CN117062839A - 抗klk7抗体、抗klk5抗体、多特异性抗klk5/klk7抗体和使用方法 - Google Patents

抗klk7抗体、抗klk5抗体、多特异性抗klk5/klk7抗体和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了抗KLK7抗体、抗KLK5抗体、抗KLK5/KLK7多特异性抗体和其使用方法。

Description

抗KLK7抗体、抗KLK5抗体、多特异性抗KLK5/KLK7抗体和使用 方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年3月12日提交的美国临时申请号63/160,434的优先权权益，该美国临时申请出于任何目的以引用方式整体并入本文。
技术领域
本发明涉及抗KLK7抗体、抗KLK5抗体、抗KLK5/KLK7多特异性抗体和其使用方法。
背景技术
人激肽释放酶相关肽酶(KLK)为胰(凝乳)蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其在诸如前列腺、卵巢、乳房、睾丸、脑和皮肤的各种组织中表达。KLK属于PA(S)大家族(clan PA(S))的胰凝乳蛋白酶样丝氨酸蛋白酶家族S1A的子组。人的15个KLK基因位于染色体19q13.4上，并构成了人基因组中最大的连续丝氨酸蛋白酶簇。这些基因通常由五个编码外显子和在一些情况下一个或两个5’非编码外显子构成，编码激肽释放酶相关肽酶KLK1至KLK15。所有KLK基因都编码单链前原蛋白质(pre-pro-protein)，其含有224-237个残基的胰凝乳蛋白酶样或胰蛋白酶样催化结构域，其中KLK4至KLK15之间的氨基酸序列同一性为约40％。KLK1和其近亲同系物KLK2和KLK3自成一分支，KLK4、5和7属于另一子组，而KLK6与KLK13和KLK14享有较多的相似性。参见Debela等人,Biol Chem 389,623-632(2008)。
KLK5为分泌型胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其在人皮肤中似乎表达得最多，特别是在皮肤的上棘层和颗粒层中尤其如此，其中角质细胞经历终末分化并转化为扁平的砖状结构，这些砖状结构形成角质层，其为最外层的表皮层和与外界环境的屏障。参见Debela等人,J Mol Biol,373,1017-1031(2007)；和Tan等人,J Med Chem.2015年1月22日；58(2):598-612(2014)。KLK7为胰凝乳蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，也在皮肤中表达。据描述，KLK5在诸如Netherton综合征的皮肤病中起到病理性作用。参见Furio等人,PLOS Genet 11(9),e1005389(2015)。Netherton综合征由编码丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal 5型(SPINK5)的SPINK5基因中的功能丧失性突变造成。参见Descargues等人,Nat Genet.2005年1月；37(1):56-65(2004)。SPINK5已显示能抑制KLK丝氨酸蛋白酶家族中的几个成员(例如KLK5和KLK7)。参见Wang等人,Exp Dermatol.7月；23(7):524-6(2014)。Netherton综合征中的SPINK5的缺失导致KLK活性不受抗衡。KLK5过度活性被认为是Netherton综合征的病理生理学中的关键要素，这是因为KLK5为表皮中蛋白质水解的调节剂。KLK5和KLK7的消融援救Netherton综合征样表型的致死性。参见Briot等人,J Exp Med.5月11日；206(5):1135-47(2009)；Furio等人,J Exp Med.3月10日；211(3):499-513(2014)；和Kasparek等人,PLoSGenet.2017年1月17日；13(1):e1006566(2017)。Netherton综合征为复杂的全身性疾病，具有多种影响，目前尚无令人满意的治疗。
哮喘为临床上的异质性病症，与遗传和环境风险因素有关。根据哮喘的双胞胎研究对可遗传性的估计从35％到80％不等，表明遗传风险的重要作用。参见例如，Ullemar等人,Allergy 71,230-238(2016)。已经针对哮喘和哮喘相关表型进行了多个大规模的GWAS，并且所鉴别的许多基因座，诸如ORMDL3、IL13、IL1RL1和TSLP基因附近的基因座已经在多个研究群体中得到证实。参见例如，Bonnelykke等人,Nat Genet 46,51-55(2014)。最近的研究鉴别了KLK4/5基因座处的SNP，该SNP对有关低骨膜素哮喘、或2型低炎症哮喘的风险具有保护作用。在同一研究中，发现重度哮喘患者的支气管肺泡灌洗液中KLK5水平升高，从而支持以下假设：KLK5在支气管阻塞和哮喘发病机制中起作用。
尽管在诸如Netherton综合征和哮喘的疾病的领域中取得了进展，但仍需要鉴别标靶并开发能够补充或增强现有疗法功效的手段。
发明内容
本发明提供了抗KLK7抗体、抗KLK5抗体、抗KLK5/KLK7多特异性抗体和其使用方法。
实施例1.一种与人KLK7结合的抗体，其中该抗体包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：
(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；或
(b)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；或
(c)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
实施例2.根据实施例1所述的抗体，其为单克隆抗体。
实施例3.根据实施例1或实施例2所述的抗体，其为人源化抗体或嵌合抗体。
实施例4.根据实施例1至3中任一项所述的抗体，其为与人KLK7结合的抗体片段。
实施例5.根据实施例1至4中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM或小于5pM的KD结合人KLK7；和/或如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM或小于5pM的KD与食蟹猕猴KLK7结合。
实施例6.根据实施例1至5中任一项所述的抗体，其中重链可变区包含：FR1，其包含选自SEQ ID NO:123-128的氨基酸序列；FR2，其包含选自SEQ ID NO:130-133的氨基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO:135-143的氨基酸序列；和/或FR4，其包含选自SEQ ID NO:144-145的氨基酸序列。
实施例7.根据实施例1至6中任一项所述的抗体，其中轻链可变区包含：FR1，其包含选自SEQ ID NO:147-150的氨基酸序列；FR2，其包含选自SEQ ID NO:152-154的氨基酸序列；FR3，其包含选自SEQ ID NO:156-158的氨基酸序列；和/或FR4，其包含选自SEQ ID NO:160的氨基酸序列。
实施例8.根据实施例1至7中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例9.根据实施例1至10中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例10.根据实施例1至11中任一项所述的抗体，其包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
实施例11.一种与人KLK7特异性地结合的抗体，其包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
实施例12.根据实施例1至11中任一项所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，其中该重链恒定区包含S183K取代(EU编号)和/或S183E取代(EU编号)；和/或该轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)和/或V133E取代(EU编号)。
实施例13.根据实施例1至12中任一项所述的抗体，其为全长IgG1抗体。
实施例14.根据实施例13所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含N297G取代(EU编号)或L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
实施例15.根据实施例12至14中任一项所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含M428L取代(EU编号)和/或N434S取代(EU编号)。
实施例16.根据实施例1至15中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7。
实施例17.根据实施例1至16中任一项所述的抗体，其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
实施例18.根据实施例1至19中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7；并且其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
实施例19.根据实施例17或实施例18所述的抗体，其中抑制人KLK7蛋白酶活性为抑制包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的人KLK7介导的裂解，其中Nval为正缬氨酸。
实施例20.根据实施例1至21中任一项所述的抗体，其中该抗体为多特异性抗体。
实施例21.根据实施例20所述的抗体，其为双特异性抗体。
实施例22.一种分离的核酸，其编码根据实施例1至21中任一项所述的抗体。
实施例23.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施例22所述的核酸。
实施例24.一种分离的宿主细胞，其表达根据实施例1至21中任一项所述的抗体。
实施例25.一种生产与人KLK7结合的抗体的方法，其包括在适合表达该抗体的条件下培养根据实施例23或实施例24所述的宿主细胞。
实施例26.根据实施例25所述的方法，其进一步包括从宿主细胞回收抗体。
实施例27.一种抗体，其通过根据实施例26所述的方法生产。
实施例28.一种与人KLK5结合的抗体，其中该抗体包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
实施例29.根据实施例28所述的抗体，其中该抗体包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
实施例30.根据实施例28或实施例29所述的抗体，其为单克隆抗体。
实施例31.根据实施例28至30中任一项所述的抗体，其为人源化抗体或嵌合抗体。
实施例32.根据实施例28至31中任一项所述的抗体，其为结合人KLK5的抗体片段。
实施例33.根据实施例28至32中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于1nM、或小于500pM、或小于300pM、或小于200pM、或小于100pM或小于50pM的KD结合人KLK5；和/或如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于1nM、或小于500pM、或小于300pM、或小于200pM、或小于100pM或小于50pM的KD与食蟹猕猴KLK5结合。
实施例34.根据实施例28至33中任一项所述的抗体，其中重链可变区包含：FR1，其包含选自SEQ ID NO:161的氨基酸序列；FR2，其包含SEQ ID NO:162-163的氨基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列；和/或FR4，其包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列。
实施例35.根据实施例28至34中任一项所述的抗体，其中轻链可变区包含：FR1，其包含SEQ ID NO:166的氨基酸序列；FR2，其包含选自SEQ ID NO:167-168的氨基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列；和/或FR4，其包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列。
实施例36.根据实施例28至35中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例37.根据实施例28至36中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例38.根据实施例28至37中任一项所述的抗体，其包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
实施例39.一种与人KLK5特异性地结合的抗体，其包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
实施例40.根据实施例28至39中任一项所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，其中该重链恒定区包含S183K取代(EU编号)和/或S183E取代(EU编号)；和/或该轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)和/或V133E取代(EU编号)。
实施例41.根据实施例28至40中任一项所述的抗体，其为全长IgG1抗体。
实施例42.根据实施例41所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含N297G取代(EU编号)或L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
实施例43.根据实施例40至42中任一项所述的抗体，其中该抗体包含重链恒定区，该重链恒定区包含M428L取代(EU编号)和/或N434S取代(EU编号)。
实施例44.根据实施例28至43中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5。
实施例45.根据实施例28至44中任一项所述的抗体，其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
实施例46.根据实施例28至45中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5；并且其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
实施例47.根据实施例45或实施例46所述的抗体，其中抑制人KLK5蛋白酶活性为抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。
实施例48.根据实施例28至47中任一项所述的抗体，其中该抗体为多特异性抗体。
实施例49.根据实施例48所述的抗体，其中该抗体为双特异性抗体。
实施例50.一种分离的核酸，其编码根据实施例28至49中任一项所述的抗体。
实施例51.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施例61所述的核酸。
实施例52.一种分离的宿主细胞，其表达根据实施例28至51中任一项所述的抗体。
实施例53.一种生产与人KLK5结合的抗体的方法，其包括在适合表达该抗体的条件下培养根据实施例51或实施例52所述的宿主细胞。
实施例54.根据实施例53所述的方法，其进一步包括从宿主细胞回收抗体。
实施例55.一种抗体，其通过根据实施例54所述的方法生产。
实施例56.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中该第一结合结构域结合人KLK7并且该第二结合结构域结合人KLK5，其中该第一结合结构域包含：
(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；或
(b)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:9的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；或
(c)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
实施例57.根据实施例56所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域为人源化的。
实施例58.根据实施例56或实施例57所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例59.根据实施例56至58中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列；以及
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例60.根据实施例56至59中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
实施例61.根据实施例56至60中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含：
(a)重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ IDNO:39和107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；或
(b)重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。
实施例62.根据实施例56至61中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
实施例63.根据实施例56至62中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域为人源化的。
实施例64.根据实施例61或实施例62所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
(d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
实施例65.根据实施例61至63中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例66.根据实施例56至63中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
(d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列；
(e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列；和
(f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
实施例67.根据实施例56至63中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:52、53、105、106和205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
(d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:81至87的氨基酸序列；
(e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:88-94的氨基酸序列；和
(f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
实施例68.根据实施例56至67中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含SEQ ID NO:202的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:203的VL氨基酸序列，并且该第二结合结构域包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL氨基酸序列。
实施例69.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中该第一结合结构域结合人KLK7并且该第二结合结构域结合人KLK5，其中该第一结合结构域包含SEQ ID NO:202的重链可变结构域(VH)氨基酸序列和SEQ ID NO:203的轻链可变结构域(VL)氨基酸序列，并且该第二结合结构域包含SEQ ID NO:205的VH氨基酸序列和SEQ IDNO:62的VL氨基酸序列。
实施例70.根据实施例56至69中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域，其中该第一重链可变结构域与第一重链恒定区连接，并且该第一轻链可变结构域与第一轻链恒定区连接；并且该第二结合结构域包含第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域，其中该第二重链可变结构域与第二重链恒定区连接，并且该第二轻链可变结构域与第二轻链恒定区连接。
实施例71.根据实施例70所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区包含杵突变并且该第二重链恒定区包含臼突变；或其中该第一重链恒定区包含臼突变并且该第二重链恒定区包含杵突变。
实施例72.根据实施例71所述的双特异性抗体，其中该抗体为IgG1抗体，并且其中该杵突变包含T366W取代。
实施例73.根据实施例71或实施例72所述的双特异性抗体，其中该抗体为IgG1抗体，并且其中该臼突变包含选自T366S、L368A和Y407V的至少一个取代、至少两个取代或三个取代。
实施例74.根据实施例73所述的双特异性抗体，其中该抗体为IgG1抗体，并且其中该臼突变包含T366S取代、L368A取代和Y407V取代。
实施例75.根据实施例70至74中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和/或该第二重链恒定区包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
实施例76.根据实施例75所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和该第二重链恒定区各自包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
实施例77.根据实施例70至76中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)该第一重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且该第一轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)，并且该第二重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且该第二轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)；或
(b)该第一重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且该第一轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)，并且该第二重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且该第二轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)。
实施例78.根据实施例70至77中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和/或该第二重链恒定区进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
实施例79.根据实施例78所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和该第二重链恒定区各自进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
实施例80.根据实施例79所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和该第二重链恒定区各自进一步包含M428L取代和N434S取代(EU编号)。
实施例81.根据实施例70至80中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)该第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、223和224的氨基酸序列，且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且该第二重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)该第二重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、223和224的氨基酸序列，且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且该第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
实施例82.根据实施例98所述的双特异性抗体，其中：
(a)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、213或214的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、217或218的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(c)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、213或214的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(d)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、217或218的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(e)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(f)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(g)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(h)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
实施例83.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中该第一结合结构域结合人KLK7并且该第二结合结构域结合人KLK5，其中该第一结合结构域包含SEQ ID NO:206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:207的轻链氨基酸序列，并且该第二结合结构域包含SEQ ID NO:208或210的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列。
实施例84.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中该第一结合结构域结合人KLK7并且该第二结合结构域结合人KLK5，其中该第二结合结构域包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
实施例85.根据实施例85所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ IDNO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
实施例86.根据实施例84或实施例85所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域为人源化的。
实施例87.根据实施例84至86中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例88.根据实施例84至86中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例89.根据实施例84至86中任一项所述的双特异性抗体，其中该第二结合结构域包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL氨基酸序列。
实施例90.根据实施例84至89中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域为人源化的。
实施例91.根据实施例84至90中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一结合结构域包含第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域，其中该第一重链可变结构域与第一重链恒定区连接，并且该第一轻链可变结构域与第一轻链恒定区连接；并且该第二结合结构域包含第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域，其中该第二重链可变结构域与第二重链恒定区连接，并且该第二轻链可变结构域与第二轻链恒定区连接。
实施例92.根据实施例91所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区包含杵突变并且该第二重链恒定区包含臼突变；或其中该第一重链恒定区包含臼突变并且该第二重链恒定区包含杵突变。
实施例93.根据实施例92所述的双特异性抗体，其中该抗体为IgG1抗体，并且其中该杵突变包含T366W突变。
实施例94.根据实施例92或实施例93所述的双特异性抗体，其中该抗体为IgG1抗体，并且其中该臼突变包含选自T366S、L368A和Y407V的至少一个突变、至少两个突变或三个突变。
实施例95.根据实施例94所述的双特异性抗体，其中该抗体为IgG1抗体，并且其中该臼突变包含T366S突变、L368A突变和Y407V突变。
实施例96.根据实施例91至95中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和/或该第二重链恒定区包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
实施例97.根据实施例96所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和该第二重链恒定区各自包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
实施例98.根据实施例91至97中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)该第一重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且该第一轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)，并且该第二重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且该第二轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)；或
(b)该第一重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且该第一轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)，并且该第二重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且该第二轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)。
实施例99.根据实施例91至98中任一项所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和/或该第二重链恒定区进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
实施例100.根据实施例99所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和该第二重链恒定区各自进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
实施例101.根据实施例100所述的双特异性抗体，其中该第一重链恒定区和该第二重链恒定区各自进一步包含M428L取代和N434S取代(EU编号)。
实施例102.根据实施例91至101中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)该第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、223和224的氨基酸序列，且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且该重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且该第二轻链恒定区包含SEQ IDNO:104的氨基酸序列；或
(b)该第二重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、223和224的氨基酸序列，且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且该第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
实施例103.根据实施例102所述的双特异性抗体，其中：
(a)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、213或214的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、217或218的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(c)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、213或214的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(d)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、217或218的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(e)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(f)该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(g)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(h)该第二重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且该第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且该第一重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且该第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
实施例104.根据实施例56至103中任一项所述的双特异性抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5。
实施例105.根据实施例56至104中任一项所述的双特异性抗体，其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
实施例106.根据实施例56至105中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5；并且其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
实施例107.根据实施例105或实施例106所述的双特异性抗体，其中抑制人KLK5蛋白酶活性为抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。
实施例108.根据实施例56至107中任一项所述的双特异性抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7。
实施例109.根据实施例56至108中任一项所述的双特异性抗体，其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
实施例110.根据实施例56至109中任一项所述的双特异性抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，该抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7；并且其中该抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
实施例111.根据实施例109或实施例110所述的双特异性抗体，其中抑制人KLK7蛋白酶活性为抑制包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的人KLK7介导的裂解，其中Nval为正缬氨酸。
实施例112.根据实施例56至111中任一项所述的双特异性抗体，其中该双特异性抗体对于人KLK5的KD和该抗体对于人KLK7的KD为彼此的3倍以内、或2.5倍以内、或2倍以内或1.5倍以内。
实施例113.一种分离的核酸，其编码根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体。
实施例114.一种分离的核酸，其编码根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第一结合结构域。
实施例115.一种分离的核酸，其编码根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第二结合结构域。
实施例116.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施例113所述的分离的核酸。
实施例117.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施例114所述的分离的核酸。
实施例118.一种分离的宿主细胞，其包含根据实施例115所述的分离的核酸。
实施例119.一种分离的宿主细胞，其表达根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体。
实施例120.一种分离的宿主细胞，其表达根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第一结合结构域。
实施例121.一种分离的宿主细胞，其表达根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第二结合结构域。
实施例122.一种生产与人KLK5和人KLK7结合的双特异性抗体的方法，其包括在适合于表达该抗体的条件下培养根据实施例116或实施例119所述的宿主细胞。
实施例123.根据实施例122所述的方法，其进一步包括从宿主细胞回收抗体。
实施例124.一种生产与人KLK5和人KLK7结合的双特异性抗体的方法，其包括(i)在适合于表达该第一结合结构域的条件下培养根据实施例117或实施例120所述的宿主细胞；和(ii)在适合于表达该第二结合结构域的条件下培养根据实施例118或实施例121所述的宿主细胞。
实施例125.根据实施例124所述的方法，其进一步包括回收该第一结合结构域和该第二结合结构域并组装该双特异性抗体。
实施例126.一种药物组合物，其包含根据实施例1至21中任一项所述的抗体以及药用载体。
实施例127.根据实施例126所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
实施例128.根据实施例127所述的药物组合物，其中该另外的治疗剂为KLK5抑制剂。
实施例129.根据实施例128所述的药物组合物，其中该KLK5抑制剂为抗KLK5抗体。
实施例130.根据实施例129所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体包含：
(a)重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ IDNO:39和107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；或
(b)重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。
实施例131.根据实施例129或实施例130所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体包含：重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
实施例132.根据实施例129至131中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体为单克隆抗体。
实施例133.根据实施例129至132中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体为人源化抗体或嵌合抗体。
实施例134.根据实施例129至133中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体为结合人KLK5的抗体片段。
实施例135.根据实施例129至134中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
(d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
实施例136.根据实施例129至134中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例137.根据实施例129至134中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
(d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列；
(e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列；和
(f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
实施例138.根据实施例129至134中任一项所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:52、53、105、106和205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
实施例139.根据实施例129所述的药物组合物，其中该抗KLK5抗体为根据实施例28至49中任一项所述的抗体。
实施例140.一种药物组合物，其包含根据实施例28至49中任一项所述的抗体以及药用载体。
实施例141.根据实施例140所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
实施例142.根据实施例141所述的药物组合物，其中该另外的治疗剂为KLK7抑制剂。
实施例143.根据实施例142所述的药物组合物，其中该KLK7抑制剂为抗KLK7抗体。
实施例144.根据实施例143所述的药物组合物，其中该抗KLK7抗体为根据实施例1至21中任一项所述的抗体。
实施例145.一种药物组合物，其包含根据实施例1至21中任一项所述的抗体和根据实施例28至49中任一项所述的抗体以及药用载体。
实施例146.根据实施例126至145中任一项所述的药物组合物，其包含选自消炎剂和抗生素的另外的治疗剂。
实施例147.一种药物组合物，其包含根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体。
实施例148.根据实施例147所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
实施例149.根据实施例148所述的药物组合物，其中该另外的治疗剂为消炎剂。
实施例150.根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物，其中该药物组合物用于局部施用。
实施例151.根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物，其中该药物组合物用于皮下施用或静脉内施用。
实施例152.根据实施例1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物，其用作药物。
实施例153.根据实施例1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物，其用于在治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病中使用。
实施例154.根据实施例153所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中该哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例155.根据实施例154所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中该哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例156.一种根据实施例1至21中任一项所述的抗体与根据实施例28至49中任一项所述的抗体的组合，其用作药物。
实施例157.根据实施例1至21中任一项所述的抗体与根据实施例28至49中任一项所述的抗体的组合在治疗疾病中的用途，该疾病选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮。
实施例158.根据实施例157所述使用的组合，其中该哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例159.根据实施例158所述的组合，其中该哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例160.根据实施例1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病。
实施例161.根据实施例160所述的用途，其中该哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例162.根据实施例161所述的用途，其中该哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例163.根据实施例1至21中任一项所述的抗体与根据实施例28至49中任一项所述的抗体的组合在制备中的用途，该药物用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病。
实施例164.根据实施例163所述的用途，其中该哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例165.根据实施例164所述的用途，其中该哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例166.根据实施例1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，该药物用于供减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。
实施例167.根据实施例1至21中任一项所述的抗体与根据实施例28至49中任一项所述的抗体的组合在制备药物中的用途，该药物用于减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。
实施例168.一种治疗患有选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病的个体的方法，其包括向该个体施用有效量的根据实施例1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物。
实施例169.一种治疗患有选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病的个体的方法，其包括向该个体施用a)有效量的根据实施例1至21中任一项所述的抗体；和b)有效量的根据实施例28至49中任一项所述的抗体。
实施例170.根据实施例169所述的方法，其中(a)中的抗体和(b)中的抗体同时施用。
实施例171.根据实施例169所述的方法，其中(a)中的抗体和(b)中的抗体依序施用。
实施例172.一种治疗患有选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病的个体的方法，其包括向该个体施用有效量的根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或有效量的根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物。
实施例173.根据实施例168至172中任一项所述的方法，其中该哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例174.根据实施例173所述的方法，其中该哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
实施例175.根据实施例168至172中任一项所述的方法，其中该个体患有Netherton综合征。
实施例176.根据实施例168至172中任一项所述的方法，其中该个体患有红斑痤疮。
实施例177.根据实施例168至176中任一项所述的方法，其进一步包括将另外的治疗剂施用至该个体。
实施例178.根据实施例177所述的方法，其中该另外的治疗剂为消炎剂。
