CN1213379A - 肽衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(Ⅰ)的药学上有用的肽衍生物:P－R1－R2－R3－R3,其中P,R1、R2、R3和R3具有本文所定义的各种含义;本发明也涉及所述肽衍生物的药学上可接受的盐和含有它们的药物组合物。这些新肽衍生物在治疗MHCⅡ类依赖性T－细胞介导的自身免疫或炎症性疾病中是有价值的,所说的疾病例如风湿性关节炎。本发明还涉及制造所述新肽衍生物的方法以及这些化合物在医疗上的用途。

Description

肽衍生物
本发明涉及某些新肽衍生物，这些新肽衍生物具有在用于治疗自身免疫病或病态中有用的药理学性质，所说的疾病如类风湿性关节炎和其它MHCⅡ类依赖性T-细胞介导的疾病。本发明也包括所说的新化合物的药物组合物、它们的制备方法、以及它们在治疗一种或多种前述疾病或病态上或者在产生用于这些医学治疗中的新的药物上的用途。
人免疫应答的刺激依赖于T细胞对蛋白质抗原的识别。然而，T细胞不能对抗原单独地作出反应仅当抗原与抗原传递细胞表面上的主要组织相容性复合物(MHC)分子复合时，触发，所说的细胞如B细胞，巨噬细胞或树状细胞。
MHCⅠ类分子激发T-杀伤细胞应答，这一应答导致携带抗原的细胞的破坏。MHCⅡ类分子激发T-辅助细胞应答，这一应答控制选择的B细胞的扩展和成熟(即产生抗原-特异性抗体)和巨噬细胞的活化。
对免疫系统关键性的要求是区别“自身”和”非自身”(即外源)抗原的能力。为了使免疫系统能够对侵入的外源病原体作出反应而保持耐受自身蛋白质，从而防止对正常组织的损害，这一区别能力是所要求的。当自身-耐受出现障碍，使免疫系统对自身组织发生反应时，就发生自身免疫病，所说的自身组织例如类风湿性关节炎中的关节。人们认为，保持所说的耐受并由此避免发生自身免疫病关键取决于MHC分子的功能。
许多自身免疫病与特定的MHC等位基因的遗传相关联的观察结果说明MHC分子在自身免疫病的发病机理中的关键作用。例如，多发性硬化与HLA-DR2的遗传相关联，胰岛素依赖性糖尿病与HLA-DR3和/或HLA-DR4相关联，桥本氏甲状腺炎与HLA-DR5相关联。具体地说，特别强的关联存在于发生慢性炎症性关节疾病类风湿性关节炎的素因和HLA-DR4Dw4和/或HLA-DR4wl4和/或HLA-DR1的遗传之间。人们认为，自身免疫病相关的MHC分子结合某些自身抗原，并将它们传递到T细胞，由此刺激自身免疫应答。以下肽可以特异性地抑制自身免疫应答：能够结合自身免疫相关MHC分子和/或阻止结合或转移已经结合的自身-抗原，和/或抑制T细胞活化(尤其是病原性T细胞(例如Th1细胞)的活性)，和/或提高保护性T细胞(例如Th2细胞)的活性的肽，或者以另一种作用机制与MHC分子相互作用，以阻止或改变经所说的MHC分子介导的自身免疫应答的刺激作用的肽。
这一类的药剂会对自身免疫病提供治疗，而避免对免疫系统的总的抑制，由此限制有害的副作用。所描述的这一类药剂会有超过疾病(如类风湿性关节炎)的现行治疗法的明显的优点。当代的实践是首先用症状缓解剂(如NSAIDs)治疗类风湿性关节炎，所说的缓解剂对疾病发展确实不具有任何有益的效果，并且经常与不希望的副作用相联系。更严重的疾病的治疗依赖于使用所谓的二线药剂。这些通常是一般的细胞毒性化合物，它们具有有限的功效，并且可以产生严重的毒性问题。因此，一种有合理基础的没有相关的非特异性细胞毒性的疾病缓和剂在类风湿性关节炎的治疗中将提供明显的益处。
国际专利申请出版物WO92/02543,WO93/05011和WO95/07707中公开了结合MHC分子并且抑制T-细胞活化的一些肽。
虽然已发现通过结合HLA-DR分子抑制HLA-DR限制的T细胞活化的大量肽，但仍然需要一些可替的化合物，这些化合物结合这些分子和/或阻止结合或转移已经结合的自身-抗原和/或抑制T细胞活化和/或提高保护性T细胞的活性，或者以另一种作用机制与MHC分子相互作用，以阻止或改变引起以上提及的疾病和病态的自身免疫应答的刺激作用。
我们已发现，本发明的肽衍生物(以下指出)惊人地具有这样的药理学上有用的性质，并且这是本发明的基础。
按照本发明的一个方面，本发明提供了一种式Ⅰ(在以下给出)的肽衍生物或其药学上可接受的盐其中P是疏水残基；R1是5个L-氨基酸的序列，R3是单个L-氨基酸；或者R1是3个L-氨基酸的序列，R3是3个L-氨基酸的序列；R2是式Ⅱ(在以下给出)或式Ⅲ(在以下给出)的基团，其中Ra和Rb分别选自氢和(1-4C)烷基，A是亚甲基(CH2)或氧；并且R4是OH、NH2或NRcRd，其中Rc选自(1-4C)烷基、2-氨基甲酰环戊基、2-吡啶甲基、4-氨基甲酰环己基、4-氨基甲酰环己甲基、3-氨基甲酰苯基、4-氨基甲酰苯基、4-(氨基甲酰甲基)苯基、4-(羧甲基)苯基、4-(甲氧羰基甲基)-苯基、2-吗啉代乙基和式-A1-G1的基团，其中A1是(3-7C)亚烷基或A1选自(1)式-A2-B1-的基团，其中A2是p-亚苯基或1,4-亚环己基，B1是(1-4C)亚烷基，或者A2是亚甲基，B1是p-亚苯基或1,4-亚环己基；和(2)式-A3-B3-C3-的基团，其中A3是亚甲基，B3是p-亚苯基或1,4-亚环己基，且C3是(1-3C)亚烷基；并且G1是式-N=C[N(Rp)2]2的基团，其中各个Rp分别选自氢、甲基、乙基和丙基；或者A1是式-A4-B4-的基团，其中A4是p-亚苯基，B4是-CH2-CO-，且G是2-吗啉代乙基或4-[2-(2-羟乙氧基)乙基]哌嗪-1-基；和Rd是氢或(1-4C)烷基；或者R4是1-哌嗪基、4-甲基-1-哌嗪基、4-脒基-1-哌嗪基、4-(2-(2-羟乙氧基)乙基)-1-哌嗪基、1-哌啶基或4-取代的-1-哌啶基，其中4-取代基选自羧基、氨基甲酰基、N-(2-氨基乙基)氨基甲酰基和N-(4-氨基丁基)氨基甲酰基；或者R4是1-6个氨基酸的序列或其酰胺。
要理解的是，R4的氨基酸可以分别具有D-或L-立体化学构型。此外，当R4被定义为羟基(OH)时，应理解为是R3的C端氨基酸的羟基。同样地，当R4被定义为NH2、NRcRd、哌嗪基、哌啶基等时，其意指R3的C端氨基酸羟基被这样一种基团取代。也要理解，当提到氨基酸时，其意指α-氨基酸。也要理解的是，当提到L-氨基酸时，其也包括象Gly、2,2-二乙基Gly、氮杂-丙氨酸和氮杂-甘氨酸在内的没有手性碳原子的一些氨基酸。还要理解的是，当碳数量允许时，如“烷基”一类的术语包括直链和支链异构体。相同的规定适用于其它基团。
本领域熟知，具有手性中心的化合物可以以外消旋体(或在具有一个以上手性中心时以非对映异构体的混合物)形式存在或以有旋光活性的对映体或非对映异构体形式存在。本领域也熟知，与外消旋或非对映体混合物相联系的特殊的生物活性可以大量地或单独地从单个有旋光活性的异构体产生。因此，可以理解，本发明涉及式(Ⅰ)的肽衍生物的任何形式，其具有上述药学上有用的性质。本领域熟知如何获得单一的有旋光活性的异构体，例如通过利用常规技术(如层析)从包含异构体的外消旋或非对映体混合物中分离，或者通过利用适当的有旋光活性的起始物质或中间体手性合成，正如本文所例举的。本领域也熟知如何测定这样的外消旋或非对映体混合物和单一的有旋光活性的异构体的药理学性质，例如利用本文所描述的测定法测定。因此本领域技术人员能够容易地获得具有本文提及的有益的药理学性质的式Ⅰ的肽衍生物的特定的异构体。
也要理解的是，本发明也包括具有本文提及的有益的药理学性质的式Ⅰ的肽衍生物的任何多态形式，任何互变异构体或任何溶剂化物，或它们的任何混合物。
包括R1和R3在内的α-氨基酸的合适的各个氨基酸包括，例如，由遗传密码编码的20种天然存在的氨基酸，特别是丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、赖氨酸(Lys)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、精氨酸(Arg)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)和脯氨酸(Pro)。氨基酸如肌氨酸(Sar)、3,3,3-三氟丙氨酸、2,2-二乙基甘氨酸、2,3-二氨基丙酸(Dap)、2,4-二氨基丁酸(Dab)、2-氨基丁酸(Abu)、高精氨酸、高苯基丙氨酸、反式-4-羟基脯氨酸(Hyp)。氮杂-丙氨酸[H2N-N(CH3)-COOH；Azala]、氮杂-甘氨酸[H2N-NH-COOH:Azgly]、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)、八氢吲哚-2-羧酸(Oic)、十氢异喹啉-3-羧酸(Dic)是也合适的(在提及Dic时，其意指这样的形式，其中在环的连接处两者具有R构型或两者具有S构型)。也可以利用相应的N2-甲基化的氨基酸，以及这样的相应的氨基酸，其中一个游离的侧链羧酸官能团是酯化的(例如，以(1-6C)烷基或苄基酯形式)，并且一个游离的侧链氨基是烷基化的(例如，甲基化的)、乙酰化的或被转化成氨基甲酸酯(例如，氨基甲酸烷基酯(例如甲酯或乙酯，苯酯或苄酯)。R1和R3的其它合适的氨基酸包括，例如，2-取代的甘氨酸，其中2-取代基是式-(CH2)sNH2的基团，其中s是1-3；或式-(CH2)pN(Re)3 +·X-的基团，其中p是2-4,X-是反离子(如乙酸根，三氟乙酸根，氢氧根或氯离子)；或式-(CH2)qN(Re)2的基团，其中q是0-4；或式-(CH2)rN=C[N(Re)2]2的基团，其中r是1-4，在这些基团中，最后3个基团的各Re分别选自氢和(1-4C)烷基(例如甲基或乙基)。
当R1是5个氨基酸的序列时，其特别重要的序列包括，例如其中第五个(从左向右阅读)氨基酸是Val或Thr的序列，和其中第四个和第五个氨基酸是Lys-Val,Arg-Val,Lys-Thr,Arg-Thr,Ala-Val或Ala-Thr的序列。
当R1是5个氨基酸的序列时，其特别的序列包括，例如Ala-Ala-Ala-Lys-Val、Ala-Lys-Ala-Ala-Val、Ala-Ala-Ala-Arg-Val、Ala-Arg-Ala-Ala-Val、Ala-Lys-Ala-Lys-Val、Ala-Arg-Ala-Arg-Val、Ala-Arg-Ala-Lys-Val、Ala-Lys-Ala-Arg-Val、Ile-Ala-Ala-Arg-Thr、Arg-Ala-Ala-Ala-Val、Arg-Ala-Ala-Ala-Thr、Ala-Ala-Ala-Arg-Thr、Ala-Arg-Ala-Arg-Thr、Ala-Ile-Ala-Arg-Val、Ala-Arg-Ala-His-Val、Ala-Arg-Ala-Ala-Thr、Ala-Ala-Asn-Arg-Val或X-Ala-Ala-Ala-Thr，其中X是-NH·CH[CH2NH·C(=NH)·NH2]·CO-(此后称为“Gap”)，或-NH·CH(CH2N=C[N(CH3)2]2)·CO-(此后称为“GapMe4”)，在这些基团中，Ala-Ala-Ala-Lys-Val、Arg-Ala-Ala-Ala-Val、Arg-Ala-Ala-Ala-Thr、Ala-Ala-Ala-Arg-Thr、Ala-Arg-Ala-Arg-Thr、Gap-Ala-Ala-Ala-Thr和GapMe4-Ala-Ala-Ala-Thr是优选的。Arg-Ala-Ala-Ala-Val和Arg-Ala-Ala-Ala-Thr是特别优选的。
当R1是3个氨基酸的序列时，其特别重要的序列包括，例如其中与R2邻接的氨基酸是Ala的序列，其中第二个和第三个氨基酸(从左至右阅读)是Lys-Ala,Arg-Ala,Ile-Ala和Ala-Ala的序列。
当R1是3个氨基酸的序列时，其特别重要的序列包括，例如，Ala-Lys-Ala、Ala-Arg-Ala、Arg-Ala-Ala、Arg-Ile-Ala和Ile-Arg-Ala，尤其是Ala-Arg-Ala。
当R3是3个氨基酸的序列时，其特别重要的序列包括，例如，其中第一个氨基酸(从左至右阅读，即与R2邻接)是Ala或Leu的序列。
当R3是3个氨基酸的序列时，其优选的序列包括，例如，Ala-Ala-Ala,Leu-Arg-Ala，尤其是Ala-Arg-Ala。
当R3是单个氨基酸时，其优选的氨基酸包括，例如，Ala,Gly和Azgly，尤其是Ala。
当Ra和Rb是烷基时，其特别的基团包括，例如，甲基，乙基和丙基。
Ra和Rb的优选的基团包括，例如，氢和甲基。
疏水残基P(最好是连接到R1的N端氨基酸的氨基上)的合适的基团包括例如，有机疏水基团如5-20个碳原子(对包含杂芳香族的基团有选自氧、硫和氮的1、2或3个杂原子)的疏水脂肪族，芳香族，杂芳香族或混合脂肪族/芳香族或脂肪族/杂芳香族有机基团，例如式R-、R·CO-、R.SO2-、R·O·CO-、R·NHCO-、R·O·CS-、R.S·CO-、R·NHCS-、R.S.CS-和R.CS-基团，其中R包括，例如，(5-10C)烷基、芳基、杂芳基、芳基(2-10C)烷基、杂芳基(2-10C)烷基、二芳基(2-8C)烷基、芳基(2-10C)烯基、芳基环丙基、(5-10C)环烷基、(5-10C)环烷基(2-6C)烷基、3-联苯基、4-联苯基、4-环己基苯基、2-萘氧甲基、3-萘氧甲基、苯氧苯基和R可以携带一个或多个(1-4C)烷基、卤素、氰基或(1-4C)烷氧基取代基的四氢萘基、芳基或杂芳基。本发明的-个特定的实施方案包括，例如，其中P是如以上定义的R·CO-的式Ⅰ的肽衍生物。本发明的另一个特定的实施方案包括，例如，其中P是5-20个碳原子的疏水脂肪族、芳香族或脂肪族/芳香族有机基团的式Ⅰ的肽衍生物。
R特别的基团包括，例如，当它是(5-10C)烷基时：戊基、异戊基、叔戊基、2-甲基戊基、己基、异己基、5-甲己基和辛基；当它是芳基时：苯基、萘基和茚基；当它是杂芳香基时：2-,3-,5-或6-吲哚基、2-,3-,5-or6-二氢吲哚基、2-,3-,5-或6-苯并[b]苯硫基(2-,3-,5-or 6-Beno[b]thiophenyl))基、噻吩基、2-,4-或5-苯并噻唑基、2-,4-或5-苯并恶唑基、2-,4-或5-苯并咪唑基、连接在2-,3-,6-或7-位上的1,4-苯并二氧六环基、2-,3-,5-或6-苯并呋喃基；当它是芳基(2-10C)烷基时：芳基(2-6C)烷基(其中芳基部分包括，例如，以上给出的芳基的任何特别的基团，(2-6C)烷基部分包括，例如，亚甲基、亚乙基、三亚甲基、四亚甲基和五亚甲基)、如2-苯乙基、3-苯丙基、4-苯丁基和5-苯戊基；当它是杂芳基(2-10C)烷基时：杂芳基(2-6C)烷基(其中杂芳基部分包括，例如，以上给出的杂芳基的任何特别的基团，(2-6C)烷基部分包括，例如，亚甲基、亚乙基、三亚甲基、四亚甲基和五亚甲基)、如2-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)乙基；当它是二芳基(2-8C)烷基时：二芳基(2-6C)烷基，如，2,2二苯乙基、3,3-二苯丙基和4,4-二-苯丁基；当它是芳基(2-10C)烯基时：芳基(2-6C)烯基，如苯乙烯基、3-苯基丙烯-2-基和4-苯基丁烯-1-基；当它是芳基环丙基时：苯基环丙基、1-萘基环丙基、2-萘基环丙基；当它是(5-10C)环烷基时：环戊基、环己基和1-金刚烷基；并且当它是(5-10C)环烷基(2-6C)烷基时：2-(环己基)乙基、3-(环己基)丙基和4-(环己基)丁基。R的芳基上的取代基的特别的基团包括，例如，甲基、乙基、氯、溴、碘、甲氧基、乙氧基和氰基。
疏水残基P也包括，例如，疏水性L-氨基酸，如苯丙氨酸(Phe)和其氢化的类似物，如环己基丙氨酸(Cha))、对-氯Phe、3-(2-噻吩基)丙氨酸、酪氨酸(Tyr)、Tyr(O甲基)、色氨酸(Trp)、二苯基丙氨酸、3-(1-萘基)丙氨酸、3-(2-萘基)丙氨酸和其氢化的类似物、3-(1-金刚烷基)丙氨酸(Ada)、Glu(O苯甲基)、3-(苄氧基)Ala、3-(苄硫基)Ala和9-芴基Gly，它们各自在N-端可以携带或不携带如以上定义的或例举的疏水脂肪族、芳香族、杂芳香族或混合的脂肪族/芳香族或脂肪族/杂芳香族有机基团。此外，所说的疏水性氨基酸可以携带或不携带，例如，选自以上所限定的R1和R3的任何序列的1-3个氨基酸的其它序列。例如P包括特定的序列Ala-Cha、Ala-Ala-Cha、Tyr-Ala-Ala-Cha、Tyr-Ala-Ala-Phe、Ala-Phe-Phe-Phe和Ala-Ala-Ala-Phe。这种1-3个氨基酸的其它序列的第一个(从左至右阅读)氨基酸可以是L-或D-氨基酸，并且也可以携带或不携带如以上限定的或例举的疏水脂肪族，芳香族，杂芳香族或混合的脂肪族/芳香族或脂肪族/杂芳香族有机基团。
P的其它特别的基团包括，例如，3-(苄氧羰基)丙酰基-Phe、3-(苄氧羰基)丙酰基-Cha、4-(苄氧羰基)丁酰基-Phe、4-(苄氧羰基)丁酰基-Cha、(5-氧代-吡咯烷-2-基)羰基-Phe-Tyr、(5-氧代-吡咯烷-2-基)羰基-Glu(O苄基)-Tyr、乙酰基-Glu(O苄基)-Tyr、二苯甲基·CONH·CH2CH2·CO-Cha、二苯甲基·CONH·CH2CH2.CO-Tyr、二苯甲基·CONH·CH2CH2CH2·CO-Cha、二苯甲基·CONH.CH2CH2CH2·CO-Tyr、二苯甲基·NHCO·CH2CH2CH2·CO-Cha、二苯甲基·NHCO·CH2CH2CH2·CO-Tyr、苄基·NHCO·CH2CH2·CO-Cha、苄基·NHCO·CH2CH2·CO-Tyr、N-乙酰基-4-氯-β-羟基Phe、4-苯氧苯基·NHCO-、苄基·NHCO·CH2CH2·CO·(N-甲基Phe)、苄基·NHCO·CH2CH2·CONH·CH(CHPh2)·CO、苄基·NHCO·CH2CH2·CO-Tyr、3,3-二苯基丙酰、反式-肉桂酰基、5-苯基戊酰基和3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酰基。
P的特别重要的基团包括，例如，Ph·(CH2)4·CO-(5-苯基戊酰基(Phv))、Ph·(CH2)4·CS-和3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酰基。
P疏水残基的更优选的基团包括，例如，3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酰基和5-苯基戊酰基(Phv)，尤其是后者。
当Rc是式-A1-G1时，A1的特别的基团，当它是亚烷基时包括，例如，亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基；G1特别的基团，当是(1-4C)亚烷基时包括，例如，亚甲基、亚乙基和亚丙基；C3的特别的基团，当它是(1-3C)亚烷基时包括，例如，亚甲基、亚乙基和亚丙基。
-A1-G1特别的基团包括，例如，3-胍丙基、4-(2-胍乙基)苯基、4-(2-吗啉代乙基·NH·CO·CH2)苯基和4-(4-[2-(2-羟乙氧基)乙基]哌嗪-1-基·CO·CH2)苯基。
R4的特别的基团，当它是1-6个氨基酸的序列或其酰胺时包括，例如，分别选自以上所限定的R1和R3的任何序列的L-氨基酸的序列(如Ala-Thr-Gly-OH)，或它们的D-类似物，或包含D-和L-氨基酸两者的序列，或其酰胺，如从氨衍生的酰胺，(1-4C)烷基胺(如甲基胺或二(1-4C)烷基胺(如二甲基胺)。一组特别的R4的基团包括，例如，本文所限定的基团，其中R4不是1-6个氨基酸的序列。
