CN1237868C - 菹草胚培养方法 - Google Patents
菹草胚培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1237868C CN1237868C CNB2003101065594A CN200310106559A CN1237868C CN 1237868 C CN1237868 C CN 1237868C CN B2003101065594 A CNB2003101065594 A CN B2003101065594A CN 200310106559 A CN200310106559 A CN 200310106559A CN 1237868 C CN1237868 C CN 1237868C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- illumination
- callus
- day
- embryo
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 241000555922 Potamogeton crispus Species 0.000 title abstract description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 12
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims description 30
- 240000001085 Trapa natans Species 0.000 claims description 26
- 235000009165 saligot Nutrition 0.000 claims description 26
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 11
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 11
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 11
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 claims description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 8
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 abstract description 6
- 230000035784 germination Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 abstract 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 2
- 241000756999 Potamogetonaceae Species 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000012851 eutrophication Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 2
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- MUKYLHIZBOASDM-UHFFFAOYSA-N 2-[carbamimidoyl(methyl)amino]acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoic acid Chemical group NC(=N)N(C)CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O MUKYLHIZBOASDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 235000019784 crude fat Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
- Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
- Y02W10/30—Wastewater or sewage treatment systems using renewable energies
- Y02W10/37—Wastewater or sewage treatment systems using renewable energies using solar energy
Abstract
本发明属于植物组织培养技术领域。运用菹草胚培养技术和快繁技术，大规模生产菹草优质组培苗，以克服该植物种子在自然条件下极难萌发、石芽生长受季节限制且萌发率低，阻滞大规模繁殖推广的弊端，适应我国恢复水生植被、发展草食性鱼类或蟹类的养殖和净化水质，以及湖泊和池塘引种的迫切需要，从而恢复良好的水生生态环境，推动我国渔业的可持续发展。
Description
一、技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域。
二、背景技术
我国水域生态系统的污染严重，水环境质量的下降对水生生物资源造成了严重破坏，要恢复水生生态系统的平衡，净化水质，促进渔业的发展，引种水体净化植物，具有重要意义。
菹草(Potamogeton crispus L.)为眼子菜科(Potamogetonaceae)多年生沉水草本植物，其营养价值和经济价值较大。菹草对水域富营养化有较强的适应能力，在受生活污水较严重污染的水体中亦能茂密生长，具有净化水体的作用，是冬季至初夏期间净化水质的主要水生植物。但由于种子在自然条件下极难萌发、石芽生长受季节限制且萌发率低，难以大规模繁殖推广。