实施例179.一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法，其包括向该个体施用有效量的根据实施例1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。
实施例180.一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法，其包括向该个体施用a)有效量的根据实施例1至21中任一项所述的抗体；和b)有效量的根据实施例28至49中任一项所述的抗体，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。
实施例181.根据实施例180所述的方法，其中(a)中的抗体和(b)中的抗体同时施用。
实施例182.根据实施例180所述的方法，其中(a)中的抗体和(b)中的抗体依序施用。
实施例183.一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法，其包括向该个体施用根据实施例56至112中任一项所述的双特异性抗体或有效量的根据实施例126至149中任一项所述的药物组合物，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。
实施例184.根据实施例168至183中任一项所述的方法，其中该施用为皮下施用或静脉内施用。
实施例185.根据实施例168至183中任一项所述的方法，其中该施用为局部施用。
实施例186.根据实施例168至183中任一项所述的方法，其中该施用为静脉内施用。
实施例187.根据实施例153所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中该疾病为Netherton综合征。
实施例188.根据实施例157所述使用的组合，其中该疾病为Netherton综合征。
实施例189.根据实施例160或163中任一项所述的用途，其中该疾病为Netherton综合征。
实施例190.根据实施例166或167中任一项所述的用途，其中该药物用于在患有Netherton综合征的个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。
实施例191.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的双特异性抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中该第一结合结构域结合人KLK7并且该第二结合结构域结合人KLK5，其中该第一结合结构域包含SEQ ID NO:206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:207的轻链氨基酸序列，并且该第二结合结构域包含SEQ ID NO:208或210的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列。
实施例192.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的抗KLK5抗体，其中该抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
实施例193.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的抗KLK7抗体，其中该抗KLK7抗体包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
实施例194.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的抗体组合，其中该抗体组合包含抗KLK5抗体和抗KLK7抗体，其中该抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQID NO:62的VL序列；并且其中该抗KLK7抗体包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
实施例195.根据实施例166或167所述的用途，或根据实施例179、180和183中任一项所述的方法，或根据实施例237所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中该皮肤炎性细胞因子为IL-8、TNFα、IL-6、IL-4和/或G-CSF中的一种或多种。
附图说明
图1A-图1B显示抗KLK7抗体rb.14H11c-LC轻链可变区与某些人源化版本的轻链可变区(1A)和抗KLK7抗体rb.14H11c-HC重链可变区与某些人源化版本的重链可变区(1B)的比对。指示了根据Chothia、Kabat和接触残基的CDR。人源化版本相对于兔亲本可变区的差异以黑色背景下的白色字显示。
图2A-图2B显示人源化抗KLK5抗体hu.10C5-H28L5轻链可变区与某些经修饰人源化版本的轻链可变区(2A)和人源化抗KLK5抗体hu.10C5-H28L5重链可变区与某些经修饰人源化版本的重链可变区(2B)的比对。指示了根据Chothia、Kabat和接触残基的CDR。人源化版本相对于亲本可变区的差异以黑色背景下的白色字显示。
图3A-图3B显示人源化抗KLK5抗体hu.9H5-H14L4轻链可变区与某些经修饰人源化版本的轻链可变区(3A)和人源化抗KLK5抗体hu.9H5-H14L4重链可变区与某些经修饰人源化版本的重链可变区(3B)的比对。指示了根据Chothia、Kabat和接触残基的CDR。人源化版本相对于亲本可变区的差异以黑色背景下的白色字显示。
图4显示人源化抗KLK5抗体hu.10C5.L5H28重链和轻链变体与亲本hu.10C5.L5H28的亲和力。
图5显示人源化抗KLK5抗体hu.9H5.L4H14重链和轻链变体的结合率(ka)和解离率(kd)的散点图。
图6A-图6B显示针对人KLK5(图6A)和食蟹猕猴KLK5(图6B)的所指示hu.10C5.L5H28变体的表面等离子体共振迹线。
图7A-图7B显示针对人KLK5(图7A)和食蟹猕猴KLK5(图7B)的所指示hu.9H5.L4H14变体的表面等离子体共振迹线。
图8显示在人正常皮肤、特应性皮炎和红斑痤疮中的代表性KLK5蛋白质表达。
图9显示在人正常皮肤、特应性皮炎、红斑痤疮和银屑病中的代表性KLK7 mRNA染色。
图10A-图10C显示在人正常皮肤、特应性皮炎、红斑痤疮和银屑病中的KLK5表达深度(10A)、KLK7表达深度(10B)和SPINK5表达深度(10C)。
图11显示经施用盐水、KLK5或KLK7的小鼠中的经表皮失水量。
图12A-图12C显示经施用同型对照抗体、抗鼠KLK5抗体、抗鼠KLK7抗体、抗KLK5抗体和抗KLK7抗体的组合或SPINK5-Fc的SDS/金黄色葡萄球菌蛋白A特应性皮炎模型小鼠的每日临床评分(12A)、终末特应性皮炎总分(12B)和AUC皮肤评分(12C)。
图13显示经施用同型对照抗体、抗鼠KLK5抗体、抗鼠KLK7抗体、抗KLK5抗体和抗KLK7抗体的组合或抗IL-13抗体的SDS/金黄色葡萄球菌蛋白A特应性皮炎模型小鼠的终末特应性皮炎总分、经表皮失水量和组织学疾病严重度评分。
图14显示来自经施用同型对照抗体、抗KLK5抗体和抗KLK7抗体的组合或抗IL-13抗体的SDS/金黄色葡萄球菌蛋白A特应性皮炎模型小鼠的皮肤的代表性苏木精和曙红染色。
图15显示本文所提供的例示性双特异性抗KLK5/KLK7抗体的示意图，该抗体包括促进适当的重链/轻链配对的取代和/或降低效应功能的取代。在替代型式中，杵可存在于抗KLK5臂上，并且臼可存在于抗KLK7臂上。
图16A-图16D显示，使用抗mKLK5/mKLK7双特异性抗体处理的Spink5缺失型小鼠的皮疹和鳞屑减少。Spink5 f/f Cre-ERT2阴性对照小鼠使用16mg/kg他莫昔芬处理(16A)，并且Spink5 f/f Cre-ERT2+小鼠使用16mg/kg(16B)、8mg/kg(16C)或4mg/kg(16D)他莫昔芬注射，然后每隔一天使用2.5mg抗gp120同型对照抗体或2.5mg抗mKLK5/mKLK7双特异性抗体处理一次。注射后6天分析背部皮肤。
图17A-图17E显示，与同型对照抗体处理相比，由在进行抗mKLK5/mKLK7双特异性抗体处理后的Spink5缺失型小鼠的背部皮肤制备的裂解物中的细胞因子IL-8(17A)、TNF-α(17B)、IL-6(17C)、IL-4(17D)和G-CSF(17E)减少。
图18显示来自使用16mg/kg他莫昔芬处理的Spink5 f/f Cre-ERT2阴性对照小鼠以及使用16mg/kg他莫昔芬和同型对照抗体或抗mKLK5/mKLK7双特异性抗体处理的Spink5f/f Cre-ERT2+小鼠的苏木精和曙红染色皮肤的代表性横截面。
图19A-图19B显示上皮通透性，如通过使用KLK5、KLK7、KLK5+KLK7、和KLK5+KLK7+抗KLK5/KLK7双特异性抗体处理的人表皮角质细胞中的跨上皮电阻(TEER)所测量。
图20A-图20C显示结合至KLK7的抗KLK7 rb.14H11c Fab的晶体结构。结合至KLK7的完全Fab显示于图20A中，其中仅叠加KLK7。图20B显示KLK7-Fab界面。图20C显示呈天然构象的KLK7(黄色)和结合至rb.14H11c Fab的KLK7(青色)的叠加。rb14H11c重链的部分以深蓝色显示。
图21显示抗KLK5抗体hu.10C5.VY.A和抗KLK7抗体hu.14H11c.KR的重链可变区序列和轻链可变区序列。与hu.14H11c-H11.Q39E VH、hu.14H11c-L2.Q38K VL和hu.10C5-H28.Q39K.N53V VH相比经取代的氨基酸被突显出来。
具体实施方式
I.定义
出于本文目的的“受体人框架”是这样的框架，其包含来源于如下所定义的人免疫球蛋白框架或人共有框架的轻链可变结构域(VL)框架或重链可变结构域(VH)框架的氨基酸序列。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与所述人免疫球蛋白框架或人共有框架相同的氨基酸序列，或者其可以包含氨基酸序列变化。在一些方面，氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少或2个或更少。在一些方面，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力一般可由解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法测量，包括本文所述的那些方法。下文描述用于测量结合亲和力的具体的说明性和示例性方法。
“亲和力成熟的”抗体是指在一个或多个互补决定区(CDR)中具有一个或多个改变的抗体，与不具有此类改变的亲本抗体相比，此类改变引起抗体对抗原的亲和力的改善。
术语“抗KLK7抗体”和“与KLK7结合的抗体”是指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合KLK7，诸如人KLK7，使得该抗体可用作靶向KLK7的诊断和/或治疗剂。在一个方面，例如通过表面等离子体共振(SPR)测量的，抗KLK7抗体与不相关的、非KLK7蛋白的结合程度小于抗体与KLK7结合的约10％。在某些方面中，与KLK7结合的抗体的解离常数(KD)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。当抗体的KD为1μM或更小时，则称该抗体“特异性地结合”KLK7。在某些方面，抗KLK7抗体与KLK7的表位结合，所述表位在来自不同物种的KLK7中是保守的。
术语“抗KLK5抗体”和“与KLK5结合的抗体”是指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合KLK5，诸如人KLK5，使得该抗体可用作靶向KLK5的诊断和/或治疗剂。在一个方面，例如通过表面等离子体共振(SPR)测量的，抗KLK5抗体与不相关的、非KLK5蛋白的结合程度小于抗体与KLK5结合的约10％。在某些方面中，与KLK5结合的抗体的解离常数(KD)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。当抗体的KD为1μM或更小时，则称该抗体“特异性地结合”KLK5。在某些方面，抗KLK5抗体与KLK5的表位结合，所述表位在来自不同物种的KLK5中是保守的。
术语“抗KLK5/KLK7抗体”和“与KLK5和KLK7结合的抗体”是指这样的多特异性抗体，其能够以足够的亲和力结合KLK7和KLK5，使得该抗体可用作靶向KLK7和/或KLK5的诊断剂和/或治疗剂。在一个方面，抗KLK5/KLK7抗体与无关、非KLK7/非KLK5蛋白质结合的程度小于该抗体与KLK7或KLK5结合的约10％，其通过例如表面等离子体共振(SPR)所量测。在某些方面，与KLK7和KLK5结合的多特异性抗体的解离常数(KD)针对KLK5和KLK7中的每一者为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。当抗体的KD为1μM或更小时，则称该抗体与靶蛋白“特异性地结合”。在某些方面，抗KLK5/KLK7抗体与KLK7的表位结合，该表位在来自不同物种的KLK7中是保守的。在某些方面，抗KLK5/KLK7抗体与KLK5的表位结合，该表位在来自不同物种的KLK5中是保守的。
本文的术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且包括各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出所需的抗原结合活性即可。
“抗体片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的一部分且结合完整抗体结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双体抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv和scFab)；单结构域抗体(dAb)；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。关于某些抗体片段的综述，请参见Holliger和Hudson,NatureBiotechnology23:1126-1136(2005)。
如本文所用，抗体的“结合结构域”是指足以与抗原结合的可变结构域的部分。在一些实施例中，结合结构域包含重链(HC)CDR1、CDR2和CDR3以及轻链(LC)CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施例中，结合结构域包含重链(HC)CDR1、FR2、CDR2、FR3和CDR3以及轻链(LC)CDR1、FR2、CDR2、FR3和CDR3。
术语“表位”表示与抗KLK7抗体或抗KLK5抗体所结合的蛋白质或非蛋白质的抗原上的位点。表位既可以由连续的氨基酸伸长段(线性表位)形成，或者通过包含非连续的氨基酸(构象表位)形成，例如由于抗原折叠，即由于蛋白质抗原的三级折叠而在空间上接近。在蛋白质抗原暴露于变性剂后，线性表位通常仍被抗体结合，而构象表位通常在用变性剂处理后被破坏。表位包含独特的立体构象中的至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或8至10个氨基酸。
抗体结合的筛选可以使用本领域常规的方法进行，例如但不限于丙氨酸扫描、肽印迹(参见Meth.Mol.Biol.248(2004)443-463)、肽裂解分析、表位切除，表位提取、抗原的化学修饰(参见Prot.Sci.9(2000)487-496)和交叉阻断(参见“Antibodies”,Harlow andLane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY)。
基于抗原结构的抗体谱分析(ASAP)，也称为修饰辅助谱分析(MAP)，允许基于来自众多抗体的每种抗体与化学或酶修饰的抗原表面的结合谱，将多种与KLK7或KLK5特异性地结合的单克隆抗体分类(参见例如US 2004/0101920)。每个组中的抗体结合相同的表位，该表位可以是独特的表位，该独特的表位与另一个组所代表的表位明显不同或部分重叠。
竞争性结合也可用于容易地确定抗体是与KLK7的相同表位结合还是与抗KLK7抗体竞争结合。例如，与参考抗KLK7抗体“结合至相同的表位的抗体”是指在竞争测定中分别阻断参考抗KLK7抗体与其抗原的结合达50％或更高的抗体，反之，参考抗体在竞争测定中阻断该抗体与其抗原的结合达50％或更高。同样例如，为了确定抗体是否与参考抗KLK7抗体结合相同表位，使参考抗体在饱和条件下与KLK7结合。在去除过量的参考抗KLK7抗体后，评定所讨论的抗KLK7抗体与KLK7结合的能力。如果在参考抗KLK7抗体饱和结合后抗KLK7抗体能够与KLK7结合，则可以得出结论，所讨论的抗KLK7抗体与和参考抗KLK7抗体不同的表位结合。但是，如果所讨论的抗KLK7抗体在参考抗KLK7抗体饱和结合后不能与KLK7结合，则所讨论的抗KLK7抗体可能与和参考抗KLK7抗体所结合的表位相同的表位结合。为了确认所讨论的抗体是与同一表位结合还是由于空间原因而使其受阻，可以使用常规实验(例如，使用ELISA、RIA、表面等离子体共振、流式细胞术或任何其他本领域可获得的定量或定性的抗体结合测定法进行的肽突变和结合分析)。该测定应以两种设置进行，即，两种抗体均为饱和抗体。如果在这两种设置中，仅第一(饱和)抗体能够与KLK7结合，则可以得出结论，所讨论的抗KLK7抗体和参考抗KLK7抗体竞争结合至KLK7。
类似地，竞争性结合可用于容易地确定抗体是与KLK5的相同表位结合还是与抗KLK5抗体竞争结合。例如，与参考抗KLK5抗体“结合至相同的表位的抗体”是指在竞争测定中分别阻断参考抗KLK5抗体与其抗原的结合达50％或更高的抗体，反之，参考抗体在竞争测定中阻断该抗体与其抗原的结合达50％或更高。同样例如，为了确定抗体是否与参考抗KLK5抗体结合相同表位，使参考抗体在饱和条件下与KLK5结合。在去除过量的参考抗KLK5抗体后，评定所讨论的抗KLK5抗体与KLK5结合的能力。如果在参考抗KLK5抗体饱和结合后抗KLK5抗体能够与KLK5结合，则可以得出结论，所讨论的抗KLK5抗体与和参考抗KLK5抗体不同的表位结合。但是，如果所讨论的抗KLK5抗体在参考抗KLK5抗体饱和结合后不能与KLK5结合，则所讨论的抗KLK5抗体可能与和参考抗KLK5抗体所结合的表位相同的表位结合。为了确认所讨论的抗体是与同一表位结合还是由于空间原因而使其受阻，可以使用常规实验(例如，使用ELISA、RIA、表面等离子体共振、流式细胞术或任何其他本领域可获得的定量或定性的抗体结合测定法进行的肽突变和结合分析)。该测定应以两种设置进行，即，两种抗体均为饱和抗体。如果在这两种设置中，仅第一(饱和)抗体能够与KLK5结合，则可以得出结论，所讨论的抗KLK5抗体和参考抗KLK5抗体竞争结合至KLK5。
在一些方面，如在竞争性结合测定中测量的，如果一种抗体1、5、10、20或100倍过量抑制另一种抗体的结合至少50％、至少75％、至少90％或甚至99％或更高，则认为两种抗体结合相同或重叠的表位(参见例如Junghans等人，Cancer Res.50(1990)1495-1502)。
在一些方面，如果抗原中减少或消除一种抗体的结合的基本上所有氨基酸突变也减少或消除另一种抗体的结合，则认为两种抗体结合相同的表位。如果只有一种减少或消除一种抗体结合的氨基酸突变的子集减少或消除另一种抗体的结合，则两种抗体被认为具有“重叠表位”。
术语“嵌合”抗体是指这样的抗体，在该抗体中重链和/或轻链的一部分来源于特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分来源于不同的来源或物种。
抗体的“类别”是指抗体的重链所具有的恒定结构域或恒定区的类型。存在五大类抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些抗体中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。在某些方面，抗体是IgG1同种型。在某些方面，抗体属于具有L234A、L235A和P329G突变(“LALAPG”)以降低Fc区效应子功能的IgG1同种型。在其他方面，抗体是IgG2同种型。在某些方面，抗体是在铰链区具有S228P突变的IgG4同种型，以改善IgG4抗体的稳定性。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。抗体的轻链基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以归属于两种类型中的一种，这两种类型称为kappa(κ)和lambda(λ)。
“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区、随着抗体同种型的变化而变化的那些生物学活性。抗体效应子功能的实例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。
药剂(例如药物组合物)的“有效量”是指能够以必需的剂量在必需的时段内有效地实现期望的治疗或预防结果的量。
本文的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，该C末端区包含恒定区的至少一部分。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个方面，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，由宿主细胞产生的抗体可以经历对来自重链C末端的一个或多个(特别是一个或两个)氨基酸的翻译后裂解。因此，由宿主细胞通过表达编码全长重链的特定核酸分子产生的抗体可以包括全长重链，或者所述抗体可以包括全长重链的切割变体。这可能是重链的最后两个C末端氨基酸为甘氨酸(G446)和赖氨酸(K447，根据EU索引)的情况。因此，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)或C末端甘氨酸(Gly446)和赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。因此，例如，“全长IgG1”包括具有Gly446和Lys447或不具有Lys447或不具有Gly446和Lys447两者的IgG1。如果没有另外指明，则包含Fc区的重链的氨基酸序列在本文中被表示为没有C末端甘氨酸-赖氨酸二肽。在一个方面，包含在根据本发明的抗体中的包括如本文所指定的Fc区的重链可包含Gly446和Lys447(根据EU索引编号)。在一个方面，包含在根据本发明的抗体中的包括如本文所指定的Fc区的重链可包含Gly446(根据EU索引编号)。除非本文另外规定，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据EU编号系统(也称为EU索引)，如在Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD,1991中所述。
“框架”或“FR”是指除互补决定区(CDR)之外的可变结构域残基。可变结构域的FR通常由以下四个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，CDR和FR序列通常在VH(或VL)中以如下序列出现：FR1-CDR-H1(CDR-L1)-FR2-CDR-H2(CDR-L2)-FR3-CDR-H3(CDR-L3)-FR4。
术语“全长抗体”、“完整抗体”及“全抗体”在本文中可互换地用于指代具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指外源核酸已被引入其中的细胞，包括此类细胞的子代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和来源于该原代转化细胞的子代，不考虑传代次数。子代可能不与亲本细胞的核酸内容物完全一致，而是可能含有突变。本文包括如在原始转化细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物活性的突变子代。
“人抗体”是这样的抗体，该抗体具有的氨基酸序列对应于由人或人细胞产生的抗体的氨基酸序列，或来源于利用人抗体全套库或其他人抗体编码序列的非人源的抗体的氨基酸序列。人抗体的该定义特别地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
“人共有框架”是这样的框架，其表示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基。一般而言，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自于可变结构域序列的亚组。一般而言，序列的亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第五版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991)，第1-3卷中所述的亚组。在一个方面，对于VL，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组κI。在一个方面，对于VH，该亚组是如Kabat等人，出处同上中的亚组III。
“人源化”抗体是指这样的嵌合抗体，其包含来自非人CDR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基。在某些方面，人源化抗体将基本上包含所有的至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本上所有CDR对应于非人抗体的CDR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的FR。人源化抗体任选地可以包含来源于人抗体的抗体恒定区的至少一部分。“人源化形式”的抗体，例如非人抗体，是指已经进行过人源化的抗体。
如本文所用的术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域中在序列上高变并确定抗原结合特异性的各个区域，例如“互补决定区”(“CDR”)。
通常，抗体包含六个CDR；三个在VH中(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且三个在VL中的(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。本文中的示例性CDR包括：
(a)出现在以下氨基酸残基处的高可变环：26至32(L1)、50至52(L2)、91至96(L3)、26至32(H1)、53至55(H2)和96至101(H3)(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)存在于氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)处的CDR(Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；以及
(c)出现在以下氨基酸残基处的抗原接触点：27c至36(L1)、46至55(L2)、89至96(L3)、30至35b(H1)、47至58(H2)，以及93至101(H3)(MacCallum等人，J.Mol.Biol.262:732-745(1996))。
除非另外指明，否则CDR根据出处同上的Kabat等人所述的方法确定。本领域的技术人员将理解，CDR名称也可以根据出处同上的Chothia所述的方法、出处同上的McCallum所述的方法或者任何其他在科学上接受的命名系统来确定。在一个方面，CDR残基包含在图1-图3中或说明书的其他地方鉴别的那些。
“免疫缀合物”为与一种或多种异源分子(包括但不限于细胞毒性剂)缀合的抗体。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些方面，个体或受试者是人。
“分离的”抗体为已从其自然环境的组分中分离的抗体。在一些方面，通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)方法确定，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评定抗体纯度的方法的综述，请参见例如Flatman等人，J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
术语“连接”当在两个多肽的上下文中使用时，意指多肽是同一氨基酸序列的一部分。连接的两个多肽可以被额外的氨基酸序列分隔开；也就是说，它们不必是连续的或彼此直接连接的。
术语“核酸分子”或“多核苷酸”包括包含核苷酸聚合物的任何化合物和/或物质。每个核苷酸由碱基组成，特别是嘌呤或嘧啶碱基(即胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U))、糖(即脱氧核糖或核糖)和磷酸酯基团。通常，核酸分子通过碱基序列进行描述，其中所述碱基代表核酸分子的一级结构(线性结构)。碱基序列通常表示为从5'至3'。在本文中，术语核酸分子涵盖脱氧核糖核酸(DNA)(包括例如互补DNA(cDNA)和基因组DNA)、核糖核酸(RNA)(特别是信使RNA(mRNA))、DNA或RNA的合成形式，以及包含这些分子中的两种或更多种的混合聚合物。核酸分子可以是线性的或环状的。此外，术语核酸分子包括有义链和反义链，以及单链和双链形式。此外，本文所描述的核酸分子可含有天然存在的或非天然存在的核苷酸。非天然存在的核苷酸的示例包括具有衍生化的糖或磷酸主链键或经化学修饰的残基的经修饰的核苷酸碱基。核酸分子还涵盖适合作为用于本发明的抗体的体外和/或体内(例如，在宿主或患者体内)直接表达的载体的DNA和RNA分子。此类DNA(例如cDNA)或RNA(例如mRNA)载体可以是未修饰的或经修饰的。例如，可以对mRNA进行化学修饰以增强RNA载体的稳定性和/或编码分子的表达，使得可以将mRNA注射到受试者体内以产生体内抗体(参见例如Stadler等人，Nature Medicine 2017，在线发表于2017年6月12日，doi:10.1038/nm.4356或EP 2 101 823 B1)。
“分离的”核酸是指已从其自然环境的组分中分离的核酸分子。经分离的核酸包括这样的核酸分子，其包含在通常含有核酸分子的细胞中，但该核酸分子存在于染色体外或与其天然染色体位置不同的染色体位置处。
“编码抗KLK7抗体的分离的核酸”是指编码抗KLK7抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括在单一载体或单独的载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。
“编码抗KLK5抗体的分离的核酸”是指编码抗KLK5抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括在单一载体或单独的载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中一个或多个位置的此类核酸分子。
“编码抗KLK5/KLK7双特异性抗体的分离的核酸”是指编码抗KLK5/KLK7双特异性抗体重链和轻链(或其片段)的一个或多个核酸分子，包括在单一载体或单独的载体中的此类核酸分子，以及存在于宿主细胞中的一个或多个位置处的此类核酸分子。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的生产过程中产生，此类变体通常以少量形式存在)之外，包括该群体的个别抗体具有同一性和/或结合相同表位。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂中的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示抗体的特征是从基本上同质的抗体群体获得的，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法，以及利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，在本文中描述了用于制备单克隆抗体的此类方法和其他示例性方法。
“裸抗体”是指不缀合至异源部分(例如，细胞毒性部分)或放射性标记物的抗体。裸抗体可存在于药物组合物中。
“天然抗体”是指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由经二硫键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N末端至C末端，每条重链均具有可变结构域(VH)，亦称为可变重链结构域或重链可变区，随后为三个恒定重链结构域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N末端至C末端，每条轻链均具有可变结构域(VL)，亦称为可变轻链结构域或轻链可变区，随后为恒定轻链(CL)结构域。
术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包括的说明书，其含有涉及此类治疗产品的使用的有关适应症、用法、剂量、施用、组合疗法、禁忌症和/或警告的信息。
相对于参照多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在比对候选序列与参考多肽序列并引入空位(如果必要的话)以实现最大的序列同一性百分比之后，并且出于比对的目的在不考虑将任何保守取代作为序列同一性的组成部分的情况下，候选序列中的氨基酸残基与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以通过本领域技术范围内的各种方式实现，例如使用公众可获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign(DNASTAR)软件或FASTA程序包。本领域技术人员可确定用于比对序列的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。可替代地，可以使用序列比较计算机程序ALIGN-2来生成同一性百分比值。ALIGN-2序列比较计算机程序由基因泰克公司编写，并且源代码已经与用户文档一起提交到U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，在那里以美国版权登记号TXU510087注册，并且在WO 2001/007611中有所描述。
除非另外指明，否则出于本文的目的，使用FASTA包第36.3.8c版或更高版本的ggsearch程序，利用BLOSUM50比较矩阵生成氨基酸序列同一性百分比的值。FASTA程序包由W.R.Pearson和D.J.Lipman(1988),“Improved Tools for Biological SequenceAnalysis”,PNAS 85:2444-2448；W.R.Pearson(1996)“Effective protein sequencecomparison”Meth.Enzymol.266:227-258；以及Pearson等人，(1997)Genomics 46:24-36创作并且可从www.fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml或www.ebi.ac.uk/Tools/sss/fasta公开获得。可替代地，可以使用可在fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi处访问的公共服务器来比较序列，使用ggsearch(全局蛋白质：蛋白质)程序和默认选项(BLOSUM50；开放：-10；ext：-2；Ktup＝2)来确保执行全局而非局部比对。在输出比对标头中给出氨基酸同一性百分比。
术语“药物组合物”或“药物制剂”是指处于允许包含在其中的活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对于将被施用该药物组合物的受试者具有不可接受的毒性的附加组分的制剂。
“药用载体”是指药物组合物或制剂中除活性成分之外的成分，其对受试者是无毒的。药用载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂，或防腐剂。
除非另外指明，否则如本文所用的术语“KLK5”和“激肽释放酶相关肽酶5”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然KLK5，该脊椎动物来源包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。该术语包括“全长”的未加工KLK5，以及通过细胞中加工产生的任何形式的KLK5。该术语还涵盖KLK5的天然存在变体，例如剪接变体或等位基因变体。例示性人前体KLK5蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:1(UniProtKB/Swiss-Prot：Q9Y337.3)中。例示性人成熟KLK5蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:2中，该序列缺乏信号肽(氨基酸1-22)和前肽(氨基酸23-66)。例示性食蟹猕猴前体KLK5蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:100(UniProtKB:A0A2K5W0T6)中。例示性食蟹猕猴成熟KLK5蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:101中，该序列缺乏信号肽(氨基酸1-22)和前肽(氨基酸23-64)。
除非另外指明，否则如本文所用的术语“KLK7”和“激肽释放酶相关肽酶7”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然KLK7，该脊椎动物来源包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。该术语包括“全长”的未加工KLK7，以及通过细胞中加工产生的任何形式的KLK7。该术语还涵盖KLK7的天然存在变体，例如剪接变体或等位基因变体。例示性人前体KLK7蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:3(UniProtKB/Swiss-Prot：P49862.1)中。例示性人成熟KLK7蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:4中，该序列缺乏信号肽(氨基酸1-22)和前肽(氨基酸23-29)。例示性食蟹猕猴前体KLK7蛋白的氨基酸序列示于SEQ ID NO:5(UniProtKB:G7PYG2)中。例示性食蟹猕猴成熟KLK7蛋白的氨基酸序列示于SEQID NO:6中，该序列缺乏信号肽(氨基酸1-21)和前肽(氨基酸22-29)。
如本文所用，“治疗”(及其语法变体)是指试图改变所治疗个体的疾病的自然病程，并且可以执行以用于预防或可以在临床病理学过程中执行的临床干预措施。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、降低疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态，以及缓解或改善预后。在一些方面，本发明的抗体用于延迟疾病的发展或减缓疾病的进展。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变结构域(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守框架区(FR)和三个互补决定区(CDR)。参见，例如，Kindt等人.KubyImmunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007).可变结构域可包含：重链(HC)CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3，其具有或不具有FR1和/或FR4的全部或一部分；以及轻链(LC)CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3，其具有或不具有FR1和/或FR4的全部或一部分。也就是说，可变结构域可缺乏FR1和/或FR4的一部分，只要它保留抗原结合活性即可。单个VH或VL结构域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可分别使用来自结合该抗原的抗体的VH或VL结构域来进行分离，以筛选互补VL或VH结构域的文库。参见，例如，Portolano等人，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人，Nature 352:624-628(1991)。
如本文所用的术语“载体”是指能够载运与其相连的另一核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体，以及整合入其已被引入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
II.组合物和方法
在一个方面，本发明部分基于以下发现：KLK5和KLK7可能均在上皮屏障通透性中起作用。因此，抑制KLK5和KLK7二者可能在治疗与上皮屏障通透性过度相关的病症方面显示出改善的功效。在某些方面，提供了与KLK5结合的抗体。在某些方面，提供了与KLK7结合的抗体。在某些方面，提供了与KLK5和KLK7结合的多特异性抗体。本发明的抗体可用于例如诊断或治疗Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮。
A.示例性抗KLK7抗体
在一个方面，本发明提供了与KLK7结合的抗体。在一个方面，提供了与KLK7结合的分离的抗体。在一个方面，本发明提供了与KLK7特异性地结合的抗体。在某些方面，抗KLK7抗体抑制KLK7蛋白酶活性。在一些实施例中，抗KLK7抗体抑制人KLK7介导的包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的裂解，其中Nval为正缬氨酸。在一些实施例中，抗KLK7抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7介导的包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的裂解，其中Nval为正缬氨酸。在一些实施例中，抗KLK7抗体以不大于5nM、或不大于3nM、或不大于2nM或不大于1nM的IC50抑制人KLK7介导的包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的裂解，其中Nval为正缬氨酸。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，抗KLK7抗体以小于20pM、小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM、或小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，抗KLK7抗体以不大于20pM、不大于10pM、或不大于9pM、或不大于8pM、或不大于7pM、或不大于6pM、或不大于5pM、或不大于3pM、或不大于2pM或不大于1pM的KD结合人KLK7。
在一些实施例中，抗KLK7抗体结合KLK7的氨基酸R71-N82、K152-S158和/或Q211-K222内的表位，其中氨基酸根据SEQ ID NO:4编号。在一些实施例中，抗KLK7抗体接触KLK7的氨基酸R71-N82内的至少一个氨基酸、接触KLK7的氨基酸K152-S158内的至少一个氨基酸以及接触KLK7的氨基酸Q211-K222内的至少一个氨基酸，如根据SEQ ID NO:4编号。在一些实施例中，抗KLK7抗体结合包含KLK7的氨基酸H72、P73、G74、S76、Q78、N82、N157、K211和/或T213中的一个或多个的表位，如根据SEQ ID NO:4编号。在一些实施例中，抗KLK7抗体结合包含KLK7的氨基酸H91、P92、G93、S95、Q97、N101、N178、K233和/或T235中的一个或多个的表位，如通过胰凝乳蛋白酶编号。在一些实施例中，抗KLK7抗体结合包含KLK7的氨基酸H72、P73、G74、S76、Q78、N82、N157、K211和T213的表位，如根据SEQ ID NO:4编号。在一些实施例中，抗KLK7抗体结合包含KLK7的氨基酸H91、P92、G93、S95、Q97、N101、N178、K233和T235的表位，如通过胰凝乳蛋白酶编号。
在一些实施例中，抗KLK7抗体当与KLK7结合时，导致人KLK7的构象变化，其中构象变化变构地导致人KLK7的底物结合位点和/或活性位点的破坏。
在一些实施例中，抗KLK7抗体不与KLK5结合。在一些实施例中，抗KLK7抗体不与KLK1、KLK4、KLK5、KLK11和KLK14结合。在一些实施例中，抗KLK7抗体与人KLK7和食蟹猕猴KLK7结合。
在一个方面，本发明提供了一种抗KLK7抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:9或200的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10或201的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
在一个方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列。在一个方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列。在另一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；和CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；和CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10或201的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一个方面，该抗体包含：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10或201的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
在另一方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(i)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(ii)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；和(iii)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10或201的氨基酸序列；(ii)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
在本文提供的任何方面，抗KLK7抗体是人源化的。在一个方面，抗KLK7抗体进一步包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在一个方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，其包含选自以下项的一个或多个重链框架序列：(a)选自SEQ ID NO:123-128的重链框架区1(HC-FR1)；(b)选自SEQ ID NO:130-133的重链框架区2(HC-FR2)；(c)选自SEQ ID NO:135-143的重链框架区3(HC-FR3)；和(d)选自SEQ ID NO:144-145的重链框架区4(HC-FR4)。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含选自SEQ ID NO:123-128的HC-FR1。在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含选自SEQ ID NO:130-133的HC-FR2。在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含选自SEQ ID NO:135-143的HC-FR3。在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含选自SEQ IDNO:144-145的HC-FR4。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含与选自SEQ ID NO:123-128的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的HC-FR1。在一个方面，VH结构域包含与选自SEQID NO:123-128的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的HC-FR1。在另一方面，VH结构域包含与选自SEQ ID NO:123-128的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的HC-FR1。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含与选自SEQ ID NO:130-133的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的HC-FR2。在一个方面，VH结构域包含与选自SEQID NO:130-133的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的HC-FR2。在另一方面，VH结构域包含与选自SEQ ID NO:130-133的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的HC-FR2。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含与选自SEQ ID NO:135-143的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的HC-FR3。在一个方面，VH结构域包含与选自SEQID NO:135-143的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的HC-FR3。在另一方面，VH结构域包含与选自SEQ ID NO:135-143的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的HC-FR3。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VH结构域，该VH结构域包含与选自SEQ ID NO:144-145的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的HC-FR4。在一个方面，VH结构域包含与选自SEQID NO:144-145的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的HC-FR4。在另一方面，VH结构域包含与选自SEQ ID NO:144-145的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的HC-FR4。