R4的优选的基团包括，例如，4-氨基甲酰基-1-哌啶基(哌啶-4-碳酰胺)(carboxamide)(Pip-NH2)的残基)、4-羧基-1-哌啶基(哌啶-4-羧酸(Pip-OH)的残基)、4-(氨基甲酰甲基)苯胺基(4-氨基苯基乙酰胺(Papa-NH2)的残基)、4-(羧甲基)苯胺基(4-氨基苯基乙酸(Papa-OH)的残基)和4-(2-胍乙基)苯胺基(2-(4-氨基苯基)乙基胍(Pape-NHC(=NH)NH2)的残基)。
一组特别的R4的基团包括，例如，Pip-NH2、Papa-NH2、Pape-NHC(=NH)NH2和NHRc，其中Rc是3-胍丙基，2-吗啉代乙基或4-(2-(2-羟乙氧基)乙基-I-哌嗪基。
R2的优选的基团包括，例如，式Ⅱ，尤其是IIa，更优选的是IIb的基团。
优选的一组式Ⅰ的肽衍生物包括，例如，其中R1是五个L-氨基酸的序列和R3是单个L-氨基酸的肽衍生物。其中序列R1和R3具有以上限定的任何序列，包括R1和R3的特别的和优选的序列。在这一组内，特别优选的肽衍生物的一个亚组包括，例如，其中R2是式Ⅱ，尤其是IIa，更优选的是IIb的基团的那些。特别优选的肽衍生物的另一个亚组包括，例如，其中R4是-Pip-OH、-Pip-NH2、-Papa-OH或Papa-NH2的那些。所说化合物的一个特别优选的亚组包括，例如，其中R3与R4一起是Ala-Pip·NH2或Ala-Papa-NH2的那些。
本发明的另一组优选的肽衍生物包括，例如，其中R1是由AA1-AA2-AA3-AA4-AA5所代表的5个L-氨基酸的序列的那些，其中：
AA1选自Ala、Ile、Tyr、Val、Glu、Lys、Arg、Gly、Gap、GapMe4和3,3,3-三氟丙氨酸，特别是Ala、Ile、Arg、Gap和GapMe4，尤其是Ala、Arg和GapMe4，更优选的是Ala和Arg；
AA2选自Ala、Lys、Glu、Sar、Val、Arg、Gly、Pro、Ile、Tic、3,3,3-三氟丙氨酸和N6-二乙基Lys，特别是Ala、Arg、Ile、Lys和Tic，尤其是Ala、Arg、Lys和Ile，更优选的是Ala和Arg；
AA3选自Ala、His、Gln、Val、Thr、Glu、Gly、Asp、Asn和N3-二乙基Dap，特别是Ala、His、Asp和Asn，尤其是Ala和Asn，更优选的是Ala；AA4选自Ala、Lys、Asn、Arg、Thr、Glu、Sar、Gly、Pro、His和N6-二乙基Lys，特别是Ala、Arg、Lys和His，尤其是Ala、Arg和His，更优选的是Ala；和
AA5选自Thr、Val、Ala、Gly、Dap、Dab、Pro、Hyp、Asn和N3-二乙基Dap，特别是Thr、Val和Dap，尤其是Thr和Val；并且R3是选自Ala、Gly、Dap、氮杂丙氨酸和氮杂甘氨酸，特别是Ala、Gly和氮杂甘氨酸，尤其是Ala和Gly，更优选的是Ala的单个L-氨基酸；并且其中P、R2和R4是以上限定的任何基团，包括特别的和优选的基团。在这一组内，所说化合物的特别的亚组包括，例如其中AA1-AA2-AA3-AA4-AA5选自Ala-Ala-Ala-Lys-Val、Ile-Ala-Ala-Arg-Thr、Arg-Ala-Ala-Ala-Val、Arg-Ala-Ala-Ala-Thr、Ala-Ala-Ala-Arg-Val、Ala-Arg-Ala-Arg-Val、Ala-Ile-Ala-Arg-Val、Ala-Arg-Ala-His-Val,Ala-Ala-Asn-Arg-Val、Ala-Arg-Ala-Ala-Thr、Ala-Arg-Ala-Arg-Thr、Gap-Ala-Ala-Ala-Thr、GapMe4-Ala-Ala-Ala-Thr和Ala-Ala-Ala-Arg-Thr的那些。其中R4是Pip-NH2,Papa-NH2和Pape-NHC(=NH)NH2的化合物是优选的。
本发明的另一组优选的肽衍生物包括，例如，其中R1是由AA1-AA2-AA3所代表的3个L-氨基酸的序列的那些，其中：
AA1选自Ala、Ile、Tyr、Val、Glu、Lys、Arg、Gly、Gap、GapMe4和3,3,3-三氟丙氨酸，特别是Ala、Ile、Arg、Gap和GapMe4，尤其是Ala、Arg和GapMe4，更优选的是Ala和Arg；
AA2选自Ala、Lys、Glu、Sar、Val、Arg、Gly、Pro、Ile、Tic、3,3,3-三氟丙氨酸和N6-二乙基Lys，特别是Ala、Arg、Ile、Lys和Tic，尤其是Ala、Arg、Lys和Ile，更优选的是Ala和Arg；
AA3选自Ala、His、Gln、Val、Thr、Glu、Gly、Asp、Asn和N3-二乙基Dap，特别是Ala、His、Asp和Asn，尤其是Ala和Asn，更优选的是Ala；
并且R3是AA6-AA7-AA8所代表的3个L-氨基酸的序列，其中：
AA6选自Gly、Leu、Lys、Ala、Pro、Glu、Sar、His和Dap，特别是Ala、Leu和Pro，尤其是Ala；
AA7选自Pro、Ala、Lys、Arg、Glu、Sar、Gly、Oic和Dic，尤其是Ala和Arg；和
AA8选自Ala、Gly、Dap、氮杂丙氨酸和氮杂甘氨酸，特别是Ala、Gly和氮杂甘氨酸，尤其是Ala；并且P、R2和R4是以上限定的任何基团，包括特别的和优选的基团。在这一组内，所说化合物的特别的亚组包括，例如其中序列AA1-AA2-AA3选自Ala-Lys-Ala和Ala-Arg-Ala，序列AA6-AA7-AA8选自Ala-Ala-Ala和Ala-Arg-Ala的那些化合物，其中R4是Pip-NH2、Papa-NH2和Pape-NHC(=NH)NH2的那些化合物是优选的。
本发明的一个优选的方面包括其中R2是式Ⅱ(尤其是其中A是亚甲基)，尤其是Ⅱb，并且P、R1、R3和R4是以上限定的任何基团，包括特别的和优选的基团的式Ⅰ的肽衍生物。
本发明的另一个优选的方面包括含有精氨酸残基的式Ⅰ的肽衍生物，特别是其中在R1是5个L-氨基酸的序列时，R1的第一个氨基酸残基(从左至右阅读时)是精氨酸的化合物(如Arg-Ala-Ala-Ala-Val和Arg-Ala-Ala-Ala-Thr)，和其中在R1是3个L-氨基酸的序列时，R1的第二个氨基酸残基是精氨酸的化合物和/或当R3是3个L-氨基酸的序列时，R3的第二个氨基酸残基是精氨酸(如，当R1是Arg-Ala-Ala和R2是Ala-Ala-Ala时或当R1和R2两者都是Ala-Arg-Ala时)的化合物。
本发明的另一方面包括其中R2是式Ⅲa或Ⅲb，并且P、R1、R3和R4是以上描述的任何基团，包括特别的和优选的基团的式Ⅰ的肽衍生物。
特别重要的本发明的化合物包括，例如，此后在伴随实施例中提出的特定的具体例。实施例5、16、19、23和24的化合物是特别重要的，并且这些化合物或其药学上的可接受的盐作为本发明的进一步的特征被提供。
Figure A9719246700171
                   实施例5
Figure A9719246700172
                   实施例16
Figure A9719246700173
                   实施例19
Figure A9719246700174
                    实施例23
Figure A9719246700181
                    实施例24
药学上可接受的盐包括，例如，对完全为碱性的肽衍生物(例如具有游离氨基的那些)而言，与形成药学上可接受的阴离子酸的盐，如与无机酸和与有机的酸的盐，所说的无机酸如氢卤化物(如氢氯化物和氢溴化物)、硫酸和磷酸，所说的有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、苦杏仁酸、p-甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸等；对完全为酸性的肽衍生物(例如具有游离羧基酸团的那些)而言，与形成药学上可接受的阳离子的酸的盐，如与碱金属(如钠和钾)、碱土金属(如镁和钙)的盐，铝和铵盐以及与合适的有机碱的盐，所说的有机碱例如乙醇胺、甲基胺、二乙胺、异丙基胺、三甲基胺等。
如上所述，式Ⅰ的肽衍生物或其药学上可接受的盐在温血动物(包括人)中对一系列自身免疫病或病态具有有益的药理学作用，用于治疗疾病和作为疾病缓解剂或作为预防性治疗剂。这样的疾病可以包括，例如，类风湿性关节炎、多发性硬化、古德帕斯彻氏综合征、特发性血小板减少性紫癜、少年类风湿性关节炎、腹腔疾病、全身性红斑狼疮、僵硬脊椎炎、斯耶格伦氏综合征、重症肌无力、1型(胰岛素依赖性)糖尿病、桥本氏病、Grave’s病、阿狄森氏病、硬皮马勃菌病、多肌炎、皮肤肌炎、寻常天疱疮、大疱类天疱疮、自身免疫血溶胞贫血、恶性贫血、肾小球性肾炎、移植物排斥等，尤其是类风湿性关节炎和多发性硬化。
可以用各种标准的试验和临床研究方法评价式Ⅰ的肽衍生物或其药学上可接受的盐的效用，所说的方法包括在国际专利申请出版物WO92/02543,WO93/05011和WO95/07707中所描述的那些(或者其修改的方法)以及以下所描述的那些。在一个或多个这样的试验和研究中，式Ⅰ的肽衍生物显示出明显的活性。试验A：纯化的HLA-DR肽体外结合测定(这一测定可以用来证明式Ⅰ的肽衍生物与疾病-相关MHCⅡ类分子的结合)将30μl在N端用长链生物素衍生化的生物素-FHA307-320(FHA(307-320)肽，800nM在磷酸缓冲盐水溶液(PBS)中的生物素-Ahx-Pro-Lys-Tyr-Val-Lys-Gln-Asn-Thr-Leu- Lys-Leu-Ala-Thr-Gly-OH)与30μl浓度在0.5和5μg/ml之间的HLA-DR4Dw4在有或没有抑制剂肽的情况下在V-孔微滴板(Nuno)中一起温育48小时。在温育期结束时，将100μl温育物转移到酶联免疫吸附测定(ELISA)平板(Nunc)上，该平板预先用抗-MHC抗体(L243-美国典型培养物保藏中心(ATCC)HB55-如Lampson和Levy(1980)，免疫学杂志，125,293-299所描述的)以10μg/ml浓度在室温下涂布1小时，此后用在PBS中的1％牛血清白蛋白(BSA)和0.05％吐温20封闭1小时。在另外的1小时后，洗去未结合的肽，并且在室温下加入用PBS1/4,000稀释的链霉抗生物素蛋白过氧化物酶(Sigma)以及0.01％合适的去污剂如NP-40(Sigma)2小时。在进一步的洗涤之后，将四甲基benzidene(TMB)底物溶液(在10m10-1M柠檬酸盐/乙酸盐缓冲液(pH6.0)以及36μl尿素过氧化氢(UHPO)(Fluke)中的1个TMB片(Sigma))加入到各板上。通过加入2M硫酸(每孔10μl)终止反应，在450nm读取吸收值来定量结合的肽的量。通过吸收值对浓度的作图获得肽的抑制活性。
可以按照以下所述获得纯化的HLA-DR4Dw4：(ⅰ)HLA-DR在杆状病毒系统中的表达
在昆虫细胞中从杆状病毒载体表达重组蛋白质是已建立的获得高产率重组蛋白质的方法[Luckow,VA和Summers,MD,1988，生物技术，6,47-551]。为了能够从单一重组体杆状病毒载体(与获得用于α和β链的不同的重组病毒，然后进行共转染相反)表达异源二聚体HLA-DR，例如HLA-DR4Dw4，构建携带有α和β链两者的双重组杆状病毒。
将编码α多肽的序列的cDNA克隆进转移载体pacYM1[Matsuura,Y；Possee,RD；Overton,HA&Bishop,DHL,1987，普通病毒学杂志(J.Gen.Virol.),68,1233-1250]，以便将所说蛋白质的表达置于多角体蛋白启动子的控制之下。通过在Sf21昆虫细胞中的同源重组将该单位插入到杆状病毒基因组中，以产生α链的单一重组体杆状病毒。Summers,MDD和SmithGE(1987)[杆状病毒载体和昆虫细胞培养过程的方法手册；得克萨斯农业的实验站，公报号1555]充分描述了用于培养和感染供异源重组使用的昆虫细胞以及检测/分离重组病毒的技术。用于构建重组载体的分子遗传学技术同样易于从文献中找到，并且由Sambrook,J；Fritsch,EF和ManiatisT,(1989)[分子克隆.实验室手册.第二版.冷泉港实验室出版社]进行了最充分的描述。
为了产生双-重组杆状病毒，将编码β链的cDNA克隆进转移载体pAcUW1[Weyer,U；Knight,S和Possee,RD,1990，普通病毒学杂志，71,1525-1534]，以便将所说蛋白质的表达置于P10启动子的控制之下。然后将这一单位插入到携带有α链的单一重组杆状病毒基因组中。通过将用随机挑取的来自转染物的病毒感染的昆虫细胞点样到膜上，并且使其与单克隆抗体反应来检测双-重组病毒，所说的抗体例如L243，其特异性地识别HLA-DR异源双体。利用容易从文献中找到的标准的流式细胞术检测抗体对Sf21昆虫细胞的结合。将表达HLA-DR的稳定的双-重组杆状病毒进行噬斑纯化。(ⅱ)从昆虫细胞纯化HLA-DR
所利用的方法是由Gorga等，1987(Gorga等，1987．生物化学杂志262,16087-16094)描述的方法的修改的方法。通过用特氟隆玻璃匀化器的10个冲程匀化，将HLA-DR表达杆状病毒/Sf21细胞(10L，约等于2×1010个细胞)溶解在100m15mMEDTA(钠盐)，50mMTris-HCl(pH8.5)，2％NP40,150nMNaCl,1mM碘乙酰胺，1mMPMSF中。在100,000g下将匀浆离心1小时，并收集上清液。将以50mgL243对10ml蛋白质A-琼脂糖fastflow(Pharmacia)的比率共价连接并用10mMTris-HCl(pH8.0),0.1％NP-40预温育的抗-HLA-DR单克隆抗体LB3.1(Gorga等，1986，细胞免疫学103,160-172)与所说的上清液一起温育一夜。然后将树脂放到柱中，并用10mMTris-HCl(pH8.0),0.1％NP-40(20倍柱体积)洗涤，其后用0.15MNaCl,50nMNa2HPO4(pH7.0),1％辛基葡糖苷(20倍柱体积)洗涤。用50mM二乙胺(pH11.0),0.15MNaCl,1％辛基葡糖苷洗脱HLA-DR。立即用1MTris-HCl(pH8.0)中和柱组分，并且通过centricon-10膜经超速离心浓缩。由BCA蛋白质测定法(Pierce)测定蛋白质含量，由SDS-PAGE电泳测定纯度。
一般来说，在试验A中试验的以上所限定的式Ⅰ的肽衍生物在约10μM浓度或更低时显示出明显的抑制作用。
本发明的另一个优选的方面包括不结合HLA-DR3，但结合HLA-DRl和/或HLA-DR4Dw4和/或HLA-DR4Dwl4的式(Ⅰ)的肽衍生物或其药学上可接受的盐。HLA-DR3是与类风湿性关节炎不相联系的一种普通的HLA-DR等位变体。因此，在携带HLA-DR3作为他们的等位变体的一种的类风湿性关节炎患者(其约为总的类风湿性关节炎患者的三分之一)中，这样的式Ⅰ的肽衍生物将不干扰HLA-DR3在宿主防御功能中的正常的作用。因此，这样一种肽衍生物的利用对治疗类风湿性关节炎患者是特别有利的，因为它比用非选择性DR结合剂产生更低的免疫抑制作用。
作为试验A的一种变化，可以按照以下所述评价本发明的肽结合一种或多种HLA-DR分子的能力：(ⅰ)从细胞系纯化HLA-DR类型
所利用的方法是由Gorga等，1987，生物化学杂志，262,16087-16094所描述的方法的改进的方法。通过免疫亲和层析从各种细胞系纯化人HLA-DR抗原。简言之，通过用特氟隆玻璃匀化器的10个冲程匀化，将1x109-5×109个选自Hom2(DR1源)，BBF(DR2源)，AVL-B(DR3源)，JAH(DR4Dw4源)，JHAF(DR4Dwl3源)或PEI17(DR4Dwl4源)的合适细胞系的小球细胞于大约4℃下溶解在50ml5mMEDTA(钠盐)，50mMTris-HCl(pH7.4),2％NP40,150mMNaCl,1mM碘乙酰胺，1mMPMSF中。在100,000g下将匀浆离心1小时，并收集上清液。将共价连接到CNBr-琼脂糖4B(Pharmacia)上的抗-HLA-DR单克隆抗体LB3.1(Gorga等，1986,细胞免疫学，103,160-173)用150mMNaCl,50mMTris-HCl(pH7.4)，0.1％NP-40预平衡，并与上清液一起温育一夜。然后将树脂装入到柱中，并且用0.15MNaCl,50mMTris-HCl(pH7.4)，1％辛基葡糖苷(20倍柱体积)洗涤。用50mM二乙胺(pH11.0),0.15MNaCl,1％辛基葡糖苷洗脱HLA-DR。立即用0.5MHEPESNaOH(pH7.4)中和柱组分。由Biorad蛋白质测定法测定蛋白质含量，由SDS-PAGE电泳测定纯度。(ⅱ)肽选择性结合测定
在有或没有在测定缓冲液(PBS,0.01％NP40(Sigma))中的抑制剂肽存在下，在V-孔微滴板(Nunc)中，将在磷酸缓冲盐水(PBS)中的200nM生物素-FHA307-320与纯化的HLA-DR1,DR2,DR4Dw4,DR4Dwl3或DR4Dwl4(2-20μg/ml)一起温育。对DR3抑制作用，将400nM生物素-Ahx-(D)Ala-Ala-Ala-Che-Ile-Ala-Ala-Ala-Thr-Leu-Lys-Ala-Ala-(D)Ala-0H与纯化的DR3(20μg/ml)一起温育，并且如上所述进行温育。在48小时之后，如试验A中的描述处理温育物，并读取吸收值。在PC上采用MicrocalOrigin软件计算以IC50表示的肽的抑制活性。
试验B：T细胞体外活化的抑制作用。(这一测定可以用来说明式Ⅰ的肽衍生物抑制由或通过MHCⅡ类分子介导的T细胞免疫应答的能力)。
试验抑制剂肽阻断B52.24鼠T细胞杂交瘤系的刺激作用的能力，所说的杂交瘤系对由HLA-DR4Dw4分子传递的FHA307-320肽(H-Pro-Lys-Tyr-Val-Lys-Gln-Asn-Thr-Leu-Lys-Leu-Ala-Thr-Gly-OH)产生应答。B52.24是由按照Woods等(1994)实验医学杂志．(J.Exp.Med.)180,173-181的描述并依据《免疫学的当代方案》第二卷7.21中给出的产生T细胞杂交瘤的一般方法，将从FHA307-320免疫的HLA-DR3Dw4转基因小鼠取得的淋巴结T细胞(国际专利申请出版物WO95/03331)与BW5147鼠T细胞淋巴瘤系(White等(1989)免疫学杂志143,1822)融合产生的。
在96-孔微滴板(Nunc)中将浓度在100和0.1μM(或更低)之间的抑制剂肽与浓度在100和0.1μM之间或者10μM固定浓度的抗原肽FHA307-320混合，用RPM1-1640培养基(Gibco)稀释，使最终体积达到100μl。通过以4×106细胞/毫升悬浮在1％戊二醛(Sigma)中30秒钟，用戊二醛将表达HLA-DR4Dw4的B细胞，例如JAHEBV转化的类淋巴母细胞细胞系(欧洲培养物保藏中心ECACC85102909)或者从HLA-DR4Dw4纯合个体取得的并按照《免疫学的当代方案》7.22.1中描述的方法用EpstenBarr病毒转化的B细胞固定，此后，加入等体积的200mM赖氨酸(Sigma)3分钟。细胞由在300g下的离心回收，用RPMI-1640洗涤，并且以2×105个细胞/孔的浓度加入到包含抗原和抑制剂化合物的微滴板中，将微滴板在37℃和5％CO2中培养2小时。
