CN115684598A - Wwp1在预防和/或治疗心力衰竭疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及WWP1在预防和/或治疗心力衰竭疾病药物中的应用，属于分子生物学和医学技术领域。通过心衰心脏组织中WWP1的表达水平与心肌细胞重塑标志基因表达水平的相关性试验，证实了WWP1的表达水平在心衰心脏组织样本中明显高于正常心脏组织，即WWP1的表达与心衰程度呈正相关。在此基础上，WWP1可作为用于筛选预防和/或治疗心力衰竭疾病的药物靶点；且WWP1可作为预防和/或治疗心力衰竭疾病治疗靶点或作为心力衰竭疾病诊断靶点。

Description

WWP1在预防和/或治疗心力衰竭疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及WWP1在预防和或治疗心力衰竭疾病药物中的应用，属于分子 生物学和医学技术领域。

背景技术

心力衰竭(心衰)是各种心血管事件的最终结果和各种心脏异常的累积效 应，最终导致心脏泵血功能下降。心血管患者一旦出现心衰的临床表现，提示 预后差，心衰程度越重，死亡风险越高。尽管治疗方法不断进步，心衰仍然是 全世界发病率和死亡率较高的疾病之一。为了预防和治疗心衰，针对其发病机 制寻找新的靶点及相应药物显得格外重要。

心衰的病理生理机制主要是神经内分泌系统的异常激活和血流动力学障 碍。神经内分泌系统[主要是交感神经系统和肾素-血管紧张素-醛固酮系统 (renin-angiotensinald-osterone system，RAAS)]的异常激活，参与并促进心肌 重构，是心衰不断进展恶化的基础。血流动力学障碍表现为心排血量减少和肺 循环或体循环淤血，其严重程度常与心衰的症状、体征相一致。病理性心肌肥 大是导致心衰的主要原因之一。压力过负荷、心肌梗塞和高血压等多种外在和 内在刺激都会引起心肌肥大，初始心脏特征为心室腔变小、心室壁变厚。在细 胞层面，其主要表现为心肌细胞表面积增大，蛋白如心钠肽(atrial natriuretic peptide，ANP)、脑钠肽(brain natriuretic polypeptide，BNP)、β肌球蛋白重链 (β-myosin heavy chain，β-MHC)的表达增多，随着疾病进程的发展，最终导致单个心肌细胞的延长而变薄，心室壁扩张且变薄，造成收缩功能障碍和心力 衰竭。由于心衰具有阶段性特点，病情一旦进入到下一阶段便难以逆转，因此， 心衰的防控重点在于预防，例如控制病理性心肌肥大进程能够有效防止心衰的 发生。

当心肌细胞受到外界的机械张力刺激或神经体液调节时，细胞能通过内分 泌、旁分泌或自分泌等形式释放各种因子，它们与心肌细胞膜上存在相应受体 相互作用，启动心肌细胞的肥大反应过程。在心肌肥大中可能存在3种跨膜信 号装置起到信号开关的作用：(1)G蛋白耦联的受体，如AngⅡ的AT1受体， ET-1的ETA受体及NE、PE等的受体。(2)具有酪氨酸激酶活性的生长因子受 体，除TGF-β和IGF-1外，大多数生长因子如HBF、FGF、PDGF的受体都是 跨膜的受体酪氨酸激酶。(3)可利用胞质非受体酪氨酸激酶的细胞因子受体。 心肌肥厚时，细胞内信号传递十分复杂，介导心肌细胞肥大的信号转导通路有 多条，且各个通路之间又存在千丝万缕的联系，形成错综复杂的信息网络。因 此，解析心肌病理性重塑的关键通路对于治疗预防和治疗病理性心肌重塑意义 重大。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供WWP1在预防和或治疗心力衰竭疾病药 物中的应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

WWP1在筛选用于预防和/或治疗心力衰竭疾病的药物靶点的用途。

WWP1作为预防和/或治疗心力衰竭疾病治疗靶点或作为心力衰竭疾病诊断 靶点的用途。

进一步的，所述心力衰竭疾病为压力过负荷条件所导致的心力衰竭疾病。

一种WWP1的抑制剂在制备预防和/或治疗心力衰竭疾病药物中的用途。

进一步的，所述WWP1的抑制剂为WWP1小干扰RNA。

一种携带WWP1小干扰RNA的腺相关病毒在预防和/或治疗心力衰竭疾病 中的用途。

进一步的，所述携带WWP1小干扰RNA的腺相关病毒中，所述腺相关病 毒的载体为具有心肌特异启动子启动的腺相关病毒载体。

进一步的，所述腺相关病毒的载体为AAV9载体。

进一步的，所述携带WWP1小干扰RNA的腺相关病毒使用时采用静脉注 射方式。

进一步的，所述WWP1小干扰RNA的核苷酸序列为如SEQ NO.1所示。

有益效果

通过心衰心脏组织中WWP1的表达水平与心肌细胞重塑标志基因表达水平 的相关性试验，证实了WWP1的表达水平在心衰心脏组织样本中明显高于正常 心脏组织，即WWP1的表达与心衰程度呈正相关。在此基础上，WWP1可作为 用于筛选预防和/或治疗心力衰竭疾病的药物靶点；且WWP1可作为预防和/或 治疗心力衰竭疾病治疗靶点或作为心力衰竭疾病诊断靶点。

进一步的，可将WWP1的抑制剂作为预防和/或治疗心力衰竭疾病药物。在 此基础上，可将WWP1小干扰RNA作为WWP1的抑制剂。

进一步的，通过腺相关病毒包装WWP1小干扰RNA尾静脉注射试验，可 缓解主动脉缩窄手术(TAC)导致的心脏指标变化，说明WWP1小干扰RNA 体外给药能够缓解TAC导致的心肌肥大，预防心衰的发生。

附图说明

图1为实施例1中TAC小鼠心脏组织Wwp1蛋白表达变化。

图2为实施例1中免疫组织化学分析TAC小鼠心脏组织Wwp1蛋白表达变 化。

图3为实施例2中Wwp1敲除小鼠TAC后心脏组织Wwp1表达检测及量化 分析。

图4为实施例2中Wwp1敲除小鼠TAC后心脏组织Wwp1表达切片分析。

图5为实施例2中Wwp1基因敲除对小鼠TAC后心脏结构的影响。

图6为实施例2中Wwp1基因敲除对小鼠TAC后心肌肥大的影响。

图7为实施例2中Wwp1基因敲除对小鼠TAC后心脏功能EF和FS的影响。

图8为实施例2中Wwp1基因敲除对小鼠TAC后心肌重塑标志基因表达的 影响。

图9为实施例3中蛋白免疫印迹法检测Wwp1小干扰RNA的效果。

图10为实施例3中Wwp1小干扰RNA病毒结构示意图。

图11为实施例3中Wwp1小干扰RNA对小鼠TAC后心脏结构的影响。

图12为实施例3中Wwp1小干扰RNA对小鼠TAC后心脏大小的影响。

图13为实施例3中Wwp1小干扰RNA对小鼠TAC后心脏功能的影响。

图14为实施例3中Wwp1小干扰RNA对小鼠TAC后心肌重塑标志基因 表达的影响。

图15为实施例4中心衰心脏组织Wwp1蛋白表达水平及量化分析。

图16为实施例4中心衰心脏组织Wwp1蛋白表达切片分析。

图17为实施例4中心衰心脏组织心肌重塑标志基因表达的影响。

图18为实施例4中心肌重塑标志基因表达水平的相关性分析。

具体实施方式

以下实验例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实验例中的 实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实验例中所用的试验材料，如 无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买所得。以下实验例中的定量试实验， 均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1、Wwp1在TAC致心肌肥大模型小鼠心脏中表达变化

1、小鼠TAC手术建立病理性心肌肥大模型

C57BL/6小鼠(野生型(WT)小鼠)，购自北京维通利华实验动物技术有 限公司，SPF级。

6-8周龄雄性C57BL/6小鼠，麻醉后暴露气管，对小鼠进行气管插管，接呼 吸机控制呼吸，呼吸参数：潮气量以肺部扩张为准9-11mL，呼吸比：1:1，频 率：90-100开胸，小鼠仰卧位固定于操作台恒温垫(30℃)，清洁手术区域，双 目体视显微镜下操作，取胸前正中切开皮肤，上至胸骨上窝，下至第二肋骨水 平。用牵引器拉开纵隔4～6mm宽，用无齿显微镊分离胸腺暴露主动脉弓，用 5号丝线在右颈总动脉和左颈总动脉分出中间处，用25～27G垫扎针头(直径 1.2～1.6mm)垫扎(可造成60％左右狭窄)，对主动脉及垫扎针进行结扎，结扎确实后抽出垫扎针，检查主动脉弓近心端波动增强，逐层关胸，缝皮。手术切 口处用红霉素眼膏涂敷并皮下注射0.5mL生理盐水，待小鼠自主呼吸恢复后脱 机拔管，移至加热垫继续观察至苏醒。假手术组(Sham)开胸但不进行主动脉 弓结扎。

2、检测指标

组织蛋白质提取及检测

剪取20mg心脏组织称重，放入1.5mL EP管中；加入600uL提前配制好 的蛋白裂解液((50mM Tris,pH 7.5,250mM NaCl,0.1％sodium dodecyl sulfate,2 mMdithiothreitol,0.5％NP-40,1mM PMSF，1mM protease inhibitor cocktail)，剪 碎，冰浴中超声匀浆(每次2-3s，重复3-4次)；12000g，4℃，离心15min， 取上清于一新EP管中；加入1/5体积的5×上样缓冲液，用移液器吹打充分混 匀，100℃煮沸10min，变性；利用蛋白免疫印迹法(Western Blot，WB)检测Wwp1表达。

免疫组化染色

剪取心脏组织用多聚甲醛固定1天，20％的乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙液 脱钙3天(4℃摇床)，蔗糖脱水，包埋剂包埋、切片，烤片1-2小时，磷酸缓冲 盐溶液(PBS)小心洗片，将PBS滴加到切片上，用吸水纸将水吸走，抗原修 复，山羊血清封闭1小时，一抗孵育过夜，PBS洗3遍，二抗室温1小时，PBS 洗3遍，DAB显色。

TAC小鼠心脏组织Wwp1蛋白表达结果如图1所示，免疫组织化学分析TAC 小鼠心脏组织Wwp1蛋白表达变化如图2所示，结果表明，TAC后小鼠心脏组 织中Wwp1表达增加

实施例2、Wwp1敲除对小鼠TAC后的表型影响

1、Wwp1基因敲除小鼠的获得

Wwp1全身敲除小鼠(KO小鼠)购买自南京大学模式动物中心。如图3所 示，Wwp1全身敲除后心脏组织内无Wwp1表达，且TAC之后其蛋白水平亦不 再增加。

2、小鼠心脏组织病理学分析

颈椎脱臼法处死小鼠(Wwp1全身敲除小鼠)，将小鼠心脏取下称重、拍照； 将小鼠心脏固定于组织固定液中，48小时后将心脏分别进行石蜡包埋和冰冻切 片包埋剂包埋，进行石蜡切片和冰冻切片，分别用于苏木精(HE)染色、噻唑 蓝(MTT)染色和麦胚凝集素(WGA)染色。

3、超声分析小鼠心脏功能

将小鼠(Wwp1全身敲除小鼠)在小动物麻醉机容器内麻醉(2％(体积) 异氟烷混合0.5L/min的氧气)；麻醉后，利用脱毛剂对小鼠胸部脱毛；小鼠置 于内嵌心电监护的保温台，并在四肢涂抹电极胶；利用Vevo公司随机配置的 770B 30MHz的超声探头进行小鼠心脏功能测试，利用B-Model中二维图像从 小鼠心脏短轴获取图像，利用系统自带软件获取超声心动图心功能观察指标： 室间隔收缩末期厚度(Systolic Interventricular SeptalThickness，IVSs)；左室舒 张末期后壁厚度(Diastolic Left Ventricular PosteriorWall Thickness，LVPWd)和 左室收缩末期后壁厚度(Systolic Left VentricularAnterior Wall Thickness， LVPWs)；左室舒张末期内径(Diastolic Left VentricularInternal Diameter， LVIDd)和左室收缩末期内径(Systolic Left VentricularInternal Diameter， LVIDs)；左室舒张末期容积(Diastolic Left Ventricular Volume，LV Vold)和左 室收缩末期容积(Systolic Left Ventricular Internal Volume，LVVols)；根据容量 公式EF＝[(LV Vold－LV Vols)/LV Vold]×100％计算左室射血分数EF，根据公 式FS＝[(LVIDd–LVIDs)/LVIDd]×100％计算短轴缩短率FS。

4、小鼠心肌重塑标志基因检测

组织RNA的提取

剪取约15mg心脏组织加入含1mL Trizol试剂的1.5mL EP管中；用电动 匀浆仪将组织充分匀浆，室温静置5min后；加入1/5Trizol体积的氯仿(0.2mL/1 mL Trizol)，剧烈振荡EP管15s，室温静置2-3min；12000g，4℃，离心15min， 取上层水相置于一新EP管中；加入等体积(0.5mL)异丙醇，轻微振荡15s， 室温静置10min；12000g，4℃，离心10min，弃上清留沉淀；加入1mL 75％ (体积)的乙醇，上下颠倒EP管数次，7500g，4℃，离心5min，弃上清； 室温晾5-10min至半干，得到RNA，加入适量灭菌DEPC水使RNA重新溶解； 取1μL溶解好的RNA，利用超微量紫外分光光度计(Q5000)进行浓度测定 及质量检测(浓度>200ng/uL，260/280控制在1.9-2.0之间)；置于-80℃保存 备用。

RNA的反转录反应：

使用Takara公司RT kit

具体方法如下：

反转录反应如下：

混匀，37℃反应15min；85℃，5s，放置冰上，得到反转录反应后的cDNA； 将10μL所述cDNA稀释20倍到200μL，-20℃保存，以备下一步实时定量PCR 检测。

实时定量PCR检测细胞中RNA的表达：

使用Takara公司SYBR进行实时定量PCR检测。

具体步骤如下：

构建PCR反应体系如下：

混匀，反应程序如下：

预变性：95℃，5min；

变性：94℃，5sec；

退火：60℃，30sec；

延伸：72℃，30sec；共40次循环；

反应结束后得到PCR熔解曲线，根据溶解曲线均一性判断产物纯度。

其中，实时定量PCR检测检测心肌重塑标志基因的引物序列如表1所示：

表1

Gapdh-F	SEQ NO.2：5’-tcaccaccatggagaaggc-3’
		Gapdh-R	SEQ NO.3：5’-gctaagcagttggtggtgca-3’
ANP-F	SEQ NO.4：5’-ttcgggggtaggattgacag-3’
		ANP-R	SEQ NO.5：5’-cacaccacaagggcttagga-3’
BNP-F	SEQ NO.6：5’-tgtttctgcttttcctttatctg-3’
		BNP-R	SEQ NO.7：5’-tctttttgggtgttcttttgtga-3’
β-MHC-F	SEQ NO.8：5’-cctcagcagaggagtacagc-3’
		β-MHC-R	SEQ NO.9：5’-ggctgagccttggattctca-3’

免疫组化染色

剪取心脏组织用多聚甲醛固定1天，20％的乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙液 脱钙3天(4℃摇床)，蔗糖脱水，包埋剂包埋、切片，烤片1-2小时，磷酸缓冲 盐溶液(PBS)小心洗片，将PBS滴加到切片上，用吸水纸将水吸走，抗原修 复，山羊血清封闭1小时，一抗孵育过夜，PBS洗3遍，二抗室温1小时，PBS 洗3遍，DAB显色。

图3为WT和KO小鼠TAC后心脏中Wwp1蛋白表达水平WB，图4为切 片分析，结果表明，心脏中Wwp1表达水平在TAC升高，而Wwp1敲除后在心 脏中检测不到Wwp1表达。

图5为WT和KO小鼠TAC后心脏大小、HE染色、MTT染色、WGA染 色和心脏重量指数(心脏重量/体重)变化，结果表明，WT小鼠TAC心脏出现 心肌肥大、心肌纤维化和心肌细胞面积增大，而Wwp1KO能够有效缓解以上情 况。

图6为WT和KO小鼠TAC后心脏指数(心脏重量/体重)分析，结果表明， Wwp1KO后能够有效缓解TAC导致的心脏指数增加。

图7为WT和KO小鼠TAC后心脏功能分析，结果表明，WT小鼠TAC后 出现心室射血分数EF和短轴缩短率FS显著下降，提示心脏功能下降，而Wwp1 KO能够对抗TAC导致的心脏功能下降。

图8为WT和KO小鼠TAC后心肌重塑标志基因表达分析，结果表明，WT 小鼠TAC后心肌重塑标志基因(ANP、BNP和β-MHC)表达显著升高，提示 病理性心肌重塑启动，而Wwp1KO能够对抗TAC导致的病理性心肌重塑。

实施例3、Wwp1小干扰RNA(siRNA)的设计及静脉给药对TAC导致的 心肌肥大的影响

1、Wwp1小干扰RNA设计

设计Wwp1小干扰RNA序列，委托吉玛基因进行合成，其序列为SEQ NO.1：gcagagaaatactgtttat。

将所述序列转染进入人胚肾细胞HEK293T，24小时后提取蛋白进行WB检 测分析siRNA效果，如图9所示，结果表明，转染DVL2小干扰RNA后，小 鼠心肌细胞中DVL2蛋白水平显著下降。

2、TAC小鼠Wwp1小干扰RNA尾静脉注射

Wwp1小干扰RNA病毒载体构建

如图10所示，将Wwp1小干扰RNA刻录至具有心肌特异启动子启动的腺 相关病毒载体AAV9，构建Wwp1小干扰RNA病毒载体AAV9-cTcTNT-shWwp1。 病毒构建及包装纯化委托汉恒生物完成。

尾静脉给药

对WT小鼠进行TAC手术，实验操作同实施例2，一周后尾静脉注射Wwp1 小干扰RNA病毒(1*10¹¹vg/只)，三周后进行心脏超声分析。

3、小鼠心脏组织病理学分析

颈椎脱臼法处死小鼠，将小鼠心脏取下称重、拍照；将小鼠心脏固定于组 织固定液中，48小时后将心脏分别进行石蜡包埋和冰冻切片包埋剂包埋，进行 石蜡切片和冰冻切片，分别用于HE染色、MTT染色和WGA染色。

小鼠TAC后心脏大小、HE染色、MTT染色和WGA染色结果如图11所示， 结果表明，注射对照病毒(NC)的小鼠TAC心脏出现心肌肥大、心肌纤维化和 心肌细胞面积增大，而注射Wwp1小干扰RNA病毒能够有效缓解以上情况。

4、超声分析小鼠心脏功能

利用小动物超声进行小鼠心脏结构、功能分析，实验操作同实施例2。

小鼠TAC后心脏指数(心脏重量/体重)分析如图12所示，shWwp1能够 有效缓解TAC导致的心脏指数增加。WGA染色量化分析结果表明，shWwp1 后能够有效缓解TAC导致的心肌细胞面积增大。

小鼠TAC后心脏功能分析结果如图13所示，NC小鼠TAC后出现心室射 血分数EF和短轴缩短率FS显著下降，提示心脏功能下降，而注射Wwp1小干 扰RNA病毒能够对抗TAC导致的心脏功能下降。

5、小鼠心肌重塑标志基因检测

提取小鼠心脏RNA，反转录后进行实时荧光定量PCR检测小鼠心肌重塑相 关基因(ANP、BNP和β-MHC)表达，实验操作同实施例2。

小鼠TAC后心肌重塑标志基因表达分析如图14所示，NC小鼠TAC后心 肌重塑标志基因(ANP、BNP和β-MHC)表达显著升高，提示病理性心肌重塑 启动，而注射Wwp1小干扰RNA病毒能够对抗TAC导致的病理性心肌重塑。

实施例4、心衰病人心脏组织中Wwp1的表达水平与心肌重塑标志基因表 达水平的相关性

1、临床心衰病人的收集标准

正常对照心脏(Healthy)来自车祸意外死亡人员，心衰心脏(Heart Fallure) 样本来自于进行心脏移植的心力衰竭患者(左室射血分数低于40％)，以上样本 均来自于北京安贞医院。

2、心脏组织中Wwp1蛋白以及心肌重塑标志基因的检测

心脏组织样本的RNA和蛋白提取、检测以及结果分析同实施例1。

其中，实时定量PCR检测检测心肌重塑标志基因的引物序列如表2所示：

表2

GAPDH-F	SEQ NO.10：5’-gtcttcaccaccatggagaagg-3’
		GAPDH-R	SEQ NO.11：5’-gcctgcttcaccaccttcttga-3’
ANP-F	SEQ NO.12：5’-ctaaaaagcaagctgagggcg-3’
		ANP-R	SEQ NO.13：5’-acaggagcctcttgcagtct-3’
BNP-F	SEQ NO.14：5’-tggaaacgtccgggttacag-3’
		BNP-R	SEQ NO.15：5’-cttccagacacctgtgggac-3’
β-MHC-F	SEQ NO.16：5’-gaggagcaagccaacaccaa-3’
		β-MHC-R	SEQ NO.17：5’-actcctcattcaagcccttcg-3’

图15为心衰心脏组织Wwp1蛋白表达水平及量化分析，图16为心衰心脏 组织Wwp1蛋白表达切片分析，结果表明，Wwp1在心衰心脏组织样本中的表 达水平明显高于正常心脏组织。

图17为心肌重塑标志基因表达水平的相关性分析，结果显示，心衰病人心 脏组织样本中心肌重塑标志基因的表达升高。

图18为心衰心脏组织Wwp1表达水平与心肌重塑标志基因表达水平的分 析，结果表明，Wwp1表达与心肌重塑相关基因表达高度相关。

综上可知，1、Wwp1在小鼠主动脉缩窄手术(TAC)导致心肌肥大中的作 用试验，证实TAC小鼠心脏组织中Wwp1表达升高，TAC小鼠心脏的射血分数 (EF)和短轴缩短率(FS)降低，心室壁厚度、纤维化程度、胚胎基因表达水 平等参数比假手术组(Sham)小鼠高。2、Wwp1基因敲除缓解了TAC导致的 心脏指标的变化，说明Wwp1基因敲除对TAC导致的病理性心肌肥大和心衰具 有保护作用。3、通过腺相关病毒包装Wwp1小干扰RNA尾静脉注射试验，同 样可缓解1中所述TAC导致的心脏指标变化，说明Wwp1小干扰RNA体外给 药能够缓解TAC导致的心肌肥大，预防心衰的发生。4、心衰心脏组织中Wwp1 的表达水平与心肌细胞重塑标志基因表达水平的相关性试验，证实Wwp1的表 达水平在心衰心脏组织样本中明显高于正常心脏组织，Wwp1的表达与心衰程度 呈正相关。

本发明通过动物实验和对临床中心衰患者心脏组织样本的分析，得出如下 结论：1、Wwp1基因敲除能够对抗主动脉缩窄导致的心肌肥大和心脏功能下降； 2、Wwp1小干扰RNA能够通过静脉给药的方式治疗主动脉缩窄导致的心肌肥 大，预防心衰发生；3、心衰病人心脏组织Wwp1表达水平与心衰呈度呈正相关。

序列表

<110> 中国航天员科研训练中心

<120> WWP1在预防和/或治疗心力衰竭疾病药物中的应用

<160> 17

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gcagagaaat actgtttat 19

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tcaccaccat ggagaaggc 19

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gctaagcagt tggtggtgca 20

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ttcgggggta ggattgacag 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cacaccacaa gggcttagga 20

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tgtttctgct tttcctttat ctg 23

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tctttttggg tgttcttttg tga 23

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cctcagcaga ggagtacagc 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

ggctgagcct tggattctca 20

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gtcttcacca ccatggagaa gg 22

<210> 11

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gcctgcttca ccaccttctt ga 22

<210> 12

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ctaaaaagca agctgagggc g 21

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

acaggagcct cttgcagtct 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

tggaaacgtc cgggttacag 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

cttccagaca cctgtgggac 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

gaggagcaag ccaacaccaa 20

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

actcctcatt caagcccttc g 21

Claims (10)

1.WWP1在筛选用于预防和/或治疗心力衰竭疾病的药物靶点的用途。

2.WWP1作为预防和/或治疗心力衰竭疾病治疗靶点或作为心力衰竭疾病诊断靶点的用途。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述心力衰竭疾病为压力过负荷条件所导致的心力衰竭疾病。

4.一种WWP1的抑制剂在制备预防和/或治疗心力衰竭疾病药物中的用途。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述WWP1的抑制剂为WWP1小干扰RNA。

6.一种携带WWP1小干扰RNA的腺相关病毒在预防和/或治疗心力衰竭疾病中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于：所述携带WWP1小干扰RNA的腺相关病毒中，所述腺相关病毒的载体为具有心肌特异启动子启动的腺相关病毒载体。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于：所述腺相关病毒的载体为AAV9载体。

9.如权利要求6所述的用途，其特征在于：所述携带WWP1小干扰RNA的腺相关病毒使用时采用静脉注射方式。

10.如权利要求5-9任意一项所述的用途，其特征在于：所述WWP1小干扰RNA的核苷酸序列如SEQ NO.1所示。

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