CN117491529A - 一种诃子中没食子酸含量的测定方法 - Google Patents
一种诃子中没食子酸含量的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117491529A CN117491529A CN202311512649.7A CN202311512649A CN117491529A CN 117491529 A CN117491529 A CN 117491529A CN 202311512649 A CN202311512649 A CN 202311512649A CN 117491529 A CN117491529 A CN 117491529A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- myrobalan
- gallic acid
- solution
- measuring
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 186
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 title claims abstract description 93
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 93
- 235000015489 Emblica officinalis Nutrition 0.000 title claims abstract description 68
- 235000011517 Terminalia chebula Nutrition 0.000 title claims abstract description 68
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 244000277583 Terminalia catappa Species 0.000 title claims abstract 26
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 15
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 10
- LBDROUOCQSGOFI-UHFFFAOYSA-N methanol;phosphoric acid Chemical compound OC.OP(O)(O)=O LBDROUOCQSGOFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 25
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 9
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 8
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 claims description 5
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000002275 isocratic elution chromatography Methods 0.000 abstract description 3
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 3
- 241000001522 Terminalia chebula Species 0.000 description 42
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 244000132059 Carica parviflora Species 0.000 description 1
- 235000014653 Carica parviflora Nutrition 0.000 description 1
- 241000221032 Combretaceae Species 0.000 description 1
- 244000119298 Emblica officinalis Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- YBHILYKTIRIUTE-UHFFFAOYSA-N berberine Chemical compound C1=C2CC[N+]3=CC4=C(OC)C(OC)=CC=C4C=C3C2=CC2=C1OCO2 YBHILYKTIRIUTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093265 berberine Drugs 0.000 description 1
- QISXPYZVZJBNDM-UHFFFAOYSA-N berberine Natural products COc1ccc2C=C3N(Cc2c1OC)C=Cc4cc5OCOc5cc34 QISXPYZVZJBNDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
- B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
- B01J20/288—Polar phases
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/047—Standards external
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供一种诃子中没食子酸含量的测定方法，涉及中药成分测定技术领域。本发明的诃子中没食子酸含量的测定方法包括以下步骤：制备没食子酸对照品溶液；制备诃子样品溶液；分别将没食子酸对照品溶液和诃子样品溶液进行液相色谱检测。本发明用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为95:5的0.2％磷酸‑甲醇为流动相，采用等度洗脱色谱法分离诃子中没食子酸，30min内完成分离，没食子酸效果良好。本方法灵敏、简便，过程容易控制，重复性好，稳定性强，可为藏药原料诃子的质量评价以及标准制订提供依据。
