CN117192105A - 一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒及其制备方法和检测方法 - Google Patents
一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒及其制备方法和检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，包括R1磁珠包被物工作液和R2碱性磷酸酶标记物工作液，所述R1磁珠包被物工作液含核小体抗原磁珠包被物，浓度为0.1‑0.3mg/mL。本发明还公开了核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法和非诊断性检测方法。本发明的抗核小体抗体IgG测定试剂盒的非诊断性检测方法通过磁珠包被核小体抗原，实现对目标分子的特异性捕获，操作流程简单、快速，并且易于自动化，在30分钟内即可获得均一性和准确度高的结果。
Description
技术领域
本发明涉及体外检测领域，尤其涉及一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒及其制备方法和非诊断性检测方法。
背景技术
抗核小体抗体是指针对细胞核内的核小体成分所产生的一类自身抗体，其中IgG是其中最常见的抗体类型之一。抗核小体抗体IgG的检测可以用于疾病的诊断和监测，例如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)等自身免疫性疾病。在这些疾病中，抗核小体抗体的水平通常会升高。
检测抗核小体抗体IgG的技术主要包括酶联免疫吸附(ELISA)、间接免疫荧光法以及免疫印迹法等。ELISA是目前应用最广泛的检测方法之一。间接免疫荧光法则是将血清样品与细胞切片或染色质纤维等特定的抗原进行共同染色，通过观察荧光显微镜下的特定染色情况来诊断抗核小体抗体。然而酶联免疫法检测抗核小体抗体可能受到抗异丙肾上腺素药物、血糖和血脂的影响，导致假阳性结果；间接免疫荧光法方法涉及到复杂的试剂制备和技术操作，且结果的解释还需要考虑其他因素的干扰；目前免疫印迹方法，采用的是硝酸纤维素膜或尼龙膜作为载体，该方法存在灵敏度较低/实验时间和操作流程长的问题。也有间接免疫方法采用磁微粒试剂进行检测，但是也存在磁微粒试剂捕获抗核小体抗体IgG不精确、无法定量以及制备工艺和操作复杂的问题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，其能解决抗核小体抗体IgG测定试剂盒，灵敏度低和检测线性范围窄的问题。
本发明的第二个目的在于提供一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法，其能解决抗核小体抗体IgG测定试剂盒制备方法复杂，制备成本高问题。
本发明的第三个目的在于提供一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的非诊断性检测方法，其能解决抗核小体抗体IgG测定试剂盒检测成本高，检测结果不均一，可检出范围低的问题。
本发明的第一个目的采用以下技术方案实现：
一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，包括R1磁珠包被物工作液和R2碱性磷酸酶标记物工作液，所述R1磁珠包被物工作液含核小体抗原磁珠包被物，浓度为0.1-0.3mg/mL。
进一步地，所述核小体抗原磁珠包被物中，核小体抗原和磁珠包被的重量比为(0.001-0.004)：1。
进一步地，所述R2碱性磷酸酶标记物工作液中含有羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物，浓度为0.5-2.0μg/mL。
进一步地，所述抗核小体抗体IgG测定试剂盒还包括校准品、校准品复融液、化学发光底物液和R3反应缓冲液；所述R3反应缓冲液为PBS溶液、Hepes溶液和Tris溶液中的至少一种，且所述R3反应缓冲液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween20、0.3-0.8％Proclin 300，所述R3反应缓冲液的浓度为0.03-0.08M，pH值为7.1-7.3。
本发明的第二个目的采用以下技术方案实现：
一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
S1、将磁珠和核小体抗原包被在磁珠结合缓冲液中进行包被结合，在磁珠封闭缓冲液中封闭，清洗后再加入磁珠包被物稀释液，稀释得到R1磁珠包被物工作液；
