CN118169283A - 一种氟西汀杂质iv的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种氟西汀杂质IV的检测方法，属于药物分析领域。本发明检测方法包括如下步骤：取待测样品，采用高效液相色谱法检测，色谱条件如下：色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以pH为5.8～6.2的三乙胺缓冲液和甲醇混合溶液作为流动相，三乙胺缓冲液和甲醇的体积比为43～53：47～57。本发明检测方法便捷、高效，适用性好，可有效检测、分离氟西汀原料药或各种制剂中氟西汀杂质IV，与中国药典方法相比，耐用性更好，并且流动相不含四氢呋喃，对环境、仪器和实验人员更加友好，检测准确、效率高且绿色环保。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种氟西汀杂质IV的检测方法。
背景技术
抑郁症是一种常见的精神障碍，以显著而持续的心境低落为主要特征，伴随着兴趣减退和愉快感的丧失，常常影响个体的工作、学习和社交功能。抑郁症可能是由多种因素引起的，包括遗传、生物学、心理社会和环境因素。临床上的病症标准为持续发作两周以上。典型的症状包括情绪低落、失眠或睡眠过度、食欲改变、疲劳、自卑感或无价值感、过度自责、注意力难以集中等。
盐酸氟西汀是一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂，通过多巴胺和5-羟色胺2型拮抗作用，可以增强5-羟色胺递质功能，阻断5-羟色胺再摄取，还可以增加去甲肾上腺素和多巴胺的传递，从而发挥抗抑郁、抗焦虑、抗强迫等作用，进而显著的改善和控制患者的精神病性症状。奥氮平盐酸氟西汀胶囊(商品名：)，是由Eli Lilly and Company开发，是首个获美国FDA批准上市的非典型抗精神病药物奥氮平与SSRI盐酸氟西汀组成的复方制剂，临床上可用于治疗双相情感障碍的抑郁发作，还可用于治疗重型抑郁症。可见氟西汀在抑郁症治疗中是一种重要的药物。
《中华人民共和国药典》(2020版)中对盐酸氟西汀结构、性状等进行了记载，同时对盐酸氟西汀中杂质I、杂质II、杂质III和杂质IV的检测方法以及含量进行了规定。其中，氟西汀杂质IV(N-甲基-3-苯基-3-(3-三氟甲基苯氧基)丙胺)为氟西汀合成过程中产生的工艺杂质，为保证产品质量，需要对其进行有效检测和控制。氟西汀杂质IV是氟西汀的同分异构体，与氟西汀结构性质相似，用普通的反相色谱难以将其分开，目前主流药典(中国药典、EP、USP)披露的检测方法流动相中均含四氢呋喃，毒性较强，会对环境、仪器、实验人员产生损害，同时该检测方法系统适用性溶液中氟西汀杂质IV和氟西汀的分离度不佳，对流动相配制要求较高，不利于氟西汀原料药、氟西汀制剂及奥氮平盐酸氟西汀复方制剂中此杂质的质量控制。公开号为CN104058977A的专利申请提供了一种盐酸氟西汀胶囊杂质的合成、纯化及含量控制方法，发明人对该检测方法进行了重现，证明该检测方法无法将氟西汀杂质IV与氟西汀进行有效的分离。
有关物质的种类和含量，直接关系到药品的质量和安全性，如何对氟西汀杂质IV进行简单高效的检测，是药品质量控制亟需解决的问题之一。
发明内容
为了有效控制氟西汀原料药、氟西汀制剂及奥氮平盐酸氟西汀复方制剂的质量品质，本发明提供了一种氟西汀杂质IV的检测方法。
本发明提供了一种氟西汀杂质IV的检测方法，它包括如下步骤：取待测样品，采用高效液相色谱法检测，色谱条件如下：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以pH为5.8～6.2的三乙胺缓冲液和甲醇混合溶液作为流动相，三乙胺缓冲液和甲醇的体积比为43～53：47～57。
进一步地，
所述色谱柱为Waters Symmetry C18或效能相当的色谱柱；所述Waters SymmetryC18的长度为250mm，内径为4.6mm，色谱柱填料颗粒的直径为5μm；
和/或，所述三乙胺缓冲液每1000mL的配制方法为：取三乙胺10-12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至5.8～6.2，用水稀释至1000ml，即得。
进一步地，前述的检测方法包括如下步骤：
a、取待测样品，加溶剂溶解，即得供试品溶液；
b、取盐酸氟西汀对照品，加溶剂溶解，即得对照品溶液；
c、取盐酸氟西汀对照品和氟西汀杂质IV对照品，加溶剂溶解，即得系统适用性溶液；
d、采用高效液相色谱法对供试品溶液、对照品溶液、系统适应性溶液进行检测。
进一步地，步骤a～c中，所述溶剂为水和乙腈的混合溶液或高效液相色谱中的流动相；
优选地，所述水和乙腈的混合溶液中水与乙腈的体积比为40～60：60～40；
更优选地，所述水和乙腈的混合溶液中水与乙腈的体积比为50：50。
进一步地，步骤a中，所述供试品溶液中氟西汀的浓度为1～5mg/mL。
进一步地，步骤b中，所述对照品溶液每1mL含氟西汀0.7～2.3μg；
优选地，步骤b中，所述对照品溶液每1mL含氟西汀0.76～2.29μg；