在一个方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含选自以下项的一个或多个轻链框架序列：(a)选自SEQ ID NO:147-150的轻链框架区1(LC-FR1)；(b)选自SEQ IDNO:152-154的轻链框架区2(LC-FR2)；(c)选自SEQ ID NO:156-158的轻链框架区3(LC-FR3)；和(d)SEQ ID NO:160的轻链框架区4(LC-FR4)。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含选自SEQ ID NO:147-150的LC-FR1。在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含选自SEQ ID NO:152-154的LC-FR2。在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含选自SEQ ID NO:156-158的LC-FR3。在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:160的LC-FR4。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含与选自SEQ ID NO:147-150的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的LC-FR1。在一个方面，VL结构域包含与选自SEQID NO:147-150的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的LC-FR1。在另一方面，VL结构域包含与选自SEQ ID NO:147-150的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的LC-FR1。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含与选自SEQ ID NO:152-154的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的LC-FR2。在一个方面，VL结构域包含与选自SEQID NO:152-154的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的LC-FR2。在另一方面，VL结构域包含与选自SEQ ID NO:152-154的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的LC-FR2。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含与选自SEQ ID NO:156-158的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的LC-FR3。在一个方面，VL结构域包含与选自SEQID NO:156-158的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的LC-FR3。在另一方面，VL结构域包含与选自SEQ ID NO:156-158的氨基酸序列具有至少98％序列同一性的LC-FR3。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR4，其与SEQ ID NO:160具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:160具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:160具有至少98％的序列同一性。
在另一方面，抗KLK7抗体包含VH的一个或多个CDR序列，其选自SEQ ID NO:13和15-30。在另一实施例中，抗KLK7抗体包含VL的一个或多个CDR序列，其选自SEQ ID NO:14、31-38和203。在另一实施例中，抗KLK7抗体包含选自SEQ ID NO:13和15-30的VH的CDR序列，以及选自SEQ ID NO:14、31-38和203的VL的CDR序列。
在又一方面，抗KLK7抗体包含选自SEQ ID NO:13和15-30的VH的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列，以及选自SEQ ID NO:14、31-38和203的VL的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。
在一个方面，抗KLK7抗体包含：VH的一个或多个重链CDR氨基酸序列，其选自SEQID NO:13、15-30和202；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的VH的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK7抗体包含：VH的三个重链CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO:13、15-30和202；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的VH的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK7抗体包含：VH的三个重链CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO:13、15-30和202；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的VH的框架氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在另一方面，抗KLK7抗体包含：VH的三个重链CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO:13、15-30和202；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的VH的框架氨基酸序列具有至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK7抗体包含：VL的一个或多个轻链CDR氨基酸序列，其选自SEQID NO:14、31-38和203；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的VL的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK7抗体包含：VL的三个轻链CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO:14、31-38和203；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的VL的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK7抗体包含：VL的三个轻链CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO:14、31-38和203；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的VL的框架氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在另一方面，抗KLK7抗体包含：VL的三个轻链CDR氨基酸序列，其选自SEQ ID NO:14、31-38和203；以及框架，该框架与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的VL的框架氨基酸序列具有(尤其至少)至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK7抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。
在一个方面，抗KLK7抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；其中该抗体与KLK7特异性地结合。在一个方面，VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。
在一个方面，如通过表面等离子体共振所测量，抗体与KLK7结合的解离常数(KD)为小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM或小于5pM。在一个方面，如通过表面等离子体共振所测量，抗体与KLK7结合的解离常数(KD)不大于10pM、或不大于9pM、或不大于8pM、或不大于7pM、或不大于6pM或不大于5pM。
在另一方面，抗KLK7抗体包含重链可变结构域(VH)序列，该VH序列与选自SEQ IDNO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，抗KLK7抗体包含重链可变结构域(VH)序列，该VH序列与选自SEQ ID NO:13和15-30的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK7抗体保留了与KLK7结合的能力。在某些方面，在选自SEQ ID NO:13、15-30或202的氨基酸序列中，共有1至10个氨基酸已经取代、插入和/或缺失。在某些方面，取代、插入或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗KLK7抗体包含选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列中的VH序列，其包括该序列的翻译后修饰。任选地，抗KLK7抗体包含SEQ ID NO:29、30或202中的VH序列，其包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的CDR-H1，(b)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的CDR-H2和(c)包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的CDR-H3。在另一方面，提供一种抗KLK7抗体，其中该抗体包含轻链可变结构域(VL)序列，该VL序列与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，抗KLK7抗体包含轻链可变结构域(VL)序列，该VL序列与选自SEQID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK7抗体保留了与KLK7结合的能力。在某些方面，在选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列中，共有1至10个氨基酸已经取代、插入和/或缺失。在某些方面，取代、插入或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗KLK7抗体包含选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列中的VL序列，其包括该序列的翻译后修饰。任选地，抗KLK7抗体包含SEQ ID NO:32或38所示的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的CDR-L1，(b)包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的CDR-L2和(c)包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的CDR-L3。
在另一方面，提供了一种抗KLK7抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一方面中的VH序列和如上文提供的任一方面的VL序列。在一个方面，该抗体包含分别为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:32的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一个方面，该抗体包含分别为SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:38的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一个方面，该抗体包含分别为SEQ ID NO:202和SEQ ID NO:203的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。
在又一方面，本发明提供一种抗体，其与本文所提供的抗KLK7抗体所结合的相同表位结合。例如，在某些方面，提供了一种与抗KLK7抗体所结合的相同表位结合的抗体，该抗体包含SEQ ID NO:29的VH序列以及SEQ ID NO:32的VL序列。例如，在某些方面，提供了一种与抗KLK7抗体所结合的相同表位结合的抗体，该抗体包含SEQ ID NO:202的VH序列以及SEQ ID NO:203的VL序列。
在另一方面，本发明提供一种抗体，其与本文所提供的抗KLK7抗体竞争结合KLK7。
在本发明的又一方面，根据以上方面的任一项所述的抗KLK7抗体为单克隆抗体，包括嵌合、人源化或人抗体。在一个方面，抗KLK7抗体为抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双抗体或F(ab’)2片段。在另一方面，抗体为全长抗体，例如本文所定义的完整IgG1抗体或其他抗体类别或同种型。
在另一方面，如以下1-8部分所述，根据以上方面的任一项的抗KLK7抗体可单独或组合地结合任何特征
B.示例性抗KLK5抗体
在一个方面，本发明提供了与KLK5结合的抗体。在一个方面，提供了与KLK5结合的分离的抗体。在一个方面，本发明提供了与KLK5特异性地结合的抗体。在某些方面，抗KLK5抗体抑制KLK5蛋白酶活性。在一些实施例中，抗KLK5抗体抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。在一些实施例中，抗KLK5抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。在一些实施例中，抗KLK5抗体以不大于5nM、或不大于3nM、或不大于2nM或不大于1nM的IC50抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，抗KLK5抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合KLK5。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，抗KLK5抗体以不大于60pM、不大于30pM、不大于20pM、不大于10pM或不大于5pM的KD结合KLK5。
在一些实施例中，抗KLK5抗体当与人KLK5结合时，导致人KLK5的构象变化，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性位点的破坏。
在一些实施例中，抗KLK5抗体与人KLK5上的表位结合，该表位包含根据标准蛋白酶编号选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224、Pro225和Lys233的一个或多个氨基酸残基(通过SEQ ID NO:2的顺序编号为P113、S114、A115、G116、V145、L146、S147、Q148、K149、R150、E152、D153、A154、Y155、P156、R157、Q158、I159、D160、D161、G167、D168、K169、A170、R172、N204、R205、P206和K214)。参见例如，PCT公开号WO 2019/178316A1。在一些实施例中，抗KLK5抗体与人KLK5上的表位结合，该表位包含根据标准蛋白酶编号选自由Pro130、Ser131、Ala132、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177、Asp178、Arg224和Lys233组成的组的一个或多个氨基酸残基。在一些实施例中，抗KLK5抗体与人KLK5上的表位结合，该表位包含根据标准蛋白酶编号选自Pro130、Ser131、Ala132、Gly133、Val162、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Tyr172、Pro173、Arg174、Gln174A、Ile176、Asp177和Lys233的一个或多个氨基酸残基。在一些实施例中，抗KLK5抗体与人KLK5上的表位结合，该表位包含根据标准蛋白酶编号选自Ser131、Ala132、Gly133、Leu163、Ser164、Gln165、Lys166、Arg167、Glu169、Asp170、Ala171、Pro173、Arg174、Gly184、Asp185、Lys186、Ala186A、Arg188、Asn223、Arg224和Pro225的一个或多个氨基酸残基。
在一些实施例中，抗KLK5抗体不与KLK7结合。在一些实施例中，抗KLK5抗体不与KLK1、KLK4、KLK7、KLK11或KLK14结合。在一些实施例中，抗KLK5抗体与人KLK5和食蟹猕猴KLK5结合。
抗体hu.10C5-H28L5和变体
在一个方面，本发明提供了一种抗KLK5抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39和107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42和204的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列。
在一个方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在另一方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VLCDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一个方面，该抗体包含(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
在一个方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含(a)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的CDR-H1、(b)包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的CDR-H2、以及(c)包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列的CDR-H3。在另一方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一个方面，该抗体包含(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
在一个方面，本发明提供一种抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列。在另一方面，该抗体包含CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供一种抗体，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列。在一个方面，该抗体包含(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在另一方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(i)CDR-H1，其包含选自SEQ ID NO:39和107的氨基酸序列；(ii)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列；和(iii)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；以及(b)VL结构域，其包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列；(ii)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:42的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:204的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
在本文提供的任何方面，抗KLK5抗体是人源化的。在一个方面，抗KLK5抗体进一步包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在一个方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含选自以下项的一个或多个重链框架序列：(a)SEQ ID NO:161的重链框架区1(HC-FR1)；(b)SEQ ID NO:162或163的重链框架区2(HC-FR2)；(c)SEQ ID NO:164的重链框架区3(HC-FR3)；和(d)SEQ ID NO:165的重链框架区4(HC-FR4)。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:161的HC-FR1。在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:162或163的HC-FR2。在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:164的HC-FR3。在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:165的HC-FR4。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR1，其与SEQ ID NO:161具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR1，其与SEQ ID NO:161具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR1，其与SEQ ID NO:161具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR2，其与SEQ ID NO:162或163具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR2，其与SEQ ID NO:162或163具有至少95％序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR2，其与SEQ ID NO:162或163具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR3，其与SEQ ID NO:164具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR3，其与SEQ ID NO:164具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR3，其与SEQ ID NO:164具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR4，其与SEQ ID NO:165具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR4，其与SEQ ID NO:165具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR4，其与SEQ ID NO:165具有至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含选自以下项的一个或多个轻链框架序列：(a)SEQ ID NO:166的轻链框架区1(LC-FR1)，(b)SEQ ID NO:167-168的轻链框架区2(LC-FR2)，(c)SEQ ID NO:169的轻链框架区3(LC-FR3)，和(d)SEQ ID NO:170的轻链框架区4(LC-FR4)。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:166的LC-FR1。在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:167或168的LC-FR2。在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:169的LC-FR3。在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:170的LC-FR4。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:166具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:166具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:166具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR2，其与SEQ ID NO:167-168具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR2，其与SEQ ID NO:167或168具有至少95％序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR2，其与SEQ ID NO:167或168具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR3，其与SEQ ID NO:169具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR3，其与SEQ ID NO:169具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR3，其与SEQ ID NO:169具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR4，其与SEQ ID NO:170具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR4，其与SEQ ID NO:170具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR4，其与SEQ ID NO:170具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH的一个或多个CDR序列。在另一实施例中，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:51或54-57的VL的一个或多个CDR序列。在另一实施例中，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH的CDR序列以及SEQ ID NO:51或54-57的VL的CDR序列。
在又一方面，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列以及SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ IDNO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在另一方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的框架氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在另一方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:51或54-57的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的VH结构域的框架氨基酸序列具有(尤其至少)至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与SEQ ID NO:51或54-67的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，VH结构域与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，VL结构域与SEQID NO:51或54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；其中该抗体与KLK5特异性地结合。在一个方面，VH结构域与SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，VL结构域与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，当与包含选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的VH序列和选自SEQ ID NO:51和54-67的VL序列的抗体的解离常数(KD)相比，该抗体与KLK5结合的解离常数(KD)减小多达10倍或增加多达10倍。
在另一方面，抗KLK5抗体包含重链可变结构域(VH)序列，该VH序列与选自SEQ IDNO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含重链可变结构域(VH)序列，该VH序列与选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留了与KLK5结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205中，共有1至10个氨基酸已经取代、插入和/或缺失。在某些方面，取代、插入或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205中的VH序列，其包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列。在另一方面，提供了一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含轻链可变结构域(VL)序列，该VL序列与SEQ ID NO:51或54-67的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含轻链可变结构域(VL)序列，该VL序列与SEQ ID NO:51或54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留了与KLK5结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:51或54-67中，共有1至10个氨基酸已经取代、插入和/或缺失。在某些方面，取代、插入或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含选自SEQ ID NO:51和54-67的VL序列，其包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)CDR-L1，其包含SEQID NO:43或44的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列。
在另一方面，提供了一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含上文提供的任一方面中的VH序列和如上文提供的任一方面中的VL序列。在一个方面，该抗体包含分别为SEQ ID NO:50、52、53、105、106或205和SEQ ID NO:51或54-67的VH和VL序列，其包括这些序列的翻译后修饰。
在又一方面，本发明提供一种抗体，其与本文所提供的抗KLK5抗体所结合的相同表位结合。例如，在某些方面，提供一种与抗KLK5抗体结合至相同表位的抗体，该抗体包含选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的VH序列和选自SEQ ID NO:51和54-67的VL序列。
在本发明的又一方面，根据以上方面的任一项所述的抗KLK5抗体为单克隆抗体，包括嵌合、人源化或人抗体。在一个方面，抗KLK5抗体为抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双抗体或F(ab’)2片段。在另一方面，抗体为全长抗体，例如本文所定义的完整IgG1抗体或其他抗体类别或同种型。
在进一步方面，根据上述实施例中任一项所述的抗KLK5抗体可单独或组合地纳入如以下1-8节所述的特征。
抗体hu.9H5-H14L4和变体
在一个方面，本发明提供了一种抗KLK5抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:69或70的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:71或72的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。
在一个方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在又一方面，该抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种抗体，该抗体包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一个方面，该抗体包含(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQID NO:74的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
在另一方面，本发明的抗体包含：(a)VH结构域，该VH结构域包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VH CDR序列：(i)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(ii)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:69或70的氨基酸序列；和(iii)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:71或72的氨基酸序列；以及(b)VL结构域，该VL结构域包含选自以下项的至少一个、至少两个或全部三个VL CDR序列：(i)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(ii)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种抗体，其包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
在本文提供的任何方面，抗KLK5抗体是人源化的。在一个方面，抗KLK5抗体进一步包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。
在一个方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含选自以下项的一个或多个重链框架序列：(a)SEQ ID NO:171的重链框架区1(HC-FR1)；(b)SEQ ID NO:172或173的重链框架区2(HC-FR2)；(c)SEQ ID NO:174的重链框架区3(HC-FR3)；和(d)SEQ ID NO:175的重链框架区4(HC-FR4)。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:171的HC-FR1。在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:172或173的HC-FR2。在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:174的HC-FR3。在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含SEQ ID NO:175的HC-FR4。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR1，其与SEQ ID NO:171具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR1，其与SEQ ID NO:171具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR1，其与SEQ ID NO:171具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR2，其与SEQ ID NO:172或173具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR2，其与SEQ ID NO:172或173具有至少95％序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR2，其与SEQ ID NO:172或173具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR3，其与SEQ ID NO:174具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR3，其与SEQ ID NO:174具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR3，其与SEQ ID NO:174具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VH结构域，该VH结构域包含HC-FR4，其与SEQ ID NO:175具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VH结构域包含HC-FR4，其与SEQ ID NO:175具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VH结构域包含HC-FR4，其与SEQ ID NO:175具有至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含选自以下项的一个或多个轻链框架序列：(a)SEQ ID NO:176的轻链框架区1(LC-FR1)；(b)SEQ ID NO:177或178的轻链框架区2(LC-FR2)；(c)SEQ ID NO:179的轻链框架区3(LC-FR3)；和(d)SEQ ID NO:180的轻链框架区4(LC-FR4)。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:176的LC-FR1。在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:177或178的LC-FR2。在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:179的LC-FR3。在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含SEQ ID NO:180的LC-FR4。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:176具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:176具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:176具有至少98％的序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR2，其与SEQ ID NO:177或178具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR2，其与SEQ ID NO:177或178具有至少95％序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR2，其与SEQ ID NO:177或178具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR3，其与SEQ ID NO:179具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR3，其与SEQ ID NO:179具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR3，其与SEQ ID NO:179具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含VL结构域，该VL结构域包含LC-FR4，其与SEQ ID NO:180具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一个方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:180具有至少95％的序列同一性。在另一方面，VL结构域包含LC-FR1，其与SEQ ID NO:180具有至少98％序列同一性。
在另一方面，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:79或81-87的VH的一个或多个CDR序列。在另一实施例中，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:80或88-94的VL的一个或多个CDR序列。在另一实施例中，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:79或81-87的VH的CDR序列和SEQ ID NO:80或88-94的VL的CDR序列。
在又一方面，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3氨基酸序列以及SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3氨基酸序列。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的一个或多个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在另一方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的三个重链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:79或81-87的VH结构域的框架氨基酸序列具有至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的一个或多个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的框架氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的框架氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在另一方面，抗KLK5抗体包含：SEQ ID NO:80或88-94的VL结构域的三个轻链CDR氨基酸序列；以及框架，该框架与SEQ ID NO:80或88-94的VH结构域的框架氨基酸序列具有(尤其至少)至少98％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:69或70的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:71或72的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ IDNO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与SEQ ID NO:79或81-87的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与SEQID NO:80或88-94的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，VH结构域与SEQ ID NO:79或81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，VL结构域与SEQ ID NO:80或88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。
在一个方面，抗KLK5抗体包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:69或70的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:71-72的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ IDNO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与SEQ ID NO:79或81-87的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与SEQID NO:80或88-94的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；其中该抗体与KLK5特异性地结合。在一个方面，VH结构域与SEQ ID NO:79或81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，VL结构域与SEQ ID NO:80或88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在一个方面，该抗体与KLK5结合的解离常数(KD)当与包含SEQ ID NO:79或81-87的VH序列和SEQ ID NO:80或88-94的VL序列的抗体的解离常数(KD)相比时减小多达10倍或增加多达10倍。
在另一方面，抗KLK5抗体包含重链可变结构域(VH)序列，该VH序列与SEQ ID NO:79或81-87的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含重链可变结构域(VH)序列，该VH序列与SEQ ID NO:79或81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VH序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留了与KLK5结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:79或81-87中，共有1至10个氨基酸已经取代、插入和/或缺失。在某些方面，取代、插入或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:79或81-87中的VH序列，其包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VH包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:69或70的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:71或72的氨基酸序列。在另一方面，提供了一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含轻链可变结构域(VL)序列，该VL序列与SEQ ID NO:80或88-94的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一个方面，抗KLK5抗体包含轻链可变结构域(VL)序列，该VL序列与SEQ ID NO:80或88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性。在某些方面，至少具有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的VL序列相对于参考序列含有取代(例如保守取代)、插入或缺失，但是包含该序列的抗KLK5抗体保留了与KLK5结合的能力。在某些方面，在SEQ ID NO:80或88-94中，共有1至10个氨基酸已经取代、插入和/或缺失。在某些方面，取代、插入或缺失发生在CDR之外的区域(即，在FR中)。任选地，抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:80或88-94中的VL序列，其包括该序列的翻译后修饰。在一个具体方面，VL包含一、二或三个选自以下各项的CDR：(a)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(b)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(c)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。
在另一方面，提供了一种抗KLK5抗体，其中该抗体包含如上文提供的任一方面中的VH序列和如上文提供的任一方面的VL序列。在一个方面，该抗体包含分别为SEQ ID NO:79或81-87和SEQ ID NO:80或88-94的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。
在又一方面，本发明提供一种抗体，其与本文所提供的抗KLK5抗体所结合的相同表位结合。例如，在某些方面，提供了一种与抗KLK5抗体结合至同一表位的抗体，其包含SEQID NO:79或81-87的VH序列和SEQ ID NO:80或88-94的VL序列。
在本发明的又一方面，根据以上方面的任一项所述的抗KLK5抗体为单克隆抗体，包括嵌合、人源化或人抗体。在一个方面，抗KLK5抗体为抗体片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、双抗体或F(ab’)2片段。在另一方面，抗体为全长抗体，例如本文所定义的完整IgG1抗体或其他抗体类别或同种型。
在进一步方面，根据上述实施例中任一项所述的抗KLK5抗体可单独或组合地纳入如以下1-8节所述的特征。
C.例示性抗KLK5/KLK7多特异性抗体
