CN117069733A - 一种河豚的毒素提取及加工方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及毒素提取技术领域，且公开了一种河豚的毒素提取及加工方法S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.1‑0.5％的乙酸混合液搅拌浸泡1‑2h，然后放置醋酸并以5800‑6200r/m转速离心除去不溶物得到混合物，S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液，S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液，本发明方案提纯工艺简单，提取效率高，适合放大生产，同时其对河豚毒素活性造成的损失小，得率和纯度明显高于传统提纯方法。
Description
技术领域
本发明属于毒素提取技术领域，具体为一种河豚的毒素提取及加工方法。
背景技术
河豚毒素是一种剧毒的天然神经毒素，具有重要的药用价值。河豚毒素可作镇痛剂，其镇痛作用比普鲁卡因和可卡因强10万倍，因此，可以用河豚毒素针剂代替吗啡、杜冷丁和阿片类药物，用于治疗各种类型的疼痛。除此之外，河豚毒素还具有局部麻醉、抗心率失常、降血压、抗肿瘤、戒毒等方面具有医学作用；
传统的钝化工艺流程长、过程复杂，耗时、高成本、成品纯度不高等缺陷，除了工艺复杂意外，其中相转换损失、高温对TTX破坏、活性炭吸附等因素，均使TTX提取得率大大降低，为此，我们提出一种河豚的毒素提取及加工方法。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种河豚的毒素提取及加工方法，有效的解决了Xx的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种河豚的毒素提取及加工方法，S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.1-0.5％的乙酸混合液搅拌浸泡1-2h，然后放置醋酸并以5800-6200r/m转速离心除去不溶物得到混合物；
S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液；
S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液；
S4：将S3得到的滤液通过吸附膜处理，并对吸附膜进行洗脱收集洗脱液制得河豚毒素原料，滤出大孔吸附剂，得到初毒液清液
S5：对液态河豚毒素粗品进行水浴蒸馏处理，收集余液，利用氨水将水浴蒸馏处理后的余液pH值调节至8.5-9.5，在低温条件下静置得到河豚毒素结晶体；
S6：将所述河豚毒素结晶体溶于醋酸-丙酮-甲醇-水体系溶液，利用氨水调pH至8.5-9.5后进行冷冻干燥再次结晶纯化，结晶产物干燥后制得河豚毒素；
S7：将将S6步骤重复三次得到提纯河豚毒素。
优选的，S1中所述乙醇混合液与醋酸中醋酸含量为0.6-0.9％，醇含量为8-12％，余量为水。
优选的，S2中将混合物在过滤膜孔径为1-2um过滤器中进行过滤，得到第一过滤液，将第一过滤液在过滤膜孔径为0.4-0.8um的过滤器中进行过滤，得到第二过滤液，将第二过滤液在过滤膜孔径为过滤膜孔径为2-6nm进行过滤得到最终过滤液。
优选的，所述混合物过滤过程中需要进行加压，三次过滤过程中压力为0.1-0.3MPa。
优选的，S6中所述冷冻干燥分为三个阶段，第一阶段需要预冻1-2h，以0.5℃/min的速度降温至-15℃，保持1h，再以0.5℃/min的速度降温至-30℃保持2h温度为-30至-35℃，第二阶段低压干燥7-10h，压力为0.01-0.02mMPa，温度为-20至-25℃，第三阶段升温干燥3-4h，温度为-5至5℃。
优选的，S6河豚毒素再次通过冷冻干燥再次结晶纯化前需要通过旋转蒸发仪蒸发掉部分液体，再放进冷冻干燥机进行冻干得到河豚毒素冻干粉末。
优选的，S6中醋酸-丙酮-甲醇-水体系中醋酸含量为0.5-0.8％，丙酮含量为4-5％，甲醇含量为4-5％，余量为水。
1、本发明提纯工艺简单，提取效率高，适合放大生产，同时其对河豚毒素活性造成的损失小，得率和纯度明显高于传统提纯方法；
2、本发明采用连续过滤程序，使其提取工艺程序简化，有利规模生产:免除传统工艺中的相反应，减少相转换损失，不采用高温，避免高温降低毒素提取率，使本发明的方法可大大提高提取得率；
3、本发明采用活性炭过滤与纳滤手段相配合，能够快速彻底地除去河豚毒素所在溶液体系中的绝大部分杂质，得到高纯度的河豚毒素。
具体实施方式
下面描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种河豚的毒素提取及加工方法，包括以下步骤：
S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.3％的乙酸混合液搅拌浸泡1-2h，然后放置醋酸并以6100r/m转速离心除去不溶物得到混合物；
S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液；
S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液；
S4：将S3得到的滤液通过吸附膜处理，并对吸附膜进行洗脱收集洗脱液制得河豚毒素原料，滤出大孔吸附剂，得到初毒液清液
S5：对液态河豚毒素粗品进行水浴蒸馏处理，收集余液，利用氨水将水浴蒸馏处理后的余液pH值调节至8.5-9.5，在低温条件下静置得到河豚毒素结晶体；
S6：将所述河豚毒素结晶体溶于醋酸-丙酮-甲醇-水体系溶液，利用氨水调pH至8.5-9.5后进行冷冻干燥再次结晶纯化，结晶产物干燥后制得河豚毒素；
S7：将将S6步骤重复三次得到提纯河豚毒素。
S2中将混合物在过滤膜孔径为1.5um过滤器中进行过滤，得到第一过滤液，将第一过滤液在过滤膜孔径为0.6um的过滤器中进行过滤，得到第二过滤液，将第二过滤液在过滤膜孔径为过滤膜孔径为4nm进行过滤得到最终过滤液，所述混合物过滤过程中需要进行加压，三次过滤过程中压力为0.4MPa，S6中所述冷冻干燥分为三个阶段，第一阶段需要预冻1.5h，以0.5℃/min的速度降温至-15℃，保持1h，再以0.5℃/min的速度降温至-30℃保持2h温度为-32℃，第二阶段低压干燥7h，压力为0.01mMPa，温度为-25℃，第三阶段升温干燥3h，温度为-2℃，S6河豚毒素再次通过冷冻干燥再次结晶纯化前需要通过旋转蒸发仪蒸发掉部分液体，再放进冷冻干燥机进行冻干得到河豚毒素冻干粉末，S6中醋酸-丙酮-甲醇-水体系中醋酸含量为0.6％，丙酮含量为4.5％，甲醇含量为4.5％，余量为水。
实施例2：
S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.4％的乙酸混合液搅拌浸泡1.5h，然后放置醋酸并以6000r/m转速离心除去不溶物得到混合物；
S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液；
S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液；
S4：将S3得到的滤液通过吸附膜处理，并对吸附膜进行洗脱收集洗脱液制得河豚毒素原料，滤出大孔吸附剂，得到初毒液清液
S5：对液态河豚毒素粗品进行水浴蒸馏处理，收集余液，利用氨水将水浴蒸馏处理后的余液pH值调节至8.9，在低温条件下静置得到河豚毒素结晶体；
S6：将所述河豚毒素结晶体溶于醋酸-丙酮-甲醇-水体系溶液，利用氨水调pH至8.9后进行冷冻干燥再次结晶纯化，结晶产物干燥后制得河豚毒素；
S7：将将S6步骤重复三次得到提纯河豚毒素。
S2中将混合物在过滤膜孔径为1um过滤器中进行过滤，得到第一过滤液，将第一过滤液在过滤膜孔径为0.8um的过滤器中进行过滤，得到第二过滤液，将第二过滤液在过滤膜孔径为过滤膜孔径为2nm进行过滤得到最终过滤液，所述混合物过滤过程中需要进行加压，三次过滤过程中压力为0.1MPa，S6中所述冷冻干燥分为三个阶段，第一阶段需要预冻2h，以0.5℃/min的速度降温至-15℃，保持1h，再以0.5℃/min的速度降温至-30℃保持2h温度为-35℃，第二阶段低压干燥10h，压力为0.01mMPa，温度为-20至-25℃，第三阶段升温干燥4h，温度为-1℃，S6河豚毒素再次通过冷冻干燥再次结晶纯化前需要通过旋转蒸发仪蒸发掉部分液体，再放进冷冻干燥机进行冻干得到河豚毒素冻干粉末，S6中醋酸-丙酮-甲醇-水体系中醋酸含量为0.6％，丙酮含量为4％，甲醇含量为5％，余量为水。
实施例3：
一种河豚的毒素提取及加工方法，包括以下步骤：
S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.35％的乙酸混合液搅拌浸泡1h，然后放置醋酸并以6000r/m转速离心除去不溶物得到混合物；
S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液；
S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液；
S4：将S3得到的滤液通过吸附膜处理，并对吸附膜进行洗脱收集洗脱液制得河豚毒素原料，滤出大孔吸附剂，得到初毒液清液
S5：对液态河豚毒素粗品进行水浴蒸馏处理，收集余液，利用氨水将水浴蒸馏处理后的余液pH值调节至9.15，在低温条件下静置得到河豚毒素结晶体；
S6：将所述河豚毒素结晶体溶于醋酸-丙酮-甲醇-水体系溶液，利用氨水调pH至8.5-9.5后进行冷冻干燥再次结晶纯化，结晶产物干燥后制得河豚毒素；
S7：将将S6步骤重复三次得到提纯河豚毒素。
S2中将混合物在过滤膜孔径为1.5um过滤器中进行过滤，得到第一过滤液，将第一过滤液在过滤膜孔径为0.6um的过滤器中进行过滤，得到第二过滤液，将第二过滤液在过滤膜孔径为过滤膜孔径为4nm进行过滤得到最终过滤液，所述混合物过滤过程中需要进行加压，三次过滤过程中压力为0.2MPa，S6中所述冷冻干燥分为三个阶段，第一阶段需要预冻1.5h，以0.5℃/min的速度降温至-15℃，保持1h，再以0.5℃/min的速度降温至-30℃保持2h温度为-30至-35℃，第二阶段低压干燥7-10h，压力为0.015mMPa，温度为-22℃，第三阶段升温干燥3.5h，温度为-5至5℃，S6河豚毒素再次通过冷冻干燥再次结晶纯化前需要通过旋转蒸发仪蒸发掉部分液体，再放进冷冻干燥机进行冻干得到河豚毒素冻干粉末，S6中醋酸-丙酮-甲醇-水体系中醋酸含量为0.6％，丙酮含量为4％，甲醇含量为4％，余量为水。
实施例4：
一种河豚的毒素提取及加工方法，包括以下步骤：
S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.4％的乙酸混合液搅拌浸泡1-2h，然后放置醋酸并以6000r/m转速离心除去不溶物得到混合物；
S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液；
S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液；
S4：将S3得到的滤液通过吸附膜处理，并对吸附膜进行洗脱收集洗脱液制得河豚毒素原料，滤出大孔吸附剂，得到初毒液清液
S5：对液态河豚毒素粗品进行水浴蒸馏处理，收集余液，利用氨水将水浴蒸馏处理后的余液pH值调节至9，在低温条件下静置得到河豚毒素结晶体；
S6：将所述河豚毒素结晶体溶于醋酸-丙酮-甲醇-水体系溶液，利用氨水调pH至9后进行冷冻干燥再次结晶纯化，结晶产物干燥后制得河豚毒素；
S7：将将S6步骤重复三次得到提纯河豚毒素。
S2中将混合物在过滤膜孔径为1.5um过滤器中进行过滤，得到第一过滤液，将第一过滤液在过滤膜孔径为0.5um的过滤器中进行过滤，得到第二过滤液，将第二过滤液在过滤膜孔径为过滤膜孔径为4nm进行过滤得到最终过滤液，所述混合物过滤过程中需要进行加压，三次过滤过程中压力为0.2MPa，S6中所述冷冻干燥分为三个阶段，第一阶段需要预冻1-2h，以0.5℃/min的速度降温至-15℃，保持1h，再以0.5℃/min的速度降温至-30℃保持2h温度为-32℃，第二阶段低压干燥8h，压力为0.012mMPa，温度为-23℃，第三阶段升温干燥3-4h，温度为-5℃，S6河豚毒素再次通过冷冻干燥再次结晶纯化前需要通过旋转蒸发仪蒸发掉部分液体，再放进冷冻干燥机进行冻干得到河豚毒素冻干粉末，S6中醋酸-丙酮-甲醇-水体系中醋酸含量为0.6％，丙酮含量为4.5％，甲醇含量为4％，余量为水。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序，而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通，对于本领域的普通技术人员而言，可以通过具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及等同物限定。
Claims (7)
1.一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：
S1：收集河豚的肝脏、肾脏、卵巢、眼睛以及河豚的血液，将河豚鱼内脏绞碎、匀浆，用含0.1-0.5％的乙酸混合液搅拌浸泡1-2h，然后放置醋酸并以5800-6200r/m转速离心除去不溶物得到混合物；
S2：将S1得到的混合物通过活性炭进行脱色，过滤三次过滤得到沉淀物与过滤液；
S3：将S2得到的滤液进行合并并将提取液在50℃真空条件下浓缩进行浓缩得到浓缩液；
S4：将S3得到的滤液通过吸附膜处理，并对吸附膜进行洗脱收集洗脱液制得河豚毒素原料，滤出大孔吸附剂，得到初毒液清液
S5：对液态河豚毒素粗品进行水浴蒸馏处理，收集余液，利用氨水将水浴蒸馏处理后的余液pH值调节至8.5-9.5，在低温条件下静置得到河豚毒素结晶体；
S6：将所述河豚毒素结晶体溶于醋酸-丙酮-甲醇-水体系溶液，利用氨水调pH至8.5-9.5后进行冷冻干燥再次结晶纯化，结晶产物干燥后制得河豚毒素；
S7：将将S6步骤重复三次得到提纯河豚毒素。
2.根据权利要求1所述的一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：S1中所述乙醇混合液与醋酸中醋酸含量为0.6-0.9％，醇含量为8-12％，余量为水。
3.根据权利要求1所述的一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：S2中将混合物在过滤膜孔径为1-2um过滤器中进行过滤，得到第一过滤液，将第一过滤液在过滤膜孔径为0.4-0.8um的过滤器中进行过滤，得到第二过滤液，将第二过滤液在过滤膜孔径为过滤膜孔径为2-6nm进行过滤得到最终过滤液。
4.根据权利要求3所述的一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：所述混合物过滤过程中需要进行加压，三次过滤过程中压力为0.1-0.3MPa。
5.根据权利要求1所述的一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：S6中所述冷冻干燥分为三个阶段，第一阶段需要预冻1-2h，以0.5℃/min的速度降温至-15℃，保持1h，再以0.5℃/min的速度降温至-30℃保持2h温度为-30至-35℃，第二阶段低压干燥7-10h，压力为0.01-0.02mMPa，温度为-20至-25℃，第三阶段升温干燥3-4h，温度为-5至5℃。
6.根据权利要求3所述的一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：S6河豚毒素再次通过冷冻干燥再次结晶纯化前需要通过旋转蒸发仪蒸发掉部分液体，再放进冷冻干燥机进行冻干得到河豚毒素冻干粉末。
7.根据权利要求6所述的一种河豚的毒素提取及加工方法，其特征在于：S6中醋酸-丙酮-甲醇-水体系中醋酸含量为0.5-0.8％，丙酮含量为4-5％，甲醇含量为4-5％，余量为水。
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