然后，通过在300g下离心用RPMI-1640洗涤微滴板，并且在以105个细胞/孔的浓度加入B52.24T细胞杂交瘤系之前，用培养基(RPMI-1640,10％胎牛血清(Gibco)和2mM谷氨酰胺(Gibco))抽吸两次。然后，将微滴板在37℃和5％CO2中培养另外的两天。接着在300g下离心微滴板10分钟，从所有的孔取出150μl上清液，在进行IL-2含量的生物测定之前冷冻在-20℃下。
把包含将要测定的上清液的培养平板置于室温下解冻，将100ml上清液转移到新的96圆底孔平板中。用培养基进行IL-2的1∶1系列稀释，以产生250单位/毫升至最后0.04单位/毫升IL-2的标准曲线，其中所说的培养基是RPMI-1640(Gibco)，10％胎牛血清(高级蛋白质产品公司)，100μg/ml链霉素和100U/ml青霉素(Gibco),2mML-谷酰胺(Gibco)和50μM2-巯基乙醇(Sigma)。收获IL-2依赖性细胞系，如CTLL-2细胞(自然(1977)268154-156)或HT-2细胞(免疫学方法杂志(1987)94-104)，在以5×104细胞/毫升悬浮之前，用培养基洗涤两次。将100μlIL-2依赖性细胞悬浮液加入到每一标准曲线与试验样品的孔中。将培养平板在37℃和5％CO2下培养72小时。此后，将20μl(1mCi)3H-胸腺嘧啶核甙(AmershamInnternational)加入到每一孔中，将平板送回到培养箱中再培养16小时。将各板的内含物收集到玻璃纤维滤膜垫上，采用β平板闪烁计数器测定放射活性。
一般来说，在试验B中试验的以上限定的式Ⅰ的肽衍生物在约10μM或更低的浓度下显示出明显的抑制作用。试验C：在BALB/C小鼠中，肽刺激DTH(迟发型超敏反应)。(该测定可以用来在动物模型中说明式Ⅰ的肽衍生物的体内活性)。Balb/c雌性小鼠(18-20g)，每组5只，在侧腹皮下用0.1毫升与完全弗氏佐剂(Sigma)1∶1 v/v混合的卵白蛋白(Sigma)(在盐水中2毫克/毫升)乳剂免疫。七天后，用双测径器测微尺测量脚板厚度，接着用在盐水中的1％热-聚集卵清蛋白的30μl足底下注射液攻击一只后脚板。在抗原攻击24小时后，测量脚板，以与对侧对照比较注射脚板的脚板厚度的增加百分比计算DTH应答。以10mg/kg/天到0.1μg/kg/天范围内的剂量，通过在抗原攻击前24小时移植的3-天渗透微泵(Alzet)施用抑制剂。由抑制剂处理的脚板肿胀值减去载体给药的对照的值，除以对照值，乘以100％计算抑制的程度。
一般来说，在试验C中试验的以上限定的式Ⅰ的肽衍生物在约1mg/kg/天或更低的浓度下显示出明显的抑制作用，而没有任何明显的毒理或其它不希望的药理作用。试验D：(这一测定可以用来在关节炎的动物模型中说明式Ⅰ的肽衍生物的体内活性)。
用0.1ml乳剂皮下注射Balb/c雌性小鼠(19-21g,5-10只/组)在第0天免疫和在第7天加强免疫，所说的乳剂含有等体积的在盐水中的2mg/ml甲基化的牛血清白蛋白(met-BSA,Sigma)和完全弗氏佐剂(Sigma)，其中补充了2.5mg/mlMycobacteriumtudercolosis(MTB，菌株C,DT和PN,MAFF,Weybridge,Surrey)，因此给出3.5mg/ml的最终MTB浓度。在相同的时间给予另一种在盐水中的109个百日咳博德特氏菌有机体(Wellcome百日咳疫苗)的0.1mli.p注射液。十四天后，用30G针与汉密尔顿注射器将含有100ug盐水中的met-BSA的10μl关节内注射液注射到膝关节来攻击动物。对侧膝盖用相同体积的盐水注射，用作对照。在13天后，通过采用双测径器测微尺测定来确定与两个膝盖相关的发炎/肿胀程度。通过以钝剪刀和钳子在膝盖之上和之下约5mm的皮肤上切口，并且继续沿膝盖侧面形成一片，然后小心地切去该片，以暴露出下面的关节来进行。测量在横跨膝盖的最宽部分，平面地在夹持在固定位置上的固定肢体上进行。按下式计算与对照比较的注射抗原的膝盖中炎症的百分增加：[注射抗原的膝盖厚度-注射盐水的膝盖厚度/注射盐水的膝盖厚度]×100。以10mg/kg/天到0.1μg/kg/天范围内的剂量，通过在抗原激发前24小时移植的14天渗透微泵(Alzet)施用抑制剂。由抑制剂处理的组的肿胀值减去载体给药的对照的值，除以对照值，乘以100％，从厚度测量值计算发炎/肿胀的百分抑制。其它的疾病评价包括1)在haemotoxylin和伊红染色的固定的膝盖段上进行的发炎、关节膜炎和软骨/骨糜烂的组织学评价，和2)血清中急相反应物、血清淀粉样P和/或触珠蛋白水平的测定。
在试验D中试验的以上限定的式Ⅰ的肽衍生物在约10mg/kg/天或更低的剂量下显示出明显的抑制作用。
式Ⅰ的特定的肽衍生物的药理学活性可以举例说明，
实施例5,16和23的化合物都显示出，在试验A中在浓度小于0.1μM时明显结合HLA-DR4Dw4，在试验C中在小于0.1mg/kg/天时是有活性的。在pH3和pH7.6时，这些化合物也显示出良好的含水稳定性，在以挤压的聚合物贮存制剂形式时，显示出由于挤压降解的最小损失和从最终贮存制剂释放的最小降解。在改变的试验A中，实施例23的化合物显示出明显地结合HLA-DR1,HLA-DR2,HLA-DR4Dw4和HLA-DR4Dw14,但不明显地结合HLA-DR3(IC50大于100μM)。
式(Ⅰ)的肽衍生物可以由可用于类似肽合成的任何肽化学领域中已知的方法制备。
可以采用例如，类似于Atherton和Sheppard的“固相肽合成：一种实用方法”(牛津大学大学出版社的IRL出版社出版，1989),Stewart和Young的“固相肽合成”(Pierce化学公司出版，Illinois,1984)，“肽合成原理”(Springer-Verlag出版，柏林，1984)和系列“氨基酸，肽和蛋白质”(1-25卷；1994年出版的第25卷)(皇家化学学会出版，剑桥，英国)所公开的那些方法获得式Ⅰ的肽衍生物。
优选地，式(Ⅰ)的肽衍生物由固相序列合成制备。利用这一技术，在α-氨基上保护将成为肽的C端氨基酸的氨基酸，如果需要，在侧链中保护，并且偶联到固相载体上，所说的固相载体例如树脂，如，在裂解之后需要游离羧酸时的2-氯三苯甲基氯化物树脂或Merrifield树脂(氯甲基聚苯乙烯-二乙烯基苯)，或者在裂解之后需要羧酰胺时的Rink酰胺树脂(4-(2’,4’-二甲氧苯基-Fmoc-氨基甲基)苯氧基树脂)或Rink酰胺MBHA树脂(N-(4-(2’,4’-二甲氧苯基-Fmoc-氨基甲基)-苯氧基乙酰氨基-正亮氨酰基)-4-甲基二苯甲基胺树脂(所有这些都可以从Calbiochem-Novabiochem获得)。此后除去α-氨基上的保护基。在α-氨基上保护将连接到C端氨基酸上的氨基酸，如果需要，在侧链中保护，并且偶联到仍然连接在固相载体上的C端氨基酸上。重复α-氨基脱保护和偶联下一个氨基酸的阶段性步骤，产生与固相载体连接的保护的或未保护的多肽。式Ⅱ或Ⅲ的基团R2通过利用适当保护的(3-氨基-2-氧代-吡咯烷-1-基)链烷酸(对于包含Ⅱ的肽衍生物，其中A=亚甲基)或如《药物化学杂志》，1993,36,256-263的描述获得的相应的氧杂类似物，或者通过其类似物(对于包含Ⅱ的肽衍生物，其中A是氧)或(6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]酮-7-基)链烷酸(对于包含Ⅲ的肽衍生物)取代保护的氨基酸而掺入到序列中。通过标准方法，例如采用三氟乙酸，三乙基硅烷和水的混合物从固相载体解脱保护的或未保护的多肽。可以预料的是可以在用于从固相载体解脱肽的条件下裂解侧链保护基，或者可以在从固相载体解脱肽之前或之后作为分离步骤裂解。也可以预料的是制备多肽的方法可以通过在特定的偶联步骤中使用两个或多个合适的保护的氨基酸的序列进行修改。合成可以利用手工技术或使用合成仪自动进行，或者可以使用两种技术组合，所说的合成仪如，AppliedBiosystems431A或430A肽合成仪，AdvancedChemtechACT357肽合成仪或类似的自动肽合成仪。
在肽的合成期间，不参加反应的氨基酸官能团是由各种官能团保护的。例如，N端和侧链氨基可以通过使用9-芴基甲氧羰基(Fmoc),t-丁氧羰基(Boc)，二苯基异丙氧羰基(Bpoc),2-[3,5-二甲氧苯基]丙基-2-氧羰基(Ddz)，金刚烷基氧羰基(Adoc)，烯丙氧羰基(Aloc),2,2-2-三氯乙氧羰基(Troc)，苯氧羰基和各种所取代的苄氧羰基团保护。当需要时，这些保护基可以用标准技术除去(例如酸或碱处理，催化氢解和Pd(O)处理或锌/乙酸处理)。
用于在包含精氨酸残基的肽中保护侧链胍基团的合适的保护基团包括硝基，金刚烷氧羰基，4-甲氧-2,3,6-三甲基苯磺酰基(Mtr),2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基(Pmc)和(尤其是)2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基(Pbf)基团。
用于保护侧链羟基的合适的保护基团包括t-丁基，苄基和三苯甲基(Trt)。用于包含组氨酸残基的肽中侧链咪唑基团的合适的保护基团包括三苯甲基，苄基，甲苯磺酰基，二硝基苯基，Adoc,Boc或Fmoc基团。
用于保护侧链羧基的合适的保护基团包括各种酯(例如甲酯，乙酯，t-丁酯，苄酯，硝基苄酯，烯丙酯和9-芴基甲酯)。
保护基裂解反应可以在4℃到40℃的温度范围内(优选地是在室温下)和在10分钟到24小时的时间范围内进行。
用于偶联单个氨基酸的合适的偶联方法包括通常使用的叠氮化物，对称酸酐，混合酸酐和各种活性酯和碳化二亚胺。在各种碳化二亚胺(例如二环己基或二异丙基碳化二亚胺)的情况下，也可以加入一些添加剂(例如1-羟基苯并三吡咯(HOBT)和N-羟基琥珀酰亚胺)。此外，氨基酸偶联也可以通过利用一些其它试剂完成，例如通过1H-苯并三唑-1-基-氧-Tris-吡咯烷磷鎓六氟磷酸(PyBOP),(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿鎓(uronium)四氟硼酸(TBTU)和(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿翁四氟硼酸(HBTU)。偶联反应可以在-20℃到40℃的温度范围内和在10分钟到24小时的时间范围内进行。用于进行偶联反应的合适的介质包括，例如，N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。特别合适的方法包括在DMF中使用HBTU,HOBT和二异丙基乙胺。
在本文提及的国际专利申请中例证了这些和其它肽合成方法。为式R-,R·CO-,R·SO2-,R·O·CO-,R·NHCO-,R·O·CS-,R·S·CO-,R·NHCS-,R·S·CS-和R·CS-的疏水残基P(或作为在P的末端氨基上存在的取代基的这样一种基团，此时P是疏水氨基酸或携带其它氨基酸的疏水氨基酸)可以作为例如末端氨基的烷基化，酰基化或其它标准官能团修饰的最后步骤(例如在从载体释放肽之前或之后)掺入。当C端修饰(以获得R4特别的值)是所需的时，它们可以通过常规官能团修饰或适当选择起始树脂或者首先偶联到树脂上的保护的整体(例如采用式R4-H的合适的保护基)，在肽合成之后完成，制备式Ⅰ的肽衍生物的典型的例子在下文的实施例中提供。
用于测量本发明的肽衍生物的稳定性一个典型的方法如下，其中，为了最大限度地减少微生物污染和降解，在高压灭菌器中灭菌用来制备肽溶液的所有设备，并在Ⅱ类层状柜橱中进行所有的材料转移。采用无菌0.22μm滤器和20ml注射器，将约20ml含有0.02％叠氮化钠的McIlvaine’s柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH3或7.6)过滤到50毫升瓶中。在加帽的小瓶中精确地称量约1.2mg肽。利用无菌移液管尖端将足够量的缓冲液加入的小瓶中的肽中，以给出0.1mg/ml的肽浓度。给小瓶加帽，并且摇动使肽溶解。利用无菌移液管尖端，将大约1毫升的肽溶液的等分样转移到10个HPLC小瓶中，然后加上帽。5个小瓶贮存在-18和37℃。在贮存开始时或在-18和37℃贮存1,2,3和4周之后，在各时间点采用新的小瓶以及重复的样品注射，用合适的标准经HPLC测定溶液的肽峰面积。从各时间点的肽峰面积与起始面积的比值确定在各时间点37℃贮存后保留的肽的百分比。在37℃pH3和7.6贮存之后，本发明的优选的肽衍生物具有大于90％，优选大于95％的肽保留。
为了治疗或预防的目的，式Ⅰ的肽衍生物一般以药物领域熟知的药物组合物的形式施用给需要这种治疗的温血动物(包括人)。
按照本发明的另一个特征，本发明提供了药物组合物，该组合物包含与药学上可接受稀释剂或载体组合在一起的式(Ⅰ)的肽衍生物或其药学上可接受的盐。
组合物可以是适于口服使用的形式，例如片剂，胶囊，含水或油的溶液，悬液或乳剂；适于经鼻使用的形式，例如嗅剂，鼻喷射剂或滴鼻剂；适于阴道或直肠使用的形式，例如栓剂；适于吸入施用的形式，例如作为充分细化的粉末或液态气溶胶；适于舌下或口腔使用的形式，例如片剂或胶囊；或适于肠胃外(包括静脉内，皮下，肌内，血管内或灌输)施用的形式，例如无菌水或油溶液或悬液。组合物可以是适于局部施用的形式，例如霜剂，软膏和凝胶。也包括皮肤补片。《综合医学化学》第5卷25.2章(编者Hansch等，Pergamon出版社，1990)综述了各种制剂。
一般来说，上述组合物可以利用常规赋形剂以常规方式制备。然而，在口服组合物的情况下，组合物包括包衣以保护多肽活性组分使之不受胃中酶的作用可能是合宜的。
本发明的更优选的组合物是适于口服的以单位剂量形式的一种组合物，例如片剂或胶囊，在各单位剂量中含有2.5-500mg，优选地10-100mg多肽；或者是适于肠胃外施用的一种组合物，其在每毫升溶液中含有0.5-100mg，优选地1-10mg多肽。
肠胃外组合物优选地是在等渗盐水或等渗葡萄糖中的溶液，如果需要，缓冲至pH5-9。此外，当使用常规可注射的制剂时，肠胃外组合物可以是为缓释而设计的，在这种情况下，每单位剂量中多肽的量一般比所需的量更大。优选的缓释制剂是连续释放制剂，例如在欧洲专利申请58481中描述的一种制剂类型，或者对包含至少一个碱性基团的式Ⅰ的肽而言，例如在国际专利申请出版物WO93/24150中描述的制剂，这些专利申请本文一并引作参考。本发明的某些肽具有可溶性特征，这使得它们特别适于制造和加工缓释的肠胃外制剂，特别是包含可生物降解的聚酯(如聚交酯)的制剂，和适于提供具有有益的释放过程的缓释制剂。此外，包含一个或多个碱性基团(特别是精氨酸)的本发明的肽也可以与具有酸末端的聚酯形成肽-聚合物盐，如聚交酯，这样的肽和肽-聚合物盐构成本发明的另一方面。某些这样的盐具有可溶性特征，这使得它们特别适于制造和加工缓释的肠胃外制剂，例如在WO93/24150中所描述的制剂，并适于提供具有有益的释放过程和贮存稳定性特征的缓释制剂。优选的缓释肠胃外制剂每单位剂量含有1-100mg(如5-50mg)多肽。优选的缓释肠胃外制剂也是设计使在至少5天的期限内提供缓释的一种制剂。
本发明的优选的肽包括这样一些肽，当以挤压聚合物贮存制剂的形式时，它们显示出对挤压降解的最小限度的损失或者在从这种贮存制剂释放时显示出最小限度的降解。测定本发明的肽的降解水平的典型的方法如下：制备肽的挤压聚合物贮存制剂
精确称量约20mg肽，加入足够的聚合物，产生约20％W/W的混合物，所说的聚合物是50/50％摩尔聚(D,L-乳酸/乙醇酸)共聚物，当用筛析色谱相对于聚苯乙烯标准测定时，其具有20kD的近似重均分子量和1.7的近似多分散性，将所说的混合物溶解到无酸酐的冰乙酸中，产生约10％W/V的溶液。将该溶液冷冻干燥，在使用之前，在真空下贮存所形成的冻干产物。
将100mg的冻干物质装入小的实验室挤压机的桶中，将活塞推下，以压实样品。将挤压机加热至90和95℃之间，并且在这一温度下保持10分钟，然后在给出直径约1mm的圆柱状挤出料的压力下挤压冻干的物质。分析肽挤压聚合物贮存制剂的肽含量
精确称量两个约5mm长的包含肽的挤压聚合物贮存制剂，将每一个溶解到分别在25ml容量的烧瓶中的1ml无酸酐的冰乙酸中。在约1.5小时之后，用蒸馏水将各个的体积增加到25ml，引起聚合物沉淀。采用0.5μm Millex PTFE滤器滤掉固体，并收集溶液A。
从0.5mg/ml肽的蒸馏水贮存溶液和2.5mg/ml聚合物的无酸酐冰乙酸贮存溶液按以下制备一系列标准溶液，用蒸馏水使每份溶液体积达到10毫升：
肽浓度(μg/ml) 贮存聚合物溶液体积(μl) 贮存肽溶液体积(μl)
    50     1000     1000
    40     1000     800
    30     1000     600
    20     1000     400
    10     1000     200
    5     1000     100
    0     1000     0
通过5μmMiIlexPTFE滤器过滤每一个标准物，采用重复样品注射经HPLC分析以上的滤液等分样以及溶液A的等分样。从溶液A中的肽浓度计算肽的挤压聚合物贮存制剂的肽含量，所说的浓度是通过将溶液A中的肽峰的面积与标准溶液的肽峰比较确定的。因为本发明的优选的肽表现出对挤压降解的最小限度的损失，所以挤压聚合物贮存制剂的肽含量接近20％W/W的近似理论值。肽从挤压聚合物贮存制剂体外释放时的降解
经0.22μ滤器过滤包含0.02％叠氮化钠的McIlvaine’s柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH7.6)的溶液，并且在40℃下贮存。将大约10mg包含肽的挤压聚合物贮存制剂置于两个小小瓶中，加入2ml缓冲液。给小瓶加上帽，并且贮存在37℃的水浴中1个月。在1个月内的合适的时间点，从各小瓶移出释放介质的3个0.6毫升等份，接着经HPLC分析或者在HPLC分析之前于-18℃冰冻贮存在HPLC小瓶中。将1.8ml缓冲液加入到每一个包含贮存制剂的小瓶中，以替代在各时间点已经移出的释放介质。
通过将释放介质的肽峰面积与已知浓度的肽标准缓冲液的肽峰面积比较，采用重复样品注射经HPLC测定各时间点释放介质中的完整肽的平均量。通过将释放介质中额外的新峰面积与已知浓度的肽标准缓冲液的肽峰面积比较，并且假定消光系数不变，经HPLC测定在各时间点释放介质中的肽降解产物的近似平均量。完整的肽和总肽(完整的肽和肽降解产物)的平均值累积体外释放曲线从各时间点释放介质中的完整肽和肽降解产物的量确定。本发明的优选的肽显示出最小限度的体外释放降解，并且由此显示出在pH7.6和37℃下体外释放进McIlvaine’s缓冲液中1个月后的低于总肽10％，优选地低于5％的总肽降解产物。
本发明的组合物一般以这样的剂量施用给人：例如，对于一个70kg的患者，日剂量是从10微克到5000毫克，优选地是0.1-100毫克，根据需要以分散剂量给药。按照医药熟知的原则，所施用的组合物的精确的量和施用途径与形式可以取决于被治疗的患者的体重、年龄和性别，和取决于所治疗的特定的疾病或病态以及其严重程度。
