CN113281420A - 一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药制剂质量控制技术领域，具体涉及一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法，所述的多成分含量测定方法是在同一色谱条件下，同时对复方珍珠解毒口服液中绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种化学成分进行高效液相色谱含量测定。所述方法的具体步骤为：(1)、色谱条件的设定；(2)、混合对照品溶液的制备；(3)、复方珍珠解毒口服液供试品溶液的制备；(4)、分别精密吸取混合对照品溶液和复方珍珠解毒口服液供试品溶液注入液相色谱仪中检测，记录色谱图，根据保留时间、峰面积计算样品的含量。本发明提供的检测方法具有简单、准确、精密度高、重现性好等优点，所提供的技术方法可全面、客观的表征复方珍珠解毒口服液质量。

Description

一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法
技术领域
本发明属于中药制剂质量控制技术领域，具体涉及一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法。
背景技术
复方珍珠解毒口服液是由珍珠层粉、金银花、土茯苓、地黄、甘草、龟甲等六味药材按照一定的处方比例组成，制成的中药复方制剂。具有清热凉血，养阴解毒的作用，适用于因热毒瘀阻肌肤所致的轻型粉刺，症见皮疹以红色丘疹、黑头或白头粉刺为主，伴有少量脓头者。其中，绿原酸是金银花中的主要化学成分，落新妇苷是土茯苓中的主要化学成分，甘草苷是甘草中的主要化学成分。
目前，复方珍珠解毒口服液执行标准是国家药品监督管理局标准（试行）（ws-5267（B-0267）-2014Z），该标准中的含量测定项仅对绿原酸的含量做了相应的规定（不得低于80μg.ml-1），不能全面评价和控制复方珍珠解毒口服液的质量，难以体现复方珍珠解毒口服液的内在质量。
基于上述现状，本发明利用高效液相色谱建立了复方珍珠解毒口服液中绿原酸、甘草苷、落新妇苷3个主要化学成分的多成分含量测定方法，该方法的特征在于可全面、客观、准确、简便的评价复方珍珠解毒口服液的质量，显著提高了产品的质量可控性，为复方珍珠解毒口服液的质量标准提升提供了依据。
发明内容
发明目的：本发明是为解决复方珍珠解毒口服液质量控制现有技术不足的问题，提供一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法。该方法的特征在于可全面、客观、准确、简便的评价复方珍珠解毒口服液的质量，显著提高了产品的质量可控性，为复方珍珠解毒口服液的质量标准提升提供了依据。
技术方案：为实现上述的目的，本发明实现的技术方案如下：
复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法是在同一色谱条件下，同时对复方珍珠解毒口服液中绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种化学成分进行高效液相含量测定。
进一步的，所述的多成分含量测定方法的步骤如下：
（1）色谱条件设定：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈—磷酸水溶液，进样量为5～20μL，柱温为30℃～40℃，流速为0.8mL/min～1mL/min,检测波长为200～400nm。
（2）混合对照品的制备：分别精密称定适量的绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种对照品，用合适的溶剂溶解对照品，得到各成分一定浓度的混合对照品溶液，低温下保存，备用。
（3）复方珍珠解毒口服液供试品溶液的制备：精密量取复方珍珠解毒口服液适量，用溶剂定容，摇匀，即得。
（4）按照步骤（1）的色谱条件设定，分别精密吸取混合对照品溶液和复方珍珠解毒口服液供试品溶液注入液相色谱仪中检测，记录色谱图，根据保留时间、峰面积计算复方珍珠解毒口服液样品含量。
进一步的，所述步骤（1）的色谱条件为：
色谱柱：Agilent 5TC-C18(2)（250 X 4.6mm,5μm），流动相：以乙腈为流动相A，以0.5%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，检测波长：220nm，流速：0.8mL/min，进样量：10μL，柱温：30℃，
梯度洗脱程序如下表：
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE002
进一步地，所述步骤（2）混合对照品的制备为：
分别精密称取绿原酸、甘草苷、落新妇苷对照品适量，置于500mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得含绿原酸为10.168μg/mL、甘草苷为3.277μg/mL、落新妇苷为7.456μg/mL的混合对照品溶液。将上述的混合对照品置于低温下保存，备用。
进一步地，所述步骤（3）复方珍珠解毒口服液供试品的制备为：
精密量取复方珍珠解毒口服液5mL，用50%甲醇定容至100mL的容量瓶中，摇匀，即得。
复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定检测条件的优化：
色谱条件的优化
本发明对流动相的配比进行了筛选，分别对乙腈-0.1%冰醋酸、乙腈-0.05%磷酸、乙腈-0.2%磷酸、乙腈-甲醇-水（57:40:3）-0.2%磷酸和乙腈-0.5%磷酸5个流动相系统对复方珍珠解毒口服液中的3种待测组分的检测情况进行考察。结果显示，是以乙腈-0.5%磷酸为流动相梯度洗脱时，3种待测成分的分离效果是最好的，3个色谱峰的峰型是最佳的，最终确定乙腈-0.5%磷酸水溶液为本方法的流动相。