更优选地，步骤b中，所述对照品溶液每1mL含氟西汀1.5μg。
进一步地，步骤c中，所述系统适用性溶液每1mL含盐酸氟西汀1～5mg，氟西汀杂质IV 0.01～0.1mg；
优选地，步骤c中，所述系统适用性溶液每1mL含盐酸氟西汀1.12mg，氟西汀杂质IV0.04mg。
进一步地，步骤d中，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括流速为每分钟0.8～1.2mL；柱温30-40℃；检测波长为210～220nm；进样体积10～20μL。
进一步地，步骤d中，所述流速为每分钟1.0mL；柱温35℃；检测波长为215nm；进样体积10μL。
进一步地，所述待测样品为氟西汀原料药、氟西汀制剂或奥氮平盐酸氟西汀复方制剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供了一种氟西汀杂质IV的检测方法，该检测方法便捷、高效，适用性好，可有效检测、分离氟西汀原料药或各种制剂中氟西汀杂质IV，与中国药典方法相比，耐用性更好，并且流动相不含四氢呋喃，对环境、仪器和实验人员更加友好，检测准确、效率高且绿色环保。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为实施例1的系统适用性溶液色谱图。
图2为实施例1的供试品溶液色谱图。
图3为实施例2的系统适用性溶液色谱图。
图4为实施例3的系统适用性溶液色谱图。
图5为实施例4的系统适用性溶液色谱图。
图6为实施例5的供试品混合溶液色谱图。
图7为对比例1的系统适用性溶液色谱图。
图8为对比例2的系统适用性溶液色谱图。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的试剂、材料、设备如未具体说明的均为已知产品，通过购买市售产品获得。
本发明的实施结果判定均按以下描述评断：
系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，氟西汀杂质Ⅳ与氟西汀峰之间的分离度应不小于1.5；灵敏度溶液色谱图中，氟西汀峰的S/N不小于10。
限度：供试品溶液色谱图中如有与氟西汀杂质Ⅳ保留时间一致的色谱峰，按主成分外标法以峰面积计算，不得过0.15％。
测定法：精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
奥氮平盐酸氟西汀胶囊由四川科瑞德制药有限公司提供；盐酸氟西汀对照品由中国食品药品检定研究院提供；氟西汀杂质Ⅳ对照品由四川天道制药有限公司提供。
在实施方式中，所述溶剂为乙腈-水(体积比50:50)的混合溶液。奥氮平盐酸氟西汀胶囊规格为6/25mg和3/25mg，理论装量均为230mg，每粒含盐酸氟西汀按氟西汀计为25mg。氟西汀杂质IV限度为0.15％，限度量的杂质在样品中的含量约为0.16μg/mg，即0.016％。根据药典验证指导原则的规定，本品中氟西汀杂质IV回收率的可接受范围为：85％～110％，重复性的可接受范围为：4％，重现性的可接受范围为：8％。
实施例1、氟西汀杂质IV的检测方法
精密配制系统适用性溶液、供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊内容物(6/25mg规格)约230mg，置于25ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml约含氟西汀1mg的溶液。
对照品溶液：取盐酸氟西汀对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含氟西汀1.5μg的溶液。
系统适用性溶液：取盐酸氟西汀对照品约28mg、氟西汀杂质Ⅳ对照品约1mg，置于25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
灵敏度溶液：精密量取对照品溶液2ml，置于10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Symmetry C18，4.6mm×250mm，5μm)；以三乙胺缓冲液(取三乙胺12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至6.0，用水稀释至1000ml)-甲醇(48:52)为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为215nm；进样体积10μl。
图1为实施例1的系统适用性溶液色谱图，由图可知，氟西汀杂质Ⅳ可与氟西汀完全分开，分离度良好；图2为实施例1的供试品溶液色谱图，由图可知，此方法可检测氟西汀及其相关制剂中的氟西汀杂质Ⅳ。
实施例2、氟西汀杂质IV的检测方法
实施例2氟西汀杂质IV的检测方法与实施例1的不同之处在于：
色谱条件中，流动相配制方式为三乙胺缓冲液(取三乙胺12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至6.0，用水稀释至1000ml)-甲醇(43:57)。
其余检测方法与实施例1相同。
图3为实施例2的系统适用性溶液色谱图，由图可知，调整流动相比例增加有机相的用量，氟西汀杂质Ⅳ仍可与氟西汀完全分开。
实施例3、氟西汀杂质IV的检测方法
实施例3氟西汀杂质IV的检测方法与实施例1的不同之处在于：
色谱条件中，流动相配制方式为三乙胺缓冲液(取三乙胺12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至6.0，用水稀释至1000ml)-甲醇(53:47)。
其余检测方法与实施例1相同。
图4为实施例3的系统适用性溶液色谱图，由图可知，调整流动相比例减少有机相的用量，氟西汀杂质Ⅳ仍可与氟西汀完全分开。
实施例4、氟西汀杂质IV的检测方法
实施例4氟西汀杂质IV的检测方法与实施例1的不同之处在于：
色谱条件中，流动相配制方式为三乙胺缓冲液(取三乙胺10ml，加水980ml，混匀，用磷酸调节pH至6.0，用水稀释至1000ml)-甲醇(48:52)。
其余检测方法与实施例1相同。
图5为实施例4的系统适用性溶液色谱图，由图可知，调整流动相中三乙胺的用量，氟西汀杂质Ⅳ仍可与氟西汀完全分开。
实施例5、氟西汀杂质IV的检测方法
实施例5氟西汀杂质IV的检测方法与实施例1的不同之处在于：
供试品混合溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，精密称定，置于25ml量瓶中，再精密加入奥氮平杂质A、杂质Ⅰ、杂质C、杂质D贮备液各1ml，氟西汀杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ贮备液各1ml，氟西汀杂质IV贮备液2ml，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。(氟西汀1mg/ml，奥氮平0.24mg/ml，奥氮平杂质A/Ⅰ/C/D各0.48μg/ml，氟西汀杂质Ⅳ1.5μg/ml，氟西汀杂质Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ各2.5μg/ml)。
奥氮平各杂质贮备液：分别称取奥氮平杂质A、杂质Ⅰ、杂质C、杂质D各2.4mg，分别置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。再分别量取2.5ml，分别置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(各约12μg/ml)。
氟西汀杂质IV贮备液：取氟西汀杂质Ⅳ约37.5mg，精密称定，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密移取1ml，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。(18.75μg/ml)。
氟西汀杂质Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ贮备液：分别称取氟西汀杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ各约3.13mg，分别置50ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。(各约62.6μg/ml)。
各杂质的结构式见表1。
表1.奥氮平及盐酸氟西汀有关物质
其余检测方法与实施例1相同。
图6为供试品混合溶液的色谱图，由图可知，此方法可实现奥氮平杂质A、杂质Ⅰ、杂质C、杂质D；氟西汀杂质Ⅰ、杂质Ⅱ、杂质Ⅲ、杂质IV和奥氮平、氟西汀的良好分离；可知，该检测方法可用于检测氟西汀原料药、氟西汀相关制剂或奥氮平盐酸氟西汀复方制剂的氟西汀杂质IV及其他杂质的检测。
实施例6、氟西汀杂质IV的检测方法
精密配制系统适用性溶液、供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊内容物(6/25mg规格)约230mg，置于25ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml约含氟西汀1mg的溶液。
对照品溶液：取盐酸氟西汀对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含氟西汀1.5μg的溶液。
系统适用性溶液：取盐酸氟西汀对照品约28mg、氟西汀杂质Ⅳ对照品约1mg，置于25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Symmetry C18，4.6mm×250mm，5μm)；以三乙胺缓冲液(取三乙胺12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至6.2，用水稀释至1000ml)-甲醇(48:52)为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为215nm；进样体积10μl。
实施例7、氟西汀杂质IV的检测方法
精密配制系统适用性溶液、供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，置于25ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml约含氟西汀1mg的溶液。
对照品溶液：取盐酸氟西汀对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含氟西汀1.5μg的溶液。
系统适用性溶液：取盐酸氟西汀对照品约28mg、氟西汀杂质Ⅳ对照品约1mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Symmetry C18，4.6mm×250mm，5μm)；以三乙胺缓冲液(取三乙胺12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至5.8，用水稀释至1000ml)-甲醇(48:52)为流动相；流速为每分钟1.0ml；柱温为35℃；检测波长为215nm；进样体积10μl。
实施例1、实施例6和实施例7均设有加标供试品溶液，其配制方式均为：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊内容物(6/25mg规格)约230mg，精密称定，置于25ml量瓶中，再精密移入氟西汀杂质Ⅳ贮备液各2ml，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液。(氟西汀杂质Ⅳ：1.5μg/ml)。
氟西汀杂质IV贮备液：取氟西汀杂质Ⅳ约37.5mg，精密称定，置20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取1ml，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。(18.75μg/ml)。
实施例1、实施例6和实施例7的供试品检测结果如下表2所示，可知，本发明的检测方法可以有效检测样品中的氟西汀杂质IV。
表2.实施例1、实施例6和实施例7检测结果
对比例1
对比例1氟西汀杂质IV的检测方法与实施例1的不同之处在于：
使用中国药典中氟西汀有关物质色谱参数，如下所示：
用辛基硅烷键合硅胶为填充剂(Agilent Zorbax Eclipse Plus C8，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱)；以三乙胺缓冲溶液(取三乙胺10ml，加水980ml，摇匀，用磷酸调节pH值至6.0，用水稀释至1000ml)-甲醇-四氢呋喃(62:8:30)为流动相；检测波长为215nm；进样体积10μl。
其余检测方法与实施例1相同。
图7为对比例1的系统适用性溶液色谱图，由图可知，中国药典方法也可实现氟西汀杂质IV和氟西汀峰的分离，但分离度仅在1.5左右，且需严格控制流动相中各成分的比例，减少2％三乙胺缓冲液的比例，即将流动相调整为三乙胺缓冲溶液-甲醇-四氢呋喃(60:8:28)时，氟西汀杂质IV和氟西汀峰的分离为1.29，不能实现完全分离，此方法耐用性不佳，对实验人员要求高，且流动相体系使用了30％的四氢呋喃，对仪器、色谱柱及实验人员均有一定危害。
对比例2
以公开号为CN104058977A的专利申请中的色谱参数进行氟西汀杂质IV的检测，具体如下：
以氰基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×250mm，5μm)，以三乙胺缓冲液(1000ml水中加10ml三乙胺，用磷酸调节pH值至6.0)-乙腈(65:35)为流动相，检测波长为215nm，进样量为10μl。
其余检测方法与实施例1相同。
图8为对比例2的系统适用性溶液色谱图，由图可知，氟西汀杂质IV和氟西汀峰重合，不能实现分离。
以下通过具体试验例证明本发明的有益效果。
试验例1、方法学验证
对上述实施例1所示方法进行方法学验证：
1、系统适用性
溶剂：水-乙腈(体积比为50:50)。
系统适用性溶液：取盐酸氟西汀对照品约28mg、氟西汀杂质Ⅳ对照品约1mg，置于同一25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
对照品贮备液：取盐酸氟西汀对照品约21mg，精密称定，置于10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。(以氟西汀计，1.875mg/ml)。
对照品溶液：精密量取对照品贮备液1ml，置于100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。再精密量取2ml，置于25ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(以氟西汀计，1.5μg/ml)。