S2、将碱性磷酸酶和羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶在碱性磷酸酶结合缓冲液在孵育结合后超滤纯化，然后加入碱性磷酸酶标记物稀释液进行稀释，稀释得到R2碱性磷酸酶标记物工作液；
S3、将所述R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、R3反应缓冲液、化学发光底物液、校准品和校准品复融液进行组装，得到抗核小体抗体IgG测定试剂盒。
进一步地，步骤S1中，所述磁珠结合缓冲液为0.05-0.2M MES缓冲液，pH为5.0-6.0，包被时间为1-6h；
所述磁珠封闭缓冲液中BSA的质量浓度为1-3％，封闭时间为0.25-1h；所述磁珠包被物稀释液成分与R3反应缓冲液相同。
进一步地，步骤S2中，所述碱性磷酸酶结合缓冲液pH为6.5-7.3，所述结合时间为30-120min；所述超滤次数为4-8次；所述羊抗人IgG抗体和碱性磷酸酶结合的质量比为1：(0.5-5)；
所述碱性磷酸酶标记物稀释液为MES溶液、Hepes溶液和Tris溶液中的一种，且所述碱性磷酸酶标记物稀释液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween20、0.3-0.8％Proclin 300，所述碱性磷酸酶标记物稀释液浓度为0.03-0.08M，pH值为7.4-7.6。
进一步地，还包括校准品的冻干处理步骤，所述冻干处理步骤的冻干程序如下：
冷冻阶段：冷冻温度-60～-40℃，持续10-12h，然后以4-6℃/h的速率升温至主干燥阶段；
主干燥阶段：冷冻温度-35～-0℃，持续10-15h，然后以0.7-10℃/h的速率升温至次干燥阶段；
次干燥阶段：冷冻温度0～20℃，持续1-4h，然后以3-10℃/h的速率升温至完全干燥阶段；
完全干燥阶段：冷冻温度25～30℃，持续2-5h。
本发明的第三个目的采用以下技术方案实现：
一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的非诊断性检测方法，包括以下步骤：
步骤1、将待测样品稀释后与R1磁珠包被物工作液、R3反应缓冲液进行孵育结合，第一次洗涤后加入R2碱性磷酸酶标记物工作液进行标记结合，磁分离并进行第二次洗涤，得到抗核小体抗体IgG免疫复合物；
步骤2、将所述抗核小体抗体IgG免疫复合物加入化学发光底物液中反应，检测RLU发光值；
步骤3、将RLU发光值与校准品构建的发光值标准曲线进行匹配，得到待测样本中的抗核小体抗体IgG的含量。
进一步地，所述待测样品的稀释倍数为10-60倍；
所述稀释后的待测样品、R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、R3反应缓冲液、化学发光底物液的加入体积比为(20-100)：(20-70)：(20-200)：(20-70)：(100-300)；
所述步骤1中，孵育结合时间为5-15min，第一次洗涤次数为1-5次；标记结合时间为2.5-10min，第二次洗涤次数为1-5次；所述步骤2中，底物反应时间为2.5-10min。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1.本发明对R1磁珠包被工作液和R2碱性磷酸酶标记物工作液的反应体系能够更好的检测样本中的抗核小体抗体IgG，测定结果信噪比更高，能有效排除其他干扰因素的影响。同时R1磁珠包被物工作液中含有的核小体抗原更多，检测灵敏度提高。
2.本发明的试剂盒的非诊断性检测方法，通过磁珠对目标分子的选择性捕获，操作流程简单、快速，并且易于自动化，在30分钟内即可获得均一性和准确度高的结果，大幅提高了样品的处理效率，同时稀释倍数在10-60，使用成本低；试剂盒的线性范围提高，避免了假阳性和假阴性的情况。
3.本发明的试剂盒的制备方法对R1磁珠包被工作液和R2碱性磷酸酶标记物工作液的制备工艺中的各个参数进行了优化，制备出试剂对目标抗体有着良好的响应度，提高了检测结果的准确性和可靠性
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1抗核小体抗体IgG试剂盒试剂工作浓度
抗核小体抗体IgG试剂盒中包括R1磁珠包被物工作液，工作浓度范围为0.1-0.3mg/mL；R2碱性磷酸酶标记物工作液，浓度为0.5-2.0μg/mL。
设置R1磁珠包被物工作液浓度为0.1、0.2、0.3mg/mL，R2碱性磷酸酶标记物浓度为0.5、1.0、2.0μg/mL，使用方阵滴定法(棋盘滴定法)进行优化，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表1所示：
表1抗核小体抗体IgG试剂盒试剂工作浓度优化结果
从表1试验结果可知，磁珠包被物工作浓度为0.1mg/mL、碱性磷酸酶标记物工作浓度为1μg/mL时，信噪比最高。最终选择R1磁珠包被物工作浓度为0.1mg/mL、R2碱性磷酸酶标记物工作浓度为1μg/mL作为本实施例抗核小体抗体IgG测定试剂盒的试剂浓度。
实施例2 R1磁珠包被物工作液的制备条件优化
(1)抗原包被量优化
按每mg磁珠添加1、2、4μg抗原进行包被，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表2所示：
表2 R1磁珠包被物工作液抗原包被量优化
根据表2显示，以每mg磁珠包被2μg抗原的检测结果最为理想，信噪比最高，因此本实施例选择使用2μg(抗原)/mg(磁珠)进行磁珠的包被。
(2)磁珠包被时间优化
分别设置磁珠包被时间为1h、3h、6h，进行磁珠包被，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表3所示，
表3 R1磁珠与核小体抗原包被时间优化
从表3结果可知，包被时间为3h时，信噪比最高。因此本实施例选择包被时间为3h。
(3)磁珠结合缓冲液pH优化
分别用pH为5.0、5.5和6.0的0.1M MES缓冲液进行磁珠包被，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)。结果如表4所示：
表4磁珠结合缓冲液pH优化结果
从表4中可以看出，当磁珠结合缓冲液pH为5.5时，信噪比显著提高，本实施例选择磁珠结合缓冲液为pH为5.5、0.1M的MES缓冲液。
(4)磁珠封闭缓冲液中BSA浓度优化
调整封闭液中BSA的量，使BSA浓度为1％、2％、3％，进行磁珠封闭，按每mg磁珠加封闭液0.1mL进行磁珠封闭，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)。结果如下表5所示：
表5磁珠封闭缓冲液中BSA浓度优化结果
从上表5可知，封闭液中BSA含量为2％时，封闭效果最好，信噪比最高。因此本实施例选用磁珠封闭缓冲液中的BSA含量为2％。
(5)磁珠封闭时间优化
分别设置磁珠封闭时间为0.25H、0.5H、1H，进行磁珠封闭，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)。结果如下表6所示：
表6磁珠封闭时间优化结果
从上表6可知，当磁珠的封闭处理时间为0.5H时，信噪比最高。因此选择本实施例封闭时间为0.5h。
(6)磁珠包被物稀释液体系筛选
分别以0.05M Hepes(PH7.1-7.3)体系、0.05M PBS(PH7.1-7.3)体系和0.05M Tris(PH7.1-7.3)体系(均含1％BSA、0.1％Tween 20、0.5％Proclin 300)稀释磁珠包被物，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表7所示。
表7磁珠包被物稀释液体系筛选
从表7结果可知，磁珠包被物用PBS体系稀释时，信噪比最好。因此本实施例选择PBS体系稀释磁珠包被物，获得R1磁珠包被物工作液。
优选的，R1磁珠包被物的制备方法为，将磁珠和核小体抗原以2μg的抗原/mg磁珠的比例，在磁珠结合缓冲液中进行包被结合，所述磁珠结合缓冲液为pH 5.5、0.1M的MES缓冲液，包被结合时间为3h。磁珠封闭缓冲液含有2％的BSA，封闭时间为0.5h，清洗后再加入磁珠包被物稀释液，所述磁珠包被物稀释液为0.05M PBS(PH7.1-7.3)，含1％BSA、0.1％Tween 20、0.5％Proclin 300，稀释得到R1磁珠包被物工作液，浓度为1mg/ml。
实施例3R2碱性磷酸酶标记物工作液的制备条件优化(1)羊抗人IgG抗体和碱性磷酸酶标记比例优化
以抗体：碱性磷酸酶(AP)质量比＝1:1、1:2、1:4进行试验，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表8所示。
表8羊抗人IgG抗体和碱性磷酸酶标记比例优化
从表8结果可知，抗体：碱性磷酸酶(AP)质量比＝1:2的信噪比最好，因此本实施例使用抗体与碱性磷酸酶结合比例为质量比＝1:2进行标记结合。
(2)碱性磷酸酶和抗体结合时间优化
分别设置30、60、120min进行碱性磷酸酶与抗体结合，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表9所示。
表9碱性磷酸酶和抗体结合时间优化
从表9结果可知，当碱性磷酸酶和抗人IgG抗体结合时间60min组的信噪比最高。最终确定本实施例碱性磷酸酶与抗体结合时间为60min。
(3)超滤次数优化
分别设置碱性磷酸酶与抗体结合后超滤纯化次数为4、6、8次，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表10所示。
表10超滤次数优化
从表10结果可知，超滤6次时，所得到的R2碱性磷酸酶工作液的信噪比最好，因此确定本实施例中超滤纯化次数为6次。
(3)R2碱性磷酸酶标记物稀释液筛选
分别以0.05M Mes(PH 7.4-7.6)体系、0.05M Tris(PH7.4-7.6)和0.05M Hepes(pH7.4-7.6)体系(均含1％BSA、0.1％Tween 20、0.5％Proclin 300)稀释羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物母液，测试样本信噪比。其余试剂稀释液保持不变，然后对低、中、高三个浓度水平的样本进行检测每个样本重复检测3次，计算平均值与信噪比(S/N)，结果如表11所示。
表11R2碱性磷酸酶标记物稀释液筛选
从上表11可知，碱性磷酸酶标记物用Tris体系稀释时，信噪比最好。因此选择本实施例选择Tris体系稀释碱性磷酸酶标记物，获得R2碱性磷酸酶标记物工作液。
优选的，抗核小体抗体IgG的制备方法包括以下步骤：
S1、将磁珠和核小体抗原，以2μg的抗原：1mg磁珠的比例进行包被结合，结合时间为3h，结合缓冲液为0.1M MES，pH值为5.0-6.0。封闭液含有1-3％的BSA，封闭液的添加量为每mg磁珠加封闭液0.1mL，封闭时间为0.5h，清洗后再加入磁珠包被物稀释液0.05M PBS含1％BSA、0.1％Tween 20、0.5％Proclin 300，pH 7.1-7.3，稀释得到R1磁珠包被物工作液，浓度为0.1mg/mL；
S2、将碱性磷酸酶和羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记结合，抗体和碱性磷酸酶的质量比为1：2，标记时间为60min，超滤纯化次数为6次，然后加入碱性磷酸酶标记物稀释液进行稀释，稀释液为0.05MTris，含1％BSA、0.1％Tween 20、0.5％Proclin 300，稀释得到R2碱性磷酸酶标记物工作液，浓度为1.0μg/mL；
S3、将所述R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、R3反应缓冲液、化学发光底物液、校准品和校准品复融液进行组装，得到抗核小体抗体IgG测定试剂盒。
实施例4抗核小体抗体IgG试剂盒的检测方法
1.抗核小体抗体IgG试剂盒的检测方法
步骤1、将待测样品稀释10-60倍后，取待测样本20-100μL，与R1磁珠包被物工作液20-70μL、R3反应缓冲液20-70μL进行孵育结合，结合时间为5-15min，第一次洗涤1-5次后加入20-100μL的R2碱性磷酸酶标记物工作液进行标记结合，标记结合时间为2.5-10min，磁分离并进行第二次洗涤，洗涤次数为1-5次，得到抗核小体抗体IgG免疫复合物；
步骤2、将所述抗核小体抗体IgG免疫复合物加入100-300μL的化学发光底物液中反应，反应时间为2.5-10min，检测RLU发光值；
步骤3、将RLU发光值与校准品构建的发光值标准曲线进行匹配，得到待测样本中的抗核小体抗体的含量。
2.样本稀释比例优化
分别用样本稀释液以10、20、40、60倍数稀释进行试验，结果如表12所示：
表12待测样本稀释比例优化
从表12可知，当待测样本稀释40倍的信噪比最好。因此本实施例确定样本稀释倍数为40倍。
3.试剂盒加样量优化
(1)R1磁珠包被物工作液加样量优化
分别以20、30、40、50、60、70μL的磁珠包被物工作液加样量进行实验，保持反应缓冲液加样量为50μL，碱性磷酸酶标记物工作液加样量为50μL，样本加样量为30μL，优化试验结果如表13所示。
表13R1磁珠包被物工作液加样量优化
从表14结果可知，以50μL R1磁珠包被物工作液的信噪比最好。因此确定本实施例中R1磁珠包被物工作液加样量为50μL。
(2)R2碱性磷酸酶标记物工作液加样量优化
分别以20、30、40、50、100、200μL的反应缓冲液加样量进行实验，保持磁珠包被物工作液加样量为50μL，反应缓冲液加样量为50μL，样本加样量为30μL，优化试验结果如表14所示：
表14R2碱性磷酸酶标记物工作液加样量优化
从表14可知，以100μL碱性磷酸酶标记物工作液的信噪比最好。因此确定本实施例中碱性磷酸酶标记物工作液加样量为100μL。
(3)R3反应缓冲液加样量优化
分别以20、30、40、50、60、70μL的反应缓冲液加样量进行实验，保持磁珠包被物工作液加样量为50μL，碱性磷酸酶标记物工作液加样量为50μL，样本加样量为30μL，优化实验如表15所示。
表15R3反应缓冲液加样量优化
从表15可知，以50μL R3反应缓冲液的信噪比最好。因此确定本实施例中R3反应缓冲液加样量为50μL。
(4)样本加样量优化
分别以20、30、40、50、60、100μL的样本加样量，所述样本已经过稀释。保持磁珠包被物工作液加样量为50μL，反应缓冲液加样量为50μL，碱性磷酸酶标记物工作液加样量为100μL，试验结果如表16。
表16样本加样量优化
从表16结果可知，以30μL加样量的信噪比最好。因此确定本实施例中稀释后样本的加样量为30μL。
(5)化学发光底物加样量优化
分别以100、200、300μL的化学发光底物液加样量进行试验，结果如下表17。
表17化学发光底物加样量优化
从表17结果可知，以200μL化学发光底物加样量的信噪比最好。因此确定本实施例中化学发光底物加样量为200μL。
4.试剂盒反应模式优化
(1)第一步洗涤优化
间接法理论上一般采用两步两清洗反应模式，因此通过测试不同洗涤次数的信噪比、CV，选取合适的洗涤次数，设置第一步洗涤次数为1、3、5次，结果如表18所示：
表18第一步洗涤优化
从表18结果可知，第一步反应后洗涤3次的信噪比S/N更高，CV更好。因此确定本实施例中，试剂R1和稀释后样品进行孵育结合后，洗涤3次。
(2)第二步洗涤优化
间接法理论上一般采用两步两清洗反应模式，因此通过测试不同洗涤次数的信噪比、CV，选取合适的洗涤次数，设置第二步洗涤次数为1、3、5次，结果如表19所示。
表19第二步反应洗涤优化
从表19结果可知，第二步反应后3次洗涤的信噪比S/N更高，CV更好。因此确定本实施例中，试剂R2和R1磁珠包被物-抗核小体抗体IgG复合物进行标记结合后，洗涤3次。
(3)第一步反应(孵育结合)时间优化
间接法理论上一般采用两步两清洗反应模式，因此通过设置5、10、15min第一步反应时间，保持第二步反应时间不变为5min进行试验，试验结果如表20所示。
表20第一步反应(孵育结合)时间优化
从表20结果可知，第一步反应时间为10min时，信噪比最好。最终确定本实施例中，R1磁珠包被物工作液和待测样品中的抗核小体抗体IgG进行第一步孵育结合的反应时间为10min。
(4)第二步反应(标记结合)时间优化
间接法理论上一般采用两步两清洗反应模式，因此通过设置2.5、5、10min第二步反应时间，保持第一步反应时间不变为10min进行试验，结果如表21所示：
表21第二步反应(标记结合)时间优化
从表21结果可知，第二步反应时间为5min时，信噪比最好。最终确定本实施例总，磁珠-核小体抗原-抗核小体抗体IgG复合物和R2碱性磷酸酶标记物工作的第二步标记结合的反应时间为5min。
(5)底物反应时间优化
设置底物反应时间为2.5、5、10min进行检测，其余条件相同，试验结果如表22所示。
表22底物反应时间优化
从表22的结果可知，抗核小体抗体IgG免疫复合物与化学发光底物反应时间为5min时，CV、信噪比最好。最终确定本实施例中底物反应时间为5min。
优选的，抗核小体抗体IgG测定试剂盒的检测方法如下：
步骤1、将待测样品稀释40倍后，取待测样本30μL，与R1磁珠包被物工作液50μL、R3反应缓冲液50μL进行孵育结合，结合时间为10min，第一次洗涤3次后加入100μL的R2碱性磷酸酶标记物工作液进行标记结合，标记结合时间为5min，磁分离并进行第二次洗涤，洗涤次数为3次，得到抗核小体抗体IgG免疫复合物；
步骤2、将所述抗核小体抗体IgG免疫复合物加入200μL的化学发光底物液中反应，反应时间为5min，检测RLU发光值；
步骤3、将RLU发光值与校准品构建的发光值标准曲线进行匹配，得到待测样本中的抗核小体抗体IgG的含量。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，其特征在于，包括R1磁珠包被物工作液和R2碱性磷酸酶标记物工作液；所述R1磁珠包被物工作液含核小体抗原磁珠包被物，浓度为0.1-0.3mg/mL。
2.如权利要求1所述一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，其特征在于，所述核小体抗原磁珠包被物中，核小体抗原和磁珠包被的重量比为(0.001-0.004)：1。
3.如权利要求1所述一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，其特征在于，所述R2碱性磷酸酶标记物工作液中含有羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物，浓度为0.5-2.0μg/mL。
4.如权利要求1所述一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒，其特征在于，所述抗核小体抗体IgG测定试剂盒还包括校准品、校准品复融液、化学发光底物液和R3反应缓冲液；所述R3反应缓冲液为PBS溶液、Hepes溶液和Tris溶液中的至少一种，且所述R3反应缓冲液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween 20、0.3-0.8％Proclin 300，所述R3反应缓冲液的浓度为0.03-0.08M，pH值为7.1-7.3。
5.权利要求1-4任一项所述的一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将磁珠和核小体抗原在磁珠结合缓冲液进行包被结合，在磁珠封闭缓冲液中封闭得到核小体抗原磁珠包被物，清洗后再加入磁珠包被物稀释液，稀释得到R1磁珠包被物工作液；
S2、将碱性磷酸酶和羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶在碱性磷酸酶标记物稀释液中标记结合后超滤纯化得到羊抗人IgG抗体碱性磷酸酶标记物，然后加入碱性磷酸酶标记物稀释液进行稀释，稀释得到R2碱性磷酸酶标记物工作液；
S3、将所述R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、R3反应缓冲液、化学发光底物液、校准品和校准品复融液进行组装，得到抗核小体抗体IgG测定试剂盒。
6.如权利要求5所述一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述磁珠结合缓冲液为0.05-0.2MMES缓冲液，pH为5.0-6.0，包被时间为1-6h；
所述磁珠封闭缓冲液中BSA的质量浓度为1-3％，封闭时间为0.25-1h；所述磁珠包被物稀释液成分与R3反应缓冲液相同。
7.如权利要求5所述一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述碱性磷酸酶结合缓冲液pH为6.5-7.3，所述结合时间为30-120min；所述超滤次数为4-8次；所述羊抗人IgG抗体和碱性磷酸酶结合的质量比为1：(0.5-5)；
所述碱性磷酸酶标记物稀释液为MES溶液、Hepes溶液和Tris溶液中的一种，且所述碱性磷酸酶标记物稀释液中包括以质量百分比计：0.8-1.5％BSA、0.08-0.15％Tween 20、0.3-0.8％Proclin 300，所述碱性磷酸酶标记物稀释液浓度为0.03-0.08M，pH值为7.4-7.6。
8.如权利要求5所述的一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括校准品的冻干处理步骤，所述冻干处理步骤的冻干程序如下：
冷冻阶段：冷冻温度-60～-40℃，持续10-12h，然后以4-6℃/h的速率升温至主干燥阶段；
主干燥阶段：冷冻温度-35～-0℃，持续10-15h，然后以0.7-10℃/h的速率升温至次干燥阶段；
次干燥阶段：冷冻温度0～20℃，持续1-4h，然后以3-10℃/h的速率升温至完全干燥阶段；
完全干燥阶段：冷冻温度25～30℃，持续2-5h。
9.权利要求1-4任一项所述的一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的非诊断性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将待测样品稀释后与R1磁珠包被物工作液、R3反应缓冲液进行孵育结合，第一次洗涤后加入R2碱性磷酸酶标记物工作液进行标记结合，磁分离并进行第二次洗涤，得到抗核小体抗体IgG免疫复合物；
步骤2、将所述抗核小体抗体IgG免疫复合物加入化学发光底物液中反应，检测RLU发光值；
步骤3、将RLU发光值与校准品构建的发光值标准曲线进行匹配，得到待测样本中的抗核小体抗体IgG的含量。
10.如权利要求9所述的一种抗核小体抗体IgG测定试剂盒的非诊断性检测方法，其特征在于，所述待测样品的稀释倍数为10-60倍；
所述稀释后的待测样品、R1磁珠包被物工作液、R2碱性磷酸酶标记物工作液、R3反应缓冲液、化学发光底物液的加入体积比为(20-100)：(20-70)：(20-200)：(20-70)：(100-300)；
所述步骤1中，孵育结合时间为5-15min，第一次洗涤次数为1-5次；标记结合时间为2.5-10min，第二次洗涤次数为1-5次；所述步骤2中，底物反应时间为2.5-10min。
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