目前国内外尚无菹草组织培养技术研究的相关报道。
三、发明内容
本发明的目的是：发明一种大规模生产菹草优质组培苗的技术，以克服该植物种子在自然条件下极难萌发、石芽生长受季节限制且萌发率低，阻滞大规模繁殖推广的弊端，适应我国恢复水生植被、发展草食性鱼类或蟹类的养殖和净化水质，湖泊和池塘引种的迫切需要，推动我国渔业的可持续发展。
本发明的技术方案是：
利用菹草胚进行愈伤组织诱导培养，通过激素调控，可使其愈伤组织诱导频率提高至60％以上。
愈伤组织的继代培养是决定其能否顺利进入分化的关键。通过调整改善光照、激素条件、琼脂类别、氮源和有机化合物浓度，在遏止愈伤组织的褐化和污染方面取得了成功，促使其继代增殖的正常进行，从而获得胚性愈伤组织。
本发明建立了菹草优质胚性细胞系，从胚性愈伤组织转入分化，植株再生频率为90％。
在以上研究的基础上，本项发明建立了菹草胚培养再生苗的繁殖方法如下：
(1)在添加2，4-D和IAA激素条件下由菹草外植体胚诱导愈伤组织；
(2)在添加2，4-D、NAA和BA激素条件下，进行愈伤组织的继代培养；
(3)在添加BA激素条件下，诱导培养再生植株；
(4)在添加IBA和NAA激素条件下，培养出完整的生根的再生植株；
该繁殖方法性能稳定，试验重复性好，试管再生苗分化、丛生性状良好。
各培养阶段的培养基配方(激素配比)如下表：
菹草胚培养各阶段的培养基配方
| 组培阶段 | 培养基组成成分 |
| 愈伤组织诱导 | 2，4-D 0.5mg/L，IAA 1.0mg/L |
| 愈伤组织继代 | 2，4-D 0.3mg/L，NAA0.5mg/L，BA 0.5mg/L |
| 植株再生 | BA 1.0mg/L |
| 植株生根 | NAA 0.2mg/L，IBA0.1mg/L |
在试管苗生产过程中，各个培养阶段的基本培养基均为MS大量元素、微量元素、B5维生素、蔗糖3％、Gelrite或Phytagel 0.2％。
采用这一技术体系，以胚为外植体，愈伤组织诱导率在60％以上；愈伤组织继代培养增殖周期为20d；愈伤组织再生植株的频率达90％；试管苗的生根率达90％以上。
通过体细胞胚的诱导培养研究，大规模生产菹草的试管苗，并用组织培养等技术手段改良菹草的农艺品质，以利于推广开发。如有足够投资，用此技术方案，可年生产菹草试管苗100万株以上。菹草经济价值较大，首先因其草质嫩脆而为草食性鱼类的良好饵料，石芽含有丰富的核黄素有助于蛋黄质量的提高而作为鸭等禽类的饲料，菹草丛生之处是蟹类的良好栖息地和脱壳期与蟹殖期的隐蔽场所和上等农田绿肥；其次是具一定的营养价值：物质含量中粗蛋白质占26.72％，粗脂肪占5.48％，粗纤维占15.78％，无氮浸出物占35.67％。更重要的是菹草对水域富营养化有较强的适应能力，在受生活污水较严重污染的水体中亦能茂密生长，具有净化水体的作用，是冬季至初夏期间净化水质的主要水生植物。兼有优良饲料、恢复水生植被和净化水体的特点，使之在湖泊与池塘发展可持续的渔业系统的需求方面将有所作为。
四、具体实施方式
1.建立无菌体系
将菹草种子用自来水洗净后，在70％乙醇中浸泡30s，用0.1％HgCl2水溶液，含少量吐温80，灭菌9min，再用无菌蒸馏水洗涤5次。将灭菌后的种子接种到附加3％蔗糖的不加外源激素的MS培养基上，在温度为25±2℃和光强为2000lx，每日光照12h的条件下建立无菌体系。
2.菹草胚培养方法的实施方式
(1)愈伤组织诱导及继代培养
在超净工作台中将无菌菹草种子进行胚剥离，接至2，4-D0.5mg/L，IAA 1.0mg/L培养基上诱导愈伤组织。温度为25±2℃、光强为800lx、每日光照12h条件下培养。利用菹草胚进行愈伤组织诱导培养，通过激素调控，可使其愈伤组织诱导频率提高至60％以上。
诱导出的愈伤组织转入含有2，4-D 0.3mg/L，NAA 0.5mg/L，BA 0.5mg/L的MS培养基上进行继代培养，每20d转代1次。
愈伤组织的继代培养是决定其能否顺利进入分化的关键。通过调整改善光照、激素条件、琼脂类别、氮源和有机化合物浓度，在遏止愈伤组织的褐化和污染方面取得了成功，促使其继代增殖的正常进行，从而获得胚性愈伤组织。
(2)苗的分化
将在弱光下诱导的愈伤组织转移到含BA 1.0mg/L的MS培养基上，在温度为25±2℃、光强为2000lx、每日光照12h条件下诱导苗的分化。本发明建立了菹草优质胚性细胞系，从胚性愈伤组织转入分化，植株再生频率为90％。
(3)根的分化
当分化苗长至5-7cm高时，将其从愈伤组织上取下来切成3cm左右并含有2-4片叶子的茎切段，按原来的向地方向插入到含NAA0.2mg/L和IBA0.1mg/L的MS培养基上，在温度为25±2℃和光强2000lx，每日光照12h的条件下诱导根的分化。
该繁殖方法性能稳定，试验重复性好，试管苗分化、丛生性状良好。采用这一技术体系，以胚为外植体，愈伤组织诱导率在60％以上；愈伤组织继代培养增殖周期为20d；愈伤组织再生植株的频率达90％；试管苗的生根率达90％以上。
Claims (1)
1、一种菹草胚培养繁殖方法，其特征是利用菹草胚进行愈伤组织诱导培养，培养出完整的菹草试管苗，其繁殖方法为：
(1)将菹草种子用自来水洗净后，在70％乙醇中浸泡30s，用含吐温80的0.1％HgCl2水溶液，灭菌9min，再用无菌蒸馏水洗涤5次，将灭菌后的种子接种到附加3％蔗糖的不加外源激素的MS培养基上，在温度为25±2℃和光强为2000lx，每日光照12h的条件下建立无菌体系；
(2)在添加0.5mg/L 2，4-D和1.0mg/L IAA的MS培养基，由菹草外植体胚诱导愈伤组织；温度为25±2℃、光强为800lx、每日光照12h条件下培养；
(3)在添加0.3mg/L 2，4-D、0.5mg/L NAA和0.5mg/L BA的MS培养基，进行愈伤组织的继代培养；温度为25±2℃、光强为800lx、每日光照12h；
(4)在添加1.0mg/L BA的MS培养基，诱导培养再生植株；温度为25±2℃、光强为2000lx、每日光照12h；
(5)在添加0.1mg/LIBA和0.2mg/L NAA的MS培养基，培养出完整的生根的再生植株；温度为25±2℃、光强2000lx、每日光照12h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2003101065594A CN1237868C (zh) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | 菹草胚培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNB2003101065594A CN1237868C (zh) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | 菹草胚培养方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200510065450.XA Division CN1303877C (zh) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | 菹草石芽组织培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1545861A CN1545861A (zh) | 2004-11-17 |
| CN1237868C true CN1237868C (zh) | 2006-01-25 |
Family
ID=34334239
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNB2003101065594A Expired - Fee Related CN1237868C (zh) | 2003-12-08 | 2003-12-08 | 菹草胚培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1237868C (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100462001C (zh) * | 2005-10-13 | 2009-02-18 | 华中师范大学 | 菹草种苗快速繁殖的方法 |
| CN102450149A (zh) * | 2010-11-01 | 2012-05-16 | 南京中科水治理工程有限公司 | 一种菹草扦插繁殖方法 |
| CN102090182B (zh) * | 2010-12-27 | 2012-05-23 | 中国科学院测量与地球物理研究所 | 一种菹草石芽的播种方法 |
| CN103734017B (zh) * | 2014-01-22 | 2016-04-20 | 云南大学 | 一种菹草的组织培养方法 |
| CN106954549B (zh) * | 2017-02-27 | 2019-05-28 | 水生藻安生物科技（武汉）有限公司 | 一种篦齿眼子菜组织培养与快速繁殖方法 |
-
2003
- 2003-12-08 CN CNB2003101065594A patent/CN1237868C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1545861A (zh) | 2004-11-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109479715B (zh) | 利用组培苗叶片快速繁育大花绣球无尽夏的方法 | |
| CN1109489C (zh) | 滇重楼种子发芽及其繁殖方法 | |
| CN112189566B (zh) | 一种砧木用樱桃苗的快速繁育方法 | |
| CN111149704A (zh) | 一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法 | |
| CN1237868C (zh) | 菹草胚培养方法 | |
| CN1869202A (zh) | 一种不结球白菜游离小孢子培养技术 | |
| CN103238519B (zh) | 一种柳枝稷组织培养快速育苗方法 | |
| CN1817106A (zh) | 北五味子体细胞胚发生和植株再生方法 | |
| CN1303877C (zh) | 菹草石芽组织培养方法 | |
| CN117204342A (zh) | 一种辣椒种子培养及种苗培育的快速扩繁方法 | |
| CN1586166A (zh) | 大花蕙兰优质种苗快速繁殖方法 | |
| CN104094848A (zh) | 油桐下胚轴愈伤组织诱导及高效再生植株的方法 | |
| CN1157107C (zh) | 金钗石斛的快速繁殖方法 | |
| CN115669518A (zh) | 一种用于水生态修复的优质水生植物的定向培育方法 | |
| CN115152629A (zh) | 一种树莓组织培养方法 | |
| CN1164166C (zh) | 树莓图拉明、秀美特和黑莓黑巴提的组培繁苗方法 | |
| CN112470926B (zh) | 一种凉粉草茎尖脱毒种苗的快速扩繁方法 | |
| CN100433971C (zh) | 苦草球茎离体培养再生方法 | |
| CN113016610A (zh) | 一种藜麦下胚轴离体再生方法 | |
| CN111316911A (zh) | 基于组织培养技术繁育草海桐种苗的方法 | |
| CN1285259C (zh) | 非洲蟛蜞菊的繁殖方法 | |
| CN1860860A (zh) | 象草体细胞培养高频率植株再生技术 | |
| CN112970584B (zh) | 一种高羊茅组培快繁方法 | |
| CN115836647B (zh) | 一种楸树幼胚无菌诱导植株再生的方法 | |
| CN104429963B (zh) | 一种马蔺游离花粉培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |