CN1178651C

CN1178651C - 冷冻干燥的噻吨酮抗肿瘤剂

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Publication number: CN1178651C
Application number: CNB961981741A
Authority: CN
Inventors: S; S·布朗; ��ɣ��˹��; G·S·桑杜
Original assignee: Sanofi Synthelabo Inc
Current assignee: Sanofi Aventis US LLC
Priority date: 1995-09-18
Filing date: 1996-09-12
Publication date: 2004-12-08
Anticipated expiration: 2016-09-12
Also published as: RU2157189C2; DE69627209D1; AU716782B2; PT917458E; EP0917458B1; NO981205L; HUP9900246A3; US5665760A; ATE235888T1; CN1201387A; HUP9900246A2; NZ316609A; MX9802143A; CA2232444A1; DK0917458T3; PL325603A1; NO981205D0; PL185164B1; HK1016891A1; WO1997010809A1

Abstract

公开了几种用于治疗哺乳动物肿瘤的再配制冷冻干燥制剂，它含有一种与作为稳定剂的甘露糖醇或蔗糖在乳酸盐缓冲液中组合的噻吨酮抗肿瘤剂。

Description

冷冻干燥的噻吨酮抗肿瘤剂

1.发明领域

本发明是关于冷冻干燥的抗肿瘤剂水性非胃肠给药溶液。更具体地说，本发明是关于冷冻干燥的噻吨酮(thioxanthenone)抗肿瘤水剂。

2.已报告的进展

许多以治疗或诊断用途为目的的常规药物和蛋白质，在水溶液中都不稳定，而需要转变成固体产品。对于药物产品，为了使之具有必需的稳定性，冷冻干燥是最常用的处理方法之一。

由于种种原因，生物活性剂很少以其纯品形式被冷冻干燥。为了某些特定目的，例如为了pH缓冲，提高稳定性或渗透压平衡，通常需要加入其它化学成分。在设计冷冻干燥程序时，主要由作为整体的制剂控制过程中的参数。因此，制剂中的任何改变，不仅是活性剂本身含量的改变，都将要求操作过程作进一步调整。除了出于上述原因加入的赋形剂之外，冷冻干燥处理通常还需要掺入更多的添加剂，以便有助于冷冻干燥过程本身，或者为了在以后的贮存和运输过程中，使冷冻干燥的填料能保持机械强度。这样一些赋形剂被称为lyoprotectants或稳定剂。稳定剂的用途将在下述参考文献中作例证说明。

国际申请No.PCT/US 89/04099(WO 90/03784)描述了一种冷冻干燥的组合物，它包含一种多肽和一种具有使之稳定/增溶量的选自如下的环糊精：β-和γ-环糊精的羟丙基衍生物，羟乙基衍生物，葡糖基衍生物，麦芽糖基衍生物和麦芽三糖基衍生物。

美国专利No.4,983,586公开了一种用于减少非胃肠给药时，亲脂性药物和/或水-不稳定性药物在注射部位出现沉淀的发生率的方法，包括以含有大约20％-50％羟丙基-β-环糊精的药物水溶液给药。对多种药物提出了权利要求，包括：抗肿瘤药，镇静剂，安定药，抗惊厥药，抗抑郁药，安眠药，肌肉弛缓药，解痉剂，抗炎症药，抗凝剂，强心药，血管扩张剂和抗心律不齐药。

美国专利No.5,298,410公开了几种冷冻干燥的生物活性物质制剂，其中的稳定剂是一种环糊精衍生物，以及一种如磷酸钠，醋酸钠和碳酸钠的缓冲剂。此制剂还可任选地加入蔗糖或海藻糖。

冷冻干燥的起始物通常是一种不饱和的水溶液，而最后的产品是固体。整个过程包括除去99％以上的水分。在冷却过程中，水溶液被冷冻浓缩，而水是以冰的形式被除去。整个过程包括几次相转变，例如液-固相转变和固-气相转变，认为这种转变对于确保有效的处理和形成稳固的产品是重要的。当温度降低时，在冰晶核自发形成之前，溶液起初将被过冷(即冷却至平衡状态冻结温度以下)。冰晶核形成和冰晶生长是一个复杂的过程，其速度取决于冷却速度，溶液浓度和其它一些因素。过程的这个步骤将在很大程度上决定最后干燥产品的质地。在冻结过程中，溶剂以越来越浓缩的形式遗留在残存的液相中，浓缩程度可由相平衡状态图来确定。最后，溶液将成为饱和状态，在此时，溶剂的固相也将形成。这样，该系统将由冰晶和溶剂晶体的混合物组成。

最初为了辅助冷冻干燥而加入的赋形剂，通常只起了二种功能中的一种作用。填充剂是单纯地用于增加整个固体的含量，以便得到机械性能更坚硬的干燥产品。这些赋形剂在冷冻干燥过程中，优选地是在冰冻阶段必须能够从溶液中结晶出来，因为它仅作为一种分散相，它们对产品的稳定性只有不确定的作用。而另一方面，稳定剂则在冷冻-浓缩过程中提供化学保护作用，并且有助于玻璃态的形成，它们还使干燥的填料具有机械强度。玻璃态转变温度是全部固体物质化学成分的函数。

尽管在以前的研究中、以物理-化学基本原理用于正确地配制冷冻干燥产品的方法受到了相当广泛的注意(参见例如Franks，F.冷冻干燥：物理学，化学，工程学和经济学的综合，Jap.J.Freese Drying，38，5-16(1992))，但是，仅根据物理-化学原理还不足以使本领域的技术人员能研制出满足理想目标的最终产品。显然，正如本发明的结果所表明，艰苦的探索和/或意外的发现，仍然是可借以产生适当产品的现实基础。

通过艰苦的探索我们现在已发现，可以将噻吨酮抗肿瘤化合物制成冷冻干燥的药物制剂，再溶解后则成为可注射的制剂，但当将这种化合物在通常的药物赋形剂中给药，例如以片剂和胶囊剂口服给药，则不能完全符合一个有效产品的要求。并发现这种冷冻干燥制剂是稳定的，在延长的贮存期内未发生降解/改变。

发明概述

根据本发明，在此提供了用于治疗哺乳动物肿瘤的再溶解冷冻干燥制剂，它含有：

a)下文所定义的噻吨酮抗肿瘤剂，大约1-50mg/ml，优选的是大约10-20mg/ml；

b)选自甘露糖醇和蔗糖的稳定剂，大约10mg/ml-125mg/ml，优选的是大约30mg/ml-100mg/ml；

c)大约0.025-0.25M乳酸盐缓冲液，优选的是乳酸钠缓冲液，该制剂具有大约3.0-4.5的pH。

该制剂还含有大约1.0-10.0mg/ml的氯化钠。

本发明优选的制剂含有抗肿瘤剂N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨(thioxanthene)-4-基]甲基]-甲磺酰胺，以及作为稳定剂的蔗糖。

所说优选的制剂含有：

a)1-50mg的N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺，

b)大约0.025-0.25M的乳酸钠缓冲剂，

c)大约10-125mg蔗糖，

d)大约1.0-10mg氯化钠，

e)加水至1.0ml。

本发明的再配制冷冻干燥制剂可对哺乳动物给药，用于治疗肿瘤。

发明详述

本发明的冷冻干燥制剂包含：噻吨酮(thioxanthenone)抗肿瘤剂，以及水性赋形剂。

抗肿瘤剂：

根据美国专利No.5,346,917，本发明的抗肿瘤剂具有如结构式(I)的结构，此专利在此被全部引入作为参考：

其中n是2或3，

R¹和R²独立地是低级烷基，

Q是一个选自如下的残基：CH₂NHR³，CH₂N(R⁴)SO₂R⁷，CH₂NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR⁵R⁶，CH₂N(R⁴)C(O)R⁷，CH₂N(C₂H₅)CHO，CH₂N(R⁴)P(O)(O-低级烷基)₂，CH₂N＝CH-N(R⁹)(R¹⁰)，CH₂N(R⁴)C(O)CF₃，和CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷，

R³是H或低级烷基，

R⁴是H，低级烷基，或Ar，

R⁵是H，低级烷基，或Ar，

R⁶是H或低级烷基，

R⁷是低级烷基，或Ar，

R⁸是H，低级烷基，低级烷氧基，或羟基，

Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羟基，卤素或硝基取代的苯基，前提条件是当n是2，R¹和R²是乙基，R⁸是H，以及Q是CH₂NHSO₂Ar时，此Ar基不能够被甲基或卤素在第4位单基取代，

R⁹和R¹⁰独立地是低级烷基，

或者其可药用的酸加成盐或溶剂化物。此化合物对治疗哺乳动物的肿瘤是有效的。

优选的抗肿瘤剂是结构式(II)代表的抗肿瘤剂：

其中n是2或3，

R¹和R²独立地是低级烷基，

Q是一个选自如下的残基：CH₂NHR³，CH₂NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR⁵R⁶，CH₂N(R⁴)C(O)R⁷，CH₂N(C₂H₅)CHO，CH₂N(R⁴)P(O)(O-低级烷基)₂，CH₂N＝CH-N(R⁹)(R¹⁰)，CH₂N(R⁴)C(O)CF₃和CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷，

R³是H或低级烷基，

R⁴是H，低级烷基或Ar，

R⁵是H，低级烷基或Ar，

R⁶是H或低级烷基，

R⁷是低级烷基，或Ar，

R⁸是H，低级烷基，低级烷氧基，或羟基，

Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羟基，卤素或硝基取代的苯基，以及

R⁹和R¹⁰独立地是低级烷基，

或者其可药用的酸加成盐或溶剂化物。

这里所说的低级烷基是指含有4个或更少碳原子的直链、支链或环状烷基。卤素是指溴、氯或氟。术语“低级烷氧基”是指有1个至约4个碳原子的直链或支链烷氧基取代基，例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、仲丁氧基等。

代表性化合物将在下述实施例中说明：

实施例1

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(N-苯基甲亚氨酰基)噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH＝N-C₆H₅，R⁸＝H，n＝2)

将1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-9-氧代-噻吨-4-甲醛17.7g(50mmol)和苯胺15.1g(150mmol)在100ml甲苯中的混合物，以迪安-斯达克榻分水器回流加热8小时。以氯仿/己烷/异丙胺10∶10∶2作流动相，在氧化铝板上作薄板层析显示出不完全反应。蒸馏除去甲苯，加入25ml苯胺，再将此混合物回流加热4小时。加入50ml二甲苯，并将此反应物再回流加热3小时。用真空法除去溶剂和剩余的苯胺，残余物用苯重结晶，产生19.9g粗品。将此粗品用大约1.5L己烷重结晶，产生15.8g(86％)产品，熔点125-126°。

实施例2

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHCHO，R⁸＝H，n＝2)

将35.4g(0.1mol)1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-9-氧代-噻吨-4-甲醛，420ml甲酰胺和50ml(1mol)甲酸的溶液在160°加热1小时。冷却后将反应物注入2L水中，并用约50ml 35％氢氧化钠溶液碱化。过滤出胶质沉淀物，并作真空干燥处理。将此干燥的沉淀物溶解于大约1.5L热乙酸乙酯中，用活性炭处理，并使之冷却结晶。过滤出产品，用乙酸乙酯洗，然后干燥，得到29.0g(75％)产品，熔点154-155°。

实施例3

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基甲酰胺

(IV：R¹＝R²＝Et，R⁴＝Me，R⁸＝H，n＝2)

按照类似于实施例2的方法，从35.4g(0.1mol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代-噻吨-4-甲醛，394g N-甲基甲酰胺，和50ml甲酸制备出24.6g所述N-甲基甲酰胺。产品用150ml丙酮重结晶，熔点为127-130°。

实施例4

4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NH₂，R⁸＝H，n＝2)

将24.4g(64mmol)实施例2制备的甲酰胺在240ml 2N盐酸中的溶液，在蒸汽浴上加热1小时。使反应物冷却至室温，用35％氢氧化钠水溶液碱化，并通过过滤收集生成的黄色沉淀。将该产品溶解于苯中，用活性炭处理，用硫酸镁干燥，过滤并共沸除去痕迹量水分。通过加入盐酸乙醚液，使干燥的残留物从甲醇和异丙醇中结晶出。将生成的固体用甲醇重结晶几次，得到10.6g作为二盐酸盐的产品，熔点270-272°。

实施例5

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)-甲基]噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHCH₃，R⁸＝H，n＝2)

按照与实施例4完全相似的方法，从14.6g(37mmol)实施例3制备的N-甲基甲酰胺和150ml 2N盐酸，得到了作为半水合二盐酸化物的甲胺10.5g。此产品的熔点为241-243°。

实施例6

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂CH₃，R⁸＝H，n＝2)

将在实施例4所制备胺的游离碱10.65g(30mmol)溶于100ml吡啶中，置于冰浴中冷却，并一次加入4g(35mmol)甲基磺酰氯。将此混合物在室温下搅拌2小时，并注入含有2g氢氧化钠的750ml水中。过滤收集暗黄色的沉淀物，用水洗，并真空干燥过夜。通过对滤液加入过量氢氧化钠，再次得到产物，过滤出所形成的固体。干燥后合并沉淀物，并用苯重结晶，得到6.4g所需甲磺酰胺，熔点169-170°。

实施例7

1-[[2′-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CONH₂，R⁸＝H，n＝2)

将74g(0.23mol)1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛和74g(1.06mol)羟胺盐酸化物在400ml吡啶和400ml乙醇中的悬液回流加热0.5小时，再加入70ml水，得到均质溶液。将此溶液再加热2小时，然后在室温下静置14小时。生成的结晶肟被过滤出，达到一定量产率，熔点215-218°。

将123g所述肟在180ml乙酸酐中，在蒸汽浴上作短暂加热，形成溶液。将此溶液冷却，加入100ml 1.8M HCl的乙醚液，形成的悬液再以500ml乙醚稀释。将此悬液在0°下静置14小时，并过滤。使此残留物(123g，熔点109-112°)在250ml二甲苯中作成淤浆状，并回流加热20分钟。将此混合物冷却，过滤得到71.3g腈，熔点265℃。

取10g这种腈置于200ml浓H₂SO₄中，在室温下搅拌3天。然后用浓NH₄OH中和此反应物，并过滤出残留物。将此残留物在温热的EtOAc/EtOH中消化，再过滤，然后从冷却液中结晶出产品，熔点241-243°。将产品溶解于乙醇中，并加入1N HCl乙醇溶液。得到6g盐酸酰胺，熔点271-272°。

实施例8

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨--基]甲基]N-甲基甲磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂N(CH₃)SO₂CH₃，R⁸＝H，n＝2)

将实施例6制备的甲磺酰胺1.5g(3.5mmol)溶于四氢呋喃(60ml)中，置于冰浴内冷却至0℃，并加入NaH 0.16g(4.0mmol)。使反应混合物温热至室温，搅拌10分钟，然后加入甲基碘0.25ml(4.0mmol)。再将反应混合物在室温下搅拌24小时，然后真空除去溶剂。通过柱层析纯化残留物，在硅胶柱上，先用氯仿(100％)洗脱，然后用1％异丙胺/氯仿洗脱，得到1.15g(74％)N-甲基甲磺酰胺黄色粉末，熔点175-177℃。也可将此游离碱在甲醇中用甲磺酸处理，得到其甲磺酸盐，熔点194-195.5℃(此后被称为实施例8a)。

实施例9

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]苯磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂Ph，R⁸＝H，n＝2)

按照基本上类似于实施例6中所述的方法，通过在2.54g(7.15mmol)实施例4所制备胺的游离碱，吡啶(50ml)和苯磺酰氯(1.1ml，8.62mmol)反应后，在甲醇中用甲磺酸处理得到了以甲磺酸盐形式存在的该苯磺酰胺2.4g(57％)。再将此产品用乙醇重结晶。

实施例10

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代-噻吨-4-基]甲基]乙酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHC(O)CH₃，R⁸＝H，n＝2)

按照基本上类似于实施例6中所述的方法，从4.15g(11.7mmol)实施例4所制备胺的游离碱，吡啶(60ml)和乙酰氯(0.82ml，11.53mmol)，得到了2.3g(52％)该乙酰胺橙色固体。将此产品用丙酮重结晶，熔点182-183℃。

实施例11

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]苯甲酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHC(O)Ph，R⁸＝H，n＝2)

按照基本上类似于实施例6中所述的方法，从1.17g(3.29mmol)实施例4所制备胺的游离碱，吡啶(25ml)和苯甲酰氯(0.42ml，3.62mmol)，得到了1.02g(68％)该苯甲酰胺黄色粉末。通过柱层析将该产品纯化，在硅胶柱上，先以氯仿(100％)、然后以1％异丙胺/氯仿洗脱，随后用乙酸乙酯重结晶。该产物熔点为161-163℃。

实施例12

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]二乙基磷酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHP(O)(OEt)₂，R⁸＝H，n＝2)

将2.28g(6.41mmol)实施例4所制备胺的游离碱，CH₂Cl₂(50ml)，和三乙基胺(2ml)的溶液，在0℃用氯代磷酸二乙基酯(1.0ml，6.9mmol)处理。此反应混合物先在0℃被搅拌2小时，然后在室温下搅拌1小时。真空除去溶剂后，残留物通过柱层析纯化，在硅胶柱上，先用乙酸乙酯(100％)洗脱，然后用5％甲醇/乙酸乙酯洗脱，最后用甲醇/异丙胺/乙酸乙酯(5/5/90)洗脱，再以乙酸乙酯重结晶后得到2.28g(72％)该二乙基磷酰胺黄色固体，熔点108-110℃。

实施例13

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-乙基甲酰胺

(IV：R¹＝R²＝Et，R⁴＝Et，R⁸＝H，n＝2)

将2.0g(5.6mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代-噻吨-4-甲醛，N-乙基甲酰胺(24.0ml)和甲酸(3.0ml，79.5mmol)的溶液，在170℃加热4小时。使反应混合物冷却之后，注入水中，并用10％氢氧化钠碱化。借助于过滤收集，得到固体，并用水洗。在氯仿/水中提取该固体残留物，分离出有机层，复盖在Na₂SO₄上干燥。真空除去溶剂后，残留物通过径向层析法纯化，用异丙胺/甲醇/乙酸乙酯(0.5/1/98.5)洗脱，得到1.32g(57％)所述N-乙基甲酰胺橙色固体，熔点75-77℃。

实施例14

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(乙氨基)-甲基]噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHC₂H₅，R⁸＝H，n＝2)

按照基本上类似于实施例4中所述的方法，从1.3g(3.2mmol)实施例13制备的N-乙基甲酰胺和10.8ml 2N盐酸，得到了作为二盐酸化物的所需乙胺1.29g(92％)。将此产物用乙醇/四氢呋喃重结晶，此产物在160℃熔化(分解)。

实施例15

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(二甲氨基亚甲基-氨甲基)-噻吨-9-酮三盐酸化物

(I：R¹＝R²＝Et；Q＝CH₂N＝CHN(Me)₂；R⁸＝H；n＝2)

将N-[[1-[[2-(二乙氨基)]乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺(3g)用50ml 2N HCl稀释后，溶液在蒸汽浴上加热90分钟。将此混合物冷却，用35％氢氧化钠溶液碱化至pH10，然后被萃取进入氯仿。分离出有机层，使之过滤通过K₂CO₃，再被真空浓缩，并使生成的粗制品在60℃与二甲基甲酰胺缩二甲醇反应过夜。真空除去过剩的二甲基甲酰胺缩二甲醇后，用快速层析法(硅胶，氯仿/iPrNH₂/甲醇(98∶1∶1)纯化该所需的标题化合物。将此产品溶解于2.5MHCl/乙醇(100ml)中，在冰浴中冷却，过滤，并干燥，得到2.38g 1-[[2-(二乙氨基)]乙基]氨基]-4-(二甲氨基亚甲基氨甲基)-噻吨-9-酮三盐酸化物橙色固体，熔点258-260℃。

实施例16

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-三氟乙酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHC(O)CF₃，R⁸＝H，n＝2)

将4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]-氨基]噻吨-9-酮(2.91g，8.19mmol)溶于80ml二氯甲烷，在0℃用三氟乙酰氨(溶于甲苯的14.75ml 0.61M溶液，9.0mmol)处理，然后将反应混合物在0℃搅拌90分钟。将此混合物真空浓缩，残留物用快速层析法纯化(硅胶柱，先用EtOAc(100％)洗脱，然后用2％异丙胺/EtOAc洗脱)，然后用乙酸乙酯重结晶，得到2.52g(68％)该产品的游离碱，熔点189-190℃(实施例16)。将此游离碱溶解于甲醇中，用甲磺酸(0.55g，5.72mmol)处理，用丙酮重结晶后，得到其甲磺酸盐，熔点152-154℃(实施例16a)。

实施例17

(a)

将硫代水杨酸(50.14g，0.33mol)和乙酸铜(5.0g)在二甲基亚砜(500ml)中的混合物回流加热，并一次加入碳酸钾(54.3g)。然后借助注射器加入3-溴氯苯(42ml，0.36mol)，并将此混合物回流加热3小时。将反应混合物注入水中，用活性炭处理，并过滤通过硅藻土。滤液用浓HCl酸化，过滤收集生成的沉淀，用水洗沉淀，在60℃真空干燥，得到75.01g(85％)2-[(3-氯苯基)硫代]苯甲酸。

(b)

在0℃，搅拌下，将2-[(3-氯苯基)硫代]苯甲酸(75.00g，0.28mol)加至浓H₂SO₄中，在超过1小时的时间内分几批加入。将此混合物再搅拌2小时，注入浓NH₄OH(500ml)的水(2.5L)溶液中，借助过滤收集生成的沉淀物，用水洗，并在60℃真空干燥，得到65.9g(95％)1-氯和3-氯噻吨-9-酮混合物。

(c)

将1-氯和3-氯噻吨-9-酮(14.01g，56.8mmol)，吡啶(20ml)，以及二乙氨基丙基胺(5.13g，39.4mmol)的混合回流加热直至反应完成。撤除加热，真空除去溶剂，残留物用氯仿萃取，并通过柱层析纯化，在硅胶柱上先用氯仿洗脱，除去未反应的3-氯异构体，然后用5％异丙胺/氯仿洗脱，得到5.10g(54％)1-[[3-(二乙氨基)丙基)]氨基]噻吨-9-酮橙色胶状物。

(d)

