CN117343883A - 一株植物乳植杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株植物乳植杆菌及其应用，属于微生物应用技术领域，本发明从青贮饲料中筛选出一株植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JYZC‑LP09，其生物保藏号为：CGMCC No.28057。菌株JYZC‑LP09对多种致病菌和霉菌具有抑菌作用，并能够分解霉菌毒素，作为益生菌具有较好的开发潜力。

Description

一株植物乳植杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及生物应用技术领域，具体涉及一株植物乳植杆菌及其应用。
背景技术
益生菌被定义为活的微生物，当摄入足够量时，对宿主健康发挥有益作用。益生菌不仅包括细菌，也包括真菌等。目前研究和应用最为广泛的益生菌是乳杆菌(Lactobacillus)以及双歧杆菌(Bifidobacterium)。植物乳植杆菌属于乳杆菌科中的乳杆菌属，植物乳植杆菌可代谢产生有机酸、过氧化氢、细菌素和双乙酰等其他天然抗菌物质，不仅抑制病原微生物的生长，同时还能提高食品的风味和良好的感官，维持肠道菌群的平衡，提高免疫力等，可应用于医学、饲料、食品保藏等领域。
大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等是常见的食源性致病菌，广泛存在于肉制品、蛋制品以及土壤、水等载体和环境中，动物和人受上述病原菌感染后，会罹患细菌性疾病，不仅给养殖业带来巨大经济损失，而且对人类健康造成威胁。另外，农产品和农副产品中的霉菌污染会导致产品色泽、质地、以及营养品质降低，最终给农业带来巨大的经济损失，霉菌不但容易分解糖分和乳酸，而且部分霉菌还会产生霉菌毒素，霉菌毒素的危害极大，对动物和人的健康造成严重影响，因此对于霉菌毒素的控制极其重要。传统的防止霉菌污染的手段主要是物理和化学方面杀菌，其中，物理方面主要采用高温高压、紫外等方法对腐败菌的生理生化特性进行破坏，化学方法是以添加化学防腐剂的形式来达到防霉的目的。但是，物理方法的使用受到国家的严格管控，其使用范围和手段也受到限制，而化学杀菌由于多重耐药微生物的增加、环境污染及其对动物和人类的残留毒性，对社会构成了巨大威胁。因此筛选出既能有效降解霉菌毒素又具有良好的抑菌功能的乳酸菌具有重要意义。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一株植物乳植杆菌及其应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的的第一方面，提供一株植物乳植杆菌，该菌株为植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JYZC-LP09：
该菌株已于2023年7月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），其生物保藏号为：CGMCC No.28057。
所述植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JYZC-LP09，分离自青贮饲料中，具有如下特征：
在MRS培养基上，37℃厌氧培养48h，菌落白色，圆形，表面湿润，不透明，边缘整齐；菌体呈杆状， 0.8-0.9 μm×1.4-2.2μm，单个或成对排列，革兰氏阳性。
本发明的第二方面，提供上述植物乳植杆菌在如下（1）-（4）至少一项中的应用：
（1）抑制细菌的生长；
（2）制备用于防治动物细菌性疾病的产品；
（3）抑制霉菌的生长；
（4）降解霉菌毒素。
作为优选，所述细菌为大肠埃希氏菌、肠沙门氏菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌中的一种或多种。
作为优选，所述大肠埃希氏菌（Escherichia coli）的保藏号为CGMCC 1.12883，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述肠沙门氏菌（Salmonella enterica）的保藏号为CGMCC 1.755，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）的保藏号为CICC 21534，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的保藏号为CICC10786，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的保藏号为CGMCC 1.10452，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的保藏号为CGMCC 1.1527，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
作为优选，所述霉菌为黄曲霉、钩状木霉、桔青霉、娄地青霉中的一种或多种。
作为优选，所述黄曲霉（Aspergillus flavus）的保藏号为CGMCC 3.15652，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述钩状木霉（Trichoderma hamatum）的保藏号为CGMCC 3.7248，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述桔青霉 （Penicillium citrinum）的保藏号为CGMCC 3.13683，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；所述娄地青霉（Penicillium roqueforti）的保藏号为CICC40663，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
作为优选，所述霉菌毒素为黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素中的一种或多种。
本发明的第三方面，提供上述植物乳植杆菌在制备青贮饲料添加剂中的应用。
本发明的第四方面，提供含有上述植物乳植杆菌的菌剂。
作为优选，所述菌剂由植物乳植杆菌JYZC-LP09、地衣芽孢杆菌、短乳杆菌、戊糖片球菌和粪链球菌按质量比4：1：3：2：1配制而成。
作为优选，所述地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）的保藏号为CICC10098，购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述短乳杆菌（Lactobacillus brevis）的保藏号为CICC 20014，购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）的保藏号为CICC 22737，购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述粪链球菌（faecalisStreptococcus）的保藏号为CCTCC DB 20081686，购自于中国典型培养物保藏中心。
作为优选，所述菌剂中，所述植物乳植杆菌JYZC-LP09的活菌数≥4×108cfu/g，所述地衣芽孢杆菌的活菌数≥1×108cfu/g；所述短乳杆菌的活菌数≥3×108cfu/g；所述戊糖片球菌的活菌数≥2×108cfu/g；所述粪链球菌的活菌数≥1×108cfu/g。
本发明的第五方面，提供上述菌剂在制备青贮饲料添加剂中的应用。
本发明的有益效果：
1.本发明从青贮饲料中分离筛选出一株产酸效率高的植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JYZC-LP09，其对多种致病菌和霉菌具有抑菌作用，并能够分解霉菌毒素，作为益生菌具有较好的开发潜力。
2.本发明将菌株JYZC-LP09和其他菌株一起复配形成菌剂，能够提高甜高粱秸秆青贮饲料的发酵品质，并延长了甜高粱秸秆青贮饲料的有氧稳定时间。
附图说明
图1是菌株JYZC-LP09宏观形态照片；
图2是菌株JYZC-LP09微观形态照片；
图3是菌株JYZC-LP09的16S rDNA序列的系统发育树；
图4是菌株JYZC-LP09phes基因序列的系统发育树。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
如前所述，肉制品、蛋制品等在加工及贮存期间，因操作条件及环境等因素的影响，易污染大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌，另外当开封使用后，容易受到霉菌污染，产生霉菌毒素；因此为了筛选出一株具有广谱抑菌性的乳酸菌，本发明首先是从青贮饲料中筛选了一株生长速率快、产酸速率高的菌株JYZC-LP09，鉴定结果显示该菌株属于植物乳植杆菌，而后本发明又考察了该菌株对于常见病原菌以及家畜等容易感染的病原菌的抑菌能力，结果显示该菌株对多种病原菌均有显著的抑制作用；另外本申请还考察了该菌株对青贮饲料中常见的霉菌的抑制作用以及对霉菌毒素的降解效果，结果显示菌株JYZC-LP09对于常见的霉菌也具有明显的抑制作用，并可以有效地降解霉菌毒素；因此综合菌株JYZC-LP09的产酸能力、抑菌能力和降解霉菌毒素的能力，在青贮饲料方面具有较好的开发潜力。
而后本发明又将菌株JYZC-LP09和其他菌株一起复配形成菌剂，并考察了该菌剂在青贮饲料发酵中的作用，发现能够提高甜高粱秸秆青贮饲料的发酵品质能延长了甜高粱秸秆青贮饲料的有氧稳定时间。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
其中，大肠埃希氏菌（Escherichia coli）的保藏号为CGMCC 1.12883，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；肠沙门氏菌（Salmonella enterica）的保藏号为CGMCC 1.755，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）的保藏号为CICC 21534，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的保藏号为CICC 10786，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的保藏号为CGMCC 1.10452，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的保藏号为CGMCC 1.1527，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
黄曲霉（Aspergillus flavus）的保藏号为CGMCC 3.15652，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；钩状木霉（Trichoderma hamatum）的保藏号为CGMCC3.7248，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；桔青霉 （Penicillium citrinum）的保藏号为CGMCC 3.13683，购自于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；娄地青霉（Penicillium roqueforti）的保藏号为CICC 40663，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。
地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）的保藏号为CICC 10098，购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心；短乳杆菌（Lactobacillusbrevis）的保藏号为CICC 20014，购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心；戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）的保藏号为CICC 22737，购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心；粪链球菌（faecalisStreptococcus）的保藏号为CCTCC DB 20081686，购自于中国典型培养物保藏中心。
所使用的培养基的组成如下：
MRS液体培养基：牛肉膏10 g/L，酵母膏5 g/L，蛋白胨10 g/L，葡萄糖20 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，乙酸钠5 g/L，七水硫酸镁0.2 g/L，四水硫酸锰0.05 g/L，吐温-80 1 g/L，柠檬酸三铵2 g/L，pH6.2。
MRS固体培养基：MRS液体培养基种添加琼脂15 g/L，pH6.2。
MRS-CaCO3培养基：是在MRS固体培养基中放入灭菌备用的CaCO3溶液，充分混匀。
实施例1：菌株的分离和鉴定：
1. 菌株的分离纯化：
取青贮60 d的玉米和紫花苜蓿青贮样品，混合均匀，称取10 g样品加至90 mL无菌水中，150 r/min振荡2 h。取1 m L悬液加到装有9 m L无菌水的试管中，用枪头吹打5次混匀，即为0.01 g/m L的样品悬液，依次稀释至0.1×10-6g/m L。选取乳酸菌菌落数范围在30～300的3个稀释度，即0.1×10-2g/m L、0.1×10-3g/m L、0.1×10-4g/m L稀释度，利用稀释涂布平板法进行分离培养，取100μL，均匀涂布于MRS-CaCO3培养基固体培养基。在厌氧条件下，将MRS-CaCO3固体培养基放置于37摄氏度培养48 h~72 h，待菌落长成，用接种环从培养基中挑取产生溶钙圈典型菌落。
根据单株菌落的色泽、菌落特征、透明度、大小、形状、边缘等选取120株菌株进行革兰氏染色和过氧化氢酶试验，初步判定有113株乳酸菌。将纯化后的113株乳酸菌菌株接种于10 mL MRS液体培养基中，37℃培养24～36 h。再将乳酸菌按1∶1比例保存在40%的甘油中，-80℃低温保存。
3.菌株的筛选：
将纯化后的113株乳酸菌菌株用1μL接种环接种在装有新的MRS液体培养基的10 mL离心管中，放置在37℃恒温培养箱中培养24～36 h，所发酵形成的菌液用于DNA的提取。
从10 m L离心管中取发酵24～36 h的乳酸菌菌液，按照3%的接种量接种到MRS液体培养基中，放置在37℃的恒温培养箱中，在12 h和24 h时测D600nm及p H值，筛选出生长速率最高、产酸能力最强的10株菌株。
将初筛代表菌株发酵液按照3%的接种量接种到新的MRS液体培养基中，放置在37℃的恒温培养箱中，3 h测定1次D600nm及p H值，根据10株菌株的生长速率和产酸速率，最终筛选出生长速率快、产酸速率高的1株菌株，为菌株JYZC-LP09。
2、菌株鉴定：
1、形态观察
将JYZC-LP09菌株接种在MRS固体培养基平板上，观察菌落形态特征。JYZC-LP09菌株的宏观形态照片见图1。JYZC-LB06菌落呈白色，圆形，表面湿润，不透明，边缘整齐。菌株的微观形态照片见图2，菌体呈杆状，0.8-0.9 μm×1.4-2.2 μm， 单个或成对排列， 革兰氏阳性。
2、生化鉴定
使用VITEK ANC鉴定卡进行菌株生理生化鉴定
菌株JYZC-LB06生理生化结果见表1。
表1 菌株JYZC-LB06的生理生化特征
。
注：“+”，阳性；“w”，弱阳性；“-”，阴性。
3、分子生物学鉴定
通过将JYZC-LP09菌株送中国工业微生物菌种保藏管理中心进行16S rDNA基因序列和pheS基因序列的鉴定，16SrDNA基因序列如 SEQ ID NO.1 所示， pheS 基因序列如SEQ ID NO.2 所示，鉴定结果显示该菌株属于植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）。
以16SrDNA及pheS基因序列的同源性为基础，用MEGA软件进行系统进化分析，结果得到了如图3及图4所示的系统发育树。
综合形态鉴定、生化鉴定和分子生物学鉴定的结果，JYZC-LP09菌株被鉴定为植物乳植杆菌，命名为植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JYZC-LP09。并对该菌株进行生物保藏，保藏信息如下：
菌种名称：植物乳植杆菌 JYZC-LP09
拉丁名：Lactiplantibacillus plantarum
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2023.7.28
保藏编号：CGMCC No. 28057
实施例2：菌株JYZC-LP09广谱抑菌效果测定：
采用平板对峙实验评估菌株JYZC-LP09对大肠埃希氏菌、肠沙门氏菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌的抑菌率。
采用平板对峙实验评估菌株JYZC-LP09对黄曲霉、钩状木霉、桔青霉、娄地青霉的抑菌率。
抑菌率 = [（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径] × 100%
表2菌株JYZC-LP09对细菌的抑菌效果测定
由表2可知，菌株JYZC-LP09对大肠埃希氏菌、肠沙门氏菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌等多种病原菌均有显著的抑制作用，能够防治动物的多种细菌性疾病。
表3菌株JYZC-LP09对霉菌的抑菌效果测定
由表3可知，菌株JYZC-LP09对多种能够产生霉菌毒素的霉菌具有明显的抑制作用，因此菌株JYZC-LP09在饲料工业以及畜牧业中减少霉菌的侵染方面具有较好的应用前景。
实施例3：菌株JYZC-LP09对玉米青贮饲料中的霉菌毒素降解效果测定：
选用0.6kg受霉菌毒素（包括黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素）污染的玉米青贮饲料，将其平均分为6份。按照《DB37T 3824.4-2019 青贮饲料质量检测与评价技术规范》测量玉米青贮饲料初始的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素浓度，其中黄曲霉毒素浓度为335ppb，玉米赤霉烯酮的浓度为425ppb；呕吐毒素浓度为1575ppb。
试验方法：试验组为向100g玉米青贮饲料中加入4g植物乳植杆菌JYZC-LP09 4g，混合均匀于37℃下脱毒3d；对照组为选取100g玉米青贮饲料不添加菌，于37℃下放置3 d。试验组和对照组均重复3次。
按照《DB37T 3824.4-2019 青贮饲料质量检测与评价技术规范》测量处理3天后各霉菌毒素的含量，并计算其降解率。
其中各霉菌毒素降解率（100%）=（空白对照组3天后各霉菌毒素浓度-试验组3天后各霉菌毒素浓度）/空白对照组3天后各霉菌毒素浓度×100%。
表4各处理组霉菌毒素降解率
由表4可知，本申请的植物乳植杆菌JYZC-LP09对黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的降解率分别为88.2%、82.1%和88.4%。
实施例4：菌剂的制备：
称取植物乳植杆菌JYZC-LP09 4g、地衣芽孢杆菌1g、短乳杆菌3g、戊糖片球菌2g和粪链球菌1g，混合均匀得到菌剂；
其中，植物乳植杆菌JYZC-LP09的活菌数为4×108cfu/g，地衣芽孢杆菌的活菌数为1×108cfu/g；短乳杆菌的活菌数为3×108cfu/g；戊糖片球菌的活菌数为2×108cfu/g；粪链球菌的活菌数为1×108cfu/g。
对比例1
本对比例和实施例4的区别在于，菌剂由短乳杆菌、戊糖片球菌和粪链球菌按质量比3:2:1配制而成，使得菌剂的总活菌数为1.1×109cfu/g；其余与实施例4相同，制备得到菌剂。
对比例2
菌剂由植物乳植杆菌JYZC-LP09、短乳杆菌、戊糖片球菌和粪链球菌按质量比4:3:2:1配制而成，使得菌剂的总活菌数为1.1×109cfu/g；其余与实施例4相同，制备得到菌剂。
对比例3
本对比例和实施例4的区别在于，菌剂由地衣芽孢杆菌、短乳杆菌、戊糖片球菌和粪链球菌按质量比1:3:2:1配制而成，使得菌剂的总活菌数为1.1×109cfu/g；其余与实施例4相同，制备得到菌剂。
试验例：
1. 甜高粱秸秆青贮饲料的制备：
将新鲜甜高粱秸秆用粉碎机切割成约1-2cm的小块，制备成青贮原料。
称取18份，每份1Kg的青贮原料，分别进行以下六组处理：
处理1（对照组）：不进行任何处理；处理2：每千克青贮原料添加0.1g植物乳植杆菌JYZC-LP09；处理3：每千克青贮原料添加0.1g实施例4制备的菌剂；处理4-处理6：每千克青贮原料添加对比例1-3制备的菌剂；每个处理组重复3次。
所有添加剂均在处理前先溶解到100 mL无菌水中，充分混匀后再使用手持式喷雾器均匀地喷洒到已经称重好的甜高粱秸秆青贮原料上，对照组仅喷洒100 mL无菌水。将添加剂与原料充分混匀后，装入青贮专用塑封袋（95 cm×55 cm）中，抽真空并密封，室温（18~28℃）贮藏40d。
2. 甜高粱秸秆青贮饲料发酵品质测定：
青贮40d后开封，按照四分法进行取样，均匀准确地称取代表性样品50 g，按照固液比为1:9的比例加蒸馏水进行打浆，经4层纱布过滤后3900 r/min离心10 min，过滤之后取滤液用于pH、氨态氮/总氮值、有机酸等指标测定；取另一部分样品在105℃条件下烘干4h，测定干物质（DM）含量。之后将其粉碎，过100目筛子，取粉末用于测定可溶性碳水化合物（WSC）和粗蛋白（CP）等指标；另取出100 g用于测定甜高粱秸秆青贮饲料有氧稳定性。
2.1有机酸的测定：
用Prominence LC高效液相色谱仪（日本Shimadzu产品）测定有机酸的含量。
2.2氨态氮含量：
采用苯酚-次氯酸钠比色法测定六个处理的甜高粱秸秆青贮饲料的氨态氮安了。
2.3干物质的测定：
取一定质量的新鲜青贮饲料，测定其重量记为W，将其放入恒温干燥箱，每隔一段时间测定其重量直至其为恒重记为W1，W1/W即为其干物质含量。
2.4粗蛋白的测定：
采用凯氏定氮法测定六个处理的甜高粱秸秆青贮饲料粗蛋白含量。
2.5可溶性碳水化合物（WSC）的测定：
采用硫酸-蒽酮法测定可溶性碳水化合物含量。
2.6甜高粱秸秆青贮饲料有氧稳定性的测定
青贮饲料开封后，取出100 g样品放入250 mL烧杯中，敞口放置，将温度计插入至烧杯内部，环境温度保持在25℃，每日每隔一段时间记录饲料温度和室温，记录样本温度超过室温2℃时的时间。
3.试验结果：
表5甜高粱秸秆青贮饲料发酵品质
由表5可以看出，添加本发明的菌剂的甜高粱秸秆青贮饲料的有机酸含量显著高于对照组和其他处理组，氨态氮含量较对照组显著降低。
表6甜高粱秸秆青贮饲料营养成分及有氧稳定性时间
由表6可以看出，处理2组在甜高粱秸秆青贮原料中加入实施例4制备的菌剂的干物质含量最高，可溶性碳水化合物和粗蛋白含量得到了较大提升，使得青贮饲料的发酵品质明显上升。另外，本发明的青贮饲料发酵剂还大大提高了甜高粱秸秆青贮饲料的有氧稳定时间。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一株植物乳植杆菌，其特征在于，该菌株为植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）JYZC-LP09，其生物保藏号为：CGMCC No. 28057。
2.权利要求1所述的植物乳植杆菌在如下（1）-（4）至少一项中的应用：
（1）抑制细菌的生长；
（2）制备用于防治动物细菌性疾病的产品；
（3）抑制霉菌的生长；
（4）降解青贮饲料中的霉菌毒素。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述细菌为大肠埃希氏菌、肠沙门氏菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌中的一种或多种。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述霉菌为黄曲霉、钩状木霉、桔青霉、娄地青霉中的一种或多种。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述霉菌毒素为黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素中的一种或多种。
6.权利要求1所述的植物乳植杆菌在制备青贮饲料添加剂中的应用。
7.含有权利要求1所述的植物乳植杆菌的菌剂。
8.根据权利要求7所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂由植物乳植杆菌JYZC-LP09、地衣芽孢杆菌、短乳杆菌、戊糖片球菌和粪链球菌按质量比4：1：3：2：1配制而成。
9.根据权利要求8所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中，所述植物乳植杆菌JYZC-LP09的活菌数≥4×108 cfu/g，所述地衣芽孢杆菌的活菌数≥1×108 cfu/g；所述短乳杆菌的活菌数≥3×108 cfu/g；所述戊糖片球菌的活菌数≥2×108 cfu/g；所述粪链球菌的活菌数≥1×108 cfu/g。
10.权利要求7-9任一项所述的菌剂在制备青贮饲料添加剂中的应用。
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Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112956498A (zh) * 2021-02-09 2021-06-15 洛阳糠豪川禾科技有限公司 一种具有杀菌功效的多菌发酵液及其制备方法和应用
CN114672443A (zh) * 2022-05-07 2022-06-28 山东百沃生物科技有限公司 一株具有预防或改善面部泛红和i型玫瑰痤疮功能的植物乳植杆菌
WO2023092852A1 (zh) * 2021-11-29 2023-06-01 暨南大学 一株植物乳植杆菌及其在亚麻木酚素生物转化中的应用
CN116240143A (zh) * 2023-03-21 2023-06-09 黑龙江优贝特乳业有限公司 一株用于促进骨骼发育的植物乳植杆菌及其微囊化制剂、制剂工艺和应用
CN116396894A (zh) * 2023-02-21 2023-07-07 上海承葛医药科技有限公司 一株具有抑制多种常见致病菌生长作用的植物乳植杆菌
JP2023106944A (ja) * 2022-01-21 2023-08-02 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 乳酸菌ｌｑ８０株を特異的に検出するプライマーセット、該プライマーセットを用いたキット及び検出方法
CN116731908A (zh) * 2023-04-28 2023-09-12 河北科技大学 一种植物乳植杆菌mt213及其应用
CN116836830A (zh) * 2023-02-15 2023-10-03 澳优乳业（中国）有限公司 产细菌素的植物乳植杆菌及其应用
WO2023190564A1 (ja) * 2022-03-29 2023-10-05 国立研究開発法人理化学研究所 メタクリル酸の製造方法
CN117070427A (zh) * 2023-10-13 2023-11-17 山东健源生物科技有限公司 一株布氏乳杆菌及其青贮饲料发酵剂
CN117106620A (zh) * 2023-06-19 2023-11-24 四川农业大学 一株植物乳植杆菌及其应用
WO2023227648A1 (en) * 2022-05-24 2023-11-30 Universiteit Antwerpen Bacterial biocontrol agent

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112956498A (zh) * 2021-02-09 2021-06-15 洛阳糠豪川禾科技有限公司 一种具有杀菌功效的多菌发酵液及其制备方法和应用
WO2023092852A1 (zh) * 2021-11-29 2023-06-01 暨南大学 一株植物乳植杆菌及其在亚麻木酚素生物转化中的应用
JP2023106944A (ja) * 2022-01-21 2023-08-02 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 乳酸菌ｌｑ８０株を特異的に検出するプライマーセット、該プライマーセットを用いたキット及び検出方法
WO2023190564A1 (ja) * 2022-03-29 2023-10-05 国立研究開発法人理化学研究所 メタクリル酸の製造方法
CN114672443A (zh) * 2022-05-07 2022-06-28 山东百沃生物科技有限公司 一株具有预防或改善面部泛红和i型玫瑰痤疮功能的植物乳植杆菌
WO2023227648A1 (en) * 2022-05-24 2023-11-30 Universiteit Antwerpen Bacterial biocontrol agent
CN116836830A (zh) * 2023-02-15 2023-10-03 澳优乳业（中国）有限公司 产细菌素的植物乳植杆菌及其应用
CN116396894A (zh) * 2023-02-21 2023-07-07 上海承葛医药科技有限公司 一株具有抑制多种常见致病菌生长作用的植物乳植杆菌
CN116240143A (zh) * 2023-03-21 2023-06-09 黑龙江优贝特乳业有限公司 一株用于促进骨骼发育的植物乳植杆菌及其微囊化制剂、制剂工艺和应用
CN116731908A (zh) * 2023-04-28 2023-09-12 河北科技大学 一种植物乳植杆菌mt213及其应用
CN117106620A (zh) * 2023-06-19 2023-11-24 四川农业大学 一株植物乳植杆菌及其应用
CN117070427A (zh) * 2023-10-13 2023-11-17 山东健源生物科技有限公司 一株布氏乳杆菌及其青贮饲料发酵剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDREA MICAELA DALLAGNOL ET AL.,: "Antifungal and antimycotoxigenic effect of Lactobacillus plantarum CRL 778 at different water activity values", REV ARGENT MICROBIOL., vol. 51, no. 2, pages 164 - 169 *
陈丽澜等: "新疆伊宁人源植物乳植杆菌的体外益生特性研究", 食品工业科技, pages 1 - 14 *

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