为了治疗和预防目的，式(Ⅰ)的肽衍生物或其药学上可接受的盐也可以与一种或多种其它药剂一起有利地施用，所说的其它药剂是本领域已知在治疗或减轻以上提及的一种或多种疾病或病态的症状中有价值的(或者是所述疾病或病态的疾病缓解剂)，例如NSAID(如布洛芬和吡罗昔康)，止痛药(如扑热息痛1)，皮质类固醇，肌肉弛缓药，脂氧合酶抑制剂，氨甲堞呤，硫唑嘌呤，D-青霉胺，环孢菌素A或单克隆抗体治疗剂(如抗-CD4或抗-TNF)。在糖尿病中，所说的肽衍生物可以与胰岛素或糖尿病或糖尿病并发症的其它治疗剂(如醛糖还原酶抑制剂)共施用。要了解的是这样的联合治疗构成本发明的另一方面。
按照本发明的另一方面，本发明提供了一种用于治疗MHCⅡ类依赖性T-细胞介导的自身免疫或炎症性疾病的方法。例如本文所提及的一种或多种疾病或病态，该方法包括向需要这种治疗的温血哺乳动物(包括人)施用有效量的式Ⅰ的肽衍生物或其药学上的可接受的盐。本发明也提供了式Ⅰ的肽衍生物或其药学上可接受的盐在生产新药物上的用途，所说的新药物是用于治疗MHCⅡ类依赖性T-细胞介导的自身免疫或炎症性疾病的药物。
除了它们的以上所说的在人类治疗药物中的用途外，式Ⅰ的肽衍生物在兽医上治疗影响有商业价值的温血动物，如狗，猫，马和牛的类似的疾病上也是有用的。一般来说，对这样的治疗，将以与以上描述的施用于人的那些类似的用量和方式施用式Ⅰ的肽衍生物。式Ⅰ的肽衍生物在作为开发和标准化试验系统中的药理学工具或作为诊断试剂也有价值，所说的试验系统用于在实验动物，如猫，狗，兔，猴子，大鼠和小鼠中评价MHCⅡ类分子的作用，作为继续研究新的和改进的治疗剂工作的一部分。
现在由下列非限制性实施例说明本发明，其中，除非有其它方式的说明：-(ⅰ)浓缩和蒸发通过真空旋转蒸发进行；(ⅱ)操作在室温进行，即在18-26℃的范围内；(ⅲ)当给出产率时，仅仅是为了帮助读者阅读，并不是通过勤奋的开发所能获得的必然的最大产率；(ⅳ)使用了下列缩写：Phv=5-苯基戊酰基；Boc=叔丁氧羰基；tBu=叔丁基；DMF=N,N-二甲基甲酰胺；HOBT=1-羟基-苯并三唑；Met=甲硫氨酸；Fmoc=9-芴基甲氧羰基；Fmoc-Pip-OH=N-(9-芴基甲氧羰基)哌啶-4-羧酸；Fmoc-Papa-OH=4-[N-(9-芴基甲氧羰基)氨基]苯基乙酸；CbZ=苯氧羰基；Pmc=2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基；Pbf=2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基；THF=四氢呋喃；DMSO=二甲亚砜；HBTU=2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基尿翁六氟磷酸；DIPEA=二异丙基乙胺：TFA=三氟乙酸；Su是经由环氮原子连接的琥珀酰亚胺；HPLC=高压液相色谱；和RP-HPLC=反相高压液相色谱(除非有其它说明，在VydacC18柱218TP54,4.6×250mm上进行)；(ⅴ)闪式层析和二氧化硅上的层析在从EMerck,Darmstadt，德国获得的Kieselgel60(ArtNO.9385)上完成，(ⅵ)1HNMR谱是采用四甲基硅烷(TMS)作为内标，在CDCl3或d6-二甲亚砜(d6-DMSO)中200Mhz下测定的，并且以化学位移(δ)值(相对于TMS，每百万的份数)表示，采用常规缩写标明重要的峰：s，单峰；m，多重峰；t，三重峰；br，宽峰；d，双峰；(ⅶ)下列Fmoc-保护的氨基酸用于引入Lys,Thr,Arg或His残基：对于Lys:Fmoc-Lys(Boc)-OH；对于Thr:Fmoc-Thr(OBu)-OH；对于Arg:Fmoc-Arg(Pmc)-OH或Fmoc-Arg(Pbf)-OH；和对于His:Fmoc-His(Trt)-OH；(ⅷ)在实施例2中，当提及式Ⅲ时，意指其中Rb是甲基的式Ⅲ；(ⅸ)在实施例17和31中，当产物名称中使用术语“吗啉”时，意指吗啉通过成环氮原子连接到邻近的亚甲基团上；(ⅹ)在实施例18中和34中，当产物名称中使用式“N(CH2CH2)2N”时，其代表哌嗪环；和(ⅹⅰ)在实施例30中，当产物名称中使用式“-Lys=C(NMe2)2-”时，其代表L-氨基酸残基-HN-CH[CH2CH2CH2CH2N=C(NMe2)2-CO-。实施例1．制备Phv-Ala-Ala-Ala-Lys-Val-IIb-Ala-Pip- NH2(SEQIDNO:1)1.1 合成Boc-(D)-Met-(L)-Ala-OMe
Figure A9719246700321
将N-甲基吗啉(5.6g),L-丙氨酸甲酯盐酸盐(3.9g),HOBT(4.6g)和1-(3-二甲氨丙基)-3-乙基碳化二亚胺(5.3g)加入到在干燥的DMF(50ml)中的Boc-(D)-甲硫氨酸溶液(7g,0.028mol)中。将混合物搅拌过夜。通过蒸发除去溶剂，将残余物在二氯甲烷(100ml)和5％含水乙酸(50ml)之间分配。静置后HOBT结晶，并且经过滤除去，分离有机层，用含水碳酸氢钠洗涤，干燥(MgSO4)，并且蒸发。在烧结漏斗中经闪烁层析，用二氯甲烷和乙醚的混合物(0％-100％乙醚)纯化残余物(8.5g)。合并包含产物的组分，蒸发，给出Boc-(D)-Met-(L)-Ala-OMe(7.2g)，其为静置时结晶的胶状物：NMR(CDCl3):1.4(d.3H),1.45(s,9H),1.95(m,1H),2.1(s,1H),2.1(m,3H),2.6(m,2H),3.75(s,3H),4.3(bs,1H),4.6(m,1H),5.3(m,1H),6.9(bs.1H)。1.2 合成(2S)-2-[(3R)-3-(N-[叔丁氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]丙酸甲酯
Figure A9719246700331
注：这一序列必须在干燥的条件下用干燥的溶剂实施，否则会出现差向异构化。
将碘甲烷加入到在DMF(20ml)和二氯甲烷(20ml)混合物中的Boc-(D)-Met-(L)-Ala-OMe(8g)中，使混合物静置16小时，然后蒸发至干。进一步加入二氯甲烷(2×50ml)，并蒸发除去剩余的碘甲烷，将残余物溶解在DMF(300ml)和二氯甲烷(300ml)的混合物中。将混合物冷却至～5℃，将氢化钠(在矿物油中的80％分散液的0.76g)一次加入，在这一温度把混合搅拌2小时。加入饱和的氯化铵水溶液(50m1)，将混合物蒸发至干，然后在水和乙醚之间分配。乙醚提取物以盐水洗涤，并且干燥和蒸发，产生胶状物，由在烧结漏斗上的闪烁层析(25％乙酸乙酯：己烷到100％乙酸乙酯)纯化，给出(2S)-2-[(3R)-3-(N-[叔丁氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]丙酸甲酯胶状物，其静置时结晶：NMR(CDCl3):1.4(s,9H),1.4(d,3H),1.8(m,1H),2.6(m,1H),3.4(m,2H),3.7(m,3H),4.2(m,1H),4.9(q,1H),5.2(bs,1H)。1.3 合成(2S)-2-[(3R)-3-(N-[9-芴基甲氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]丙酸(Fmoc-IIb-OH)
将(2S)-2-[(3R)-3-(N-[叔丁氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]丙酸甲酯(4g)在丙酮(60ml)，水(40ml)和浓盐酸(24ml)的混合物中回流3小时，然后将混合物蒸发至干。加入水并重复蒸发。将残余物在水(15ml)中溶解，加入过量的固体碳酸氢钠。加入在丙酮(30ml)中的9-芴基甲基琥珀酰亚胺基碳酸盐(5.2g)。将混合物搅拌16小时，然后由蒸发除去溶剂，使残余物在水和乙醚之间分配。分离水层，用盐酸将其pH调整到～3，并且用二氯甲烷提取。有机层以水洗涤，干燥(MgSO4)，并且蒸发，给出一种白色泡沫，其在与乙醚研磨时结晶，产生(2S)-2-[(3R)-3-(N-[9-芴基甲氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]丙酸白色固体(4.29g):mp.191-3℃(分解)；NMR(CDCl3):1.4(d,3H),2.0(m,1H),2.6(m,1H),3.4(m,2H),4.2(t,1H),4.4(m,3H),4.9(m,1H),5.8(bs,1H),7.4(m,4H),7.6(d,2H),7.7(d,2H)。1.4 合成Phv-Ala-Ala-Ala-Lys-Val-IIb-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:1)
在BondElut管(Varian,15ml，在底部装有滤器)中，从FmocRink酰胺MBHA树脂(Novabiochem,0.50g,0.25mmoles)开始，用Fmoc固相合成法制备该肽。
(a)用在DMF中的20％哌啶溶液使树脂脱保护(5ml的两次处理，每次10分钟)。在脱保护后，以DMF充分洗涤(5×10ml)树脂。
(b)通过加入Fmoc-Pip-OH(353mg,1mmol),DMF(1.5ml),HOBT(165mg,1mmol)和二异丙基碳化二亚胺(155微升，1mmol)溶液进行酰化。使偶联进行大约30分钟，用DMF(5×10ml)洗涤，以小部分树脂采用Kaiser试验(E.Kaiser等，(1970)，生物化学年评，34,595)检查酰化的完全程度。
采用以下物质重复以上脱保护(a)和偶联循环(b)
Fmoc-Ala-OH                  (311mg,1mmol)；
Fmoc-IIb-OH                  (394mg,1mmol)；
Fmoc-Val-OH              (339mg,1mmol)；
Fmoc-Lys(Boc)-OH         (468mg,1mmol)；
Fmoc-Ala-OH              (311mg,1mmol)；
Fmoc-Ala-OH              (311mg,1mmol)；
Fmoc-Ala-OH              (311mg,1mmol)；和
5-苯基戊酸               (178mg,1mmol)；
在每一种情况之下，偶联的时间是大约30分钟，以小部分树脂采用Kaiser试验检查酰化的完全程度。苯基戊酸需要双倍量才能获得Kaiser试验的阳性结果。
用三氟乙酸(7.9ml)与三乙基硅烷(0.395ml)混合物从树脂上裂解下所说的肽。2小时之后树脂以二氯甲烷(大约150ml)洗涤，将得到的溶液蒸发至干。使形成的固体在乙醚(25ml)和水(25ml)之间分配，然后乙醚相用另外的水(2×25ml)进一步提取。合并水相并冻结干燥。
用制备型RP-HPLC(Vydac218TP1022柱，250mm×22mm)纯化粗产物，用含有200微升DMF的5ml20％乙腈/水使粗提品上样。以含有0.1％TFA的乙腈/水梯度液(15-35％乙腈)在80分钟内洗脱，流速为10ml/分钟。合并和冻结干燥包含产物的组分，给出Phv-Ala-Ala-Ala-Lys-Val-IIb-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:1)白色固体(84mmg；35％产率)。
HPLC、质谱和氨基酸分析确定产物的特征。
RP-HPLCVydacC18柱，218TP54,4.6×250mm，以含有0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0ml/分钟，显示100％纯度，保留时间为18.56分钟；质谱，m/e(正电喷射(ES+))954.6(MH+)；氨基酸分析(在130℃下用含有1％苯酚的6NHCl溶液酸水解24小时以上)给出(Ala+IIb)4.80,Val1.11,Lys1.07。
通过E.Atherton和R.C.Sheppard(“固相肽合成：一种实用方法”，IRL出版社，1989，第51页)描述的用于N-Fmoc-L-甲硫氨酸的方法类似的方法获得Fmoc-Pip-OH：
Fmoc-Pip-OH:NMR(DMSO-d6)1.3(m,2H),1.7(m.2H),2.5(m,2H),2.9(t2H),3.7(m,1H),4.2(t,1H),4.4(d,2H),7.4(m,4H).7.7(d,2H),7.9(d,2H)；质谱m/e(ES+)352.2(MH+)。
实施例2Phv-Ala-Ala-Ala-Lys-Val-III-Ala-Pip-NH2和分离异构体(SEQIDNO:2)2.1 合成(RS)-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酸
Figure A9719246700361
将在THF(20ml)中的N-苄氧羰基脯氨酸甲酯(13g)于-78℃在氮氛围下逐滴加入到在THF(100ml)中二异丙基酰胺锂(27.5ml，在己烷/THF中2M)中。将混合物搅拌30分钟，然后逐滴加入烯丙基碘化物(5.5ml)，进一步搅拌混合物30分钟，然后使其温热至室温。接着将混合物加入到氯化铵水溶液(200ml)中，并且以乙醚(2×200ml)提取。蒸发乙醚层，采用己烷增加至20％的乙酸乙酯：己烷梯度液，通过在二氧化硅上的层析纯化残渣。将合适的组分蒸发至干，给出(RS)-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酸甲酯(9g)油状物。
将这一物质8.5g溶解到甲醇(40ml)中，加入在水(20ml)中的氢氧化钠(4.5g)，将混合物回流60分钟。然后以浓盐酸将混合物的pH调节至7，由蒸发除去甲醇。将混合物的pH调节至3，接着用乙醚(2×50ml)提取混合物。蒸发合并的乙醚提取物，给出(RS)-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酸胶状物：
NMR(d6-DMSO(373K)):1.9(m,2H),2.1(m,2H),2.6(q,1H),2.9(q,1H),3.4(m,1H),3.6(m,1H),5.0(m,4H),5.75(m,1H),7.3(m,5H)。2.2)合成(RS)-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酰基]-(S)-丙氨酸甲酯
Figure A9719246700362
将HOBT(7.7g),N-甲基吗啉(6.6g),L-丙氨酸甲酯盐酸盐(4.5g)和1-(3-二甲氨丙基)-3-乙基-碳化二亚胺(5.7g)加入到在DMF(30ml)中的(RS)-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酸(6.5g)中，将混合物搅拌18小时，然后蒸发。使残余物在乙醚和水之间分配，过滤除去HOBt，分离有机层。将有机层蒸发，采用己烷中20％乙酸乙酯增加到己烷中50％乙酸乙酯的梯度液，在二氧化硅上层析纯化残余物。合并合适的组分并蒸发至干，产生[(RS))-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酰基]-(S)-丙氨酸甲酯(7g)；NMR(d6-DMSO(373K))：由于是非对映异构体混合物而为重叠峰，1.25和1.3(2d,3H),1.75(m,2H),2.2(m,2H),2.65(m,1H),2.9(m,1H),3.4(m,1H),3.65(2s,3H),3.7(m,1H),4.3(2q,1H),5.0(m,4H),5.7(m,1H),7.3(m,5H),7.4和7.5(bs,1H)。2.3 合成(S)-2-(1-苄氧羰基-6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4,4]壬-7-基)丙酸甲酯(CbZ-III-OMe)
将四氧化锇(4％水溶液1.5ml)加入到在甲醇(30ml)和水(20ml)混合物中的[(RS)-2-烯丙基-N-(苄氧羰基)脯氨酰基]-(S)-丙氨酸甲酯(1.45g)中。将混合物在氩氛围下搅拌10分钟，然后分几次加入过碘酸钠(2.45g)。搅拌混合物2小时，然后加入水(100ml)，以乙酸乙酯(2×70ml)提取混合物。干燥和蒸发合并的提取物，给出胶状物1.4g。将胶状物在二氯甲烷(30ml)和三乙基硅烷(0.65g)中溶解，然后逐滴加入三氟乙酸(4g)。将混合物搅拌3小时并蒸发，使残余物分配在碳酸氢钠水溶液和乙醚之间。分离乙醚提取物并蒸发至干。采用己烷中25％乙酸乙酯增加到100％乙酸乙酯的梯度液，在二氧化硅上层析纯化残余物。合并合适的组分并蒸发至干，产生(S)-2-(1-苄氧羰基-6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4,4]壬(non)-7-基)丙酸甲酯(0.8g)；NMR(D6-DMSO(373K)：一些峰加倍是由于非对映异构体混合物，1.25和1.35(2d,3H),1.95(m,6H),3.1-3.5(m,4H),3.6和3.65(2s,3H),4.5和4.65(2q,1H),5.05(m,2H),7.25(m,5H)。2.4 合成(S)-2-(6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]壬(non)-7-基)丙酸(H- III-OH)
Figure A9719246700381
将碳酸钾(2.5g)加入到在甲醇(40ml)和水(40ml)混合物中的(S)-2-(1-苄氧羰基-6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4,4]壬(non)-7-基)丙酸甲酯(3.3g)中。在室温搅拌混合物10小时。以浓盐酸将pH调节至～5,并且将混合物蒸发至干。将残余物溶解在水(40ml)中，用浓盐酸将pH调节至3。然后以二氯甲烷(2×50ml)提取混合物。干燥(MgSO4)合并的提取物，并且蒸发，产生一种泡沫(2.8g)。将泡沫在甲醇(20ml)中溶解，加入环己烯(0.7g)，其后加入10％Pd/C(0.5g)。将混合物回流2小时，冷却，过滤，并蒸发滤液，给出(S)-2-(6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]壬(non)-7-基)丙酸泡沫(1.9g)；NMR(d6-DMSO)：一些峰加倍是由于非对映异构体混合物，1.25和1.3(2s.3H),1.8(m,4H),2.0(m,2H),3.0(m,2H),3.3(m,2H),4.5(m,1H)。2.5 合成(S)-2-(1-(9-芴基甲氧羰基)-6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]t壬(non)-7-基]丙酸(Fmoc-III-OH)
Figure A9719246700382
将过量的固体碳酸氢钠加入到在水(2ml)中的(S)-2-(6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]壬(non)-7-基)丙酸(0.42g)中，然后加入在丙酮(3ml)中的9-芴基甲基琥珀酰亚胺基碳酸盐(0.7g)。将混合物搅拌18小时。然后将混合物加入水(10ml)中，用乙醚(10ml)提取，并分离水层。弃去乙醚提取物。以浓盐酸将水层的pH调节至～3，然后以二氯甲烷(2×10ml)提取。分离合并的提取物，干燥(MgSO4)并蒸发，给出(S)-2-(1-(9-芴基甲氧羰基)-6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]壬(non)-7-基]丙酸白色泡沫(0.62g)；NMR(d6-DMSO(373K))：一些峰加倍是由于非对映异构体混合物，1.3(2d,3H),1.6-2.0(m,6H),3.05(m,1H),3.2-3.45(m,3H),4.2-4.4(m,1H),4.5(m,1H),6.2(s,2H),7.35(m,4H),7.8(m,4H)。2.6 合成Phv-Ala-Ala-Ala-Lys-Val-III-Ala-Pip-NH2和分离异构体(SEQIDNO:2)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法完成合成的第一部分，但用Fmoc-III-OH替代Fmoc-IIb-OH。在这种情况下，通过用下列方法活化酸完成酰化：酸(1mmol),HBTU(1mmol)，二异丙基乙胺(2mmol)，DMF(4ml)。在不到45分钟之后，Kaiser试验显示所有偶联都是完全的。这一方法用来给出Fmoc-Val-III-Ala-Pip-NH-树脂。然后将肽树脂转移到ABI431自动肽合成仪中，此时，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法(如下)条件偶联序列中剩下的残基。在脱保护之后，树脂以DMF洗涤(10×10-20ml)。在转移到树脂上之前，用在DMF中的HBTU(1当量)，HOBT(当量)和DIPEA(2当量)活化羧酸(1mmol)约11分钟。使酰化进行大约60分钟，然后树脂以DMF洗涤(10×10-20ml)。在每一阶段用在DMF中的20％哌啶溶液(两次用5ml处理，每次10分钟)进行Fmoc脱保护。在每一次脱保护之后，树脂以DMF充分洗涤(5×10ml)。
通过用三氟乙酸(TFA)，三乙基硅烷(TES)和水(10ml,90∶5∶5)处理1.5小时从树脂上裂解下肽。将树脂滤掉，用TFA充分洗涤。经旋转蒸发将所收集的滤液浓缩至干，然后将所得到的残渣与乙醚一起研磨，产生Phv-Ala-Ala-Ala-Lys-Val-III-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:2)，其含有两个主要的组分(RP-HPLC(Vydac218TP54C18柱)分析显示为52∶48的混合物)。在1毫升/分钟的流速下，20分钟内的20-50％梯度的乙腈∶水(含有0.1％TFA)洗脱中，极性较大的非对映体具有12.5分钟的保留时间，极性较小的非对映体具有16.5分钟的保留时间。基本上如实施例1.4所述，进一步经制备型RP-HPLC纯化肽，给出两个不同的组分，由RP-HPLC检测，两个组分的纯度都大于95％。在试验A和B中，极性较大的非对映体比极性较小的非对映体更有效，前者具有以下特征：
RP-HPLG(20分钟内的20-50％乙腈梯度，流速1毫升/分钟)保留时间=12.3分钟；质谱，m/e(ES+)994.5(MH+)；氨基酸分析给出Ala3.99,Lys1.20,Val0.73。实施例3Phv-Ala-Lys-Ala-IIb-Ala-Ala-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:3)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成和进行纯化，以合适的次序使Fmoc-保护的氨基酸与Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用20分钟内的25-40％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=5.56分钟；质谱，m/e(ES+)926.5(MH+)：氨基酸分析给出(Ala+IIb)5.87,Lys1.12。实施例4Phv-Ile-Ala-Ala-Arg-Thr-Ilb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:4)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成和进行纯化，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的20-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=17.08分钟；质谱，m/e(ES+)1048.7(MH+)：氨基酸分析给出Arg0.98,Ala3.00,IIb1.27,Thr0.86,Ile0.88。
通过E.Atherton和R.C.Sheppard(“固相肽合成：一种实用方法”,IRL出版社，1989，第51页)描述的用于N-Fmoc-L-甲硫氨酸的方法类似的方法获得Fmoc-Papa-OH：
Fmoc-Papa-OH:NMR(DMSO-d6,)3.5(s,2H),4.25(t,1H),4.5(d,2H),7.1(d,2H),7.4(m,6H),7.75(d,2H),7.9(d,2H),9.6(s,1H)；质谱m/e(ES-)372.1(M-H)-。实施例5Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Val-IIb-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:5)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成，以合适的次序使Fmoc-保护的氨基酸与Fmoc-IIb-OH偶联脱保护。以与实施例1.4所述的方式类似的方式用制备型RP-HPLC纯化产物，由包含0.1％TFA的乙腈-水梯度液(15-40％乙腈)60分钟内洗脱，流速10毫升/分钟。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=18.28分钟；质谱，m/e(ES+)982.5(MH+)：氨基酸分析给出Arg1.12,(Ala+IIb)3.8,Val1.12。实施例6Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:6)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成的第一部分，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，以产生Fmoc-Thr(OBu)-IIb.Ala-Papa-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ACT357)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。从树脂上裂解下肽，以与实施例1.4所述的方式类似的方式用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=18.21分钟；质谱，m/e(ES+)1006.4(MH+)：氨基酸分析给出Arg1.10,Ala3.88,IIb1.04,Thr0.95。实施例7Phv-Ala-Ala-Ala-Arg-Val-IIb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:7)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成的第一部分，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，以产生Fmoc-Val-IIb-Ala-Papa-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方式类似的方式从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=20.87分钟；质谱，m/e(ES+)1004.6(MH+)：氨基酸分析给出Arg0.96,(Ala+IIb)5.05,Val0.97。实施例8Phv-Ala-Arg-Ala-Arg-Val-IIb-Gly-Papa-NH2(SEQIDNO:8)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成的第一部分，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，以产生Fmoc-Val-IIb-Gly-Papa-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方式类似的方式从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=18.12分钟；质谱，m/e(ES+)538.4(M+2H++)：氨基酸分析给出Arg0.92,Ala2.16.(Gly+IIb)2.12,Val0.88。实施例9Phv-Ala-Ile-Ala-Arg-Val-IIb-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:9)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成和进行纯化，以合适的次序使Fmoc-保护的氨基酸与Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=23.4分钟；质谱，m/e(ES+)1024.6(MH+)：氨基酸分析给出Arg1.15,(Ala+IIb)3.88,Val0.96,Ile1.02。实施例10Phv-Ala-Arg-A1a-His-Val-IIb-A1a-Papa-NH2(SEQIDNO:10)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成的第一部分，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，以产生Fmoc-Val-IIb-Ala-Papa-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方式类似的方式从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的20-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=18.8分钟；质谱，m/e(ES+)1070.6(MH+)：氨基酸分析给出Arg1.02,(Aia+IIb)4.12,Val0.90,His0.95。实施例11Phv-Ala-Ala-Asn-Arg-Val-IIb-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:11)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成的第一部分，以合适的次序使Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，以产生Fmoc-IIb-Ala-Pip-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方式类似的方式从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=17.66分钟；质谱，m/e(ES+)1025.5(MH+)：氨基酸分析给出Arg1.04,Ala2.94,Val0.95,Asp1.05。实施例12Phv-Ala-Arg-Ala-IIb-Ala-Ala-Ala-Pip-NH2(SEQIDNO:12)
用与实施例2.6所描述的方法类似的方法在ABI431自动合成仪上自动进行合成的第一部分，以合适的次序偶联Fmoc-保护的氨基酸，以产生Fmoc-Ala-Ala-Pip-NH-树脂。剩下的合成人工进行。以与实施例1.4所述的方法类似的方法用制备型RP-HPLC纯化产物。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=16.68分钟；质谱，m/e(ES+)954.6(MH+)；氨基酸分析给出Arg1.09,(Ala+IIb)5.88。实施例13Phv-Ala-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NH(CH2)3NH·C(=NH)·NH2(SEQIDNO:14)(a)制备Phv-Ala-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NH(CH2)3NH2(SEQIDNO:13)
通过在室温下与在DMF(4ml)中的1,3-二氨基丙烷(0.42ml)反应1小时，将2-氯三苯甲基氯化物树脂(0.4g，可用氯大约0.25mmole)转变成(3-氨基丙基)氨基-树脂，用DMF充分洗涤后，将该树脂转移到AppliedBiosystems430A肽合成仪上，按照制造商推荐的条件进行合适保护的氨基酸顺序偶联和脱保护。然后用甲醇洗涤树脂并干燥(0.722g)。从树脂上裂解下肽，以与实施例2.6所述的方法类似的方法用制备型RP-HPLC纯化产物。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=17.76分钟。由此获得Ahv-Ala-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NH(CH2)3NH2(SEQIDN0:13)(冻干后获得329mg)；质谱，m/e(ES+)916.5(MH+)。(b)制备Phv-Ala-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NH(CH2)3NH·C(=NH)·NH2(SEQIDNO:14)
将Phv-Ala-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NH(CH2)3NH2(SEQIDNO:13)(329mg)溶解到水(5ml)和乙腈(5ml)混合物中，加入1-H-吡唑-1-羧脒氢氯化物(132mg,3当量)和二异丙基乙胺(52微升，1当量)。在室温下搅拌混合物4天。以与实施例1.4所述的方法类似的方法用制备型RP-HPLC纯化混合物，并且经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征，由此获得Phy-Ala-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NH(CH2)3NH.C(=NH)·NH2(SEQIDNO:14)(178mg)；RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=18.42分钟；质谱，m/e(ES+)958.5(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.86,Gly0.90,Ala3.20,Arg1.00。实施例14Phv-Ala-Arg-Ala-Arg-Thr-IIb-Gly-NHEt(SEQIDNO:15)
从Boc-Gly-O-苄基酯树脂(Merrifield树脂)(0.54g,0.25mmole)开始，在AppliedBiosystems430A合成仪上进行合成的第一部分，并且按照制造商推荐的条件使适当保护的氨基酸顺序偶联和脱保护。树脂以甲醇洗涤，并且干燥(871mg)，然后在室温下与DMF(10ml)和在甲醇(10ml)中的2M乙胺一起轻轻搅拌7天。RP-HPLC分析表明迅速将甲基酯释放进溶液中，其后缓慢地转变为稍微更亲水的N-乙基酰胺。过滤混合物，以DMF洗涤树脂。蒸发溶剂，产生粗的为N-乙基酰胺的保护肽。用TFA,TES和水(90∶5∶5)的混合物使肽脱保护，采用与实施例2.6中所描述的类似的方法经制备型RP-HPLC纯化，得到Phv-Ala-Arg-Ala-Arg-Thr-IIb-Gly-NHEt(SEQIDNO:15)(168mg)。以与实施例1.4所述的方法类似的方法经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征；RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=17.85分钟；质谱，m/e(ES+)972.5(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.83,Gly1.03.Ala2.17,IIb0.9,Arg2.00。实施例15和16Phv-Gap-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(实施例15)(SEQIDNO:16)Phv-Gap(Me)4-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(实施例16)(SEQIDNO:17)(a)制备Phv-Dap-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:36)
用FmocRink酰胺树脂(0.25mmole)，在AppliedBiosystems430A合成仪上自动完成合成，并且按照制造商推荐的条件使适当保护的氨基酸顺序偶联和脱保护。在合成的适当阶段用Fmoc-Dap(Boc)-OH掺入Dap残基。干燥所完成的树脂。产率1.292g(重量增加，792mg)。从树脂上裂解下肽，以与实施例1.4所述的方法类似的方法用制备型RP-HPLC纯化。但是采用Dynamax60A柱(一英寸内径)，用包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用60分钟内的10-40％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)，产生Phv-Dap-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:36)(304mg)。以与实施例1.4所述的方法类似的方法经HPLC和质谱确定产物的特征；RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用40分钟内的10-40％乙腈梯度，流速12毫升/分钟)保留时间=24.5分钟；质谱，m/e(ES+)937.1(MH+)。(b)将(a)的Dap肽溶解在水(7ml)和乙腈(5ml)中，并且在室温下用1-H-吡唑-1-羧脒盐酸盐(130mg)和二异丙基乙胺(53微升)处理1周。RP-HPLC分析表明仅40％转变成为对应的Gap肽。尝试的制备型RP-HPLC不能完全分离两个化合物。因此，混合物在DMF(50ml)中用HBTU(87mg)和二异丙基乙胺(50微升)处理16小时，以将未改变的Dap肽转化成为四甲基胍(GapMe4)肽。这一化合物的额外的疏水性使制备性HPLC更容易(条件如(a)中所述)。采用在以上(a)中所描述的那些条件相同的条件下进行。产生(ⅰ)Phv-Gap-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:16)(80mg)，以与实施例1.4所述的方法类似的方法经HPLC，质谱和氨基酸分析确定其特征；RP-HPLC(40分钟内的10-40％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=26.2分钟；质谱，m/e(ES+)978.5(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.90,Ala4.05,IIb存在，峰在Gap的Trp位置。和(ⅱ)Phv-Gap(Me)4-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Pap-NH2(122mg)(SEQIDNO:17)，如以上(ⅰ)确定其特征；RP-HPLC(如以上(ⅰ)的洗脱液和梯度)保留时间=28.4分钟；质谱，m/e(ES+)1034.6(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.90,Ala4.11,IIb存在，峰在Gap(Me)4的Trp位置。实施例17Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-NHCH2CH2-吗啉(SEQIDNO:18)
采用保护片段策略。通过在N-二异丙基乙胺(4mmol)存在下将Fmoc-Gly-OH(2mmol)与2-氯三苯甲基氯化物树脂(1g,1mmol在DMF(10ml)中偶联，在AppliedBiosystems430A合成仪上自动制备Fmoc-Gly-O-氯三苯甲基树脂(1mmol,1g)，并且通过双偶联策略(以与实施例2.6中所描述的类似的方式)延长，产生保护的肽树脂(2.15g)。在室温下用二氯甲烷(30ml)，乙酸(5ml)和三氟乙醇(5ml)从树脂上裂解1小时后，滤掉树脂，并且以二氯甲烷和乙酸洗涤。蒸发溶剂，接着从含水乙腈冻干，产生所需的保护的肽酸(1.23g)。以与实施例1.4中所描述类似的方式确定该肽的特征；RP-HPLC(40分钟内20-80％乙腈梯度，流速1.2ml/分钟)保留时间=26.2分钟。
用HBTU(76mg,1当量)和二异丙基乙胺(70微升)在DMF(10ml)中将保护的酸(235mg,0.2mmol)偶联到4-(2-氨基乙基)吗啉(27微升，1当量)上。用与实施例1.4中所描述方法类似的方法，蒸发溶剂，用90％TFA/H20脱保护并纯化，产生纯化的酰胺(150mg)。以与实施例1.4所述的方法类似的方法经HPLC，质谱和氨基酸分析确定肽的特征；RP-HPLC(40分钟内的10-40％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=18.6分钟；质谱，m/e(ES+)972.8(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.6,Gly1.02,Ala2.94,IIb0.9,Arg1.00。实施例18Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-N(CH2CH2)2NCH2CH2O-CH2CH2OH(SEQIDNQ:19)
采用与实施例17中描述方法类似的方法，但是用4-[2-(2-羟乙氧基)乙基]哌嗪替代4-(2-氨基乙基)吗啉，由此获得Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-N(CH2CH2)2NCH2CH2O-CH2CH2OH(SEQIDNO:19)。以与实施例1.4所述的方法类似的方法经HPLC，质谱和氨基酸分析确定该肽的特征；RP-HPLC(采用实施例17中所使用的洗脱液和梯度)保留时间=20.5分钟；质谱，m/e(ES+)1016.8(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.89,Gly1.02,Ala2.98,IIb1.05,Arg1.00。实施例19Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Gly-Pape- NHC(=NH)NH2(SEQIDNO:20)
采用与实施例17中描述方法类似的方法，但是用4-(2-胍乙基)苯胺替代4-(2-氨基乙基)吗啉，由此获得Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr- IIb-Gly-Pape-NHC(=NH)NH2(SEQIDNO:20)。采用与实施例1.4中所描述的类似的方式经制备型HPLC纯化该肽，但是使用Vydac201HS1022柱(一英寸内径)，以12ml/分钟的流速，用包含0.1％TFA的乙腈-水梯度液(10-35％乙腈)在60分钟内洗脱。经HPLC，质谱和氨基酸分析确定该肽的特征；RP-HPLC(采用实施例17中所使用的洗脱液和梯度)保留时间=24.2分钟；质谱，m/e(ES+)1021.1(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.8,Gly0.95,Ala2.86,Arg1.00,IIb存在。
4-(2-胍乙基)苯胺二氢氯化物按如下制备。室温下在乙腈(10ml)和水(10ml)中将4-硝基苯乙胺盐酸盐(1.013g,5mmol),1H-吡唑-1-羧脒盐酸盐0.733g,5mmol和N-二异丙基乙胺(0.88ml,5mmol)搅拌16小时。用Dynamax60AC18柱(一英寸内径)以两份进行制备型RP-HPLC,用包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱。产生纯化的4-硝基苯乙基胍。将产物溶解在水(100ml)中，加入一滴浓盐酸，其后加入5％钯/碳(100mg)，使氢气泡通过溶液4小时。通过过滤除去催化剂，并且以水洗涤。由蒸发除去易挥发的材料，给出4-(2-胍乙基)苯胺二氢氯化物棕色泡沫(0.984g)(用氢氧化钾小球干燥后)。实施例20Phv-Ala-Ala-Ala-Arg-Thr-IIb-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:21)
用与实施例2.6所描述的方法类似的方法，用HBTU/DIPEA活化，人工完成合成的第一部分，以合适的次序使Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，以产生Fmoc-IIb-Ala-Papa-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方式类似的方式从树脂上裂解下肽并纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用20分钟内的20-40％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=11.57分钟；质谱，m/e(ES+)1006.4(MH+),503.8(M+2H++),514.8(M+H++Na+)：氨基酸分析给出Ala4.19,Arg0.91,Thr0.74。实施例21Phv-Ala-Arg-Ala-Arg-Thr-IIb-Azgly-Papa- NH2(SEQIDNO:22)
用与实施例2.6所描述的方法类似的方法，用HBTU/DIPEA活化，人工完成合成的第一部分，以合适的次序和使Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护，除了掺入Azgly残基外。通过于50℃下在DMF中用HOBT(0.25当量)与Fmoc-Azgly-OSu(如在EP518655中获得的)(4当量)偶联4小时掺入Azgly残基，由此获得Fmoc-IIb-AzGly-Papa-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方式类似的方式从树脂上裂解下肽纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用20分钟内的15-35％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=8.10分钟；质谱，m/e(负电喷射)(ES-))1076.4(MH-)，氨基酸分析给出Ala2.10,Arg2.00,Thr0.99。实施例22Phv-Ala-Arg-Ala-Arg-Thr-IIb-Azgly-NH2(SEQIDNO:23)
使用与实施例21中所描述的方法类似的方法。用HBTU/DIPEA活化，人工完成合成的第一部分，给出Fmoc-IIb-Azgly-NH-树脂。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431A)上，按照制造商推荐的用于掺入HBTU/HOBT的单酰化化学法条件偶联序列中剩下的残基。以与实施例2.6所述的方法类似的方法从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用20分钟内的20-35％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=7.26分钟；质谱，m/e(ES+)945.6(MH+),473.4(M+2H++)；氨基酸分析给出Ala2.08,Arg2.00,Thr0.78。实施例23Phv-Ala-Arg-Ala-IIb-Ala-Arg-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:24)
除了采用HBTU/DIPEA活化人工完成全部肽装配，以合适的次序偶联Fmoc-Papa-OH,Fmoc-Ala-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-IIb-OH和5-苯基戊酸外，使用与实施例2.6描述的类似的方法。用类似于实施例2.6中所描述的方法从树脂上裂解下肽，以与实施例1.4中所描述的方式类似的方式用制备型RP-HPLC纯化，用包含0.1％TFA的乙腈-水梯度液(15-30％乙腈)在90分钟内洗脱，流速10ml/分钟。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的15-30％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=20.02分钟；质谱，m/e(ES+)1061.6(MH+),531.4(M+2H++)；氨基酸分析给出Ala4.16,Arg2.00,IIb存在。实施例243-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酰基-Ala-Arg-Ala-IIb-Ala-Arg-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:25)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成和进行纯化，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。并且用3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酸代替5-苯基戊酸。以与实施例1.4中所描述的方式类似的方式用制备型RP-HPLC纯化，用包含0.1％TFA的乙腈-水梯度液(15-40％乙腈)在60分钟内洗脱，流速10ml/分钟。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=17.58分钟；质谱，m/e(ES+)1114.7(MH+)；氨基酸分析给出Arg2.86,Ala4.12,IIb1.00。
按照以下所述获得3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酸：
(a)于60℃将兰尼氏镍(1g)和肼水合物(3ml)加入到在乙醇(500ml)中的5-硝基苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(25g)(如Syn.Comm.,(1991),21,959-964中所描述的方法获得)中。随后发生剧烈反应，回流混合物。以10分钟的间隙再加入几份兰尼氏镍(1g)和肼水合物(3ml)，直到总共加入15ml，然后回流混合物90分钟。将热的混合物过滤，并蒸发滤液。将残余物溶解在热的乙醇(300ml)中，向其中加入活性炭。过滤混合物，将滤液蒸发至干，给出5-氨基苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(18g)淡黄色固体。在～0℃下将该固体加入到浓盐酸(50ml)和水(130ml)的搅拌混合物中。缓慢地加入亚硝酸钠(5.6g)水(20ml)溶液，接着在0℃下进一步搅拌混合物30分钟。然后缓慢地加入碘化钾(130g)水(200ml)溶液。使混合物温热至室温，并且在50℃加热30分钟。使混合物冷却，以氯仿(150ml)提取，用焦亚硫酸钠溶液洗涤有机层。干燥(MgSO4)有机层，并且蒸发至给出棕色油状物。采用己烷增加至10％的乙酸乙酯/己烷梯度液通过硅胶层析纯化该油状物。合并适当的组分，并蒸发至给出5-碘代苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(14g)油状物；NMR(d6-DMSO):1.35(t,3H),4.4(q,2H),7.8(dd,1H),7.9(d,1H),8.15(s,1H),8.45(d,1H)。(b)将氢氧化钠(5g)水(150ml)溶液加入到在乙醇(200ml)中的5-碘代苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(14g)中，将混合物搅拌16小时。通过蒸发将混合物浓缩至约150ml，由加入稀盐酸将混合物的pH值调节至3。然后以二乙醚提取(2×100ml)混合物。干燥(MgSO4)合并的有机提取物，并且蒸发，给出5-碘代苯并[b]噻吩-2-羧酸(11.7g)固体；NMR(d6-DMSO):7.8(dd,1H),7.9(d,1H),8.05(s,1H),8.45(d,1H)。(c)将草酰氯(2.7ml)和DMF(1滴)加入到在二氯甲烷(30ml)中的5-碘代苯并[b]噻吩-2-羧酸(3.05g)中，此时开始产生气体。在气体产生停止之后，将混合物蒸发至干，使残余物在THF(10ml)中溶解。将溶液分成几份加入到浓氨水(25ml)中。在加入完全之后，将混合物搅拌1小时。由过滤收集沉淀的固体，以水洗涤，并且在真空下干燥。将固体(3g)溶解在DMF(15ml)中，在0℃下将该混合物加入到DMF(20ml)和磷酰氯(3g)的混合物中。将混合物搅拌2小时。然后把混合物加入到水(60ml)中，通过过滤收集沉淀的固体，以水洗涤，并且在真空下干燥，给出2-氰基-5-碘代苯并[b]噻吩(2.65g)淡黄色粉末；NMR(d6-DMSO):7.9(dd,1H),8.0(d,1H),8.3(s,1H),8.45(d,1H)。(d)将丙烯酸甲酯(2g)，三乙胺(2.35g)和乙酸钯(0.05g)加入到在DMF(25ml)中的2-氰基-5-碘代苯并[b]噻吩(4.8g)中，在氩氛围下90℃搅拌混合物30分钟。使混合物冷却，然后加入水(50ml)中。通过过滤收集沉淀的固体，并且溶解在氯仿中。加入活性炭，过滤混合物并干燥滤液(MgSO4)。通过蒸发除去溶剂，给出3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙烯酸甲酯(2.5g)；NMR(d6-DMSO):3.75(s,3H),6.7(d,1H),7.8(d,1H),8.0(dd,1H),8.2(d,1H),8.3(d,1H),8.85(s,1H)。(e)用10％钯/碳(0.5g)为催化剂在THF(20ml)中氢化3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙烯酸甲酯(2.5g)。直到大多数起始物质在薄层层析(用乙酸乙酯/己烷1∶4洗脱二氧化硅板)中消失。过滤混合物并蒸发，给出2-氰基苯并[b]噻吩-5-丙酸甲酯(1.45g)，其含有～20％的起始物质。将氢氧化钠(0.23g)加入到在THF(10ml)和水(3ml)中的这一产物(1.4g)的混合物中，将混合物搅拌2小时。混合物以浓盐酸调节至～pH5，并且由蒸发浓缩除去存在的THF。然后以浓盐酸将混合物的pH调节至～pH3，用二氯甲烷提取混合物。干燥提取物(MgSO4)，并且蒸发。采用C18柱和40％甲醇/水增加到75％甲醇/水的梯度液通过反相层析纯化残渣。合并适当的组分并蒸发，给出2-氰基苯并[b]噻吩-5-丙酸(0.28g)白色固体；NMR(CDCl3):2.88(t,2H),3.1(t,2H),7.4(d,1H),7.75(s,1H),7.8(d,1H),7.85(s,1H)。实施例25Phv-Arg-Ala-Ala-IIb-Ala-Arg-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:26)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成和进行纯化，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=17.45分钟；质谱，m/e(ES+)1061.9(MH+)；氨基酸分析给出Arg1.94,Ala4.04,IIb1.02．实施例26Phv-Arg-Ile-Ala-IIb-Ala-Arg-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:27)
除了人工掺入Fmoc-IIb-OH外，用与实施例2.6所描述的方法类似的方法在自动合成仪(ABI431)上进行自动合成，以合适的次序偶联Fmoc-Papa-OH和Fmoc-保护的氨基酸脱保护。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=20.7分钟；质谱，m/e(ES+)1103.8(MH+)；氨基酸分析给出Arg1.92,Ala3.03,IIb0.96,Ile1.08。实施例27Phv-Ile-Arg-Ala-IIb-Leu-Arg-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:28)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成和进行纯化，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用30分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=23.8分钟；质谱，m/e(ES+)1145.7(MH+)；氨基酸分析给出Arg1.98,Ala1.92,Leu0.99,Ile1.09,IIb存在。实施例28Phv-Ala-Arg-Ala-IIc-Ala-Ala-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:29)
用与实施例1.4所描述的方法类似的方法人工完成合成，以合适的次序使Fmoc-Papa-OH(用于代替Fmoc-Pip-OH),Fmoc-保护的氨基酸和Fmoc-IIb-OH偶联和脱保护。产物不需要经制备型HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用20分钟内的20-40％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=10.45分钟；质谱，m/e(ES+)962.5(MH+),492.8(M+H+Na)++；氨基酸分析给出Ala4.90,Arg1.00,IIc存在。
用与实施例1中所描述的制备Fmoc-IIb-OH的方法类似的方法获得Fmoc-IIc-OH，但是在步骤1.1中用甘氨酸甲酯盐酸盐替代L-丙氨酸甲酯盐酸盐。获得下列中间体：Boc-(D)-Met-Gly-OMe；80％产率；NMR(CDCl3):1.4d(s,9H),2.0d(m,1H),2.1d(m,1H),2.1d(s,3H),2.6d(t,2H),3.8d(s,3H),4.0Sd(m,2H),4.4d(m,1H),5.3d(bs,1H),6.8d(bs,1H)；2-[(3R)-3-(N-[叔丁氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷-1-基]乙酸甲酯；50％产率；NMR(CDCl3):1.45d(s,9H),2.0d(m,1H),2.6d(m,1H),3.4d(m,2H),3.8d(s,3H),4.0Sd(q,2H),4.1d(m,1H),5.55(bs,1H)；2-[(3R)-3-(N-[9-芴基甲氧羰基]氨基)-2-氧代-吡咯烷010基乙酸；75％产率；NMR(d6-DMSO):1.9d(m,1H),2.3d(m,1H),3.3d(m,2H),4.0d(q,2H),4.3d(m,4H),7.4d(m,4H).7.6d(m,2H),7.9d(d,2H)。实施例29Phv-Arg-Ala-Ala-IIb-Ala-Ala-Ala-Papa-NH2(SEQIDNO:30)
除了Fmoc-IIb-OH人工掺入外，在ACT 357自动肽合成仪上进行自动合成(采用Rink酰胺树脂)，以适当的顺序偶联Fmoc-Papa-OH与Fmoc-保护的氨基酸。通过在转移到树脂上之前，在DMF中用二异丙基碳化二亚胺(1当量)和HOBT(1当量)活化羧酸(1mmol)11分钟，按照制造商推荐的用于单酰化的条件完成自动偶联。使酰化进行大约60分钟，以类似实施例2.6所描述的方法进行洗涤和脱保护过程。在BondElut管中用HBTU/HOBT化学法进行Fmoc-IIb-OH的人工偶联。5-苯基戊酸需要双偶联才能获得Kaiser试验的阳性结果。然后用类似于实施例1.4中所描述的方法从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(由包含0.1％TFA的乙腈和水洗脱，采用15分钟内的20-35％乙腈梯度，流速1.0毫升/分钟)保留时间=10.33分钟；质谱，m/e(ES+)976.5(MH+),499.9(M+H+Na)++；氨基酸分析给出Ala5.02,Arg1.00,IIb1.22。实施例30Phv-Lys(=C(NMe2)2)-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa- NH2(SEQIDNO:31)
用与实施例15(a)中所描述的类似的方法，但是用Fmoc-Lys(Boc)-OH替代Fmoc-Dap(Boc)-OH，在从树脂上裂解下肽并用制备型RP-HPLC纯化后，获得Phv-Lys-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa- NH2(270mg)。然后将该肽(270mg)在HBTU(94mg)，二异丙基乙胺(88微升)和DMF(50ml)的混合物中搅拌16小时的。用与实施例15(a)中所描述的类似的方法蒸发混合物并由制备型RP-HPLC纯化。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(40分钟内的10-40％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=29.83分钟；质谱，m/e(ES+)1077.27(MH+)；氨基酸分析给出Thr1.0,Ala4.3,Arg1.00,IIb存在；四甲基高精氨酸存在。实施例31-33Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NHCH2CH2吗啉(实施例31)(SEQIDNO:32)Phv-Arg-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-OCH3(实施例32)(SEQIDNO:33)
Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-OH(实施例33)(SEQIDNO:34)
于室温下在DMF(5ml)和二氯甲烷(20ml)中将羟甲基聚苯乙烯树脂(1.67g,1mmol)与Fmoc-Papa-OH(1.5g,4mmol)，二异丙基碳化二亚胺(0.628m14mmol)和二甲氨基吡啶(61mg,0.5mmol)一起搅拌2小时。过滤树脂，以DMF(5×20ml)和甲醇(5×20ml)洗涤，并且在40℃下真空干燥(产量2.105g)。然后将肽树脂转移到自动合成仪(ABI431A)上，以与实施例2.6中所述类似的方式偶联剩下的Fmoc-保护的氨基酸，给出保护的肽树脂(2.992g)。然后将肽树脂悬浮在DMF(10ml)和甲醇(10ml)和4-(2-氨基乙基)吗啉(0.88ml)的混合物中，随后加入催化量的氰化钾(50mg)。在室温下7天之后，过滤混合物，以DMF(5×20ml)洗涤树脂。立即将树脂重悬于DMF(10ml)，甲醇(10ml)和氰化钾(50mg)的混合物中。在4天之后，过滤混合物，以DMF(5×20ml)洗涤树脂。合并两次处理的所有滤液和洗涤液，并蒸发至干。在用90％TFA/H2O脱保护和蒸发除去易挥发的物质之后，采用与实施例1.4中所描述的类似的方法经制备型RP-HPLC纯化残余物，给出3种产品。各产品具有以下特征：Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-NHCH2CH2-吗啉(SEQIDNO:32)(40mg)；
RP-HPLC(40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2ml/分钟)保留时间=19.5分钟；质谱，m/e(ES+)1119.8(MH)+；氨基酸分析给出Thr0.58,Ala3.84,Arg1.16,IIb1.00；Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-OMe(SEQIDNO:33)(37mg)；
RP-HPLC(40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2ml/分钟)保留时间=27.7分钟；质谱，m/e(ES+)1021.6(MH)+；氨基酸分析给出Thr0.61,Ala3.80,Arg1.22,IIb0.97；Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-OH(SEQIDNO:34)(155mg)；
RP-HPLC(40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2ml/分钟)保留时间=24.2分钟；质谱，m/e(ES+)1007.5(MH)+；氨基酸分析给出Thr0.62,Ala3.78,Arg1.20,IIb0.98。实施例34Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-N(CH2CH2)2N-(CH2)2O(CH2)2OH(SEQIDNO:35)
将4-[2-(2-羟乙氧基)乙基]哌嗪(235mg)加入到Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-OH(135mg),HBTU(51mg),DIPEA(47微升)和DMF(10ml)的混合物中，搅拌混合物60分钟。蒸发除去易挥发的物质，用与实施例1.4所描述的类似的方法经制备型HPLC纯化残余物，给出Phv-Arg-Ala-Ala-Ala-Thr-IIb-Ala-Papa-N(CH2CH2)2NCH2CH2-OCH2CH2OH(SEQIDNO:34)(115mg)。以与实施例1.4所描述的方式类似的方式经HPLC，质谱和氨基酸分析确定产物的特征：RP-HPLC(用含有0.1％TFA的乙腈和水洗脱，40分钟内的10-50％乙腈梯度，流速1.2毫升/分钟)保留时间=18.83分钟；质谱，m/e(ES+)1163.8(MH+)；氨基酸分析给出Thr0.62,Ala3.80,Arg1.22,IIb0.97。实施例35
本发明的化合物可以为了治疗和预防用途以常规药物组合物的形式施用于温血动物，如人，这种组合物的一个典型的例子包括：-可注射的溶液
将0.01至100mg活性组分溶解在高达2ml的含水注射载体中，得到0.01至100mg/ml之间的活性组分浓度。所说的含水注射载体用一种药学上可接受的缓冲液(例如磷酸盐或乙酸盐缓冲液)将pH值缓冲至5和8之间，并且含有一种加入以获得等张性的药学上可接受的张力调节剂(例如，氯化钠或葡萄糖)。所说的载体可以含有也可以不合有其它药学上可接受的赋形剂，例如增溶剂(如DMSO，乙醇，丙二醇或聚乙二醇)、防腐剂和抗氧化剂。活性组分典型地可以是在上文中所描述的例子，并且可以方便地以一种药学上可接受的盐的形式存在。P-R1-R2-R3-R4  Ⅰ
Figure A9719246700561
                                序列表(1)一般信息：
(ⅰ)申请人：
    (A)名称：ZENECALIMITED
    (B)街道：15STANHOPEGATE
    (C)城市：伦敦
    (E)国家：联合王国
    (F)邮区代码(ZIP):W1Y6LN
    (G)电话：01713045000
    (H)传真：01713045151
    (I)电传：01718342042
(ⅱ)发明名称：肽衍生物
(ⅲ)序列数：36
(ⅳ)计算机可读形式：
    (A)介质类型：软盘
    (B)计算机：IBMPC兼容机
    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
    (D)软件：PatentInRelease#1.0,#1.30版(EPO)
(ⅵ)在先申请的数据：
    (A)申请号：GB9603855.9
    (B)申请日：1996年2月23日
(ⅵ)在先申请的数据：
    (A)申请号：GB9620819.4
    (B)申请日：1996年10月5日(2)SEQIDNO：1的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯基戊酰基(Phenylpentanoyl)-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=
      “[(S((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)-丙酰基
    (propanoyl)]-Ala-哌啶-4-甲酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:1:
    Xaa Ala Ala Lys Val Xaa
    1               5(2)SEQIDNO:2的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
    (ⅱ)分子类型：肽
    (ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯戊酰基-Ala”
    (ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=
      “[(s)-2-(6-氧代-1,7-二氮杂螺环[4.4]壬7-基)丙酰
    基]-Ala-哌啶-4-甲酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:2:
      XaaAlaAlaLysValXaa
      1           5(2)SEQIDNO:3的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=
       “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“A1a-哌啶-4-甲酰胺”
(ⅹi)序列描述：SEQIDNO:3:
    XaaLysAlaXaaAlaXaa
    1           5(2)SEQIDNO:4的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯基戊酰基-Ile”
(iⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-
    4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹi)序列描述：SEOIDNO:4:
    XaaAlaAlaArgThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:5的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=
      “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基-Ala-
    哌啶-4-甲酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:5:
    XaaAlaAlaAlaValXaa
    1           5(2)SEQIDNO:6的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-
    氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:6:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:7的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
       /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=
     “[(S-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-
    氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:7:
    XaaAlaAlaArgValXaa
    1           5(2)SEQIDNO:8的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=
     “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-
    4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:8:
    XaaArgAlaArgValXaa
    1           5(2)SEQIDNO:9的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它“
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=
     “[(S-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-哌
    啶-4-甲酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:9:
    XaaIleAlaArgValXaa
    1           5(2)SEQIDNO:10的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=
     “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-
     4-氨基苯基乙酰胺”
    (ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:10:
    XaaArgAlaHisValXaa
    1           5(2)SEQIDNO：11的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=“5-苯基戊酰基-Ala
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=“[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-
    Ala-哌啶-4-甲酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:11:
    XaaAlaAsnArgValXaa
    1           5(2)SEQIDNO:12的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：
    (B)位置：4
    (D)其它信息：产物=“其它”
      /注=“[(S-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (8)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
      /注=“Ala-哌啶-4-甲酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:12:
    XaaArgAlaXaaAlaXaa
    1           5(2)SEQIDNO:13的信息：
(ⅱ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-3-
    氨基苯基丙胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:13:
    XaaArgAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:14的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-3-氨基丙基胍”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:14:
    XaaArgAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:15的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-氨
    基乙基”
    (ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:15:
    XaaArgAlaArgThrXaa
    1           5(2)SEOIDNO:16的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-3-胍基Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-
    氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:16:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:17的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “5-苯基戊酰基-3-(四甲基胍基)Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨
    基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:17:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:18的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-4-
    (2-氨乙基)吗啉”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:18:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)EQIDNO:19的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=”其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=”其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-哌嗪-4-基·CH2CH2OCH2CH2OH”
(ⅹⅰ)序列描述：SEOIDNO:19:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:20的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：、产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Gly-4-氨基苯乙基胍”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:20:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:21的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:21:
    XaaAlaAlaArgThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:22的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-[NH-NH-CO]-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:22:
    XaaArgAlaArgThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:23的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-NH-NH-CONH2”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:23:
    XaaArgAlaArgThrXaa
    1           5(2)SEOIDNO:24的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”/
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:24:
    XaaArgAlaXaaArgXaa
    1           5(2)SEQIDNO:25的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“3-(2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)丙酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
    “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:25:
    XaaArgAlaXaaArgXaa
    1           5(2)SEQIDNO:26的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:26:
    XaaAlaAlaXaaArgXaa
    1           5(2)SEQIDNO:27的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:27:
    XaaIleAlaXaaArgXaa
    1           5(2)SEQIDNO:28的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯戊酰基-Ile”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Leu”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:28:
    XaaArgAlaXaaArgXaa
    1           5(2)SEQIDNO:29的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：l
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:29:
    XaaArgAlaXaaAlaXaa
    1           5(2)SEQIDNO:30的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：4
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:30:
    XaaAlaAlaXaaAlaXaa
    1           5(2)SEQIDNO:31的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-四甲基高Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:31:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:32的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-(4-氨基苯基·CH2·CO·NH·CH2CH2·吗啉”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:32:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:33的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨基苯基乙酸甲酯”
(ⅹⅰ)序列描述SEQIDNO:33:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEOIDNO:34的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨基苯基乙酸”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:34:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:35的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Arg”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨基苯基乙酰基-哌嗪-4-基-CH2CH2OCH2CH2OH”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:35:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5(2)SEQIDNO:36的信息：
(ⅰ)序列特征：
    (A)长度：6个氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)链型：单链
    (D)拓扑结构：线型
(ⅱ)分子类型：肽
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：1
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=“5-苯基戊酰基-Dpr”
(ⅸ)特征：
    (A)名称/关键词：肽
    (B)位置：6
    (D)其它信息：/产物=“其它”
    /注=
   “[(S)-2-((R)-3-氨基-2-氧代吡咯烷-1-基)丙酰基]-Ala-4-氨基苯基乙酰胺”
(ⅹⅰ)序列描述：SEQIDNO:36:
    XaaAlaAlaAlaThrXaa
    1           5

Claims (15)

1．一种式Ⅰ的肽衍生物或其药学上可接受的盐：p-R1-R2-R3-R4，其中P是疏水残基；R1是5个L-氨基酸的序列，R3是单个L-氨基酸；或者R1是3个L-氨基酸的序列，R3是3个L-氨基酸的序列；R2是式Ⅱ或式Ⅲ的基团
Figure A9719246700021
其中Ra和Rb分别选自氢和(1-4C)烷基，A是亚甲基或氧；并且R4是OH、NH2或NRcRd，其中Rc选自(1-4C)烷基、2-氨基甲酰基环戊基、2-吡啶甲基、4-氨基甲酰基环己基、4-氨基甲酰基环己基甲基、3-氨基甲酰苯基、4-氨基甲酰苯基、4-(氨基甲酰甲基)苯基、4-(羧甲基)苯基、4-(甲氧羰基甲基)-苯基、2-吗啉代乙基和式-A1-G1的基团，其中A1是(3-7C)亚烷基或A1选自(1)式-A2-B2-的基团，其中A2是p-亚苯基或1,4-亚环己基，B2是(1-4C)亚烷基，或者A2是亚甲基，B2是p-亚苯基或1,4-亚环己基；和(2)式-A3-B3-C3-的基团，其中A3是亚甲基，B3是p-亚苯基或1,4-亚环己基，且C3是(1-3C)亚烷基；并且G1是式-N=C[N(Rp)2]2的基团，其中各个Rp分别选自氢、甲基、乙基和丙基；或者A1是式-A4-B4-的基团，其中A4是p-亚苯基，B4是-CH2-CO-，且G1是2-吗啉代乙基或4-[2-(2-羟乙氧基)乙基]哌嗪-1-基；和Rd是氢或(1-4C)烷基；或者R4是1-哌嗪基、4-甲基-1-哌嗪基、4-脒基-1-哌嗪基、4-(2-(2-羟乙氧基)乙基)-1-哌嗪基、1-哌啶基或4-取代的-1-哌啶基，其中4-取代基选自羧基、氨基甲酰基、N-(2-氨基乙基)氨基甲酰基和N-(4-氨基丁基)氨基甲酰基；或者R4是1-6个氨基酸的序列或其酰胺。
2．如权利要求1所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中P是5-20个碳原子的脂肪族、芳香族或混合脂肪族/芳香族有机基团，或者5-20个碳原子和1、2或3个选自氧、硫和氮的杂原子的杂芳香族或混合脂肪族/杂芳香族有机基团。
3．如权利要求1或2所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中R4是OH、NH2或NRcRd，其中Rc选自(1-4C)烷基、2-氨基甲酰环戊基、2-吡啶甲基、4-氨基甲酰环己基、4-氨基甲酰基环己基甲基、3-氨基甲酰苯基、4-氨基甲酰苯基、4-(氨基甲酰甲基)苯基、4-(羧甲基)苯基、2-吗啉代乙基和式-A1-G1的基团，其中A1是(3-7C)亚烷基或A1选自(1)式-A2-B2-的基团，其中A2是p-亚苯基或1,4-亚环己基，B2是(1-4C)亚烷基，或者A2是亚甲基，B2是p-亚苯基或1,4-亚环己基；和(2)式-A3-B3-C3-的基团，其中A3是亚甲基，B3是p-亚苯基或1,4-亚环己基，且C3是(1-3C)亚烷基；并且G1是式-N=C[N(Rp)2]2的基团，其中各个Rp分别选自氢、甲基、乙基和丙基；且Rd是氢或(1-4C)烷基；或者R4是1-哌嗪基、4-甲基-1-哌嗪基、4-脒基-1-哌嗪基、4-(2-(2-羟乙氧基)乙基)-1-哌嗪基、1-哌啶基或4-取代的-1-哌啶基，其中4-取代基选自羧基、氨基甲酰基、N-(2-氨基乙基)氨基甲酰基和N-(4-氨基丁基)氨基甲酰基；或者R4是1-6个氨基酸的序列或其酰胺。
4．如权利要求1、2或3所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中P是5-20个碳原子的脂肪族、芳香族或混合脂肪族/芳香族有机基团：包括R1和R3在内的L-氨基酸独立地选自Ala、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Asn、Gln、Arg、Thr和Val；并且R4是OH、NH2、NHRc，其中Rc选自(1-4C)烷基、2-氨基甲酰环戊基、2-吡啶基甲基、4-氨基甲酰环己基、4-氨基甲酰环己基甲基、3-氨基甲酰苯基、4-氨基甲酰苯基、4-(氨基甲酰甲基)苯基；或者R4是1-哌嗪基、4-甲基-1-哌嗪基、4-脒基-1-哌嗪基、1-哌啶基或4-取代的-1-哌啶基，其中4-取代基选自羧基、氨基甲酰基、N-(2-氨基乙基)氨基甲酰基和N-(4-氨基丁基)氨基甲酰基；或者R4是1-6个氨基酸的序列或其酰胺。
5．如权利要求1、2或3所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1是由AA1-AA2-AA3-AA4-AA5代表的5个L-氨基酸的序列，其中AA1选自Ala、Ile、Tyr、Val、Glu、Lys、Arg、Gly、Gap、GapMe4和3,3,3-三氟丙氨酸；AA2选自Ala、Lys、Glu、Sar、Val、Arg、Gly、Pro、Ile、Tic、3,3,3-三氟丙氨酸和N6-二乙基Lys；AA3选自Ala、His、Gln、Val、Thr、Glu、Gly、Asp、Asn和N3-二乙基Dap；AA4选自Ala、Lys、Asn、Arg、Thr、Gln、Sar、Gly、Pro、His和N6-二乙基Lys；AA5选自Thr、Val、Ala、Gly、Dap、Dab、Pro、Hyp、Asn和N3二乙基Dap；和R3是选自Ala、Gly、Dap、氮杂丙氨酸和氮杂甘氨酸的单个氨基酸。
6．如权利要求1、2或3所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中R1是由AA1-AA2-AA3代表的3个L-氨基酸的序列，其中AA1选自Ala、Ile、Tyr、Val、Glu、Lys、Arg、Gly、Gap、GapMe4和3,3,3-三氟丙氨酸；AA2选自Ala、Lys、Glu、Sar、Val、Arg、Gly、Pro、Ile、Tic、3,.3,3-三氟丙氨酸和N6-二乙基Lys；和AA3选自Ala、His、Gln、Val、Thr、Glu、Gly、Asp、Asn和N3-二乙基Dap；并且R3选自由AA6-AA7-AA8代表的3个L-氨基酸的序列，其中AA6选自Gly、Leu、Lys、Ala、Pro、Glu、Sar、His和Dap；AA7选自Pro、Ala、Lys、Arg、Glu、Sar、Gly、Oic和Dic；和AA8选自Ala、Gly、Dap、氮杂丙氨酸和氮杂甘氨酸。
7．如以上权利要求之任一所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中R2是式Ⅱb的基团
8．如以上权利要求之任一所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中疏水基团P是5-苯基戊酰基。
9．如以上权利要求之任一所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其中R4是4-氨基甲酰基-1-哌啶基，4-(氨基甲酰甲基)苯胺基或4-(2-胍乙基)苯胺基。
10．如权利要求1所要求的肽衍生物或其药学上可接受的盐，其选
Figure A9719246700052
和
或它们的药学上可接受的盐，其中Phv代表5-苯基戊酰基团。
11．一种药物组合物，该组合物包含与药学上可接受的稀释剂或载体组合的
式Ⅰ的肽衍生物或其药学上可接受的盐。
12．一种制备如权利要求1所要求的肽衍生物或其药学上的可接受的盐的方法，该方法包括以适当的次序偶联适当保护的氨基酸或者两个或多个适当保护的氨基酸的序列、适当保护的式H-Ⅱ-OH或H-Ⅲ-OH的基团和可有可无的适当保护的式R3-H的基团，接着可以也可以不进行N端氨基的官能团修饰，以引入疏水基团P，并除去任何保留的保护基和任何固相载体。
13．一种治疗MHCⅡ类依赖性T-细胞介导的自身免疫或炎症性疾病的方法，该方法包括向需要这种治疗的温血哺乳动物施用有效量的式Ⅰ的肽衍生物或其药学上的可接受的盐。
14．如权利要求14的方法，其用于治疗类风湿性关节炎或多发性硬化。
15．式Ⅰ的肽衍生物或其药学上可接受的盐在生产新药物上的用途，所说的新药物是用于治疗MHCⅡ类依赖性T-细胞介导的自身免疫或炎症性疾病的药物。
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