CN104145710B - 一株西藏高原黑木耳菌株 - Google Patents
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Abstract
一株西藏高原黑木耳菌株，它涉及一株黑木耳菌株。它为黑木耳HDXZ‑2（Auricularia auricular HDXZ‑2），保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2013033。本发明应用于黑木耳栽培领域。
Description
技术领域
本发明涉及一株黑木耳菌株。
背景技术
黑木耳是一类营腐生生活的食用真菌，在生长发育的两个阶段靠菌丝体深入基质中，降解基质中的有机物吸收被释放出的营养元素来提供自身的营养和繁殖需求。黑木耳是我国的传统食用菌，被誉为“植物肉、素中之荤”，有人体清道夫之称，是人们生活中的健康食品。
西藏黑木耳是青藏高原山珍中的极品，是生长在朽木上的一种腐生真菌，由菌丝体和子实体组成。西藏独特环境条件赋予了高原黑木耳营养价值高、价格昂贵等特点；但也因为西藏特殊的地理环境，如紫外光照高、森林基质环境不同导致高原当地木耳产量普遍较低，也使得内地的优秀木耳品种在西藏“水土不服”，品质、口感等有明显下降。
发明内容
本发明提供了一株适合在高原环境条件下种植的黑木耳，其在高原地区种植产量高、商品性能好，综合性能优于内地移植品种。
本发明黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2），保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2013033。
在西藏种植本发明黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2），每个菌袋（菌袋规格为Φ16.5cm×33cm，接种块为1cm×2cm×2cm）的产量干重达49.3±0.21g，与种植在内地平原地区（黑龙江东宁）的黑29（每个菌袋产量干重为50.3±0.29g）和元宝2号（每个菌袋产量干重为49.7±0.31g）产量基本相当，是移植到西藏地区的黑29（每个菌袋产量干重为40.6±0.31g）的1.2倍数和元宝2号（每个菌袋产量干重为45.7±0.28g）1.1倍，具有产量高的优点。
本发明黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）具有口感好，优于内地移植木耳的特点。
本发明黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）的栽培季节与传统的农忙时间不冲突，使广大农牧民在农闲时有事可做，有钱可赚。采用袋料栽培不占用耕地，滩涂、沙石地均可栽培，这样可有效地扩大土地使用面积。通过栽培黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricularHDXZ-2）可以增加高原地区农牧民的收入，20万袋需用地20亩，预估可收获干耳约1.9万余斤，根据每袋原材料成本1.2元，人工成本1元，每斤售价150元，能带来241万元的纯收入，有利于当地的经济发展。
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）为木耳（Auricularia auricula），属于木耳属（Auricularia）；保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是武汉大学，保藏日期为2013年1月21日，保藏编号为CCTCC NO:M2013033。
附图说明
图1是选取黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）同源性在99%以上的真菌构建系统发育树。
图2是具体实施方式二中硬度对比试验结果图。
图3是具体实施方式二中弹性对比试验结果图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2），保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2013年1月21日，保藏编号为CCTCC NO:M2013033。
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）采集自西藏工布江达县，海拔3200m，木耳基物为榆树，采集人为丹真，采集时间为2010年。
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）经形态学初步鉴定为黑木耳。
将采集到的黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）标本除去污物，用高锰酸钾-甲醛溶液进行熏蒸处理30min，然后将子实体放置于超净工作台上进行无菌分离（用接菌铲取子实体的胶质部分），将分离出来的胶质部分（黄豆粒大小）接种到PDA培养基中央在25℃恒温培养箱中培养15天后挑取菌落边缘的尖端菌丝体，并且移植到试管培养基（1L试管培养基由200g去皮马铃薯、20.0g葡萄糖、3.0g KH2PO4、1.5g MgSO4、14.0g琼脂、75g麦麸和余量的水组成）斜面中央在25℃条件下培养至菌丝长满斜面，如此重复3次。纯化后的菌种接入装有木屑培养基（装有木屑培养基由40%的干料与60%的水组成，干料按质量百分比由78%的阔叶硬杂木木屑、20%的麦麸或米糠、1%的石膏和1%的白砂糖组成）的试管中保藏。
拮抗试验：
将黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）与对照木耳菌株（木耳品种黑29、元宝2号以及在西藏波密县才采集获得的另一黑木耳菌株西藏8号——西藏8号采集自西藏波密县，海拔2900m，木耳基物为桦树，采集人为张彦龙，采集时间为2010年，现保藏于黑龙江大学211实验室，并对公众发放提供），两两组合进行菌株独立性检验，分别接种到装有PDA培养基的试管两端，每个组合做3个重复。接种标记序号后25℃条件下恒温培养，每隔12h观察一次，及时发现并弃掉被杂菌污染的试管，更换新的试管斜面重新接菌培养。待管内菌株菌丝接触后，观察菌丝接触部位、菌丝的亲和程度及拮抗线形成情况并记录，具体形态特征隆起、隔离型、沟型参照《GB/T12728食用菌术语》的规定来判定；以“－”表示亲和、“+”表示不亲和但无明显拮抗线、“++”表示不亲和且有明拮抗线。拮抗试验结果如表1所示。
表1拮抗反应结果
| 菌株 | 黑29 | 元宝2号 | 西藏8号 |
| 黑木耳HDXZ-2 | ++ | + | + |
菌丝长势、长速对比试验（试验在西藏地区进行）：
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）按照一级菌种:二级菌种:三级菌种=1:7:560的比例进行接种（1个一级菌种接种7个二级培养基，1个二级菌种接种80个三级培养基）。一级菌种每个菌种接5支试管（一级菌种用PDA培养基），二级菌种（二级菌种培养基按质量百分比由40%的干料与60%的水组成，干料按质量百分比由78%的阔叶硬杂木木屑、20%的麦麸或米糠、1%的石膏和1%的白砂糖组成）与三级菌种（三级菌种培养基按质量百分比由38%的干料与62%的水组成，干料按质量百分比由76%的青冈木屑、22%的青稞麸皮、1%的石膏和1%的石灰组成）分别接种100袋和300袋，设置3个重复。
（1）首先在超净工作台内将黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）接种于PDA试管斜面中央，置于25℃恒温培养箱内培养，观察黑木耳HDXZ-2在室温下生长情况，如菌丝粗壮、浓密程度、颜色等。
（2）将黑木耳HDXZ-2在接菌箱内接种二级菌，然后将二级菌种放入预先用菌室消毒王灭菌的培养室内培养（接菌口朝上立放），首先在29℃环境下培养，待菌种吃料后改为25℃培养，待菌丝铺满整个料面后，观察各菌株的菌丝生长情况如菌丝粗壮、浓密程度、颜色等。
（3）按照无菌操作规程在接菌桌上接种黑木耳HDXZ-2的三级菌（接种块大小为1cm×2cm×2cm），然后将三级菌种横放在培养架上（接菌口处留适当的空隙）在20℃环境中培养，每天无风时开门通气1h。待菌丝铺满料面时，随机选取10袋，每隔2天对走菌长度进行一次标记，同时观察菌丝长势，测量其长度并记录走满时间，计算日均菌丝生长速度，并进行方差分析。
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）各级菌种生长情况如表2所示。
表2各级菌种生长情况
说明黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）菌丝生长旺盛、菌丝粗壮、洁白、长势好。
表3三级菌培养基上的生长速度（mm）
高原栽培出耳试验：
在西藏林芝地区进行高原栽培出耳试验，栽培培养基（菌袋）由水和干料混合而成，水与干料质量比为38:62，干料按照质量百分比由76%的青冈木屑、22%的青稞麸皮、1%的石膏和1%石灰组成；栽培菌袋养菌期间温度为20℃；栽培培养基运用简易灭菌锅在高原地区灭菌的灭菌时间为9h；选择4月上旬对栽培菌袋进行下地栽培管理；在黑木耳田间管理阶段，最佳划口形状为“∣”型，最佳划口数量为140。
将长满菌袋的黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）下地管理，观察菌种的出耳情况，杂菌污染情况，采耳后对子实体的商品性能进行比较分析，随机抽取10袋记录子实体的产量。
表4菌株产量情况
表5高原栽培商品性能
| 菌株 | 子实体颜色 | 朵型 | 开片情况 | 口感 |
| 黑木耳HDXZ-2 | 腹面漆黑背面褐色 | 碗状 | 开片、小根 | 软滑 |
黑木耳HDXZ-2的商品性能符合优秀黑木耳商品的要求。
将黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）菌株的ITS序列提交到NCBI中，运用BLAST程序与GenBank已收录的序列库进行同源性比较，下载MEGA5.0选取同源性在99%以上的真菌构建系统发育树（如图1所示），通过系统进化树可知，黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）菌株与数据库中的黑木耳菌株9809为主的亚群处在同一分支上，由此可以确定黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）为木耳属黑木耳种。
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）与黑木耳菌株9809比较，区别如表6所示。
表6
| 菌株 | 黑木耳HDXZ-2 | 黑木耳菌株9809 |
| 菌丝萌发温度 | 17℃ | 19℃ |
| 最适生长PH | 7.4 | 7.6 |
| 最适生长温度 | 25℃-28℃ | 23℃-26℃ |
| 生长最适含水量 | 59%-62% | 60%-65% |
| 子实体商品性能 | 小根单片 | 大根朵状 |
| 袋菌产量 | 49g | 52g |
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）水浴中复水60min，用吸水纸吸干表面水分，复水率为87.5%。黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）复水之前耳块较小较碎，颜色灰暗无光泽；复水后，耳片较薄，呈深褐色无光泽，弹性较好，劲道爽滑性一般，整体口感不错。
具体实施方式二：本实施方式对黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）、内地优秀木耳品种以及移植到西藏种植的内地优秀木耳品种进行对比试验：
1号样品是黑龙江东宁黑木耳，为东宁县必德金食用菌研究所分离得到的黑木耳元宝2号；
2号样品是黑龙江东宁黑木耳，为东宁县必德金食用菌研究所分离得到的黑木耳A4；
3号样品是移植到西藏种植的元宝黑木耳2号；
4号样品是移植到西藏种植的黑木耳A4；
5号样品是黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）。
1、硬度对比试验结果如图2所示，说明移植到西藏种植的内地木耳品种硬度显著增加，且明显大于黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2），口感显著下降。
2、弹性对比试验结果如图3所示，说明移植到西藏种植的内地木耳品种弹性显著下降，也低于黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2），口感差。
3、黑木耳常量营养成分检测结果如表7所示，黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricularHDXZ-2）即5号样品的水分和蛋白质含量高于其他4个样品，粗脂肪、还原糖和总糖含量则明显低于其他4个样品，黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）更符合当今高蛋白高膳食纤维低脂肪摄入的饮食理念。
表7黑木耳样品中常量营养成分表（单位：g/100g）
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
| 水分 | 8.29±0.05b | 8.49±0.03b | 8.34±0.04b | 8.02±0.07b | 9.21±0.03a |
| 灰分 | 5.51±0.03a | 5.45±0.01a | 5.18±0.04b | 5.28±0.06b | 5.15±0.01b |
| 蛋白质 | 13.5±0.34b | 13.7±0.46b | 13.4+0.35b | 13.3±0.26b | 14.7±0.46a |
| 粗纤维 | 5.4+0.1c | 5.8±0.02c | 9.3±0.08a | 9.1±0.03a | 7.7±0.05b |
| 粗脂肪 | 0.55±0.007b | 0.52±0.008b | 0.7±0.01a | 0.67±0.002a | 0.33±0.003c |
| 总糖 | 55.8±1.3b | 57.3±1.1b | 68.6±1.4a | 64.7±1.15a | 49.5±1.1c |
| 还原糖 | 13.7±0.21b | 14.9±0.31b | 19.6±0.46a | 18.3±0.5a | 4.2±0.3c |
3、矿物质元素及部分重金属含量检测
测定方法：采用NY/T1653-2008中的电感耦合等离子发射光谱法，测定黑木耳样品中的矿物质元素及部分重金属元素。检测条件：载气流速15L/min，辅助气流速0.2L/min，泵流速1.5mL/min，观测方式为轴向，延迟时间15秒。
检测结果如表8所示，Ca和Mg在黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）中的含量最高，分析Ca和Mg在黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）中含量高不但有西藏当地环境因素，黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）对Ca和Mg的吸收能力也强于其他4个样品。
P在黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）中的含量最高，而移植品种3号和4号样品较低，说明虽然培养环境中P含量低，黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）对P具有较好的吸收和富集能力。
试验说明黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）对K元素的吸收能力明显优于3号和4号样品。
试验说明西藏地区环境中Zn含量较高，黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）具有平衡Zn含量的作用和效果。
Na在黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）中的含量最低。
重金属Cr和Pb在黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）中的含量最低，虽然西藏高原环境中重金属Cr和Pb的含量高，但是黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricularHDXZ-2）能够有效的避免这两种对人体有害重金属的吸收。
Na和K的摄入需维持平衡才能对人体健康；Ca、Zn、P均为骨细胞结构和功能的必需元素，促进骨的形成；Mg是生理生化反应中多种酶的激活剂，并且Mg还具有调节肌肉兴奋性的作用；而Cr和Pb是对人体有害的重金属。所以，可以看出黑木耳HDXZ-2（Auriculariaauricular HDXZ-2）是一种适合在西藏高原地区推广的种植，且矿物元素含量合理的黑木耳菌株。
表8木耳样品中矿物质元素及重金属元素含量（μg/g）
| 名称 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Ca | 3186±56 | 3245±65 | 4157±48 | 4229±36 | 4372±76 |
| Zn | 1.12±0.22 | 0.05±0.01 | 23.1±0.74 | 24.6±0.43 | 5.51±0.11 |
| P | 3187±15 | 3223±27 | 3019±27 | 3089±26 | 3624±18 |
| K | 12612±85 | 12481±101 | 10841±63 | 11089±74 | 12091±81 |
| Na | 1993±23 | 1960±17 | 1307±27 | 1249±12 | 843±20 |
| Mg | 1021±12 | 1323±28 | 1697±37 | 1773±35 | 2060±15 |
| Cr | 36.8±1.23 | 35.8±1.01 | 51.2±1.56 | 52.8±1.03 | 32.9±1.24 |
| Pb | 1.02±0.2 | 0.84±0.1 | 3.49±0.26 | 3.89±0.5 | 0.58±0.1 |
| As | 0.47±0.1 | 0.37±0.05 | - | - | - |
4、维生素含量检测
黑木耳HDXZ-2（Auricularia auricular HDXZ-2）VB2含量最高。
Claims (1)
1.一株西藏高原黑木耳菌株，其特征在于，所述菌株为黑木耳(Auricularia auricular)HDXZ-2，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2013033。
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