灵敏度溶液：精密量取对照品溶液2ml，置于10ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
系统适用性溶液色谱图中，氟西汀杂质Ⅳ与氟西汀峰之间的分离度应不小于1.5；灵敏度溶液色谱图中，氟西汀峰的S/N不小于10；对照品溶液重复进样5针，主峰保留时间的RSD应不得过1.0％，峰面积的RSD应不得过10％。表3为系统适用性试验结果。
表3.系统适用性试验结果
结论：根据表3的系统适用性试验结果可知，系统适用性溶液中，氟西汀杂质Ⅳ与氟西汀峰之间的分离度为1.91，大于1.5；灵敏度溶液中，氟西汀峰的S/N为60.5，大于10；对照品溶液重复进样5针，氟西汀峰保留时间的RSD为0.1％，小于1.0％，峰面积的RSD为2.7％，小于10％；系统适用性均符合要求。
2、专属性
干扰及杂质定位试验
空白溶剂：水-乙腈(体积比为50:50)。
空白辅料溶液：称取空白辅料(不含原料药)约200mg，置于25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。
奥氮平定位溶液：取奥氮平原料药约24mg，置于100ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。(0.24mg/ml)。
氟西汀定位溶液：取盐酸氟西汀原料药约12mg，置于10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。(以氟西汀计，1mg/ml)。
氟西汀杂质IV贮备液：取氟西汀杂质Ⅳ约37.5mg，精密称定，置于20ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。(18.75μg/ml)。
氟西汀杂质IV定位溶液：量取氟西汀杂质IV贮备液2ml，置于25ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀。(1.5μg/ml，限度浓度)。
供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，置于25ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml约含氟西汀1mg的溶液。
混合溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，精密称定，置于25ml量瓶中，再精密加入氟西汀杂质IV贮备液2ml，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。(氟西汀1mg/ml，奥氮平0.24mg/ml，氟西汀杂质Ⅳ1.5μg/ml)。
精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
空白溶剂和空白辅料应不干扰氟西汀杂质Ⅳ和氟西汀的出峰；混合溶液色谱图中，氟西汀杂质Ⅳ峰、氟西汀峰与相邻峰之间的分离度应不小于1.5。干扰及定位试验结果如表4所示。
表4.干扰及定位试验结果
结论：根据表4的干扰及定位试验结果可知，空白溶剂和空白辅料均不干扰氟西汀杂质Ⅳ和氟西汀的出峰；混合溶液中，氟西汀杂质Ⅳ峰、氟西汀峰与相邻峰之间的最小分离度为1.81，大于1.5；干扰及杂质定位试验均符合要求。
3、准确度
系统适用性溶液、灵敏度溶液及对照品溶液：同“1、系统适用性”项下。
氟西汀杂质Ⅳ贮备液：同“2、专属性”项下。
供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，置于25ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml约含氟西汀1mg的溶液。
准确度试验供试品溶液制备：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，精密称定，置于25ml量瓶中，同法称取9份，照下表5移取氟西汀杂质Ⅳ贮备液，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。每个浓度平行配制3份。
表5.回收率试验供试品溶液的配制方法
精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
在50％限度浓度、100％限度浓度、150％限度浓度下，各供试品中氟西汀杂质Ⅳ的回收率均应在85％～110％范围内，回收率的RSD应不得过4％。
采用以下公式计算回收率。
表6.准确度结果统计表
结论：氟西汀杂质Ⅳ在50％限度浓度、100％限度浓度、150％限度浓度下，氟西汀杂质Ⅳ的回收率在94.58～98.79％范围内，9份供试品溶液的回收率RSD为1.8％，小于4％，准确度试验符合要求。
4、精密度
重复性
系统适用性溶液、灵敏度溶液及对照品溶液：同“1、系统适用性”项下。
氟西汀杂质Ⅳ贮备液：同“2、专属性”项下。
供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，置于25ml量瓶中，加溶剂适量，超声使溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成每1ml约含氟西汀1mg的溶液。平行配制6份。
加标供试品溶液：取奥氮平盐酸氟西汀胶囊(6/25mg规格)内容物约230mg，精密称定，置于25ml量瓶中，再精密移入氟西汀杂质Ⅳ贮备液各2ml，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液。平行配制6份。(氟西汀杂质Ⅳ：1.5μg/ml)。
精密量取上述溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
6份加标供试品溶液中，氟西汀杂质Ⅳ测定结果的RSD不得过4％。
表7.重复性试验结果表(计算检出量)
表8.重复性试验结果表(计算回收率)
备注：6份未加标供试品溶液中，氟西汀杂质Ⅳ的平均含量为0.02％，含量较低，小于报告限(本品杂质报告限为0.1％)，不考察未加标供试品溶液重复6份结果的RSD，重复6份结果的RSD以加标供试品溶液计。
结论：重复6份加标供试品溶液氟西汀杂质Ⅳ测定结果的RSD为1.4％，氟西汀杂质Ⅳ回收率RSD为1.3％，均小于4％，重复性满足要求。
综上，本发明提供了一种氟西汀杂质IV的检测方法，该检测方法便捷、高效，适用性好，可有效检测、分离氟西汀原料药或各种制剂中氟西汀杂质IV，与中国药典方法相比，耐用性更好，并且流动相不含四氢呋喃，对环境、仪器和实验人员更加友好，检测准确、效率高且绿色环保。
Claims (10)
1.一种氟西汀杂质IV的检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：取待测样品，采用高效液相色谱法检测，色谱条件如下：
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以pH为5.8～6.2的三乙胺缓冲液和甲醇混合溶液作为流动相，三乙胺缓冲液和甲醇的体积比为43～53：47～57。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：
所述色谱柱为Waters Symmetry C18或效能相当的色谱柱；所述Waters Symmetry C18的长度为250mm，内径为4.6mm，色谱柱填料颗粒的直径为5μm；
和/或，所述三乙胺缓冲液每1000mL的配制方法为：取三乙胺10-12.5ml，加水900ml，混匀，用磷酸调节pH至5.8～6.2，用水稀释至1000ml，即得。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：
a、取待测样品，加溶剂溶解，即得供试品溶液；
b、取盐酸氟西汀对照品，加溶剂溶解，即得对照品溶液；
c、取盐酸氟西汀对照品和氟西汀杂质IV对照品，加溶剂溶解，即得系统适用性溶液；
d、采用高效液相色谱法对供试品溶液、对照品溶液、系统适应性溶液进行检测。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：步骤a～c中，所述溶剂为水和乙腈的混合溶液或高效液相色谱中的流动相；
优选地，所述水和乙腈的混合溶液中水与乙腈的体积比为40～60：60～40；
更优选地，所述水和乙腈的混合溶液中水与乙腈的体积比为50：50。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：步骤a中，所述供试品溶液中氟西汀的浓度为1～5mg/mL。
6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：步骤b中，所述对照品溶液每1mL含氟西汀0.7～2.3μg；
优选地，步骤b中，所述对照品溶液每1mL含氟西汀0.76～2.29μg；
更优选地，步骤b中，所述对照品溶液每1mL含氟西汀1.5μg。
7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：步骤c中，所述系统适用性溶液每1mL含盐酸氟西汀1～5mg，氟西汀杂质IV 0.01～0.1mg；
优选地，步骤c中，所述系统适用性溶液每1mL含盐酸氟西汀1.12mg，氟西汀杂质IV0.04mg。
8.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：步骤d中，所述高效液相色谱法的色谱条件还包括流速为每分钟0.8～1.2mL；柱温30-40℃；检测波长为210～220nm；进样体积10～20μL。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于：步骤d中，所述流速为每分钟1.0mL；柱温35℃；检测波长为215nm；进样体积10μL。
10.根据权利要求1-9任一项所述的检测方法，其特征在于：所述待测样品为氟西汀原料药、氟西汀制剂或奥氮平盐酸氟西汀复方制剂。
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication |