CN1171135A - 用酶进行生皮脱毛的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用酶进行对环境无害的生皮脱毛的方法,包括如下步骤:1)将生皮浸泡,2)将经过浸泡的生皮进行主浸泡,3)通过加入水、在机械作用和至少一种蛋白酶的作用下对经上述处理的生皮进行脱毛,其特征在于,在步骤1)至3)中,生皮至少经过了一次至少一种蛋白质二硫化物氧化还原剂的作用。

Description

用酶进行生皮脱毛的方法
本发明涉及一种用酶进行生皮脱毛的方法。
使用酶进行生皮(hides or skins)脱毛的描述最早见于本世纪60的中晚期。美国专利3,840,433(Aunstrup等人)所述的方法是现有技术方法中的典型代表，其中使用某种耐碱性的蛋白水解酶在强碱性的环境下进行生皮脱毛。
这类脱毛方法的缺点是不能够使生皮得到完美的脱毛，因为所得到脱毛生皮或者是毛没有完全脱净(如果酶的用量小)或者是皮面有损坏(如果酶的用量大)。
现有技术的另一类方法描述于PCT/DK 93/00283中。即使用现有技术的方法有可能得到完全脱毛且皮面没有损坏的生皮，但它使用硫化物，因而不是对环境无害的方法。
迄今为止，还不能以一种对环境无害的方式通过使用酶来生产完全脱毛且皮面没有损坏的生皮。
本发明的目的就是解决上面所提到的问题，具体作法是提供一种对环境无害的使用酶进行生皮脱毛的方法，最终将得到完全脱毛的而且皮面没有损坏的生皮。
令人惊奇的是，现在已经发现通过一种对环境无害的方法可以对生皮进行完全脱毛而且不损坏皮面。
根据本发明，用于生皮脱毛的方法包括如下步骤：
1)将生皮浸泡，
2)将经过浸泡的生皮进行主浸泡，以及
3)通过加入水、在机械作用和至少一种蛋白酶的作用下对经上述处理的生皮进行脱毛，其特征在于，在步骤1)至3)中，生皮至少经过了一次至少一种蛋白质二硫化物氧化还原剂的作用。
本发明人意外地发现了一种对环境无害的利用酶进行生皮脱毛的方法，利用该法将会得到完全脱毛且皮面没有损坏的生皮。
本方法可有利地用于牛皮的脱毛，也可用于其它来源的生皮，例如绵羊皮或山羊皮的脱毛。
根据本发明，生皮
1)被浸泡，
2)将经过浸泡的生皮进行主浸泡，以及
3)通过加入水、在机械作用和至少一种蛋白酶的作用下对经上述处理的生皮进行脱毛，其特征在于，在步骤1)至3)中，生皮至少经过了一次至少一种蛋白质二硫化物氧化还原剂的作用。
步骤1)、2)和3)通常在同一设备中实施，例如在浸灰转鼓中，这能保证生皮经受足够的机械作用。然而这些步骤也可在不同的设备中进行。
在步骤1)、2)或3)中的哪一步加入蛋白质二硫化物氧化还原剂，取决于所述蛋白质二硫化物氧化还原剂的最适pH与处理过程的pH的比较。
在最适pH值时，该酶显示出其最大催化活力的大约80至100％。
如果蛋白质二硫化物氧化还原剂的最适pH大致为7，在步骤2)的主浸泡中将其加入是优选的，因为主浸泡通常在pH7至9下进行。
如果蛋白质二硫化物氧化还原剂的最适pH明显偏高(高碱性蛋白质二硫化物氧化还原剂)，将其与步骤3)中的蛋白酶一同加入将是有利的。这将导致在除去二硫交联键后角蛋白的立即降解。
高碱性蛋白质二硫化物氧化还原剂是一类在pH高于9时显示最佳酶活力的酶，优选是在脱毛过程(步骤3))的pH范围之内，即在pH9和13之间，大多数情况是在10和12.5之间。
在某些情况下，在初步浸泡(步骤1))或主浸泡(步骤2))过程中加入上述蛋白质氧化还原剂是有利的，而在另外的情况下，与步骤3)中所述的蛋白酶同时或以任意顺序加入是有利的。
本发明还考虑了在主浸泡时加入一种蛋白质二硫化物氧化还原剂，然后与上述蛋白酶同时或以任意顺序加入。所加入的蛋白质二硫化物氧化还原剂可以是相同，也可是不同的两种蛋白质二硫化物氧化还原剂。
应该被了解的是，如果蛋白质二硫化物氧化还原剂和蛋白酶这两种酶分别显示出的最适pH十分不同，它们就必须被相继加入，而且要进行pH调节。
初步浸泡是为了从生皮中除去灰尘、血污和其它杂质。在工业生产中，总是需要对生皮进行初步浸泡。然而如果生皮已经得到了清洁，第一步就不那么重要了，在一些情况下甚至是不必要了。
初步浸泡和主浸泡通常在水中进行。
根据本发明，可以使用浸泡和脱毛步骤中常规使用的化学物质，它们用于根据本发明的方法中通常也是有利的，如浸泡过程中使用的防腐剂、洗涤剂和苏打以及脱毛过程中使用的石灰。
