CN1191603A - 竞争性免疫测定装置 - Google Patents
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Abstract
一种用于在竞争性免疫测定中检测和/或确定一种被分析物的色谱测定装置给出了在一个单独的测定装置中被分析物浓度的半定量或定量指示,而同时还给出了通过上述装置已合适地出现流动的、肯定的指示。在一种结构中,上述装置包括一个第一对置组件(12)和一个第二对置组件(14),第一对置组件(12)包括一个样品制备区域(18)和一个吸收体(20),而第二对置组件(14)包括一种具有俘获和检测区域的第一色谱介质(22)、一种具有一个比较区域(38)的第二色谱介质(32)、以及一个比较标记物区域(40)。
Description
发明背景
本发明是针对用于确定样品特性的试验条或测定装置、组装成一体的外壳以及带有试验条和外壳的试剂盒,而且,本发明还针对采用试验条和外壳以确定样品特性尤其是用于竞争性免疫测定的方法。
在用于检测和/或确定被分析物的许多分析系统中,特别是在用于检测和/或确定生物学上感兴趣的被分析物的许多分析系统中都有色谱分析系统。
医生和医疗技术人员常常采用这样的色谱系统,用于在上班时快速诊断和治疗监控各种各样的健康情况和病症。它们也日益增加地被患者本人用于在家监控健康状况和病症。
最重要的这样一些系统是“薄层”系统,在这“薄层”系统中,一种溶剂横穿过一种薄的扁平吸收介质移动。
可以用这样的薄层系统所进行的最重要的那些检验中就有免疫测定,免疫测定依赖于在一种抗原或半抗原和一种相应的抗体之间的特异性相互作用。一段时间以来,人们就已知道采用免疫测定作为检验具有临床重要性的分子的存在和/或量的一种方法。早至1956年,J.M.Singer就报道过采用一种基于免疫的胶乳凝集检验用于检测与风湿性关节炎伴随在一起的因子(J.M.Singer等人,Am.J.Med.22:888-892(1956))。
在与免疫测定一起使用的色谱技术中,有一种叫作免疫色谱法的方法。免疫色谱测定分为两种主要类别:根据要被检测的抗原-抗体复合物的性质和产生那种复合物所需要的反应顺序分为“三明治”型和“竞争”型两种主要类别。要被检测的抗原本身可是一种抗体,例如,用于对幽门螺杆菌特异的抗体的那些血清学测定。对于这样一些情况,要被检测的抗体可与一种特异抗原结合。另外,可利用被标记的第二种抗体间接地检测要被检测的抗体,所述被标记的第二种抗体与对于要被检测的被分析物的第一种抗体结合。
在竞争性免疫测定中,标记物典型地是一种被标记的被分析物或被分析物的类似物,这种被标记的被分析物或被分析物的类似物与存在于样品中的任何未被标记的被分析物竞争结合一种抗体。竞争性免疫测定典型地用于检测诸如半抗原那样的被分析物,每种半抗原是单价的并且能够只结合一种抗体分子。Deutsch等人的美国专利US 4,235,601、Liotta的美国专利US 4,442,204以及Buechler等人的美国专利US 5,208,535中都公开了竞争性免疫测定装置的例子,这里,结合上述所有这些美国专利作为参考。
目前可资利用的那些采用试验条的色谱技术尽管有用,但却有许多缺点。诸如粪便样品那样的许多样品含有可阻塞色谱介质的孔的颗粒材料,这极大地妨碍了免疫色谱方法。诸如血液那样的其它一些样品含有使得难以判读检验结果的细胞和带颜色的组份。还有诸如牛奶那样的其它一些样品含有可产生干扰的脂肪小体或其它一些组份。即使样品并不产生干扰,现有的色谱检验装置还是常常难以把样品施加到色谱介质上,从而使样品正面均匀地移动通过色谱介质,以便确保该样品到达以均匀、直线方式出现结合的区域。
因为要被测定的样品的性质或要进行的测定的性质,目前可资利用的那些试验条存在一些其它问题。对于这样的一些装置,进行清洗步骤是不实际的,该清洗步骤常常需要提高灵敏度并减少背景。而且还难以在上述装置中进行预温育步骤。此外,需要能进行广泛范围的分离的免疫色谱测定装置,例如,能从牛奶中分离脂肪或诸如从甲苯中分离苯那样分离有机化学物质。
目前可资利用的用于免疫色谱的装置和技术的其它一些问题是关于样品制备和产生废物。通过受到感染的血液或血液组份以及其它一些身体分泌物所传播的疾病的日渐流行,例如,艾滋病和肝炎的日渐流行,使这些问题更加恶化。极少可能把样品(例如粪便)或取样装置(例如咽喉拭子)直接施加于色谱介质。在能把样品施加于色谱介质之前,通常需要几种提取和预处理反应。一般由内科医生或技术人员进行这些反应,在几种小容器中进行检验,例如,在试管或微小物质去除管进行检验,此外,还需要使用诸如吸移管那样的转移装置。之后,这些装置的每一种都被污染,并且必须特别小心地处置,从而使可能会偶然地与上述废品接触的工作人员或人们不被污染。
此外,目前可资利用的那些检验装置尽管有用,但一般来说并不适于半定量或定量指明存在于检验样品中的被分析物的浓度,尤其是对于竞争性免疫测定。一般来说,获得这样的定量或半定量的指标需要使用一种以上的装置,例如,使用用于校准的装置。使用一种以上的检验装置需要耗费更多的时间和材料,而且,还增加了在进行测定期间弄错的可能性。具体地说,使用可能被污染的样品,就有可能偶然地涉及到一个被认为只含有一种对照物的装置实际上含有一种可具有一种传染性媒介物的样品。这样,就宁愿在一个测定装置中能够确定被分析物浓度的定量或半定量的指标,而不使用作为对照或用于校准的单独的测定装置。
还需要一种装置,这种装置给出肯定的指示,指明检验已正确地进行而且流动已合适地出现在色谱测定装置中。
因此,就需要一种能够处理广泛范围的色谱测定的改进的色谱测定装置。这样的一种装置应该能处理所有类型的免疫测定,特别是竞争性免疫测定,以及其它类型采用色谱方法的测定。这样的一种装置应该能直接容纳一种可能被污染的样品或样品制备装置,以便消除对于提取容器和转移装置的需要。这样的一种装置,特别是试验条形式的装置,还应该能够对有色样品或含有颗粒物的样品进行免疫色谱测定而不会有干扰,并且应该能够给色谱介质均匀且平坦地发送样品,以便提高检验的准确性和精度。此外,这样一种改进的试验条应该能够进行在一个单个的测定装置中被分析物浓度的半定量或定量指示而无需另外的对照测定装置,并且应该给出肯定的指示,指明在上述装置中已合适地出现流动能及已正确进行测定。
概述
我已开发出一种测定装置,这种装置满足这些需要,并且在一个单独的测定装置中进行被分析物浓度的半定量或定量确定而无需另外的对照测定装置。本发明的测定装置还提供了测定合适地进行的肯定指示。所述装置可进行对于各种各样的被分析物的、尤其是对于半抗原的竞争性免疫测定。
本发明的一个方面是一种竞争性免疫测定装置,这种装置包括:(1)一个第一对置组件(opposable component),这个第一对置组件包括:(a)一个样品制备区域,这个样品制备区域包括对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(b)一个吸收体,这个吸收体对于吸收其中的流体并与在上述第一对置组件上的样品制备区域分开;以及(2)一个可与上述第一对置组件用铰链转动联接的第二对置组件,这个第二对置组件包括:(a)一种具有第一和第二端的第一色谱介质,而这种第一色谱介质在其上包括(i)与上述第一色谱介质结合的被固定了的被分析物或被分析物的类似物的、一个第一区域;以及(ii)一种被固定了的分子的一个第二区域,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员,这个第二成员对于与上述第一色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;(b)一种具有一个第一端和一个第二端的第二色谱介质,而这种第二色谱介质在其上包括一个比较区域,这个比较区域含有已知量的、固定在该比较区域上的、上述被分析物或被分析物的类似物;以及(c)一个比较标记物区域,这个比较标记物区域在其中包括可再溶解形式的、与上述第二色谱介质有效接触的、对于上述被分析物或被分析物的类似物的一种被标记的特异性结合配对。
当使第一和第二对置组件从它们并不对置的位置而对置时,样品制备区域开始有效接触第一色谱介质的第一端,以便把样品和对于与生物素共轭的被分析物的被标记的特异性结合配对施加到所述第一色谱介质上。吸收体也开始与上述色谱介质的第二端和第二色谱介质的第二端接触,以便通过所述第一和第二色谱介质从它们的第一端到它们的第二端抽取流体,从而通过比较在上述色谱介质的检测区域处和在上述第二色谱介质的比较区域处、所结合的标记物的强度,本发明的装置给出了比预定量更多量的被分析物存在的可检测到的指示。
优选地,在第一对置组件上的样品制备区域包括一种第二被标记的特异性结合配对,这种第二被标记的特异性结合配对结合一种分子,这种分子基本上不与可再溶解形式的被分析物交叉反应,而第一色谱介质还包括一种流动检查指示剂,这种流动检查指示剂包括结合了上述第二被标记的特异性结合配对的一种分子,从而使流动检查指示剂给出肯定的指示,指明通过上述第一色谱介质已出现流动。
优选地,辅助特异性结合对的第一成员是生物素。当辅助特异性结合对的第一成员是生物素时,该辅助特异性结合对的第二成员优选是链霉抗生物素蛋白。
在这种装置的一个典型实施例中,被分析物是β-内酰胺抗菌素,被固定了的被分析物或被分析物的类似物的第一区域是与免疫球蛋白共轭的7-氨基头孢烷酸,而对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被标记的特异性结合配对是生物素化的结合了青霉素的蛋白质。
在这种装置的另一个典型实施例中,被分析物是选自下述这组物质的抗菌素,所述这组物质包括庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、以及四环素,被固定了的被分析物或被分析物的类似物的第一区域是与免疫球蛋白共价共轭的被分析物,而对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被标记的特异性结合配对是生物素化的抗被分析物抗体。
本发明的另一个方面是一种用于检测和/或确定被分析物的检验试剂盒,这种检验试剂盒包括被包装在一些单独的容器中的:(1)上述免疫测定装置;以及(2)在比较标记区域中用于再溶解对于上述被分析物或该被分析物的类似物的被标记的特异性结合对的一种液体。
本发明的另外又一个方面是竞争性免疫测定装置的另一种改型,这种竞争性免疫测定装置采用了一种单独的色谱介质,以便提供检测和对照两种功能。这种改型包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)一个样品制备区域,这个样品制备区域包括(i)一种对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的被分析物的、可再溶解形式的、被标记的特异性结合配对;以及(ii)与对于一种分子的一种被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的上述被分析物或该被分析物的类似物,所述这种分子基本上并不与可再溶解形式的上述被分析物交叉反应;以及(b)一个与上述样品制备区域分开的吸收体;以及(2)一个第二对置组件,这个第二对置组件包括一种具有第一和第二端的色谱介质,该色谱介质上面包括有一些离散的、不重叠的区域:(a)与上述色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的、一个第一俘获区域;(b)一个第二检测区域,这个第二检测区域包括一种被固定了的分子,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员、并且对于与上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;以及(c)一个第三对照区域,这个第三对照区域包括一种被固定了的分子,这种被固定了的分子能够特异性地结合上述被标记的特异性结合配对,该被标记的特异性结合配对与上述结合到所述色谱介质的被分析物或该被分析物的类似物共价共轭。
在本发明的测定装置的这个实施例中,这样构成第一和第二对置组件,使得把该第一和第二对置组件从它们并不对置的位置弄成对置时就导致吸收体与色谱介质的第二端有效接触,并导致样品制备区域与该色谱介质的第一端接触,这使得检验样品、对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的被再溶解过的被标记过的特异性结合配对、以及与一种被标记的特异性结合配对共价结合的预定量的上述被分析物或该被分析物的类似物从上述第一端到上述第二端流过所述色谱介质。结果,通过比较结合在第二色谱介质的检测区域和对照区域处的标记物的强度,上述装置给出比较定量更多量的一种被分析物存在的可检测到的指示。
在这种装置的一种典型实施例中,辅助特异性结合对的第一成员是生物素,而该辅助特异性结合对的第二成员是链霉抗生物素蛋白,被分析物是β-内酰胺抗菌素,对于与上述辅助特异性结合对的第一成员共轭的所述被分析物的、被标记的特异性结合配对是一种结合了青霉素的蛋白质,结合在色谱介质上的俘获区域处的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物是与免疫球蛋白G共价共轭的7-氨基头孢烷酸,对于基本上不与上述被分析物交叉反应的一种分子的被标记的特异性结合配对是一种抗兔免疫球蛋白G抗体,而结合在上述色谱介质上的对照区域处的被固定了的分子是兔免疫球蛋白G。
