0 P p m的硒加 入蒸餾水中並經由醋酸纖維素過濾膜加以過濾。 6 .如申請專利範圍第1項的方法，其中該第二·添加 步驟包含將該硒生長混合物增量地加入該活酵母培養物中 〇 7 .如申請專利範圍第1項的方法，其中在該第二添 加步驟的酵母係包拉迪酵母PY3 1 (Saccharomyces bo ulardii sequela PY31) ( ATCC No.74,366 )。 8 .如申請專利範圍第1項的方法，其中該第二添加 步驟包含在約2 0 °C至約3 0 t：下的溫和搖動。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9 ·如申請專利範圍第1項的方法，其中該第二添加 步驟包括介於2 0小時至6 0小時的溫育。 1 0 _如申請專利範圍第1項的方法，其中該回收及 濃縮的步驟包括離心處理。 1 1 · 一種營養補充品，包含混合了藥學上可接受載 體之以申請專利範圍第1項至第1 0項中任一項方法所製 備的硒酵母。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -2 -