CN117844656B - 一种元蘑菌株、杂交育种方法、栽培方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种元蘑菌株、杂交育种方法、栽培方法及应用，涉及生物技术领域，为解决现有技术中元蘑品种较少、产量低且生物转化率低，且杂交育种方法中的孢子收集过程得到的孢子弹射量小，孢子质量不高的问题。本发明提供一种元蘑（Hohenbuehelia serotine）哈元1号，保藏编号为CGMCC No.40961。采用野生元蘑进行杂交育种获得，孢子采集过程中的环境温度为15℃、湿度为90%以及100Lux的光照12h/d，可促进孢子弹射，提升孢子质量，有效的缩短杂交菌种的菌丝萌发时间和生长时间，并且提高了杂交的成功率。得到的元蘑子实体呈亮黄色，单朵重较高、产量高、生长周期短、出菇整齐，且正常出菇的温度范围为8‑18℃，出菇率达98%，生物转化率达83%，远高于现有品种。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种元蘑菌株、杂交育种方法、栽培方法及应用
背景技术
元蘑[Hohenbuehelia serotine (Pers. : Fr.) Sing. ]，隶属于担子菌门（Basidiomycota）、层菌纲（Hymenomycetes）、伞菌目（Agaricales）、侧耳科（Pleurotaceae）、亚侧耳属，又名冬蘑、黄蘑（吉林）。元蘑是蘑菇中仅次于猴头蘑的上品蘑，营养成份是一般蔬菜的十几倍。元蘑滋味鲜美，有较高的食用价值。其味道与海鲜相似，堪称“素中有荤”的山珍。元蘑营养丰富，对于增强人体免疫、抑抗肿瘤、预防多种疾病等均有较好的作用。
目前适合人工栽培生产的元蘑品种较少，且大多存在产量低、出菇温度范围窄等现象；现有的元蘑菌株中，绝大多数都是野生驯化获得，同时存在出菇时间长以及出菇整齐度较低等问题。现有的元蘑杂交育种方法中，孢子收集过程中孢子弹射量小、孢子萌发时间长，难以得到高质量的孢子，得到的元蘑往往产量低，生物转化率低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：
现有技术中元蘑品种较少、产量低且生物转化率低，且杂交育种方法中的孢子收集过程得到的孢子弹射量小，孢子质量不高。
本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案：
本发明提供了一种元蘑菌株，所述菌株为元蘑（Hohenbuehelia serotine）哈元1号，其保藏编号为CGMCC No.40961，保藏于中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年10月26日。
进一步地，该菌株的获得方法包括如下步骤：
（1）选种：将采集的两株野生元蘑进行驯化栽培，选出生长健壮、成熟度适宜的元蘑子实体作为种菇；
（2）孢子采集：用无菌水清洗种菇菇体表面，晾干，切去多余菌柄，仅留下1.5-2.0cm菌柄；采用75％的酒精棉球对两个种菇进行表面消毒，用无菌水清洗3次，无菌纱布吸干表面水分，用镊子夹住种菇菌柄，使菌褶向下插于孢子采集器的金属支架上，盖上玻璃罩；然后将孢子采集器置于培养箱中，培养温度为15℃、湿度为90%以及100Lux的光照12h/d，以促进孢子弹射，提升孢子质量，1-2d后孢子弹射完成，收集孢子备用；
（3）单孢分离与鉴定：将取得的孢子接入装有灭菌水的一级试管中并摇匀，得到孢子悬浮液，逐级稀释孢子悬浮液，至镜检视野中只有零星单个孢子存在，得到稀释的孢子悬浮液；在无菌状态下将所获得的稀释的孢子悬浮液接种到孢子培养基上，22℃下恒温培养，待菌丝萌发后，对菌丝进行镜检鉴定，若没有锁状联合，即获得了单核菌丝；
（4）杂交与鉴定：将获得的两个不同品系的单核菌丝接种到同一杂交培养基上进行培养，当菌丝交汇后，取交汇后的菌丝进行镜检鉴定，若存在锁状联合，说明杂交成功，选取交汇处菌丝进行扩繁，筛选，得到杂交菌株。
进一步地，所述孢子培养基和杂交培养基按质量份数均包括：蛋白胨2份、酵母膏2份、MgSO4·7H2O 0.5份、KH2PO40.46份、K2HPO41.0份、葡萄糖20份以及10%元蘑浸煮液1000份。
进一步地，该菌株的获得方法还包括通过拮抗分析及菌丝质量对比对所述杂交菌株进行筛选，并基于筛选后的杂交菌株开展栽培试验，根据菌株子实体的生物转化率、产量和出菇率，筛选得到较优的杂交菌株。
一种元蘑子实体，为栽培上述技术方案任一项中所述的元蘑（Hohenbueheliaserotine）哈元1号得到的子实体。
一种如上述技术方案所述元蘑子实体在食品加工中的应用。
一种如上述技术方案所述的元蘑子实体的栽培方法，具体为：
菌丝培养：元蘑哈元1号菌块捣碎后散落接种于母种培养基中，培养至菌丝长满斜面；在无菌条件下将母种菌丝接种至原种培养基，在无菌室内进行避光扩大培养，至菌丝长满袋；在无菌条件下，将原种菌丝接种于栽培种培养基，接种后移入温室进行养菌，至菌丝长满袋；
出菇期管理：菌丝后熟期满后进行出菇，在出菇期间控制温度为8-18℃，每天给予200-500Lux的散射光照射，并向地面喷水，每天向空中喷水雾3-4次，以保证空气相对湿度达到85 95%，每天给予3h的蓝光照射，蓝光光照强度为100Lux，以促进原基形成和子实体分化，保证通风良好，二氧化碳浓度不高于0.3%；
子实体采收：当元蘑子实体边缘微微上翘时采收子实体，采完第一潮菇后将料袋稍加整理，并适当养菌以培养第二潮菇，当元蘑子实体边缘微微上翘时采收第二潮菇子实体。
进一步地，所述菌丝培养具体为：
取元蘑哈元1号菌块捣碎后散落接种于母种培养基中，21-24℃温度下避光培养至菌丝长满斜面；在无菌条件下将母种菌丝接种至原种培养基，进行避光扩大培养，期间温度控制在20-25℃，湿度控制在65%，并注意加强通风，至菌丝长满袋；在无菌条件下，将原种菌丝接种于栽培种培养基，接种量为15-20%，接种后移入温室进行养菌，养菌期间环境条件为：温度20-25℃、空气相对湿度65%并保证通风良好，至菌丝长满袋。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
1、本发明对元蘑杂交方法中孢子收集时的环境条件进行了优化，可促进孢子弹射，提升孢子质量，有效的缩短杂交菌种的菌丝萌发时间和生长时间，并且提高了杂交的成功率。
2、本发明得到的元蘑子实体颜色为亮黄色，相较于现有元蘑品种的黄绿色颜色更特别，且单朵重较高、产量高、生长周期短、出菇整齐；本发明元蘑出菇温度更广，正常出菇的温度范围为8-18℃，且出菇率达98%，生物转化率达83%，远高于现有品种。
3、本发明对元蘑子实体的栽培过程，在母种接种阶段，取元蘑哈元1号菌块捣碎后散落接种于母种培养基中，以缩短母种培养基生长时间1-3天；在出菇阶段采用低温高湿度的栽培环境，并采用蓝光照射进行促生菇，可缩短原基分化时间，并提高出菇整齐度。
4、本发明元蘑子实体含有丰富的蛋白质、糖类、钙、铁、磷等营养成分以及多种微量元素；元蘑入药，具有舒筋活络和强筋壮骨的功效，能够治疗腰腿疼痛、手足麻木及筋络不舒等症，具有较高的食用价值和药用价值。
附图说明
图1为本发明实施例中的锁状联合图；
图2为本发明实施例中母种培养基不同接种方式菌丝生长速度对比图；其中，左图为菌块捣碎后散落接种，右图为取0.5cm2大小菌块接种；
图3为本发明实施例中的元蘑菌株哈元1号子实体图；
图4为本发明实施例中的元蘑菌株哈元1号温室栽培图。
元蘑（Hohenbuehelia serotine）哈元1号，其保藏编号为CGMCC No.40961，保藏于中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年10月26日。
具体实施方式
在本发明的描述中，应当说明的是，在本发明的实施例中所提到的术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，并不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”、“第三”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者多个该特征。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施例做详细的说明。
实施例1：
1.菌株分离和诱变纯化
本发明所采用的两株野生元蘑菌株分别于2018年9月24日采集自黑龙江省牡丹江市宁安市火山口旅游公路火山口国家森林公园（H001）以及于2018年9月26日采集自黑龙江省绥化市庆安县大青山林场（H002），分离得到两株野生元蘑菌株品种H001和H002，两野生菌株均可在当地采集或者从公开的商业途径购买获得，通过对两株野生元蘑进一步进行杂交获得杂交元蘑菌株哈元1号，具体方法如下：
1.1.野生菌株的驯化栽培
母种培养基配方：马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、琼脂20g和水1000ml；培养基PH值为5-6。
取马铃薯，洗净去皮切片，加入1000ml水烧煮，用纱布过滤，取滤液，然后加入琼脂煮至融化，再加入葡萄糖融化，趁热分装试管灭菌，试管装入量为试管高度的五分之一至四分之一左右，试管用棉塞封口，高压灭菌121℃、20min，灭菌后放置斜面备用。
原种和栽培种培养基配方：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%；培养基PH值为5-6。
先将蔗糖、过磷酸钙、石膏和碳酸钙溶于水中，再把阔叶木屑和麦麸混合。以上原料混合，搅拌均匀，使培养基含水量达到60%-65%，堆闷片刻，装入17x35cm大小的菌袋灭菌，每袋装入菌料1.5kg，常压灭菌12h，备用。
将野生元蘑子实体于无菌室内用无菌水冲洗，吸干表面水分，再用0.1%升汞浸泡5min，再用无菌水冲洗多次，进行表面消毒。消毒后，在酒精灯火焰上方，迅速用接种针挑取野生元蘑子实体中部约0.5cm2的子实体组织块，接种于试管斜面母种培养基上进行培养。
将两株野生元蘑的试管母种分别接种于原种培养基中，在无菌室内避光培养，温度控制在20-25℃，湿度控制在65%，并注意加强通风。
将发满菌的元蘑原种分别接种于栽培种培养基中，并将接种后的两种栽培种移入温室进行培养管理，培养条件为温度10-20℃，空气相对湿度85-95%，散射光光照为200-500Lux，并保证通风良好，二氧化碳浓度不高于0.3%；当元蘑子实体边缘微微上翘时采收子实体，选择两个菌株的第一潮菇中生长健壮、成熟度适宜的优良个体作为种菇。
1.2.野生菌株孢子收集
用无菌水清洗种菇菇体表面，晾干，切去多余菌柄，仅留下1.5-2.0cm菌柄。
准备玻璃罩（顶部有孔）、搪瓷盘、培养皿、金属支架（插种菇用）和纱布等用于组成孢子采集器，在搪瓷盘内垫几层纱布，上面放置一个直径为70-90mm的培养皿，其内放入金属支架，培养皿外加盖玻璃罩，玻璃罩顶部孔口用棉塞塞好。将组装好的孢子采集器用双层纱布包起来，经高压灭菌后备用。
用75％的酒精棉球对种菇进行表面消毒，再用无菌水冲洗3次，无菌纱布吸干表面水分。用镊子夹住种菇菌柄，使菌褶向下插于孢子采集器的金属支架上，盖上玻璃罩。为了满足种菇开伞弹射孢子时的湿度要求，同时防止杂菌侵入，在搪瓷盘中的纱布上倒少量无菌水，然后将孢子采集器置于培养箱中，培养温度为15℃、湿度为90%以及100Lux的光照12h/d，以促进孢子弹射，提升孢子质量，经1-2d，即可在培养皿中看到落下的孢子印。在无菌条件下，将种菇连同金属支架一起拿掉，盖好培养皿，用透明胶带封上或用纸包扎好备用。
1.3.野生菌株杂交
准备10支装有灭菌水的试管，将取得的孢子接入第1级试管，摇匀，得到孢子悬浮液，然后用灭菌后的吸管吸取1滴，滴入第2支试管，逐级稀释孢子悬浮液，直到第10级后镜检，视野里只有零星单个孢子存在，得到稀释的孢子悬浮液。在无菌状态下将所获得的稀释的孢子悬浮液接种到孢子培养基平皿上，在22℃下恒温培养，待菌丝萌发后，对菌丝进行镜检鉴定，若没有锁状联合，即获得了两个品系的单核菌丝。
将获得的两个不同品系的单核菌丝接入同一杂交培养基平皿上进行培养，当菌丝交汇后，取交汇后的菌丝镜检鉴定，若存在锁状联合，说明杂交成功（见图1）；选取交汇处菌丝进行扩繁。经筛选，共得到8株杂交成功的菌株，分别命名为H003-H010。
其中，所述孢子培养基和杂交培养基包括：蛋白胨2g、酵母膏2g、MgSO4·7H2O0.5g、KH2PO40.46g、K2HPO41.0g、葡萄糖20g和10%元蘑浸煮液1000ml。
元蘑浸煮液制备方法为：取元蘑子实体100克，切成小块放入锅中，加1000毫升水，加热至沸腾，用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃去，滤液补水至1000毫升。
本发明采用10%元蘑浸煮液制备孢子培养基和杂交培养基，使培养基更适用于元蘑的营养需求，达到更好的培养效果。
1.4.拮抗试验
以杂交所得的H003-H010菌株及菌株H001和菌株H002作为试验材料开展拮抗试验，试验方法参照NY/T 1845食用菌菌株区别性鉴定拮抗反应。
拮抗试验平板培养基配方为:马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g和水1000ml。
将杂交所得菌株H003-H010及野生元蘑菌株H001-H002，分别两两对峙接种于拮抗试验平板培养基上，于25℃恒温培养，若菌株H003-H010中存在两菌株不拮抗，则将其中一菌株淘汰，结果菌株H001-H010之间均对抗，同时也证明了杂交成功。
2.菌株筛选比较试验
将本发明杂交方法所得的8株菌株进行筛选比较试验，具体试验方法如下：
2.1.菌丝生长速度试验
在菌株H003-H010的试管母种斜面上取0.5cm2的菌块，接种于斜面试管培养基，其中培养基配方采用PDA培养基，25℃恒温培养，待菌丝长满试管，观察统计菌丝萌发时间、菌丝长满斜面时间以及比较菌丝浓密度，结果如表1所示。
表1
其中，“+”表示菌丝生长非常稀疏；“++”表示菌丝生长较为稀疏；“+++”表示菌丝生长较为浓密；“++++”表示菌丝生长浓密。
通过菌丝生长试验可得，菌株H003、H005和H009菌丝萌发时间和长满斜面时间均较短，并且菌丝较为浓密，因此，选取这3株菌株进行栽培试验。
2.2.栽培试验
将筛选取菌株H003、H005和H009进行栽培试验。具体方法如下：
将菌株H003、H005和H009的试管母种分别接种于按质量百分比计包括：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%的原种培养基内（含水量60wt%），在无菌室内避光培养，温度控制在20-25℃，湿度控制在65%，并注意加强通风，培养至发满菌；
将原种分别接种于按质量百分比计包括：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%的栽培种培养基（含水量60wt%），并将接种后的栽培种分别移入温室进行培养管理，培养条件为温度20-25℃，空气相对湿度70-85%，并保证通风良好。
在出菇阶段环境条件为：温度8-18℃、空气相对湿度85-95%以及散射光光照为200-500Lux，每天给予3h的蓝光照射，蓝光光照强度为100Lux，以进行促生菇，并保证通风良好，二氧化碳浓度不高于0.3%。当元蘑子实体边缘微微上翘时采收子实体。采完第一潮菇后将料袋稍加整理，并适当养菌，经过10-15天后开始长第二潮菇。在子实体生长期间，记录不同菌株产量、出菇率及计算生物转化率，结果如表2所示。其中，生物转化率为每袋菌包产出的元蘑总重量/菌袋栽培料干重(600g)。
表2
可以看到，H003菌株生物转化率最高，可达83%，单袋产量达500g，出菇率为98%，相交于其他两个菌株的栽培效果更好，因此，将H003菌株作为较优的杂交菌株。
3.鉴定
3.1.形态学鉴定
本发明H003菌株的菌丝体洁白浓密，整体呈绒毛状，长0.1-0.5cm。子实体覆瓦状叠生，扇形，子实体表面较黏，有胶质膜，新鲜时颜色亮黄色，干燥后变成灰黄色，单个子实体宽12-15cm；子实体边缘平滑，初内卷，后反卷；菌肉厚，白色，柔软；菌褶延生，较薄（见图3）。与《中国东北野生食药用真菌图志》（戴玉成等.科学出版社.2007年）中有关元蘑菌株的分类特征和《中国大型真菌》（卯晓岚主编.河南科学技术出版社.2000年）中元蘑的照片一致。
3.2.分子生物学鉴定
对H003菌株进行ITS测序，通过扩增、DNA测序得到ITS序列：
TGCGGAAGGATCATTATTGAATTTCAAGAGAGATGGTTGTCGCTGGCTTT
CAGGAGCATGTGCACGCCTCTCTTCTTAGTTCTCACATTCACCTGTGCAC
CTCTTGTAGACCCGAGACAAACTCTTGTCGAGGAAACTCGGATGTGAAGG
TTGCGGGCCTCTTCGGACGGTCGGCTTCCCTCTAATCGTTTGACTCGCGC
GTCTACGTTTTTACAAACCCTTTTTAAAAATGTCAACAGAATGTCATCAA
CGGTTCGCCCTAAAAAAGCGAGCTTTAAATTATACAACTTTCAACAACGG
ATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAA
TGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCG
CTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATTAAATTCTCA
ACCTTCTCCGTCTTTGCTGACGGGGTCGTGCTTGGACGTGGGGGTTTGCG
GGCTTCCTCAGAAGTCGGCTCCCCTTAAATGCATTAGCGGAACCTTTGTG
GACCGTCTATTGGTGTGATAATTATCTACGCCATCGACGCGGACGCTGTT
ATATGGGGTTCAGCTTCTAACCATCCCGCAAGGGATAACAACTTAATTGA
CATTTTGACCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATA
经分子生物学鉴定H003菌株隶属于担子菌门、层菌纲、伞菌目、侧耳科、亚侧耳属。综合形态学鉴定，属于元蘑Hohenbuehelia serotine。
4.保藏
2023年10月26日，将该杂交得到的元蘑菌株保藏于中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为元蘑，菌株名称为哈元1号，拉丁名为Hohenbuehelia serotine，保藏编号为CGMCC No.40961。
实施例2：
1.母种制备
1.1.培养基制作
培养基配方：马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、琼脂20g和水1000ml；培养基PH值为5-6。
称取200g去皮马铃薯，切成薄片，洗净，加入1000ml水烧煮，水开后煮20min，然后用纱布过滤，取滤液，如滤液不足1000ml需添加补足1000ml，然后加入葡萄糖20g、蛋白胨5g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g和琼脂20g融化，趁热分装试管灭菌，试管装入量为试管高度的五分之一至四分之一左右，试管用棉塞封口，高压灭菌121℃、20min，灭菌后放置斜面备用。
1.2.接种与培养
如图2所示，取元蘑哈元1号菌块捣碎后散落接种于母种培养基中，21-24℃温度下避光培养，9-10d长满试管，菌丝浓密茁壮。取0.5cm2的哈元1号菌块转接于母种培养基中，10-12d长满试管；相较于传统接种方式，散落接种菌丝满管时间提前1-3d。
2.原种的制备
2.1.培养基制作
原种培养基包括：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%；培养基PH值为5-6（含水量60wt%）。
选用新鲜、无霉变的培养料，先将蔗糖、过磷酸钙、石膏和碳酸钙溶于水中，再把阔叶木屑、麦麸混合。以上原料混合，搅拌均匀，使培养基含水量达到60 wt%，堆闷片刻，即可装入17x35cm大小的菌袋灭菌，每袋装入菌料1.5kg，常压灭菌12h。
2.2.接种与培养
温度下降到25℃，在无菌条件下接入哈元1号试管母种，在无菌室内避光培养，温度控制在20-25℃，湿度控制在65%，并注意加强通风。
3.栽培种的制备
3.1.培养基制作
栽培种培养基的培养料包括：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%；培养基PH值为5-6（含水量60wt%）。
选用新鲜、无霉变的培养料，先将蔗糖、过磷酸钙、石膏和碳酸钙溶于水中，再把阔叶木屑、麦麸混合。以上原料混合，搅拌均匀，使培养基含水量达到60 wt%，堆闷片刻，即可装入17x35cm大小的菌袋灭菌，每袋装入菌料1.5kg，常压灭菌12h。
3.2.接种与培养
栽培袋温度下降到25℃，在无菌条件下接种，接种量为15-20%。接种后移入温室进行养菌期管理，培养条件为温度20-25℃，空气相对湿度65%，并保证通风良好。
4.出菇期管理
菌种培养完成后，将进行出菇期管理。出菇期间，每天给予200-500Lux的散射光照射，在正常光照时间段内，每天给予3h的蓝光照射，光照强度为100Lux，以促进原基形成和子实体分化；出菇期间温度控制在8-18℃，并保证通风良好，二氧化碳浓度不高于0.3%，可以很好的促进哈元1号原基形成。由于元蘑属于低温型菌类，出菇时间为早春和晚秋，由于出菇阶段环境湿度较小，因此除每天向地面喷水外，还向空中喷水雾3-4次，以保证空气相对湿度达到85 95%。
5.子实体采收
当元蘑子实体边缘微微上翘时采收子实体，采完第一潮菇后将料袋稍加整理，并适当养菌，经过10-15天后开始长第二潮菇，当元蘑子实体边缘微微上翘时采收第二潮菇子实体。如图3和图4所示，得到的子实体颜色亮黄，出菇整齐，长势良好。
实施例3：
1.孢子收集环境条件优化
收集孢子过程中，以温度、空气相对湿度和光照条件为影响因素，研究确定最适宜的产孢环境；其中，温度条件分别选取10℃、15℃和20℃，空气相对湿度条件分别选取85%、90%和95%，光照条件分别选取50Lux、100Lux和150Lux。