在一个方面，本发明提供了与KLK5和KLK7二者结合的多特异性抗体。在一些实施例中，提供了与KLK5和KLK7二者结合的双特异性抗体。在一些实施例中，多特异性(诸如双特异性)抗体抑制KLK5蛋白酶活性和KLK7蛋白酶活性二者。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，多特异性(诸如双特异性)抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合KLK5。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，多特异性(诸如双特异性)抗体以小于20pM、小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM、或小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD与KLK7结合。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，多特异性(诸如双特异性)抗体以不大于60pM、不大于30pM、不大于20pM、不大于10pM或不大于5pM的KD结合KLK5。在一些实施例中，如通过表面等离子体共振所测量，多特异性(诸如双特异性)抗体以不大于20pM、不大于10pM、或不大于9pM、或不大于8pM、或不大于7pM、或不大于6pM、或不大于5pM、或不大于3pM、或不大于2pM或不大于1pM的KD与KLK7结合。
在一些实施例中，抗KLK5/KLK7多特异性抗体抑制人KLK7蛋白酶活性并且抑制人KLK5蛋白酶活性。在一些实施例中，抗KLK5/KLK7多特异性抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7介导的包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的裂解，其中Nval为正缬氨酸。在一些实施例中，抗KLK5/KLK7多特异性抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。在一些实施例中，抗KLK5/KLK7多特异性抗体以不大于5nM、或不大于3nM、或不大于2nM或不大于1nM的IC50抑制人KLK7介导的包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ IDNO:121)的底物的裂解，其中Nval为正缬氨酸。在一些实施例中，抗KLK5/KLK7多特异性抗体以不大于5nM、或不大于3nM、或不大于2nM或不大于1nM的IC50抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。在一些实施例中，多特异性抗体对于人KLK5的KD和该抗体对于人KLK7的KD为彼此的3倍以内、或2.5倍以内、或2倍以内或1.5倍以内。
在一些方面，与KLK5和KLK7二者结合的多特异性抗体包含与KLK7结合的第一结合结构域和结合KLK5的第二结合结构域。
在一些实施例中，与KLK5和KLK7二者结合的多特异性抗体当结合至人KLK5时，导致人KLK5的构象变化，其中构象变化变构地导致人KLK5的底物结合位点和/或活性位点的破坏。在一些实施例中，与KLK5和KLK7二者结合的多特异性抗体当结合至人KLK7时，导致人KLK7的构象变化，其中构象变化变构地导致人KLK7的底物结合位点和/或活性位点的破坏。
在一些实施例中，第一结合结构域包含本文所述的抗KLK7抗体结合结构域。例如，在一些此类实施例中，第一结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。作为又一非限制性实例，在一些实施例中，第一结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，第一结合结构域包含分别为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:32的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施例中，第一结合结构域包含分别为SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:38的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施例中，第一结合结构域包含分别为SEQ ID NO:202和SEQ ID NO:203的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。
在一些实施例中，第二结合结构域包含本文所述的抗KLK5抗体结合结构域。例如，在一些此类实施例中，第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ ID NO:39和107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:42和204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列。作为又一非限制性实例，在一些实施例中，第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ ID NO:39和107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:42和204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，第二结合结构域包含分别为SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:55的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施例中，第二结合结构域包含分别为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:62的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施例中，第二结合结构域包含分别为SEQ ID NO:205和SEQID NO:62的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。
在一些实施例中，第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。作为又一非限制性实例，在一些实施例中，第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施例中，第二结合结构域包含分别为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:88的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。在一些实施例中，第二结合结构域包含分别为SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:92的VH和VL序列，其包括那些序列的翻译后修饰。
在一些实施例中，提供了一种多特异性抗体(诸如双特异性抗体)，其中第一结合结构域结合KLK7并且第二结合结构域结合KLK5，其中第一结合结构域为本文所提供的抗KLK7抗体结合结构域，并且第二结合结构域为本文所提供的抗KLK5结合结构域。在一些此类实施例中，第一结合结构域
在一些实施例中，第一结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10或201的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；并且第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ ID NO:39和107的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:42和204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，其包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列。在一些实施例中，第一结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10或201的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；并且第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含选自SEQID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，其包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ IDNO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列。
在一些实施例中，第一结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；并且第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ ID NO:39和107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
在一些实施例中，第一结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:13、15-30和202的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:14、31-38和203的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；并且第二结合结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQID NO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:75-78的氨基酸序列，以及VH结构域，该VH结构域与选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性；以及VL结构域，该VL结构域与选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。
在一些实施例中，双特异性抗KLK5/KLK7抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含重链可变结构域(VH)，该VH结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ IDNO:10或201的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；并且第二结合结构域包含重链可变结构域(VH)，该VH包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42和204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
在一些实施例中，双特异性抗KLK5/KLK7抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含重链可变结构域(VH)，该VH结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9或200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ IDNO:10或201的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；并且第二结合结构域包含重链可变结构域(VH)，该VH结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(b)CDR-H2，其包含SEQ IDNO:70的氨基酸序列；和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，该VL结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列；(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列；和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。
在一些实施例中，双特异性抗KLK5/KLK7抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中(i)第一结合结构域包含SEQ ID NO:29的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VL氨基酸序列，或SEQ ID NO:30或202的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:38或203的VL氨基酸序列；并且(ii)第二结合结构域包含SEQ ID NO:52的VH序列和SEQ ID NO:55的VL氨基酸序列；或SEQ ID NO:53或205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL氨基酸序列。在一些实施例中，第一结合结构域包含SEQ ID NO:30或202的VH序列和SEQ ID NO:38或203的VL序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:53或205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
在一些实施例中，双特异性抗KLK5/KLK7抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中(i)第一结合结构域包含SEQ ID NO:29的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:32的VL氨基酸序列，或SEQ ID NO:30或202的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:38或203的VL氨基酸序列；并且(ii)第二结合结构域包含SEQ ID NO:83的VH序列和SEQ ID NO:88的VL氨基酸序列；或SEQ ID NO:87的VH序列和SEQ ID NO:92的VL氨基酸序列。在一些实施例中，第一结合结构域包含SEQ ID NO:30或202的VH序列和SEQ ID NO:38或203的VL序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:87的VH序列和SEQ ID NO:92的VL序列。
在一些实施例中，双特异性抗KLK5/KLK7抗体包含结合KLK7的第一结合结构域和结合KLK5的第二结合结构域，其中第一结合结构域包含第一重链可变区和第一轻链可变区，并且第二结合结构域包含第二重链可变区和第二轻链可变区。在一些此类实施例中，第一重链可变区包含Q39E取代(Kabat编号)且第一轻链可变区包含Q38K取代(Kabat编号)；并且第二重链可变区包含Q39K取代(Kabat编号)且第二轻链可变区包含Q38E取代(Kabat编号)。在一些实施例中，第一重链可变区包含Q39K取代(Kabat编号)且第一轻链可变区包含Q38E取代(Kabat编号)；并且第二重链可变区包含Q39E取代(Kabat编号)且第二轻链可变区包含Q38K取代(Kabat编号)。在一些实施方案中，Q39E/Q38K和Q39K/Q38E取代减少了双特异性抗体的重链和轻链的错配。
在一些实施例中，第一结合结构域包含与第一重链恒定区连接的第一重链可变结构域和与第一轻链恒定区连接的第一轻链可变结构域；并且第二结合结构域包含与第二重链恒定区连接的第二重链可变结构域和与第二轻链恒定区连接的第二轻链可变结构域。在一些此类实施例中，第一重链恒定区包含S183K取代(EU编号)且第一轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)，并且第二重链恒定区包含S183E取代(EU编号)且第二轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)。在一些实施例中，第一重链恒定区包含S183E取代(EU编号)且第一轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)，并且第二重链恒定区包含S183K取代(EU编号)且第二轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)。在一些实施方案中，S183K/V133E和S183E/V133K取代减少了双特异性抗体的重链和轻链的错配。
在一些实施例中，双特异性抗KLK5/KLK7抗体包含结合结构域中的Q39E/Q38K和Q39K/Q38E取代以及恒定区中的S183K/V133E和S183E/V133K取代。参见，例如，WO 2016/172485，其出于任何目的以引用方式整体并入本文。双特异性抗体的非限制性例示性示意图如图15所示。
在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:108或192的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:109的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:110或193的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:111的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:112、194、206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:113或207的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:114、195、208或210的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:207的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:208或210的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列。
在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:108或192的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:109的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:114、195、208或210的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:111或115的轻链氨基酸序列。在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:112、194、206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:113或207的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:110或193的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列。
在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:194的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:113的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:195的重链氨基酸序列和SEQID NO:115的轻链氨基酸序列。
在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:112的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:113的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:195的重链氨基酸序列和SEQID NO:115的轻链氨基酸序列。
在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:206或209的重链氨基酸序列和SEQ IDNO:207的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:208或210的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:115的轻链氨基酸序列。
在一些实施例中，提供了一种双特异性抗KLK5/KLK7抗体，其中该双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域结合人KLK7并且第二结合结构域结合人KLK5，其中第一结合结构域包含SEQ ID NO:194的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:113的轻链氨基酸序列，并且第二结合结构域包含SEQ ID NO:114的重链氨基酸序列和SEQID NO:115的轻链氨基酸序列。
在另一方面，如以下部分1-8所述，根据以上任一方面的多特异性抗体可单独或组合地结合任何特征。
1.抗体亲和力
在某些方面，本文提供了一种抗体，其解离常数(KD)为≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。
在一个方面，使用表面等离子体共振测量KD。在一个方面，KD使用表面等离子体共振测定法诸如BIAcoreTMT200或BIAcoreTM8K测定法进行测量。例如，使用BIAcoreTM8K(BIAcore,Inc.，Piscataway,NJ)的测定在25℃或37℃下执行，其中固定化抗体以约300响应单位(RU)存在于蛋白A芯片上。在37℃下，将抗原(诸如人KLK7或人KLK5)的十倍系列稀释液以100μL/min的流速注入HBS-P缓冲液中。替代性地，将抗原的10倍连续稀释液在25℃以30μL/min的流速注入HBS-P缓冲液中。缔合速率(ka)和解离速率(kd)使用1:1Langmuir结合模型进行计算(例如，使用BIAcore Insight评估软件2.0版)。平衡解离常数(KD)计算为比率kd/ka。
在一种替代方法中，通过放射性标记的抗原结合测定法(RIA)测量KD。在一个方面，采用目的抗体的Fab形式及其抗原进行RIA。例如，通过在一系列未标记的抗原滴定存在下用最小浓度(125I)标记的抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原，来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见，例如，Chen等人，J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了确定用于测定法的条件，用在50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕获抗Fab抗体(CappelLabs)包被多孔板(Thermo Scientific)过夜，并且随后在室温(大约23℃)，用在PBS中的2％(w/v)牛血清白蛋白阻断二至五小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与目的Fab的连续稀释液(例如，遵循在Presta等人，CancerRes.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体(Fab-12)的评定)混合。然后将目的Fab孵育过夜；然而，孵育可以持续更长时间(例如，约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下孵育(例如，一小时)。随后移除溶液并且用在PBS中的0.1％聚山梨酯20洗涤该板八次。当板已干燥时，添加150μl/孔的闪烁体(MICROSCINT-20TM；Packard)，并且在TOPCOUNT TMγ计数器(Packard)上对板计数十分钟。选择给出小于或等于20％最大结合的各Fab的浓度以用于竞争性结合测定中。
2.抗体片段
在某些方面，本文提供的抗体是抗体片段。
一方面，抗体片段是Fab’、Fab’-SH或F(ab’)2片段，特别是Fab片段。木瓜蛋白酶消化完整抗体产生两个称为“Fab”片段的相同的抗原结合片段，每个“Fab”片段含有重链可变结构域和轻链可变结构域(分别为VH和VL)以及轻链的恒定结构域(CL)和重链的第一恒定结构域(CH1)。因此，术语“Fab片段”是指包括包含VL结构域和CL结构域的轻链以及包含VH结构域和CH1结构域的重链片段的抗体片段。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于Fab’片段在CH1结构域的羧基末端添加了残基，这些残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是Fab’片段，其中恒定结构域的半胱氨酸残基具有游离巯基。胃蛋白酶处理产生F(ab')2片段，该片段具有两个抗原结合位点(两个Fab片段)和Fc区的一部分。关于对包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的Fab和F(ab')2片段的讨论，请参见美国专利号5,869,046。
在另一方面，抗体片段是双体抗体、三体抗体或四体抗体。“双体抗体”是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价或双特异性的。参见，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人，Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。Hudson等人在《自然医学》(Nat.Med.)9:129-134(2003)中还描述了三体抗体和四体抗体。
在另一个方面，抗体片段为单链Fab片段。“单链Fab片段”或“scFab”是由抗体重链可变结构域(VH)、抗体重链恒定结构域1(CH1)、抗体轻链可变结构域(VL)、抗体轻链恒定结构域(CL)和接头组成的多肽，其中抗体结构域和接头在N末端至C末端方向上具有以下顺序中的一种：a)VH-CH1-接头-VL-CL、b)VL-CL-接头-VH-CH1、c)VH-CL-接头-VL-CH1，或d)VL-CH1-接头-VH-CL。特别地，所述接头是至少30个氨基酸，优选地在32个与50个氨基酸之间的多肽。所述单链Fab片段经由CL结构域与CH1结构域之间的天然二硫键而稳定化。此外，这些单链Fab片段可以通过经由插入半胱氨酸残基(例如，根据Kabat编号的可变重链中的44位和可变轻链中的100位)生成链间二硫键，而进一步稳定化。
在另一方面，抗体片段是单链可变片段(scFv)。“单链可变片段”或“scFv”是抗体的重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)的融合蛋白，是通过接头连接的。特别地，接头是10个至约25个氨基酸的短多肽，并且通常富含甘氨酸以获得柔性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以获得溶解性，并且可以将VH的N末端与VL的C末端连接，或反之亦然。尽管去除了恒定区并且引入了接头，但该蛋白质仍保留了原始抗体的特异性。关于scFv片段的综述，参见例如Plückthun，载于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑(Springer-Verlag,New York)，第269至第315页(1994)；还可参见WO 93/16185；以及美国专利号5,571,894和5,587,458。
在另一方面，抗体片段是单结构域抗体。“单结构域抗体”是包含抗体的全部或部分重链可变结构域或者抗体的全部或部分轻链可变结构域的抗体片段。在某些方面，单结构域抗体是人单结构域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；参见例如美国专利号6,248,516B1)。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及由重组宿主细胞(例如大肠杆菌)重组产生，如本文所述。
3.嵌合抗体和人源化抗体
在某些方面，本文提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体描述于，例如，美国专利号4,816,567和Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)中。在一个实例中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，源自小鼠、大鼠、仓鼠、兔或非人灵长类动物(诸如猴)的可变区)和人恒定区。在另一个实例中，嵌合抗体为其中类别或亚类已经与亲本抗体的类别或亚类改变的“类别转换”抗体。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些方面，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以减少对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。通常，人源化抗体包含一个或多个可变结构域，其中CDR(或其部分)源自非人抗体，并且FR(或其部分)源自人抗体序列。人源化抗体任选地还将包含人恒定区的至少一部分。在一些方面，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源于的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其制备方法在例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中综述，并且进一步描述于例如Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；Queen等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利号5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等人，Methods 36:25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“表面再塑”)；Dall'Acqua等人，Methods 36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；以及Osbourn等人，Methods 36:61-68(2005)和Klimka等人，Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了用于FR改组的“指导选择”方法)中。
可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(参见，例如，Sims等人J.Immunol.151:2296(1993))；来源于轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见，例如，Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；以及Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人种系框架区(参见，例如，Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及来源于筛选FR文库的框架区(参见，例如，Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些方面，本文提供的抗体是人抗体。可以使用本领域已知的各种技术来产生人抗体。人抗体一般描述于van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)以及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中。
可以通过以下方式来制备人抗体：将免疫原施用于转基因动物，所述转基因动物已被修饰以响应于抗原激发而产生具有人可变区的完整人抗体或完整抗体。此类动物通常含有全部或部分人免疫球蛋白基因座，所述全部或部分人免疫球蛋白基因座替代内源性免疫球蛋白基因座，或者在动物的染色体外存在或随机整合至动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，内源性免疫球蛋白基因座通常已被灭活。关于从转基因动物获得人抗体的方法的综述，参见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还参见例如描述XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584；描述技术的美国专利号5,770,429；描述K-M/>技术的美国专利号7,041,870，以及描述/>技术的美国专利申请公开号US 2007/0061900)。可以进一步修饰来自由此类动物产生的完整抗体的人可变区，例如通过与不同的人恒定区组合。
人抗体也可以通过基于杂交瘤的方法制备。已经描述了用于产生人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人杂交骨髓瘤细胞系。(参见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.,147:86(1991)。)经由人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体也如Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)所述。另外的方法包括例如在美国专利号7,189,826(描述了从杂交瘤细胞系产生单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述了人-人杂交瘤)中描述的那些方法。人类杂交瘤技术(Trioma技术)也描述于Vollmers和Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005)和Vollmers和Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)中。
人抗体还可以通过分离选自人源噬菌体展示文库的可变结构域序列产生。然后可以将此类可变结构域序列与预期的人恒定结构域结合。从抗体文库中选择人抗体的技术描述如下。
5.源自文库的抗体
在某些方面，本文提供的抗体衍生自文库。可以通过筛选组合文库中具有一个或多个所需活性的抗体来分离本发明的抗体。用于筛选组合文库的方法综述于例如Lerner等人，Nature Reviews 16:498-508(2016)中。例如，本领域已知多种方法用于产生噬菌体展示文库并筛选此类文库以获得具有所需结合特征的抗体。此类方法综述于例如Frenzel等人，mAbs8:1177-1194(2016)；Bazan等人，Human Vaccines and Immunotherapeutics8:1817-1828(2012)和Zhao等人，Critical Reviews in Biotechnology 36:276-289(2016)中，以及Hoogenboom等人，Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人编辑，Human Press,Totowa,NJ,2001)中和Marks和Bradbury,Methods in Molecular Biology248:161-175(Lo编辑，Human Press,Totowa,NJ,2003)中。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全部集合通过聚合酶链式反应(PCR)单独克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以从所述噬菌体文库中筛选抗原结合噬菌体，如在Winter等人，Annual Review of Immunology 12:433-455(1994)中所描述的。噬菌体通常将抗体片段展示为单链Fv(scFv)片段或Fab片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而无需构建杂交瘤。可替代地，可以克隆所有天然组成成分(例如，来自人的所有天然组成成分)以提供针对广泛的非自身抗原和自身抗原的抗体的单一来源，而无需任何免疫，如由Griffiths等人在EMBO Journal 12:725-734(1993)中所描述的。此外，还通过以下方式来合成天然文库：克隆来自干细胞的未重排的V基因区段；以及使用含有随机序列的PCR引物来编码高度可变的CDR3区并完成体外重排，如由Hoogenboom和Winter在Journal of Molecular Biology 227:381-388(1992)中所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利出版物包括，例如：美国专利号5,750,373；7,985,840；7,785,903和8,679,490以及美国专利公开号2005/0079574、2007/0117126、2007/0237764和2007/0292936。
本领域已知用于筛选具有一种或多种所需活性的抗体的组合文库的方法的其他实例包括核糖体和mRNA展示，以及对细菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞或酵母细胞进行抗体展示和选择的方法。用于酵母表面展示的方法综述于例如Scholler等人，Methods inMolecular Biology 503:135-56(2012)和Cherf等人，Methods in Molecular biology1319:155-175(2015)以及Zhao等人，Methods in Molecular Biology 889:73-84(2012)中。用于核糖体展示的方法描述于例如He等人，Nucleic Acids Research 25:5132-5134(1997)和Hanes等人，PNAS 94:4937-4942(1997)中。
在本文中从人抗体文库分离出的抗体或抗体片段被认为是人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体
在某些方面，本文提供的抗体是多特异性抗体，特别是双特异性抗体。“多特异性抗体”是对至少两个不同位点(即，不同抗原上的不同表位或相同抗原上的不同表位)具有结合特异性的单克隆抗体。在某些方面，多特异性抗体具有三种或更多种结合特异性。在某些方面，结合特异性中的一种是针对KLK7的，并且另一种特异性是针对任何其他抗原的。在某些方面，结合特异性中的一种是针对KLK7的，并且另一种特异性是针对KLK5的。在某些方面，双特异性抗体可结合抗原的两个(或更多个)不同的表位。可以将多特异性抗体制备为全长抗体或抗体片段。
用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两种免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein和Cuello，Nature 305:537(1983))及“杵臼结构”工程化(参见例如，美国专利5,731,168，以及Atwell等人，J.Mol.Biol.270:26(1997))。非限制性示例性杵臼取代包括T366W(杵)和T366S/L368A/Y407V(臼)。在一些实施方案中，杵臼取代在IgG1恒定结构域中。
多特异性抗体也可通过用于制备抗体Fc-异二聚分子的工程化静电转向效应来制备。参见，例如，WO 2009/089004；Dillon等人，Mabs 9(2):213-230(2017)。作为一个非限制性实例，在包含两个重链可变区和两个轻链可变区的双特异性抗体中，第一重链可变区可包含Q39E取代(根据Kabat编号)并且第一轻链可变区可包含Q38K取代(根据Kabat编号)；第二重链可变区可包含Q39K取代(根据Kabat编号)并且第二轻链可变区可包含Q38E取代(根据Kabat编号)。在一些实施方案中，Q39E/Q38K和Q39K/Q38E取代减少了双特异性抗体的重链和轻链的错配。类似地，第一重链恒定区可包含S183K取代(根据EU编号)，第一轻链恒定区可包含V133E取代(根据EU编号)，第二重链恒定区可包含S183E取代(根据EU编号)，并且第二轻链恒定区可包含V133K取代(根据EU编号)。在一些实施方案中，S183K/V133E和S183E/V133K取代减少了双特异性抗体的重链和轻链的错配。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含在结合结构域中的Q39E/Q38K和Q39K/Q38E取代以及在恒定区中的S183K/V133E和S183E/V133K取代。在一些实施方案中，双特异性抗体包含杵臼取代和静电取代两者。参见，例如，WO 2016/172485，其出于任何目的以引用方式整体并入本文。双特异性抗体的非限制性例示性示意图如图15所示。
因此，在一些实施方案中，提供了一种多特异性抗体，其包含：a)第一重链/轻链对，其与第一抗原结合，该第一抗原包含第一重链多肽(H1)和第一轻链多肽(L1)；和b)第二重链/轻链对，其与第二抗原结合，该第二抗原包含第二重链多肽(H2)和第二轻链多肽(L2)，其中每个H1和H2包含重链可变结构域(VH)和重链恒定结构域(CH1)，并且每个L1和L2包含轻链可变结构域(VL)和轻链恒定结构域(CL)；其中H1的CH1结构域包含在S183(根据EU编号)处的氨基酸取代，并且L1的CL结构域包含在V133(根据EU编号)处的氨基酸取代；并且其中H1的VH结构域包含在位置Q39处的氨基酸取代，并且L1的VL结构域包含在位置Q38处的氨基酸取代，和/或H2的VH结构域包含在位置Q39处的氨基酸取代，并且L2的VL结构域包含在位置Q38处的氨基酸取代(均根据Kabat编号)。在一些实施方案中，H1的VH结构域包含在Q39(根据Kabat编号)处的氨基酸取代，并且L1的VL结构域包含在Q38(根据Kabat编号)处的氨基酸取代。在一些实施方案中，H2的CH1结构域包含在S183(根据EU编号)处的氨基酸取代，并且L2的CL结构域包含在V133(根据EU编号)处的氨基酸取代。在一些实施方案中，H2的VH结构域进一步包含在位置Q39处的氨基酸取代，并且L2的VL结构域进一步包含在位置Q38处的氨基酸取代(根据Kabat编号)。在一些实施方案中，H1的CH1结构域包含S183K突变并且L1的CL包含V133E突变，并且H2的CH1包含S183E突变并且L2的CL结构域包含V133K突变。在一些实施方案中，H1的VH结构域包含Q39E突变并且L1的VL结构域包含Q38K突变，并且H2的VH结构域包含Q39K突变并且L2的VL结构域包含Q38E突变(均根据Kabat编号)。
多特异性抗体还可以通过以下方式来制备：使两个或更多个抗体或片段交联(参见例如，美国专利号4,676,980，以及Brennan等人，Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链来产生双特异性抗体(参见例如，Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)和WO 2011/034605)；使用于避免轻链错配问题的常用轻链技术(参见例如，WO 98/50431)；使用于制备双特异性抗体片段的“双体抗体”技术(参见例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；以及使用单链Fv(sFv)二聚体(参见例如Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994))；以及如Tutt等人J.Immunol.147:60(1991)中所述制备三特异性抗体。
本文还包括具有三个或更多个抗原结合位点的工程化抗体，包括例如“章鱼抗体”或者DVD-Ig(参见例如，WO 2001/77342和WO 2008/024715)。具有三个或更多个抗原结合位点的多特异性抗体的其他示例可以在WO 2010/115589、WO 2010/112193、WO 2010/136172、WO 2010/145792和WO 2013/026831中找到。双特异性抗体或其抗原结合片段还包括“双重作用FAb”或“DAF”，其包含与KLK7以及另一种不同抗原(诸如KLK5)结合的抗原结合位点(参见例如US2008/0069820和WO 2015/095539)。
多特异性抗体也可以以不对称形式提供，其中在具有相同抗原特异性的一个或多个结合臂中有结构域互换，即通过交换VH/VL结构域(参见例如，WO 2009/080252和WO2015/150447)、CH1/CL结构域(参见例如，WO 2009/080253)或完整的Fab臂(参见例如，WO2009/080251、WO 2016/016299，还参见Schaefer等人，PNAS,108(2011)1187-1191，以及Klein等人，MAbs 8(2016)1010-20)。在一方面，多特异性抗体包含交叉Fab片段。术语“cross-Fab片段”或“xFab片段”或“交叉Fab片段”是指其中重链和轻链的可变区或恒定区发生交换的Fab片段。交叉Fab片段包含由轻链可变区(VL)和重链恒定区1(CH1)组成的多肽链，以及由重链可变区(VH)和轻链恒定区(CL)组成的多肽链。还可以通过将荷电或非荷电的氨基酸突变引入结构域界面以指导正确的Fab配对，以对不对称Fab臂进行工程化。参见例如WO 2016/172485。
多特异性抗体的各种其他分子形式是在本领域中已知的并且包括在本文中(参见例如Spiess等人，Mol Immunol 67(2015)95-106)。
可用于此目的的双特异性抗体形式的示例包括但不限于所谓的“BiTE”(双特异性T细胞接合子)分子，其中两个scFv分子通过柔性接头融合(参见例如，WO 2004/106381、WO2005/061547、WO 2007/042261以及WO 2008/119567；Nagorsen和Exp Cell Res317,1255-1260(2011))；双体抗体(Holliger等人，Prot Eng 9,299-305(1996))及其衍生物，诸如串联双体抗体(“TandAb”；Kipriyanov等人，J Mol Biol 293,41--56(1999))；“DART”(双重亲和力再靶向)分子，其基于双体抗体形式但特征是具有用于实现额外稳定化的C-末端二硫桥(Johnson等人，JMol Biol 399,436-449(2010))，以及所谓的三功能抗体(triomab)，其是全杂交小鼠/大鼠IgG分子(综述于Seimetz等人，Cancer Treat Rev 36,458-467(2010)中)。本文所包含的特定的T细胞双特异性抗体形式描述于以下文献中：WO2013/026833；WO 2013/026839；WO 2016/020309；Bacac等人，Oncoimmunology 5(8)(2016)e1203498。
7.抗体变体
在某些方面中，设想了本文提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可能期望改变抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过向编码抗体的核苷酸序列中引入适当的修饰或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内残基的缺失、和/或插入和/或取代。可以进行缺失、插入和取代的任何组合以实现最终构建体，前提条件是最终构建体具有所需特征，例如抗原结合。
a)取代、插入和缺失性变体
在某些方面，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗体变体。用于取代诱变的感兴趣的位点包括CDR和FR。保守取代在表1中的“优选取代”标题下示出。在表1中的“示例性取代”标题下提供了更实质性的变化，如下面参考氨基酸侧链类别所进一步描述的。可以将氨基酸取代引入目标抗体中，并对产物进行所需活性(例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC)筛选。
表1
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可根据共同的侧链特性将氨基酸分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly，Pro；
(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代将需要用这些类别中的一个的成员交换另一类别的成员。
一种类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如，人源化抗体或人抗体)的一个或多个高可变区残基。通常，相对于亲本抗体，选为用于进一步研究的一个或多个所得变体将在某些生物学特性方面(例如，亲和力增加、免疫原性降低)有改变(例如，改善)和/或将基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。示例性取代变体是亲和力成熟抗体，其可例如使用诸如本文所述的那些基于噬菌体展示的亲和力成熟技术方便地生成。简要地说，对一个或多个CDR残基进行突变并且将变体抗体展示在噬菌体上并针对特定生物学活性(例如结合亲和力)进行筛选。
例如，可在CDR中作出改变(例如，取代)，以改善抗体亲和力。此类改变可发生于CDR“热点”中，即由体细胞成熟过程中发生高频突变的密码子编码的残基(参见例如，Chowdhury，Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))和/或与抗原接触的残基(检测所得变体VH或VL的结合亲和力。通过构建并自二级文库重新选择而实现的亲和力成熟已被例如Hoogenboom等人在Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人编，HumanPress,Totowa,NJ,(2001))中进行描述。在亲和力成熟的某些方面，通过多种方法(例如，易错PCR、链改组或寡核苷酸定向诱变)的任何一种将多样性引入选择用于成熟的可变基因中。然后创建一个二级文库。随后对该文库进行筛选以鉴别具有所需亲和力的任何抗体变体。引入多样性的另一种方法涉及CDR定向方法，其中将若干CDR残基(例如，每次4至6个残基)随机化。参与抗原结合的CDR残基可例如使用丙氨酸扫描突变或建模来特异性地鉴定。具体而言，常常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些方面，取代、插入或缺失可发生在一个或多个CDR内，只要此类改变基本上不降低抗体结合抗原的能力即可。例如，可在CDR中进行基本上不降低结合亲和力的保守性改变(例如，如本文提供的保守性取代)。这样的改变可以例如在CDR中的抗原接触残基的外部。在上文提供的某些变体VH和VL序列中，每个CDR要么保持不变，要么包含不超过一个、两个或三个氨基酸取代。