另可选择地,被分析物可以是选自下述这组物质的抗菌素,所述这组物质包括庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、以及四环素,对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的上述被分析物的被标记的特异性结合配对可以是抗被分析物抗体,对于基本上不与上述被分析物交叉反应的一种分子的被标记的特异性结合配对可以是抗兔免疫球蛋白G,结合在色谱介质上的俘获区域处的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物可以是与除了不是兔这一物种之外的一种物种的免疫球蛋白G共价结合的上述被分析物,而结合在对照区域处的被固定了的分子可以是兔免疫球蛋白G。
本发明的另外又一个方面是可以同时进行多于一种测定的多重测定装置。这样一种多重测定装置的一种改型包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)许多样品制备区域,每一样品制备区域包括对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(b)一种用于吸收其中的流体的吸收体,这种吸收体与在上述第一对置组件上的所述那些样品制备区域分开;以及(2)一个可与上述第一对置组件用铰链转动联接的第二对置组件,这个第二对置组件包括:(a)许多种第一色谱介质,用于每一样品制备区域的是一种第一色谱介质,每一种第一色谱介质具有第一和第二端,且在每一种第一色谱介质上面包括:(i)一个与上述第一色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的第一区域;以及(ii)一种被固定了的分子的一个第二区域,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并且对于与上述第一色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;(b)许多种第二色谱介质,用于每一样品制备区域的是一种第二色谱介质,每一种第二色谱介质具有一个第一端和一个第二端,而且每一种第二色谱介质上面包括一个比较区域,这个比较区域含有已知量的、固定到该比较区域上的一种被分析物或该被分析物的类似物;以及(c)许多比较标记物区域,用于每一种第二色谱介质的是一个比较标记物区域,每一比较标记物区域中包括可再溶解形式的、与上述第二色谱介质有效接触的、对于上述被分析物或该被分析物的类似物的、一种被标记的特异性结合配对。
在本发明的多重测定装置的这种改型中,当把第一和第二对置组件从它们不对置的位置弄成对置时,那些样品制备区域与每一种第一色谱介质的第一端有效接触,以便把样品以及对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的被标记的特异性结合配对施加到所述每一种第一色谱介质,而且,吸收体与每一种第一色谱介质的第二端和每一种第二色谱介质的第二端有效接触,以便通过所述第一和第二色谱介质从它们的第一端到它们的第二端抽取流体。结果,通过比较结合在每一种第一色谱介质的检测区域处和每一种第二色谱介质的比较区域处的标记物的强度,上述装置给出了在所述每一种第一和第二色谱介质中存在有比预定量更多量的一种被分析物的、一种可检测到的指示。
一种装有本发明的这种多重测定装置的改型的检验试剂盒包括:(1)免疫测定装置;以及(2)用于在每一比较标记区域中再溶解对于被分析物或该被分析物的类似物的被标记的特异性结合配对的一种液体。
本发明的多重测定装置的另一种改型是基于采用一种单独的色谱介质的装置的改型,并且包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)许多样品制备区域,每一样品制备区域包括:(i)对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(ii)预定量的一种被分析物或该被分析的一种类似物,所述预定量的一种被分析物或该被分析物的一种类似物与对于一种分子的一种被标记的特异性结合配对共价结合,所述这种分子基本上不与可再溶解形式的上述被分析物交叉反应;以及(b)一种与上述那些样品制备区域分开的吸收体;以及(2)一个第二对置组件,这个第二对置组件包括许多种具有第一和第二端的色谱介质,每一种色谱介质上面包括一些离散的、不重叠的区域:(a)与上述色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的、一个第一俘获区域;(b)一个第二检测区域,这个第二检测区域包括一种被固定了的分子,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员,并且对于与上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;以及(c)一个第三对照区域,这个第三对照区域包括一种被固定了的分子,这种被固定了的分子能够与上述被标记的特异性结合配对特异性地结合,该被标记的特异性结合配对与结合到上述色谱介质上的所述被分析物或该被分析物的类似物共价共轭。
在本发明的多重测定装置的这种改型中,这样构造第一和第二对置组件,使得把该第一和第二对置组件从它们并不对置的位置弄成对置时就会导致吸收体与每一种色谱介质的第二端有效接触并导致那些样品制备区域与每一种色谱介质的第一端有效接触,从而使得那些检验样品、对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的被再溶解过的被标记的特异性结合配对、以及与一种被标记的特异性结合配对共价结合的预定量的所述被分析物或该被分析物的类似物通过每一种色谱介质从第一端流动到第二端。
附图简述
参见下面的说明、所附的权利要求书以及附图,就会更好地理解本发明的这些和其它特征、情况和优点,附图中:
图1是采用两种色谱介质的、本发明的竞争性免疫测定装置的一个第一实施例的一幅图;
图2是采用一种单独的色谱介质的、本发明的竞争性免疫测定装置的一个第二实施例的一幅图;
图3是按照图1的装置的原理工作的、本发明的多重测定装置的一个第一实施例的一幅图;以及
图4是按照图2的装置的原理工作的、本发明的多重测定装置的一个第二实施例的一幅图。
说明
定义
在本申请文件中,除非另外指明,如下定义下述这些术语。
特异性结合配对:一对分子的一个成员,这对分子借助于特异性非共价连接而相互作用,该特异性非共价相互作用依赖于所涉及的分子的三维结构。特异性结合配对的典型的对包括抗原-抗体、半抗原-抗体、激素-受体、核酸链-互补的核酸链、底物-酶、β-内酰胺抗菌素-结合了青霉素的蛋白质、抑制剂-酶、碳水化合物-外源凝集素、生物素-抗生物素蛋白、以及病毒-细胞受体。
免疫测定:如本文所用的那样,术语“免疫测定”包括涉及到至少一种如上所述的特异性结合配对的那些测定,而且,并非必须限于其中所述特异性结合配对是一种抗体的那些测定,除非特别指明了这样一种限制。
有效接触:两个固体组件当它们以这样一种方式直接或间接接触时就是有效接触,所述这种方式是:液体,典型的是含水液体,可从上述两个组件中的一个基本上不间断地、通过毛细管作用流到另一个,或反之。“直接接触”意味着两个部件的诸如边对边或前面对后面的直接接触。典型的情况是,当两个组件直接接触时,它们重叠,重叠部分大约为0.5mm到约3mm。不过,可把上述这些组件的边对接放置。“间接接触”意味着两个部件并非直接接触,而是通过一个或多个导体接通。
被分析物:术语“被分析物”包括要被测定的实际分子以及该分子的类似物和衍生物,这是指当这样的类似物和衍生物以这样一种方式结合用于测定中的另一种分子时,所述这种方式是指所述类似物和衍生物就亲合性和交叉反应性来说基本上等效于上述被分析物本身。
抗体:术语“抗体”包括合适特异性的完整抗体分子和抗体片段(包括Fab,F(ab′)和F(ab′)2片段)以及化学修饰的完整抗体分子和抗体片段,该化学修饰的完整抗体分子和抗体片段包括通过体外重组亚单位所组合的杂交抗体。
辅助特异性结合对:术语“辅助特异性结合对”是指彼此是特异性结合配对的一对分子,就如这个术语上面所定义的那样,所述对中没有一个成员对于参与用本发明的测定装置所进行的测定的任何其它分子具有特异结合亲合性。辅助特异性结合对的一个例子是生物素-抗生物素蛋白。I.色谱测定装置
本发明的一个方面包括色谱测定装置,特别是用于被分析物和生物样品的测定,尤其是用到竞争性免疫测定。这些装置适于直接应用于生物样品,而无需预先的提取步骤,并这样构造这些装置,以便使对于由颗粒或有色样品所导致的测定结果的干扰最小。
上述装置至少具有两个实际上是平面的对置组件。所述实际上是平面的那些组件中的一个在其表面上有一种色谱介质。
上述装置还有用于使所述那些对置组件对置并给它们施加压力的装置。典型的情况是,通过人工直接关闭来完成使那些对置组件对置。所施加的压力足以使流体在基本上垂直于那些对置组件的方向上从一个对置组件到另一个对置组件传送,从而使样品施加给色谱介质,用于检测和/或确定其上的被分析物。压力还驱使流体通过色谱介质,以便加速色谱法的过程,以较少的时间给出可检测的结果。此外,压力使得能在上述装置中进行一些步骤,例如,提取步骤,而且,可用压力通过吸收体从色谱介质中去除过剩的流体,以便减弱测定的背景。通过把上述那些对置组件对置来产生压力,并通过用诸如锁扣或铰链搭扣那样的连接器固定所述那些组件来保持此压力。对某一具体测定,把压力校正到最佳值,而且,该压力可变化,这取决于上述装置的结构、用于色谱介质中的材料、样品的体积和性质、特异性结合配对和标记物的性质、以及其它一些因素。
本发明的测定装置进行免疫测定,而无需一旦施加样品时给色谱介质施加另外的流体。这避免了稀释样品或特异性结合配对,并保持了最大测定灵敏度。
典型的情况是,把本发明的装置构造成用于进行竞争性免疫测定。不过,可用类似的原理来构造那些装置,用于进行其它类型的免疫测定,而且这些都处于本发明的范围之内。
在适于进行竞争性免疫测定的装置中,色谱介质在其上面带有对于一种被标记的组份的一种特异性结合配对的一个检测区域。所述被标记的第一组份是一种辅助特异性结合对的一个第一成员,而所述检测区域包括上述辅助特异性结合对的一个第二成员。
在一个采用一种辅助特异性结合对、特别优选的、可供选择的例子中,检测区域是一种对于生物素具有特异亲合性的被固定了的分子,而测定包括对于与生物素共轭的一种被分析物的一种被标记的特异性结合配对。上述对生物素具有特异亲合性的被固定了的分子典型的是链霉抗生物素蛋白,但也可以是抗生物素蛋白或一种抗-生物素抗体。
这里所用的术语“生物素”不仅包括生物素本身,而且也包括生物素的衍生物,其中,在生物素的衍生物和它的特异性结合配对之间的结合等价于在生物素本身和所述特异性结合配对之间结合。这些衍生物包括亚氨基生物素和与一种诸如ε-己酰胺生物素那样的间隔基团共价共轭的生物素。也可采用其它生物素的衍生物,例如,那些带有各不相同长度的间隔基团。
检测区域实际上小于色谱介质。它典型地延伸过色谱介质的整个宽度,但也可局限于比色谱介质的整个宽度更小的部位。
典型的情况是,在进行测定后,通过利用可目视检测的被标记的组份检测和/或确定被分析物。所述被标记的组份优选地是与一种可目视检测的标记物连接的被分析物或该被分析物的类似物,或者是对于与一种可目视检测的标记物连接的被分析物的一种特异性结合配对。在下面所述的用于竞争性免疫测定的装置中,被标记的组份典型的是对于一种被分析物的一种被标记的特异性结合配对,所述这种被分析物与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭。优选地,辅助特异性结合对的第一成员是生物素。当辅助特异性结合对的第一成员是生物素时,该辅助特异性结合对的第二成员优选地是链霉抗生物素蛋白。
包括被分析物的类似物在内的配体类似物在本领域中是众所周知的,例如,在授权给Rubenstein等人的美国专利US 3,817,837中就有说明,本文结合这篇美国专利作为参考。被分析物的类似物可通过一种接头与诸如免疫球蛋白那样的更大的蛋白质共轭,免疫球蛋白在免疫测定中是不反应的。可选择上述接头的长度,以便使得能最佳完成用上述装置所进行的测定。可使用各种连接反应以便合成被分析物的类似物,这取决于可资利用的官能团。例如,在授权给Rubenstein等人的美国专利US 3,817,837中说明了一些这样的连接反应。
可把本发明的测定装置构造成用于同时进行一种以上的测定,在这样的一些装置中,那些基本上是平面的组件中的一个在其上面至少有两种分开的、并且是不接触的色谱介质。下面对此作进一步说明。A.本发明的装置所共有的那些部件
许多部件是本发明的那些装置所共有的,这里为方便起见而加以说明。1.色谱介质
色谱介质是一个条。典型的情况是,所述条基本上是平面形状的,尽管并非要求在所有的用途中都是这样。它典型地是矩形形状、具有第一和第二端以及第一和第二表面。在整个申请文件中,术语“第一端”是指液体首先施加到色谱介质的那端,而术语“第二端”用于指该色谱介质的对面的那端。在色谱介质的第一端处或该第一端附近所施加的液体可以是,但并非必须是一种样品或一种处理过的样品。色谱介质由适于作为用于被分析物和被分析物-抗体共轭物的薄层色谱验定法的材料构成,该材料例如是硝化纤维、尼龙、人造纤维、纸、或二氧化硅。可按需要预先制备或改进色谱介质。
使位于检测区域中的试剂以这样一种方式固定在色谱介质上,使得该试剂抵抗扩散运动而被稳定。可通过共价或非共价方式使试剂与色谱介质结合;这两种方式在本领域中是众所周知的,并且在此无需作进一步的详细说明。如果色谱介质是硝化纤维,就可以通过疏水性相互作用结合检测区域中的试剂。
例如,在P.Tijssen的“酶免疫测定的实践和理论”(Elsevier,Amsterdam,1985)(pp.297-328)中,说明了试剂与固相的结合。
典型的情况是,色谱介质是半透明的,从而使得可从每一面观察出现在它上面的有色区域。2.吸收体
