CN117210553B - Tmed3作为作用靶点在制备防治心肌重构药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，提出了TMED3作为作用靶点在制备防治心肌重构药物中的应用，公开了TMED3在制备防治心肌重构药物中的应用，所述TMED3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的TMED3能够显著抑制心肌重构的发生发展，为心肌重构的预防和治疗提供了一个新的靶点。

Description

TMED3作为作用靶点在制备防治心肌重构药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及TMED3作为作用靶点在制备防治心肌重构药物中的应用。

背景技术

心肌重构是心肌组织从分子水平、细胞水平到心脏结构均发生变化的复杂病理过程，临床表现为心肌损伤所导致的心脏大小、质量及收缩/舒张功能的改变。心肌重构是几乎所有类型的心血管疾病共有的组织病理学特征，被认为是治疗高血压、心肌病和慢性心力衰竭患者的主要治疗目标，但是目前临床上缺乏专一有效治疗心肌重构的药物，因此，深入探究心肌重构的发病机制，挖掘有效作用靶点，研发防治心肌重构的新药物，对于治疗心血管疾病、延长患者的生存时间和改善重症患者的生存质量具有重要价值。

跨膜p24运输蛋白(transmembrane p24 trafficking proteins,TMEDs)，又称为p24家族蛋白，是一类分子量约为24KD的I型跨膜蛋白，与蛋白质在细胞器与细胞器之间或与细胞质膜间的转运相关。脊椎动物的TMED家族蛋白包含10个成员，分为4个亚家族：α、β、γ和δ。大部分TMEDs定位于COPII、COPI、内质网和高尔基体上；也有一些成员定位于内体、过氧化物酶体或分泌颗粒的膜结构上。所有的TMEDs都由相似的结构域组成，包括N端的GOLD结构域和CC螺旋、中间的跨膜区域和C端的胞质结构域(13-20AAs)。其中GOLD结构域和CC螺旋共同组成了腔内结构域，负责调节蛋白质与蛋白质的相互作用，促进货物蛋白的选择与聚集；C端的胞质结构域可能与COPII或COPI复合物相互作用，促进蛋白质的转运。TMED3是目前发现的TMEDsγ亚家族中的成员之一，在调节蛋白转运过程中发挥重要作用。已有研究证实TMED3的异常表达会导致蛋白转运失控，与机体的正常发育和多种疾病的发生发展密切相关，如：TMED3的敲降能够显著抑制子宫内膜癌的发生发展；在乳腺癌、骨肉瘤等肿瘤中TMED3能够显著促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭等；然而TMED3在心肌重塑中的功能尚未见相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了TMED3作为作用靶点在制备防治心肌重构药物中的应用，为心肌重构的预防和治疗提供了一个新的靶点。

本发明的技术方案是这样实现的：第一，本发明提供了TMED3在制备防治心肌重构药物中的应用。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述TMED3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

第二，本发明提供了促进TMED3高表达的药物在制备防治心肌重构药物中的应用。

第三，本发明提供了一种预防和治疗心肌重构的药物，所述药物包括TMED3蛋白。

在以上技术方案的基础上，优选的，还包括促进TMED3高表达的药物。

在以上技术方案的基础上，优选的，还包括含有TMED3蛋白的慢病毒载体。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述慢病毒载体包括重组慢病毒载体PTK881-TMED3和包装质粒。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述包装质粒包括NRF质粒和VSVG质粒。

本发明的TMED3作为作用靶点在制备防治心肌重构药物中的应用相对于现有技术具有以下有益效果：

(1)本发明首次发现TMED3在心肌重构中的功能，实验结果显示，TMED3在心肌重构细胞模型和动物模型中的表达显著降低，增加TMED3的表达可逆转心肌重构的发生发展，揭示其有可能作为心肌重构的治疗靶点。由此可见，促进TMED3表达的药物或基因疗法可用于对心肌重构疾病的治疗。总的来说，本发明为心肌重构的治疗提供了新的药物靶点。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为不同MOI的慢病毒转导心肌细胞48h后TMED3的表达结果图；

图2为各组心肌细胞大小的差异图(×400)；

图3为各组细胞中心肌重构相关基因mRNA水平的表达差异图；

图4为各组细胞中心肌重构相关基因蛋白水平的表达差异图；

图5为各组小鼠心脏组织的超声心动结果图；

图6为各组小鼠心重与体重的比值(HW/BW)、肺重与体重的比值(LW/BW)、及心重与胫骨长度的比值(HW/TL)的统计分析结果图；

图7为各组小鼠心脏组织切片H&E染色结果图(×200)；

图8为各组小鼠心脏组织中心肌重构相关基因mRNA水平的表达差异图；

图9为各组小鼠心脏组织中心肌重构相关基因蛋白水平的表达差异图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施方式，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种能够用于制备防治心肌重构药物的新靶点TMED3，TMED3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。上调TMED3的表达水平，促进TMED3高表达可以缓解抑制心肌重塑相关蛋白的转运失控，从而发挥治疗心肌重构的作用。本发明还提供了一种预防和治疗心肌重构的药物，药物包括TMED3蛋白、促进TMED3高表达的药物和含有TMED3蛋白的慢病毒载体中的一种或多种组合。慢病毒载体包括重组慢病毒载体PTK881-TMED3和包装质粒，所述包装质粒包括NRF质粒和VSVG质粒。

实施例1TMED3质粒的构建及慢病毒包装

1、TMED3表达序列的合成

在生工生物工程(上海)股份有限公司合成小鼠TMED3的CDS片段(共666bp)，并在片段的上游和下游分别加入XbaI(5`-TCTAGA-3`)酶切位点，TMED3的CDS片段核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2、慢病毒载体及包装质粒提取

从-80℃冰箱中分别取出慢病毒载体PTK881、包装质粒NRF和VSVG的甘油菌置于冰上融化，融化后分别取10μL接种于3mL含有氨苄抗性的LB液体培养基中并做好标记，于37℃恒温摇床上200rpm/min振荡培养12-16h。第二天，分别取100μL培养的菌液接种于100mL含有氨苄抗性的LB液体培养基中并做好标记，于37℃恒温摇床上200rpm/min振荡培养12-16h。质粒大提试剂盒购自天根生化科技有限公司，按照其说明书进行质粒提取，得到PTK-881慢病毒表达质粒和NRF、VSVG慢病毒包装质粒。利用微量定量仪测定质粒浓度，电泳鉴定质粒质量后做好标记并置于-20℃中保存。

3、构建PTK881-TMED3慢病毒表达质粒

①酶切、连接和转化

用限制性核酸内切酶XbaI在37℃水浴锅中酶切PTK-881载体1-2h，酶切结束后用1.0％琼脂糖凝胶分离酶切产物。电泳结束后，在凝胶成像仪下切割收集线性的PTK-881载体。利用天根琼脂糖凝胶回收试剂盒回收凝胶中的线性PTK-881载体，并用微量定量仪测定浓度。按照载体：片段＝1：3的摩尔比进行连接，并将连接体系置于16℃PCR仪中连接16h。随后在超净工作台中进行转化。从-80℃冰箱中取出HB101感受态细胞置于冰上融化，将连接产物加到感受态细胞中并轻轻混匀，置于冰上孵育30min。30min后置于42℃水浴中热激90s，热激后立即置于冰上冷却5min。随后加入500μL无抗性的LB液体培养基并置于37℃恒温摇床中200rpm/min振荡培养60min。在此期间，将含有氨苄抗性的LB固体培养基置于37℃细菌培养箱中预热。振荡培养结束后，3000rpm/min室温离心2min，弃大部分上清，留下50-80μL上清重悬菌液。将重悬后的菌液螺旋式滴入预热的固体培养基中并涂布均匀，在37℃培养箱中正置培养30min后倒置培养12-16h。

②挑单克隆、提质粒、酶切验证和测序

挑取10个左右的单克隆置于3mL含有氨苄抗性的LB液体培养基中，在37℃恒温摇床中200rpm/min振荡培养12-16h。振荡培养结束后，分别取1.5mL菌液用购自天根生化科技有限公司的质粒小提试剂盒抽提质粒，按照其说明书进行质粒提取，对提取后的质粒进行酶切验证，电泳检测结果。选取酶切验证结果正确的质粒送测序，将测序结果正确的质粒对应的菌液进行质粒大提，利用微量定量仪测定质粒浓度，电泳鉴定质粒质量后做好标记并置于-20℃中保存。

4、慢病毒的包装及浓缩

①慢病毒的包装

选择HEK293T细胞作为慢病毒包装细胞。转染前两天将处于对数期的细胞按1.3-1.5×10⁶的数量接种于10cm的细胞培养皿中并加入10mL含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基，在37℃、5％CO₂的细胞培养箱中进行培养，待细胞的汇合度达到70％-80％时进行转染。转染前配制转染复合物(按10cm培养皿中细胞的转染量计算)：取慢病毒重组质粒(PTK881-TMED3)或者重组质粒的对照质粒(PTK881)12μg，加入混有8μgNRF和4μgVSVG两种慢病毒包装质粒的400μL无血清培养基中混匀作为A液；取72μLPEI转染试剂于400μL无血清培养基中混匀作为B液；混匀后的A液和B液室温放置5min，随后将B液加入A液中涡旋震荡10s，混匀后的转染复合物室温孵育25min。在孵育的过程中，弃去待转染细胞的上清并加入8mL无血清的DMEM高糖培养基，待转染复合物孵育完毕后螺旋式转圈加入待转染的细胞中，放置于细胞培养箱中培养6h之后将无血清培养基更换为完全培养基，培养72h。

②慢病毒的回收浓缩及滴度测定

使用Lenti-Pac^TM慢病毒浓缩试剂盒浓缩病毒液，具体操作步骤如下：收集培养72h后HEK293T细胞的上清，室温1000rpm/min离心5min，去除细胞碎片；取上清并用0.45μm的滤器过滤，得到含慢病毒颗粒的上清液。按照试剂盒说明书中的比例(上清液：浓缩液＝5:1)加入慢病毒浓缩液，上下颠倒混匀，放置于4℃冰箱中，每隔15min上下颠倒充分混匀一次，重复3次，然后4℃静置过夜；第二天取出浓缩处理之后的病毒混合液，3500g 4℃离心30min，离心后小心弃掉上清，尽可能多的保留病毒沉淀；用无血清培养基重悬病毒沉淀(无血清培养基的用量为浓缩之前上清液体积的1/10-1/100)并按每管50μL的体积进行分装并置于-80℃低温冰箱中保存，避免反复冻融。每一批浓缩病毒留10μL的量用QuickTiter^TMHIVLentiviral Quantitation Kit(HIV p24 ELISA)慢病毒滴度测定试剂盒测定浓缩病毒液的滴度。

实施例2TMED3抑制心肌重构的体外实验

本实施例中采用小鼠原代心肌细胞为实验对象，分为Control、TMED3、Control+AngII、TMED3+AngII四组，通过对各组进行心肌重构表型和心肌重构相关标志物的分子水平等进行检测，在体外证实TMED3对心肌重构的抑制作用。

1、原代心肌细胞分离提取

选择出生1-2天C57BL/6小鼠20-30只，解剖取出心脏后清洗、消毒、剪碎、消化，选用70目孔径的细胞筛过滤消化后的细胞，过滤后的细胞采用差速贴壁(90min)的方式获取原代心肌细胞，得到的细胞计数铺板并用含0.1μM Brdu的F12完全培养基进行培养。

2、TMED3慢病毒转导原代心肌细胞MOI的确定

将提取的原代心肌细胞以2×10⁵个/孔的密度接种于24孔板中，细胞铺板后置于37℃、5％CO₂培养箱中培养24h，24h后按照MOI＝12.5、25、50、100的比例进行TMED3慢病毒的转导(MOI＝0组加入对照慢病毒)，培养48h后弃原培养基，每孔加入500μL 1×PBS溶液洗1次，弃PBS，每孔加入500μL Trizol试剂，置于4℃冰箱的摇床中摇20min。20min后反复吹打孔板底部，并将Trizol移至无核酸酶的1.5mL EP管中，加入1/5Trizol体积的氯仿即100μL氯仿，上下轻轻颠倒混匀，冰上放置10min。随后12000g 4℃离心7min。离心结束后，取水相上清加入预冷的等体积异丙醇，上下颠倒混匀，置于-20℃冰箱中静置1h。1h后12000g 4℃离心10min，EP管管底会出现白色沉淀。弃上清，加入1mL 75％的乙醇上下颠倒清洗白色沉淀，12000g 4℃离心10min。弃尽上清，EP管敞口室温放置5min挥发残留的乙醇，随后加入适量DEPC水溶解RNA沉淀。

用微量定量仪测定RNA含量并电泳鉴定RNA结构完整后，用逆转录试剂盒(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)合成cDNA。以合成的cDNA为模板，依据ChamQ SYBR qPCRMasterMix试剂盒说明书进行实时荧光定量PCR检测(β-actin为内参基因)。Realtime PCR引物序列如下：TMED3，F：5′-CTCCG CACGCTTCATCCTTC-3′，R：5′-TCACGCCCTGCTCCACCTCT-3′；β-actin，F：5`-TCAAGAAGGTGGTGAAGCAG-3`，R：5`-AGGTGGAGGAGTGGGTGTCG-3`，结果见图1。

图1结果显示：与MOI＝0(即空白对照组)组相比，按照MOI＝12.5、25、50、100转导后的心肌细胞中TMED3的表达均显著升高。当MOI＝50、100时，TMED3的表达较高，但两组中TMED3的表达量相近，表明原代心肌细胞转导TMED3慢病毒的最佳MOI为50。

3、心肌重构细胞模型构建

利用10μM的Ang II处理24h诱导原代心肌细胞构建心肌重构细胞模型。

4、细胞分组处理

Control组：对照慢病毒转导48h后不给予AngII刺激；

TMED3组：TMED3慢病毒转导48h后不给予AngII刺激；

Control+AngII组：对照慢病毒转导48h后给予AngII处理24h；

TMED3+AngII组：TMED3慢病毒转导48h后给予AngII处理24h。

二、心肌重构表型和相关标志物分子水平检测

1、细胞免疫荧光实验

用1×PBS溶液清洗待检测细胞(细胞实验前种于细胞爬片上)后，依次进行固定、透膜、鬼笔环肽染色、DAPI染色及封片，封片后用激光共聚焦显微镜观察并采集图像，并检测各组心肌细胞大小的差异，结果见图2。

由图2可知：从免疫荧光结果可以看出，Control组和TMED3组之间心肌细胞的大小没有显著性差异。与Control组相比，Control+AngII组心肌细胞明显增大。而TMED3+AngII组相比于Control+AngII组，心肌细胞的肥大程度明显减轻，说明TMED3的过表达能有效缓解心肌细胞的肥大。

2、实时荧光定量PCR实验(Realtime PCR)

根据realtime PCR引物设计原则，检索基因数据库设计并合成待检测基因的引物(以β-actin作为内参基因)；提取待检测心肌细胞的总RNA，测定含量并鉴定质量后合成cDNA，随后在反应管中依次加入cDNA、引物、SYBR Green Realtime PCR Master Mix、去离子水配制20μL realtime PCR反应体系，随后置于Bio-Rad CFX 96Realtime-PCR仪中进行PCR反应，利用仪器自带软件进行数据分析，并检测各组细胞中心肌重构相关基因mRNA水平的表达差异，结果见图3。Realtime PCR引物序列如下：ANP，F：5`-ATACAGTGCGGTGTCCAACA-3`，R：5`-AGCCCTCAGTTTGCTTTTCA-3`；BNP，F：5`-GTCCCAGATGATTCTG TTTC-3`，R：5`-GCCATTTCCTCCGACTTTT-3`；β-MHC，F：5`-TGACAGTGGGA AAGGCAAA-3`，R：5`-ACAAAGTGAGGATGGGTGG-3`：β-actin，F：5`-ATCGTG CGTGACATCAAAGA-3`，R：5`-CAAGAAGGAAGGCTGGAAAA-3`。

由图3可知：与Control组相比，Control+AngII组中心肌重构相关基因ANP、BNP、β-MHC的表达显著升高，说明AngII成功诱导心肌细胞重构，而TMED3组相比与Control组心肌重构相关基因的表达显著下降，TMED3+AngII组与Control+AngII组相比，心肌重构相关基因的表达也是显著下降，说明TMED3的过表达能显著抑制心肌重构的发生。

3、免疫印迹实验(Westernblot)

提取待检测心肌细胞的蛋白并用BCA法测定含量，取10-20μg蛋白加入5×LoadingBuffer后高温使其变性，随后将待测样品依次进行上样、电泳分离、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育，最后用ECL混合液进行化学发光，利用Image-Lab控制曝光时间并采集数据，检测各组细胞中心肌重构相关基因蛋白水平的表达差异，结果见图4。

由图4可知：与Control组相比，Control+AngII组中心肌重构相关基因ANP、BNP、β-MHC的表达显著升高，说明AngII成功诱导心肌细胞重构，而TMED3组相比与Control组心肌重构相关基因的表达显著下降，TMED3+AngII组与Control+AngII组相比，心肌重构相关基因的表达也是显著下降，说明TMED3的过表达能显著抑制心肌重构的发生。

实施例3TMED3抑制心肌重构的体内实验

本实施例中采用C57BL/6小鼠为实验对象，分为Control+sham、TMED3+sham、Control+cardiac remodeling、TMED3+cardiac remodeling四组，通过对各组小鼠进行超声心动图、心脏组织形态学分析、心肌重构表型及心肌重构相关标志物分子水平等进行检测，在体内证实TMED3对心肌重构的抑制作用。

一、动物分组及心肌重构造模

1、AAV9-TMED3腺病毒

由吉玛基因公司提供1×10¹¹pfu/mL，尾静脉注射100μL/只。

2、动物分组

选取8-10周龄的C57BL/6雄性小鼠作为研究对象，随机分为：Control+sham、TMED3+sham、Control+cardiac remodeling、TMED3+cardiac remodeling组，每组15只。

2、心肌重构造模

利用0.5％戊巴比妥钠(按0.02mL/g的比例)对小鼠进行腹腔注射麻醉，麻醉后气管插管，并连接心电图和小动物呼吸机。胸部备皮，于胸骨左侧纵向切口，钝性分离皮下组织和肌层，剪断第二肋骨，稍扩张切口，分离组织暴露出主动脉弓的位置用6-0号丝线结扎主动脉弓，造成升主动脉环形缩窄，检查无出血后逐层缝合。

3、分组处理

Control+sham组：对照腺病毒尾静脉注射一周后穿线不结扎；

TMED3+sham组：TMED3腺病毒尾静脉注射一周后穿线不结扎；

Control+cardiac remodeling组：对照腺病毒尾静脉注射一周后结扎升主动脉弓；

TMED3+cardiac remodeling组：TMED3腺病毒尾静脉注射一周后结扎升主动脉弓。

所有动物标准饮食，饲养条件相同。术后4周动物处死取材检测相关指标。

二、超声心动图实验

用2％异氟醚气体麻醉小鼠，当小鼠处于浅麻醉状态后迅速调低异氟醚的流速，直至小鼠心率控制在400-500次/min左右为宜，体温维持在37℃。采用超高分辨率小动物超声影像系统(Vevo2100)，通过胸骨旁长轴和短轴切面分析左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室射血分数(LVEF)和缩短分数(FS)等参数，结果见图5。

由图5结果可知：超声结果显示，Control+sham组和TMED3+sham组小鼠之间的心脏功能没有明显差异。与Control+sham组相比，Control+cardiac remodeling组小鼠心功能明显受损。其中LVEDd和LVESd这两个指标的值在Control+cardiac remodeling组中均显著降低，而LVEF和FS这两个指标的值均显著升高。而与Control+cardiac remodeling组相比，TMED3+cardiac remodeling组的心功能明显改善，其中LVEDd和LVESd这两个指标的值均明显升高，而LVEF和FS这两个指标的值均明显降低。说明TMED3的过表达对心肌重构有一定的改善作用。

三、心脏组织形态学分析

1、体重(BW)、心重(HW)、肺重(LW)、胫骨长度(TL)的统计分析

各组小鼠术后6周处死，利用电子天平称取小鼠心脏组织重量(HW)和肺组织的重量(LW)，利用卡尺测量小鼠胫骨的长度(TL)，分别与体重(BW)相比，以HW/BW、LW/BW以及HW/TL作为心肌重构的定量指标，结果见图6。

由图6结果可知：从统计结果可以看出，Control+sham组和TMED3+sham组小鼠之间HW/BW、LW/BW、HW/TL这三个比值都没有明显差异，与Control+sham组相比，Control+cardiac remodeling组小鼠HW/BW、LW/BW、HW/TL这三个比值明显增大，说明小鼠心脏体积明显增大。而TMED3+cardiac remodeling组相比于Control+cardiac remodeling组小鼠HW/BW、LW/BW、HW/TL这三个比值显著降低，说明TMED3的过表达显著抑制了小鼠心肌重构的发生。

2、H&E染色

待检测的心脏组织石蜡切片复水后，依次进行：苏木素染液染色、1％盐酸乙醇分化、伊红染液染色、脱水、透明、封片，封片后用光学显微镜观察并采集图像，并检测各组小鼠心脏组织形态及心肌细胞大小的差异，结果见图7。

由图7结果可知：从染色结果可以看出，Control+sham组和TMED3+sham组小鼠心脏细胞形态规整，胞核大小均匀，胞浆着色一致。而Control+cardiac remodeling组小鼠心肌细胞明显变大，排列紊乱，肌纤维断裂。TMED3+cardiac remodeling组相比于Control+cardiac remodeling组小鼠心肌细胞大小和排列紊乱情况均有所改善。说明TMED3的过表达能显著抑制心肌重构的发生。

四、心肌重构相关标志物水平检测

1、实时荧光定量PCR实验(Realtime PCR)

根据realtime PCR引物设计原则，检索基因数据库设计并合成待检测基因的引物(以β-actin作为内参基因)；提取待检测心脏组织的总RNA，测定含量并鉴定质量后合成cDNA，随后在反应管中依次加入cDNA、引物、SYBR Green Realtime PCR Master Mix、去离子水配制20μL realtime PCR反应体系，随后置于Bio-Rad CFX 96Realtime-PCR仪中进行PCR反应，利用仪器自带软件进行数据分析，并检测各组小鼠心脏组织中心肌重构相关基因mRNA水平的表达差异，结果见图8。

图8结果显示：与Control+sham组相比，Control+cardiac remodeling组小鼠心脏组织中心肌重构相关基因ANP、BNP、β-MHC的表达显著升高，说明心肌重构模型的成功构建，而TMED3+sham组相比与Control+sham组心肌重构相关基因的表达显著下降，TMED3+cardiac remodeling组与Control+cardiac remodeling组相比，心肌重构相关基因的表达也是显著下降，说明TMED3的过表达能显著抑制心肌重构的发生。

2、免疫印迹实验

提取待检测心脏组织的蛋白并用BCA法测定含量，取10-20μg蛋白加入5×LoadingBuffer后高温使其变性，随后将待测样品依次进行上样、电泳分离、转膜、封闭、一抗孵育、二抗孵育，最后用ECL混合液进行化学发光，利用Image-Lab控制曝光时间并采集数据，并检测各组小鼠心脏组织中心肌重构相关基因蛋白水平的表达差异，结果见图9。

图9结果显示：与Control+sham组相比，Control+cardiac remodeling组小鼠心脏组织中心肌重构相关基因ANP、BNP、β-MHC的表达显著升高，说明心肌重构模型的成功构建，而TMED3+sham组相比与Control+sham组心肌重构相关基因的表达显著下降，TMED3+cardiac remodeling组与Control+cardiac remodeling组相比，心肌重构相关基因的表达也是显著下降，说明TMED3的过表达能显著抑制心肌重构的发生。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.促进TMED3高表达的药物在制备防治心肌重构药物中的应用，其特征在于：所述药物是含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示TMED3的重组慢病毒载体PTK881-TMED3和包装质粒。

2.如权利要求1所述的促进TMED3高表达的药物在制备防治心肌重构药物中的应用，其特征在于：所述包装质粒是NRF质粒和VSVG质粒。