CN117929563A - 1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的分离测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种1‑苄基‑3‑哌啶醇中杂质和残留溶剂的分离测定方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，体积比为94‑90:6‑10的磷酸盐溶液‑乙腈(pH为6.5～7.5)为流动相A，体积比为30‑50:70‑50的磷酸盐溶液‑乙腈(pH为6.5～7.5)为流动相B，通过梯度洗脱将1‑苄基‑3‑哌啶醇中杂质和残留溶剂进行分离，随后对分离后的溶液进行检测，得到色谱图，基于色谱图实现各个杂质以及残留溶剂的含量测定。本发明通过对各个杂质及残留溶剂的检测，能评价1‑苄基‑3‑哌啶醇的质量，对使用1‑苄基‑3‑哌啶醇制备得到合格盐酸贝尼地平有重要的控制作用。
Description
技术领域
本发明涉及化学分析技术领域，特别是涉及一种盐酸贝尼地平关键原料1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的分离测定方法。
背景技术
1-苄基-3-哌啶醇，以3-羟基吡啶和氯化苄为原料，在甲苯中发生成盐反应制得，参与合成盐酸贝尼地平最后一步的关键原料，控制本品中相关杂质及残留溶剂，用一套方法即对本品进行全面的质量控制，对制备合格盐酸贝尼地平有重要的意义。
1-苄基-3-哌啶醇的英文化学名为：1-Benzyl-3-piperidinol。
结构式：
分子式：C12H17NO
分子量：191.27
CAS号：14813-01-5。
现有技术中，公开了一种哌啶醇化合物[选自(R)-1-苄基-3-哌啶醇、(S)-1-苄基-3-哌啶醇或外消旋的1-苄基-3-哌啶醇]的分析方法,该方法对1-苄基-3-哌啶醇的线性和检测限进行研究，该方法能够实现1-苄基-3-哌啶醇的富集，富集倍数高达数十倍，同时检测限明显降低，由此提高了分析方法的灵敏度。但是该方法并未涉及到如何对现1-苄基-3-哌啶中相关杂质以及残留溶剂的分离测定。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种分离1-苄基-3-哌啶醇中杂质和/或残留溶剂的方法，选取合适的色谱柱以及流动相，对盐酸贝尼地平关键原料1-苄基-3-哌啶醇中的杂质和残留溶剂进行有效分离。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
分离1-苄基-3-哌啶醇中杂质和/或残留溶剂的方法，所述方法包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，体积比为94-90:6-10的磷酸盐溶液-乙腈为流动相A，体积比为30-50:70-50的磷酸盐溶液-乙腈为流动相B，通过梯度洗脱将1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂进行分离，所述杂质为杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、苯甲醇、苯甲醛以及氯化苄中的任一种或多种，所述残留溶剂包括乙酸乙酯以及甲苯。
进一步地，所述流动相A中的磷酸盐溶液的浓度为0.005～0.02mol/L，所述流动相B中的磷酸盐溶液的浓度为0.005～0.02mol/L。
进一步地，所述色谱柱的规格为4.6mm×150mm，3.5μm。
进一步地，所述通过梯度洗脱将1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂进行分离，包括：
流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，检测波长为207nm，进样体积为8～12μl，梯度洗脱流程如下：
0分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0；
10分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0；
30分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为0:100；
40分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为0:100；
41分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0；
55分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0。
进一步地，体积比为94-90:6-10的磷酸盐溶液-乙腈的pH值为6.5～7.5。
进一步地，体积比为30-50:70-50的磷酸盐溶液-乙腈的pH值为6.5～7.5。
本发明的目的之二在于提供一种定性鉴别1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的方法，该方法可以实现在超低浓度下的各个杂质和残留溶剂的检测和鉴别。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
定性鉴别1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的方法，利用如本发明目的之一所提供的方法将检测物中1-苄基-3-哌啶醇及杂质和残留溶剂进行分离，记录色谱图，将检测得到的色谱图与已知对照品色谱图进行对比，判定检测物中是否含有所述1-苄基-3-哌啶醇及杂质和残留溶剂。
本发明的目的之三在于提供一种测定1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的方法，该方法可以在超低浓度下实现杂质和残留溶剂的含量测定。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
测定1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的方法，包括以下步骤：
(1)配制检测品溶液、对照品溶液：取供检测品溶于稀释剂中，得检测品溶液；取所述相关物质标准品，用稀释剂溶解制成对照品溶液；
(1)分离：采用本发明的目的之一所提供的方法分离1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂；
(2)鉴定：分离后，采用本发明的目的之二所提供的方法对分离后的杂质和残留溶剂进行鉴定；
(3)含量计算：根据所述色谱图，分别计算杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f与杂质SM3g的含量以及乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯的含量。
进一步地，根据所述色谱图，按外标法分别计算杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f与杂质SM3g的含量。
进一步，所述外标法计算公式为：
其中：Ai为供试品溶液色谱图中杂质的峰面积，AR为对照品溶液色谱图中相应杂质的峰面积，cR为对照品溶液中相应杂质的浓度，cX为供试品溶液的浓度。
进一步地，根据所述色谱图，按面积归一化法计算乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯的含量。
进一步，所述面积归一化法计算公式为：
其中：Ai为供试品溶液色谱图中杂质的峰面积，An供试品溶液色谱图中所有峰的峰面积之和。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明采用小粒径(3.5μm)十八烷基键合硅胶为分离色谱柱，磷酸盐-有机相洗脱系统，能同时对8个已知杂质(杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、苯甲醇、苯甲醛、氯化苄)、未知杂质及2个残留溶剂(乙酸乙酯、甲苯)进行检测。其中杂质SM3a、杂质SM3b、氯化苄为关键起始原料或中间体，杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、苯甲醇、苯甲醛均为主要副反应杂质，氯化苄和苯甲醛含有警示结构，乙酸乙酯和甲苯为主要反应溶剂和精制溶剂。检测以上杂质及溶剂，能评价1-苄基-3-哌啶醇的质量，对使用1-苄基-3-哌啶醇制备得到合格盐酸贝尼地平有重要的控制作用。
附图说明
图1为混合溶液HPLC图。
图2为耐用性-正常条件-混合溶液HPLC图。
图3为耐用性-流速0.9ml/min-混合溶液HPLC图。
图4为耐用性-流速1.1ml/min-混合溶液HPLC图。
图5为耐用性-柱温28℃-混合溶液HPLC图。
图6为耐用性-柱温32℃-混合溶液HPLC图。
图7为耐用性-流动相A中乙腈比例(7％)-混合溶液HPLC图。
图8为耐用性-流动相A中乙腈比例(9％)-混合溶液HPLC图。
图9为耐用性-流动相pH(pH＝6.9)-混合溶液HPLC图。
图10为耐用性-流动相pH(pH＝7.1)-混合溶液HPLC图。
图11为耐用性-流动相中缓冲盐浓度(9.5mmol/L)-混合溶液HPLC图。
图12为耐用性-流动相中缓冲盐浓度(10.5mmol/L)-混合溶液HPLC图。
图13为定量限溶液HPLC图。
图14为对照品溶液HPLC图。
图15为供试品溶液HPLC图。
图16为杂质SM3b线性曲线图。
图17为杂质SM3a线性曲线图。
图18为杂质SM3f线性曲线图。
图19为杂质SM3e线性曲线图。
图20为杂质SM3g线性曲线图。
具体实施方式
以下列举的部分实施例仅仅是为了更好地对本发明进行说明，但本发明的内容并不局限在应用于所举的实施例中。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整而应用于其他实施例中，仍在本发明的保护范围之内。
现在结合说明书附图对本发明做进一步的说明。
实施例1：
本发明实施例提供一种盐酸贝尼地平关键原料1-苄基-3-哌啶醇中的杂质和残留溶剂(杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯与氯化苄之和)的测定方法，杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g的结构式如表1所示。
表1.杂质结构式
溶液配制。
溶剂：乙腈-水(20:80)
供试品溶液：取本品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每1ml含本品约1mg的溶液。
对照品溶液：取杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f和SM3g对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并用溶剂定量稀释制成每1ml中各约含1.5μg的溶液。
测试方法：精密量取供试品溶液和对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。对照品溶液中出峰顺序为：杂质SM3b、杂质SM3a、主成分、杂质SM3f、杂质SM3e、杂质SM3g。
供试品溶液色谱图中，除溶剂峰、梯度洗脱峰外，用外标法计算杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g含量；用面积归一化法计算其他单个杂质(包括乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯与氯化苄)。
混合溶液色谱图如图1所示，出峰顺序为：杂质SM3b、乙酸乙酯、杂质SM3a、苯甲醇、主成分、苯甲醛、杂质SM3f、杂质SM3e、甲苯与氯化苄、杂质SM3g。
总的来说，本实施例采用小粒径(3.5μm)十八烷基键合硅胶为分离色谱柱，磷酸盐-有机相洗脱系统，能同时对8个已知杂质(杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、苯甲醇、苯甲醛、氯化苄)、未知杂质及2个残留溶剂(乙酸乙酯、甲苯)进行检测。其中杂质SM3a、杂质SM3b、氯化苄为关键起始原料或中间体，杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、苯甲醇、苯甲醛均为主要副反应杂质，氯化苄和苯甲醛含有警示结构，乙酸乙酯和甲苯为主要反应溶剂和精制溶剂。检测以上杂质及溶剂，能评价1-苄基-3-哌啶醇的质量，对使用1-苄基-3-哌啶醇制备得到合格盐酸贝尼地平有重要的控制作用。
试验条件如表2所示。
表2.试验条件:
色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Xbridge Shield RP184.6mm×150mm，3.5μm或效能相当的色谱柱)；以0.01mol/L磷酸氢二钾溶液(称取磷酸氢二钾1.74g，加1000ml水使溶解，用磷酸调节pH值至7.0)-乙腈(92:8)为流动相A，以0.01mol/L磷酸氢二钾溶液(称取磷酸氢二钾1.74g，加1000ml水使溶解，用磷酸调节pH值至7.0)-乙腈(40:60)为流动相B，按表3进行线性梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；柱温为30℃；检测波长为207nm；进样体积10μl。
表3.线性梯度洗脱参数
1、专属性和耐用性
空白溶剂：乙腈-水(20:80)
各杂质储备液：分别精密称取杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯、氯化苄各约25mg，分别置不同的25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
定位溶液：精密移取各杂质储备液各0.1ml，分别置不同的10ml量瓶中，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
混合储备液：移取各杂质储备液5ml，置同一50ml量瓶中，摇匀，即得。
混合溶液：称取本品约100mg，置100ml量瓶中，再精密移取混合储备液1.5ml加入，用乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
取上述空白溶剂、各定位溶液和混合溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见表4。
表4.专属性试验结果
取混合溶液，分别微调各色谱条件进行实验，考察各峰之间的分离度，试验结果见表5以及图2至12。
表5.色谱系统耐用性测定结果
流速、柱温、流动相pH值、流动相A中乙腈比例、流动相盐浓度微小的波动时，各组分峰间分离度均大于1.5。
2、定量限
储备液：分别精密称取杂质SM3b对照品25.78mg、杂质SM3a对照品25.69mg、杂质SM3f对照品25.60mg、杂质SM3e对照品25.55mg、杂质SM3g对照品25.26mg，置5个不同的25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取各储备液5.0ml，置同一50ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
定量限溶液：精密移取定量限储备液0.1ml至100ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取定量限溶液10μl，连续进样6次，记录色谱图，并计算各峰的信噪比及峰面积RSD，结果见下表。
结论：如表6和图13所示，当供试品浓度为1mg/ml时，供试品中含有0.01％的杂质SM3b、杂质SM3a、杂质SM3f、杂质SM3e、杂质SM3g均能被定量检测，连续进样6针峰面积RSD％均小于10％，峰高S/N均大于10。
表6.定量限试验结果
3、线性
储备液：分别精密称取杂质SM3b对照品25.78mg、杂质SM3a对照品25.69mg、杂质SM3f对照品25.60mg、杂质SM3e对照品25.55mg、杂质SM3g对照品25.26mg，置5个不同的25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀；精密移取各储备液5.0ml，置同一50ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
线性溶液1#～7#：精密移取线性储备液0.1ml、0.3ml、1.0ml、1.5ml、2ml、3ml、5ml，置7个不同的100ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
取上述各线性溶液，按浓度由低到高依次进样，记录色谱图，以浓度X(μg/ml)对峰面积Y用最小二乘法线性回归，计算回归方程及相关系数。试验结果见表7以及图16至20。
表7.杂质SM3b线性
表8.杂质SM3a线性
表9.杂质SM3f线性
表10.杂质SM3e线性
表11.杂质SM3g线性
5、样品检测
杂质储备液：分别精密称取SM3b对照品25.16mg、SM3a对照品25.45mg、SM3f对照品25.55mg、SM3e对照品25.28mg、SM3g对照品25.12mg，置5个不同的25ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
混合储备液：精密移取杂质SM3b、杂质SM3a、杂质SM3f和杂质SM3g储备液各5.0ml，置同一50ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质SM3e储备液2#：精密移取杂质SM3e储备液5.0ml至50ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液：精密移取混合储备液1.5ml和杂质SM3e储备液2#2.0ml置100ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液：精密称取本品101.63mg，置100ml量瓶中，加乙腈-水(20:80)溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
精密量取对照品溶液、供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，如图14和图15所示，按外标法计算各已知杂质的含量，面积归一化法计算其他杂质含量。
以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。
Claims (10)
1.一种分离1-苄基-3-哌啶醇中杂质和/或残留溶剂的方法，其特征在于，所述方法包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，体积比为94-90:6-10的磷酸盐溶液-乙腈为流动相A，体积比为30-50:70-50的磷酸盐溶液-乙腈为流动相B，通过梯度洗脱将1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂进行分离，所述杂质为杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f、杂质SM3g、苯甲醇、苯甲醛以及氯化苄中的任一种或多种，所述残留溶剂包括乙酸乙酯以及甲苯。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A中的磷酸盐溶液的浓度为0.005～0.02mol/L，所述流动相B中的磷酸盐溶液的浓度为0.005～0.02mol/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为4.6mm×150mm，3.5μm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述通过梯度洗脱将1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂进行分离，包括：
流速为0.8～1.2ml/min，柱温为25～35℃，检测波长为207nm，进样体积为8～12μl，梯度洗脱流程如下：
0分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0；
10分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0；
30分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为0:100；
40分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为0:100；
41分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0；
55分钟，设置流动相A和流动相B的体积比为100:0。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，体积比为94-90:6-10的磷酸盐溶液-乙腈的pH值为6.5～7.5。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，体积比为30-50:70-50的磷酸盐溶液-乙腈的pH值为6.5～7.5。
7.定性鉴别1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的方法，其特征在于，利用权利要求1至6中任一项所述方法将检测物中1-苄基-3-哌啶醇及杂质和残留溶剂进行分离，记录色谱图，将检测得到的色谱图与已知对照品色谱图进行对比，判定检测物中是否含有所述1-苄基-3-哌啶醇及杂质和残留溶剂。
8.测定1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制检测品溶液、对照品溶液：取供检测品溶于稀释剂中，得检测品溶液；取所述相关物质标准品，用稀释剂溶解制成对照品溶液；
(2)分离：采用权利要求1至6任一项所述的方法分离1-苄基-3-哌啶醇中杂质和残留溶剂；
(3)鉴定：分离后，采用如权利要求7所述的方法对分离后的杂质和残留溶剂进行鉴定；
(4)含量计算：根据所述色谱图，分别计算杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f与杂质SM3g的含量以及乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯的含量。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，根据所述色谱图，按外标法分别计算杂质SM3a、杂质SM3b、杂质SM3e、杂质SM3f与杂质SM3g的含量。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，根据所述色谱图，按面积归一化法计算乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲醛、甲苯的含量。
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