在许多本发明的装置中,吸收体与色谱介质的一端或两端有效接触。吸收体可由任何充分保持液体(典型的是一种含水液体)的吸水材料制成,从而可通过色谱介质抽取液体,并把该液体聚集在该吸收体中。典型的材料包括但并不限于滤纸。3.其它可载运流体的组件
如下所述,在那些本发明的特定的装置中,可用一些其它载运流体的部件作为样品制备区域、施用器和/或导体。用亲水性介质制备这些部件,该亲水性介质能通过液体,典型的是通过含水液体,而基本上不会吸收它们。这样的一些材料在本领域中是众所周知的。
在某些情况下,这些部件可在其中装有一种干燥形式的组份,可通过给该部件添加一种液体,典型的是添加一种含水液体来再溶解所述那种干燥形式的组份。这种组份可以是一种被标记的组份或是反应的另一种组份。4.对置组件
本发明的测定装置的许多实施例包括两个对置组件。对置组件的主体优选地由叠层的纸板制成,该叠层的纸板足以不透过湿汽,以便含有在进行测定中所涉及到的液体,利用上述装置进行该测定一段时间,在这段时间中进行所述测定。
可使用其它一些基于纤维素的材料,例如,纸板或固体漂白过的亚硫酸盐(SBS)。另外可选择的是,对置组件的主体可由不能透过湿汽的塑料制成。一种合适的塑料是诸如勒克森TM那样的聚碳酸酯。
典型地用一个绞链连接那些对置组件,这个铰链优选地由不能透过包括含水液体在内的液体的材料制成,例如,由一种塑料制成,这种塑料可以与用于第一和第二对置组件的材料相容地连接,或是与用于第一和第二对置组件的材料相同。5.被标记的组份
对于打算进行竞争性免疫测定的本发明的测定装置,被标记的组份典型的是对于也与生物素共轭的被分析物的一种被标记的特异性结合配对。不过,可使用其它标记方案。
标记物优选地是一种可目视检测的标记物,例如,一种胶体金属标记物。胶体金属标记物优选地是金、银、青铜、铁、或锡,金是最优选的。在J.DeMey的“金探针的制备和使用”,免疫细胞化学:现代方法和应用(J.M.Polak & S.Van Noorden,eds.,Wright,Bristd,England,1986),(第8章,第115-145页)中说明了金标记的抗体和抗原的制备;本领域中已知关于制备这样被标记的抗体和抗原的其它一些参考文献。从市场可买到用胶体金标记的抗体,例如,从St.Louis,Missouri的西格玛化学公司可买到。另外可选择的是,也可采用其它一些胶体标记物,例如,胶体硫标记物或一种染料-二氧化硅标记物。在一个不怎么优选的可供选择的例子中,可目视检测的标记物可以是一种胶体乳胶标记物。还可以使用其它一些标记物,例如,放射性标记物、萤光标记物、化学发光标记物、生物发光标记物、或酶标记物。B.用于竞争性免疫测定的测定装置1.具有两种色谱介质的用于竞争性免疫测定的测定装置
适于进行竞争性免疫测定的本发明的一个实施例在一个单独的对置组件上使用了两种分开的色谱介质。这些色谱介质中的一种用来进行免疫测定,而另一种利用已知量的被分析物提供比较,以使确定存在于检验样品中的被分析物的浓度是否高于预定的浓度。
一般说来,这种免疫测定装置包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)一个样品制备区域,这个样品制备区域包括对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(b)一个与在上述第一对置组件上所述样品制备区域分开的、用于吸收其中流体的吸收体;以及(2)一个可与上述第一对置组件用铰链转动联接的第二对置组件,这个第二对置组件包括:(a)一种具有第一和第二端的第一色谱介质,这种第一色谱介质的上面包括:(i)与上述第一色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的一个第一区域;以及(ii)一种被固定了的分子的一个第二区域,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并且对于与上述第一色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;(b)一种具有第一和第二端的第二色谱介质,这种第二色谱介质上面包括一个比较区域,这个比较区域包含有固定在该比较区域上的、已知量的、上述被分析物或该被分析物的类似物;以及(c)一个比较标记物区域,这个比较标记物区域在其中包括可再溶解形式的、与上述第二色谱介质有效接触的、对于上述被分析物或该被分析物的类似物的、一种被标记的特异性结合配对。
上述装置通过比较结合在第一色谱介质的检测区域处和结合在第二色谱介质的比较区域处的标记物的强度,给出了比预定量更多量的被分析物存在的可检测到的指示。
图1中示出了这种装置。
装置10包括用铰链16连接的一个第一对置组件12和一个第二对置组件14。第一对置组件12包括一个样品制备区域18。样品制备区域18包括对于一种被分析物的、通过给样品制备区域18添加液体而可以再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对,所述这种被分析物与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭。第一对置组件12还包括一个用于吸收流体的吸收体20。吸收体20与在第一对置组件12上的样品制备区域18分开。
第二对置组件14包括一种第一色谱介质22。第一色谱介质22具有一个第一端24和一个第二端26。第一色谱介质22的上面包括:(i)与第一色谱介质22结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的一个第一区域28,以及(ii)一种被固定了的分子的一个第二区域30,这种被固定了的分子是与第一色谱介质22结合的辅助特异性结合配对的一个第二成员。当辅助特异性结合对的第一成员是生物素时,对于生物素具有特异亲合性的被固定了的分子典型地是链霉抗生物素蛋白,但另外也可以是抗生物素蛋白或抗-生物素抗体。
第二对置组件还包括一种第二色谱介质32。第二色谱介质32具有一个第一端34和一个第二端36,并且,第二色谱介质32的上面包括一个比较区域38,这个比较区域38含有已知量的、固定到比较区域38上的被分析物或该被分析物的类似物。第二对置组件14还包括一个比较标记物区域40,这个比较标记物区域40在其中包括对于被分析物或该被分析物的类似物的一种被标记的特异性结合配对,通过给比较标记物区域40添加一种液体,典型地是添加一种含水液体,可以再溶解所述这种被标记的特异性结合配对。比较标记物区域40与第二色谱介质32有效接触,从而,当再溶解所述对于被分析物或该被分析物的被标记的特异性结合配对时,它扩散进入第二色谱介质32。可用一个衬底42衬托第一和第二色谱介质22和32,衬底42可以是塑料,例如,聚碳酸酯(Lexan)或其它不能渗透的塑料。
当把第一和第二对置组件12和14从它们并不对置的位置弄成对置时,样品制备区域18与色谱介质22的第一端24有效接触,以便把样品以及对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的被标记的特异性结合配对施加给第一色谱介质22。在第一对置组件12上的吸收体20与第一色谱介质22的第二端26以及第二色谱介质32的第二端36这两者有效接触,以便通过第一和第二色谱介质22和32从它们的第一端24和34把流体抽到它们的第二端26和36。吸收体20足够大,从而使它能从第一色谱介质22和第二色谱介质32吸收流体。
第一对置组件12中可有一个孔44,以便观察在第一色谱介质24上的第二区域30和在第二色谱区域32上的比较区域38。装置10还可包括诸如锁扣46和48那样的连接器,以便保持第一和第二对置组件12和14的对置,并包括一个密封垫50,以便防止流体从上述装置流出。
在第二对置组件14上的第一色谱介质优选地还包括一种流动检查指示剂52。流动检查指示剂52位于第一色谱介质22的第二端26的附近。当使用流动检查指示剂52时,在第一对置组件12上的样品制备区域1 8还包括结合了一种分子的一种第二被标记的特异性结合配对,所述这种分子基本上不与被分析物交叉反应,可通过给该样品制备区域添加一种液体,典型地是添加一种含水液体,来再溶解所述第二被标记的特异性结合配对。流动检查指示剂52包括一种结合了上述第二被标记的特异性结合配对,从而使流动检查指示剂52给出肯定的指示,指明通过第一色谱介质22已出现流动。
在用测定装置10进行测定时,把样品加给在第一对置组件12上的样品制备区域18。该样品再溶解对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被标记的、特异性结合配对,而且还再溶解结合了基本上不与所述被分析物交叉反应的那种分子的、第二被标记的、特异性结合配对,以便给出流动检查的指示。然后,使测定装置能温育一段预定的时间,典型的是温育1分钟到10分钟。可在室温进行这种温育;也可以把测定装置10或测定装置10的第一对置组件12放在温育箱中,为了更快地测定,该温育箱将温度升到比室温更高的温度,例如,升到30℃或37℃。如果这样的温度不能导致抗体或其它特异性结合配对的失效或变性,甚至要采用更高的温度。
温育后,把缓冲剂或其它含水试剂施加给在第二对置组件14上的比较标记物区域40。之后,使得对于被分析物或该被分析物的类似物的、被再溶解过的、被标记的、特异性结合配对能够通过第二色谱介质32从它的第一端34朝向它的第二端36迁移。
然后,关闭测定装置10,使第一和第二对置组件12和14对置,并施加对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被再溶解过的、被标记的、特异性结合配对到第一色谱介质22的第一端24,而且,如果有的话,也施加结合了一种并不与所述被分析物交叉反应的一种分子的、第二被标记的特异性结合配对到第一色谱介质22的第一端24。如果样品中有被分析物的话,对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被标记的、特异性结合配对就结合到在第一色谱介质22上的被固定了的被分析物或类似物28的第一区域(俘获区域)。在这种情况下,在第二区域30(检测区域)处不能检测到信号,第二区域30包括与第一色谱介质22结合的辅助特异性结合配对的被固定了的第二成员。
不过,不管样品中是否有被分析物存在,对于每一种情况,结合了基本上不与被分析物交叉反应的一种分子的、第二被标记的、特异性结合配对就会与在第一色谱介质22的第二端26附近的流动检查区域52结合,并给出肯定的指示,指明已通过该第一色谱介质出现合适的流动。
原来就存在于比较标记物区域40中的、对于被分析物或该被分析物的类似物的、被再溶解过的、被标记的、特异性结合配对同时通过第二色谱介质32从第一端34到第二端36迁移,然后,该对于所述被分析物或该被分析物的类似物的、被再溶解过的、被标记的、特异性结合配对结合存在于在第二色谱介质32上的比较区域38处的、预定量的、被固定了的被分析物或该被分析物的类似物。
在迁移一段时间后,典型地是迁移1分钟到10分钟后,于是,使用者就通过孔42观察在第一色谱介质22上的被固定了的被分析物30的第二区域以及在第二色谱介质32上的比较区域38,以便比较在所述这些区域处的标记物的相对强度,为了半定量地估计检验样品中被分析物的浓度。例如,如果比较区域38含有5ng的被分析物,如果存在于在第一色谱介质22上的第二区域30处的强度大于在第二色谱介质上的比较区域38处的强度,那么,存在于施加给测定装置10的那个体积的检验样品中的被分析物就多于5ng。可使用一个范围的浓度。2.采用与流动指示剂组合的对照线的测定装置
本发明的测定装置的另一个实施例采用了一种组合的对照线和流动指示剂,这种组合的对照线和流动指示剂提供了检验样品中的被分析物的半定量指示。这种装置还通过一种竞争性免疫测定方法来工作。
一般说来,这个实施例包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)一个样品制备区域,这个样品制备区域包括:(i)对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(ii)预定量的上述被分析物或该被分析物的一种类似物,所述被分析物或该被分析物的一种类似物与对于一种分子的、一种被标记的特异性结合配对共价结合;这种分子基本上不与可再溶解形式的上述被分析物交叉反应;以及(b)一个与上述样品制备区域分开的吸收体;以及(2)一个包括一种具有第一和第二端的色谱介质的、第二对置组件,所述色谱介质上面包括一些离散的、不重叠的区域:(a)与上述色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的、一个第一俘获区域;(b)一个包括一种被固定了的分子的第二检测区域,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合配对的一个第二成员并对于与上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;以及(c)一个包括一种被固定了的分子的、第三对照区域,这种被固定了的分子能够特异性地结合上述被标记的特异性结合配对,所述被标记的特异性结合配对共价地与上述被分析物或该被分析物的类似物共轭,所述被分析物或该被分析物的类似物与上述色谱介质结合。