本发明采用紫外检测器（DAD）对检测波长进行全波长扫描，通过查阅2015年版《中国药典》第一部，确定绿原酸、甘草苷、落新妇苷3个化学组分的波长，分别为327nm、237nm和291nm，在210nm至350nm波长范围内进行筛选，检测时发现3种化学成分在220nm波长下有最佳的峰吸收且基线平稳，色谱图美观，分离效果最佳。因此，最终确定的波长为220nm。
本发明对流速0.8mL/min和1.0mL/nin进行了考察和筛选，因复方珍珠解毒口服液中存在较多的同分异构体以及极性比较相似的成分，因此在流速为1.0ml/min时没有办法将其分开，在流速为0.8mL/min，复方珍珠解毒口服液中的各个成分的分离效果是最佳的。因此，最终确定的流速为0.8mL/min。
综上所述，由于采用了上述的技术方案，本发明的有益效果是：
本发明多成分含量检测方法实现进一次样，能够同时检测复方珍珠解毒口服液中绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种化学成分的含量，缩短检测的时间，提高工作效率，可全面、客观、准确的评价复方珍珠解毒口服液的质量，为复方珍珠解毒口服液的质量控制提供依据，提高复方珍珠解毒口服液的质量控制。
【附图说明】图1：混合对照品色谱图。
图2：复方珍珠解毒口服液供试品色谱图（220nm）。
色谱峰分别对应：1为绿原酸、2为甘草苷、3为落新妇苷。
【具体实施方式】
高效液相同时检测复方珍珠解毒口服液的多个化学成分的含量实例。
1.仪器与试药
1.1仪器
安捷伦1260 infinit Ⅱ高效液相色谱仪（安捷伦科技（中国）有限公司）、岛津LC20A高效液相色谱仪（岛津企业管理）（中国）有限公司）、KQ-500DA型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、SHB-Ⅳ双A循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸易有限公司）、GH-202型分析天平（A&D Company,Limited）
1.2试药
甲醇、磷酸、乙醇、盐酸等均为分析纯；乙腈、甲醇均为色谱级，均购自赛默飞世尔科技中国有限公司；纯净水，购自杭州娃哈哈集团有限公司；绿原酸对照品（批号110753-201716，质量分数99.3%）、甘草苷对照品（批号111610-201607，质量分数93.1%）、落新妇苷（批号111798-201504，质量分数93.9%）均购自中国食品药品检定研究院；复方珍珠解毒口服液（批号181001、190302），来自广西慧宝源医药科技有限公司。
2.色谱条件设定
色谱柱：Agilent 5TC-C18(2)（250 X 4.6mm,5μm），流动相：以乙腈为流动相A，以0.5%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，检测波长：220nm，流速：0.8mL/min，进样量：10μL，柱温：30℃，
梯度洗脱程序如下表：
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE003
3.试验方法
3.1 混合对照品溶液的制备
分别精密称取绿原酸、甘草苷、落新妇苷对照品适量，置于500mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得含绿原酸为10.168μg/mL、甘草苷为3.277μg/mL、落新妇苷为7.456μg/mL的混合对照品溶液。将上述的混合对照品置于低温下保存，备用。
3.2 复方珍珠解毒口服液供试品溶液的制备
精密量取复方珍珠解毒口服液5mL，用50%甲醇定容至100mL的容量瓶中，摇匀，即得。
4.精密度试验
取“3.1”项下的混合对照品溶液，按照上述的色谱条件重复进样6次，记录绿原酸、甘草苷、落新妇苷的峰面积，分别计算这3个组分峰面积的RSD值，结果这3个组分峰面积的RSD值依次为0.36%、0.38%、0.41%，结果表明了仪器的精密度良好，数据见表1。
表1 表示精密性试验数据结果
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE005
5.稳定性试验
取批号为190302的复方珍珠解毒口服液5mL，按照“3.2”项制备方法供试品溶液，分别在0、4、8、12、24小时准确吸取10μL注入高效液相色谱仪中，按照上述的色谱条件测定复方珍珠解毒口服液中的绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种化学成分的峰面积值，分别计算这3种成分的峰面积RSD,求得这3种成分的峰面积RSD依次为1.90%、1.89%%、1.33%，表明供试样品溶液制备后24h内稳定，数据见表2。
表2 表示稳定性试验数据结果
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE007
6.线性关系试验
吸取混合对照品溶液过0.45μm滤膜后，按照所述的色谱条件分别进样8、10、15、20、25μL，记录色谱图面积。以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，对其进行线性回归，得回归方程，结果见表3
表3 线性关系考查
化合物 回归方程 相关系数（r）
绿原酸 y = 42.454x + 24.37 0.9992
甘草苷 y = 49.265x + 27.177 0.9996
落新妇苷 y = 98.469x + 56.656 0.9991
7.重复性试验
取批号为190302复方珍珠解毒口服液样品，按照“3.2”项下的方法平行制备6份供试品溶液，按照“4.1”项下的色谱条件进行测定，计算绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种成分质量分数的RSD值，结果分别为0.77%、1.18%、0.98%，结果表明该方法中甘草苷的重复性好。
表4 表示重复性的数据结果
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE009
8.加样回收试验
分别精密量取已知含量的供试品（批号：190302）9份，每份取5mL，分别加入绿原酸、甘草苷、落新妇苷含量的1.5倍、1倍、0.5倍的各对照品溶液，按照“3.2”项下的方法制备供试品溶液，按照上述的色谱条件进行测定，计算加样回收率，结果显示，平均加样回收率分别为100.1%、100.7%、99.7%，RSD分别为2.08%、2.20%、1.19%，结果表明本方法的回收率好。
表5 表示绿原酸加样回收的数据结果（0.5、1、1.5）
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE011
表6 表示甘草苷加样回收的数据结果（0.5、1、1.5）
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE013
表7 表示落新妇苷加样回收的数据结果（0.5、1、1.5）
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE015
9.复方珍珠解毒口服液3种成分的含量测定的结果
分别精密量取3.1项下的混合对照品和10批复方珍珠解毒口服液（编号为：1至10），10批复方珍珠解毒口服液样品按照“3.2”项下的方法制备，分别精密吸取供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按照所述的色谱条件测定样品峰面积。采用外标法测定复方珍珠解毒口服液中绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种化学成分的含量，具体的数据如表8
表8 表示不同批次的复方珍珠解毒口服液样品含量测定数据表
Figure RE-DEST_PATH_IMAGE017
10.总结
本发明首次利用高效液相一测多评技术同时测定复方珍珠解毒口服液中绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种主要成分。本发明可全面、客观、准确的评价复方珍珠解毒口服液的质量，为复方珍珠解毒口服液的质量控制提供依据，提高复方珍珠解毒口服液的质量控制。
上述说明是针对本发明较佳可行的实施例的详细说明，不用于限制本发明的专利申请范围，凡本发明提供的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (6)

1.一种复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定方法，其特征在于，所述的多成分含量测定方法按以下步骤进行：
(1)色谱条件设定：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈一磷酸水溶液，进样量为5～20μL，柱 温为30℃～40℃，流速为0.8mL/min～1mL/min，检测波长为200～400nm。
(2)混合对照品的制备：分别精密称定适量的绿原酸、甘草苷、落新妇苷3种对照品，用合适的溶剂溶解对照品，得到各成分一定浓度的混合对照品溶液，低温下保存，备用。
(3)复方珍珠解毒口服液供试品溶液的制备：精密量取复方珍珠解毒口服液适量，用溶剂定容，摇匀，即得。
2.按照步骤(1)的色谱条件设定，分别精密吸取混合对照品溶液和复方珍珠解毒口服液供试品溶液注入液相色谱仪中检测，记录色谱图，根据保留时间、峰面积计算复方珍珠解毒口服液样品含量。
3.根据权利要求1所述的复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定，其特征在于，步骤(1)色谱条件：色谱柱：Aglient 5TC-C18(2)(250×4.6mm，5μm)，流动相：以乙腈为流动相A，以0.5％磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，检测波长：220nm，流速：0.8mL/min，进样量：10μL，柱温：30℃，梯度洗脱程序如下表：
时间 A(％) B(％) 0 10 90 10 20 80 15 30 70 30 30 70 40 10 90
4.根据权利要求1所述的复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定，其特征在于，步骤(2)混合对照品溶液的制备：分别精密称取绿原酸、甘草苷、落新妇苷对照品适量，置于500mL量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得到含绿原酸为10.168μg/mL、甘草苷为3.277μg/mL、落新妇苷为7.456μg/mL的混合对照品溶液。
5.将上述的混合对照品置于低温下保存，备用。
6.根据权利要求1所述的复方珍珠解毒口服液的多成分含量测定，其特征在于，步骤(3)复方珍珠解毒口服液供试品溶液的制备：精密量取复方珍珠解毒口服液5mL，用50％甲醇定容至100mL的容量瓶中，摇匀，即得。
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