CN110317761A - 一种乳双歧杆菌及其应用 - Google Patents

一种乳双歧杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110317761A
CN110317761A CN201910664409.6A CN201910664409A CN110317761A CN 110317761 A CN110317761 A CN 110317761A CN 201910664409 A CN201910664409 A CN 201910664409A CN 110317761 A CN110317761 A CN 110317761A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bifidobacterium lactis
bifidobacterium
food
defecation
lactic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910664409.6A
Other languages
English (en)
Inventor
张伟
金庭飞
葛邵阳
余保宁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Yikewei Health Technology Co ltd
Original Assignee
Guangdong Yikewei Health Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Yikewei Health Technology Co ltd filed Critical Guangdong Yikewei Health Technology Co ltd
Priority to CN201910664409.6A priority Critical patent/CN110317761A/zh
Publication of CN110317761A publication Critical patent/CN110317761A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/745Bifidobacteria
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/10Laxatives
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51Bifidobacterium
    • A23V2400/531Lactis
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明涉及生物技术领域,公开了一种具有较强润肠通便能力的乳酸菌的分离、筛选及鉴定,具体是一种乳双歧杆菌及其应用。从广西巴马长寿村中长寿人群及其家族人群的粪便样品分离乳酸菌,在耐酸耐胆盐特性,葡萄糖产酸产气能力的综合比较基础上,筛选出一株乳酸菌,经生理生化试验及16S rDNA测序分析,将该菌株鉴定为乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium Lactobacillus Y6),其保藏编号为CGMCC NO.15026。通过动物实验显示,乳双歧杆菌Y6具有较强的润肠通便作用,在制备润肠通便的药物和/或保健食品和/或食品中的具有良好的应用,市场应用价值高。

Description

一种乳双歧杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域,更具体的,涉及一株乳双歧杆菌及其应用。
背景技术
伴随社会节奏的加快、饮食结构的改变,便秘的发生率呈逐渐上升趋势。慢性便秘是全球范围内常见的胃肠功能紊乱症状,并可能诱发其他疾病。而且,慢性便秘患病率呈逐年上升趋势,严重影响人们的生活质量。目前,相当一部分功能性便秘患者伴有结肠动力障碍,最常见的表现是因结肠动力减弱导致的结肠排空迟缓。由于肠内容物在结肠滞留时间过长,水分过度吸收,粪便干结,加重排便困难。
影响慢性便秘的因素很多,如年龄、性别、饮食习惯、生活方式,其中年龄是绕不开的话题。随着年龄的增长,肠道中有益菌数量逐渐减少,加之各项功能器官退化,老年人慢性便秘患病率高达50%,在养老院中慢性便秘患病率更高。然而,目前人群对慢性便秘的重视度不高,缺乏科学认识,同时滥用泻药,致使慢性便秘病反复迁延。
现有技术中,诸多品牌用到了“药食同源”的概念,将益生菌与多种药食同源食材混合制成具有润肠通便的特殊膳食,其中,益生菌为双歧杆菌、乳杆菌、嗜热链球菌等肠道益生菌菌株,而药食同源食材则大多为火麻仁、郁李仁、莱菔子、何首乌、番泻叶等中药药物。由于目前大多数中药药物药理性不明,因此该特殊膳食一般建议婴儿、老人、孕妇、哺乳期等人群慎用。
乳双歧杆菌是存在于人体肠道中的一种重要的有益菌群,对促进人体健康、改善免疫功能等具有重要意义。乳双歧杆菌在体内定殖后可产生有机酸促进肠壁蠕动,吸附更多水分,促进毒素、垃圾顺畅地排出体外;同时抑制腐败菌生长,减少体内腐败菌产生的胺酚、吲哚类代谢产物堆积和吸收,改善肠道环境。乳双歧杆菌的安全性比较高,生产成本相对较低,将其工业化应用和推广前景广阔。
发明内容
本发明目的旨在提供一株具有润肠通便的益生菌菌株及其应用。
本发明提供了一株乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium Lactobacillus Y6),该菌具有高效的润肠通便能力,其保藏号为:CGMCC NO.15206。
本发明经试验证明,该菌株具有润肠通便的能力,并耐人工胃液和胆盐。通过生理生化和16S rRNA序列对比分析,将该菌株鉴定为乳双歧杆菌。
本发明还提供了乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium Lactobacillus Y6)在制备具有润肠通便的药物和/或保健食品和/或食品中的应用。
优选地,在所述药物和/或保健食品和/或食品中含所述乳双歧杆菌的活菌体和/或死菌体作为活性成分。
进一步地,以每克或每毫升所述药物和/或保健食品和/或食品为基准,所述乳双歧杆菌含量为106-1011CFU/g或/ml,优选为 107-1010CFU/g或/ml。
生物保藏
本发明所采用的乳双歧杆菌Y6菌种保藏号为CGMCC NO.15206,已于2017年12月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮政编码:100101。
本发明的有益效果是:本发明的乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium LactobacillusY6)筛选于广西巴马长寿村长寿人群及其家族人群,具有较强的润肠通便的能力,并耐人工胃液及胆盐,将其用于制备润肠通便的药物、保健食品、食品,具有很好的前景。
具体实施例
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明,以下实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制,因此本发明要求保护的范围并不局限于所述。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。本发明所采用的各种材料、实际或用具如无特殊说明,均可以从市场中获得。
一方面,本发明提供了一株乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium LactobacillusY6),该菌具有较强的润肠通便能力。其中,该乳双歧杆菌的保藏编号为CGMCC NO.15206。
本发明的乳双歧杆菌分离自广西巴马县长寿人群及其家族人群粪便。
本发明提供的乳双歧杆菌经培养可得到大量乳双歧杆菌活菌体,培养方法无特别要求,菌株增殖即可,例如可按照107CFU/mL的接种量接种于双歧杆菌培养基中,于厌氧条件下,在25-45℃下培养5-72 小时后,得到培养液。所述双歧杆菌的培养基可以为本领域公知的各种适合双歧杆菌培养的培养基,例如MRS培养基(《乳酸菌——生物学基础及应用》,杨洁彬轻工业出版社1996年出版)。
本发明可继续分离上述培养液中的乳双歧杆菌活菌体,所述分离方法无特别限制,能从培养液中富集菌体即可,例如可以通过本领域公知的离心和/或过滤的方法实现。
第二方面,本发明提出了本发明菌株在制备润肠通便的药物和/ 或保健食品和/或食品中的应用。
本发明中,所述药物可以根据给药途径不同而制备成不同形式,例如,可制备成散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂等形式,所述药物中还可包括药学上可接受的佐剂。所述食品包括任意类型的食品,例如固体饮料、豆制品、果汁、乳制品、冰淇淋、糖果、饼干等。所述食品中还可含有常规的添加剂、营养强化剂、原辅料,例如香精香料、稳定剂、增稠剂、防腐剂、矿物质、维生素、麦芽糊精等。
根据本发明,在所述药物和/或保健食品和/或食品中含所述乳双歧杆菌的活菌体和/或死菌体作为活性成分。优选地,含所述乳双歧杆菌的活菌体或者活菌体和死菌体的混合菌体作为活性成分。当使用活菌体和死菌体的混合菌体作为活性成分时,活菌体的数量优选高于死菌体的数量。所述乳双歧杆菌的死菌体制备方法业内常规,例如,将上述培养后的乳双歧杆菌活菌体加热致死,或将其辐射致死。
根据本发明,将上述乳双歧杆菌添加到所述药物和/或保健食品和/或食品中,并对个体进行食用,即可实现本发明目的,起到润肠通便的作用。优选地,以每克或每毫升所述药物和/或保健食品和/或食品为基准,所述乳双歧杆菌含量为106-1011CFU/g或/ml,优选为 107-1010CFU/g或/ml。
以下的实施例将对本发明作进一步的说明,但并不因此限制本发明。
下述制备例、实施例和对比例中:
1.实验材料
1.1实验培养基
乳酸细菌培养基(MRS):蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2.0g、葡萄糖(C6H12O6·H2O) 20.0g、吐温80 1.0mL、乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5.0g、磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2.0g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58g、硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水1 000mL、调 pH至6.2-6.6,121℃灭菌15min,冷却备用。
1.2主要试剂及配置方法
复方地芬诺酯片,购于常州康普药业有限公司;阿拉伯树胶,购于广东汕头市西陇化工厂;活性碳粉,购于巩义市嵩山滤材活性碳厂;脱脂乳,购于广东燕塘乳业股份有限公司;无双歧杆菌小鼠饲料购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,饲喂前经辐射灭菌。
1.3主要试验仪器
高压灭菌锅,型号为GI54DWS,购于zealway公司;多功能生化培养箱,型号为ZSD-1160,购于TOKYO RIKAKIKAI CO.LTD;电热恒温鼓风干燥箱,型号为DHG-9076A,购于上海精宏实验设备有限公司;低温高速离心机,型号为3K30,购于德国Satorious公司;分析天平,型号为ACCULAB,购于德国Satorious公司。
(1)复方地芬诺酯混悬液(0.05g/100ml及0.025g/100ml)配制:复方地芬诺酯片,每片含复方地芬诺酯2.5mg,分别取20片、10片用研钵研碎呈粉末后加水至50ml,配制得到复方地芬诺酯混悬液A1 (0.05g/100ml)和复方地芬诺酯混悬液A2(0.025g/100ml),临用前配制。
(2)墨汁配制:准确称取阿拉伯树胶100g,加水800mL,煮沸至溶液透明,称取活性碳(粉状)50g加至上述溶液中煮沸3次,待溶液凉后加水定容到1000mL,于冰箱中4℃保存,用前摇匀。
1.4实验动物
健康的SPF级BALB/c小鼠128只,二月龄,雄性,18-22g,购于广东省实验动物中心。饲养于中国农业大学转基因生物使用安全监督检验测试中心SPF动物房中。
1.5实验菌株
受试菌株:乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium Lactobacillus Y6),本发明菌株,菌种保藏号为CGMCC NO.15206。代田乳酸菌LCS (Lactobacillus casei strain ShirotaLCS)来自养乐多公司,作为实验的阳性对照菌株。
制备例
(1)乳双歧杆菌Y6活菌体菌悬液的制备:将乳双歧杆菌Y6按照107CFU/ml的接种量分别接种于500ml的MRS液体培养基中, 37℃厌氧培养12h,4500r/min离心15min收集菌体,菌体沉淀重悬于质量分数10%的脱脂乳中,分别配制成2×106CFU/ml的低剂量菌悬液L1、2×108CFU/ml的中剂量菌悬液M1、2×1010CFU/ml的高剂量菌悬液H1。
(2)乳双歧杆菌Y6死菌体菌悬液的制备:将乳双歧杆菌Y6按照107CFU/ml的接种量接种于100ml的MRS液体培养基中,37℃培养12h,70℃灭活1小时,4500r/min离心15min收集菌体,菌体沉淀重悬于质量分数10%的脱脂乳中,配制成2×108CFU/ml的菌悬液M2。
(3)乳双歧杆菌Y6死活混合菌体菌悬液的制备:按照(1)和 (3)中的方法制备乳双歧杆菌Y6的活菌体菌悬液M1和死菌体菌悬液M2,按1:1的体积比配制成2×108CFU/ml的菌悬液M3。
(4)代田乳酸菌LCS活菌体菌悬液的制备:将代田乳酸菌LCS 按照107CFU/ml的接种量分别接种于500ml的MRS液体培养基中, 37℃厌氧培养12h,4500r/min离心15min收集菌体,菌体沉淀重悬于质量分数10%的脱脂乳中配置成2×108CFU/ml的对照菌悬液C1。
(5)实验小鼠按照每笼8只饲养,保持饲养动物房温度20±2℃,湿度40-50%,每天12h光照交替。自由摄入饲料,自由饮水,适应性饲养1周后,按照体重随机分为8组,每组16只,每组分为两笼。
实施例1用于说明乳双歧杆菌Y6的分离、筛选及鉴定方法
本研究采用传统涂布平板法从广西巴马长寿村长寿人群及其家族人群粪便中分离乳酸菌,进行体外试验筛选具有较强润肠通便特性的菌株,然后通过模拟人体胃肠道的环境来筛选具有耐酸、耐胆盐的菌株,并研究其抑菌性及耐药性,通过综合比较,获得益生性能最为优异的益生菌菌株。
1.菌株分离、筛选具体步骤如下:
(1)样品采集
采集广西巴马长寿村的长寿人群及其家族人群的粪便样品,加入 1ml灭菌液体石蜡油密封后,迅速置于冰盒内,收集采样管后置于 -18℃的采样箱内,带回实验室冻存(-80℃),用于样品中乳酸菌的分离。
(2)乳酸菌分离
将采集的样品经梯度稀释后,接种于MRS固体培养基中,37℃厌氧培养48h。随机挑取符合乳酸菌菌落形态特征的菌落,划线分离得到纯菌落。挑取各平板上的纯菌落于MRS液体培养基中,37℃厌氧培养24h后,4℃冰箱冷藏备用或冻干保藏。
(3)乳酸菌复筛
将步骤(2)得到的菌株进行耐酸耐胆盐试验以及葡萄糖发酵产酸产气试验。挑选耐酸耐胆盐能力强,同时产酸产气较多的菌株,得到最优势菌株Y6。
(4)乳酸菌生理生化鉴定试验
将菌株Y6进行革兰氏染色于显微镜下观察菌体形态。同时进行接触酶、运动性、硝酸盐还原性、过氧化氢酶等生理生化实验。
结果显示,菌株Y6为革兰氏阳性,过氧化氢酶、接触酶、运动性、硝酸盐还原均为阴性,不形成芽孢的菌株,初步判断菌株Y6为乳酸菌的菌株,在其培养液中加入甘油,使甘油的最终浓度为30% (V/V),冻存于-80℃备用。
(5)菌株16S rDNA测序鉴定
以菌株Y6基因组DNA为模板,采用通用的16S rDNA引物进行PCR扩增。电泳检测扩增产物后,送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行16S rDNA测序。
利用NCBI-BLAST对本发明菌株的16S rDNA序列与GenBank 中已收录序列进行同源性对比,本发明菌株的16S rDNA序列与乳双歧杆菌(Bifidobacterium Lactobacillus)序列相似性达99%以上。根据16S rDNA序列,本发明菌株被鉴定为乳双歧杆菌(Bifidobacterium Lactobacillus)。
下面结合动物实验对本发明菌株的润肠通便能力做进一步的研究,以说明本发明的有效性。
以下实施例和对比例中对实验动物的处理方式见表1
表1实施例和对比例中对实验动物的处理方式
实施例2-6用于说明本发明的乳双歧杆菌Y6的润肠通便作用
(1)取制备例(5)中的5组小鼠,分别灌服制备例中的菌悬液 L1(实施例2)、菌悬液M1(实施例2)、菌悬液H1(实施例2)、菌悬液M2(实施例2)、菌悬液M3(实施例2),灌胃量为0.1ml/kg/d 小鼠体重。每组中的其中一笼小鼠连续灌服7d,另一笼小鼠连续灌服14d。实验期间实验小鼠自由饮食,12小时灯照/黑暗循环。
(2)取步骤(1)中每组中连续灌服菌体7d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,之后分别给其灌服10mg/kg小鼠体重的复方地芬诺酯悬浮液A1,0.5小时后再分别灌服0.1ml/kg小鼠体重的墨汁,然后将每只实验动物进行单笼饲养,正常饮水进食。从灌胃墨汁开始,记录每只动物排首粒黑便的时间、5h内排黑便粒数、5h排便质量。将收集的粪便在105℃烘干至质量恒定,按式(1)计算粪便的含水率,结果见表2。
(3)取步骤(1)中每组中连续灌服菌体14d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,然后分别给其灌服5mg/kg小鼠体重的复方地芬诺酯悬浮液A2,0.5小时后再分别给其灌服0.1ml/kg小鼠体重的墨汁,25min后立即脱颈椎处死小鼠,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端自幽门、下端至回盲肠部的肠管,置于托盘上,轻轻将小肠拉成直线,定义肠管长度为“小肠总长度”,定义从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按式(2)计算墨汁推进率,结果见表3。
对比例1用于说明使用阳性对照菌株的润肠通便作用
(1)取制备例(5)中的1组小鼠,分别灌服制备例中的菌悬液C1作为对比例1,灌胃量为0.1ml/kg/d小鼠体重。其中一笼小鼠连续灌服7d,另一笼小鼠连续灌服14d。实验期间实验动物自由饮食,12 小时灯照/黑暗循环。
(2)取步骤(1)中连续灌服菌体7d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,分别给每只实验动物灌服10mg/kg小鼠体重的复方地芬诺酯悬浮液A1,0.5小时后均再分别给每只实验动物灌服 0.1ml/kg小鼠体重的墨汁,之后将每只实验动物进行单笼饲养,正常饮水进食。从灌胃墨汁开始,记录每只动物排首粒黑便的时间、5h 内排黑便粒数、5h排便质量。收集的粪便在105℃烘干至质量恒定,按式(1)计算粪便的含水率,结果见表2。
(3)取步骤(1)中连续灌服菌体14d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时后,分别给每只实验动物灌服10mg/kg小鼠体重的复方地芬诺酯悬浮液A2,0.5小时后均再分别给每只实验动物灌服 0.1ml/kg体重的墨汁,25min后立即脱颈椎处死小鼠,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端自幽门、下端至回盲肠部的肠管,置于托盘上,轻轻将小肠拉成直线,定义肠管长度为“小肠总长度”,定义从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按式(2)计算墨汁推进率,结果见表3。
对比例2用于说明便秘小鼠的排便状态
(1)取制备例(5)中的1组小鼠,分别灌服质量分数10%的脱脂乳,灌胃量为0.1ml/kg/d小鼠体重。其中一笼小鼠连续灌服7d,另一笼小鼠连续灌服14d。实验期间实验动物自由饮食,12小时灯照/ 黑暗循环。
(2)取步骤(1)中连续灌服菌体7d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,分别给实验动物灌服10mg/kg小鼠体重的复方地芬诺酯悬浮液A1,0.5小时后均再分别给每只实验动物灌服0.1ml/kg 小鼠体重的墨汁,之后将每只实验动物进行单笼饲养,正常饮水进食。从灌胃墨汁开始,记录每只动物排首粒黑便的时间、5h内排黑便粒数、5h排便质量。收集的粪便在105℃烘干至质量恒定,按式(1) 计算粪便的含水率,结果见表2。
(3)取步骤(1)中连续灌服菌体14d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,分别给实验动物灌服10mg/kg小鼠体重的复方地芬诺酯悬浮液A2,0.5小时后均再分别给每只实验动物灌服0.1ml/kg 体重的墨汁,25min后立即脱颈椎处死小鼠,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端自幽门、下端至回盲肠部的肠管,置于托盘上,轻轻将小肠拉成直线,定义肠管长度为“小肠总长度”,定义从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按式(2)计算墨汁推进率,结果见表3。
对比例3用于说明自然状态下小鼠的排便状态
(1)取制备例(5)中的1组小鼠,分别灌服质量分数10%的脱脂乳,灌胃量为0.1ml/kg/d小鼠体重。其中,每组中的其中一笼小鼠连续灌服7d,另一笼小鼠连续灌服14d。实验期间实验动物自由饮食, 12小时灯照/黑暗循环。
(2)取步骤(1)中连续灌服菌体7d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,分别给每只实验动物然灌服10mg/kg小鼠体重的蒸馏水,0.5小时后均再分别给每只实验动物灌服0.1ml/kg小鼠体重的墨汁,之后将每只实验动物进行单笼饲养,正常饮水进食。从灌胃墨汁开始,记录每只动物排首粒黑便的时间、5h内排黑便粒数、5h 排便质量。收集的粪便在105℃烘干至质量恒定,按式(1)计算粪便的含水率,结果见表2。
(3)取步骤(1)中连续灌服菌体14d的实验动物,对其进行禁食不禁水16小时,分别给每只实验动物然灌服10mg/kg小鼠体重的蒸馏水。0.5小时后均再分别给每只实验动物灌服0.1ml/kg体重的墨汁,25min后立即脱颈椎处死小鼠,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端自幽门、下端至回盲肠部的肠管,置于托盘上,轻轻将小肠拉成直线,定义肠管长度为“小肠总长度”,定义从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”。按式(2)计算墨汁推进率,结果见表3。
以本发明实施例2-6、对比例1-3的对实验动物的处理方式进行实验,除实验过程中动物的处理方式不同之外,其他的动物饲养条件,如温度、湿度、光照等均保持一致,所测量的实验数据如下:
表2乳双歧杆菌Y6对小鼠排便能力的影响
注:与对比例2比较,实施例2-6有显著差异性(P<0.05)
通过表2可看出,与对比例3(空白对照组)比较,对比例2(便秘模型组)中的小鼠首次排黑便时间延长了5倍,5h内排黑便颗粒数下降85.19%、5h排便质量降低89.32%,同时粪便含水率降低 19.50%,说明对比例2小鼠较空白对照组对比例3小鼠通便能力明显下降,证明便秘小鼠造模成功。
在灌胃乳双歧杆菌Y6的实施例2-6中,小鼠排首粒黑便时间均显著低于对比例2,5h排便质量、5h排便粒数和粪便含水率均显著高于对比例2,说明本发明中乳双歧杆菌Y6有通肠润便的作用。
其中,实施例2-4中,随着灌胃浓度增加,小鼠排首粒黑便时间减少,5h排便质量、5h排便粒数和粪便含水率增加,说明浓度越高通肠润便效果越好。
将灌服同一浓度乳双歧杆菌Y6的实施例3、实施例5和实施例 6进行对比,发现灌服活菌体的实施例3的通肠润便的效果最好,其次是灌服活菌和死菌混合菌悬液的实施例6,效果最次是的灌服死菌体菌悬液的实施例5。
最后,对比例1中的乳酸菌LCS为来源于养乐多公司的代田乳酸菌,是公认的均有通肠润便效果的益生菌。试验显示,实施例3与对比例1相比,其排首粒黑便时间降低了14.42%,5h排便质量、5h 排便粒数和粪便含水率分别提高了43.65%、68.24%、3.36%,说明同一浓度下本发明菌株乳双歧杆菌Y6的通肠润便效果优于乳酸菌 LCS,而对比例1中的乳酸菌LCS为来源于养乐多公司的代田乳酸菌,是公认的均有通肠润便效果的益生菌。
表3乳双歧杆菌Y6对小鼠墨汁推进率的影响
注:与对比例2比较,实施例2-6有显著差异性(P<0.05)
墨汁推进率可从侧面反映小鼠通便情况,墨汁推进率越高说明小鼠肠道通便情况越好。
通过表3可看出,对比例2(便秘模型组)的墨汁推进率较对比例3(空白对照组)降低了36.83%,即对比例3中小鼠的肠道通便情况好于对比例2,说明墨汁推进实验中小鼠便秘模型造模成功。
实施例2-6中小鼠的墨汁推进率均显著高于对比例2,说明本发明中灌胃乳双歧杆菌Y6具有一定的通便的作用。
其中,随着灌胃浓度增加,实施例2-4墨汁推进率相较于对比例 2分别提高了14.85%、42.08%、52.39%。说明,浓度越高,乳双歧杆菌的润肠通便效果越好。同时实施例3、实施例5和实施例6的墨汁推进率分别较对比例2的墨汁推进率提高了42.08%、35.57%、39.45%,说明了活菌体菌悬液的润肠通便效果优于活菌和死菌混合菌悬液,更优于死菌体菌悬液。
另外,对比例1中的乳酸菌LCS为来源于养乐多公司的代田乳酸菌,是公认的均有通肠润便效果的益生菌。然而,实施例3与对比例1相比,墨汁推进率提高了17.50%,说明同一浓度下的本发明菌株乳双歧杆菌Y6润肠通便效果远远优于代田乳酸菌。
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非是对本发明的实施例的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动,这里无需也无法对所有的实施例予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium Lactobacillus Y6),其保藏号是CGMCCNO.15026。
2.权利要求1所述的乳双歧杆菌Y6(Bifidobacterium Lactobacillus Y6)在制备润肠通便的药物和/或保健食品和/或食品中的应用。
3.权利要求2所述的应用,其特征在于,所述乳双歧杆菌为活菌体和/或死菌体。
4.权利要求3所述的应用,其特征在于,以每克或每毫升所述药物和/或保健食品和/或食品为基准,所述乳双歧杆菌含量为106-1011CFU/ml或106-1011CFU/g。
5.权利要求4所述的应用,其特征在于,以每克或每毫升所述药物和/或保健食品和/或食品为基准,所述乳双歧杆菌含量为107-1010CFU/ml或107-1010CFU/g。
CN201910664409.6A 2019-07-23 2019-07-23 一种乳双歧杆菌及其应用 Pending CN110317761A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910664409.6A CN110317761A (zh) 2019-07-23 2019-07-23 一种乳双歧杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910664409.6A CN110317761A (zh) 2019-07-23 2019-07-23 一种乳双歧杆菌及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110317761A true CN110317761A (zh) 2019-10-11

Family

ID=68124249

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910664409.6A Pending CN110317761A (zh) 2019-07-23 2019-07-23 一种乳双歧杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110317761A (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110577919A (zh) * 2019-10-14 2019-12-17 汉臣氏(沈阳)儿童制品有限公司 一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种
CN111011493A (zh) * 2019-12-24 2020-04-17 广东燕塘乳业股份有限公司 一种富含动物双歧杆菌的凝固型发酵乳的制备方法及其发酵乳
CN113088465A (zh) * 2021-04-02 2021-07-09 湖北均瑶大健康饮品股份有限公司 一种乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis菌株J605及其应用
CN113892642A (zh) * 2021-08-25 2022-01-07 仙乐健康科技股份有限公司 一种润肠通便的益生菌组合物
CN114146101A (zh) * 2021-11-22 2022-03-08 微康益生菌(苏州)股份有限公司 动物双歧杆菌乳亚种BLa80在制备调节肠道动力的药物或食物中的应用
CN114504623A (zh) * 2022-04-19 2022-05-17 广东益可维生物技术有限公司 改善气虚型便秘的中药益生菌复合制品及其制备方法
CN115747121A (zh) * 2022-12-12 2023-03-07 威凯海思(山东)生物工程有限公司 一种乳双歧杆菌hsla-009、菌剂及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109394794A (zh) * 2018-06-29 2019-03-01 广东益可维健康科技有限公司 预防治疗妇科疾病的复合益生菌制剂及制备方法与应用
CN109528776A (zh) * 2018-06-08 2019-03-29 广东益可维健康科技有限公司 一种预防治疗口腔疾病的复合益生菌含片及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109528776A (zh) * 2018-06-08 2019-03-29 广东益可维健康科技有限公司 一种预防治疗口腔疾病的复合益生菌含片及其制备方法
CN109394794A (zh) * 2018-06-29 2019-03-01 广东益可维健康科技有限公司 预防治疗妇科疾病的复合益生菌制剂及制备方法与应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
白鸿主编: "《保健食品功效成分检测方法》", 31 May 2011, 中国中医药出版社 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110577919A (zh) * 2019-10-14 2019-12-17 汉臣氏(沈阳)儿童制品有限公司 一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种
CN110577919B (zh) * 2019-10-14 2022-12-23 江西仁仁健康产业有限公司 一种分离自婴儿粪便的耐热型动物双歧杆菌乳亚种
CN111011493A (zh) * 2019-12-24 2020-04-17 广东燕塘乳业股份有限公司 一种富含动物双歧杆菌的凝固型发酵乳的制备方法及其发酵乳
CN113088465A (zh) * 2021-04-02 2021-07-09 湖北均瑶大健康饮品股份有限公司 一种乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis菌株J605及其应用
CN113892642A (zh) * 2021-08-25 2022-01-07 仙乐健康科技股份有限公司 一种润肠通便的益生菌组合物
CN113892642B (zh) * 2021-08-25 2024-03-08 仙乐健康科技股份有限公司 一种润肠通便的益生菌组合物
CN114146101A (zh) * 2021-11-22 2022-03-08 微康益生菌(苏州)股份有限公司 动物双歧杆菌乳亚种BLa80在制备调节肠道动力的药物或食物中的应用
CN114504623A (zh) * 2022-04-19 2022-05-17 广东益可维生物技术有限公司 改善气虚型便秘的中药益生菌复合制品及其制备方法
CN115747121A (zh) * 2022-12-12 2023-03-07 威凯海思(山东)生物工程有限公司 一种乳双歧杆菌hsla-009、菌剂及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110317761A (zh) 一种乳双歧杆菌及其应用
CN107893044B (zh) 一株长双歧杆菌及其应用
CN112175864B (zh) 动物双歧杆菌及其选育方法和应用
KR101095712B1 (ko) 점막 면역 부활 작용을 갖는 유산균
JP4623896B2 (ja) ヒトおよび動物に使用される細菌株、加工された植物抽出物およびプロバイオティック組成物
CN111826299B (zh) 一种润肠通便的乳双歧杆菌及其应用与制剂
WO2021098755A1 (zh) 乳双歧杆菌bl-99在抑制肠道炎症方面的新应用
CN114774313B (zh) 鼠李糖乳杆菌LRa05在制备缓解便秘制品或调解肠道菌群制品方面的用途
CN110893193B (zh) 乳双歧杆菌bl-99的新应用
CN110205270A (zh) 一种缓解养殖动物便秘的副干酪乳杆菌l9的应用
CN105685970A (zh) 一种全消化道改善的复合营养食品
CN105420150A (zh) 一种嗜酸乳杆菌及其应用
CN110643524A (zh) 一种具有胃肠道粘膜保护作用的复合益生菌制剂及其应用
CN105121627A (zh) 含有乳杆菌属菌的组合物
CN112218646A (zh) 一种组合物及其应用
CN114468306B (zh) 凝结芽孢杆菌bc99在制备缓解结肠炎制品或免疫调节制品方面的用途
CN110835615B (zh) 乳双歧杆菌gkk2的活性物质、含其的组合物及其促进长寿的用途
CN114259050A (zh) 一种改善肠道功能的饮品及其制备方法
CN106491657A (zh) 一种加强调节肠道菌群功能的保健食品及其制备方法
CN113862181A (zh) 一种具有肠道调节功能的乳双歧杆菌株rk-7782及其应用
CN107752015A (zh) 一种全消化道改善的复合营养食品
CN102919956A (zh) 调理人体消化系统的营养液及其制备方法
JP2007126365A (ja) ラクトバチルス・プランタラムの培養物を有効成分とする抗アレルギー剤
CN104031856B (zh) 干酪乳杆菌及其应用以及功能食品组合物及其制备方法
CN110892961B (zh) 一种含乳双歧杆菌bl-99的固体饮料及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191011