图2示出了测定装置的这个实施例。测定装置100具有一个第一对置组件102和一个第二对置组件104。用铰链106连接第一和第二对置组件102和104。第一对置组件102有一个样品制备区域108。样品制备区域108包括(1)对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、通过一种液体可以被再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(2)与对于一种分子的一种被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的、上述被分析物或该被分析物的一种类似物,所述这种分子基本上不与上述被分析物交叉反应,通过一种液体,典型地是通过一种含水液体,可再溶解所述被分析物。如上所述,典型的情况是,辅助特异性结合对的第一成员是生物素,而该辅助特异性结合对的第二成员是对于生物素具有特异性结合亲合性的、一种被固定了的分子,例如,抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、或抗-生物素抗体。更典型的情况是,辅助特异性结合对的第二成员是链霉抗生物素蛋白。第一对置组件102还有一个吸收体110,这个吸收体110与在第一对置组件102上的样品制备区域108分开。
第二对置组件104包括一种具有一个第一端114和一个第二端116的色谱介质112。色谱介质112的上面包括(1)与色谱介质112结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的一个第一俘获区域118;(2)一个第二检测区域120,这个第二检测区域120包括一种被固定了的分子,这种被固定了的分子是辅助特异性结合配对的一个第二成员并对于与色谱介质112结合的第一成员具有特异亲合性;以及(3)包括一种被固定了的分子的一个第三对照区域122,这种被固定了的分子能够特异性地结合被标记的特异性结合配对,该被标记的特异性结合配对与被分析物或该被分析物的类似物共价共轭,所述被分析物或该被分析物的类似物与色谱介质112结合。这样安置这些区域,从而使得第一俘获区域118最靠近色谱介质112的第一端114,而第三对照区域122最靠近色谱介质112的第二端116,使第二检测区域120处于第一俘获区域118和第三对照区域122之间。可以如上所述,用塑料衬底124衬托色谱介质112。
第二对置组件104有一个孔126,以便使得能观察一部分色谱介质112,而这部分包括检测区域120和对照区域122。可用诸如锁扣128和130那样的连接器把第一和第二对置组件102和104保持在一起。可用密封垫132围绕第一和第二对置组件102和104,以便防止流体从装置中流出。
这样构造第一和第二对置组件102和104,使得把该第一和第二对置组件102和104从它们不是对置的位置弄成对置时,就会导致吸收体110与色谱介质112的第二端116有效接触。它还导致在第一对置组件102上的样品制备区域108与色谱介质112的第一端114接触,从而使检验样品、对于与辅助特异性结合配对的第一成员共轭的被分析物的被再溶解过的被标记的特异性结合配对、以及与所述被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的、上述被分析物或该被分析物的类似物从第一端114通过色谱介质112流到第二端116。
在使用时,把样品加到在第一对置组件102上的样品制备区域108,以便再溶解被标记的试剂。可把测定装置100或第一对置组件102插入一个温育箱,就像对于上述第一个实施例所述的那样。然后,使第一和第二对置组件相对置,并使样品和被再溶解过的被标记的那些组份能从第一端114通过色谱介质112迁移到第二端116。
在没有被分析物时,对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被标记的特异性结合配对就与被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的第一俘获区118结合,而且,并不到达包括上述辅助特异性结合对的被固定了的第二成员的第二检测区域120。不过,如果样品中有被分析物,它就与存在于第一俘获区域118中的被固定了的被分析物竞争结合对于与生物素共轭的被分析物的被标记的特异性结合配对,而且,然后至少某些所述对于被分析物的被标记的特异性结合配对到达包括辅助特异性结合对的被固定了的第二成员的第二检测区域120。之后,对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的、被标记的特异性结合配对就结合在第二检测区域120处,在那个地方产生一个可检测的信号。所述可检测的信号的强度正比于在原来的检验样品中的被分析物的浓度。
不过,不管样品中是否有被分析物;对照区域122都产生一个可检测的信号,这是因为,与对于基本上不与存在于样品制备区域108中的被分析物交叉反应的一种分子的被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的所述被分析物或该被分析物的类似物结合了被固定了的分子,该被固定了的分子能够特异性地结合在对照区域122处的被标记的特异性结合配对。这给出了一个恒定的信号,这个恒定的信号用作对于通过上述装置的合适的流动的一个对照区域和一个比较区域,从而使得能定量确定被分析物的浓度。C.多重测定装置
尽管根据进行一种单一测定的装置说明了上述那些装置,也可以用同样的原理来构造能够同时进行一种以上测定的多重测定装置。可这样构造这些测定装置,从而使得对于相同或不同的被分析物可同时进行那些测定。例如,可采用本发明的一种多重测定装置来测定大量不同的被分析物和相同样品的不同的等分试样,例如,在一种牛奶样品的不同等分试样中的不同的抗菌素,或者,可采用本发明的多重测定装置来测定大量不同样品中的相同的被分析物。这后一种方式对于这样一种情况的测定特别有用,这种情况是,样品是在不同时候取自要被测定是否有所感兴趣的被分析物的、同一病人。可以选择地,一种或多种测定可用于对照或参考标准。
本发明的多重装置可含有2到12种或更多种样品制备区域以及色谱介质,这取决于该装置所要用于的测定。典型的情况是,所述装置包含2到5种分开的样品制备区域和色谱介质。
用于多重测定装置的工作原理与上面图1和图2中所示的那些测定装置的工作原理完全相同,只是除了在同一装置上进行多种测定这一点。
图3中示出了采用与图1中所示的装置相同的原理的、一种多重测定装置的一个实施例。
一般来说,这种装置包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)许多样品制备区域,每一样品制备区域包括对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(b)一种与在上述第一对置组件上的所述那些样品制备区域分开的、用于吸收其中的流体的吸收体;以及(2)一个与上述第一对置组件可用铰链转动联接的、第二对置组件,这个第二对置组件包括:(a)许多种第一色谱介质,用于每一样品制备区域的是一种第一色谱介质,每一种第一色谱介质具有第一和第二端,而且,每一种第一色谱介质的上面包括:(i)与上述第一色谱介质结合的一种被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的一个第一区域;以及(ii)一种被固定了的分子的一个第二区域,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并对于与上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;(b)许多种第二色谱介质,用于每一样品制备区域的是一种第二色谱介质,每一种第二色谱介质具有一个第一端和一个第二端,而且,每一种第二色谱介质上面包括一个比较区域,这个比较区域含有已知量的、被固定到该比较区域上的、一种被分析物或该被分析物的类似物;以及(c)许多比较标记物区域,用于每一种第二色谱介质的是一个比较标记物区域,每个比较标记物区域中包括对于上述被分析物或该被分析物的类似物的、可再溶解形式的、与所述第二色谱介质有效接触的、一种被标记的特异性结合配对。
在本发明的多重测定装置的这种改型中,当把第一和第二对置组件从它们不是对置的位置弄成对置时,样品制备区域与每一种第一色谱介质的第一端有效接触,以便把样品以及对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的被标记的特异性结合配对施加给每一种第一色谱介质,而且,吸收体与每一种第一色谱介质的第二端以及每一种第二色谱介质的第二端有效接触,以便通过所述第一和第二色谱介质从它们的第一端抽取流体到它们的第二端。结果,通过比较结合在每一种第一色谱介质的检测区域处和第一种第二色谱介质的比较区域处的标记物的强度,上述装置给出了在所述每一种第一和第二色谱介质中存在有比预定量更多量的一种被分析物的、一种可检测到的指示。
装置200具有通过一个铰链206连接的一个第一对置组件202和一个第二对置组件204。第一对置组件202有许多样品制备区域208。第一对置组件202有许多吸收体210,这许多吸收体210在第一对置组件202上与每一样品制备区域208分开。也可以只要在那些样品两两之间没有交叉感染,采用一个单独的吸收体。
第二对置组件204有许多种第一色谱介质212,每一种第一色谱介质212具有一个第一端214和一个第二端216。每一种第一色谱介质212具有一个被固定了的被分析物的第一俘获区域218以及一个一种被固定了的分子的第二检测区域,所述这种被固定了的分子是辅助特异性结合对的一个第二成员并对于第一成员220具有特异亲合性。每一第二对置组件204也具有许多种第二色谱介质222,每一种色谱介质222具有一个第一端224和一个第二端226。每一种第二色谱介质222的上面有一个比较区域228。第二对置组件204有许多比较标记物区域230。可用一种塑料衬底232衬托每一种第一和第二色谱介质212和222。第二对置组件有一个或多个孔234,以便使得能观察第二俘获区域220和比较区域228。色谱装置还有锁扣236和238以及一个密封垫240。优选地,每一种第一色谱介质212有一种流动检查指示剂242。
图4示出了一种利用与图2的测定装置相同的原理而工作的多重测定装置。一般说来,这种装置包括:(1)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:(a)许多样品制备区域,每一样品制备区域包括:(i)对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及(ii)与对于一种分子的一种被标记的特异性结合配对共价共轭的、预定量的一种被分析物或该被分析物的一种类似物,所述这种分子基本上不与可再溶解形式的上述被分析物交叉反应;以及(b)一种与上述那些样品制备区域分开的吸收体;以及(2)一个第二对置组件,这个第二对置组件包括许多种具有第一和第二端的色谱介质;每种色谱介质的上面包括一些离散的、不重叠的区域:(a)与上述色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的一个第一俘获区域;(b)包括一种被固定了的分子的一个第二检测区域,这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并对于与上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;以及(c)包括一种被固定了的分子的一个第三对照区域,这种被固定了的分子能够特异性地结合上述被标记的特异性结合配对,该特异性结合配对与上述被分析物或该被分析物的类似物共价共轭,所述被分析物或该被分析物的类似物与上述色谱介质结合。
在本发明的多重测定装置的这种改型中,这样构造第一和第二对置组件,从而使得把所述第一和第二对置组件从它们不是对置的位置弄成对置时就会导致吸收体与每一种色谱介质的第二端有效接触。这还导致样品制备区域与每一种色谱介质的第一端接触,从而使检验样品、对于与辅助特异性结合对的第一成员共轭的被分析物的被再溶解过的被标记的特异性结合配对、以及与一种被标记的特异性结合配对共价结合的预定量的上述被分析物或该被分析物的类似物通过每种色谱介质从第一端流到第二端。
测定装置300具有通过一个铰链306连接的一个第一对置组件302和一个第二对置组件304。第一对置组件302有许多样品制备区域308以及一些与样品制备区域308分开的吸收体310。
第二对置组件304有许多种色谱介质312,每一种色谱介质312具有一个第一端314和一个第二端316。每一种色谱介质312有一个第一俘获区域318、一个第二检测区域320、以及一个第三对照区域322。可用一种塑料衬底324衬托每一种色谱介质312。第二对置组件304有一个孔或许多个孔326,以便使得能观察检测区域320和对照区域322,通过诸如锁扣328和330那样的连接器把第一和第二对置组件保持在一起,并且用一个衬垫332围绕所述第一和第二对置组件,以防止流体流出。
在使用时,严格按照上面图1和图2中所示的进行单独测定的测定装置那样使用多重测定装置,这使得能有足够的时间,以便能使在上述装置上的那些试剂再溶解,并能通过色谱介质迁移。II.被分析物和特异性结合配对A.被分析物
典型的情况是,采用诸如通过本发明的测定装置所进行的测定那样的竞争性测定,用于单价的被分析物。单价的被分析物典型地是半抗原,但同样的原理可用来测定任何单价的被分析物,例如,一种正常的多价抗原,在这种正常的多价抗原上,阻塞或修饰另外的结合了抗体的部位。
可测定的被分析物包括下述这些物质:茶碱;地谷新;达舒平;利多卡因;普鲁卡因酰胺;心得安;奎尼定;氨基羟丁基卡那霉素;青霉素;以及包括氨苄青霉素、氨苄青霉素的衍生物、合成和半合成青霉素、和先锋霉素在内的其它一些β-内酰胺抗菌素;庆大霉素;卡那霉素;乙基西梭霉素硫酸盐;妥布霉素;四环素;一些磺胺,例如,酞磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺乙酰胺、磺胺、磺胺苯吡唑、磺胺甲异噁唑、磺胺嘧啶、磺胺-5-甲氧嘧啶、长效磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲氧吡嗪、周效磺胺、和4,4′-氨苯砜;三环抗忧郁药;乙琥胺柴浪丁;苯巴比妥;安定;苯妥英;脱氧苯比妥;丙戊酸;扑热息痛;乙酰水扬酸;布洛劳;氨甲喋呤;一些滥用的药物,例如,吗啡、可待因、可卡因、芬太尼、3-甲基芬太尼、苯异丙胺、麦角酸二乙基酰胺、苯环哌啶、N,α-二甲基-1,3-苯并二羟氧基-5-乙胺(“精神昏迷”)、和海络英以及它们的代谢物;DNP;1-取代-4-羟基-2-硝基苯;4-取代2-硝基-三烷基苯胺盐;以及一些环境污染物,例如,苯、甲苯、二甲苯、乙苯、氯丹、DDT及其代谢物、2,4-D,2,4,5-T、和阿特拉津。
在这些被分析物中,特别重要的被分析物是β-内酰胺抗菌素、磺胺二甲嘧啶、庆大霉素、以及四环素。这些抗菌素常常出现在牛奶中,而且,人们愿意有一种检测它们存在于牛奶中的快速方法。B.特异性结合配对
适用于采用本发明的装置进行测定的特异性结合配对包括但并不限于抗体和特异性结合蛋白质。后者的一个例子是从脂肪嗜热杆菌分离出的结合了青霉素的蛋白质(PBP)。特异性结合蛋白质的另外的一些例子是对于激素的一些蛋白质受体。
典型的情况是,通过产生抗体的一种动物的免疫法产生抗半抗原的抗体,这种动物一般是一种哺乳动物,例如山羊、兔、牛、马、或绵羊,并且这种动物具有与一种载体蛋白质共价共轭的一种半抗原。一般优选一种半抗原与一种载体蛋白质共轭用于产生抗体,而在某些情况下,可以要求这样。这是因为绝大多数半抗原如果注射进产生抗体的一种动物而没有共轭的话,就会最弱地致免疫。
本领域中众所周知各种各样的载体蛋白质,而这些载体蛋白质可包括各种物种的血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、血纤维蛋白原、聚赖氨酸、以及结核菌素(PPD)的提纯的蛋白质衍生物。
本领域中已知大量的偶合试剂。用于半抗原与蛋白质共轭的那些反应类型的有酰化试剂、烷基化试剂、氧化还原试剂、以及亲电子试剂。
选择反应典型地依赖于用于反应的半抗原中可资利用的基团。如果一种半抗原含有一种自由羧基或一种可易于羧化的基,那么,广泛采用的方法是混合过的酐方法、碳化二亚胺方法、以及N-羧基琥珀酰亚胺酯方法,所述碳化二亚胺方法使用一些碳化二亚胺,例如,1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺、N,N′-双环己基碳二亚胺、或1-双环己基-3(2-吗啉代乙基)碳化二亚胺N-甲-对甲苯磺酸盐,而在所述N-羧基琥珀酰亚胺酯方法中,用羧基琥珀酰亚胺使碳化二亚胺酯化。
具有氨基或可还原为氨基的硝基的半抗原可通过许多反应与蛋白质偶合。如果胺是芳族的,它们可以通过慢慢加入硝酸而被转化为重氮盐并且可与中等碱性pH值的蛋白质反应。具有脂肪族胺的半抗原可通过各种方法与蛋白质共轭,例如,通过采用碳化二亚胺、甲代亚苯基-2,4-二异氰酸盐,通过采用马来酰亚胺化合物,或通过与高碘酸钠反应。另外的方法是通过与对硝基苯甲酰氯反应,接着还原为对氨基苯甲酰胺,然后用重氮化作用可使对氨基苯甲酰胺与蛋白质偶合,这样将脂肪族胺转化为芳族胺。
可采用与氨基反应以便形成脒的双官能亚胺酯(imidate esters)来使半抗原与蛋白质共轭。这样的亚胺酯包括二甲基己二亚胺酯、二甲基庚二亚胺、甲基辛二亚胺、以及其它一些相似的类似物。
可用马来酰亚胺使具有巯基的半抗原与蛋白质共轭。其它一些反应也是可能的,例如,用溴乙酰胺基活化蛋白质,或者,在pH值为4.0的乙酸盐缓冲剂中在载体和半抗原之间形成二硫化物键。
对于具有羧基的半抗原,一般优选地把羧基转化为另一种基。例如,乙醇可转化为引入可用于共轭羧基的、琥珀酸。双官能试剂癸二酰二氯把乙醇转化为酰基氯,这酰基氯易于与稍微呈碱性pH值的蛋白质反应。可用重氮化过的、引入羧基的、对氨基苯甲酸活化酚,然后,如上所述,可通过混合了的酐反应使所述酚与载体反应。通过形成对硝基苯苷,随后把硝基还原为氨基,并在重氮化后共轭,来活化糖,就像对芳族胺那样。另外的方法是基于糖的连糖醇类裂解为醛类,然后通过还原性的烷基取代使这醛类与胺偶合。还可以通过氯甲酸盐共轭半抗原,用相同摩尔数量的碳酰氯制备所述氯甲酸盐。
对于具有醛基或酮基的半抗原,通过形成O-(羧甲基)肟,可易于引入羧基。还可用对肼基苯甲酸来衍生酮基,以便产生羧基,这羧基可与上述用于羧基的载体共轭。含有醛类的半抗原可通过形成席夫碱类直接被共轭,通过用硼氢化钠还原来稳定所述席夫碱类。
在P.Tijssen的“酶免疫测定的实践和理论”(Elsevier,Amsterdam,1985)一书的第12章,第279页到第296页中,一般性地说明了共轭方法。其它一些共轭方法在本领域中是已知的,并且可用于一些特定的半抗原。III.检验试剂盒
本发明的另一个方面是用于采用本发明的测定装置进行测定的检验试剂盒。这些检验试剂盒装有I(B)(1)部分中的上述实施例的、具有两种色谱介质的一种测定装置。
本发明的检验试剂盒可包括:(1)免疫测定装置;以及(2)用于在比较标记物区域中再溶解对于被分析物或该被分析物的类似物的、被标记的特异性结合配对。
液体典型地是一种含水液体。含水液体典型的是水、盐水或一种缓冲过的溶液,但也可用其它含水液体。检验试剂盒中的免疫测定装置可以是进行一种单一测定的测定装置或是一种多重测定装置。如果免疫测定装置是一种多重测定装置,试剂盒一般包括用于在每一比较标记物区域中再溶解对于被分析物或被分析物的类似物的被标记的特异性结合配对的充足液体。
本发明的检验试剂盒还可包含其它一些试剂,例如,提取或处理样品的试剂。
实例
用下述这些实例说明本发明。这些例子只是用于说明性的目的,而绝不能被认为是以任何方式来限制本发明的范围。
例1
用于检测牛奶中的β-内酰胺抗菌素的测定装置
(可能的例子)
这个例子中所述的测定装置打算用于检测牛奶中的β-内酰胺抗菌素(青霉素、氨苄青霉素或先锋霉素)。它也可以用于其它一些测定。
按照图1构造这种装置。第一对置组件10和第二对置组件12是固体漂白过的亚硫酸盐。第一对置组件12包括由Cytosep(AhlstromFiltration,Holly Springs,PA)制成的一个样品制备区域18。这个样品制备区域包括与生物素共轭的、并用胶体全标记的、结合了青霉素的蛋白质。样品制备区域18还包括来自诸如绵羊或山羊那样的动物的、10%的抗-兔免疫球蛋白G。用相等体积的共轭稀释剂(5mM的硼酸盐、0.1%的曲力通X-100、1%的牛血清白蛋白、5%的蔗糖,pH值为8.0)分开混合生物素标记的结合了青霉素的蛋白质以及抗-兔免疫球蛋白G,并在37℃干燥所述生物素标记的结合了青霉素的蛋白质以及抗-兔免疫球蛋白G30分钟。
第二对置组件14包括20μM的硝化纤维(Schleicher & Schuell(Keene,NH))的一种第一色谱介质22。第一色谱介质22在其上面在一个第一区域28处已结合了7-氨基头孢烷酸,这种7-氨基头孢烷酸与山羊免疫球蛋白G共轭并如上所述在上述第一色谱介质上从共轭稀释剂干燥出来。典型的情况是,上述色谱介质的尺寸是长度从约0.5英寸到约1英寸,而宽度为约0.125英寸到约0.375英寸。该第一色谱介质还有与第一色谱介质22结合的链霉抗生物素蛋白的一个第二区域30。链霉抗生物素溶解在共轭稀释剂中并如上面那样被干燥。第一色谱介质22还包括一种流动检查指示剂52,这种流动检查指示剂52是溶解在共轭缓冲剂中并被干燥的兔免疫球蛋白G。用一种聚碳酸酯试验条衬底(勒克森)42衬托第一色谱介质22。
第一色谱介质22还包括一种流动检查指示剂52,这种流动检查指示剂52是如上所述从共轭稀释剂干燥出来的兔免疫球蛋白G。第二色谱介质32由20微米的硝化纤维(Schleicher & Schuell)制成。所述第二色谱介质的尺寸典型地与上述第一色谱介质的尺寸相同。第二色谱介质32的上面包括通过诸如钥孔血蓝蛋白(KLH)那样的蛋白质载体固定在该色谱介质上的、5ng青霉素G。第二色谱介质32还包括作为对照比较物区域40的、金标记的、结合了青霉素的蛋白质。
在使用时,把生牛奶样品加到样品制备区域18上。可把第一对置组件12放进一个温育箱。在温育步骤后,把两滴试剂A(0.005M的磷酸盐缓冲过的盐水,0.4%的吐温20,1.25mM的HEPES,0.0025%的曲力通X100,0.0015的EDTA,0.25%的叠氮化钠,pH值为7.5)加入到在第二对置组件32上的比较标记物区域40。然后,关闭装置,并判读结果。如果检验线的强度比对照线的强度低,那么,牛奶样品就含有少于5ng的青霉素G或等效物。反之,如果检验线的强度比对照线的强度强,那么,样品就含有多于5ng的青霉素G。假若已出现合适的流动,在流动检查区域总会出现颜色。
实例2
用于检测牛奶中的庆大霉素、磺胺
二甲嘧啶或四环素的检验装置
(可能的例子)
按照例1构造一种装置,这种装置用于检测牛奶中的下述这些抗菌素的一种,所述这些抗菌素是庆大霉素、磺胺二甲嘧啶或四环素,但除开这一点,就是用对于与生物素共轭的并用胶体金标记的抗菌素的、单克隆抗体来取代与在第一对置组件12的样品制备区域18上的生物素共轭的、胶体金标记的、结合了青霉素的蛋白质。类似地,比较标记物区域是用胶体金标记的、同样的单克隆抗体。与第一色谱介质22结合的被固定了的抗原或该抗原的类似物的、第一区域28是与免疫球蛋白G物种共价结合的抗原,该免疫球蛋白G物种并不被抗-兔免疫球蛋白G抗体特异性地结合。对照线是5ng的、固定在第二色谱介质32上的、抗原或一种等效物。
结构和进行测定的其它细节如例1中那样。
实施3
用于检测牛奶中的β-内酰胺抗菌素的检验装置
(另一种样式)
(可能的例子)
可按图2的另一种样式构造用于检测β-内酰胺抗菌素的检验装置。按照图2构造这种装置。第一和第二对置组件是固体漂白过的亚硫酸盐。样品制备区域108包括经由抗-兔免疫球蛋白G与胶体金结合的、5ng/ml的青霉素G(或等效物)。样品制备区域108还包括用胶体金标记的、生物素标记的、结合了青霉素的蛋白质。在样品制备区域使这些试剂干燥下来,这样品制备区域是上述的Cytosep(Ahlstrom)。吸收体270是Ahlstrom 270。
第二对置组件104具有一种是20微米硝化纤维的(Schleicher &Schuell)色谱介质112。用勒克森衬底衬托色谱介质112。色谱介质112的上面包括:(1)与山羊免疫球蛋白G共轭并被固定在所述色谱介质上的7-氨基头孢烷酸的、第一俘获区域118;(2)如例1中的、链霉抗生物素蛋白的一个检测区域;以及(3)一个对照区域122,这个对照区域122也用作一种流动指示剂,而且是被固定了的兔免疫球蛋白G。在使用时,把生牛奶样品加给样品制备区域108,并如例1那样,把检验卡放进一个温育箱。之后,关闭装置并判读结果。如果检验线的强度比对照线的强度低,牛奶样品就含有少于5ng的青霉素G或等效物。反之,如果检验线的强度比对照线的强度强,样品就含有5ng以上的青霉素G。对于每一种情况,也用作流动指示剂的对照线应该给出可检测到的信号。
实例4
用于检测牛奶中的庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、
或四环素的测定装置
(另一种样式)
(可能的例子)
按照例3构造另一种样式的、用于检测牛奶中的庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、或四环素的装置,除开这一点,就是在第一对置组件102上的样品制备区域108具有5ng的与结合了胶体金的抗-兔免疫球蛋白G共价结合的抗菌素(或等效物)以及对于用胶体金标记并与生物结合的抗原(见例2)的、单克隆抗体。
在色谱介质112上的俘获区域118是与山羊免疫球蛋白G共价结合的抗原。结构和进行测定的其它细节如例3中那样。
本发明的优点
本发明的色谱测定装置可对各种各样的抗原和半抗原进行半定量测定,而同时提供了测定正确地进行的肯定的指示。
本发明的色谱测定装置还提供了一个优点,就是用一些对置组件来构造。使用对置组件提供了极好的通用性,因为它使得能以许多不同的顺序进行反应。这一点是可能的,因为采用这样的一些对置组件使得能把试剂发送给试验条或其它反应组份的一些精确确定的区域。采用对置组件还提供了以最少的试剂消耗来最佳地进行测定的优点,这是通过保证利用隔绝装置中的死角而不浪费试剂这一点来做到的。
采用可通过直接人工关闭而成为对置的、一些对置组件,使得操作者能进行本发明的测定而无需使用另外一些液体或可破碎的容器。这使得一旦上述样品或一些样品施加到色谱介质,就能进行测定而无需加入另外的液体,这样就避免了稀释,并保持了用本发明的测定装置进行测定的灵敏度。
此外,本发明的色谱测定装置使得能快速并准确地检测一些具有临床重要性的被分析物。所述装置的结构使得能更均匀地把样品施加给色谱介质,并减少干扰,这干扰在不同情况下可能会由颗粒物或有色样品引入。采用可再溶解形式的胶体金属标记物提供了极快速的、标记的运动学过程,并对进行测定有所改善。
采用本发明的装置的检验方法具有广泛的动力学范围,而且基本上没有假阴性,这种假阴性可出现于其它一些对于高浓度被分析物的检验方法中。
尽管已相当详细地说明了本发明,并参见了本发明的某些优选的改型,其它一些改型和实施例也是可能的。这些改型包括两个组件的装置的其它一些结构,该两个组件的装置按此处所述的基本原理工作并进行一些竞争性免疫测定。因此,本发明的范围由下面的权利要求书确定。
Claims (18)
1.一种竞争性免疫测定装置,这种装置包括:(a)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:
(i)一个样品制备区域,这个样品制备区域包括对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的一种特异性结合配对;以及
(ii)一个与在上述第一对置组件上的所述样品制备区域分开的、用于吸收其中的流体的吸收体;以及(b)一个可与上述第一对置组件用绞链转动联接的、第二对置组件,这个第二对置组件包括:
(i)一种第一色谱介质,这种第一色谱介质具有第一和第二端,而且这种第一色谱介质上面包括:
(A)与上述第一色谱介质结合的、被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的、一个第一区域;以及
(B)一种被固定了的分子的一个第二区域,所述这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并对于与上述第一色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;
(ii)一种具有一个第一端和一个第二端的、第二色谱介质,这种第二色谱介质上面包括一个比较区域,所述这个比较区域含有被固定到该比较区域上的、已知量的、上述被分析物或该被分析物的类似物;以及
(iii)一个比较标记物区域,这个比较标记物区域中包括对于上述被分析物或该被分析物的类似物的、可再溶解形式的、与上述第二色谱介质有效接触的、一种被标记的特异性结合配对;
其中,当把上述第一和第二对置组件从它们不是对置的位置弄成对置时,上述样品制备区域就会与上述第一色谱介质的第一端有效接触,以便把样品以及对于与上述辅助特异性结合对的第一成员共轭的所述被分析物的上述被标记的特异性结合配对施加给所述第一色谱介质,而且,上述吸收体就会与所述第一色谱介质的第二端以及所述第二色谱介质的第二端有效接触,以便通过所述第一和第二色谱介质从它们的第一端抽取流体到它们的第二端,从而使得所述装置给出关于一种被分析物存在的、可检测到的、可比较的指示。
2.如权利要求1所述的免疫测定装置,其中在上述第一对置组件上的所述样品制备区域还包括结合了一种实际上不与所述被分析物交叉反应的分子的、可再溶解形式的、一种第二被标记的特异性结合配对,而所述第一色谱介质还包括一种流动检查指示剂,这种流动检查指示剂包括一种结合了上述第二被标记的特异性结合配对的分子,从而使得所述流动检查指示剂给出了已出现通过上述第一色谱介质的流动的、肯定的指示。
3.如权利要求1所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的第一成员是生物素。
4.如权利要求3所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的第二成员是链霉抗生物素蛋白。
5.如权利要求4所述的免疫测定装置,其中上述被分析物、上述被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的第一区域、以及对于与生物素共轭的上述被分析物的所述被标记的特异性结合配对分别选自下述这组物质,所述这组物质由以下这些组合构成:(1)上述被分析物是β-内酰胺抗菌素,所述被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的第一区域是与免疫球蛋白共轭的7-氨基头孢烷酸,而对于与生物素共轭的上述被分析物的所述被标记的特异性结合配对是生物素酰化的、结合了青霉素的蛋白质;以及(2)所述被分析物选自下述这组物质,所述这组物质包括庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、以及四环素,所述被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的第一区域是与免疫球蛋白共价共轭的被分析物,而对于与生物素共轭的上述被分析物的所述被标记的特异性结合配对是一种生物素酰化的抗-被分析物抗体。
6.一种用于检测和/或确定被分析物的检验试剂盒,这种试剂盒包括包装在一些单独的容器中的:(a)权利要求1的免疫测定装置;以及(b)用于在比较标记物区域中再溶解所述对于上述被分析物或该被分析物的类似物的被标记的特异性结合配对的一种液体。
7.一种竞争性免疫测定装置,这种装置包括:(a)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:
(i)一个样品制备区域,这个样品制备区域包括:
(A)对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及
(B)与对于一种分子的一种被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的、上述被分析物或该被分析物的一种类似物,所述这种分子实际上不与可再溶解形式的上述被分析物交叉反应;以及
(ii)一个与上述样品制备区域分开的吸收体;以及(b)一个第二对置组件,这个第二对置组件包括一种具有第一和第二端的色谱介质,所述这种色谱介质上面包括一些离散的、不重叠的区域:
(i)与上述色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的一个第一俘获区域;
(ii)包括一种被固定了的分子的一个第二检测区域,所述这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并对于上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;以及
(iii)包括一种被固定了的分子的一个第三对照区域,所述这种被固定了的分子能够特异性地结合上述被标记的特异性结合配对,该被标记的特异性结合配对与上述被分析物或该被分析物的类似物共价共轭,所述被分析物或该被分析物的类似物与上述色谱介质结合;
其中这样构造上述第一和第二对置组件,使得把该第一和第二对置组件从它们不是对置的位置弄成对置时就导致上述吸收体与所述色谱介质的第二端有效接触,并导致上述样品制备区域与所述色谱介质的第一端接触,从而使得检验样品,对于与生物素共轭的上述被分析物的被再溶解过的被标记的特异性结合配对、以及与一种被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的、上述被分析物或该被分析物的类似物通过上述色谱介质从所述第一端流到所述第二端,这使得所述装置给出关于上述被分析物存在的、可检测到的、可比较的指示。
8.如权利要求7所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的所述第一成员是生物素。
9.如权利要求8所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的所述第二成员是链霉抗生物素蛋白。
10.如权利要求9所述的免疫测定装置,其中上述被分析物、对于与生物素共轭的该被分析物的所述被标记的特异性结合配对、结合在上述色谱介质上的所述俘获区域处的所述被固定了的被分析物或该被分析物的类似物、对于一种实际上不与所述被分析物交叉反应的分子的上述被标记的特异性结合配对、以及结合在上述色谱介质上的所述对照区域处的所述被固定了的分子选自下述这组物质,所述这组物质由下述这些组合构成:(1)所述被分析物是β-内酰胺抗菌素,对于与生物素共轭的上述被分析物的所述被标记的特异性结合配对是结合了青霉素的一种蛋白质,上述结合在所述色谱介质上的俘获区域处的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物是与免疫球蛋白G共价共轭的7-氨基头孢烷酸,对于一种实际上不与所述被分析物交叉反应的分子的上述被标记的特异性结合配对是抗-免免疫球蛋白G抗体,而结合在上述色谱介质上的所述对照区域处的所述被固定了的分子是兔免疫球蛋白G;以及(2)上述被分析物是选自下述这组物质的抗菌素,所述这组物质包括庆大霉素、磺胺二甲嘧啶、以及四环素,对于与生物素共轭的上述被分析物的所述被标记的特异性结合配对是一种抗-被分析物抗体,对于实际上不与上述被分析物交叉反应的一种分子的所述被标记的特异性结合配对是抗-兔免疫球蛋白G,结合在上述色谱介质上的所述俘获区域处的所述被固定了的被分析物或该被分析物的类似物是与除了兔这一物种外的一种物种的免疫球蛋白G共价结合的上述被分析物,而结合在上述对照区域处的所述被固定了的分子是兔免疫球蛋白G。
11.一种竞争性免疫测定装置,这种装置包括:(a)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:
(i)许多样品制备区域,每一样品制备区域包括对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及
(ii)一种与在上述第一对置组件上的所述那些样品制备区域分开的、用于吸收其中流体的吸收体;以及(b)一个可与上述第一对置组件用绞链转动联接的、第二对置组件,这个第二对置组件包括:
(i)许多种第一色谱介质,用于每一样品制备区域的是一种第一色谱介质,每一种第一色谱介质具有第一和第二端,而且,每一种第一色谱介质的上面包括:
(A)与上述第一色谱介质结合的一种被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的、一个第一区域;以及
(B)一种被固定了的分子的一个第二区域,所述这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并对于与上述第一色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性;
(ii)许多种第二色谱介质,用于每一样品制备区域的是一种第二色谱介质,每一种第二色谱介质具有一个第一端和一个第二端,而且,每一种第二色谱介质上面包括一个比较区域,这个比较区域含有已知量的、固定在该比较区域上的一种被分析物或该被分析物的类似物;以及
(iii)许多比较标记物区域,用于每一种第二色谱介质的是一个比较标记物区域,每一比较标记物区域中包括可再溶解形式的、与上述第二色谱介质有效接触的、对于上述被分析物或该被分析物的类似物的、一种被标记的特异性结合配对;
其中当把上述第一和第二对置组件从它们不是对置的位置弄成对置时,上述那些样品制备区域与每一种第一色谱介质的第一端有效接触,以便把样品以及对于与上述辅助特异性结合对的所述第一成员共轭的上述被分析物的所述被标记的特异性结合配对施加到上述每一种第一色谱介质,而且,上述吸收体与所述每一种第一色谱介质的第二端和每一种第二色谱介质的第二端有效接触,以便通过所述第一和第二色谱介质从它们的第一端到它们的第二端抽取流体,从而使得上述装置给出在上述第一和第二色谱介质中的至少一种中存在一种被分析物的、可检测到的、可比较的指示。
12.如权利要求11所述的免疫测定装置,其中在上述第一对置组件上的所述那些样品制备区域的每一个还包括结合了一种分子的、可再溶解形式的、一种第二被标记的特异性结合配对,所述这种分子实际上不与上述被分析物交叉反应,而且,上述每一种第一色谱介质还包括一种流动检查指示剂,这种流动检查指示剂包括一种结合了每一种第二被标记的特异性结合配对的分子,从而使每一种所述流动检查指示剂给出了通过每一种上述第一色谱介质已出现流动的、一种肯定的指示。
13.如权利要求11所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的所述第一成员是生物素。
14.如权利要求13所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的所述第二成员是链霉抗生物素蛋白。
15.一种用于检测和/或确定至少一种被分析物的检验试剂盒,这种试剂盒包括包装在一些单独的容器中的:(a)权利要求11的免疫测定装置;以及(b)一种用于在每一个比较标记物区域中再溶解对于所述被分析物或该被分析物的类似物的上述被标记的特异性结合配对的液体。
16.一种竞争性免疫测定装置,这种装置包括:(a)一个第一对置组件,这个第一对置组件包括:
(i)许多样品制备区域,每一样品制备区域包括:
(A)对于与一种辅助特异性结合对的一个第一成员共轭的一种被分析物的、可再溶解形式的、一种被标记的特异性结合配对;以及
(B)与对于一种分子的一种被标记的特异性结合配对共价结合的、预定量的、一种被分析物或该被分析物的一种类似物,所述这种分子实际上不与可再溶解形式的所述被分析物交叉反应;以及
(ii)一种与上述那些样品制备区域分开的吸收体;(b)一个包括许多种色谱介质的、第二对置组件,所述许多种色谱介质具有第一和第二端,每一种色谱介质上面包括一些离散的、不重叠的区域:
(i)与上述色谱介质结合的被固定了的被分析物或该被分析物的类似物的、一个第一俘获区域;
(ii)包括一种被固定了的分子的、一个第二检测区域,所述这种被固定了的分子是上述辅助特异性结合对的一个第二成员并对于与上述色谱介质结合的所述第一成员具有特异亲合性,以及
(iii)包括一种被固定了的分子的一个第三对照区域,所述这种被固定了的分子与上述被标记的特异性结合配对特异性地结合,所述被标记的特异性结合配对与上述被分析物或该被分析物的类似物共价共轭,所述被分析物或该被分析物的类似物与上述色谱介质结合;
其中这样构造上述第一和第二对置组件,使得把该第一和第二对置组件从它们不是对置的位置弄成对置时就导致上述吸收体与每一种色谱介质的所述第二端有效接触,并导致上述那些样品制备区域与每一种色谱介质的所述第一端有效接触,从而使得那些检验样品、对于与上述辅助特异性结合对的所述第一成员共轭的上述被分析物的被再溶解过的被标记的特异性结合配对、以及与一种被标记的特异性结合配对共价结合的预定量的所述被分析物或该被分析物的类似物通过每一种色谱介质从所述第一端流动到所述第二端,这使得上述装置给出了在第一和第二色谱介质中的至少一种中存在一种被分析物的、可检测到的、可比较的指示。
17.如权利要求16所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的所述第一成员是生物素。
18.如权利要求17所述的免疫测定装置,其中上述辅助特异性结合对的所述第二成员是链霉抗生物素蛋白。
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WO (1) | WO1996038720A1 (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103109182A (zh) * | 2010-09-24 | 2013-05-15 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 用于色谱柱的塑料床支撑体的润湿 |
CN112098655A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-12-18 | 南方医科大学 | 一种基于肠道菌群的心力衰竭检测试剂盒 |
Families Citing this family (78)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3479100B2 (ja) | 1993-06-02 | 2003-12-15 | 帝国臓器製薬株式会社 | 免疫化学的簡易半定量方法および装置 |
AU6720096A (en) * | 1995-08-09 | 1997-03-05 | Quidel Corporation | Test strip and method for one step lateral flow assay |
ATE203828T1 (de) * | 1996-03-29 | 2001-08-15 | Univ British Columbia | Bestimmung der plättchenzahl unter verwendung eines plättchen-körnchenproteins |
US5900379A (en) * | 1996-04-11 | 1999-05-04 | Mizuho Usa, Inc. | Analytical device |
AUPO071396A0 (en) | 1996-06-28 | 1996-07-25 | Chandler, Howard Milne | Chromatographic assay or test device |
US5879951A (en) * | 1997-01-29 | 1999-03-09 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Opposable-element assay device employing unidirectional flow |
EP0977770A4 (en) * | 1997-03-14 | 2000-04-05 | Univ Boston | DIFFERENTLY FLAVORED STREPTAVIDINE |
US6103536A (en) | 1997-05-02 | 2000-08-15 | Silver Lake Research Corporation | Internally referenced competitive assays |
ES2284210T3 (es) | 1997-07-16 | 2007-11-01 | Charm Sciences Inc. | Un dispositivo de ensayo y un metodo para detectar la presencia de un analito residual en una muestra. |
US5985675A (en) | 1997-12-31 | 1999-11-16 | Charm Sciences, Inc. | Test device for detection of an analyte |
US6271046B1 (en) * | 1997-10-06 | 2001-08-07 | Enterix, Inc. | Apparatus and method for analyte detection |
US6221678B1 (en) * | 1997-10-06 | 2001-04-24 | Enterix Inc | Apparatus and method for analyte detection |
BR9812876B1 (pt) * | 1997-10-07 | 2011-09-06 | estojo de ensaio para detectar a presença de antibióticos contendo um anel de ß-lactama em um produto de laticìnio lìquido, e, método de detecção de antibióticos num produto de laticìnio lìquido. | |
US6087184A (en) * | 1997-11-10 | 2000-07-11 | Beckman Coulter, Inc. | Opposable-element chromatographic assay device for detection of analytes |
US6267722B1 (en) | 1998-02-03 | 2001-07-31 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care diagnostic systems |
US6394952B1 (en) | 1998-02-03 | 2002-05-28 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care diagnostic systems |
USD434153S (en) * | 1998-04-20 | 2000-11-21 | Adeza Biomedical Corporation | Point of care analyte detector system |
USD432244S (en) * | 1998-04-20 | 2000-10-17 | Adeza Biomedical Corporation | Device for encasing an assay test strip |
US6297020B1 (en) | 1999-03-01 | 2001-10-02 | Bayer Corporation | Device for carrying out lateral-flow assays involving more than one analyte |
FR2801386A1 (fr) * | 1999-11-19 | 2001-05-25 | Adiatec Sa | Dispositif de test pour l'analyse de faibles volumes d'echantillons par des methodes immunochromatographiques |
US6509196B1 (en) | 2000-01-04 | 2003-01-21 | Response Biomedical Corp. | Compensation for non-specific signals in quantitative immunoassays |
US6316205B1 (en) | 2000-01-28 | 2001-11-13 | Genelabs Diagnostics Pte Ltd. | Assay devices and methods of analyte detection |
DE10009503A1 (de) | 2000-02-29 | 2001-08-30 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur Immobilisierung von Konjugaten in diagnostischen Tests |
US20030003476A1 (en) * | 2001-03-23 | 2003-01-02 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Waste water inspecting agent and waste water inspecting apparatus using the same |
US20030162236A1 (en) * | 2001-03-26 | 2003-08-28 | Response Biomedical Corporation | Compensation for variability in specific binding in quantitative assays |
DE10126583C2 (de) * | 2001-05-31 | 2003-05-08 | Envitec Wismar Gmbh | Vorrichtung zum Sammeln von flüssigen Proben |
US8481334B1 (en) | 2001-11-06 | 2013-07-09 | Charm Sciences, Inc. | Method of attaching a ligand to a solid support |
JP3918741B2 (ja) * | 2002-03-28 | 2007-05-23 | セイコーエプソン株式会社 | 電気光学装置の製造方法、及び半導体装置の製造方法 |
JP4532121B2 (ja) * | 2002-04-10 | 2010-08-25 | レスポンス バイオメディカル コーポレイション | 高感度の免疫クロマトグラフィーアッセイ法 |
US7175992B2 (en) * | 2002-04-10 | 2007-02-13 | Response Biomedical Corporation | Sensitive immunochromatographic assay |
WO2004033101A1 (en) * | 2002-10-11 | 2004-04-22 | Zbx Corporation | Diagnostic devices |
FI20021935A (fi) * | 2002-10-31 | 2004-05-01 | Erilab Oy | Menetelmä pikatestiä varten ja kontrollilaite |
US7300802B2 (en) * | 2003-04-25 | 2007-11-27 | Biodigit Laboratories Corp. | Membrane strip biosensor system for point-of-care testing |
US7499154B2 (en) * | 2003-06-03 | 2009-03-03 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Readhead for optical inspection apparatus |
US8101429B2 (en) | 2003-06-03 | 2012-01-24 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Native analyte as a reference in lateral flow assays |
WO2005006959A2 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-27 | Oakville Hong Kong Co., Limited | Compact analyte testing cassette with true positive and negative analyte controls |
US7238538B2 (en) * | 2003-09-19 | 2007-07-03 | Freitag Helmut E | Chromatographic assay device and methods |
US7410808B1 (en) | 2003-12-08 | 2008-08-12 | Charm Sciences, Inc. | Method and assay for detection of residues |
CN100357738C (zh) * | 2004-03-26 | 2007-12-26 | 博奥生物有限公司 | 一种检测小分子化合物的方法 |
US7056473B2 (en) * | 2004-04-29 | 2006-06-06 | Response Biomedical Corp. | Method and apparatus of quantitative assays |
US7906276B2 (en) * | 2004-06-30 | 2011-03-15 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzymatic detection techniques |
US20060008920A1 (en) * | 2004-07-09 | 2006-01-12 | Branan Medical Corporation | Combination assay for alcohol and drugs of abuse |
US20060019406A1 (en) * | 2004-07-23 | 2006-01-26 | Ning Wei | Lateral flow device for the detection of large pathogens |
US20060068500A1 (en) * | 2004-09-28 | 2006-03-30 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Detecting yeast infections using a lateral flow assay |
EP1807212A4 (en) * | 2004-10-06 | 2009-06-03 | Binax Inc | SAMPLE RECEIVING DEVICE AND USE METHOD THEREFOR |
US7442557B1 (en) | 2004-10-22 | 2008-10-28 | Idexx Laboratories, Inc. | Bi-directional flow assay device with reagent bridge |
US20060199221A1 (en) * | 2005-03-07 | 2006-09-07 | Samad Talebpour | Correction for temperature dependence assays |
WO2006098804A2 (en) | 2005-03-11 | 2006-09-21 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
US7189522B2 (en) | 2005-03-11 | 2007-03-13 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Dual path immunoassay device |
FR2883375B1 (fr) * | 2005-03-17 | 2007-05-18 | Groupe Servibio Soc Par Action | Emballage pour outil de prelevement de secretions corporelles |
JP4891317B2 (ja) * | 2005-06-28 | 2012-03-07 | ズィービーエックス・コーポレーション | 膜アレイ及び分析用装置 |
US20070020699A1 (en) * | 2005-07-19 | 2007-01-25 | Idexx Laboratories, Inc. | Lateral flow assay and device using magnetic particles |
US8185318B2 (en) * | 2006-01-19 | 2012-05-22 | Novx Systems Canada Inc. | Method of compensation of dose-response curve of an assay for sensitivity to perturbing variables |
US8185319B2 (en) * | 2006-01-19 | 2012-05-22 | Novx Systems Canada Inc. | Method of compensation of dose-response curve of an assay for sensitivity to perturbing variables |
US20070224701A1 (en) * | 2006-02-16 | 2007-09-27 | Becton, Dickinson And Company | Combination vertical and lateral flow immunoassay device |
EP2132571B1 (en) * | 2007-02-26 | 2014-09-03 | Response Biomedical Corporation | Comparative multiple analyte assay |
WO2008109977A1 (en) * | 2007-03-12 | 2008-09-18 | Novx Systems Inc. | Method of compensation of dose-response curve of an assay for sensitivity to perturbing variables |
TW200900696A (en) * | 2007-06-25 | 2009-01-01 | Univ Chang Gung | Streptavidin surface-acoustic-wave immunosensor apparatus |
US8005280B2 (en) * | 2007-12-12 | 2011-08-23 | Jadak, Llc | Optical imaging clinical sampler |
US20130196310A1 (en) | 2008-05-20 | 2013-08-01 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Method and Device for Combined Detection of Viral and Bacterial Infections |
JP5117928B2 (ja) | 2008-05-27 | 2013-01-16 | 富士フイルム株式会社 | イムノクロマトグラフデバイス |
US20100022916A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Javanbakhsh Esfandiari | Method and Apparatus for Collecting and Preparing Biological Samples for Testing |
JP5248264B2 (ja) * | 2008-10-22 | 2013-07-31 | 田中貴金属工業株式会社 | イムノクロマトグラフ法による高感度測定キット |
US9234889B1 (en) | 2008-12-18 | 2016-01-12 | Charm Sciences, Inc. | Method and test strip for detecting residues |
ES2945032T3 (es) | 2010-05-06 | 2023-06-28 | Charm Sciences Inc | Dispositivo de incubadora con lector |
US8603835B2 (en) | 2011-02-10 | 2013-12-10 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Reduced step dual path immunoassay device and method |
WO2013037886A1 (en) * | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
WO2013037887A1 (en) * | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Competitive immunoassay for the detection of antibiotics |
WO2013037885A1 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Immunoassay for detecting antibiotics |
JP6293797B2 (ja) * | 2013-03-07 | 2018-03-14 | ラピッド パトゲン スクリーニング,インク. | 転換領域を持つ複数面の側方流動アッセイ |
AU2015241521B2 (en) | 2014-04-02 | 2019-12-19 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay utilizing trapping conjugate |
US20160116466A1 (en) | 2014-10-27 | 2016-04-28 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Rapid Screening Assay for Qualitative Detection of Multiple Febrile Illnesses |
US10808287B2 (en) | 2015-10-23 | 2020-10-20 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Methods and devices for accurate diagnosis of infections |
US11119102B1 (en) | 2016-02-16 | 2021-09-14 | Charm Sciences, Inc. | Test device, method, and assembly |
WO2019152657A1 (en) * | 2018-02-03 | 2019-08-08 | Simple Healthkit, Inc. | Reliable, comprehensive, and rapid sexual health assessment |
CN108693350A (zh) * | 2018-03-06 | 2018-10-23 | 山西省食品药品检验所(山西省药品包装材料监测中心) | 一种西布曲明胶体金快速检测装置及其用途 |
JP7347849B2 (ja) | 2018-04-19 | 2023-09-20 | ファースト ライト ダイアグノスティクス, インコーポレイテッド | 標的の検出 |
CN111812237A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-10-23 | 苏州药明泽康生物科技有限公司 | 丙戊酸药物浓度检测试剂盒及其应用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6168956B1 (en) * | 1991-05-29 | 2001-01-02 | Beckman Coulter, Inc. | Multiple component chromatographic assay device |
US5877028A (en) * | 1991-05-29 | 1999-03-02 | Smithkline Diagnostics, Inc. | Immunochromatographic assay device |
DE4202850A1 (de) * | 1992-01-31 | 1993-08-05 | Boehringer Mannheim Gmbh | Analysenelement fuer immunoassays |
US5395754A (en) * | 1992-07-31 | 1995-03-07 | Hybritech Incorporated | Membrane-based immunoassay method |
-
1995
- 1995-06-02 US US08/459,466 patent/US5648274A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
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- 1996-05-23 WO PCT/US1996/007576 patent/WO1996038720A1/en active IP Right Grant
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103109182A (zh) * | 2010-09-24 | 2013-05-15 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 用于色谱柱的塑料床支撑体的润湿 |
CN103109182B (zh) * | 2010-09-24 | 2015-07-01 | 通用电气健康护理生物科学股份公司 | 用于色谱柱的塑料床支撑体的润湿 |
CN112098655A (zh) * | 2020-08-06 | 2020-12-18 | 南方医科大学 | 一种基于肠道菌群的心力衰竭检测试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
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