在第2)步的主浸泡中通常加入一种浸泡酶以使生皮柔软。对于浸泡，可以使用广谱蛋白酶，如AquadermTM(可从Novo Nordisk A/S得到)。但是，如果生皮的质量不佳，浸泡酶的使用就必须要慎重。
对用本发明的方法所得到的意外效果的一种可能的解释是，蛋白质二硫化物氧化还原剂对毛根的处理为蛋白酶的处理进行了准备。对毛根的处理导致了软化角蛋白(只含有少量的二硫交联键)中的一些二硫交联键被除去，使角蛋白更加柔软，与表皮中的角蛋白类型相似。用蛋白酶处理使表皮和皮毛根部都得到了降解，从而导致了生皮的完全脱毛。
上述的蛋白质二硫化物氧化还原剂催化下面一类反应：
R1-S-S-R2+EnzredR1-SH+R2SH+Enzox(反应I)
其中R1和R2代表相同或不同的蛋白质本体，它们在相同的多肽中，或是两种多肽；Enzox是处于氧化状态下的蛋白质二硫化物氧化还原剂，Enzred是处于还原状态下的蛋白质二硫化物氧化还原剂。EC5.3.4.1类酶(Enzyme Nomenclature，Academic Press，Inc.，1992)是指能够催化蛋白质中-S-S-键的重排的酶，E1.6.4.4和E1.8.4.2类酶分别是作为介质催化与NA(P)H和谷胱甘肽的反应的酶的例子。
根据本发明，所有的蛋白质二硫化物氧化还原剂以及它们的混合物都可以使用。举例来说，这类蛋白质二硫化物氧化还原剂可从下组物质中选出：蛋白质二硫化物还原酶，蛋白质二硫化物异构酶，蛋白质二硫化物氧化酶，蛋白质二硫化物氧化还原酶，蛋白质二硫化物转氢酶，巯基氧化酶以及硫氧还蛋白，包括未决专利申请WO 94/00264和WO94/00265(Novo N0rdisk A/S)中的蛋白质二硫化物氧化还原剂。
优选的蛋白质二硫化物氧化还原剂是蛋白质二硫化物异构酶(PDI)，硫氧还蛋白(TRX)，或二硫键合成蛋白质如DsbA和DsbC，或其变体。
TRX是一种分子量为12kDa的蛋白质，它具有二硫化物/二硫酚氧化还原活力，并且能够催化硫醇-二硫化物交换反应(Edman等人，(1985)，Nature，317，P.267-270；Holmgren，(1985)，Annu.Rev.Biochem.，54，P.237-271；Holmgren，(1989)，J.Biol.Chem.，264，P.13963-13966)。
PDI是一种分子量为57kDa的蛋白质，它通常包含两个亚基。它具有二硫化物/二硫酚氧化还原活力并能催化硫醇-二硫化物交换反应(作为一种二硫化物氧化酶和异构酶)(Yamauchi等人，(1987)，Biochem.Biophys.Res.Commun.，146，P.1485-1492)，Chicken(Parkkonen等人，(1988)，Biochem.J.256，P.1005-1011)，Human(Rapilajaniemi等人，(1987)，EMBO J.，6，p.643-649)，Mouse(Gong，等人，(1988)，NucleicAcids Res.，16，p.1203)，Rabbit(Fliegel等人，(1990)，J.Biol.Chem.，265，p.15496-15502)，以及Rat(Edman等人，(1985)，Nature，317，p.267-270)。PDI也可分离自酵母(Yachikawa等人，J.Biochem.，110，p.306-313)。
DsbA是一种分子量为21kDa的蛋白质，它能够还原胰岛素中的二硫键而且有与二硫化物氧化还原酶同样的活力(Bardwell等人，(1991)，Cell，Vol.67，P.581-589)。
DsbC是一种分子量为23kDa的蛋白质，它具有二硫化物氧化酶和二硫化物异构酶活力(Missiakas等人，(1994)，The EMBO journal，vol.13，no.8，P.2012-2020)。
应该了解的是，一种氧化还原配合剂也应该与蛋白质二硫化物氧化还原剂一共加入。这种氧化还原配合剂显示出对蛋白质二硫化物氧化还原剂有作用，而对生皮无作用。根据本发明的方法，所有的氧化还原配合剂都可以使用。
上述的氧化还原配合剂可以是一种有机或无机的还原剂，可以从下组物质中选出：谷胱甘肽、L-半胱氨酸、二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙醇、巯基乙酸、L-半胱氨酸乙酯、β-巯基乙胺、巯基琥珀酸、β-巯基丙酸、二巯基己二酸、硫羟苹果酸、硫基甘氨酰胺、乙二醇巯基乙酸酯、丙三醇巯基乙酸酯、硫羟乳酸及其盐类、亚硫酸盐和亚硫酸氢盐。
然而，弱的氧化还原配合剂如谷胱甘肽和二硫苏糖醇(DTT)是优选的。甚至脱毛飘浮物本身也显示出弱的氧化还原能力。
就步骤3)而言，应该指出的是可以使用任何蛋白水解酶或它们的混合物。
蛋白酶可以分别是丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶。合适的酶还包括上述各种酶的截断物、突变物和/或变体。
举例来说，丝氨酸蛋白酶有胰蛋白酶、糜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶。
从芽孢杆菌(Bacillus sp.)中提取的碱性丝氨酸蛋白酶是优选的。由实验发现，利用这种酶可以进行令人满意的脱毛而且对皮面不造成损坏。这类酶的例子有枯草杆菌蛋白酶BPN’，枯草杆菌蛋白酶amylosacchariticus，枯草杆菌蛋白酶168，枯草杆菌蛋白酶肠系膜肽酶(subtilisin mesentericopeptidase)，枯草杆菌蛋白酶carlsberg，枯草杆菌蛋白酶DY，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147，嗜热酶(thermitase)，水合细胞溶素(aqualysin)，芽孢杆菌PB92蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶TW7，蛋白酶TW3及其截断物、突变物和变体。
在本发明的上下文中，枯草杆菌蛋白酶的变体或突变的枯草杆菌蛋白酶蛋白酶是指由一种生物体生产的枯草杆菌蛋白酶，该生物体表达了从具有初始或亲代基因的亲代微生物中提取的突变基因，而且还产生了相应的亲代酶。对亲代基因进行了突变以得到突变基因，在合适的宿主中表达后就生产出了上述的突变枯草杆菌蛋白酶。
有关这类酶和/或生产截断物、变体和突变物的方法的文献包括：EP 130,756(Genen-tech)，EP 479,870(Novo Nordisk A/S)，EP 214,435(Henkel)，WO 87/04461(Amgen)，WO 87/05050(Genex)，EP申请号87303761(Genetech)，EP 260,105(Genecor)，WO 88/06624(Gist-Brocades NV)，WO 88/07578(Genentech)，WO 88/08028(Genex)，WO88/08033(Amgen)，WO 88/08164(Genex)，Thomas等人，(1985)，Nature，318，p.375-376；Thomas等人，(1987)，J.Mol.Biol.，193，p803-813；Russel和Fersht，(1987)，Nature 328，p.496-500，也可以使用本领域中已有的方法。
举例来说，丝氨酸蛋白酶有木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶。
举例来说，金属蛋白酶有Neutrase(由Novo Nordisk A/S得到)和胶原酶。
举例来说，酸性天冬氨酸蛋白酶有胃蛋白酶A，胃蛋白酶B，胃蛋白酶C、凝乳酶、组织蛋白酶B和肾素。
上述蛋白酶活力的一般测定方法参见“Methods of EnzymaticAnalysis”，第三版，第5卷，(1984)，Verlag Chemie，Weinheim。
可以用于本发明的方法的优选的酶，举例来说，包括描述于WO92/17576，WO 89/06279，WO 91/00345和PCT/DK 93/00074的碱性蛋白酶。
合适的可方便获得的蛋白酶的一个具体例子是NUE(得自NovoNordisk A/S)。
在本发明方法的一个优选实施方案中，根据KNPU活性测定法(使用酪蛋白作为底物的KNPU活性测定法在AF277中有描述，可向NovoNordisk A/S，Novo Alle，Dk-2880 Bagsvaerd，Denmark函索)，蛋白酶的pH活性曲线显示在pH大于9时有一最大值，这样就可以进行十分令人满意的脱毛而且对皮面没有损坏。
本发明方法的一个实施方案中包括在步骤2)和步骤3)之间进行鲜皮去肉。进行生皮去肉的目的是为了除去影响脱毛的脂肪。这一实施方案的优点如下：1)由于减少了脱毛悬浮物中和生皮上的脂肪，脱毛过程中酶的作用得到了增强；2)废水中含有较少的脂肪，因而从环境角度考虑是更可行的。
然而，本发明还考察了在脱毛步骤之后进行去肉，而不是上面所说的鲜皮去肉。
在步骤3)中，水的加入量能够使生皮之间充分摩擦，通过对生皮的转鼓加工，例如在浸灰转鼓或类似设备中的加工来确保机械作用。
在本发明方法的一个优选实施方案中，水的加入量是生皮干重的50至200％，优选是在70至120％。如果水的加入量少于50％，生皮间的摩擦将导致其损坏，如果水的加入量高于200％，机械效率通常很低，而且水的消耗量将过大。
对实施本发明方法的温度范围的选择要考虑酶的最适活力和诸如生皮的收缩特性等方面的因素。一个合适的温度范围是5℃至60℃，优选是10℃至40℃，更优选是22℃至32℃。
在本发明的一个实施方案中，蛋白质二硫化物氧化还原剂、氧化还原配合剂和蛋白酶在步骤3)中被同时加入。在这种情况下，上述两种酶应该具有大致相同的最适pH。由此可见，这一实施方案是简单的，因为酶的加入一步完成。
本发明方法的一个优选实施方案包括在步骤3)中蛋白质二硫化物氧化还原剂和蛋白酶被相继加入，其中先加入蛋白质二硫化物氧化还原剂，然后再加入蛋白酶。
我们发现可以获得十分有效的脱毛效果和完美的皮面，原因是在这种情况下可以使用最适pH较高的蛋白酶，这类蛋白酶通常是最好的脱毛酶。
本发明方法的一个优选的实施方案包括：蛋白质二硫化物氧化还原剂的加入量是每kg用盐处理的生皮中加入25至1000mg纯酶蛋白，蛋白酶的加入量是每kg用盐处理的生皮中加入5至50mg纯酶蛋白，总的脱毛时间最长为24小时。我们发现在上述的活力和时间下可以得到理想的结果。如果酶的用量较少以及处理时间较短，所得到的结果就不很理想。如果酶的用量较大以及处理时间较长，该方法将不太经济而且/或者皮面将受到损坏。
本发明方法的一个优选的实施方案包括：在脱毛过程中通过连续过滤将脱毛液中的毛除去。如果不进行连续过滤，毛将很容易粘附在生皮背面的脂肪组织上。
对本发明的方法将通过下列实施例予以说明。
脱毛作用是由表皮角蛋白的分解造成的。因此，如果表皮角蛋白分解得越多，说明进行的脱毛效果就越好。
尽管在下面的实施例中对本发明进行了说明，但在本发明的具体实施过程中可能会有许多不背离本发明主旨或范围的改变和修正。因此，本发明的范围被认为与后面权利要求书中所定义的内容相一致。方法和原料底物：
天蓝角蛋白，Sigma K-8500，LOT 33H3614(一种部分变性的染成蓝色的角蛋白)酶：
5mg PDI，溶解于1.5ml 0.1M的K2HPO4溶液中(根据WO 94/00264中的描述配制，可从Novo Nordisk A/S得到)。
NUE 12.0MP(活性8.37KNPU(E)/g)(从Novo Nordisk A/S得到)。Eusapon-S(洗涤剂)Arazit KF(防腐剂)氧化还原配合剂：二硫苏糖醇(DTT)缓冲液：0.1M K2HPO4溶液(pH7.0)方法：NUE蛋白酶活力的测定
按照AF-277中描述的方法进行KNPU活力测定(可向NovoNordisk A/S函索得到)。PDI活力的测定
将得自Novo Nordisk A/S的胰岛素作为底物。胰岛素中含有两个二硫键，当二硫键被除去后，它将变混浊。这样就可以在650nm下进行分光光度测定。
将胰岛素(不完全溶解)悬浮于水中，加入0.1M的HCl直到其完全溶解。
用稀NaOH对溶液进行滴定直到出现混浊，然后再加入一滴HCl。加入水直到胰岛素的浓度为1.3mM。使用前的底物：
100μl 1M K2HPO4，pH7
100μl 1.3mM胰岛素
3.3μl 100mM DTT
800μl 水
1.5ml缓冲液中的5mg PDI，pH7.0，用100μl 0.1M的磷酸钠和263μl1mM的EDTA，pH7.0，稀释至大约100U/ml。
将0-10-20-40-60-80-100μl的PDI加入到微量滴定板上，分别加入缓冲溶液至100μl。加入100μl的胰岛素底物。650nm下的吸光度代表了酶的活力。实施例实施例1
将20mg天蓝角蛋白加入一个小的具塞容器中。向天蓝角蛋白中加入10ml 0.1M的K2HPO4溶液(pH7.0)和不同量的100mM的DTT。向容器中加入一个小的磁力搅拌子。
接着如下表所示加入不同量的PDI(蛋白质二硫化物氧化还原剂)，将混合物加热到60℃，在磁力搅拌下保持19个小时。然后将温度降至30℃，再加入不同量的NUE蛋白酶，将该混合物搅拌52小时。
接着对液体进行过滤，对颜色的变化在595nm下进行分光光度测定。吸光值越高，天蓝角蛋白分解得越多。
表1
样品编号     步骤1     步骤2  595nm下的吸光度
每个容器中的PDI mg数(20mg天蓝角蛋白) 每个容器中的DTTμl数(20mg天蓝角蛋白) 每g天蓝角蛋白的纯NUE蛋白酶克数
    1     0.25     5  200×10-5     0.664
    2     0.50     5  200×10-5     0.838
    3     1.50     5  200×10-5     0.998
    4     0.25     5  200×10-5     0.585
    5     0     5  200×10-5     0.270
    6     0     5     0     0.137
    7     0     100     0     0.257
实验结果显示，单独使用蛋白酶(NUE)，或者单独使用氧化还原配合剂(DTT)，都不会使皮毛(天蓝角蛋白)显著降解，但如果将蛋白酶与蛋白质二硫化物氧化还原剂组合使用，再加上氧化还原配合物的存在，皮毛的降解量将随着蛋白质二硫化物氧化还原剂的量的增加而增加。实施例2
使用PDI酶作为蛋白质二硫化物氧化还原剂，DTT作为氧化还原配合剂，NUE作为蛋白酶，对50kg牛皮进行了脱毛。初步浸泡-步骤1)
0h 300％(150kg)的水，温度大约为25℃。
0.1％的Eusapon-S(0.05kg)(洗涤剂)
开始-10rpm(每分钟转数)
pH值在7-8之间。
0：30h停止主浸泡-步骤2)0：45h 125％(67.5kg)的水，温度大约为28℃。
1)0.1％的Eusapon-S(0.05kg)(洗涤剂)
2)0.01％的Arazit KF(0.005kg)(防腐剂)
3)0.003％的AquadermTMB(0.0015kg)(浸泡酶)
4)0.1％的PDI制剂(0.050kg)，10mg活性PDI酶蛋白/克PDI制剂。
10rpm(每分钟转数)
pH值在7至8之间。5：45h 停止脱毛-步骤3)6：00h 80％(40kg)的水，温度大约为28℃。2.5％的石灰(1.25kg)6：15h 0.06％的NUE(0.03kg)12,0MP(蛋白酶)11：00h转鼓的操作被设置为每运转5分钟，随后暂停25分钟。24：00h停止
在脱毛步骤后进行去肉操作。
牛皮得到了彻底的脱毛，而且皮面没有损坏。结论：
上述实验表明，使用蛋白质二硫化物氧化还原剂，能够以一种对环境无害的方式(没有硫化物)对生皮进行脱毛。
上述实施例只是模型实验。然而我们发现，使用本发明方法进行的生皮脱毛会使皮毛完全脱除而且不对皮面造成任何损坏。

Claims (28)

1.用酶进行生皮脱毛的方法，其中
1)将生皮浸泡
2)将经过浸泡的生皮进行主浸泡
3)通过加入水、在机械作用和至少一种蛋白酶的作用下对经上述处理的生皮进行脱毛，其特征在于，在步骤1)至3)中，生皮至少经过了一次至少一种蛋白质二硫化物氧化还原剂的作用。
2.根据权利要求1的方法，其中的蛋白质氧化还原剂在步骤2)的主浸泡过程中加入。
3.根据权利要求1的方法，其中的蛋白质氧化还原剂与所述蛋白酶同时或以任意顺序加入。
4.根据权利要求1的方法，其中蛋白质氧化还原剂在主浸泡过程中加入，蛋白质二硫化物氧化还原剂与所述蛋白酶同时或以任意顺序加入。
5.根据权利要求4的方法，其中首先加入的蛋白质二硫化物氧化还原剂与随后加入的蛋白质二硫化物氧化还原剂相同。
6.根据权利要求4的方法，其中首先加入的蛋白质二硫化物氧化还原剂与随后加入的蛋白质二硫化物氧化还原剂不同。
7.根据权利要求3和4的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂与蛋白酶同时加入。
8.根据权利要求3和4的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂和蛋白酶被相继加入，方法是先加入蛋白质二硫化物氧化还原酶，再加入蛋白酶。
9.根据权利要求1至8的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂可在步骤1)、2)或3)中加入。
10.根据权利要求1至9任一项的方法，其中浸泡酶在步骤2)的主浸泡过程中加入。
11.根据权利要求1至10任一项的方法，其中在步骤2)和3)之间进行生皮去肉。
12.根据权利要求1至11中任一项的方法，其中在步骤3)中向被处理的生皮中加入水的量是生皮干重的50至200％，优选是70至120％
13.根据权利要求1至12的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂的加入量是每kg用盐处理的生皮中加入25至1000mg纯酶蛋白，蛋白酶的加入量是每kg用盐处理的生皮中加入5至50mg纯酶蛋白，总的脱毛时间最长为24小时。
14.根据权利要求1至13的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂可从下组物质中选出：蛋白质二硫化物还原酶、蛋白质二硫化物异构酶、蛋白质二硫化物氧化酶、蛋白质二硫化物氧化还原酶、蛋白质二硫化物转氢酶、巯基氧化酶、硫氧还蛋白以及二硫键合成蛋白质。
15.根据权利要求14的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂是蛋白质二硫化物异构酶(PDI)或其变体。
16.根据权利要求14的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂是硫氧还蛋白(TXR)或其变体。
17.根据权利要求14的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂是二硫键合成蛋白质或其变体。
18.根据权利要求17的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂是DsbA。
19.根据权利要求17的方法，其中蛋白质二硫化物氧化还原剂是DsbC。
20.根据权利要求1至19中任一项的方法，其中蛋白酶可以从下组物质中选出：丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和金属蛋白酶，或者是其截断物、突变物或变体。
21.根据权利要求20的方法，其中蛋白酶是丝氨酸蛋白酶，包括胰蛋白酶、糜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶。
22.根据权利要求20和21任一项的方法，其中蛋白酶是从芽孢杆菌中提取的碱性丝氨酸蛋白酶。
23.根据权利要求22的方法，其中，根据KNPU活性测定法，蛋白酶的pH活性曲线显示在pH大于9时有一最大值。
24.根据权利要求21或23的方法，其中蛋白酶从下组物质中选出：枯草杆菌蛋白酶BPN’，枯草杆菌蛋白酶amylosacchariticus，枯草杆菌蛋白酶168，枯草杆菌蛋白酶肠系膜肽酶，枯草杆菌蛋白酶Carlsberg，枯草杆菌蛋白酶DY，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147，嗜热酶(thermitase)，水合细胞溶素，芽孢杆菌PB92蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶TW7，蛋白酶TW3及其截断物、突变物和变体。
25.根据权利要求20的方法，其中半胱氨酸蛋白酶来自于包括木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶在内的一组物质。
26.根据权利要求20的方法，其中金属蛋白酶来自于包括Neutrase和胶原酶在内的一组物质。
27.根据权利要求20的方法，其中天冬氨酸蛋白酶从下组物质中选出：胃蛋白酶A，胃蛋白酶B，胃蛋白酶C，凝乳酶，组织蛋白酶B和肾素。
28.根据权利要求1至27的方法，其中在脱毛过程中通过连续过滤将脱毛液中的毛除去。
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