Description
技术领域
本发明涉及中药成分测定技术领域，特别是涉及一种诃子中没食子酸含量的测定方法。
背景技术
诃子为使君子科植物诃子或绒毛诃子的干燥成熟果实，诃子的主要成分为单宁、三萜类物质、小檗碱、酚酸类物质等，具有收敛、抗病原微生物、降低内毒素损伤及炎症反应、抗氧化以及提升肠道屏障功能等多方面功效。在《中国药典》2020版中诃子的质量标准中只有性状和薄层色谱鉴别，无含量检测项，不能有效判定产品的质量和稳定性，因此建立诃子没食子酸有效成分含量测定对评价诃子质量具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种诃子中没食子酸含量的测定方法，以解决上述现有技术存在的问题。本发明采用HPLC法测定诃子中没食子酸的含量，可用于诃子的质量控制。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种诃子中没食子酸含量的测定方法，包括以下步骤：
制备没食子酸对照品溶液；制备诃子样品溶液；分别将没食子酸对照品溶液和诃子样品溶液进行液相色谱检测；
液相色谱检测的色谱条件：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液，洗脱方式为等度洗脱。
作为本发明的进一步优选，所述制备没食子酸对照品溶液中，提取溶剂为甲醇，所述没食子酸对照品溶液的浓度为96μg/mL。
作为本发明的进一步优选，所述制备诃子样品溶液中，溶剂为甲醇，提取方式为超声提取，诃子样品与提取溶剂的质量体积比为1g:50mL。
作为本发明的进一步优选，所述制备没食子酸对照品溶液包括以下步骤：取没食子酸对照品，精密称定，置量瓶中，加甲醇溶解并定容至量瓶刻度，摇匀，即得没食子酸对照品母液；精密量取没食子酸对照品母液置量瓶中，用甲醇稀释至量瓶刻度，摇匀，即得没食子酸对照品溶液。
作为本发明的进一步优选，所述制备诃子样品溶液包括以下步骤：取诃子样品，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，在功率200W、频率53kHz的条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得诃子样品溶液。
提取溶剂选择：选用甲醇作为溶剂，进行超声提取。
本发明参照中国药典余甘子项下没食子酸的含量测定方法与二十五味珊瑚胶囊标准项下没食子酸含量测定方法选择甲醇作为溶剂，甲醇作为实验室常用的有机溶剂，价格低廉，吸收波长适中。从提取时间和能源成本方面考虑，选择超声提取。
作为本发明的进一步优选，本发明还包括建立没食子酸标准曲线的步骤，所述建立没食子酸标准曲线的步骤具体为：精密吸取含没食子酸1.201212mg/mL的没食子酸对照品母液，分别精密吸取0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分别置于10mL的容量瓶中，加甲醇至容量瓶刻度，摇匀，按色谱条件进样测定，记录峰面积。以没食子酸浓度(μg/mL)为x轴，以峰面积为y轴，进行线性回归，得回归方程Y＝30345.9X-12384.0，相关系数R＝0.9999012。
作为本发明的进一步优选，本发明还包括确定诃子样品的没食子酸含量的步骤，所述确定诃子样品的没食子酸含量的步骤具体为：将诃子样品的峰面积代入没食子酸标准曲线，计算出诃子样品的没食子酸浓度，计算得到诃子样品的没食子酸含量。
作为本发明的进一步优选，所述液相色谱检测的色谱条件具体为：
色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
色谱柱：waters xbridgeC18、InertSustain C18和zafex supfexjx C18色谱柱中的一种；
流动相：体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液；
检测波长：271nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
洗脱方式：等度洗脱；
进样量：10μL。
更优选的，waters xbridgeC18色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5μm；InertSustainC18色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5μm；zafex supfexjx C18色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm。
色谱条件中色谱柱的性能、流动相的选择、柱温、流速等都会影响分离效果。
作为本发明的进一步优选，所述诃子样品为诃子肉。
本发明公开了以下技术效果：
本发明用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液为流动相，采用等度洗脱色谱法分离诃子中没食子酸，30min内完成分离，没食子酸出峰效果良好。本发明的测定方法灵敏、简便，过程容易控制，重复性好，稳定性强，可为藏药原料诃子的质量评价以及标准制订提供依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为没食子酸对照品紫外吸收波长图；
图2为没食子酸对照品溶液HPLC图；
图3为诃子样品溶液HPLC图；
图4为没食子酸标准曲线图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明以下实施例所用的仪器与试剂：
液相色谱仪(四元泵，DAD检测，柱温箱，自动进样器，Labsolutions色谱数据工作站)、METTLER XP205(十万分之一)电子天平、METTLER XP504(万分之一)电子天平、数控超声波清洗器KQ-500DE；没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110831-201906，规格：20mg，含量：91.5％)；甲醇为色谱纯(Fisher公司)；磷酸为色谱纯；水为超纯水。
下面结合实施例对本发明技术方案进行进一步详细的说明。
实施例1
步骤1没食子酸对照品溶液和诃子样品溶液的制备
取没食子酸对照品32.82mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至量瓶刻度，摇匀，即得没食子酸对照品母液。精密量取没食子酸对照品母液0.8mL置10mL量瓶中，用甲醇稀释至量瓶刻度，摇匀，即得没食子酸对照品溶液(每1mL中含没食子酸96μg)。