按照上述环境条件梯度，设计如表3所示的复合实验，并收集各复合实验得到的孢子，在无菌状态下，用无菌水稀释孢子制成孢子悬浮液，取孢子悬浮液1-2滴，在显微镜下观察孢子数量和孢子活力，对不同环境条件下收集到的孢子数量进行数量等级划分，结果如表3所示。
表3
其中，“+”表示孢子数量较少，活性弱；“++”表示孢子数量一般,活性较好；“+++”表示孢子数量较多,或活性好；“++++”表示孢子数量多、活性强。
可以看到，元蘑子实体孢子收集过程中，在温度15℃、空气相对湿度90%并提供100Lux散射光的环境条件下，收集到的孢子数量更多，孢子活力更强，有利于后续的杂交试验。
2.出菇阶段环境条件优化
在出菇期间，将光照条件分为三组处理，其余环境条件均为：温度控制在8-18℃，湿度控制在85-90%，并保证通风良好。光照为散射光光照并不添加任何其他光源照射为处理组A；在组A的散射光光照时间段内，每天给予3h的蓝光照射、光照强度为100Lux为处理组B；在组A的散射光光照时间段内，每天给予3h的红光照射、光照强度为100Lux为处理组C。观察统计各处理哈元1号原基分化时间和出菇整齐度，结果如表4所示。
表4
其中，“+”表示出菇不整齐，“++”表示出菇较整齐，“+++”表示非常整齐。
可以看到，哈元1号原基分化阶段，在散射光光照时间段内每天给予3h的蓝光照射，可以很好的缩短原基分化时间和提高出菇整齐度。
实施例4：
将本发明元蘑菌株哈元1号、元蘑市场种“厚片元蘑”、“常满冻蘑”和“安慧元蘑”(东北地区广泛使用的市场种)作为试验材料开展试验。其中“厚片元蘑”引自东北食药用菌研究所、“常满冻蘑”引自常满食用菌研究所，“安慧元蘑”引自安慧真菌研究所。
1.菌丝生长速度试验
于本发明元蘑菌株哈元1号、元蘑市场种“厚片元蘑”、“常满冻蘑”和“安慧元蘑”的试管母种斜面上取0.5cm2的菌块，接种于PDA平板培养基(d=9cm)，于25℃恒温培养，待菌丝长满平板，用直径为0.7cm的打孔器取菌龄一致、大小相等且无污染的菌块转接于平板培养基(d=9cm)中央，于25℃恒温培养，菌丝萌发后采用十字画线法每隔24h刻度至菌丝长满平板，计算菌丝生长速度并观察菌丝长势，结果如表5所示。
表5
可以看到，本发明的哈元1号菌丝生长速度更快。
2.栽培试验
将本发明元蘑菌株哈元1号、元蘑市场种“厚片元蘑”、“常满冻蘑”和“安慧元蘑”的试管母种分别接种于按质量百分比计包括：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%的原种培养基内（含水量60wt%），在无菌室内避光培养，温度控制在21-24℃，湿度控制在65%，并注意加强通风。
将发满菌的原种分别接种于按质量百分比计包括：阔叶木屑76%、麦麸20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、石膏1%和碳酸钙1%的栽培种培养基内（含水量60wt%），并将接种后的栽培种分别移入温室进行培养管理，培养条件为：温度20-25℃，空气相对湿度70-85%，并保证通风良好。
在出菇阶段温度为13-18℃、空气相对湿度为85-95%及散射光光照为200-500Lux，并保证通风良好，二氧化碳浓度不高于0.3%。当元蘑子实体边缘微微上翘时采收子实体。采完第一潮菇后将料袋稍加整理，并适当养菌，培养并采集第二潮菇。在子实体生长期间，观察统计各品种元蘑子实体颜色、形状等外观，并记录不同品种产量、生物转化率及出菇率，结果如表6所示。
表6
结果表明，本发明哈元1号与“厚片元蘑”、“常满冻蘑”和“安慧元蘑”相比，生物转化率达83%，远高于“厚片元蘑”的生物转化率25%、“常满冻蘑”的生物转化率37%以及“安慧元蘑”的生物转化率33%，在出菇率方面，哈元1号出菇率最高，可达98%，且各市场种元蘑只产一潮菇或者第二潮菇量很少，而哈元1号的可产两潮菇且第二潮菇量较多。
3.温度广度试验
将本发明元蘑菌株哈元1号、元蘑市场种“厚片元蘑”、“常满冻蘑”和“安慧元蘑”的试管母种分别接种于按质量百分比计包括：棉籽壳78%、稻糠20%、蔗糖1%和石膏粉1%的原种培养基内（含水量60wt%），在无菌室内避光培养，温度控制在21-25℃，湿度控制在65%。
将发满菌的四种元蘑原种分别接种于按质量百分比计包括：柞木屑76%、麦麸皮20%、豆粉1%、蔗糖1%、石膏粉1%和石灰粉1%的栽培种培养基内（含水量60wt%）。
将接种后的四种栽培种分别放置于如表7所示的不同温度梯度环境中进行培养，其它栽培条件均相同，具体为：空气相对湿度为95%、光照为200-500 Lux，空气中二氧化碳浓度不超过0.3%；在出菇阶段对不同元蘑品种各个温度处理环境的出菇量进行统计，结果表7所示。
表7
结果可以看到，本发明哈元1号在6-20℃环境中均出菇，且在8-18℃环境中出菇量正常，只在5℃和20℃以上几乎不出菇；而“厚片元蘑”、“常满冻蘑”和“安慧元蘑”均仅在14-17℃环境中出菇量正常，通过温度广度试验表明本发明的哈元1号元蘑的出菇温度范围更广，相较于现有品种具有显著的优势。
虽然本发明公开披露如上，但本发明公开的保护范围并非仅限于此。本发明领域技术人员在不脱离本发明公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种元蘑菌株，其特征在于，所述菌株为元蘑(Hohenbuehelia serotine)哈元1号，其保藏编号为CGMCC No.40961，保藏于中国微生物菌株保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2023年10月26日。
2.一种元蘑子实体，其特征在于，为栽培权利要求1所述的元蘑(Hohenbueheliaserotine)哈元1号得到的子实体。
3.一种如权利要求2所述元蘑子实体在食品加工中的应用。
4.一种如权利要求3所述的元蘑子实体的栽培方法，其特征在于，具体为：
菌丝培养：元蘑哈元1号菌块捣碎后散落接种于母种培养基中，培养至菌丝长满斜面；在无菌条件下将母种菌丝接种至原种培养基，在无菌室内进行避光扩大培养，至菌丝长满袋；在无菌条件下，将原种菌丝接种于栽培种培养基，接种后移入温室进行养菌，至菌丝长满袋；
出菇期管理：菌丝后熟期满后进行出菇，在出菇期间控制温度为8-18℃，每天给予200-500Lux的散射光照射，并向地面喷水，每天向空中喷水雾3-4次，以保证空气相对湿度达到85-95％，每天给予3h的蓝光照射，蓝光光照强度为100Lux，以促进原基形成和子实体分化，保证通风良好，二氧化碳浓度不高于0.3％；
子实体采收：当元蘑子实体边缘微微上翘时采收子实体，采完第一潮菇后将料袋稍加整理，并适当养菌以培养第二潮菇，当元蘑子实体边缘微微上翘时采收第二潮菇子实体。
5.根据权利要求4所述的元蘑子实体的栽培方法，其特征在于，所述菌丝培养具体为：
取元蘑哈元1号菌块捣碎后散落接种于母种培养基中，21-24℃温度下避光培养至菌丝长满斜面；在无菌条件下将母种菌丝接种至原种培养基，进行避光扩大培养，期间温度控制在20-25℃，湿度控制在65％，并注意加强通风，至菌丝长满袋；在无菌条件下，将原种菌丝接种于栽培种培养基，接种量为15-20％，接种后移入温室进行养菌，养菌期间环境条件为：温度20-25℃、空气相对湿度65％并保证通风良好，至菌丝长满袋。
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