将1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-噻吨-9-酮(5.10g，15.0mmol)，甲醛水溶液(160ml)和5N乙酸(0.8ml)的混合物，在90℃加热16小时，再加入5N乙酸(0.20ml)，随之加入甲醛水溶液(50ml)，然后将此混合物在90℃再加热约57小时。用水将混合物稀释，用5N NaOH碱化，并用氯仿萃取。有机层复盖在Na₂SO₄上干燥，并使之通过硅胶柱，先用2％甲醇/氯仿洗脱，然后用异丙胺/甲醇/氯仿(2/2/96)洗脱，得到3.82g(69％)1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-4-(羟甲基)-噻吨-9-酮橙色/棕色胶状物。

(e)

1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛

(II：R¹＝R²＝Et，R⁸＝H，n＝3)

将1-[[3-(二乙氨基)丙基)]氨基]-4-(羟甲基)-噻吨-9-酮(3.82g)，甲苯(60ml)和二氧化锰(7.5g)的混合物回流加热6.5小时。将混合物冷却至室温后，使之过滤通过硅藻土，真空浓缩滤液，得到3.3g(87％)1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛棕色油状物。

(f)

1-[[3-(二乙氨基)丙基)]氨基]-4-(甲氨基甲基)噻吨-9-酮二盐酸化物·3/2水合物

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHMe，R⁸＝H，n＝3)

将1-[[3-(二乙氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛(3.3g，8.96mmol)和3g甲酸在50ml，N-甲基甲酰胺中的溶液回流加热2小时。用5ml 5N氢氧化钠溶液碱化此混合物，并在氯仿萃取(3次，每次150ml氯仿)。有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩，粗制油状物被溶解于3N HCl水溶液(50ml)中，并在蒸汽浴上加热3小时。将上述混合物冷却，用30ml 35％NaOH碱化，在氯仿(3×150ml)中萃取，有机层用硫酸钠干燥，真空浓缩后得到棕色油状物。将此棕色油状物用快速层析法纯化(硅胶柱，先用5％三乙基胺/Et₂O洗脱，然后用5％Et₃N/EtOAc洗脱，再用三乙基胺/甲醇/EtOAc(5∶5∶90)洗脱)，得到1.1g 1-[[3-(二乙氨基)-丙基]氨基]-4-(甲氨基甲基)噻吨-9-酮鲜橙色胶状物。通过在乙醚中用6N HCl处理，将此胶状物转变成相应的二盐酸化物，得到1.04g其二盐酸化物3/2水合物黄色粉末，熔点222-224℃。

实施例18

(a)

4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基-9-氧代噻吨-9-酮二盐酸化物·1/2水合物

(I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NH₂，R⁸＝H，n＝2)

将N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺(6.2g)和2N HCl(52ml)的混合物，加热至100℃，持续1.5-2小时。再将此反应混合物注入冰水中，用35％NaOH碱化，并用氯仿萃取。有机层用水洗(二次)，然后用盐水洗(1次)，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。残留物通过柱层析纯化，在硅胶柱上，先用乙酸乙酯洗脱，然后用0.5％三乙基胺/EtOAc洗脱，再用2％三乙基胺/EtOAc洗脱，再用CHCl₃/1-2％异丙胺洗脱，最后用CHCl₃/1-2％异丙胺/2％甲醇洗脱，得到3.3g(58％)该产品的游离碱。将一部分这种游离碱(1.25g)溶解于甲醇中，并在甲醇(6ml)中用浓HCl(3.3ml)处理，得到1.2g该产品的二盐酸化物·1/2水合物，熔点213℃(分解)。

(b)

N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基)]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺甲磺酸盐

(I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHSO₂Me，R⁸＝H，n＝2)

将4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)]乙基]氨基]-噻吨-9-酮(2g，6mmol)置于在氮气下的30ml干燥吡啶中，在室温下搅拌直至完全溶解。使此溶液在冰浴中冷却，滴加溶于冷吡啶中的甲磺酰氯0.52ml(6.7mmol)，并将此混合物在室温下搅拌1小时。再将此反应混合物注入含有0.51g氢氧化钠的500ml水中，用氯仿萃取，有机层用水(2次)和盐水洗，并用无水硫酸钠干燥。将此混合物过滤，并真空浓缩。残留物(2.5g)在乙醚中搅拌，过滤，干燥后得到2g N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺，熔点126-127℃。将此游离碱溶于甲醇中，用甲磺酸(0.48g)处理，得到2.0g(67％)该产品的甲磺酸盐，熔点168℃(分解)。

(c)

将1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-4-(羟甲基)-噻吨-9-酮(9.2g，0.028mol)在甲苯(322ml)中的混合物加热至大约60℃，然后加入氧化锰(MnO₂，16g)，再将此混合物在60℃加热1小时。过滤此混合物，真空浓缩其滤液，得到7.9g(87％)1-[[2-(二甲氨基)-乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛(结构式II：R¹＝R²＝Me，R⁸＝H，n＝2)。

(d)

N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺

(I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHCHO，R⁸＝H，n＝2)

将1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛(4.75g)，甲酰胺(66.5ml)和甲酸(7.6ml)的混合物，在170℃加热4小时。将此混合物注入冰水(250ml)中，然后用35％NaOH碱化，用氯仿萃取。有机层先用水洗(2次)，然后用盐水洗(1次)，再将此溶剂用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩，得到6.3g N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺。

(e)

4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-9-酮二盐酸化物·1/2水合物

(I：R¹＝R²＝甲基，Q＝CH₂NH₂，R⁸＝H，n＝2)

将N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺(6.2g)和2N HCl(52ml)的混合物1加热至100℃，持续1.5-2小时。将此反应混合物注入冰水中，用35％NaOH碱化，用氯仿萃取。有机层用水洗(2次)，然后用盐水洗(1次)用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。残留物通过柱层析纯化，在硅胶柱上，先用乙酸乙酯洗脱，然后用0.5％三乙基胺/EtOAc洗脱，再用2％三乙基胺/EtOAc洗脱，再用CHCl₃/1-2％异丙胺洗脱，最后用CHCl₃/1-2％异丙胺/2％甲醇洗脱，得到3.3g(58％)该产品的游离碱。取一部分此游离碱(1.25g)溶于甲醇中，在甲醇(6ml)中用浓HCl(3.3ml)处理，得到1.2g该产品的二盐酸化物·合1/2水，熔点213℃(分解)。

(f)

N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺甲磺酸盐

(I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHSO₂Me，R⁸＝H，n＝2)

将4-(氨甲基)-1-[[2-(二甲氨基)]乙基]氨基]-噻吨-9-酮(2g，6mmol)置于在氮气下的30ml干燥吡啶中，在室温下搅拌，直至完全溶解。使此溶液在冰浴中冷却，滴加溶于冷吡啶中的甲磺酰氯0.52ml(6.7mmol)，并将此混合物在室温下搅拌1小时。再将此反应混合物注入含有0.51g氢氧化钠的500ml水中，用氯仿萃取，有机层用水(2次)和盐水洗，并用无水磷酸钠干燥。将此混合物过滤，并真浓缩。残留物(2.5g)在乙醚中搅拌，过滤，干燥后得到2g N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺，熔点126-127℃。将此游离碱溶于甲醇中，用甲磺酸(0.48g)处理，得到2.0g(67％)该产品的甲磺酸盐，熔点168℃(分解)。

实施例19

(a)

按照类似于在实施例17(c)中所述的方法，从1-氯和3-氯噻吨-9-酮(15.15g，61.4mmol)，吡啶(20ml)，以及二甲氨基丙基胺(6.01g，58.7mmol)的混合物，制备了6.83g 1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]噻吨-9-酮。

(b)

按照类似于在实施例17(d)中所述的方法，从1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-噻吨-9-酮(6.8g，21.8mmol)，甲醛水溶液(175ml)和冰醋酸(0.75ml)，得到了6.74g(90％)1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基-4-(羟甲基)噻吨-9-酮。

(c)

按照类似于在实施例17(e)中所述的方法，从1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-4-(羟甲基)-噻吨-9-酮(6.7g)，甲苯(80ml)和MnO₂(12.15g)，得到了4.2g 1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛(结构式II：R¹＝R²＝Me，R⁸＝H，n＝3)。将此产物通过柱层析纯化，在硅胶柱上，先用CHCl₃(100％)洗脱，然后用1％异丙胺/CHCl₃洗脱。

(d)

将N-甲基甲酰胺(50ml)，甲酸(5.2g)和1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛(4.14g，12.16mmol)的混合物回流加热3小时。再将此混合物用水(250ml)稀释，用35％NaOH碱化，并用CHCl₃萃取(3次，每次CHCl₃ 150ml)。将此有机层用Na₂SO₄干燥，然后使之通过硅胶柱，先用CHCl₃(100％)洗脱，然后用2％异丙胺/CHCl₃洗脱，得到3.93g(84％)N-[[1-[[3-(二甲氨基)-丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基甲酰胺(结构式IV：R¹＝R²＝Me，R⁴＝Me，R⁸＝H，n＝3)。

(e)

1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-4-[[甲氨基甲基]噻吨-9-酮二盐酸化物·一水合物

(R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHMe，R⁸＝H，n＝3)

将上面制备的N-甲基甲酰胺(3.83g，10mmol)在40ml 3N HCl中的溶液，在蒸汽浴上加热4小时，再用35％NaOH溶液中和，并在冰上冷却1小时。将液体层轻轻倒去，粗制产物溶解于氯仿中，并使之过滤通过硅胶柱(用氯仿，1％异丙胺/氯仿洗脱)，得到2.38g所需的胺橙色胶状物。此产物通过溶解在甲醇中，用浓HCl处理，被转变成相应的盐酸盐，得到0.98g所需的二盐酸化物一水合物，熔点228-229℃。

实施例20

(a)

将1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4甲醛(4.75g，0.15mol)，N-甲基甲酰胺(48ml)和甲酸(3.9ml)的混合物，在170℃加热4.5小时，然后使其在室温下静置大约64小时。再将此反应混合物注入水(250ml)中，用35％NaOH碱化，用CHCl₃萃取(3次)。分离出有机层，先用水洗(2次)，然后用盐水洗(1次)，并用Na₂SO₄干燥。真空除去溶剂后，得到5.75g N-[[1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基甲酰胺(结构式IV：R¹＝R²＝Me，R⁴＝Me，R⁸＝H，n＝3)。

(b)

1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)-甲基]噻吨-9-酮二盐酸化物·5/4水合物

(I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHMe，R⁸＝H，n＝2)

按照类似于实施例19e的方法，从5.7g(15.4mmol)实施例20(a)制备的相应N-甲基甲酰胺和50ml 2N HCl，通过快速层析法纯化其游离碱之后(硅胶柱，先用氯仿洗脱，然后用0.5％异丙胺/氯仿洗脱，再后用1％异丙胺/氯仿洗脱)，得到了1.8g 1-[[2-(二甲氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]噻吨-9-酮。通过在甲醇中用浓HCl处理，将此游离碱转化成相应的二盐酸盐·5/4水合物，得到1.8g(30％)此产品，熔点177℃(分解)。

实施例21

(a)

将[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-甲醛(3.6g，10.57mmol)溶解于含有3.6g甲酸的50ml甲酰胺中，再将此溶液回流加热1.5小时，然后使之在室温下静置过夜。用水(400ml)将此反应混合物稀释后，用3ml 5N NaOH溶液碱化，快速搅拌30分钟，再过滤出沉淀的固体，用水洗，干燥后得到3.1g(79％)N-[[1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基甲酰胺(结构I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHCHO，R⁸＝H，n＝3)，为黄色粉末。

(b)

将实施例21(a)制备的甲酰胺(2.98g，8.07mmol)在40ml 3NHCl中的溶液，在蒸汽浴上加热4小时，使之冷却至室温后，再在冰上冷却，并用5N NaOH溶液中和至pH8。形成的不均匀混合物用氯仿萃取(5×100ml)，将其有机层用硫酸钠干燥，并过滤通过硅胶柱(先用5％三乙基胺/乙醚洗脱，然后用1-5％异丙胺/氯仿洗脱)，得到2.3g(83％)4-(氨甲基)-1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]噻吨-9-酮(结构式I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NH₂，R⁸＝H，n＝3)。

(c)

N-[[1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺甲磺酸盐·1/2水合物

(I：R¹＝R²＝Me，Q＝CH₂NHSO₂Me，R⁸＝H，n＝3)

将甲磺酰氯(0.51ml，6.59mmol)加到实施例21(b)所制备的胺(2.2g，6.44mmol)溶于吡啶的冰冷溶液中，并在室温下将此形成的混合物搅拌过夜。用氯仿稀释此混合物，并使之通过大硅胶柱，用5％三乙基胺/EtOAc洗脱，得到1.32g N-[[1-[[3-(二甲氨基)丙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-甲磺酰胺黄色粉末。将此游离碱溶解于甲醇(10ml)，并在甲醇中用甲磺酸(0.31g，1当量)处理，得到1.38g该甲磺酸盐·1/2水合物，为橙色固体，熔点＞107℃。

实施例22

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基-乙磺酰胺甲磺酸盐

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂N(CH₃)SO₂Et，R⁸＝H，n＝2)

将2.03g(5.49mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]噻吨-9-酮(按照实施例5中所述方法制备的)和三乙胺在45ml二氯甲烷中的溶液冷却至0℃，并用乙磺酰氯(0.74g，5.76mmol)处理。在0℃放置15分钟后，再在室温下将此反应混合物搅拌72小时。真空浓缩此混合物，将残留物溶于氯仿中，并使之通过硅胶柱纯化(先用氯仿，然后用1％三乙胺/氯仿洗脱)，得到2.43g(96％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基乙磺酰胺。将此磺酰胺用乙酸乙酯重结晶，并在异丙醇中用甲磺酸处理，得到此产品的甲磺酸盐，熔点159-161℃。

实施例23

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基](对-甲氧基)苯磺酰胺甲磺酸盐

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂C₆H₄-p-OMe，R⁸＝H，n＝2)

将1.40g(3.94mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻吨-9-酮(按照实施例4中所述的方法制备的)溶于含有1.5ml三乙胺的30ml氯仿中，并将此溶液冷却至0℃，再用对-甲氧苯磺酰氯(0.83g，4.02mmol)处理。在0℃放置10分钟后，再将此反应混合物在室温下搅拌2小时。真空除去氯仿，将残留物溶解于含有1ml三乙胺的100ml二氯甲烷中，并在室温下，搅拌中再加入对-甲氧苯磺酰氯(0.85g)处理。真空浓缩此混合物，残留物通过硅胶柱纯化(用1％三乙胺/氯仿洗脱)，得到1.57g N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-对-甲氧基苯磺酰胺。将此磺酰胺在异丙醇/乙酸异丙酯/甲醇中用甲磺酸(0.3g)处理，得到1.07g其甲磺酸盐，熔点133-137℃。

实施例24

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]乙磺酰胺甲磺酰盐

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂Et，R⁸＝H，n＝2)

将2.5g 4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻吨-9-酮(按照实施例4中所述方法制备的)在30ml吡啶中的溶液在冰浴中冷却15分钟，快速滴加0.95g乙磺酰氯在5ml吡啶中的溶液，并将此反应混合物在室温下搅拌1小时。再将此混合物注入含有0.75gNaOH的75ml水中，用氯仿萃取，然后用水(2次)和盐水洗有机层，并将此有机层用硫酸钠干燥。真空浓缩此混合物，将残留物在乙醚中搅拌，干燥(40℃/0.1mm)，得到1.7g N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]乙磺酰胺，熔点105℃(分解)。将此磺酰胺溶于甲醇中，在甲醇中用甲磺酸处理，得到1.61g(42％)其甲磺酸盐，熔点135℃(分解)。

实施例25

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-乙基-甲磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂N(Et)SO₂Me，R⁸＝H，n＝2)

将2.10g(5.48mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(乙氨基)甲基]噻吨-9-酮(按照实施例14的方法制备的)在30ml二氯甲烷中的溶液冷却至0℃，用2ml三乙胺和甲磺酰氯(0.7ml)处理，并将此反应混合物在室温下搅拌6小时。真空除去溶剂，将残留物溶解于氯仿中，并使此溶液通过硅胶柱纯化(先用氯仿，然后用2％三乙胺/氯仿洗脱)。将分离出的黄色固体用乙酸乙酯重结晶，干燥后得到1.11g(44％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-乙基甲磺酰胺黄色粉末，熔点172-176℃。

实施例26

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-3，4-二氯苯磺酰胺甲磺酸盐·1/2水合物

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂C₆H₃-3，4-二氯，R⁸＝H，n＝2)

将2.5g(7mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻吨-9-酮(按照实施例4中所述方法制备的)，在氮气下加入到溶解于35ml干燥吡啶的3，4-二氯苯磺酰氯(1.84g，7.5mmol)溶液中，并将此反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后使之静置大约72小时。再将此反应混合物注入含有0.75g NaOH的75ml水中，并用氯仿萃取。有机层先用水(2次)和盐水洗，再用硫酸钠干燥。真空除去氯仿后，残留物用乙醇重结晶，得到1.24g N-[[1-[[2-(二乙氨基)]乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-3，4-二氯苯磺酰胺，熔点95℃(分解)。将此游离碱溶解于甲醇中，并在甲醇中用甲磺酸处理，得到其甲磺酸盐·1/2水合物，熔点55℃(分解)。

实施例27

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-2-氟苯磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂C₆H₄-2-F，R⁸＝H，n＝2)

将1.36g(3.83mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻吨-9-酮(按实施例4中所述方法制备的)溶于含有1ml三乙胺的25ml二氯甲烷中，并将此溶液冷却至0℃，再用2-氟苯磺酰氯(0.84g，4.32mmol)处理，搅拌反应混合物几小时。真空除去溶剂后，将残留物溶于氯仿中，并用快速层析法纯化(硅胶柱，先用氯仿，随后用1％三乙胺/氯仿洗脱)。真空除去溶剂后，用乙酸乙酯重结晶此产物，得到1.08g(55％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-2-氟苯磺酰胺橙色粉末，熔点125-127℃。

实施例28

N-[[1-[[2-(三乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-丙基-甲磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂N(C₃H₇)SO₂Me，R⁸＝H，n＝2)

通过用戊烷研磨(4次)，将油从氢化钠在矿物油中的60％悬液0.2g中除去。在氮气中，搅拌下将干燥的二甲基甲酰胺(DMF、40ml)加入氢化物中，然后在氮气中将2g N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺(实施例6)加入到该反应混合物中，同时搅拌，并将此混合物加热至50℃持续2小时。再将上面的混合物在冰浴中冷却15分钟，加入溶于少量DMF中的丙基胺0.87g，然后在室温下将此混合物搅拌过夜。用35ml水搅拌此混合物，过滤，其残留物用水洗，并干燥(50℃/0.1mm/P₂O₅)，得到2.17g N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-丙基甲磺酰胺，熔点142-143℃。

实施例29

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基-苯磺酰胺甲磺酸盐

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂N(Me)SO₂C₆H₅，R₈＝H，n＝2)

将5.32g(14.4mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]噻吨-9-酮(按实施例5中所述方法制备的)在100ml二氯甲烷中的溶液冷却至0℃，并用三乙胺(5ml)和苯磺酰氯(2ml，15.67mmol)处理，将此反应混合物搅拌2小时。真空浓缩此混合物，使其残留物通过硅胶柱纯化，(先用氯仿洗脱，然后用1/2％-1％异丙胺/氯仿洗脱)，得到6.24g黄色胶状物。将此产物溶解于乙酸乙酯中，真空除去溶剂后得到6.06g(83％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基苯磺酰胺。将此磺酰胺(2.5g)悬浮于异丙醇中，用甲磺酸(0.51g)处理，生成2.63g其甲磺酸盐，熔点171-174℃。

实施例30

(a)

先将溴(85ml)，然后将水(1L)分别加入到间-茴香酸(250g，1.67mol)与乙酸(1L)的混合物中。将此混合物加热回流，在冰浴中冷却，并借助过滤收集沉淀产物，用水洗，得到305.7g(79％)2-溴-5-甲氧基苯甲酸，熔点154-156℃。

(b)

将K₂CO₃(23g)加入到3-氯苯硫酚(20g，138mol)，乙酸铜(1.8g)和DMF(200ml)的混合物中。将此混合物加热至150℃，持续15-20分钟，然后分几次加入2-溴-5-甲氧基苯甲酸(35.8g，0.155mol)。再将此混合物加热过夜，然后注入水(600ml)中，过滤，并用活性炭处理滤出液，再过滤，并用HCl稀释。再用过滤法收集生成的沉淀物，用水洗，在50℃，在P₂O₅上真空干燥，得到27.6g 2-[(3-氯苯基)硫基]-5-甲氧基苯甲酸。

(c)

在氮气中，将2-[(3-氯苯基)硫基]-5-甲氧基苯甲酸(27g，0.092mol)加入到冷硫酸(89ml)中，分几次加入，持续1.5-2小时以上。将此混合物在室温下搅拌过夜，然后注入含有浓NH₄OH(218ml)和冰的水(900ml)中。过滤收集沉淀的固体，在50℃，在P₂O₅上真空干燥，得到21g(42％)1-氯和3-氯-7-甲氧基-噻吨-9-酮的混合物。

(d)

将1-氯和3-氯-7-甲氧基-噻吨-9-酮(20.7g)，吡啶(69ml)和二乙氨基乙胺(16.1g，0.138mol)的混合物，在115℃，氮气中加热20小时。真空除去溶剂后，残留物通过柱层析法纯化，在硅胶柱上，先用CHCl₃(100％)洗脱，然后用1％异丙胺/氯仿洗脱，得到11.22g 1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基噻吨-9-酮。

(e)

将1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基噻吨-9-酮(11.2g，0.031mol)，37％甲醛(277ml)和5N乙酸(4.6ml)的混合物在100℃加热3小时。使反应混合物冷却后过滤，将滤出液注入冰水(600ml)中，并用35％NaOH碱化。用氯仿萃取此混合物(3次)，再用盐水洗，并在Na₂SO₄上干燥。真空除去溶剂后，残留物通过柱层析纯化，在硅胶柱上，依次用25％CHCl₃/己烷，50％CHCl₃/己烷，75％CHCl₃/己烷，0.5％异丙胺/CHCl₃洗脱，得到8.8g(73％)1-[[2-(二乙氨基)-乙基]氨基]-4-(羟甲基)-7-甲氧基噻吨-9-酮。

(f)

将1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(羟甲基)-7-甲氧基噻吨-9-酮(8.8g，0.023mol)在甲苯(268ml)中的溶液，在氮气中加热至60℃，然后加入MnO₂(13.2g)。将此混合物加热过夜，然后过滤，并将滤液真空浓缩，得到7.05g(81％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-甲醛(结构式II：R¹＝R²＝Et，R⁸＝7-OCH₃，n＝2)。

(g)

将1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-甲醛(3g，7.8mmol)和1.5ml甲酸在25.5ml N-甲基甲酰胺中的溶液在氮气中，加热至170℃，持续8小时，同时搅拌。将此反应混合物注入160ml冰水中，用35％NaOH溶液碱化后用氯仿萃取(3次)。有机层用水(2次)和盐水洗，在硫酸钠上干燥，真空除去溶剂后得到3g(89％)所需的N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-N-甲基甲酰胺(结构式IV：R¹＝R²＝Et，R⁴＝Me，R⁸＝7-OCH₃，n＝2)。

(h)

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-甲氧基-噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHMe，R⁸＝7-OMe，n＝2)

将实施例30(g)制备的N-甲基甲酰胺(3.0g)溶于2N HCl水溶液(24ml)中，在氮气中，在100℃搅拌加热2小时。将上述混合物冷却后，注入125ml冰水中，用35％NaOH液碱化，用氯仿萃取，先用水洗(2次)，再用盐水洗。将此有机层在硫酸钠上干燥，并真空浓缩后得到3.1g粗制产物。将此产物在乙醚中研磨，其滤出液通过几支快速层析柱纯化(硅胶柱，依次用50％己烷/氯仿，氯仿，和0.25-0.5％异丙胺/氯仿洗脱(柱1)，先用氯仿，再用1％异丙胺/1％MeOH/CHCl₃洗脱(柱2)，以及先用CHCl₃，再用0.5％异丙胺/CHCl₃洗脱(柱3))，得到0.746g 1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-甲氧基-噻吨-9-酮。

实施例31

(a)

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHCHO，R⁸＝7-OMe，n＝2)

将1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-甲醛(3.6g，0.0094mol)，甲酰胺(48ml)和甲酸(6ml)的混合物，在N₂中加热至170℃，持续8小时。再将此混合物注入冰水中，用35％NaOH碱化后用氯仿萃取。分离出有机层，先用水(2次)，然后用盐水洗，并在Na₂SO₄上干燥，真空浓缩后得到3.88g N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺。

(b)

4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NH₂，R⁸＝7-OCH₃，n＝2)

将实施例31(a)制备的甲酰胺(3.88g)和2N HCl(32ml)的混合物，在氮气中，在100℃搅拌加热2小时。使上述混合物冷却后，注入水中，用10％NaOH液碱化后用氯仿萃取，再先后用水和盐水洗有机层。将此有机层在硫酸钠上干燥，真空浓缩后得到3.6g粗制产物。将此产物溶解于氯仿中，借助快速层析法纯化(硅胶柱，先用已烷/氯仿(50∶50)洗脱，然后用在己烷/氯仿(50∶50)中的1％异丙胺洗脱)，得到1.75g所需的产物。

(c)

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-甲磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂Me，R⁸＝7-OMe，n＝2)

先将1.75g(0.0045mol)实施例31(b)制备的酰胺溶于在冰浴内冷却的22.5ml吡啶中，然后在氮气中，搅拌下向此溶液滴加0.39ml(0.005mol)甲磺酰氯在少量吡啶中的溶液，并将此反应混合物在室温下搅拌2小时。再将此混合物注入含有0.38g NaOH的375ml水中，用氯仿萃取，其有机层用水和盐水洗。再将此氯仿层在硫酸钠上干燥，真空除去此溶剂，残留物被真空干燥后得到1.61g(77％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺，熔点144℃(分解)。

实施例32

(a)

在N₂中，分几次将N₂CO₃(23g)加入到3-氯苯硫酚(20g，0.138mol)，乙酸酮(1.75g)和DMF(199ml)的混合物中。先将此混合物加热至150℃，然后加入2，5-二溴苯甲酸(43.5g)。再将此混合物加热这夜，然后注入水中(600ml)，过滤，用活性炭处理滤液后再次过滤。将此滤出液先用浓HCl酸化，再用CHCl₃萃取，用盐水洗此有机层，并在Na₂SO₄上干燥。真空除去溶剂后得到28.9g 2-[(3-氯苯基)硫基]-5-溴苯甲酸。

(b)

将2-[(3-氯苯基)硫基]-5-溴苯甲酸(28.4g)和浓硫酸(80ml)的混合物，先在0℃搅拌，然后在室温下搅拌过夜。再将此混合物注入含有浓NH₄OH(199ml)的冰水(850ml)中，借助过滤收集沉淀产物，并在50℃真空干燥，得到15.0g 1-氯和3-氯-7-溴-噻吨-9-酮的混合物。

(c)

将1-氯和3-氯-7-溴噻吨-9-酮(13.6g)，吡啶(108ml)，以及N，N-二乙基乙二胺(16.3ml)的混合物加热至115℃，持续20小时。真空除去溶剂后，残留物通过柱层析纯化，在硅胶柱上，先用CHCl₃(100％)，然后用1％异丙胺/CHCl₃洗脱，得到9.3g 1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴噻吨-9-酮。

(d)

将1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴噻吨-9-酮(9.3g，22.9mmol)，37％甲醛溶液203ml，以及5N乙酸溶液3.4ml的混合物，在氮气中加热至100℃，持续过夜。将此混合物冷却至室温，并借助于过滤除去生成的固体。用水稀释滤出液，并用35％NaOH液碱化，用氯仿萃取。其有机层用盐水洗，在硫酸钠上干燥，真空除去溶剂后，得到10g油状物。将此油状物溶于二氯甲烷中，并过滤，真空除去此溶剂后，其羟甲基类似物粗品用快速层析法纯化(硅胶柱，依次用25％氯仿/己烷，氯仿/己烷(1∶1)，25％氯仿/己烷，CHCl₃(100％)，和0.5-1％异丙胺/氯仿洗脱)，得到3.2g 1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(羟甲基)-7-溴噻吨-9-酮。

(e)

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻吨-4-甲醛

(II：R¹＝R²＝Et，R⁸＝7-Br，n＝2)

将3.2g(7.34mmol)实施例32(d)制备的醇和4.3g MnO₂在85ml甲苯中的混合物，在氮气中，60℃加热1小时。过滤此混合物，并用CHCl₃洗，用真空法浓缩合并的滤出液，得到3g黄色固体。在乙醚中研磨此黄色固体，过滤，干燥后得到2.7g(94.3％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻吨-4-甲醛，熔点145-146℃。

(f)

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHCHO，R⁸＝7-Br，n＝2)

将2.7g(6.2mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻吨-4-甲醛，31.7ml甲酰胺，和3.6ml甲酸的混合物，在氮气中加热至170℃，同时搅拌持续8小时，然后此混合物在室温下静置72小时。将此混合物注入150ml冰水中，用35％NaOH液碱化，过滤出固体产物，并用水洗。将此固体产物溶于氯仿中，用盐水洗，在硫酸钠上干燥，真空除去溶剂后得到2.85g所需的甲酰胺，为黄色/橙色固体，熔点132℃(分解)。

(g)

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(氨甲基)-7-溴噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NH₂，R⁸＝7-Br，n＝2)

将2.85g(6.6mmol)上述甲酰胺(实施例32(f))在26ml 2NHCl溶液中的混合物，在氮气中加热到100℃，持续2小时，然后使混合物在室温下静置过夜。将此反应混合物注入200ml冰水中，用35％NaOH溶液碱化，用氯仿萃取。用水和盐水洗其有机层，在硫酸钠上干燥，真空浓缩后得到2.67g黑色油状物。用快速层析法纯化此黑色油状物(硅胶柱，先用1250ml己烷/氯仿(1∶1)洗脱，然后用在己烷/氯仿(1∶1)中的1％异丙胺洗脱)，得到1.87g(70％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-(氨甲基)-7-溴噻吨-9-酮，熔点79-82℃。

实施例33

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂Me，R⁸＝7-Br，n＝2)

在氮气中将1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4(氨甲基)-7-溴噻吨-9-酮(1g，2.3mmol)溶于11.5ml干燥吡啶中，在冰浴内搅拌15分钟，并滴加溶于冷吡啶中的0.2ml(2.6mmol)甲磺酰氯，在室温下搅拌此混合物。将此反应混合物注入200ml水中，在冰水中加入0.19g氢氧化钠，用氯仿萃取。用水(2次)和盐水洗其有机层，并在无水硫酸钠上干燥。过滤此混合物，真空浓缩，在乙醚中搅拌其残留物，过滤并干燥后得到1.02g N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-溴-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-甲磺酰胺，熔点134-139℃。

实施例34

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]氨基甲酸甲酯

(I：R¹＝R²＝Et；Q＝CH₂NHCOOMe；R⁸＝H；n＝2)

将2.94g(8.27mmol)4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-噻吨-9-酮溶解于含有5ml三乙胺，并冷却至0℃的50ml二氯甲烷中，向此溶液加入0.7ml(9.06mmol)氯甲酸甲酯，并将此混合物搅拌2.5小时。真空除去其溶剂后，将残留物悬浮于氯仿中，并通过快速层析法纯化(硅胶柱，先用氯仿，然后用1％异丙胺/氯仿洗脱)，得到2.36g(69％)N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]-氨基甲酸甲酯，为黄色固体，熔点129-131℃。

实施例35

1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-羟基噻吨-9-酮

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHMe，R⁸＝7-OH，n＝2)

将1.6g(4mmol)1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-4-[(甲基-氨基)甲基]-7-甲氧基-噻吨-9-酮(按实施例30(h)中所述方法制备的)在10ml 48％HBr中的溶液加热至110℃，持续5小时。冷却后，将此反应混合物用饱和碳酸氢钠中和，用氯仿萃取(3次，每次100ml氯仿)。得到一种不溶于水或氯仿的黑色胶状物，将它溶解于甲醇，并与氯仿溶液结合。真空浓缩除去溶剂后得到1.67g深橙色固体物。用快速层析法纯化此橙色固体产物(硅胶柱，用异丙胺/甲醇/氯仿(1∶1∶98)洗脱，随后用第二支硅胶柱，以异丙胺/MeOH/CHCl₃(2∶2∶96)洗脱)得到0.56g(36％)1-[[2-(二乙氨基)乙基]-氨基]-4-[(甲氨基)甲基]-7-羟基-噻吨-9-酮，熔点167-169℃。

实施例36

N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]-甲基]氨基甲酸甲酯

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHCOOMe，R⁸＝7-OMe，n＝2)

将1.55g 4-(氨甲基)-1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基噻吨-9-酮溶解于含有2ml三乙胺，并冷却至0℃的40ml氯仿中，向此溶液加入0.45ml氯甲酸甲酯，将此混合物在室温下搅拌几小时。真空除去溶剂后，残留物用快速层析法纯化(硅胶柱，先用氯仿，然后用在氯仿/己烷(1∶1)中的1％三乙胺洗脱)，得到1.2gN-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]-甲基]氨基甲酸甲酯，用乙酸乙酯重结晶后，形成0.79g亮黄色固体物，熔点131-132℃。

实施例37

N-[[1-(2-二乙氨基)乙基]氨基]-7-羟基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺·3/4水合物

(I：R¹＝R²＝Et，Q＝CH₂NHSO₂CH₃，R⁸＝7-OH，n＝2)

在-78℃将1N BBr₃在CH₂Cl₂(1.75ml)中的溶液加到N-[[1-[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺(0.5g)在CH₂Cl₂(45ml)中的溶液中。将此混合物温热至室温，搅拌过夜，然后注入含有35％NaOH(8ml)的冰水(250ml)中。对此混合物先用稀HCl酸化，然后用固体Na₂CO₃碱化，再用乙酸乙酯萃取。分离出有机层，用盐水洗，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。残留物用柱层析法纯化，在硅胶柱上，用5％MeOH/EtOAc洗脱，得到0.28g(58％)N-[[1-(2-二乙氨基)乙基]氨基]-7-羟基-9-氧代噻吨-4-基]甲磺酰胺·3/4水合物，熔点78℃(分解)。

按照如下的方法，测定了本发明代表性实施例化合物对小鼠的抗肿瘤活性。

先将动物混合在一起，用12号标准套针皮下植入30-60mg肿瘤碎片，在未选择分配到不同的治疗组或对照组之前，将动物再次混合。对于早期治疗，是在植入肿瘤后1-5天内开始化学治疗，此时细胞的数量比较少(10⁷-10⁸个细胞)。对于晚期治疗，是推迟到肿瘤变得比较大(重量200-300mg)时才开始化学治疗。一个300mg的肿瘤总共含有大约3×10⁸个细胞。对于90％动物，在已知晚期试验中的肿瘤都在2.5倍的大小范围之内。每周用卡尺测量肿瘤一次(或者对较快生长的肿瘤每周测量2次)。当它们的肿瘤达到1500mg时(也就是在它们能引起动物不安之前)将小鼠活杀。肿瘤的重量可根据二维测量来估算。

当对照组肿瘤大小达到大约700-1200mg(组中位数)时，对治疗组和对照组进行测定。确实每组动物的平均肿瘤重量(包括0)。T/C值(治疗组肿瘤重量比对照组肿瘤重量)的百分数是抗肿瘤疗效的指标：按照癌症治疗部分的药物评价分部(Drug Evalnation Branchof the Division of Cancer Treatment(NCI))的标准，T/C等于或小于42％被认为有显著的抗肿瘤活性。T/C值＜10％被认为表明有非常显著的抗肿瘤活性。认为最低体重下降(组平均数)大于20％，或者大于20％的药物-致死，指示是极端毒性的剂量。

对于胰管腺癌#3的结果显示在表1中，对于结肠腺癌#38的结果显示在表2中。

表1

实施例号# T/C(％) 体重下降(g) ^★ 药物致死总剂量(mg/kg)静脉内或口服

1 0 1.6 0 1739

2 0 2.0 0 576

2 7 1.6 0 144

4 0 0.4 0 570

5 0 1.6 0 222

6 0 1.6 0 124

7 0 3.2 1/5 400

8 0 0.8 0 304

9 8 1.6 0 1395

10 0 2.4 0 540

11 0 0.8 0 855

12 36 3.2 0 1298

13 0 2.4 0 431

14 0 1.2 0 448

15 0 2.0 0 390

16(a) 21 +0.8 0 1171

17(f) 17 2.0 0 1060

18(e) 82 1.0 0 128

18(f) 0 5.2 2/5 256

19(e) 4 3.4 0 610

20(b) 10 0.4 0 383

21(c) 0 4.5 0 208

22 0 3.2 0 465

23 20 2.4 0 1212

24 0 2.3 0 203

25 0 4.6 0 288

26 13 2.2 0 654

27 5 +0.8 0 2594

28 0 2.8 0 552

29 6 2.4 0 2403

31(c) 0 5.6 0 248

30(h) 0 1.4 0 880

33 28 2.0 0 1281

34 0 3.6 0 248

36 0 0.4 0 155

37 7 0 0 32

^★平均体重是25g

表2

实施例号# T/C(％) 体重下降(g) ^★ 药物致死总剂量(mg/kg)静脉内注射

2 0 2.8 0 600

5 11 2.9 0 960

6 0 5.0 3/7 132

6 4 1.7 1/7 82

7 16 0.6 0 840

10 0 4.0 0 340(b)

24 2.3 0 200(b)

22 0.6 0 160(b)

2 4.0 2/5 740(a)

7 1.2 0 460(a)

23 2.0 0 865(b)

11 0 2.0 0 1709(a)

0 0.8 0 885(a)

39 0.8 0 518(b)

16(a) 20 1.2 0 1000

27 1.5 0 670

18(e) 51 2.2 4/5 180

3 1.0 0 120

25 0 4.8 4/5 852(c)

0 0.6 0 529(c)

0 0.8 0 327(c)

^★平均体重是20.5-25.5g

(a)＝口服给药

(b)＝腹膜内给药

(c)＝静脉注射给药3-6天及口服给药7-10天

通过静脉内输注给药，试验了实施例5的化合物对抗多种其它肿瘤的作用，如表3中所示，并且，以300mg/kg口服给药，此化合物具有抗结肠腺癌#38的活性。

通过静脉内快速浓注给药，试验了实施例6的化合物对抗多种其它肿瘤的作用，如表4中所示。

实施例8(a)的化合物对抗多种肿瘤的试验结果如表5中所示。

实施例36的化合物对抗多种肿瘤的试验结果如表6所示。

本发明代表性化合物对抗乳腺癌16/C/RP的试验结果如表7中所示。

本发明代表性化合物对抗P3 88/阿霉素抗性白血病的试验结果如表8中所示。

表3

总剂量

肿瘤 mg/kg 给药方案最低体重下降g/小鼠 T/C值(％) 无肿瘤的观察天数

Human Adeno 960 输注16小时，第7天，第20天 -0.4 16％ 1/4 33

Squamous Lung#125 -0.4 16％ 0/4 132

600 -0.4 15％ 0/5 33

-0.4 15％ 0/5 132

乳腺癌16/C 720 输注4小时，第1天，第4天 -2.0 18％ 0/7 13

454 -1.2 16％ 0/7 13

乳腺癌16/C/Adr^* 960 输注3小时，第1天，第4天 -2.8 23％ 0/7 27

结肠腺癌#38 732 快速浓缩3-15次 -2.0 0％ 1/5 100

477 -2.8 9％ 0/5 100

结肠腺癌#38 960 输注4小时，第6天，第3天 -2.9 11％ 2/7 20

-2.9 11％ 1/7 100

600 -2.0 26％ 0/7 20

-2.0 26％ 0/7 100

结肠癌#51 720 输注3小时，第3天，第7天 -1.1 8％ 0/5 50

454 -2.8 12％ 0/7 50

胰腺癌03 222 输注3小时 -1.6 0 1/4 108

^*阿霉素抗性的

表4

总剂量

肿瘤 mg/kg 给药方案最低体重下降 T/C值(％) 无肿瘤的观摩天数

结肠腺癌#38 82 第6-9天快速浓注 -1.7 1 2/7 132

51 -1.2 18 1/7 132

乳腺癌16/C 82 第1-4天快速浓注 -3.0 6 0/5 23

51 -1.2 13 0/5 23

结肠癌51/A 96 第3-6天，第9天，11天快速 -3.0 14 0/6 32

浓注

66 -2.3 28 0/6 32

胰腺癌02 82 第1-4天快速浓注 -2.0 23 0/5 28

51 -1.2 42 0/5 28

胰腺癌03 124 第3-4天，6-14天快速浓注 -1.6 0 3/5 245

79 -1.0 0 1/5 245

表5

总剂量最低体重下降 T/C值

肿瘤 mg/kg 给药途径给药方案 g/小鼠 (％) 药物致死无肿瘤观摩天数

结肠腺癌#38 340 腹膜内注射 3-10天 -2.0 0 0 5/5 168

196 腹膜内注射 3-10天 -0.0 0 0 1/5 168

112 腹膜内注射 3-10天 +0.4 3 0 -- 168

550 口服 3-7天 -2.8 0 0 5/5 168

275 口服 3-7天 -0.4 0 0 3/5 168

结肠癌51/A 500 口服 3-7天 -4.6 0 4/5 0/5 31

250 口服 3-7天 -1.6 16 0 0/5 31

乳腺癌16/C/Adr^* 340 静脉注射静注2次/天1-4 -7.1 32 5/6 0/6 22

→口服天口服5天

284 静脉注射静注2次/天1-4 -2.3 61 3/6 0/6 22

→口服天口服5-6天

183 静脉注射静脉2次/天口 -4.3 39 0/4 0/4 22

→口服服5-6天

^*阿霉素抗性

表6

总剂量给药途径给药方案最低体重下降 T/C值药物致死无肿瘤观察天数

肿瘤 mg/kg g/小鼠 (％)

胰腺癌03 420 静脉内注射 3-6天 -5.6 0 3/5 2/5 45

240 静脉内注射 3-6天 -0.4 0 0 5/5 45

155 静脉内注射 3-6天 -0.4 0 0 5/5 45

结肠腺癌#38 330 静脉内注射 3-7天 -3.2 0 0 5/5 33

220 静脉内注射 3-7天 -0.8 0 0 5/5 33

147 静脉内注射 3-7天 0 0 0 5/5 33

乳腺癌16/C 363 静脉内注射 1-4天 -2.4 2 2/5 2/5 21

242 静脉内注射 1-4天 -1.2 8 1/5 0/5 21

161 静脉内注射 1-4天 -0.4 9 0 0/5 21

人MX-1乳腺癌 297 静脉内注射 1-6天 -2.4 39 0 0/5 26

132 静脉内注射 1-6天 -0.8 27 0 0/5 26

(a)注意：由于尾静脉损伤，在注射给药2-4天后，某些注射改为口服。

表7

实施例号No. 总剂量给药途径给药方案最低体重下降 T/C值药物致死无肿瘤观察天数

mg/kg g/小鼠 (％)

30(H) 900 静脉内输注输注1天，4天 0 29 1/6 0/5 63

600 静脉内输注输注1天，4天 -0.7 23 0/5 0/5 63

400 静脉内输注输注1天，4天 -1.0 46 0/5 0/5 63

31(C) 224 静脉注射 2次/天，3-6 -4.4 0 0 1/5 28

天

156.8 静脉注射 2次/天，3-6 -1.6 5 0 0/5 28

天

109.6 静脉注射 2次/天，3-6 -1.6 6 0 1/5 28

天

表8

实施例号在第0天静脉内注射植总剂量给药给药最低体重下降药物 ILS Log₁₀杀肿肿瘤观察

No. 入的P388/Adr细胞数 mg/kg 途径方案 g/小鼠致死％瘤细胞数细胞天数

10 10⁵ 520 静脉内输第1，4天 -3.75 3/7 54 3.5 0/7 129

注3小时

10⁵ 320 静脉内输第1，4天 -1.75 0/5 23 1.5 0/5 129

注3小时

10⁵ 200 静脉内输第1，4天 -1.5 0/7 8 0.5 0/7 129

注3小时

13 10⁵ 450 静脉内输第1，4天 -3.0 2/7 38 2.5 0/7 129

注3小时

10⁵ 300 静脉内输第1，4天 -1.75 0/7 15 1.0 0/7 129

注3小时

10⁵ 150 静脉内输第1，4天 -1.75 0/8 8 0.5 0/8 129

注3小时

30(H) 10⁶ 450 静脉内输第1，4天 -2.3 0/7 62 5.3 0/7 43

注3小时

表8(续)

实施例号在第0天静脉内注射植总剂量给药途径给药最低体重药物 ILS Log 杀肿肿瘤观察

No. 入的P388/Adr细胞数 mg/kg 方案下降g/小鼠致死％瘤细胞数细胞天数

10⁶ 280 静脉内输注第1天 -1.7 0/7 69 6.0 2/7 43

3小时

31(C) 10⁶ 248 静脉注射第1，4天 -3.0 1/6 0 0 0/6 43

→口服*

10⁶ 112 静脉注射第1，4天 -2.7 0/6 0 0 0/6 43

→口服*

34 10⁶ 320 静脉内输注第1天 -3.6 5/5 中毒 LD100 0/5 23

3.5小时

198 静脉内输注第1天 -1.2 0/5 41.7 3.3 0/5 23

3.5小时

123 静脉内输注第1天 -1.2 0/5 8.3 0.7 0/5 23

3.5小时

76 静脉内输注第1天 -0.4 0/5 0 0 0/5 23

3.5小时

^*：由于尾静脉损伤注射4天后改为口服。

％ILS＝生成期增加的百分数。

在进行上述试验过程中，研究者遇到了非在注射给药之前新鲜配制的注射液降解的问题。因此，进行了提供在放置中不降解注射液的研究，这样，该抗肿瘤剂就可以用于临床治疗肿瘤病人。

具有细胞毒抗肿瘤活性的实施例6化合物被用于此项研究，它具有如下结构：

化学名称为N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲磺酰胺。为便于引用，此化合物以后有时将被称为WIN33377。用在安瓿中以2.5mg/ml的浓度溶于柠檬酸盐缓冲液(pH5.5)的最后稳定化溶液制剂，对此化合物进行了临床评价研究。为了达到可接受的贮存寿命，将此制剂在冷藏下贮存(2-8℃)。在较高的温度下贮存会导致形成非常难溶解的二聚体形式，在低浓度就会沉淀出。为了提供能在室温贮存，市场可接受的产品，可能要求制成冷冻干燥制剂。

使用了三种制剂，如表9中所示：

表9

制剂	1	2	3
制剂	1	2	3	WIN 33377	10.0mg	10.0mg	10.0mg
乙酸(0.1M)	0.5ml			WIN 33377	10.0mg	10.0mg	10.0mg
乙酸(0.1M)	0.5ml			柠檬酸(0.1M)		9.6mg
乳酸(0.1M)			0.5ml	柠檬酸(0.1M)		9.6mg
乳酸(0.1M)			0.5ml	NaOH(0.5M)		8.8μl	12μl
加注射用水至	1ml	1ml	1ml	NaOH(0.5M)		8.8μl	12μl
加注射用水至	1ml	1ml	1ml	pH	4.95	3.98	3.99

在加入稳定剂之前，先制成WIN 33377的水溶液制剂。

对此溶液以不同的浓度加入三种稳定剂：甘露糖醇(Fison AR级，M/2405)，葡聚糖(Sigma Chemical Co.医用级D-4751)，以及蔗糖(Prolabo Normapur AR级，27480.294)。

采用了与亚室温辅助部件相适应的Perkin-Elmer DSC-II。在Dell 210微机上用DARES软件进行数据收集和分析。如厂商说明书中所述，用铟和水作参照物进行温度校准。将液体待分析样品密封在大不锈钢平锅内。在27℃把它们装入热量计中，并使之在-53℃和27℃之间进行冷/热循环作用。加热和冷却的速度是5度/分钟。冷冻干燥的样品也被密封在大不锈钢平锅内，但是是在干燥的氮气环境中，以便减少这种千块吸潮的可能性。为了提高所有信号的强度，在-53℃-127℃的温度范围内采用了10度/分钟的加热和冷却速度。在一台实验用冷冻干燥机内进行冷冻干燥。

用高效液相色谱(HPLC)技术，通过分析WIN 33377试样或者其总色谱杂质，对冷冻干燥样品进行稳定性评价。

试样分析法

用HPLC仪(Kontron)，在如下条件下进行色谱分析：

色谱柱： Partisil ODS-3，5μm，10×0.46cm

流动相： A∶B(77∶23v/v

其中 A＝0.5M乙酸铵缓冲液，pH4.8，和

B＝乙腈

流速： 2.0ml/min

检测波长： 258nm

温度： 40℃

注入体积： 20μl

总色谱杂质分析法

以如下条件，用梯度洗脱HPLC技术对总色谱杂质进行测定：

色谱柱：Hypersil BDS，C18，5μm，25×0.46cm内径

流动相：A：7.71g/l乙酸铵+6.0ml/l冰醋酸+10ml/l三乙胺，

调pH4.8

B：乙腈

梯度条件：

时间(分钟) ％A ％B

0.00 80 20

30.00 80 20

60.00 60 40

70.00 60 40

70.01 80 20

80.00 80 20

流速： 2.0ml/min

检测波长： 438nm

温度： 40℃

注入体积： 25μl

制剂研制：

在试图制备冷冻干燥制剂之前，实施任何冷冻干燥过程的第一步，是充分了解此溶液的物理化学特性。按照上述程序，通过DSC(差示扫描量热法)对如表9中给出的三种制剂样品进行了分析。在表10中概括地显示了其相关的转化温度。

表10

制剂	缓冲剂	转化温度1(℃)	转化温度2(℃)
制剂	缓冲剂	转化温度1(℃)	转化温度2(℃)	1	乙酸盐	-28	-17
2	柠檬酸盐	-33	-17	1	乙酸盐	-28	-17
2	柠檬酸盐	-33	-17	3	乳酸盐	-32

发现这三种混合物发现出不同的物理化学性能：发现基于乙酸盐的制剂是结晶体状，基于柠檬酸盐的制剂一部分是结晶体状，而其余部分形成玻璃状，基于乳酸盐的制剂形成玻璃状。

这三种类型状态中，部分结晶对冷冻干燥导致最大的问题。部分结晶通常是不可预测的，并且，在药瓶内配制药剂的情况下，它可能导致不同药瓶之间的冷冻产品结构有显著差别。这又可能引起不同药瓶之间的干燥效果不同。最后结果是同一批次内产品质量不同，例如不同药瓶之间的稳定性，再水化作用和贮存寿命不同。不同药瓶之间的水分含量不同是此问题最直接的指示。

如柠檬酸盐制剂所表现的不完全结晶作用，可通过对此混合物加入适当的玻璃态形成赋形剂来防止。这种赋形剂将阻止其它材料形成结晶，而导致形成玻璃态。加入玻璃态形成剂的量将取决于结晶材料的性质和结晶的速度。在本研究中是拒绝使用柠檬酸盐，主要是由于在柠檬酸盐缓冲液中，药物虽然在配制初期是溶解了，但是，在4℃或25℃贮存过程中，几小时内就会结晶出来。因为冷冻干燥并不影响药物的溶解度，所以在使用时，当此柠檬酸盐制剂被再水化、可能会遇到某种溶解困难，加之甚至在给药过程中也可能出现散发的结晶作用。

所有三种制剂的总溶剂含量都较少，大约仅1％-2％w/w。这种水平不足以维持适当的填料结构，因需要再配制。结晶体制剂1需要加入填充剂。另一方面，制剂3(玻璃状的)需要加入玻璃态形成剂。对于结晶体，选择的稳定剂是甘露糖醇，对于玻璃态制剂，稳定剂是蔗糖或葡聚糖。它们是以50mg/ml的浓度被加入到表9所列举的溶液中。然后通过DSC对所配制溶液的样品进行分析。

DSC测定得出了这三种制剂的玻璃态转化温度值。这些温度相当于瓦解和变质最小时可允许的最高初始干燥温度。含葡聚糖的系统具有最高的玻璃态转化温度，并且当冰的升华速度随温度升高按指数变化增加时，将使干燥周期最短。但是，WIN 33377需要重复给药，在这种情况下，葡聚糖可能会引起过敏性休克反应。因此，出于医疗原因，这种制剂被排除了。

对于其它二种制剂发现了如下情况。

对于蔗糖/乳酸盐制剂，初期干燥应使在大约-40℃进行。这允许有5℃的安全范围(对目前使用的干燥器是足够的)，以便补偿干燥器内的温度梯度。每个药瓶装有10ml产品，装填深度大约1.63cm。药瓶的直径为2.8cm，使产品有6.15cm²的表面积。对于这些样品，总产品容量的有效升华速度计算为0.22g/瓶/h，其总产品容量由大约9.4g冰组成，其余部分是由固体和未冻结的水组成。在-40℃，以0.226g/h的速度，完成升华需要大约42小时。

对于甘露糖醇/乙酸盐混合制剂，初期干燥必须在低于通过DSC对乙酸盐制剂所测定的最低转化温度下进行，即在-30℃下进行。药瓶的装填容积和直径是相同的，但是，此刻升华作用可能在较高的温度下进行，对于这些样品，计算的有效升华速度是0.670g/瓶/h。同上面一样，必须升华9.4g冰，而现在初期干燥时间减少为14小时。

按上述将产品在所推荐的温度下保持一段时间，假定在升华面的温度等于冰核心的温度，这将确保能完成初始的干燥。然后，必须使产品的温度按逐渐增加的放置温度上升，以便除去产品中残留的水分。

冷冻干燥产品的制备：

表11显示了一些冷冻干燥的方法参数，可任选地用于分别以甘露糖醇和蔗糖稳定化的乙酸盐和乳酸盐缓冲的溶液。

表11

制剂甘露糖醇蔗糖

药瓶容量(ml) 20 20

装填容量(ml) 10 10

装填深度(cm) 1.63 1.63

初期干燥温度(℃) -30 -40

初期干燥时间(h) 14 42

第二期干燥中温度上升的速度(度/h) 4 4

最后干燥温度(℃) 25 25

初期干燥中的压力(mbar) 0.3 0.1

用如下的方法对本发明的制剂进行冷冻干燥。

根据剂量要求，选择装填某种制剂所需容量的药瓶。在选择容纳某一剂量的药瓶时，装填量不应越过药瓶容量的某一分数。例如，不应将5ml装填量装入小于10ml的药瓶内。装瓶后，将药瓶装入干燥室，并直接放在预冷至4℃的冷冻架上。将热电偶安置在若干药瓶内，以便监测冷冻干燥过程中制剂的温度。先使药瓶温度与架子温度(4℃)平衡，然后，对于蔗糖的制剂使架子温度降至-40℃，对于甘露糖醇的制剂，使之降至-30℃。分别对于蔗糖和甘露糖醇的制剂，一旦达到了-40℃和-30℃，使药瓶在此温度维持大约2小时，以便使制剂完全冷冻(对于甘露糖醇的制剂，在此阶段包括一个退火步骤)。经过这段时间之后，再使冷凝器螺旋管冷却至-60℃，并开动真空泵，对冷凝器室抽真空，随之进行初期干燥和第二期干燥过程。在初期干燥过程中，将冷凝器与干燥室之间的主阀打开，对干燥室抽真空，排出氮气，使之达到大约100微米汞柱的压力。冷冻干燥周期的这部分时间(初级干燥期)需要大约40-50小时。当冷冻混合物中的冰全部消失了，初期干燥过程即告完成。在第二期干燥过程中，为了除去在初期干燥过程中未除去的所有残留水分，使温度从-20℃或-30℃上升至+25℃。这段第二期干燥时间需要大约15小时。

完成第二期干燥过程之后，将主阀关闭，并对干燥室充入氮气，这样使干燥室内保持有轻微的真空度。然后启动加塞机，将塞子压下进入药瓶口。使干燥室与大气压平衡后，打开干燥室门，取出药瓶，并进行卷边密封。然后将药瓶贮存在规定的温度下，直到以水再溶解用于注射。

稳定性研究

在30℃，40℃和50℃贮存至4周后，对干燥产品的稳定性进行评价。对此样品实施试样研究和色谱杂质研究。对于甘露糖醇的制剂结果表明，在直至50℃的温度下存放该产品4周后，药物试样没有显著改变。总色谱杂质从起始的0.35％w/w，在30℃增加至0.54％w/w，在40℃增加至0.49％w/w，在50℃增加至0.56％w/w。该产品的水分含量为2.4％w/w，凝结外观也令人满意，即就是说未见有产品崩坍现象。但是，5个药瓶中的二个未能重新水合成澄清的黄色溶液。能够重溶解形成澄清溶液的药瓶，比不能形成澄清溶液(pH5.6)的药瓶具有较低的pH(5.0)。认为这种pH偏移是由于冷冻干燥过程中乙酸的蒸发。

对蔗糖制剂(含5％残留水分)的稳定性研究表明，在30℃和40℃存放4周后，试样或总色谱杂质都没有改变。在50℃存放的药品显示出试样含量减少，总色谱杂质含量增加。在各个温度下存放2周后，可见冷冻干燥的凝块有些崩坍。

WIN 33377/甘露糖醇制剂的稳定性显示在表12中，WIN 33377/蔗糖制剂的稳定性显示在表13中。

表12

开始时 2周后 4周后

温度药物杂质药物杂质药物杂质

％W/W ％W/W ％W/W ％W/W ％W/W ％W/W

室温 101.6 0.35 - - - -

30℃ - - 100.3 0.43 98.0 0.54

40℃ - - 102.5 0.54 100.9 0.49

50℃ - - 101.0 0.65 98.1 0.56

表13

开始时 2周后 4周后

温度药物杂质药物杂质药物杂质

％W/W ％W/W ％W/W ％W/W ％W/W ％W/W

室温 98.4 0.35 - - - -

30℃ - - 98.4 0.32 96.8 0.33

40℃ - - 98.2 0.31 98.1 0.34

50℃ - - 96.8 0.51 95.2 0.87

此研究发现了一种适当的冷冻干燥制剂(乳酸盐-蔗糖的制剂)，但是，对此还可以进一步最优化，并且可包括另一些最终使用要求。已发现在起始溶液中药物浓度可增加到20mg/ml，这样装填量可以减半，使初级干燥时间减少。通过加入氯化钠平衡等渗性也是重要的。因为这种盐会影响玻璃态转化温度(Tg′)，通过DSC对修改的制剂(见表14)进行了测定。其玻璃态转化温度测定结果在表15中被给出。

表14-用于测定NaCl和蔗糖对缓冲的WIN 33377溶液相对影响的待测制剂

制剂 A B C D

WIN 33377 20.0mg 20.0mg 20.0mg 20.0mg

乳酸(0.1M) 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml

NaOH(0.5M) 12μl 12μl 12μl 12μl

蔗糖 100mg 50mg 40mg 30mg

NaCl 2.7mg 2.7mg 3.8mg 5.0mg

加注射用水至 1ml 1ml 1ml 1ml

pH 3.99 3.99 3.99 3.99

表15-对表14中所列制剂测定的玻璃态转化温度值

制剂 Tg′(℃)

未加NaCl的对照制剂A -35

A -37

B -38

C -42.5

D -45.5

可见，加入NaCl使此冷冻浓缩物的玻璃态温度降低了。NaCl具有比蔗糖低很多的玻璃态转化温度(-87℃对-32℃)。因此，当NaCl的重量比率增加(从A到D)，玻璃态转化温度则朝向纯NaCl的数值下降。向标准的5％蔗糖制剂加入NaCl，导致玻璃态转化温度降低2℃。降低蔗糖浓度，以及为了保持等渗性所必须的NaCl浓度补偿性增加，将导致玻璃态转化温度进一步下降。可以认为，干燥产品的玻璃态转化温度是该产品应该面对的最高温度。超过玻璃态温度，将导致填料最终崩坍，使产品变成液体态，在这种情况下，扩散速度将迅速增加，导致活性物质降解。玻璃态转化温度取决于水分含量，因此，在某一批次中水分含量的任何改变，都将引起玻璃态转化温度改变。这样，考虑到在某一批次内安全贮存的最高温度有所差异，为谨慎起见，此产品应贮存在低于所测定玻璃态温度至少5℃之下。在20ml的药瓶中，含量WIN 33377溶液(100mg)和蔗糖的制剂：

赋形剂加入量(mg/瓶)

WIN 33377 100.0

蔗糖 250.0

氯化钠 5.0

0.5M乳酸溶液 1.0ml

1.0M氢氧化钠 57.0μl

注射用水 5.0ml

pH(范围3.70-4.30) 4.00

在30℃和40℃贮存直至6个月的过程中，对此优选的蔗糖制剂进行了稳定评价。试样分析结果和pH被列举在表16中。该产品具有1.3％w/w的起始水分含量。在40℃贮存2周之后观察到产品有崩坍。这是被预料到的，因为这种贮存温接近于此批产品的玻璃态转化温度(42℃)。稳定性结果表明，该产品是化学稳定的，也就是说，在30℃或40℃贮存6个月之后，试样含量和pH都未见任何改变。

表16

WIN 33377(％w/v)

时间温度(℃) 双份分析 pH

开始时室温 90.85， 90.95 3.95

3周后 30℃ 89.13， 89.28 3.96

40℃ 90.14， 89.79 3.94

2周后 30℃ 90.81， 92.36 3.95

40℃ 88.59， 89.49 3.95

4周后 30℃ 93.88， 91.93 3.99

40℃ 95.52， 95.2 400

表16(续)

WIN 33377(％w/v)

时间温度(℃) 双份分析 pH

6月后 30℃ 90.08， 87.68 4.02

40℃ 88.40， 86.75 4.05

由本发明提供的高稳定性，使该产品能贮存在室温下，并延长了它的贮存寿命。这种冷冻干燥产品既适合封装在传统的玻璃药瓶内，也适合封装在预先装填的注射器内。这种制剂对治疗肿瘤大有用处，是迄今未曾有过的。

Claims

1.一种用于治疗哺乳动物肿瘤的再配制冷冻干燥制剂，含有：

a)1-50mg/ml具有如下结构式(I)结构的抗肿瘤剂：

其中n是2或3，

R¹和R²独立地是C₁-C₄烷基；

Q是一个选自如下的残基：CH₂NHR³，CH₂N(R⁴)SO₂R⁷，

CH₂NHCHO，CH＝N-Ar，C(O)NR⁵R⁶，CH₂N(R⁴)C(O)R⁷，

CH₂N(C₂H₅)CHO，CH₂N(R⁴)P(O)(O-C₁-C₄烷基)₂，

CH₂N＝CH-N(R⁹)(R¹⁰)，CH₂N(R⁴)C(O)CF₃，和CH₂N(R⁴)C(O)OR⁷，

R³是氢或C₁-C₄烷基，

R⁴是氢，C₁-C₄烷基或Ar，

R⁵是氢，C₁-C₄烷基或Ar，

R⁶是氢或C₁-C₄烷基，

R⁷是C₁-C₄烷基，或Ar，

R⁸是氢，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，或羟基，Ar是苯基，或者是被甲基，甲氧基，羟基，卤素或硝基取代的苯基，前提条件是当n是2，R¹和R²是乙基，R⁸是氢，以及Q是CH₂NHSO₂Ar时，此Ar不能被甲基或卤素在第4位单基取代，

R⁹和R¹⁰独立地是C₁-C₄烷基，

或其可药用的酸加成盐或溶剂化物；

b)10-125mg/ml选自甘露糖醇和蔗糖的稳定剂，以及

c)0.025-0.25M的乳酸盐缓冲剂，该制剂具有3.0-4.5的pH。

2.权利要求1的再配制冷冻干燥制剂，其还含有1.0-10.0mg/ml氯化钠。

3.权利要求1的再配制冷冻干燥制剂，其中所说的乳酸盐缓冲剂是乳酸钠。

4.一种用于治疗哺乳动物肿瘤的再配制冷冻干燥制剂，含有：

a)1-20mg/ml具有如下结构式(II)结构的抗肿瘤剂：

其中n是2或3，

R¹和R²独立地是C₁-C₄烷基，

Q是一个选自如下的残基：CH₂NHR³，CH₂NHCHO，

CH＝N-Ar，C(O)NR⁵R⁶，CH₂N(R⁴)C(O)R⁷，

CH₂N(C₂H₅)CHO，CH₂N(R⁴)P(O)(O-C₁-C₄烷基)₂，

R³是氢或C₁-C₄烷基，

R⁴是氢，C₁-C₄烷基或Ar，

R⁵是氢，C₁-C₄烷基或Ar，

R⁶是氢或C₁-C₄烷基，

R⁷是C₁-C₄烷基，或Ar，

R⁸是氢，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，或羟基，

R⁹和R¹⁰独立地是C₁-C₄烷基，

或其可药用的酸加成盐或溶剂化物。

b)30-100mg/ml选自甘露糖醇和蔗糖的稳定剂，

c)0.025-0.25M的乳酸盐缓冲剂，该制剂具有3.5-4.5的pH。

5.权利要求4的再配制冷冻干燥制剂，其还含有1.0-10.0ml/ml氯化钠。

6.权利要求4的再配制冷冻干燥制剂，其中所说的乳酸盐缓冲剂是乳酸钠。

7.一种用于治疗哺乳动物肿瘤的再配制冷冻干燥制剂，含有：

b)0.025-0.25M的乳酸钠缓冲剂，

c)10-125mg蔗糖，

d)1.0-10mg氯化钠，

e)加水至1.0ml。

8.权利要求1的再配制冷冻干燥制剂在制备治疗哺乳动物的敏感性肿瘤的药物中的用途。

9.权利要求4的再配制冷冻干燥制剂在制备治疗哺乳动物的敏感性肿瘤的药物中的用途。

10.权利要求7的再配制冷冻干燥制剂在制备治疗哺乳动物的敏感性肿瘤的药物中的用途。

11.权利要求1-6任一项的再配制冷冻干燥制剂，其中抗肿瘤剂是N-[[1-[[2-(二乙氨基)乙基]氨基]-7-甲氧基-9-氧代噻吨-4-基]甲基]甲酰胺。

12.权利要求11的再配制冷冻干燥制剂在制备治疗哺乳动物的敏感性肿瘤时药物中的用途。