取诃子样品0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200W，频率53kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得诃子样品溶液。
步骤2流动相的选择
色谱条件与系统适用性条件用十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液为流动相；检测波长271nm；柱温30℃；流速为1.0mL/min，等度洗脱色谱法分离诃子中没食子酸，30min内完成分离，没食子酸出峰效果良好，出峰时间适宜，峰性好，没有拖尾等现象，符合含量测定要求。
步骤3检测波长的选择
取没食子酸对照品溶液，进样10μL，用DAD检测器在210～400nm波长范围进行全波长扫描，没食子酸对照品紫外吸收波长图如图1所示。结果显示没食子酸在271nm处有最大吸收，故选择检测波长为271nm。
步骤4测定法
分别精密吸取没食子酸对照品溶液、诃子样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按以下色谱条件测定。
色谱条件：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；色谱柱：zafex supfexjx C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液；检测波长：271nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；洗脱方式：等度洗脱。
没食子酸对照品溶液HPLC图如图2所示，诃子样品溶液HPLC溶液如图3所示。诃子样品溶液色谱中，在与没食子酸对照品色谱峰相应的位置上，有相同的色谱峰。以没食子酸峰计算理论板数大于3000。
定量分析方法学考察
1.建立没食子酸标准曲线
精密吸取没食子酸对照品母液(含没食子酸1.201212mg/mL)，分别精密吸取0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL分别置于10mL的容量瓶中，加甲醇至容量瓶刻度，摇匀，按步骤4测定法进样测定，记录峰面积。以没食子酸进样量(μg)为x轴，以峰面积为y轴，进行线性回归，得回归方程Y＝30345.9X-12384.0，相关系数R＝0.9999012。结果表明该成分在范围内线性关系良好。没食子酸标准曲线如图4所示。
2.精密度实验
取步骤1中的没食子酸对照品溶液10μL，连续进样6次，记录峰面积，并计算相对标准偏差(RSD)。没食子酸的峰面积的RSD为0.79％(n＝6)，表明仪器精密度良好。结果见表1。
表1精密度实验结果(峰面积)n＝6
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均 | RSD％ |
| 没食子酸 | 2991515 | 2963727 | 2953460 | 2945944 | 2926929 | 2932772 | 2952391 | 0.79 |
3.重复性实验
按照步骤1的方法平行制备6份诃子样品溶液，分别进样10μL并记录峰面积，计算含量，结果见表2。从表2可以看出各份诃子样品溶液的没食子酸测定结果，RSD(n＝6)为1.58％，表明本发明的方法重复性好。
表2重复性实验结果(含量)n＝6
4.稳定性实验
取6份诃子样品溶液在室温下放置0、2、4、6、8、12、24小时在步骤4的色谱条件下分析，测得没食子酸的峰面积的RSD(n＝6)为0.70％，结果表明诃子样品溶液在24小时内稳定。稳定性实验结果见表3。
表3供试品溶液稳定性实验结果(峰面积)
5.加样回收率实验
取没食子酸对照品适量，加甲醇制成24.0242μg/mL的溶液，即加样回收实验没食子酸对照品溶液。
取已知没食子酸含量的诃子样品粉末6份，每份0.05g左右，精密称定，置于6个具塞锥形瓶中，分别加入加样回收实验没食子酸对照品溶液50mL，按照步骤1的方法制备没食子酸加样回收诃子样品溶液，按步骤4的色谱条件测定，计算回收率，结果见表4；平均回收率为105.92，RSD为3.2％，表明该方法加样回收试验结果良好。表明本法有良好的准确性。
回收率的计算方法为：回收率(％)＝(测得没食子酸的量-样品中没食子酸的量)/加入没食子酸的量。
表4加样回收率试验结果(n＝6)
6.耐用性考察
分别采用3种不同品牌的色谱柱对同一诃子样品溶液进行测定，实验结果见表5。三种色谱柱型号分别为waters xbridge C18、InertSustain C18、zafex supfexjx C18。没食子酸的平均含量为1.9％，其中waters xbridgeC18测定的没食子酸含量为2.0％，InertSustain C18和zafex supfexjx C18均为1.9％，RSD为2.9％。因此说明三种型号的色谱柱型号差别不大，都适用于诃子中没食子酸含量的测定。
表5耐用性实验结果
色谱柱的选择：试验过程中考察了waters xbridgeC18(4.6mm×250mm，5μm)和InertSustain C18(4.6mm×250mm，5μm)以及zafex supfexjx C18色谱柱，结果表明三种色谱柱出峰效果差别不大，因此选择三种色谱柱waters xbridgeC18、InertSustain C18和zafex supfexjx C18色谱柱。
本方法灵敏、简便，过程容易控制，重复性好，稳定性强，可为藏药原料诃子的质量评价以及标准制订提供依据。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (8)
1.一种诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备没食子酸对照品溶液；制备诃子样品溶液；分别将没食子酸对照品溶液和诃子样品溶液进行液相色谱检测；
液相色谱检测的色谱条件：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液，洗脱方式为等度洗脱。
2.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述制备没食子酸对照品溶液中，溶剂为甲醇，所述没食子酸对照品溶液的浓度为96μg/mL。