可用于鉴别可被靶向诱变的抗体残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells(1989)Science，244:1081-1085所述。在此方法中，鉴别残基或一组靶残基(例如，带电残基，诸如arg、asp、his、lys和glu)并用中性或带负电的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以确定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可在对初始取代展示功能敏感性的氨基酸位置引入其他取代。替代性地或附加地，可以使用抗原-抗体复合物的晶体结构鉴定抗体与抗原之间的接触点。可靶向或消除作为取代的候选的此类接触残基和相邻残基。可筛选变体以确定它们是否具备期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合，以及一个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括将抗体的N末端或C末端与增加抗体的血清半衰期的酶(例如，对于ADEPT(抗体定向酶前药治疗))或多肽融合。
b)糖基化变体
在某些方面，改变本文提供的抗体以增加或降低抗体糖基化的程度。糖基化位点向抗体的添加或缺失可通过改变氨基酸序列以产生或去除一个或多个糖基化位点而方便地实现。
当抗体包含Fc区时，与其相连的寡糖可以被改变。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含支链的、双触角寡糖，该双触角寡糖通常通过N-键结连接至Fc区的CH2结构域的Asn297。参见，例如，Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各种碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及附接于双触角寡糖结构的“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些方面中，可对本发明的抗体中的寡糖进行修饰，以产生具有某些改善的特性的抗体变体。
一方面，提供了具有非岩藻糖基化的寡糖的抗体变体，即缺少(直接或间接地)连接在Fc区的岩藻糖的寡糖结构。这样的非岩藻糖基化的寡糖(也称为“去岩藻糖基化”的寡糖)特别是N-连接的寡糖，其缺少在双触角寡糖结构的茎中连接第一GlcNAc的岩藻糖残基。一方面，提供了与天然或亲本抗体相比在Fc区中具有增加比例的非岩藻糖基化寡糖的抗体变体。例如，非岩藻糖基化寡糖的比例可以为至少约20％、至少约40％、至少约60％、至少约80％或甚至约100％(即不存在岩藻糖基化寡糖)。非岩藻糖基化寡糖的百分比，如例如WO2006/082515中所述，如通过MALDI-TOF质谱法测量的，是缺少岩藻糖残基的寡糖的(平均)量相对于与Asn 297连接的所有寡糖(例如复杂、杂合和高甘露糖结构)之和。Asn297是指位于Fc区中约297位的天冬酰胺残基(Fc区残基的EU编号)；然而，由于抗体中的微小序列变化，Asn297也可以位于297位上游或下游大约±3个氨基酸，即在294位和300位之间。在Fc区中具有非岩藻糖基化寡糖比例增加的此类抗体可具有改善的FcγRIIIa受体结合和/或改善的效应子功能，特别是改善的ADCC功能。参见例如US2003/0157108和US2004/0093621。
能够生产岩藻糖基化减少的抗体的细胞系的实例包括缺乏蛋白质岩藻糖基化的Lec13 CHO细胞(Ripka等人.Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；US2003/0157108；和WO 2004/056312，尤其是在实例11中)，以及敲除细胞系，例如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因，FUT8，敲除CHO细胞(参见，例如，Yamane-Ohnuki等人.Biotech.Bioeng.87:614-622(2004)；Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；和WO 2003/085107)，或具有降低或取消的GDP-岩藻糖合成或转运蛋白活性的细胞(参见，例如，US2004259150、US2005031613、US2004132140、US2004110282)。
在另一方面，抗体变体提供了二等分的寡糖，例如，其中连接至抗体的Fc区的双触角寡糖被GlcNAc二等分。如上所述，这样的抗体变体可以具有减少的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的实例描述于例如Umana等人,Nat Biotechnol 17,176-180(1999)；Ferrara等人,Biotechn Bioeng 93,851-861(2006)；WO 99/54342；WO 2004/065540,WO 2003/011878。
还提供了在连接于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。这样的抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体描述于例如WO 1997/30087、WO 1998/58964和WO 1999/22764中。
c)Fc区变体
在某些方面，一个或多个氨基酸修饰可引入本文提供的抗体的Fc区中，从而生成Fc区变体。Fc区变体可包含人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)，其在一个或多个氨基酸位置上包含氨基酸修饰(例如取代)。
在某些方面，本发明考虑具有一些但不是全部效应功能的抗体变体，这使其成为其中抗体的体内半衰期很重要而某些效应功能(例如补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))不必要或有害的应用的理想候选者。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定，以确认CDC和/或ADCC活性的降低/耗尽。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的原代细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达总结在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页的表3中。用于评估目标分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362(参见例如Hellstrom,I.等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。替代性地，可使用非放射性测定方法(参见例如，用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；以及CytoTox非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,WI)。用于此类测定法的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。替代性地或附加地，可例如在诸如在Clynes等人，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA95:652-656(1998)中公开的动物模型中体内评定感兴趣的分子的ADCC活性。也可以进行C1q结合测定以确认抗体不能结合C1q，因此缺乏CDC活性。参见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体活化，可以执行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie，Blood 103:2738-2743(2004))。FcRn结合和体内清除率/半衰期测定也可以使用本领域已知的方法执行(参见例如Petkova,S.B.等人，Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006)；WO 2013/120929 Al)。
具有降低的效应功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一者或多者的取代的那些(美国专利号6,737,056)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327处的两个或多个处具有取代的Fc突变体，包括所谓的“DANA”Fc突变体，其残基265和297被取代为丙氨酸(美国专利号7332581)。
描述了具有改善的或降低的与FcR的结合的某些抗体变体。(参见例如美国专利号6,737,056；WO 2004/056312；以及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。)
在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个改善ADCC的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的298、333和/或334位的取代(残基的EU编号)。
在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个减少FcγR结合的氨基酸取代的Fc区，例如Fc区的234位和235位的取代(残基的EU编号)。一方面，取代是L234A和L235A(LALA)。在某些方面，抗体变体进一步包含在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中的D265A和/或P329G。一方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代是L234A、L235A和P329G(LALA-PG)。(参见例如WO2012/130831)。在另一方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代是L234A、L235A和D265A(LALA-DA)。
在一些方面，在Fc区中进行导致改变(即，改善或减少)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)的改变，例如，如美国专利号6,194,551、WO 99/51642以及Idusogie等人.J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所描述。
具有延长的半衰期和改善的新生儿Fc受体(FcRn)结合、负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等人，J.Immunol.117:587(1976)，以及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))的抗体描述于US2005/0014934(Hinton等人)中。那些抗体包含这样的Fc区，该Fc区中具有改善Fc区与FcRn的结合的一个或多个取代。此类Fc变体包括在以下Fc区残基中的一处或多处具有取代的Fc变体：238、252、254、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、428或434，例如Fc区残基434的取代(参见例如美国专利号7,371,826；Dall'Acqua,W.F.等人J.Biol.Chem.281(2006)23514-23524)。在一些实施例中，本文所提供的抗体包含取代M428L和/或N434S，诸如M428L和N434S(“LS”)。
通过定点诱变已经鉴定了对小鼠Fc-小鼠FcRn相互作用至关重要的Fc区残基(参见例如Dall’Acqua,W.F.等人.J.Immunol 169(2002)5171-5180)。相互作用涉及残基I253、H310、H433、N434和H435(EU索引编号)(Medesan,C.等人,Eur.J.Immunol.26(1996)2533；Firan,M.等人,Int.Immunol.13(2001)993；Kim,J.K.等人,Eur.J.Immunol.24(1994)542)。发现残基I253、H310和H435对于人Fc与鼠FcRn的相互作用至关重要(Kim,J.K.等人,Eur.J.Immunol.29(1999)2819)。对人Fc-人FcRn复合物的研究表明，残基I253、S254、H435和Y436对于相互作用至关重要(Firan,M.等人,Int.Immunol.13(2001)993；Shields,R.L.等人,J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604)。在Yeung,Y.A.等人(J.Immunol.182(2009)7667-7671)中已经报道并检查了残基248至259和301至317和376至382和424至437的各种突变体。
在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个减少FcRn结合的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的253、和/或310和/或435位的取代(残基的EU编号)。在某些方面，抗体变体包含在位置253、310和435位具有氨基酸取代的Fc区。一方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代是I253A、H310A和H435A。参见例如Grevys,A.等人,J.Immunol.194(2015)5497-5508。
在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个减少FcRn结合的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的310、和/或433和/或436位的取代(残基的EU编号)。在某些方面，抗体变体包含在位置310、433和436位具有氨基酸取代的Fc区。一方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代是H310A、H433A和Y436A。(参见，例如，WO 2014/177460 Al)。
在某些方面，抗体变体包含具有一个或多个增加FcRn结合的氨基酸取代的Fc区，例如，在Fc区的252、和/或254和/或256位的取代(残基的EU编号)。在某些方面，抗体变体包含在位置252、254和256位具有氨基酸取代的Fc区。一方面，在衍生自人IgG1 Fc区的Fc区中，取代是M252Y、S254T和T256E。有关Fc区变体的其他实例，另外参见：Duncan和Winter，Nature 322:738-40(1988)；美国专利号5,648,260；美国专利号5,624,821；以及WO 94/29351。
如本文报道的抗体的重链的C末端可以是以氨基酸残基PGK结束的完整C末端。重链的C末端可以是缩短的C末端，在所述缩短的C末端中已经去除了一个或两个C末端氨基酸残基。在一个优选的方面，重链的C末端是以PG结束的缩短的C末端。在本文报道的所有方面中的一个方面，如本文所指定的包含包括C末端CH3结构域的重链的抗体，包含C末端甘氨酸-赖氨酸二肽(G446和K447，氨基酸位置的EU索引编号)。在本文报道的所有方面的一个方面中，如本文所指定的包含包括C末端CH3结构域的重链的抗体，包含C末端甘氨酸残基(G446，氨基酸位置的EU索引编号)。
d)半胱氨酸工程化改造的抗体变体
在某些方面，可能需要产生半胱氨酸工程化改造的抗体，例如THIOMABTM抗体，其中抗体的一个或多个残基被半胱氨酸残基取代。在特定实施例中，取代的残基存在于抗体的可接近位点。如本文进一步描述的，通过用半胱氨酸取代那些残基，从而将反应性硫醇基团定位于抗体的可接近位点，并且可用于将抗体与其他部分(诸如药物部分或接头-药物部分)缀合，以产生免疫缀合物。半胱氨酸工程化改造的抗体可以如例如在美国专利号7,521,541、8,30,930、7,855,275、9,000,130或WO 2016040856中所述产生。
e)抗体衍生物
在某些方面，本文提供的抗体可被进一步修饰以包含本领域已知的并且容易获得的附加非蛋白质部分。适合于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性示例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)和葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇以及它们的混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在制备中可具有优势。聚合物可具有任何分子量，并且可以具有支链或不具有支链。附接于抗体的聚合物的数目可变化，并且如果附接了多于一个聚合物，那么它们可以为相同或不同的分子。通常，可基于以下考虑因素确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体待改善的特定特性或功能、抗体衍生物是否将用于限定条件下的疗法等。
8.免疫缀合物
本发明还提供了包含本文抗体的免疫缀合物，该抗体与一种或多种治疗剂，诸如细胞毒性剂、化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如蛋白质毒素，细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素缀合(化学结合)。
一方面，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体缀合至上述一种或多种治疗剂。通常使用接头将抗体连接至一种或多种治疗剂。Pharmacol Review 68:3-19(2016)中列出了ADC技术的概述，其包括治疗剂、药物和接头的实例。
在另一个方面，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的本文所述的抗体，该酶活性毒素或其片段包括但不限于白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒蛋白质A链、相思豆毒蛋白质A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲霉素、油桐蛋白、石竹黄素蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜抑制剂、姜黄素、巴豆素、肥皂草抑制剂、明胶、米托菌素、局限曲霉素、酚霉素、依诺霉素和单端孢菌素。
在另一个方面，免疫缀合物包括与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的本文所述的抗体。多种放射性同位素可用于制备放射性缀合物。实例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素。当放射性缀合物用于检测时，它可能包含用于闪烁显像研究的放射性原子，例如，tc99m或I123，或用于核磁共振(NMR)成像(也称为磁共振成像，mri)的自旋标记物，诸如碘-123、碘-131、铟-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、钆、锰或铁。
可以使用多种双功能蛋白质偶联剂，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨基酯的双官能衍生物(诸如己二酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)制备抗体和细胞毒剂的缀合物。例如，可以如Vitetta等人,Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)为一种示例性螯合剂，用于将放射性核苷酸缀合至抗体。参见WO 94/11026。连接基可以为促进细胞中细胞毒性药物释放的“可切割连接基”。例如，可以使用对酸不稳定的连接基、肽酶敏感的连接基、对光不稳定的连接基、二甲基连接基或含二硫键的连接基(Chari等人，Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利号5,208,020)。
本文的免疫缀合物或ADC明确考虑但不限于用交联剂制备的此类缀合物，包括但不限于市售的(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB和SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)。
D.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如，如在US 4,816,567中所述。对于这些方法，提供了编码抗体的一种或多种分离的核酸。
在天然抗体或天然抗体片段的情况下，需要两种核酸，一种用于轻链或其片段，一种用于重链或其片段。此类核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含抗体的VH的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或不同的表达载体上。
在具有异源二聚重链的某些双特异性抗体的情况下，需要四种核酸，一种用于第一轻链，一种用于包含第一异单体(heteromonomeric)Fc区多肽的第一重链，一种用于第二轻链，并且一种用于包含第二异单体Fc区多肽的第二重链。四种核酸可包含在一种或多种核酸分子或表达载体中。此类核酸编码构成抗体的第一VL的氨基酸序列和/或构成抗体的包含第一异单体Fc区的第一VH的氨基酸序列和/或构成抗体的第二VL的氨基酸序列和/或构成抗体的包含第二异单体Fc区的第二VH的氨基酸序列(例如抗体的第一轻链和/或第二轻链和/或第一重链和/或第二重链)。这些核酸可以在相同的表达载体上或在不同的表达载体上，通常这些核酸位于两个或三个表达载体上，即一个载体可以包含这些核酸中的多于一种。这些双特异性抗体的示例是CrossMab(参见例如Schaefer,W.等人，PNAS,108(2011)11187-1191)。例如，该异单体重链中的一条包含所谓的“杵突变(杵mutation)”(T366W，以及任选地S354C或Y349C中的一者)，并且该异单体重链中的另一条包含所谓的“臼突变(hole mutation)”(T366S、L368A和Y407V，以及任选地Y349C或S354C)(参见例如Carter，P.等人，Immunotechnol。2(1996)73)，根据EU索引编号。
在一个方面，提供了编码如在本文所报道的方法中使用的抗体的分离的核酸。
在一方面，提供了一种制备抗体的方法，其中该方法包括在适于表达抗体的条件下培养包括如上提供的编码抗体的核酸的宿主细胞，以及任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
对于抗体重组生产，将编码抗体的核酸(例如，如上所述)分离并插入至一个或多个载体中以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序来容易地对此类核酸进行分离和测序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性地结合的寡核苷酸探针)，或通过重组方法产生或通过化学合成获得此类核酸。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是当不需要糖基化和Fc效应功能时。关于在细菌中表达抗体片段和多肽，参见例如US 5,648,237、US 5,789,199和US 5,840,523。(还参见Charlton,K.A.,在：Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.主编，HumanaPress，Totowa，NJ(2003)，第245-254页中，描述抗体片段在大肠杆菌中的表达。)抗体可在表达后在可溶性级分中从细菌细胞糊中分离，并且可以进一步纯化。
除了原核生物外，诸如丝状真菌或酵母等真核微生物也是用于编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主，该真核微生物包括真菌和酵母菌株，其糖基化途径已经“人源化”，从而导致产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见Gerngross,T.U.,Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；以及Li,H.等人，Nat.Biotech.24(2006)210-215。
用于表达糖基化抗体的合适宿主细胞也来源于多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定出了可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的许多杆状病毒株。
植物细胞培养物也可用作宿主。参见例如US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978和US 6,417,429(描述了用于在转基因植物中生产抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾细胞系(如在例如Graham,F.L.等人，J.Gen Virol.36(1977)59-74中所述的293或293T细胞)；小仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利氏细胞(例如在Mather,J.P.,Biol.Reprod.23(1980)243-252中描述的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；布法罗大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞(如例如在Mather,J.P.等人，AnnalsN.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68中所述)；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub,G.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(1980)4216-4220)；以及骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki,P.和Wu,A.M.,Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(编辑)，Humana Press,Totowa,NJ(2004)，第255-268页。
一方面，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如Y0、NS0、Sp20细胞)。
E.测定
可通过本技术领域中已知的各种测定，对本文所提供的抗KLK7抗体和抗KLK5的物理/化学特性和/或生物活性来进行鉴别、筛选或表征。
1.结合测定和其他测定
在一个方面，本发明的抗体通过诸如ELISA、蛋白质印迹等已知方法测试其抗原结合活性。
在另一方面，可使用竞争测定鉴别与本文提供的抗体诸如hu.1411c-H11L2竞争结合至KLK7的抗体。在某些方面，此类竞争抗体与hu.1411c-H11L2结合的同一表位(例如，线性或构象表位)结合。在某些方面，此类竞争抗体与hu.1411c-H11L2结合的同一表位(例如，线性或构象表位)结合。在一些实施例中，可使用竞争测定鉴别与本文提供的抗体诸如hu.10C5-H28L5或hu.9H5-H14L4竞争结合至KLK5的抗体。在某些方面，此类竞争抗体与hu.10C5-H28L5或hu.9H5-H14L4结合的同一表位(例如，线性或构象表位)结合。用于定位抗体与之结合的表位的详细示例性方法提供于：Morris(1996)，“Epitope MappingProtocols”，收录于Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)。
在例示性竞争测定中，将固定化抗原(诸如KLK5或KLK7)置于包含与抗原(例如，hu.1411c-H11L2、hu.10C5-H28L5或hu.9H5-H14L4)结合的第一标记抗体和第二未标记的抗体(正在试验其与第一抗体竞争结合至抗原的能力)的溶液中进行孵育。该第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，将固定化抗原在包含第一标记抗体而非包含第二未标记抗体的溶液中孵育。在容许第一抗体与抗原结合的条件下孵育之后，去除过量未结合的抗体，并且测量与固定化抗原缔合的标记的量。如果相对于对照样品，测试样品中与固定化的抗原缔合的标记的量大幅减少，则表明该第二抗体在与该第一抗体竞争以结合到抗原。参见Harlow和Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual第14章(Cold Spring HarborLaboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性测定
KLK7为胰凝乳蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。在一些实施例中，KLK7在芳香族和/或疏水性氨基酸(诸如酪氨酸、苯丙氨酸和/或白氨酸)后裂解多肽。在一个方面，提供了鉴别抑制人KLK7活性的抗KLK7抗体的测定。生物活性可包括例如KLK7蛋白酶活性。还提供了在体内和/或体外具有此类生物活性的抗体。
在某些方面中，测试本发明的抗体的此类生物活性。用于测定KLK7蛋白酶活性的测定为本领域中已知的，并且通常包括在存在底物和试验分子(诸如抗KLK7抗体)的情况下孵育KLK7。用于试验抗KLK7抗体(或包含抗KLK7结合臂的多特异性抗体)是否抑制KLK7蛋白酶活性的非限制性测定如下：KLK7直接功能测定可在室温下于384孔板中进行，最终反应体积为15μL。在测定缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％ Tween 20)中将抑制剂样品稀释至3倍的最终浓度。将抑制剂(例如，抗KLK7抗体)或对照样品(5μL)加入板中，然后加入测定缓冲液中的5μL人KLK7(SEQ ID NO:4)，最终浓度为0.5nM。40min后，加入于测定缓冲液中的5μL Mca-RPKPVE-Nval-WRK(Dnp)(SEQ ID NO:121；Bachem M-2110，于DMSO中的4.3mM储备溶液)，最终浓度为10μM。加入底物后，使用光学模块FI 320 405在酶标仪(BMG Labtech)中读取板，其中将增益设定为0％。每100s进行测量，持续约1.5h。反应速率(表示为RFU/s)通过线性回归在线性范围内进行计算。反应速率可归一化至0％和100％活性对照值，并用4参数方程进行拟合以计算IC50值。对于二价抑制剂，可以将原始IC50乘以2。
KLK5为胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。在一个方面，提供了鉴别抑制人KLK5活性的抗KLK5抗体的测定。生物活性可包括例如KLK5蛋白酶活性。在一个实施例中，抗KLK5抗体抑制KLK5的丝氨酸蛋白酶活性。还提供了在体内和/或体外具有此类生物活性的抗体。
在某些方面中，测试本发明的抗体的此类生物活性。用于测定KLK5蛋白酶活性的测定为本领域中已知的，并且可包括例如在存在底物和试验分子(诸如抗KLK5抗体)的情况下孵育KLK5。在一些实施例中，抗KLK5抗体的生物活性通过一种或多种方法进行检测，这些方法选自直接活性测定、荧光肽测定、LC/MS测定和Ki(app)测定。在一些实施例中，通过选自重组KLK5直接活性测定、偶联pro-KLK1荧光肽测定、偶联pro-KLK7荧光肽测定、pro-KLK1LC/MS测定、pro-KLK7 LC/MS测定和Ki(app)测定中的一种或多种方法测量生物活性。在一些实施例中，通过本文所述的测定测量IC50值。在一些实施例中，本发明的抗KLK5抗体使KLK5的生物活性抑制至少50％，如通过选自重组KLK5直接活性测定、偶联pro-KLK1荧光肽测定、偶联pro-KLK7荧光肽测定、pro-KLK1LC/MS测定、pro-KLK7 LC/MS测定和Ki(app)测定中的一种或多种方法所测量。在一些实施例中，生物活性为KLK5的丝氨酸蛋白酶活性。在一些实施例中，通过本文所述的测定测量IC50值。
用于试验抗KLK5抗体(或包含抗KLK5结合臂的多特异性抗体)是否抑制KLK5蛋白酶活性的非限制性测定如下：KLK5直接功能测定可在室温下于384孔板中进行，最终反应体积为15μL。在测定缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％ Tween 20)中将抑制剂样品稀释至3倍的最终浓度。将抑制剂(例如，抗KLK5抗体)或对照样品(5μL)加入板中，然后加入测定缓冲液中的5μL人KLK5(SEQ ID NO:2)，最终浓度为0.5nM。40min后，加入于测定缓冲液中的5μL Boc-Val-Pro-Arg-AMC(Bachem I-1120，于水中的31.3mM储备溶液)，最终浓度为50μM。加入底物后，使用光学模块FI 320 405在酶标仪(BMG Labtech)中读取板，其中将增益设定为0％。每100s进行测量，持续约1.5h。反应速率(表示为RFU/s)通过线性回归在线性范围内进行计算。反应速率可归一化至0％和100％活性对照值，并用4参数方程进行拟合以计算IC50值。对于二价抑制剂，可以将原始IC50乘以2。
F.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些方面，本文提供的任何抗体均可用于检测生物样品是否存在抗原。如本文所用的术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些方面，生物样品包括细胞或组织(诸如皮肤样品)。
在一个方面，提供了一种用于诊断或检测方法中的抗体。在另一方面，提供了一种检测生物样品中是否存在KLK5和/或KLK7的方法。在某些方面，该方法包括在允许抗体与其抗原结合的条件下，使生物样品与如本文所述的抗KLK5抗体或抗KLK7抗体接触，并且检测抗体与抗原之间是否形成复合物。这种方法可以是体外或体内方法。在一些实施例中，选择患者接受本文所提供的抗体的治疗的方法包括确定来自患者的样品中的KLK5和/或KLK7表达。
在某些方面，提供了经标记的抗KLK7抗体。在某些方面，提供了经标记的抗KLK5抗体。在某些方面，提供了标记的多特异性抗KLK5/KLK7抗体。标记包括但不限于直接检测的标记或部分(诸如荧光标记、发色标记、电子致密标记、化学发光标记，以及放射性标记)，以及间接(例如通过酶促反应或分子相互作用)检测的部分(诸如酶或配体)。示例性标记包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I；荧光团，诸如稀土螯合物或荧光素(fluorescein)及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹酰、伞形酮；萤光素酶(luciferase)，例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利号4,737,456)；萤光素(luciferin)；2,3-二氢二氮杂萘二酮(2,3-dihydrophthalazinedione)；辣根过氧化物酶(HRP)；碱性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡糖淀粉酶；溶菌酶；糖氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；杂环氧化酶，诸如尿酸氧化酶和黄嘌呤氧化酶；与采用过氧化氢来氧化染料前体的酶(诸如HRP、乳过氧化物酶，或微过氧化物酶)偶联；生物素/抗生物素蛋白；纺丝标记；噬菌体标记；稳定自由基等。
G.药物组合物
在其他方面，提供了包含本文提供的任一种抗体的药物组合物，其例如用于以下任一种治疗方法中。一方面，药物组合物包含任一种本文提供的抗体和药用载体。在另一方面，药物组合物包含任一种本文提供的抗体和例如如下所述的至少一种另外的治疗剂。
如本文所述的抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或抗KLK5/KLK7抗体的药物组合物通过将具有所需纯度的此类一种或多种抗体与一种或多种可选的呈冻干组合物或水溶液形式的药用载体混合来制备(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))。药用载体通常在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒，包括但不限于：缓冲剂，诸如组氨酸、磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如锌蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性药用载体进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如，人类可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(Halozyme,Inc.)。某些例示性sHASEGP和使用方法(包括rHuPH20)描述于美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968中。在一个方面中，将sHASEGP与一种或多种另外的糖胺聚糖酶(诸如软骨素酶)组合。
在一些实施例中，本文所提供的一种或多种抗体被配制成用于皮下施用。在一些实施例中，本文所提供的一种或多种抗体被配制成用于静脉内施用。在一些实施例中，本文所提供的一种或多种抗体配被制成用于局部施用。
示例性的冻干抗体组合物描述于美国专利号6,267,958中。水性抗体组合物包括在美国专利号6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些，后者中的组合物包含组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文的药物组合物还可含有多于一种对于所治疗的特定适应症是必需的活性成分，优选是具有不会彼此不利地影响的互补活性的活性成分。例如，在一些实施例中，药物组合物包含抗KLK7抗体与抗KLK5抗体的组合。此类活性成分适当地以对预期目的有效的量组合存在。
活性成分可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合而制备的微胶囊(例如分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中；包埋在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米胶囊)中；或包埋在粗乳液中。此类技术公开于Remington'sPharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.编(1980)中。
可以制备用于缓释的药物组合物。缓释制备物的合适实例包括含有抗体的固态疏水聚合物的半透性基质，该基质是例如膜或微胶囊等成型制品的形式。
用于体内施用的药物组合物通常是无菌的。例如，无菌可以通过无菌过滤膜过滤而容易地实现。
H.治疗方法和施用途径
本文所提供的任何抗体可单独或组合用于治疗方法。
在一个方面，提供一种用作药物的抗KLK7抗体。在一个方面，提供一种用作药物的抗KLK5抗体。在一个方面，提供了一种用作药物的多特异性抗KLK5/KLK7抗体。在一个方面，提供了一种用作药物的抗KLK7抗体和抗KLK5抗体的组合。在其他方面，提供了用于治疗Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮的此类抗体。在某些方面，提供一种用于治疗方法中的抗KLK7抗体。在某些方面，提供一种用于治疗方法中的抗KLK5抗体。在某些方面，提供了一种用于治疗方法中的多特异性抗KLK5/KLK7抗体。在某些方面，提供了一种用于治疗方法中的抗KLK7抗体和抗KLK5抗体的组合。在某些方面，本发明提供了用于治疗患有Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮的个体的方法中的此类抗体，该方法包含向该个体施用有效量的一种抗体或多种抗体。在一个这样的方面，例如如下所描述的，所述方法进一步包括向个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂(例如，一种、两种、三种、四种、五种或六种另外的治疗剂)。
在其他方面，本发明提供了用于减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或多特异性抗KLK5/KLK5抗体。在某些方面，本发明提供了用于在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法中的抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或多特异性抗KLK5/KLK5抗体，该方法包含向该个体施用有效量的一种或多种抗体，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。根据上述方面中的任一者的“个体”优选地是人。
在又一方面，本发明提供了抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或多特异性抗KLK5/KLK5抗体在药物的制造或制备中的用途。在一个方面，该药物用于治疗Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮。在又一方面，该药物用于治疗Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮的方法中，该方法包括向患有Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮的个体施用有效量的药物。在一个这样的方面，例如如下所描述的，该方法进一步包括向个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂。在又一方面，该药物用于减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。在又一方面，该药物用于在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法中，该方法包含向该个体施用有效量的药物，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。根据上述实施例中的任一实施例的“个体”可以是人。
在又一方面，本发明提供了一种治疗Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮的方法。在一个方面，该方法包括向患有Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和/或红斑痤疮的个体施用有效量的抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或多特异性抗KLK5/KLK5抗体。在一个这样的方面，如下所描述的，该方法进一步包括向个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂。
在一些实施例中，提供了在患有Netherton综合征的个体中改善皮疹和/或鳞屑的方法，其包括向个体施用有效量的抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或多特异性抗KLK5/KLK5抗体。
根据上述实施例中的任一实施例的“个体”可以是人。
在又一方面，本发明提供一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法。在一个方面，该方法包含向个体施用有效量的抗KLK7抗体和/或抗KLK5抗体和/或多特异性抗KLK5/KLK5抗体，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水量、减少皮肤浸润、减少角化不全、复原上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。非限制性的例示性皮肤炎性细胞因子包括IL-8、TNFα、IL-6、IL-4和G-CSF。在一个方面，“个体”是人。
在又一方面，本发明提供了包含本文所提供的任何抗体的药物组合物，其例如用于以上任何治疗方法。一方面，药物组合物包含任一种本文提供的抗体和药用载体。在另一方面，药物组合物包含任一种本文提供的抗体和例如如下所述的至少一种另外的治疗剂。
本发明的抗体可以单独施用或用于组合疗法。例如，该组合疗法包括施用本发明的抗体并且施用至少一种另外的治疗剂(例如，一种、两种、三种、四种、五种或六种另外的治疗剂)。在某些方面，该组合疗法包括施用本发明的抗体并且施用至少一种另外的治疗剂，诸如消炎剂。在一些实施例中，消炎剂经口施用。在一些实施例中，消炎剂经局部施用。消炎剂包括但不限于低剂量抗生素、类固醇、皮质类固醇、他克莫司、抗IL4R抗体、TNF抑制剂、IL-12/23抑制剂、IL-17抑制剂和IL-4受体抑制剂。非限制性例示性消炎剂包括多西环素、甲氨蝶呤、强的松、环孢菌素、麦考酚酯(mycophenolate mofetil)、度普利尤单抗、塞妥珠单抗(certolizumab pegol)、依那西普、阿达木单抗、英夫利昔单抗、戈利木单抗、优特克单抗、苏金单抗、依克珠单抗、布罗达单抗、阿巴西普、替拉珠单抗(tidrakizumab)-asmn、瑞莎珠单抗(risankisumab)-rzaa和古塞库单抗。
在一些实施例中，例如，在红斑痤疮的治疗中，另外的治疗剂为经口服施用的多西环素。在一些实施例中，例如在特应性皮炎的治疗中，另外的治疗剂为经皮下施用的度普利尤单抗；和/或经局部施用的类固醇。在一些实施例中，例如，在红斑痤疮的治疗中，另外的治疗剂选自经局部施用的类固醇；经口服施用的甲氨蝶呤；经口服施用的环孢菌素；和通常经皮下施用的TNF抑制剂。
上述此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包括在相同或单独的药物组合物中)和单独施用，在单独施用的情况下，本发明的抗体的施用可以在施用另外的治疗剂或药剂之前、同时和/或之后进行。在一个方面，本发明的一种或多种抗体的施用和另外的治疗剂的施用彼此在约一个月内或在约一、二或三周内或在约一、二、三、四、五或六天内发生。在一个方面，在治疗的第1天将抗体和另外的治疗剂施用于患者。
本发明的抗体(和任何另外的治疗剂)可以通过任何合适的方式施用，包括肠胃外、肺内和鼻内，并且如果需要的话用于局部治疗、病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。给药可以通过任何合适的途径进行，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文考虑了各种投配时间安排，包括但不限于在各个时间点处的单次或多次施用、推注施用，以及脉冲输注。
在一些实施例中，皮下施用本发明的抗体。在一些实施例中，每四周或每月施用该抗体。在一些实施例中，静脉内施用本发明的抗体。在一些实施例中，每四周或每月施用该抗体。在一些实施例中，例如，当抗体包含半衰期延长的取代诸如M428L(EU编号)和N434S(EU编号)时，每八周施用该抗体。
本发明的抗体将以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用。在这种情况下需要考虑的因素包括所治疗的特定疾患、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病症、疾患的原因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间安排，以及执业医师已知的其他因素。所述抗体不是必须的，而是任选地与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论的疾患的制剂共同配制。这些其他制剂的有效量取决于药物组合物中存在的抗体的量、疾患或治疗的类型以及上面讨论的其他因素。这些通常以与本文该相同的剂量和施用途径使用，或以本文该剂量的约1％至99％使用，或以任何剂量且通过经验/临床上确定为合适的任何途径使用。
为了预防或治疗疾病，本发明的抗体的适当剂量(当单独使用或与一种或多种其他另外治疗剂组合使用时)将取决于待治疗的疾病类型、抗体的类型、疾病的严重程度和病程、施用分子用于预防还是治疗目的、患者的病史和对抗体的应答以及主治医师的酌处权。抗体适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。取决于疾病的类型和严重性，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)的抗体可以是例如通过一次或多次单独施用或通过连续输注而施用于患者的初始候选剂量。取决于上述因素，一种典型的日剂量的范围可以为约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于数天或更长时间的重复施用，取决于病症，治疗通常会持续直至发生所需的疾病症状抑制。抗体的一种示例性剂量的范围为约0.05mg/kg至约10mg/kg。因此，可以向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或它们的任何组合)的一种或多种剂量。此类剂量可以间歇施用，例如每周或每三周施用(例如，使得患者接受约两次至约二十次，或例如约六次剂量的抗体)。可施用初始较高负荷剂量，然后施用一种或多种较低剂量。然而，其他剂量方案可能有用。通过常规技术和测定可以容易地监测该疗法的进展。
在各种实施例中，本文的方法中使用的抗KLK5抗体可用KLK5拮抗剂代替，其中KLK5拮抗剂抑制KLK5蛋白酶活性。在各种实施例中，本文的方法中使用的抗KLK7抗体可用KLK7拮抗剂代替，其中KLK7拮抗剂抑制KLK5蛋白酶活性。在各种实施例中，本文的方法中使用的双特异性抗KLK5.KLK7抗体可用KLK5/KLK7拮抗剂代替，其中KLK5/KLK7拮抗剂抑制KLK5蛋白酶活性和KLK7蛋白酶活性。
I.制品
在本发明的另一方面中，提供了一种制品，其含有可用于治疗、预防和/或诊断上述疾患的物质。该制品包括容器和在该容器上或与该容器相关的标签或包装插页(packageinsert)。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。所述容器容纳组合物，该组合物本身或与另一种组合物组合以有效治疗、预防和/或诊断病症，并且所述容器可具有无菌进入口(例如，所述容器可以是静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示该组合物用于治疗所选择的病症。此外，该制品可包括(a)第一容器，其中该第一容器中含有包含本发明的抗体的组合物；以及(b)第二容器，该第二容器中含有包含另外的细胞毒性剂或其他治疗剂组合物。本发明该方面中的制品还可包含包装插页，该包装插页指示该组合物可用于治疗特定病症。可替代地或另外地，该制品可进一步包括第二(或第三)容器，该第二(或第三)容器包括药用缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。所述制品还可包括从商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
Ⅲ.实例
以下是本发明的方法和组合物的实例。应当理解，在给出以上提供的一般描述的情况下，可以实践各种其他实施方案。
实例1：抗KLK7抗体的生成
用人KLK7(SEQ ID NO:4)对新西兰白兔进行免疫接种，并使用与已出版文献相关的改良方案对单B细胞进行分离。参见例如，Offner等人,PLoS ONE 9(2),2014。该改进的工作流程包括将IgG+huKLK7+B细胞直接FACS分选到单个孔中。通过ELISA测定B细胞培养上清液与人KLK7和不相关的对照蛋白的结合。将KLK7特异性B细胞裂解并立即在-80℃冷冻保存直至进行分子克隆。如先前所述，将来自兔B细胞的各种单克隆抗体的可变区(VH和VL)克隆到来自提取的mRNA的表达载体中。参见相同文献。在Expi293细胞中表达个别重组兔抗体，随后用蛋白A进行纯化。获得约244种抗KLK7抗体，其与人和食蟹猕猴KLK7二者结合。克隆并表达171种抗体以进行进一步表征。针对与huKLK7的结合亲和力、对huKLK7的选择性以及功能活性，对纯化的抗KLK7抗体进行筛选。
通过BIAcoreTMT200机器测定抗体的结合亲和力。重组表达兔抗体。对于动力学测量，在研究级蛋白A芯片(GE Healthcare，USA)上捕获抗体以达到约300RU。将人和食蟹猕猴KLK7的10倍连续稀释液在25℃以30μL/min的流速注入HBS-P缓冲液中。使用1:1Langmuir结合模型(BIAcoreTMT200评价软件2.0版)计算结合率(ka)和解离率(kd)。平衡解离常数(KD)计算为比率kd/ka。
表1显示了最有效抗体的亚群的针对人KLK7和食蟹猕猴KLK7的解离速率的结果。未观察到与huKLK1、huKLK4、huKLK5或huKLK11的结合，从而证实这些抗体具有特异性。
表1
克隆ID hu KLK7 kd(1/s) Cy KLK7 kd(1/s)
5D10 <1E-6 <1E-6
7C7(14D10) <1E-6 2.08E-5
9C7 <1E-6 3.66E-5
11D11 <1E-6 1.06E-4
15A2 <1E-6 3.90E-4
14H11 <1E-6 <1E-6
12F11 2.84E-5 4.95E-4
13A4 <1E-6 <1E-6
13C10 <1E-6 1.78E-4
15E6 <1E-6 7.65E-5
10C8 <1E-6 1.97E-4
11H7 3.51E-4 1.53E-4
27E9 4.02E-3 3.06E-4
17B9 1.25E-3 6.96E-4
25B8 2.87E-5 4.01E-4
27D10 4.34E-4 9.75E-4
2-18D4 1e-5 1e-5
在室温下在384孔板(黑色，小体积圆底，Corning#4514)中进行KLK7直接功能测定，最终反应体积为15μL。在测定缓冲液(75mM Tris，pH 8.0，150mM NaCl，0.01％ Tween20)中将抑制剂样品稀释至3倍的最终浓度。将缺少抑制剂的反应以及与200nM最终SFTI21705(Genentech，于DMSO中的10mM储备液；也称为SFTI-KLK7；序列GKCLFSNPPICFPN(SEQID NO:196)；参见例如，de Veer等人,2017,J.Investig.Dermatol.,137:430-439)的反应分别用作100％和0％活性对照。将抑制剂或对照样品(5μL)加入板中，然后加入于测定缓冲液中的5μL人KLK7(SEQ ID NO:4加上C端FLAG标签；Genentech)或5μL食蟹猕猴KLK7(SEQ IDNO:6加上C端FLAG标签；Genentech)中，最终浓度为0.5nM(Mca底物测定)。40min后，加入于测定缓冲液中的最终浓度为10μM底物的5μL Mca-RPKPVE-Nval-WRK(Dnp)(SEQ ID NO:121；Bachem M-2110，于DMSO中的4.3mM储备溶液)。加入底物后，使用光学模块FI 320 405在酶标仪(BMG Labtech)中读取板，其中将增益设定为0％。每100s进行测量，持续约1.5h。反应速率(表示为RFU/s)通过线性回归在线性范围内进行计算。反应速率归一化至0％和100％活性对照值并用4参数方程进行拟合以计算IC50值。对于与二价抑制剂相关的某些数据，使原始IC50乘以2，如下文所指出。
通过对在每个时间点测量的相对荧光单位(RFU)进行线性回归来计算每个测定孔的初始速率。前两个时间点通常被忽略。相对于无抑制和完全抑制对照的平均值计算对照活性百分比。相对于抑制剂浓度绘制这些对照活性百分比，并使用4参数方程进行拟合以确定IC50值。表2显示了某些抗体克隆的人KLK7和食蟹猕猴KLK7抑制测定的结果。在表2中，因为所有克隆都是二价的，未针对二价对IC50进行校正。
表2：使用MCA肽底物对抗KLK7抗体的IC50，在IC50中未考虑二价(图1a和图1b)
实例2：抗KLK7抗体的人源化
如实例1所述进行筛选后，选择具有最佳抑制活性的17种抗体进行进一步表征。选择具有最强结合亲和力、抑制活性且制造问题最少的抗体(14H11)进行人源化。首先通过用S取代C35a以消除未配对的半胱氨酸，对抗体14H11重链可变区(SEQ ID NO:116)进行修饰，产生抗体14H11c(VH，SEQ ID NO:13；VL SEQ ID NO:14)。
如下将兔单克隆抗体14H11c人源化。残基编号是根据Kabat等人,Sequences ofproteins of immunological interest,第5版,Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991)。
在14H11c的人源化期间构建的变体以人IgG1的形式进行评定。将VL结构域中来自兔抗体的超可变区的位置24-34(L1；SEQ ID NO:10)、50-56(L2；SEQ ID NO:11)和89-97(L3；SEQ ID NO:12)移植到人KV1D-39*01框架中；并将VH结构域中的31-35b(H1；SEQ IDNO:7)、50-65(H2；SEQ ID NO:8)和95-102(H3；SEQ ID NO:9)移植到人HV3-53*01框架中。另外，将来自兔抗体的所有VL和VH游标位置移植到其相应的人生殖系框架中。所有兔氨基酸都位于游标位置的移植物称为L1H1(hu.14H11c.L1H1；SEQ ID NO:15(VH)和31(VL))。
通过BIAcoreTM8K SPR系统测定人源化抗体的结合亲和力。对于动力学测量，在研究级蛋白A芯片(GE Healthcare)上捕获抗体以达到大约300RU。将人KLK7的10倍连续稀释液在37℃以100μL/min的流速注入HBS-P缓冲液中。使用1:1Langmuir结合模型(BIAcoreInsight评估软件2.0版)计算结合速率(ka)和解离速率(kd)。平衡解离常数(KD)计算为比率kd/ka。
将hu.14H11c.L1H1抗体的结合亲和力与其嵌合亲本克隆进行比较。hu.14H11c.L1H1抗体的兔游标位置被转化回为人残基，以评估每个兔游标位置对hKLK7结合亲和力的贡献。制备三个额外的轻链(L2：L1+Ala43(SEQ ID NO:32)、L3：L1+Phe71(SEQID NO:33)和L4：L1+Ala43+Phe71(SEQ ID NO:34))以及九个额外的重链(H2：H1+Val2(SEQID NO:16)、H3：H1+Val48(SEQ ID NO:17)、H4：H1+Ser49(SEQ ID NO:18)、H5：H1+Arg71(SEQID NO:19)、H6：H1+Asn73(SEQ ID NO:20)、H7：H1+Leu78(SEQ ID NO:21)、H8：H1+Tyr91(SEQID NO:22)、H9：H1+Gln105(SEQ ID NO:23)、H10：游标位置无兔残基(SEQ ID NO:24))。参见图1A-图1B。基于上文所述的变体抗体的结合亲和力评估(数据未显示)，确定轻链上的Tyr71(L2；SEQ ID NO:32)以及重链上的Gln2和Pro105(H11；SEQ ID NO:29)为重要的兔游标残基。嵌合14H11c以KD<1pM结合，而hu.14H11c.L2H11以KD 0.4pM结合。
表3.人源化抗KLK7抗体的亲和力
实例3：抗KLK5抗体的亲和力优化
为提高抗KLK5抗体hu.9H5.L4H14和hu.10C5.L5H28的亲和性，分别产生544和576单点突变变体。所得抗体通过表面等离子体共振进行筛选，并根据解离率进行排名。参见图4(hu.10C5.L5H28变体)和图5(hu.9H5.L4H14变体)。hu.10C5.L5H28中仅有五个突变，其导致解离速率显著变慢。它们为LC.S34K(SEQ ID NO:54)、LC.F92Y(SEQ ID NO:55)、LC.S95F(SEQ ID NO:56)、HC.G33P(SEQ ID NO:105)和HC.N53V(SEQ ID NO:52)。参见图2A-图2B。对于hu.9H5.L4H14，仅四个突变的解离速率慢于亲本抗体：LC.H89V(SEQ ID NO:88)、LC.S95Y(SEQ ID NO:89)、HC.G54A(SEQ ID NO:81)和HC.G98Q(SEQ ID NO:82)。参见图3A-图3B。
为鉴别变体的良好组合，生成了带有人IgG1 Fc的单臂(OA)单价抗体，其具有单独和组合的突变集二者。通过表面等离子体共振表征来鉴别良好的组合。表4-表7显示了单臂(OA)单价抗体的动力学特性。
表4.hu.9H5.L4H14变体对于人KLK5的亲和力
表5.hu9H5.L4H14变体对于食蟹猕猴KLK5的亲和力
表6.hu10C5.L5H28变体对于人KLK5的亲和力
表7.hu10C5.L5H28变体对于食蟹猕猴KLK5的亲和力
图6显示针对人KLK5(图6A)和食蟹猕猴KLK5(图6B)的所指示hu.10C5.L5H28变体的表面等离子体共振迹线。图7显示针对人KLK5(图7A)和食蟹猕猴KLK5(图7B)的所指示hu.9H5.L4H14变体的表面等离子体共振迹线。
实例4：抗KLK5/KLK7双特异性抗体的生成和表征
为选择良好的10C5.L5H28变体组合与双特异性抗体中的抗KLK7臂配对，评估了每种变体的KLK5抑制活性、杆状病毒结合测定中的非特异性结合以及与单个细胞中的抗KLK7臂共表达时产生正确的双特异性。每种变体均经建构而具有先前所述的突变，以增强单细胞双特异性组装的正确链配对。参见Dillon等人,Mabs 9(2):213-230(2017)。抗KLK5 LC含有Q38E和V133K，并且HC含有Q39K和S183E。抗KLK7 LC含有Q38K和V133E，并且HC含有Q39E和S183K。
所有单臂抗KLK5抗体变体在KLK5抑制测定中均展现出类似的效力，IC50范围为1.14nM至2.30nM(数据未显示)。
基本上如Hotzel等人,Mabs 4(6):753-760(2012)所述，使用杆状病毒颗粒在ELISA中测量每种抗KLK5抗体变体的非特异性结合。
在杆状病毒结合测定后，由于较高的非特异性结合，消除了两种变体(N53V/S34K和N53V/S34K/F92Y/S95F)，这可能导致不良的药代动力学特性。参见表8和表9。
表8：hu10C5.L5H28变体的杆状病毒结合ELISA
表9：hu.9H5.L4H14变体的杆状病毒结合ELISA
xKLK5变体(全部具有Q38E/Q39K) BV ELISA VH/VL SEQ ID
OA.hu.9H5.H14L4 0.02 84/91
OA.hu.9H5.H14L4.G54A.H89V 0.30 85/92
OA.hu.9H5.H14L4.G54A.S95Y 0.17 85/93
OA.hu.9H5.H14L4.G54A.H89V.S95Y 0.34 85/94
OA.hu.9H5.H14L4.G98Q.H89V 0.32 86/92
OA.hu.9H5.H14L4.G98Q.S95Y 0.12 86/93
OA.hu.9H5.H14L4.G98Q.H89V.S95Y 0.33 86/94
OA.hu.9H5.H14L4.G54A.G98Q.H89V 0.27 87/92
OA.hu.9H5.H14L4.G54A.G98Q.S95Y 0.12 87/93
OA.hu.9H5.H14L4.G54A.G98Q.H89V.S95Y 0.20 87/94
在HEK293细胞中共表达后，评估每种变体与抗KLK7臂正确配对的能力。如表10所示，所有具有LC.S34K的变体均展现出不良的组装特性。
表10.质谱法测量单细胞生产时双特异性的正确率％。
基于结合的特性，选择具有Q39K/Q38E突变的hu.10C5.L5H28.N53V.F92Y(VH，SEQID NO:53；VL，SEQ ID NO:62)作为抗KLK5臂与具有Q39E/Q38K突变的hu14H11c.L2H11(VH，SEQ ID NO:30；VL，SEQ ID NO:38)作为抗KLK7臂进行配对。在hIgG1 N297G情况下产生了两种版本的双特异性抗体，其具有减弱的效应功能。其中一个版本含有两个突变(M428L/N434S)，其已被证明可以延长抗体的体内半衰期。参见Zalevsky等人Nature Biotech,2010,28:157-9；Ko等人Nature,2014,514:642-5；Gaudinski等人PLOS Medicine,2018,15:e1002493。
测定了具有和不具有M428L/N434S(“LS”)突变的抗KLK5/KLK7双特异性抗体对于人和食蟹猕猴KLK5和KLK7的亲和力。
表11.双特异性抗体对于人和食蟹猕猴KLK5的亲和力
表12.双特异性抗体对于人和食蟹猕猴KLK7的亲和力
基本上如实例1中所述，使用KLK7和KLK5直接功能测定法测定双特异性抗体的活性。对于KLK5功能测定，将实例1中的测定修改为使用人或食蟹猕猴KLK5(分别为SEQ IDNO:2和101)代替KLK7和最终浓度为50μM的底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC(Bachem I-1120，31.3mM储备水溶液)。将200nM SPINK9.SRE.Fc(SEQ ID NO:197；Genentech；参见例如Brannstrom等人,2012,Biol.Chem.393:369-377)用作0％活性对照。结果示于表13及14中。
表13：抗KLK5/KLK7双特异性抗体和亲本单特异性抗体针对人KLK5和KLK7的IC50，在IC50中校正了二价性(AMC＝Boc-Val-Pro-Arg-AMC；MCA＝Mca-RPKPVE-Nval-WRK(Dnp))
表14：抗KLK5/KLK7双特异性抗体和亲本单特异性抗体针对食蟹猕猴KLK5和KLK7的IC50，在IC50中校正了二价性(AMC＝Boc-Val-Pro-Arg-AMC；MCA＝Mca-RPKPVE-Nval-WRK(Dnp))
实例5：KLK5和KLK7在特应性皮炎、红斑痤疮和银屑病中的表达
使用免疫化学法测定KLK5在人红斑痤疮和特应性皮炎样品中的表达。如图8所示，与正常皮肤相比，人红斑痤疮和特应性皮炎中的KLK5蛋白升高。
为确定KLK7是否也在人皮炎条件下表达，使用反义RNA探针进行原位杂交以使KLK5和KLK7的表达可视化。图9显示，与正常皮肤相比，特应性皮炎、红斑痤疮和银屑病中的代表性KLK7 mRNA染色。图10显示，KLK5(10A)和KLK7(10B)mRNA在人皮肤中显示出类似的解剖表达，并且在特应性皮炎、红斑痤疮和银屑病中均有所上调。SPINK5表达的增加在特应性皮炎或红斑痤疮中不显著，但在银屑病中则较显著。图10中的数据显示了由病理学家进行的双盲定量。
实例6：皮内注射KLK5或KLK7增加经表皮失水量
为了测试KLK5或KLK7是否直接促进上皮屏障失调并增加经表皮失水量，将2μg重组KLK5或KLK7皮内注射到Balb/c小鼠的背部皮肤中。
如图11中所示，注射后6小时，如通过便携式皮肤Vapometer(Delfintechnologies)所测量，注射KLK5和KLK7二者的动物的经表皮失水量增加。这些数据表明KLK5和KLK7可各自促进上皮通透性增加。
实例7：抑制KLK5和KLK7改善鼠炎性皮炎
产生替代抗鼠KLK5和抗鼠KLK7抑制抗体，以测试抑制KLK5和KLK7对鼠特应性皮炎的治疗功效。通过使用SDS和金黄色葡萄球菌蛋白A进行局部治疗来诱导鼠特应性皮炎。然后，使患有炎性皮炎的小鼠接受腹膜内注射250μg同型对照(抗gp120)、抗鼠KLK5抗体、抗鼠KLK7抗体或抗KLK5抗体和抗KLK7抗体的组合。此处使用鼠SPINK5-Fc融合蛋白作为多种KLK(包括KLK5、KLK7和KLK14)的非特异性抑制剂。
如图12中所示，虽然单独抑制KLK5或KLK7在每日皮炎临床评分(12A)、终末特应性皮炎总分(12B)和AUC皮肤评分(12C)方面提供中等程度的保护，但共抑制KLK5和KLK7提供了优越的治疗功效，类似于SPINK5-Fc。由于SPINK5在抑制KLK5和KLK7之外还抑制其他KLK，因此该数据表明抑制KLK5和KLK7足以获得治疗功效。
炎性特应性皮炎与T细胞浸润和IL-13生产相关联。中和IL-13会改善鼠动物模型和人特应性皮炎患者中的特应性皮炎。在第二项实验中，将抗IL-13抗体用作SDS/金黄色葡萄球菌蛋白A特应性皮炎模型中的阳性对照。如图13中所示，抗KLK5抗体和抗KLK7抗体的组合减小终末AD总分、减少经表皮失水量(TEWL)并减小组织学疾病严重程度评分，其程度与抗IL-13抗体类似。图14显示了代表性苏木精和曙红染色，表明组合的抗KLK5抗体和抗KLK7抗体减少皮肤炎症和角化不全，其程度与抗IL-13抗体类似。
综上，这些结果表明KLK5和KLK7在促进上皮屏障通透性方面具有冗余作用。因此，与单独抑制KLK5或KLK7相比，预期组合抑制KLK5和KLK7导致改善的皮炎临床评分、皮肤屏障功能和组织病理学表现。
实例8：使用抗mKLK5/mKLK7双特异性抗体处理或抗mKLK5抗体/抗mKLK7抗体组合处理改善Spink5缺失型小鼠的皮疹和鳞屑
对Spink5 f/f Cre-ERT2+小鼠腹膜内注射16mg/kg、8mg/kg或4mg/kg他莫昔芬以使Spink5基因缺失。在他莫昔芬处理前一天，抗鼠KLK5抗体(2.5mg/小鼠)和抗鼠KLK7抗体(0.5mg/小鼠)或同型对照抗体(2.5mg/小鼠)。使用与抗mKLK7抗体相比过量的抗mKLK5抗体，因为据测定，该抗mKLK5抗体的效力比该抗mKLK7抗体低100倍，其IC50为4.78nM，而与之相比，抗mKLK7抗体的IC50为0.48nM。在注射他莫昔芬后6天分析背部皮肤。Spink5 f/f Cre-ERT2阴性小鼠还使用16mg/kg他莫昔芬作为对照进行处理。
注射后6天的小鼠背部皮肤显示于图16A-图16D中。使用同型对照处理的Spink5缺失型小鼠的皮肤变得干燥、起屑、发炎和变红。通过组合注射抗mKLK5抗体和抗mKLK7抗体与不同他莫昔芬剂量，这些外部Netherton综合征样症状得到显著改善。
将小鼠的背部皮肤在磷酸盐缓冲盐水中均质化以制备皮肤裂解物。使用Bio-Plex多重免疫测定(BioRad)分析裂解物的细胞因子水平。
细胞因子测定的结果显示于图17A-图17E中。与同型对照抗体处理相比，通过抗mKLK5/mKLK7双特异性抗体处理降低了细胞因子IL-8(17A)、TNF-α(17B)、IL-6(17C)、IL-4(17D)和G-CSF(17E)的含量。
图18显示来自使用16mg/kg他莫昔芬以及同型对照抗体或组合的抗mKLK5抗体/抗mKLK7抗体处理的Spink5缺失型小鼠的苏木精和曙红染色皮肤的代表性横截面。来自使用同型对照抗体处理的Spink5缺失型小鼠的皮肤显示显著的白细胞浸润、表皮层的增厚以及表皮脱屑，而mKLK5和mKLK7的组合阻断显著减少了病理学表现。
实例9：抗KLK5/KLK7双特异性抗体抑制KLK5诱导的上皮通透性和KLK7诱导的上皮通透性
将人表皮角质细胞接种到涂布有胶原的组织培养跨孔板中，并且使用1.5mMCaCl2分化2天。分化之后，将CaCl2减少至0.1mM。将单层的最顶端侧使用KLK5(5μg/ml)、KLK7(5μg/ml)、KLK5+KLK7(各为5μg/ml)或KLK5+KLK7(各为5μg/ml)+100μg/ml抗KLK5/KLK7双特异性抗体(hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS)处理72小时或96小时。使用伏特/欧姆计在每个时间点测量跨上皮电阻(TEER)。
结果在图22A-22B中示出。重组KLK5、KLK7或KLK5/KLK7一起的加入诱导了上皮通透性，如通过跨上皮电阻所定量。抗KLK5/KLK7双特异性抗体显著降低了KLK5诱导的上皮通透性和KLK7诱导的上皮通透性。
实例10：与KLK7结合的抗KLK7抗体14H11c的结构确定
重组KLK7残基I30-R253(SEQ ID NO:4)表达于哺乳动物表达系统(CHO细胞)中，其中His标签位于N端，之后为经工程化为介于该His标签与KLK7之间的肠激酶裂解位点。使用1mg/mL的几夫碱(Kifunensine)将CHO细胞与EndoH共表达。获取该表达介质，并且如第一步那样使用Ni-NTA纯化。将从该Ni-NTA柱洗出的蛋白质在Superdex 200(S200)尺寸排阻柱上进一步纯化。通过使用肠激酶处理隔夜来去除KLK7上的His标签，并且在SP HP阳离子交换柱上使用25mM Hepes pH7.8以及0-800mM NaCl的梯度进一步纯化KLK7。
将包括抗KLK7抗体rb.14H11c的重链和轻链的Fab片段表达于HEK293细胞中。将His标签添加至该重链的C端以便使用Ni-NTA树脂，随后通过PBS中的尺寸排阻色谱进行纯化。重链和轻链的序列分别显示于SEQ ID NO:198和199中。对于这一实例的目的，将这些序列以信号序列开始编号。显示于SEQ ID NO:198中的Fab重链因此以20开始编号(氨基酸20-256)，而显示于SEQ ID NO:199中的Fab轻链因此以23开始编号(氨基酸23-237)。
将KLK7与14H11c Fab以1:1.5KLK7:Fab的摩尔比混合，并且将复合物通过尺寸排阻色谱在25mM HEPES pH 7.8、150mM NaCl中进行纯化。含有KLK7:Fab复合物的峰在赖氨酸上经甲基化(Methods in Structure,2006,14,1617-1622)，并在S200柱上使用25mM TRISpH 7.8和150mM NaCl进一步纯化。将该复合物浓缩至10mg/mL，并且通过使用1μL蛋白质和1μL的10％ PEG 4K和0.2M硫酸铵来悬滴使晶体生长。晶体在3天后出现并历经另外2-3天成熟。然后获取晶体进行资料收集。
在100开尔文的低温冷却条件下，使用Advanced Light Source(Berkeley,CA)的各种同步加速器X射线辐射，根据标准方法收集X射线衍射数据。使用数据处理软件XDS处理并还原衍射图象(Kabsch,W.XDS.Acta Cryst.D66,125-132(2010))。使用分子置换技术，以程序PHASER生成模型。使用人KLK7的结构(Proc Natl Acad Sci U S A 104:16086-16091(2007))和Fab抗体模型作为研究模型。这些结构使用程序COOT进行反复轮次的模型调整，并且使用PHENIX进行改良。将模型改良为可接受的R值和R自由值以及Ramachandran统计值(通过Molprobity计算)。KLK7的氨基酸残基编号基于胰凝乳蛋白酶编号系统(对于KLK7，Proc Natl Acad Sci U S A 104:16086-16091(2007)；PDB代码2QXI作为参考；也称为“标准蛋白酶编号”)。
与人KLK7结合的14H11c Fab的结构显示于图20A-图20B中。结合至KLK7的完全Fab显示于图20A中，其中仅叠加KLK7。图20B显示KLK7-Fab界面。
表15列出了参与Fab-KLK7界面的14H11c重链氨基酸和KLK7氨基酸。
表15：14H11c重链和KLK7之间的界面残基
表16列出了参与Fab-KLK7界面的14H11c轻链氨基酸和KLK7氨基酸。
表16：14H11c轻链和KLK7之间的界面残基
表17列出了在结构中形成氢键的14H11c重链氨基酸和KLK7氨基酸，并且表18列出了形成盐桥的14H11c重链氨基酸和KLK7氨基酸。
表17：14H11c重链和KLK7之间的氢键
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表18：14H11c重链和KLK7之间的盐桥
表19列出了在结构中形成氢键的14H11c重链氨基酸和KLK7氨基酸。
表19：14H11c轻链和KLK7之间的氢键
基于该晶体结构，抗KLK7抗体rb.14H11c结合KLK7的不连续表位，其界面包含KLK7(SEQ ID NO:4)的区域R71-N82、K152-S158和Q211-K222。rb.14H11c与KLK7的氨基酸H72、P73、G74、S76、Q78、N82、N157、K211和T213形成氢键和/或盐桥，如根据SEQ ID NO:4编号(H91、P92、G93、S95、Q97、N101、N178、K233和T235，其通过胰凝乳蛋白酶编号)。
如图20C中所示，14H11c Fab与KLK7(胰凝乳蛋白酶编号)的170s环结合导致在170s环中的一致构形变化，其中L176(SEQ ID NO:4中的L155)和D174(SEQ ID NO:4中的D153)的构形变化最显著。L176为天然状态下的KLK7的疏水核心，其面向Fab(并且通过与Fab的相互作用得以稳定化)。由于与Fab的空间冲突，D174移动至更靠近底物结合区域的区域内，导致Y172(SEQ ID NO:4中的Y151)和W215(SEQ ID NO:4中的W192)的移动，与180s环冲突，导致180s环和220s环二者的解折叠以及底物结合位点的制约。据信这些构象变化会导致KLK7酶失活。
尽管为了清楚理解的目的先前已通过举例说明和实施方案相当详细地描述了本发明，但是这些描述和实施方案不应解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容均全文以引用方式明确地并入。
IV.特定序列表
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序列表
<110> 基因泰克公司
<120> 抗 KLK7 抗体、抗 KLK5 抗体、多特异性抗 KLK5/KLK7 抗体和使用方法
<130> 01146-0103-00PCT
<150> US 63/160,434
<151> 2021-03-12
<160> 226
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 293
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ala Thr Ala Arg Pro Pro Trp Met Trp Val Leu Cys Ala Leu Ile
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Thr Ala Leu Leu Leu Gly Val Thr Glu His Val Leu Ala Asn Asn Asp
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Val Ser Cys Asp His Pro Ser Asn Thr Val Pro Ser Gly Ser Asn Gln
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Asp Leu Gly Ala Gly Ala Gly Glu Asp Ala Arg Ser Asp Asp Ser Ser
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Ser Arg Ile Ile Asn Gly Ser Asp Cys Asp Met His Thr Gln Pro Trp
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Gln Ala Ala Leu Leu Leu Arg Pro Asn Gln Leu Tyr Cys Gly Ala Val
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Val Phe Arg Val Arg Leu Gly His Tyr Ser Leu Ser Pro Val Tyr Glu
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Gly Leu Val Ser Trp Gly Asp Tyr Pro Cys Ala Arg Pro Asn Arg Pro
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Gly Val Tyr Thr Asn Leu Cys Lys Phe Thr Lys Trp Ile Gln Glu Thr
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<213> 智人
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Ile Ile Asn Gly Ser Asp Cys Asp Met His Thr Gln Pro Trp Gln Ala
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Ala Leu Leu Leu Arg Pro Asn Gln Leu Tyr Cys Gly Ala Val Leu Val
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<213> 智人
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<212> PRT
<213> 智人
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Gln Asp Cys Thr Lys Val Tyr Lys Asp Met Leu Gly Asn Ser Met Leu
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Cys Ala Gly Ile Pro Asn Ser Lys Lys Asn Ala Cys Asn Gly Asp Ser
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1 5 10 15
Leu
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<223> rb.14H11c 重链可变区 (VH)
<400> 13
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ala Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala Ala Tyr
100 105 110
Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c 轻链可变区 (VL); rb.14H11 VL
<400> 14
Ala Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H1 VH
<400> 15
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 16
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H2 VH
<400> 16
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 17
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H3 VH
<400> 17
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 18
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H4 VH
<400> 18
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H5 VH
<400> 19
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 20
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H6 VH
<400> 20
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H7 VH
<400> 21
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 22
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H8 VH
<400> 22
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H9 VH
<400> 23
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 24
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H10 VH
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*4.H1 VH
<400> 25
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys His Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 26
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-23.H1 VH
<400> 26
Glu Gln Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 27
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-33*2.H1 VH
<400> 27
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Thr Asn Thr
65 70 75 80
Val Phe Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 28
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-21.H1 VH
<400> 28
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ala Ser Thr Ser
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Phe Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 29
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c-H11 VH
<400> 29
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 30
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c-H11.Q39E VH
<400> 30
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 31
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-39.L1 VL
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-39.L2 VL
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 33
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-39.L3 VL
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-39.L4 VL
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 35
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-5.L1 VL
<400> 35
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-8.L1 VL
<400> 36
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 37
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-6.L1 VL
<400> 37
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 38
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c-L2.Q38K VL
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 39
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 39
Ser Tyr Gly Val Thr
1 5
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 40
Tyr Ile Thr Ser Asn Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 41
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 41
Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 42
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
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1 5
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 47
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<211> 12
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<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 48
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<211> 12
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 49
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<213> 人工序列
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Gly Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
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<213> 人工序列
<220>
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<220>
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20 25 30
Gly Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<213> 人工序列
<220>
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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20 25 30
Gly Val Thr Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
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Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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65 70 75 80
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Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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<213> 人工序列
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Leu Lys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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Leu Lys Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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Val Glu Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<213> 人工序列
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Leu Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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<213> 人工序列
<220>
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Leu Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Glu
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Leu Lys Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Glu
20 25 30
Leu Lys Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly Phe Gly Ser Phe Gly
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<213> 人工序列
<220>
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Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Glu
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Leu Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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<213> 人工序列
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Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
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Leu Lys Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly Tyr Gly Ser Phe Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<400> 69
Phe Ile Gly Ser Gly Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 70
Phe Ile Gly Ser Ala Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Ser
1 5 10 15
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
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Asp Asp Val Gly Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 72
Asp Asp Val Gln Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile
1 5 10
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 73
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 74
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 74
Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 75
His Gln Asp Tyr Thr Ser Ser Asn Val Asp Asn Thr
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 76
Val Gln Asp Tyr Thr Ser Ser Asn Val Asp Asn Thr
1 5 10
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 77
His Gln Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Val Asp Asn Thr
1 5 10
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 78
Val Gln Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn Val Asp Asn Thr
1 5 10
<210> 79
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14L4 VH
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Gly Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gly Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 80
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14L4 VL
<400> 80
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Asp Tyr Thr Ser Ser Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 81
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.G54A VH
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Ala Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gly Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.G98Q VH
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Gly Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gln Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.G54A.G98Q VH
<400> 83
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Ala Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gln Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.Q39K VH
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Gly Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gly Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.Q39K.G54A VH
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Ala Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gly Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 86
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.Q39K.G98Q VH
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Gly Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gln Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 87
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-H14.Q39K.G54A.G98Q VH
<400> 87
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Gly Phe Ile Gly Ser Ala Gly Phe Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Asp Val Gln Gly Gly Lys Ser Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.H89V VL
<400> 88
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Gln Asp Tyr Thr Ser Ser Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.S95Y VL
<400> 89
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.H89V.S95Y VL
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Gln Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn
85 90 95
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100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.Q38E VL
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
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35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.Q38E.H89V VL
<400> 92
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.Q38E.S95Y VL
<400> 93
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.9H5-L4.Q38E.H89V.S95Y VL
<400> 94
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
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35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Gln Asp Tyr Thr Ser Tyr Asn
85 90 95
Val Asp Asn Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 95
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 重链恒定区 (hIgG1)
<400> 95
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 96
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183K
<400> 96
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 97
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V). S183E
<400> 97
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 98
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183K.M428L.N434S
<400> 98
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 99
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V).S183E. M428L.N434S
<400> 99
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 100
<211> 291
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 100
Met Ala Thr Ala Arg Thr Pro Trp Met Trp Val Leu Cys Ala Leu Ile
1 5 10 15
Thr Ala Leu Leu Leu Gly Val Thr Glu His Val Leu Ala Asn Asp Asp
20 25 30
Val Ser Cys Asp Asn Pro Ser Asn Thr Val Pro Ser Gly Ser Asn Arg
35 40 45
Asp Val Gly Ala Gly Asp Asp Ala Arg Ser Asp Asp Ser Ser Ser Arg
50 55 60
Ile Ile Asn Gly Ser Asp Cys Asp Glu His Thr Gln Pro Trp Gln Ala
65 70 75 80
Ala Leu Leu Leu Gly Pro Asn Gln Leu Tyr Cys Gly Gly Val Leu Val
85 90 95
His Pro Gln Trp Leu Leu Thr Ala Ala His Cys Arg Lys Lys Val Phe
100 105 110
Arg Val Arg Leu Gly His Tyr Ser Leu Ser Pro Val Tyr Glu Ser Gly
115 120 125
Gln Gln Met Phe Gln Gly Ile Lys Ser Ile Pro His Pro Gly Tyr Ser
130 135 140
His Pro Gly His Ser Asn Asp Leu Met Leu Ile Lys Leu Asn Arg Arg
145 150 155 160
Ile His Ser Thr Lys Asp Val Arg Pro Ile Asn Val Ser Ser His Cys
165 170 175
Pro Ser Ala Gly Thr Lys Cys Leu Val Ser Gly Trp Gly Thr Thr Arg
180 185 190
Ser Pro Gln Val His Phe Pro Lys Val Leu Gln Cys Leu Asn Ile Ser
195 200 205
Val Leu Ser Gln Lys Arg Cys Glu Asp Ala Tyr Pro Arg Gln Ile Asp
210 215 220
Asp Thr Met Phe Cys Ala Gly Asp Glu Ala Gly Arg Asp Ser Cys Gln
225 230 235 240
Gly Asp Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Ser Leu Gln Gly Leu
245 250 255
Val Ser Trp Gly Asp Tyr Pro Cys Ala Lys Pro Asn Arg Pro Gly Val
260 265 270
Tyr Thr Asn Leu Cys Lys Phe Thr Lys Trp Ile Gln Glu Thr Ile Gln
275 280 285
Ala Asn Ser
290
<210> 101
<211> 227
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 101
Ile Ile Asn Gly Ser Asp Cys Asp Glu His Thr Gln Pro Trp Gln Ala
1 5 10 15
Ala Leu Leu Leu Gly Pro Asn Gln Leu Tyr Cys Gly Gly Val Leu Val
20 25 30
His Pro Gln Trp Leu Leu Thr Ala Ala His Cys Arg Lys Lys Val Phe
35 40 45
Arg Val Arg Leu Gly His Tyr Ser Leu Ser Pro Val Tyr Glu Ser Gly
50 55 60
Gln Gln Met Phe Gln Gly Ile Lys Ser Ile Pro His Pro Gly Tyr Ser
65 70 75 80
His Pro Gly His Ser Asn Asp Leu Met Leu Ile Lys Leu Asn Arg Arg
85 90 95
Ile His Ser Thr Lys Asp Val Arg Pro Ile Asn Val Ser Ser His Cys
100 105 110
Pro Ser Ala Gly Thr Lys Cys Leu Val Ser Gly Trp Gly Thr Thr Arg
115 120 125
Ser Pro Gln Val His Phe Pro Lys Val Leu Gln Cys Leu Asn Ile Ser
130 135 140
Val Leu Ser Gln Lys Arg Cys Glu Asp Ala Tyr Pro Arg Gln Ile Asp
145 150 155 160
Asp Thr Met Phe Cys Ala Gly Asp Glu Ala Gly Arg Asp Ser Cys Gln
165 170 175
Gly Asp Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Ser Leu Gln Gly Leu
180 185 190
Val Ser Trp Gly Asp Tyr Pro Cys Ala Lys Pro Asn Arg Pro Gly Val
195 200 205
Tyr Thr Asn Leu Cys Lys Phe Thr Lys Trp Ile Gln Glu Thr Ile Gln
210 215 220
Ala Asn Ser
225
<210> 102
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 κ 轻链恒定区 (hκ)
<400> 102
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hκ.V133E
<400> 103
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Glu Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 104
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hκ.V133K
<400> 104
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Lys Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 105
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5-H28.G33P VH
<400> 105
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Asn Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Pro Asp Tyr Gly Tyr Ala Tyr Asp Ala Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 106
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5-H28.G33P.N53V VH
<400> 106
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Pro Asp Tyr Gly Tyr Ala Tyr Asp Ala Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 107
Ser Tyr Pro Val Thr
1 5
<210> 108
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 WT 中的 hu14H11c 重链 (HC)
<400> 108
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 109
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 WT 中的 hu14H11c 轻链 (LC)
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Glu Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 110
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 WT 中的 hu.10C5VY 重链 (HC)
<400> 110
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Thr Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Pro Asp Tyr Gly Tyr Ala Tyr Asp Ala Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 111
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 WT 中的 hu.10C5VY 轻链 (LC)
<400> 111
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Glu
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly Tyr Gly Ser Ser Gly
85 90 95
Val Glu Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Lys Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 112
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS 中的 hu14H11c 重链 (HC)
<400> 112
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 113
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS 中的 hu14H11c 轻链 (LC)
<400> 113
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Ser Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Glu Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 114
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS 中的 hu.10C5VY 重链 (HC)
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Thr Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Pro Asp Tyr Gly Tyr Ala Tyr Asp Ala Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His
420 425 430
Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 115
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS 中的 hu.10C5VY 轻链 (LC)
<400> 115
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Glu
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gln Gly Tyr Gly Ser Ser Gly
85 90 95
Val Glu Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Lys Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 116
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11 重链可变区 (VH)
<400> 116
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ala Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala Ala Tyr
100 105 110
Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 117
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183E
<400> 117
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 118
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V). S183K
<400> 118
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 119
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183E.M428L.N434S
<400> 119
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 120
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V).S183K. M428L.N434S
<400> 120
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KLK7 底物
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Nva
<400> 121
Arg Pro Lys Pro Val Glu Xaa Trp Arg Lys
1 5 10
<210> 122
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c VH FR1
<400> 122
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25
<210> 123
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 123
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 124
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 125
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*4.H1 VH FR1
<400> 125
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 126
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-23.H1 VH FR1
<400> 126
Glu Gln Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 127
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-33*2.H1 VH FR1
<400> 127
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 128
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-21.H1 VH FR1
<400> 128
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser
20 25 30
<210> 129
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 129
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ala
1 5 10
<210> 130
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H3 VH FR2
<400> 130
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 131
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H4 VH FR2
<400> 131
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Ser
1 5 10
<210> 132
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 132
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 133
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c-H11.Q39E VH FR2
<400> 133
Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 134
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c VH FR3
<400> 134
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ala Val Thr Leu Gln Met
1 5 10 15
Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 135
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 135
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 136
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H5 VH FR3
<400> 136
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 137
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H6 VH FR3
<400> 137
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 138
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H7 VH FR3
<400> 138
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 139
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*1.H8 VH FR3
<400> 139
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 140
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 140
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 141
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-53*4.H1 VH FR3
<400> 141
Arg Phe Thr Ile Ser Lys His Ser Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 142
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-33*2.H1 VH FR3
<400> 142
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Thr Asn Thr Val Phe Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 143
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.V3-21.H1 VH FR3
<400> 143
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ala Ser Thr Ser Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 144
Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 145
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 145
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 146
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c VL FR1
<400> 146
Ala Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys
20
<210> 147
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 147
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 148
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-5.L1 VL FR1
<400> 148
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 149
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-8.L1 VL FR1
<400> 149
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 150
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-6.L1 VL FR1
<400> 150
Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 151
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c VL FR2
<400> 151
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 152
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 152
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 153
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 153
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 154
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c-L2.Q38K VL FR2
<400> 154
Trp Tyr Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 155
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c VL FR3
<400> 155
Gly Val Pro Pro Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 156
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 156
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 157
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 157
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 158
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.K1-5.L1 VL FR3
<400> 158
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c VL FR4
<400> 159
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 160
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 160
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 161
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 161
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 162
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 162
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 163
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5-H28.Q39K.N54V VH FR2
<400> 163
Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 164
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 164
Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 165
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 165
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 166
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性 LC-FR1 序列
<400> 166
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Phe Ser Ala Ser Thr Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 167
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 167
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 168
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 168
Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 169
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 169
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 170
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 170
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 171
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 171
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 172
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 172
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Gly
1 5 10
<210> 173
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 173
Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val Gly
1 5 10
<210> 174
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 174
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 175
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 175
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 176
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 176
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 177
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 177
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 178
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 178
Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 179
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 179
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 180
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 180
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 181
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 模拟 hIgG1.N297G.杵(T366W). 单臂构建体的 S183K
<400> 181
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 182
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 模拟 hIgG1. N297G.臼(T366S. L368A.Y407V). 单臂构建体的 S183E
<400> 182
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 183
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 重链恒定区 (hIgG1) GK
<400> 183
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 184
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183K GK
<400> 184
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 185
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V). S183EGK
<400> 185
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 186
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183K.M428L.N434S GK
<400> 186
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 187
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V).S183E. M428L.N434S GK
<400> 187
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 188
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183E GK
<400> 188
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 189
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V). S183K GK
<400> 189
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 190
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.杵(T366W). S183E.M428L.N434S GK
<400> 190
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 191
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.N297G.臼(T366S. L368A.Y407V).S183K. M428L.N434S GK
<400> 191
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325
<210> 192
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 WT 中的 hu14H11c 重链 (HC) GK
<400> 192
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 193
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 WT 中的 hu.10C5VY 重链 (HC) GK
<400> 193
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Thr Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Pro Asp Tyr Gly Tyr Ala Tyr Asp Ala Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
<210> 194
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS 中的 hu14H11c 重链 (HC) GK
<400> 194
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
Trp Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala
100 105 110
Ala Tyr Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 195
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.10C5VY.hu14H11c.L2H11 LS GK 中的 hu.10C5VY 重链 (HC)
<400> 195
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Thr Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Thr Ser Val Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
50 55 60
Lys Ser Arg Ser Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asn Pro Asp Tyr Gly Tyr Ala Tyr Asp Ala Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Glu Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His
420 425 430
Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
<210> 196
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SFTI 21705（也称为 SFTI-KLK7）
<400> 196
Gly Lys Cys Leu Phe Ser Asn Pro Pro Ile Cys Phe Pro Asn
1 5 10
<210> 197
<211> 314
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SPINK9.SRE.Fc
<400> 197
Gly Ser Ile Glu Ser Ala Lys Gln Thr Lys Gln Met Val Asp Cys Ser
1 5 10 15
His Tyr Lys Lys Leu Pro Pro Gly Gln Gln Arg Phe Cys His Arg Glu
20 25 30
Tyr Asp Pro Ile Cys Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Lys Asn Asp Cys
35 40 45
Phe Phe Cys Ser Lys Val Lys Lys Thr Asp Gly Thr Leu Lys Phe Val
50 55 60
His Phe Gly Lys Cys Gly Asn Ser Arg Ala Gln Val Thr Asp Lys Lys
65 70 75 80
Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
85 90 95
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
100 105 110
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
115 120 125
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
130 135 140
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
145 150 155 160
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
165 170 175
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
180 185 190
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
195 200 205
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
210 215 220
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
225 230 235 240
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
245 250 255
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
260 265 270
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
275 280 285
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
290 295 300
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
305 310
<210> 198
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c 重链 Fab
<400> 198
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Ala Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Phe Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala Ala Tyr
100 105 110
Phe Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln
115 120 125
Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr
130 135 140
Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val
165 170 175
Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val
195 200 205
Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser
210 215 220
Thr Cys Ser Lys Pro Thr His His His His His His Pro
225 230 235
<210> 199
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> rb.14H11c 轻链 Fab
<400> 199
Ala Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Ala Asn Ser
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr Ala Phe Gly Ala Gly Thr Lys Val Glu Ile Asn Arg Asp
100 105 110
Pro Val Ala Pro Ser Val Leu Leu Phe Pro Pro Ser Lys Glu Glu Leu
115 120 125
Thr Thr Gly Thr Ala Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Thr Val Thr Trp Lys Val Asp Gly Thr Thr Gln Gln Ser
145 150 155 160
Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Ser Pro Glu Asp Asn Thr Tyr
165 170 175
Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His
180 185 190
Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210 215
<210> 200
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.KR CDRH3
<400> 200
Glu Gly Arg Ala Glu Thr Gly Gly Tyr Gly Tyr Ala Ala Tyr Phe Asn
1 5 10 15
Leu
<210> 201
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.KR CDRL1
<400> 201
Leu Ala Ser Glu Lys Ile Ala Ser Ser Val Ser
1 5 10
<210> 202
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hu.14H11c.KR VH
<400> 202
Glu Gln Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Glu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Ser Ile Tyr Ala Gly Ser Ser Gly Ala Pro Tyr Tyr Ala Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
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50 55 60
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65 70 75 80
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S183K.M428L.N434S δGK]
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165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
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195 200 205
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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
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Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
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420 425 430
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435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455
<210> 210
<211> 448
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<213> 人工序列
<220>
<223> hu10C5.VY.A 重链 (HC) δGK [hIgG1.LALAPG.臼(T366S.
L368A.Y407V).S183E. M428L.N434S δGK]
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Gly Val Thr Trp Val Arg Lys Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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65 70 75 80
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
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Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His
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195 200 205
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210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
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245 250 255
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<210> 214
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
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Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
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50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 226
<211> 328
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIgG1.LALAPG.臼(T366S. L368A.Y407V).S183K. M428L.N434S δGK
<400> 226
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Leu His Glu Ala Leu His Ser His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
325

Claims (195)

1.一种与人KLK7结合的抗体，其中所述抗体包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：
(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；
或
(b)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；或
(c)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体，其为单克隆抗体。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗体，其为人源化抗体或嵌合抗体。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体，其为与人KLK7结合的抗体片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM或小于5pM的KD结合人KLK7；和/或如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于10pM、或小于9pM、或小于8pM、或小于7pM、或小于6pM或小于5pM的KD与食蟹猕猴KLK7结合。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中重链可变区包含：FR1，其包含选自SEQID NO:123-128的氨基酸序列；FR2，其包含选自SEQ ID NO:130-133的氨基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO:135-143的氨基酸序列；和/或FR4，其包含选自SEQ ID NO:144-145的氨基酸序列。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体，其中轻链可变区包含：FR1，其包含选自SEQID NO:147-150的氨基酸序列；FR2，其包含选自SEQ ID NO:152-154的氨基酸序列；FR3，其包含选自SEQ ID NO:156-158的氨基酸序列；和/或FR4，其包含选自SEQ ID NO:160的氨基酸序列。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；以及
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
9.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列；以及
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
10.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQID NO:203的VL序列。
11.一种与人KLK7特异性地结合的抗体，其包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，其中所述重链恒定区包含S183K取代(EU编号)和/或S183E取代(EU编号)；和/或所述轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)和/或V133E取代(EU编号)。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的抗体，其为全长IgG1抗体。
14.根据权利要求13所述的抗体，其中所述抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含N297G取代(EU编号)或L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含M428L取代(EU编号)和/或N434S取代(EU编号)。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的抗体，其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
18.根据权利要求1至19中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7；并且其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
19.根据权利要求17或权利要求18所述的抗体，其中抑制人KLK7蛋白酶活性为抑制包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的人KLK7介导的裂解，其中Nval为正缬氨酸。
20.根据权利要求1至21中任一项所述的抗体，其中所述抗体为多特异性抗体。
21.根据权利要求20所述的抗体，其为双特异性抗体。
22.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1至21中任一项所述的抗体。
23.一种分离的宿主细胞，其包含根据权利要求22所述的核酸。
24.一种分离的宿主细胞，其表达根据权利要求1至21中任一项所述的抗体。
25.一种生产与人KLK7结合的抗体的方法，其包括在适合表达所述抗体的条件下培养根据权利要求23或权利要求24所述的宿主细胞。
26.根据权利要求25所述的方法，其进一步包括从所述宿主细胞回收所述抗体。
27.一种抗体，其通过根据权利要求26所述的方法生产。
28.一种与人KLK5结合的抗体，其中所述抗体包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQID NO:47的氨基酸序列。
29.根据权利要求28所述的抗体，其中所述抗体包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
30.根据权利要求28或权利要求29所述的抗体，其为单克隆抗体。
31.根据权利要求28至30中任一项所述的抗体，其为人源化抗体或嵌合抗体。
32.根据权利要求28至31中任一项所述的抗体，其为结合人KLK5的抗体片段。
33.根据权利要求28至32中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于1nM、或小于500pM、或小于300pM、或小于200pM、或小于100pM或小于50pM的KD结合人KLK5；和/或如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于1nM、或小于500pM、或小于300pM、或小于200pM、或小于100pM或小于50pM的KD与食蟹猕猴KLK5结合。
34.根据权利要求28至33中任一项所述的抗体，其中重链可变区包含：FR1，其包含选自SEQ ID NO:161的氨基酸序列；FR2，其包含SEQ ID NO:162-163的氨基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列；和/或FR4，其包含SEQ ID NO:165的氨基酸序列。
35.根据权利要求28至34中任一项所述的抗体，其中轻链可变区包含：FR1，其包含SEQID NO:166的氨基酸序列；FR2，其包含选自SEQ ID NO:167-168的氨基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO:169的氨基酸序列；和/或FR4，其包含SEQ ID NO:170的氨基酸序列。
36.根据权利要求28至35中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；以及
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
37.根据权利要求28至36中任一项所述的抗体，其包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；以及
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
38.根据权利要求28至37中任一项所述的抗体，其包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQID NO:62的VL序列。
39.一种与人KLK5特异性地结合的抗体，其包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
40.根据权利要求28至39中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链恒定区和轻链恒定区，其中所述重链恒定区包含S183K取代(EU编号)和/或S183E取代(EU编号)；和/或所述轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)和/或V133E取代(EU编号)。
41.根据权利要求28至40中任一项所述的抗体，其为全长IgG1抗体。
42.根据权利要求41所述的抗体，其中所述抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含N297G取代(EU编号)或L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
43.根据权利要求40至42中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含重链恒定区，所述重链恒定区包含M428L取代(EU编号)和/或N434S取代(EU编号)。
44.根据权利要求28至43中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5。
45.根据权利要求28至44中任一项所述的抗体，其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
46.根据权利要求28至45中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5；并且其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
47.根据权利要求45或权利要求46所述的抗体，其中抑制人KLK5蛋白酶活性为抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。
48.根据权利要求28至47中任一项所述的抗体，其中所述抗体为多特异性抗体。
49.根据权利要求48所述的抗体，其中所述抗体为双特异性抗体。
50.一种分离的核酸，其编码根据权利要求28至49中任一项所述的抗体。
51.一种分离的宿主细胞，其包含根据权利要求61所述的核酸。
52.一种分离的宿主细胞，其表达根据权利要求28至51中任一项所述的抗体。
53.一种生产与人KLK5结合的抗体的方法，其包括在适合表达所述抗体的条件下培养根据权利要求51或权利要求52所述的宿主细胞。
54.根据权利要求53所述的方法，其进一步包括从所述宿主细胞回收所述抗体。
55.一种抗体，其通过根据权利要求54所述的方法生产。
56.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合人KLK7并且所述第二结合结构域结合人KLK5，其中所述第一结合结构域包含：
(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；
或
(b)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:201的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；或
(c)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:200的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
57.根据权利要求56所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域为人源化的。
58.根据权利要求56或权利要求57所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
(b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；以及
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
59.根据权利要求56至58中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含选自以下的序列：
(a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:15-30和202的氨基酸序列；
(b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:31-38和203的氨基酸序列；和
(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
60.根据权利要求56至59中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
61.根据权利要求56至60中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含：
(a)重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ IDNO:39和107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；或
(b)重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，
其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ IDNO:74的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:
75-78的氨基酸序列。
62.根据权利要求56至61中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ IDNO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
63.根据权利要求56至62中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域为人源化的。
64.根据权利要求61或权利要求62所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含选自以下的序列：
a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
65.根据权利要求61至63中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含选自以下的序列：
a)VH序列，其与选自SEQ ID NO:52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
66.根据权利要求56至63中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含选自以下的序列：
a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列；
b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列；
e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列；和
f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
67.根据权利要求56至63中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含选自以下的序列：
a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:52、53、105、106和205的氨基酸序列；
b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:81-87的氨基酸序列；
e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:88-94的氨基酸序列；和
f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
68.根据权利要求56至67中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含SEQ ID NO:202的VH氨基酸序列和SEQ ID NO:203的VL氨基酸序列，并且所述第二结合结构域包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL氨基酸序列。
69.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合人KLK7并且所述第二结合结构域结合人KLK5，其中所述第一结合结构域包含SEQ ID NO:202的重链可变结构域(VH)氨基酸序列和SEQ ID NO:203的轻链可变结构域(VL)氨基酸序列，并且所述第二结合结构域包含SEQ ID NO:205的VH氨基酸序列和SEQ IDNO:62的VL氨基酸序列。
70.根据权利要求56至69中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域，其中所述第一重链可变结构域与第一重链恒定区连接，并且所述第一轻链可变结构域与第一轻链恒定区连接；并且所述第二结合结构域包含第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域，其中所述第二重链可变结构域与第二重链恒定区连接，并且所述第二轻链可变结构域与第二轻链恒定区连接。
71.根据权利要求70所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区包含杵突变并且所述第二重链恒定区包含臼突变；或其中所述第一重链恒定区包含臼突变并且所述第二重链恒定区包含杵突变。
72.根据权利要求71所述的双特异性抗体，其中所述抗体为IgG1抗体，并且其中所述杵突变包含T366W取代。
73.根据权利要求71或权利要求72所述的双特异性抗体，其中所述抗体为IgG1抗体，并且其中所述臼突变包含选自T366S、L368A和Y407V的至少一个取代、至少两个取代或三个取代。
74.根据权利要求73所述的双特异性抗体，其中所述抗体为IgG1抗体，并且其中所述臼突变包含T366S取代、L368A取代和Y407V取代。
75.根据权利要求70至74中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和/或所述第二重链恒定区包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
76.根据权利要求75所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区各自包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
77.根据权利要求70至76中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且所述第一轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)，并且所述第二重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且所述第二轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)；或
(b)所述第一重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且所述第一轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)，并且所述第二重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且所述第二轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)。
78.根据权利要求70至77中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和/或所述第二重链恒定区进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
79.根据权利要求78所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区各自进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
80.根据权利要求79所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区各自进一步包含M428L取代和N434S取代(EU编号)。
81.根据权利要求70至80中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、223和224的氨基酸序列，且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且所述第二重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)所述第二重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、
223和224的氨基酸序列，且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且所述第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、
214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且所述第一轻链恒定区包含SEQ IDNO:104的氨基酸序列。
82.根据权利要求98所述的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、
213或214的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、
217或218的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(c)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、
213或214的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(d)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、
217或218的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(e)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列；或
(f)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列；或
(g)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列；或
(h)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列。
83.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合人KLK7并且所述第二结合结构域结合人KLK5，其中所述第一结合结构域包含SEQ ID NO:206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:207的轻链氨基酸序列，并且所述第二结合结构域包含SEQ ID NO:208或210的重链氨基酸序列和SEQID NO:115的轻链氨基酸序列。
84.一种双特异性抗体，其包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合人KLK7并且所述第二结合结构域结合人KLK5，其中所述第二结合结构域包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39或107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:40或41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43或44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQID NO:47的氨基酸序列。
85.根据权利要求85所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQID NO:47的氨基酸序列。
86.根据权利要求84或权利要求85所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域为人源化的。
87.根据权利要求84至86中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含选自以下的序列：
a)VH序列，其与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
88.根据权利要求84至86中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含选自以下的序列：
a)VH序列，其包含SEQ ID NO:205的氨基酸序列；
b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
89.根据权利要求84至86中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第二结合结构域包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL氨基酸序列。
90.根据权利要求84至89中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域为人源化的。
91.根据权利要求84至90中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一结合结构域包含第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域，其中所述第一重链可变结构域与第一重链恒定区连接，并且所述第一轻链可变结构域与第一轻链恒定区连接；并且所述第二结合结构域包含第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域，其中所述第二重链可变结构域与第二重链恒定区连接，并且所述第二轻链可变结构域与第二轻链恒定区连接。
92.根据权利要求91所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区包含杵突变并且所述第二重链恒定区包含臼突变；或其中所述第一重链恒定区包含臼突变并且所述第二重链恒定区包含杵突变。
93.根据权利要求92所述的双特异性抗体，其中所述抗体为IgG1抗体，并且其中所述杵突变包含T366W突变。
94.根据权利要求92或权利要求93所述的双特异性抗体，其中所述抗体为IgG1抗体，并且其中所述臼突变包含选自T366S、L368A和Y407V的至少一个突变、至少两个突变或三个突变。
95.根据权利要求94所述的双特异性抗体，其中所述抗体为IgG1抗体，并且其中所述臼突变包含T366S突变、L368A突变和Y407V突变。
96.根据权利要求91至95中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和/或所述第二重链恒定区包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
97.根据权利要求96所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区各自包含L234A取代、L235A取代和P329G取代(EU编号)。
98.根据权利要求91至97中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且所述第一轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)，并且所述第二重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且所述第二轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)；或
(b)所述第一重链恒定区进一步包含S183E取代(EU编号)且所述第一轻链恒定区包含V133K取代(EU编号)，并且所述第二重链恒定区进一步包含S183K取代(EU编号)且所述第二轻链恒定区包含V133E取代(EU编号)。
99.根据权利要求91至98中任一项所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和/或所述第二重链恒定区进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
100.根据权利要求99所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区各自进一步包含选自M428L和N434S(EU编号)的至少一个取代。
101.根据权利要求100所述的双特异性抗体，其中所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区各自进一步包含M428L取代和N434S取代(EU编号)。
102.根据权利要求91至101中任一项所述的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、
223和224的氨基酸序列，且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且所述重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、
217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)所述第二重链恒定区包含选自SEQ ID NO:96、184、98、186、117、188、119、190、211、212、215、216、219、220、
223和224的氨基酸序列，且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列；并且所述第一重链恒定区包含选自SEQ ID NO:97、185、99、187、118、189、120、191、213、214、217、218、221、222、225和226的氨基酸序列，且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列。
103.根据权利要求102所述的双特异性抗体，其中：
(a)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、213或214的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(b)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、217或218的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(c)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:96、184、211或212的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:97、185、213或214的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(d)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:98、186、215或216的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:99、187、217或218的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列；或
(e)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列；或
(f)所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列；或
(g)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:118、189、221或222的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:117、188、219或220的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列；或
(h)所述第二重链恒定区包含SEQ ID NO:120、191、225或226的氨基酸序列且所述第二轻链恒定区包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，并且所述第一重链恒定区包含SEQ ID NO:119、190、223或224的氨基酸序列且所述第一轻链恒定区包含SEQID NO:104的氨基酸序列。
104.根据权利要求56至103中任一项所述的双特异性抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5。
105.根据权利要求56至104中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
106.根据权利要求56至105中任一项所述的抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于60pM、小于30pM、小于20pM、小于10pM或小于5pM的KD结合人KLK5；并且其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK5蛋白酶活性。
107.根据权利要求105或权利要求106所述的双特异性抗体，其中抑制人KLK5蛋白酶活性为抑制底物Boc-Val-Pro-Arg-AMC的人KLK5介导的裂解。
108.根据权利要求56至107中任一项所述的双特异性抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7。
109.根据权利要求56至108中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
110.根据权利要求56至109中任一项所述的双特异性抗体，其中如通过表面等离子体共振所测量，所述抗体以小于20pM、或小于15pM、或小于10pM、小于5pM、或小于3pM、或小于2pM或小于1pM的KD结合人KLK7；并且其中所述抗体以小于5nM、或小于3nM、或小于2nM或小于1nM的IC50抑制人KLK7蛋白酶活性。
111.根据权利要求109或权利要求110所述的双特异性抗体，其中抑制人KLK7蛋白酶活性为抑制包含氨基酸序列RPKPVE-Nval-WRK(SEQ ID NO:121)的底物的人KLK7介导的裂解，其中Nval为正缬氨酸。
112.根据权利要求56至111中任一项所述的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体对于人KLK5的KD和所述抗体对于人KLK7的KD为彼此的3倍以内、或2.5倍以内、或2倍以内或1.5倍以内。
113.一种分离的核酸，其编码根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体。
114.一种分离的核酸，其编码根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第一结合结构域。
115.一种分离的核酸，其编码根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第二结合结构域。
116.一种分离的宿主细胞，其包含根据权利要求113所述的分离的核酸。
117.一种分离的宿主细胞，其包含根据权利要求114所述的分离的核酸。
118.一种分离的宿主细胞，其包含根据权利要求115所述的分离的核酸。
119.一种分离的宿主细胞，其表达根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体。
120.一种分离的宿主细胞，其表达根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第一结合结构域。
121.一种分离的宿主细胞，其表达根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体的所述第二结合结构域。
122.一种生产与人KLK5和人KLK7结合的双特异性抗体的方法，其包括在适合于表达所述抗体的条件下培养根据权利要求116或权利要求119所述的宿主细胞。
123.根据权利要求122所述的方法，其进一步包括从所述宿主细胞回收所述抗体。
124.一种生产与人KLK5和人KLK7结合的双特异性抗体的方法，其包括(i)在适合于表达所述第一结合结构域的条件下培养根据权利要求117或权利要求120所述的宿主细胞；和(ii)在适合于表达所述第二结合结构域的条件下培养根据权利要求118或权利要求121所述的宿主细胞。
125.根据权利要求124所述的方法，其进一步包括回收所述第一结合结构域和所述第二结合结构域并组装所述双特异性抗体。
126.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至21中任一项所述的抗体以及药用载体。
127.根据权利要求126所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
128.根据权利要求127所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂为KLK5抑制剂。
129.根据权利要求128所述的药物组合物，其中所述KLK5抑制剂为抗KLK5抗体。
130.根据权利要求129所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体包含：
(a)重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含选自SEQ IDNO:39和107的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:40和41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:42或204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含选自SEQ ID NO:43和44的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:46-49的氨基酸序列；或
(b)重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含选自SEQ ID NO:69和70的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，
其包含选自SEQ ID NO:71和72的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ IDNO:74的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含选自SEQ ID NO:
75-78的氨基酸序列。
131.根据权利要求129或权利要求130所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体包含：重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含：(a)CDR-H1，其包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列，(b)CDR-H2，其包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列，和(c)CDR-H3，其包含SEQ ID NO:204的氨基酸序列；以及轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含：(d)CDR-L1，其包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，(e)CDR-L2，其包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列，和(f)CDR-L3，其包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。
132.根据权利要求129至131中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体为单克隆抗体。
133.根据权利要求129至132中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体为人源化抗体或嵌合抗体。
134.根据权利要求129至133中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体为结合人KLK5的抗体片段。
135.根据权利要求129至134中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
a)VH序列，其与SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
d)VH序列，其与选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
e)VL序列，其与选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
136.根据权利要求129至134中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
a)VH序列，其与SEQ ID NO:205的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；
b)VL序列，其与选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列具有至少95％序列同一性；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
137.根据权利要求129至134中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:50、52、53、105、106和205的氨基酸序列；
b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:51和54-67的氨基酸序列；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列；
d)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:79和81-87的氨基酸序列；
e)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:80和88-94的氨基酸序列；和
f)如(d)中定义的VH序列和如(e)中定义的VL序列。
138.根据权利要求129至134中任一项所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体包含选自以下的序列：
a)VH序列，其包含选自SEQ ID NO:52、53、105、106和205的氨基酸序列；
b)VL序列，其包含选自SEQ ID NO:54-67的氨基酸序列；和
c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。
139.根据权利要求129所述的药物组合物，其中所述抗KLK5抗体为根据权利要求28至49中任一项所述的抗体。
140.一种药物组合物，其包含根据权利要求28至49中任一项所述的抗体以及药用载体。
141.根据权利要求140所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
142.根据权利要求141所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂为KLK7抑制剂。
143.根据权利要求142所述的药物组合物，其中所述KLK7抑制剂为抗KLK7抗体。
144.根据权利要求143所述的药物组合物，其中所述抗KLK7抗体为根据权利要求1至21中任一项所述的抗体。
145.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至21中任一项所述的抗体和根据权利要求28至49中任一项所述的抗体以及药用载体。
146.根据权利要求126至145中任一项所述的药物组合物，其包含选自消炎剂和抗生素的另外的治疗剂。
147.一种药物组合物，其包含根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体。
148.根据权利要求147所述的药物组合物，其进一步包含另外的治疗剂。
149.根据权利要求148所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂为消炎剂。
150.根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于局部施用。
151.根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于皮下施用或静脉内施用。
152.根据权利要求1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物，其用作药物。
153.根据权利要求1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物，其用于在治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病中使用。
154.根据权利要求153所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中所述哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
155.根据权利要求154所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中所述哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
156.一种根据权利要求1至21中任一项所述的抗体与根据权利要求28至49中任一项所述的抗体的组合，其用作药物。
157.一种根据权利要求1至21中任一项所述的抗体与根据权利要求28至49中任一项所述的抗体的组合，其用于在治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病中使用。
158.根据权利要求157所述使用的组合，其中所述哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
159.根据权利要求158所述的组合，其中所述哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
160.根据权利要求1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病。
161.根据权利要求160所述的用途，其中所述哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
162.根据权利要求161所述的用途，其中所述哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
163.根据权利要求1至21中任一项所述的抗体与根据权利要求28至49中任一项所述的抗体的组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病。
164.根据权利要求163所述的用途，其中所述哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
165.根据权利要求164所述的用途，其中所述哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
166.根据权利要求1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。
167.根据权利要求1至21中任一项所述的抗体与根据权利要求28至49中任一项所述的抗体的组合在制备药物中的用途，所述药物用于减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。
168.一种治疗患有选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病的个体的方法，其包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物。
169.一种治疗患有选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病的个体的方法，其包括向所述个体施用a)有效量的根据权利要求1至21中任一项所述的抗体；和b)有效量的根据权利要求28至49中任一项所述的抗体。
170.根据权利要求169所述的方法，其中(a)中的所述抗体和(b)中的所述抗体同时施用。
171.根据权利要求169所述的方法，其中(a)中的所述抗体和(b)中的所述抗体依序施用。
172.一种治疗患有选自Netherton综合征、哮喘、特应性皮炎、银屑病、嗜酸性食管炎和红斑痤疮的疾病的个体的方法，其包括向所述个体施用有效量的根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或有效量的根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物。
173.根据权利要求168至172中任一项所述的方法，其中所述哮喘选自变应性哮喘、过敏性哮喘、非过敏性哮喘、运动诱发的哮喘、阿司匹林敏感性/加重的哮喘、轻度哮喘、中度至重度哮喘、未使用过皮质类固醇的哮喘、慢性哮喘、皮质类固醇抵抗性哮喘、皮质类固醇难治性哮喘、新诊断和未治疗的哮喘、吸烟引起的哮喘、使用皮质类固醇未控制的哮喘、辅助T淋巴细胞2型(Th2)或高2型(Th2)或2型(T2)驱动的哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘、高骨膜素哮喘、高嗜酸性粒细胞性哮喘、低Th2哮喘或非Th2驱动的哮喘、低骨膜素哮喘和低嗜酸性粒细胞性哮喘。
174.根据权利要求173所述的方法，其中所述哮喘为低嗜酸性粒细胞性哮喘。
175.根据权利要求168至172中任一项所述的方法，其中所述个体患有Netherton综合征。
176.根据权利要求168至172中任一项所述的方法，其中所述个体患有红斑痤疮。
177.根据权利要求168至176中任一项所述的方法，其进一步包括将另外的治疗剂施用至所述个体。
178.根据权利要求177所述的方法，其中所述另外的治疗剂为消炎剂。
179.一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法，其包括向所述个体施用有效量的根据权利要求1至21和28至49中任一项所述的抗体、根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。
180.一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法，其包括向所述个体施用a)有效量的根据权利要求1至21中任一项所述的抗体；和b)有效量的根据权利要求28至49中任一项所述的抗体，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。
181.根据权利要求180所述的方法，其中(a)中的所述抗体和(b)中的所述抗体同时施用。
182.根据权利要求180所述的方法，其中(a)中的所述抗体和(b)中的所述抗体依序施用。
183.一种在个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子的方法，其包括向所述个体施用根据权利要求56至112中任一项所述的双特异性抗体或有效量的根据权利要求126至149中任一项所述的药物组合物，以减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全和/或恢复上皮屏障。
184.根据权利要求168至183中任一项所述的方法，其中所述施用为皮下施用或静脉内施用。
185.根据权利要求168至183中任一项所述的方法，其中所述施用为局部施用。
186.根据权利要求168至183中任一项所述的方法，其中所述施用为静脉内施用。
187.根据权利要求153所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中所述疾病为Netherton综合征。
188.根据权利要求157所述使用的组合，其中所述疾病为Netherton综合征。
189.根据权利要求160或163中任一项所述的用途，其中所述疾病为Netherton综合征。
190.根据权利要求166或167中任一项所述的用途，其中所述药物用于在患有Netherton综合征的个体中减少上皮炎症、减少上皮通透性、减少经表皮失水、减少皮肤浸润、减少角化不全、恢复上皮屏障和/或减少皮肤炎性细胞因子。
191.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的双特异性抗体，其中所述双特异性抗体包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合人KLK7并且所述第二结合结构域结合人KLK5，其中所述第一结合结构域包含SEQ ID NO:206或209的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:207的轻链氨基酸序列，并且所述第二结合结构域包含SEQ ID NO:208或210的重链氨基酸序列和SEQID NO:115的轻链氨基酸序列。
192.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的抗KLK5抗体，其中所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列。
193.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的抗KLK7抗体，其中所述抗KLK7抗体包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
194.一种用于在治疗Netherton综合征中使用的抗体组合，其中所述抗体组合包含抗KLK5抗体和抗KLK7抗体，其中所述抗KLK5抗体包含SEQ ID NO:205的VH序列和SEQ ID NO:62的VL序列；并且
其中所述抗KLK7抗体包含SEQ ID NO:202的VH序列和SEQ ID NO:203的VL序列。
195.根据权利要求166或167所述的用途，或根据权利要求179、180和183中任一项所述的方法，或根据权利要求237所述使用的抗体、双特异性抗体或药物组合物，其中所述皮肤炎性细胞因子为IL-8、TNFα、IL-6、IL-4和/或G-CSF中的一种或多种。
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