3.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述制备诃子样品溶液中，提取溶剂为甲醇，提取方式为超声提取，诃子样品与提取溶剂的质量体积比为1g:50mL。
4.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述制备没食子酸对照品溶液包括以下步骤：取没食子酸对照品，精密称定，置量瓶中，加甲醇溶解并定容至量瓶刻度，摇匀，即得没食子酸对照品母液；精密量取没食子酸对照品母液置量瓶中，用甲醇稀释至量瓶刻度，摇匀，即得没食子酸对照品溶液。
5.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述制备诃子样品溶液包括以下步骤：取诃子样品，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，在功率200W、频率53kHz的条件下超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得诃子样品溶液。
6.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述液相色谱检测的色谱条件具体为：
色谱柱填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
色谱柱：waters xbridgeC18、InertSustain C18和zafex supfexjx C18色谱柱中的一种；
流动相：体积比95:5的0.2％磷酸-甲醇溶液；
检测波长：271nm；
柱温：30℃；
流速：1.0mL/min；
洗脱方式：等度洗脱；
进样量：10μL。
7.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法还包括建立没食子酸标准曲线、确定诃子样品的没食子酸含量的步骤。
8.根据权利要求1所述的诃子中没食子酸含量的测定方法，其特征在于，所述诃子样品为诃子肉。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311512649.7A CN117491529A (zh) | 2023-11-14 | 2023-11-14 | 一种诃子中没食子酸含量的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311512649.7A CN117491529A (zh) | 2023-11-14 | 2023-11-14 | 一种诃子中没食子酸含量的测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117491529A true CN117491529A (zh) | 2024-02-02 |
Family
ID=89670462
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311512649.7A Pending CN117491529A (zh) | 2023-11-14 | 2023-11-14 | 一种诃子中没食子酸含量的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117491529A (zh) |
-
2023
- 2023-11-14 CN CN202311512649.7A patent/CN117491529A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110031573B (zh) | 二维柱切换高效液相色谱法测定维生素d含量的方法 | |
| CN109632997B (zh) | 一种百合药材中王百合苷b的提取及测定方法 | |
| CN110243969B (zh) | 一种同时测定虎掌南星中7种有机酸的hplc方法 | |
| CN102967684A (zh) | 一种炎宁胶囊质量标准检测方法 | |
| CN117491529A (zh) | 一种诃子中没食子酸含量的测定方法 | |
| CN112986478B (zh) | 一种用于筛查和定量分析复方甘草片中防腐剂成分的测定方法 | |
| CN112578035B (zh) | 一种猪排泄物中帕托珠利的高效液相色谱检测方法 | |
| CN114910583A (zh) | 一种桔贝合剂的检测方法 | |
| CN118348177B (zh) | 一种同时测定桔梗冬花片8种成分含量的方法 | |
| CN115097040B (zh) | 一种木鳖子的uplc特征图谱构建方法及应用 | |
| CN113156017B (zh) | 一种采用hplc法同时测定强力定眩片中12种化学成分含量的方法 | |
| CN114778730B (zh) | 一种同时检测紫菀药材或紫菀制品中6种有机酸的方法 | |
| CN117147738B (zh) | 一种醒脑再造丸中马兜铃酸ⅰ的检测方法 | |
| CN116818940B (zh) | 一种基于一测多评法的化浊解毒疏肝方中成分含量的检测方法 | |
| CN112595793B (zh) | 一种基于苯酚测定的地龙注射液检测方法 | |
| CN108732263B (zh) | 一种盐酸雷莫司琼注射液中杂质的测定方法 | |
| CN113686999B (zh) | 一种糖类化合物中苯胺残留的高效液相色谱检测方法 | |
| CN106841462A (zh) | 一种西青果中没食子酸的检测方法 | |
| CN108279272B (zh) | 一种同时测定心可舒片中多种成分的含量的方法 | |
| CN113281420A (zh) | 一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法 | |
| CN115453025A (zh) | 一种水合氯醛的有关物质检测方法 | |
| CN118169282A (zh) | 一种碳酸钙制剂中维生素e含量的检测方法 | |
| CN113820405A (zh) | 一种石韦配方颗粒质量控制方法 | |
| CN117871727A (zh) | 一种利奈唑胺葡萄糖注射液中枸橼酸根含量的检测方法 | |
| CN118225909A (zh) | 一种注射液中丙二醇含量的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |