CN116947794A - 一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 - Google Patents
一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116947794A CN116947794A CN202311211532.5A CN202311211532A CN116947794A CN 116947794 A CN116947794 A CN 116947794A CN 202311211532 A CN202311211532 A CN 202311211532A CN 116947794 A CN116947794 A CN 116947794A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethyl acetate
- cells
- component
- tetracyclic
- silica gel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 244000166124 Eucalyptus globulus Species 0.000 title description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 40
- -1 eudesmane sesquiterpene compound Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 71
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 70
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 65
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 40
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 31
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 28
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 claims description 21
- VGAJNILINWUWOP-UHFFFAOYSA-N Eudesmane Natural products COC(=O)C(=C)C1C(O)C2C(=O)CCC(O)C2(C)CC1OC(=O)C(=C)CO VGAJNILINWUWOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- DYEQPYSFRWUNNV-APIJFGDWSA-N eudesmane Chemical compound C1CC[C@@H](C)[C@@H]2C[C@H](C(C)C)CC[C@]21C DYEQPYSFRWUNNV-APIJFGDWSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 15
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 14
- 235000003261 Artemisia vulgaris Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 12
- 240000006891 Artemisia vulgaris Species 0.000 claims description 10
- SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;ethyl acetate Chemical compound CCOCC.CCOC(C)=O SRCZQMGIVIYBBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 8
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 5
- WEEGYLXZBRQIMU-UHFFFAOYSA-N 1,8-cineole Natural products C1CC2CCC1(C)OC2(C)C WEEGYLXZBRQIMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WEEGYLXZBRQIMU-WAAGHKOSSA-N Eucalyptol Chemical compound C1C[C@H]2CC[C@]1(C)OC2(C)C WEEGYLXZBRQIMU-WAAGHKOSSA-N 0.000 claims description 4
- 229960005233 cineole Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims description 4
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 claims description 3
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 3
- 241001247197 Cephalocarida Species 0.000 abstract description 55
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 abstract description 52
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 abstract description 52
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 abstract description 52
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 abstract description 52
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 48
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 abstract description 42
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 abstract description 42
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 abstract description 42
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 abstract description 41
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 abstract description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 32
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 18
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 16
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 abstract description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 12
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 abstract description 10
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 8
- 230000009545 invasion Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract description 4
- 230000004668 G2/M phase Effects 0.000 abstract description 3
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 abstract 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 112
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 45
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 32
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 20
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 11
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 8
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 8
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 8
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 8
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 8
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 8
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 7
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 101710160621 Fusion glycoprotein F0 Proteins 0.000 description 6
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 6
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 6
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 6
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 6
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical group O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- SMEJXMYNQKQENF-UHFFFAOYSA-N Dihydrovulgarin Natural products CC1(O)CCC(=O)C2(C)C1C1OC(=O)C(C)C1CC2 SMEJXMYNQKQENF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NGPDZEACIWDCKX-UHFFFAOYSA-N Tauremesin Natural products CC1(O)C=CC(=O)C2(C)C1C1OC(=O)C(C)C1CC2 NGPDZEACIWDCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NGPDZEACIWDCKX-WUDKWMPASA-N Vulgarin Chemical compound C([C@]1(O)C)=CC(=O)[C@@]2(C)[C@H]1[C@H]1OC(=O)[C@@H](C)[C@@H]1CC2 NGPDZEACIWDCKX-WUDKWMPASA-N 0.000 description 5
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 5
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 5
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 229930014931 vulgarin Natural products 0.000 description 5
- DGIMMEWTLSCNGO-UHFFFAOYSA-N (11S)-1alpha-hydroxyeudesm-3-eno-12,6alpha-lactone Natural products C1CC2(C)C(O)CC=C(C)C2C2C1C(C)C(=O)O2 DGIMMEWTLSCNGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DGIMMEWTLSCNGO-DMLGPZFASA-N (3s,3as,5ar,6r,9as,9bs)-6-hydroxy-3,5a,9-trimethyl-3,3a,4,5,6,7,9a,9b-octahydrobenzo[g][1]benzofuran-2-one Chemical compound O[C@@H]([C@]1(C)CC2)CC=C(C)[C@@H]1[C@@H]1[C@@H]2[C@H](C)C(=O)O1 DGIMMEWTLSCNGO-DMLGPZFASA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 4
- 229920002785 Croscarmellose sodium Polymers 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 229920003081 Povidone K 30 Polymers 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- 244000030166 artemisia Species 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 4
- 239000001767 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 4
- 235000010947 crosslinked sodium carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- 229940031703 low substituted hydroxypropyl cellulose Drugs 0.000 description 4
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 4
- HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L magnesium;dodecyl sulfate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 4
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 4
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 235000003826 Artemisia Nutrition 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YFKOMLOLNDFZBJ-UHFFFAOYSA-N acetyltabarin Natural products CC1C2C(CC3(C)C(C2OC1=O)C(C)(O)C=CC3=O)OC(=O)C YFKOMLOLNDFZBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 235000009052 artemisia Nutrition 0.000 description 3
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 238000004467 single crystal X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 3
- BMCOUTUQAWFTFQ-GGAZOKNXSA-N (3s,3ar,4as,8as,9ar)-3,5,8a-trimethyl-3,3a,4,4a,9,9a-hexahydrobenzo[f][1]benzofuran-2-one Chemical compound CC([C@@H]1C2)=CC=C[C@]1(C)C[C@@H]1[C@H]2[C@H](C)C(=O)O1 BMCOUTUQAWFTFQ-GGAZOKNXSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAFLATQAKKHUAC-UHFFFAOYSA-N 11alpha,13-dihydroyomogin Natural products CC1C2CC3=C(C)C(=O)C=CC3(C)CC2OC1=O IAFLATQAKKHUAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PLVZMXKRJMWMNE-UHFFFAOYSA-N 3alpha,11beta,15alpha,21-Tetrahydroxy-5alpha-pregnanon-(20) Natural products CC1C2C(CC3(C)C(O)CC=C(C)C3C2OC1=O)OC(=O)C PLVZMXKRJMWMNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001435059 Artemisia argyi Species 0.000 description 2
- 235000010894 Artemisia argyi Nutrition 0.000 description 2
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- MTVPOQKYYUETRT-UHFFFAOYSA-N Eupatilin Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 MTVPOQKYYUETRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 2
- GSNMNPBWIVTHHA-UHFFFAOYSA-N UNPD54402 Natural products CC1C2C(O)CC3(C)C(O)CC=C(C)C3C2OC1=O GSNMNPBWIVTHHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 229960000981 artemether Drugs 0.000 description 2
- BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N artemisinin Chemical compound C([C@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2OC(=O)[C@@H]4C BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N 0.000 description 2
- 239000012928 buffer substance Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 238000013506 data mapping Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- SXYIRMFQILZOAM-HVNFFKDJSA-N dihydroartemisinin methyl ether Chemical compound C1C[C@H]2[C@H](C)CC[C@H]3[C@@H](C)[C@@H](OC)O[C@H]4[C@]32OO[C@@]1(C)O4 SXYIRMFQILZOAM-HVNFFKDJSA-N 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 description 2
- FHHSEFRSDKWJKJ-UHFFFAOYSA-N eupafolin Natural products C=1C(=O)C2=C(O)C(OC)=C(O)C=C2OC=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 FHHSEFRSDKWJKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRRWBCNQOKKKOL-UHFFFAOYSA-N eupatilin Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC(=O)C2=C(O)C(OC)=C(O)C=C2O1 DRRWBCNQOKKKOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 125000001434 methanylylidene group Chemical group [H]C#[*] 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- SXDUGGRDNCRRHY-BIGJJFBESA-N (3r,3as,6r,6as,10as)-3,6,9-trimethyl-3,3a,4,5,6,6a,7,8-octahydrobenzo[h][1]benzofuran-2-one Chemical compound C([C@H]1[C@H](C)CC2)CC(C)=C[C@]31[C@@H]2[C@@H](C)C(=O)O3 SXDUGGRDNCRRHY-BIGJJFBESA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 240000004385 Centaurea cyanus Species 0.000 description 1
- 235000005940 Centaurea cyanus Nutrition 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 229930186526 Deoxyarteannuin Natural products 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical group 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 229960004191 artemisinin Drugs 0.000 description 1
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- GLENKKGPJNCTCZ-UHFFFAOYSA-N dihydro-epideoxyarteannuin B Natural products CC1CCC2C(C)C(=O)OC23C=C(C)CCC13C GLENKKGPJNCTCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl formate Chemical compound CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003324 eudesmane derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000000174 eudesmanes Chemical class 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000004798 organs belonging to the digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 238000001896 rotating frame Overhauser effect spectroscopy Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229930009674 sesquiterpene lactone Natural products 0.000 description 1
- 150000002107 sesquiterpene lactone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 208000018556 stomach disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/94—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom spiro-condensed with carbocyclic rings or ring systems, e.g. griseofulvins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用。本发明提供的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物(Artemilavanin F)抗肿瘤活性高,可抑制胃癌AGS、结肠癌HCT‑116、胰腺癌PANC‑1细胞增殖,诱导G2/M期细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡,具有抗胃癌、结肠癌、胰腺癌增殖的活性;化合物Artemilavanin F还可抑制胃癌AGS、结肠癌HCT‑116、胰腺癌PANC‑1细胞划痕融合和细胞迁移,具有抑制胰腺癌侵袭转移的活性,在制备治疗消化道肿瘤、预防和治疗消化道肿瘤侵袭转移的药物和药物组合物中具有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域,具体涉及四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用。
背景技术
消化道肿瘤是指食管癌、胃癌、肝癌、肠癌、胰腺癌、胆管癌等与消化相关的器官癌症,也可以见于其他组织器官肿瘤转移到消化道,并在局部生长。消化道肿瘤与高脂等饮食习惯和现代生活节奏改变有关,而且随着人口老龄化加剧,消化道肿瘤的患病人数将持续增加。因此,针对消化道肿瘤治疗的新型肿瘤抑制剂研发已成为肿瘤治疗领域迫切需要解决的问题。
天然产物具有化学结构多样性和生物活性多样性的特点,是抗肿瘤药物先导化合物的重要来源。在1981~2019年间上市的小分子药物中,有1/3直接或间接来源于天然产物(Journal of Natural Products,2020,83,770-803)。大量研究证实,中药和传统药用植物具有抗肿瘤作用,其中天然产物抗肿瘤活性成分的发掘具有重要意义。蒿属(ArternisiaL.)隶属于菊科(Compositae)春黄菊族(Anthemideae),全球有350种以上,我国有186种(胡厚才等,现代药物与临床,2012)。该属药用植物多具有清热解毒、抗菌消炎、祛风除湿、通经活络、活血、止血等功效,在国内外民间药方中广泛应用于疟疾、肝炎、癌症、炎症及感染(含真菌、细菌、病毒感染)等疾病的治疗及预防。迄今为止,从蒿属植物中分离得到的与胃病治疗有关的药理成分包括黄酮类化合物(异泽兰黄素、棕矢车菊素等)及倍半萜内酯类化合物(dehydroleucodine、蒿甲醚、二氢表脱氧青蒿乙素B及去氧青蒿素等)。研究表明,蒿属植物中异泽兰黄素具有显著促胃癌细胞凋亡的活性,通过上调肿瘤抑制蛋白p53和p21的表达水平,抑制与癌细胞增殖分化相关的信号通路中ERK1/2、Akt活性。蒿甲醚对胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45以及胰腺癌细胞株BXPC-3和SW-1990均具有体外杀伤作用,其作用机制与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关。倍半萜类化合物是蒿属植物中的重要活性成分,如最具代表性的青蒿素(Artemisinin)不仅是公认的疟疾治疗药物,而且还具有显著抗肿瘤活性。
目前,报道的桉烷型倍半萜类化合物主要有:Acetyltabarin(参见Phytochemistry. 1999. 51: 995-997)、Vulgarin(Helv. Chim. Acta. 2010. 93: 1344-1349)、8α-hydroxy-11β,13-dihydrobalchanin(参见Phytochemistry. 1999. 51: 995-997)、11β,13-dihydrosantamarin(参见Phytochemistry. 2013, 9: 90-94)、anthemidin(参见Epstein and Jenkins, 1979)、11α,13-dihydroyomogin(参见Phytochemistry. 27:1113-1120)、8α-acetoxy-1β-hydroxyeudesm-3-en-5α,6β,7α,11βH-12,6-olide(参见Phytochemistry. 1999. 51: 995-997)、Acetylartemisin(参见Serkerov, 1982)和8-acetylartapshin(参见Mustakerova et al., 2002)。然而,上述化合物对于消化道肿瘤的抗肿瘤活性低。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用。本发明提供的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物对消化道肿瘤的抗肿瘤活性高。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案。
本发明提供了一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物,具有式I所示的结构:
式I。
本发明提供了上述技术方案所述四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物的制备方法,包括以下步骤:
利用乙醇水溶液对野艾蒿进行醇提,得到醇提物;所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40~100%;
将所述醇提物溶解于水中,进行乙酸乙酯提取,得到乙酸乙酯提取物;
将所述乙酸乙酯提取物进行第一硅胶柱层析,得到Fr2组分;所述第一硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-丙酮混合溶液,所述洗脱剂中石油醚和丙酮的体积比为9:1~5:5;
将所述Fr2组分进行MCI-gel色谱柱分级,得到Fr2.3组分;所述MCI-gel色谱柱分级采用的洗脱剂为40~100v/v%甲醇水溶液;
将所述Fr2.3组分进行第二硅胶柱层析,得到Fr2.3.3组分;所述第二硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为20:1~7:3;
将所述Fr2.3.3组分进行第三硅胶柱层析,得到Fr2.3.3.3组分;所述第三硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为35:1~9:1;
将所述Fr2.3.3.3组分进行重结晶,得到四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。
优选的,所述醇提的温度为20~80℃,所述醇提的次数为2~4次,单次醇提的时间为24~72h;
所述野艾蒿的干重与单次醇提用乙醇水溶液的体积比为1kg:2~5L。
优选的,所述乙酸乙酯提取的次数为2~4次;
所述醇提物的质量与单次提取用乙酸乙酯的体积之比为1kg:4~10L。
优选的,所述第一硅胶柱层析为梯度洗脱,所述梯度洗脱过程中石油醚和丙酮的体积比依次为9:1、8:2、7:3、6:4和5:5。
优选的,所述重结晶采用的溶剂包括甲醇。
本发明提供了一种药物组合物,包括活性组分以及药学上可接受的载体和/或辅料;所述活性组分为上述技术方案所述的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物或上述技术方案所述制备方法制得的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。
优选的,所述药物组合物的剂型包括注射剂、片剂、胶囊、丸剂或颗粒剂。
本发明提供了上述技术方案所述的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物、上述技术方案所述制备方法制得的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物或上述技术方案所述药物组合物在制备预防肿瘤的药物或治疗肿瘤的药物中的应用。
优选的,所述肿瘤包括消化道肿瘤中的应用。
本发明提供的具有式I所示结构的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物(5/3/6/5四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物,Artemilavanin F)抗肿瘤活性高,在制备治疗消化道肿瘤、预防和治疗消化道肿瘤侵袭转移的药物和药物组合物中具有很好的应用前景。
药理活性实验证明,本发明提供的具有式I所示结构的化合物Artemilavanin F可抑制胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞增殖,诱导G2/M期细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡,具有抗胃癌、结肠癌、胰腺癌增殖的活性;化合物Artemilavanin F还可抑制胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞划痕融合和细胞迁移,具有抑制胰腺癌侵袭转移的活性,可用于制备预防肿瘤术后复发和转移药物或药物组合物。
本发明提供的化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞具有肿瘤细胞毒活性,半数抑制率分别为23.58μM、15.31μM和7.30μM。化合物Artemilavanin F可抑制AGS、PANC-1、HCT-116细胞的克隆形成,在0.625~1.25μM剂量下即可显著减少肿瘤细胞克隆形成数量。
本发明提供的化合物Artemilavanin F还可引起AGS、PANC-1、HCT-116细胞周期阻滞并进一步诱导细胞凋亡。该实验结果提示,化合物Artemilavanin F具有抑制胃癌、结肠癌、胰腺癌增殖,引起癌细胞周期阻滞和凋亡的抗肿瘤活性。
本发明提供的化合物Artemilavanin F还对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞迁移抑制活性,在24h时间点时1.25~2.5μM剂量下化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、胰腺癌PANC-1和结肠癌HCT-116细胞划痕愈合即有明显抑制作用,在48h时间点时仍可观察到10μM剂量下化合物Artemilavanin F具有划痕愈合抑制作用。该结果提示,Artemilavanin F具有抑制消化道肿瘤侵袭和转移的作用,可用于预防肿瘤术后复发和转移药物或药物组合物。
本发明首次从野艾蒿中分离获得一种新型桉烷型倍半萜类化合物ArtemilavaninF,并首次鉴定了Artemilavanin F的化学结构并对其抗消化道肿瘤的药理学活性进行研究,证明该化合物Artemilavanin F为结构重排的桉烷型倍半萜类化合物。而且,本发明以野艾蒿为原料进行提取得到四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物,原料来源广泛、成本低,避免使用大量的有机原料以及复杂的制备过程,四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物的收率高,纯度高。
附图说明
图1为化合物Artemilavanin F的单晶X衍射图;
图2为化合物Artemilavanin F及其桉烷型倍半萜类似物对胰腺癌PANC-1细胞的肿瘤细胞毒活性图;
图3为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞的肿瘤细胞毒活性图;
图4为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞克隆形成的抑制活图;
图5为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS细胞周期的调控作用图;
图6为化合物Artemilavanin F对结肠癌HCT-116细胞周期的调控作用图;
图7为化合物Artemilavanin F对胰腺癌PANC-1细胞周期的调控作用图;
图8为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS细胞凋亡的诱导活性图;
图9为化合物Artemilavanin F对结肠癌HCT-116细胞凋亡的诱导活性图;
图10为化合物Artemilavanin F对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的诱导活性图;
图11为化合物Artemilavanin F抑制胃癌AGS细胞迁移活性图;
图12为化合物Artemilavanin F抑制结肠癌HCT-116细胞迁移活性图;
图13为化合物Artemilavanin F抑制胰腺癌PANC-1细胞迁移活性图。
具体实施方式
本发明提供了一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物,具有式I所示的结构:
式I。
本发明提供了上述技术方案所述四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物的制备方法,包括以下步骤:
利用乙醇水溶液对野艾蒿进行醇提,得到醇提物;所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40~100%;
将所述醇提物溶解于水中,进行乙酸乙酯提取,得到乙酸乙酯提取物;
将所述乙酸乙酯提取物进行第一硅胶柱层析,得到Fr2组分;所述第一硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-丙酮混合溶液,所述洗脱剂中石油醚和丙酮的体积比为9:1~5:5;
将所述Fr2组分进行MCI-gel色谱柱分级,得到Fr2.3组分;所述MCI-gel色谱柱分级采用的洗脱剂为40~100v/v%甲醇水溶液;
将所述Fr2.3组分进行第二硅胶柱层析,得到Fr2.3.3组分;所述第二硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为20:1~7:3;
将所述Fr2.3.3组分进行第三硅胶柱层析,得到Fr2.3.3.3组分;所述第三硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为35:1~9:1;
将所述Fr2.3.3.3组分进行重结晶,得到四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。
在本发明中,若无特殊说明,使用的材料和设备均为本领域市售商品。
本发明利用乙醇水溶液对野艾蒿进行醇提,得到醇提物。在本发明中,所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40~100%,优选为60~100%,更优选为80~95%。在本发明中,所述野艾蒿的干重与单次醇提用乙醇水溶液的体积比优选为1kg:2~5L,更优选为1kg:2.5~4L,进一步优选为1kg:3~3.5L。在本发明中,所述醇提的温度优选为20~80℃,更优选为20~40℃,进一步优选为20~30℃;所述醇提的次数优选为2~4次,更优选为3次;单次醇提的时间优选为24~72h,更优选为30~60h,进一步优选为40~50h。
所述醇提后,本发明优选还包括将所得醇提液进行浓缩,得到醇提物。本发明对于所述浓缩没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的浓缩方式即可,具体如减压蒸馏。
得到醇提物后,本发明将所述醇提物溶解于水中,进行乙酸乙酯提取,得到乙酸乙酯提取物。在本发明中,所述醇提物与水的质量比优选为1:2~8,更优选为1:3~5。在本发明中,所述乙酸乙酯提取的次数优选为2~4次,更优选为3次。在本发明中,所述醇提物的质量与单次提取用乙酸乙酯的体积之比优选为1kg:4~10L,更优选为1kg:5~9L,进一步优选为1kg:6~7L。在本发明中,所述乙酸乙酯提取的温度优选为10~40℃,更优选为15~30℃;单次乙酸乙酯提取的时间优选为0.1~2h,更优选为0.2~1h。
得到乙酸乙酯提取物后,本发明将所述乙酸乙酯提取物进行第一硅胶柱层析,得到Fr2组分;所述第一硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-丙酮混合溶液,所述洗脱剂中石油醚(PE)和丙酮的体积比为9:1~5:5。在本发明中,所述第一硅胶柱层析优选为梯度洗脱,所述第一硅胶柱层过程中石油醚和丙酮的体积比具体优选依次为9:1、8:2、7:3、6:4和5:5;所述第一硅胶柱层析得到7个组分,记为Fr7组分~Fr7组分。
得到Fr2组分后,本发明将所述Fr2组分进行MCI-gel色谱柱分级,得到Fr2.3组分。在本发明中,所述MCI-gel色谱柱分级采用的洗脱剂为40~100v/v%甲醇水溶液,优选为50~90v/v%甲醇水溶液;所述MCI-gel色谱柱分级的洗脱方式优选为梯度洗脱,所述MCI-gel色谱柱分级采用的甲醇水溶液中甲醇的体积分数具体优选依次为40%、 50%、60%、70%、80%、90%和 100%;所述MCI-gel色谱柱分级得到9个组分,记为Fr2.1组分~Fr2.9组分。
得到Fr2.3组分后,本发明将所述Fr2.3组分进行第二硅胶柱层析,得到Fr2.3.3组分。在本发明中,所述第二硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为20:1~7:3;所述第二硅胶柱层析的洗脱方式优选为梯度洗脱,所述梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为20:1、15:1、9:1、8.5:1.5、8:2、7.5:2.5和7:3;所述第二硅胶柱层析得到11个组分,记为Fr2.3.1组分~Fr2.3.11组分。
得到Fr2.3.3组分后,本发明将所述Fr2.3.3组分进行第三硅胶柱层析,得到Fr2.3.3.3组分。在本发明中,所述第三硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为35:1~9:1。在本发明中,所述第三硅胶柱层析的洗脱方式优选为梯度洗脱,所述第三硅胶柱层析过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比具体优选依次为20:1、15:1、9:1、8.5:1.5、8:2、7.5:2.5和7:3;所述第三硅胶柱层析得到4个组分,记为Fr2.3.3.1组分~Fr2.3.3.4组分。
得到Fr2.3.3.3组分后,本发明将所述Fr2.3.3.3组分进行重结晶,得到四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。在本发明中,所述重结晶采用的溶剂优选包括甲醇。在本发明中,所述Fr2.3.3.3组分的质量与重结晶用甲醇的体积之比优选为1g:10~100mL,更优选为1g:30~80mL,进一步优选为1g:40~50mL。在本发明中,重结晶的温度优选为0~30℃,更优选为10~25℃,进一步优选为20~25℃;所述重结晶的时间优选为0.5~96h,更优选为10~80h,进一步优选为30~72h。
本发明提供了一种药物组合物,包括活性组分以及药学上可接受的载体和/或辅料;所述活性组分为上述技术方案所述的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物或上述技术方案所述制备方法制得的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。
在本发明中,所述载体优选包括卵磷脂、维生素E、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇、吐温、表面活性剂、氧化铝、硬脂酸铝、离子交换材料、缓冲物质、山梨酸、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、羊毛脂和环糊精中的一种或几种;所述缓冲物质优选包括磷酸盐。
在本发明中,所述辅料优选包括崩解剂、粘合剂、填充剂、润滑剂、赋形剂、抗氧化剂、包衣剂、芳香剂、增溶剂、香味剂和着色剂中的一种或几种;所述崩解剂优选包括羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和海藻酸钠中的一种或几种;所述粘合剂优选包括聚维酮K30、微晶纤维素和褐藻酸钠中的一种或几种;所述填充剂优选包括无水乳糖、淀粉、葡萄糖和乳糖珠粒中的一种或几种;所述润滑剂优选包括十二烷基硫酸镁和/或硬脂酸镁。本发明对于所述赋形剂、抗氧化剂、包衣剂、芳香剂、增溶剂、香味剂、着色剂和稳定剂没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的赋形剂、抗氧化剂、包衣剂、芳香剂、增溶剂、香味剂、着色剂和稳定剂即可。
在本发明中,所述药物组合物的剂型优选包括注射剂、片剂、胶囊、丸剂工艺颗粒剂。在本发明中,所述药物组合物优选包括缓释制剂或控释制剂。在本发明中,所述药物组合物的给药量优选为1~100mg/天,更优选为10~50mg/天。
本发明提供的药物组合物可经口或不经过口给药,经口服给药时,首先使化合物与常规的药用辅料如赋形剂、解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等混合,将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式给药;非经口给药时可以注射剂、栓剂、经皮吸收制剂等形式给药。
本发明对于所述药物组合物的制备方法没有特殊限定,采用本领域技术人员熟知的药物组合物的制备方法即可。
本发明提供了上述技术方案所述的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物、上述技术方案所述制备方法制得的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物或上述技术方案所述药物组合物在制备预防和/或治疗消化道肿瘤的药物中的应用。在本发明中,所述消化道肿瘤优选包括胃癌、结肠癌和胰腺癌中的一种或几种,更优选包括胃癌AGS、结肠癌HCT-116和胰腺癌PANC-1中的一种或几种。在本发明中,所述治疗和/或预防消化道肿瘤的药物,更优选包括预防和/或治疗消化道肿瘤侵袭转移的药物。在本发明中,所述消化道肿瘤优选包括胃癌、结肠癌和胰腺癌中的一种或几种,更优选包括胃癌AGS、结肠癌HCT-116和胰腺癌PANC-1中的一种或几种。
为了进一步说明本发明,下面结合附图和实施例对本发明的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将干燥野艾蒿地上部分(6 kg)用95v/v%乙醇(单次用量20 L)在室温下醇提3次,单次醇提时间为48h,将所得提取液减压蒸馏至恒重,得到醇提物(500g)。
在醇提物(500g)中加1.5L水溶解,乙酸乙酯(单次用量3L)提取3次,将所得乙酸乙酯提取液减压蒸馏至恒重,得到乙酸乙酯提取物(250g)。
将所述乙酸乙酯提取物进行硅胶柱层析(石油醚:丙酮体积比依次为9:1、8:2、7:3、6:4和5:5),得到7个组分,记为Fr1组分~Fr7组分。
将所述Fr2组分(13g)进行MCI-gel色谱柱分级(甲醇体积分数依次为40%、 50%、60%、70%、80%、 90%和100%的甲醇水溶液),得到9个亚组分,记为Fr2.1组分~Fr2.9组分。
将所述Fr2.3组分(996mg)进行硅胶柱层析(梯度洗脱,PE/EtOAc体积比依次为20:1、15:1、9:1、8.5:1.5、8:2、7.5:2.5和7:3),得到11个亚组分,记为Fr2.3.1组分~Fr2.3.11组分。
将所述Fr2.3.3组分(119mg)进行硅胶柱层析(石油醚:丙酮体积比=35:1~9:1)进行,得到4个亚组分,记为Fr2.3.3.1组分~Fr2.3.3.4组分。
将所述Fr2.3.3.3组分置于甲醇中,在25℃条件下重结晶72h,得到式I所示结构的5/3/6/5四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物(Artemilavanin F)。其中,Fr2.3.3.3组分的质量与重结晶用甲醇的体积之比为1g:50mL。
结构鉴定:化合物Artemilavanin F的1H和13C NMR数据见表1,Artemilavanin F的单晶X衍射图如图1所示;无色晶体;根据HR-ESI-MS at m/z 269.1152 [M + Na]+ (calcd269.1154),分子式为C15H18O3,不饱和度为7。红外光谱中1763 cm−1和1696 cm−1有吸收峰,表明存在羰基和烯烃官能团。1H和13C核磁共振信号显示三个甲基 [δH 1.17 (3H, d, J =7.4 Hz, H3-13), 0.96 (3H, s, H3-14), 1.21 (3H, s, H3-15); δC 10.7 (C-13), 14.6(C-14), 8.4 (C-15)],两个亚甲基,三个次甲基括一个被氧化的次甲基 [δH 4.69 (1H,m, H-8); δC 75.6 (C-8)],一个α,β-不饱和酮基团[δH 7.42 (1H, d, J = 5.6 Hz, H-1),5.98 (1H, d, J = 5.6 Hz, H-2); δC 162.8 (C-1), 129.6 (C-2), 206.9 (C-3)], 一个酯羰基[δC 179.0 (C-12)],以及三个季碳。核磁共振数据表明,Artemilavanin F是一个重排的桉烷型倍半萜。ROESY谱中,H-1与H-7和H-6α,H-8与H-11和H3-14,H-6β与H-9β和H3-15的相关,表明H-7,H-8,H-11和H3-14的α构型,H3-13和H3-15的β构型,以及C-5的S*构型。利用甲醇对该化合物进行晶体培养,最终通过单晶X衍射实验确定其绝对构型为4R,5S,7R,8R,10S,11S (图1),Flack系数为0.1(5)。经检索确定Artemilavanin F为首次分离获得的式I所示结构的新化合物。
表1 Artemilavanin F的1H (400 MHz)和13C (100 MHz) NMR数据(CDCl3)
Position | 1H | 13C |
1 | 7.42 (d, 5.6) | 162.8 |
2 | 5.98 (d, 5.6) | 129.6 |
3 | 206.9 | |
5 | 48.0 | |
6α | 1.83 (dd, 14.0, 4.5) | 41.6 |
6β | 1.16 (overlap) | 18.2 |
7 | 2.56 (m) | 37.5 |
8 | 4.69 (m) | 75.6 |
9α | 2.25 (dd, 14.0, 7.5) | 33.3 |
9β | 1.36 (dd, 14.0, 9.2) | 40.3 |
11 | 2.97 (m) | 37.1 |
13 | 1.17 (d, 7.4) | 179.0 |
14 | 0.96 (s) | 10.7 |
15a | 1.21 (s) | 14.6 |
15b | 8.4 |
实施例2
野艾蒿中Artemilavanin F结构类似物的分离:
在野艾蒿中分离获得9个具有与Artemilavanin F类似结构已知化合物:
11α,13-dihydroyomogin (Phytochemistry. 27: 1113-1120);
Acetyltabarin(Phytochemistry. 1999. 51: 995-997);
Vulgarin (Helv. Chim. Acta. 2010. 93: 1344-1349);
8α-acetoxy-1β-hydroxyeudesm-3-en-5α,6β,7α,11βH-12,6-olide(Phytochemistry. 1999. 51: 995-997);
8α-hydroxy-11β,13-dihydrobalchanin(Phytochemistry. 1999. 51: 995-997);
11β,13-dihydrosantamarin (Phytochemistry. 2013,90: 90-94);
Anthemidin(Epstein and Jenkins, 1979);
8-acetylartapshin(Mustakerova et al., 2002);
Acetylartemisin(Serkerov, 1982)。
Acetyltabarin:将所述Fr2.5.3组分(202mg)依次进行硅胶柱层析(PE/EtOAc,30:1~8:2,v/v)和Sephadex LH-20凝胶柱分离(CHCl3/MeOH,1:1,v/v),得到Acetyltabarin(9mg)。
Acetyltabarin
11β,13-dihydrosantamarin:将所述Fr3.2组分(125mg)依次进行硅胶柱层析(PE/EtOAc,8:2,v/v)和Sephadex LH-20凝胶柱分离(CHCl3/MeOHH,1:1,v/v),得到11β,13-dihydrosantamarin(12.3mg)。
11β,13-dihydrosantamarin
8α-hydroxy-11β,13-dihydrobalchanin和8-acetylartapshin:将所述Fr3.4.3.2组分(283mg)进行Sephadex LH-20凝胶柱分离(CHCl3/MeOH,1:1,v/v),分别得到8α-hydroxy-11β,13-dihydrobalchanin8α-hydroxy-11β,13-dihydrobalchanin (13mg)和8-acetylartapshin(2.8mg)。
8α-hydroxy-11β,13-dihydrobalchanin
8-acetylartapshin
11α,13-dihydroyomogin和Anthemidin:将所述Fr4组分(65g)进行MCI-gel色谱柱分级(40~100v/v%甲醇水溶液),得到7个亚组分Fr4.1组分~Fr4.7组分。将所述Fr4.1组分(3.4g)进行硅胶柱层析(PE/EtOAc,30:1~6:4,v/v),得到7个亚组分,记为Fr4.1.1组分~Fr4.1.7组分。将所述Fr4.1.3组分(1.4g)依次进行Sephadex LH-20凝胶柱分离(CHCl3/MeOH,1:1,v/v)和硅胶柱层析,分别得到11α,13-dihydroyomogin(8.8mg)和Anthemidin(6.2mg)。
11α,13-dihydroyomogin
Anthemidin
Vulgarin和acetylartemisin:将所述Fr4.2组分(12g)进行色谱柱梯度洗脱(CHCl3/丙酮,100:1~6:4,v/v),得到6个组分,记为Fr4.2.1组分~Fr4.2.6组分。将所述Fr4.2.5组分(134mg)进行Sephadex LH-20凝胶层析分离(CHCl3/MeOH,1:1,v/v),得到Vulgarin (6mg)和Acetylartemisin (2.3mg)。
Vulgarin
Acetylartemisin
8α-acetoxy-1β-hydroxyeudesm-3-en-5α,6β,7α,11βH-12,6-olide:将Fr5组分(8.3g)进行MCI-gel色谱柱分级(30~100v/v%甲醇水溶液),得到8个组分,记为Fr5.1组分~Fr5.8组分。将所述Fr5.2组分(4.1g)进行RP-C18柱分离(梯度洗脱,MeOH/H2O,甲醇体积分数由20%增加到100%),得到10个亚组分,记为Fr5.2.1组分~Fr5.2.10组分。将所述Fr5.2.1组分(207mg)进行Sephadex LH-20凝胶层析(CHCl3:MeOH,1:1,v/v),得到8α-acetoxy- 1β-hydroxyeudesm-3-en-5α,6β,7α,11βH-12,6-olide(7.8mg)。
8α-acetoxy-1β-hydroxyeudesm-3-en-5α,6β,7α,11βH-12,6-olide
测试例1
实施例1~2制备的化合物对胰腺癌PANC-1细胞的肿瘤细胞毒活性:
1. 材料和方法
1.1 实验材料:PANC-1(人胰腺癌细胞);细胞培养于高糖DMEM完全培养基中,置于37℃、5% CO2的细胞培养箱,细胞贴壁后密度达到80~90%,胰酶消化传代。MTT溶液:将250mgMTT粉末溶解于50mL的PBS中,配置为5mg/mL的MTT溶液,待用。
1.2 实验步骤
1)对数生长期细胞接种于96孔培养板中,每孔接种5×103个细胞,细胞悬液体积为100μL,置于二氧化碳细胞培养箱中培养。
2)设紫杉醇组、待测样品组:①紫杉醇给药浓度:单浓度筛选为500nM;②待测样品最高给药浓度:单浓度筛选时为20μM。细胞贴壁后(悬浮细胞接种于96孔板中),分别加入100μL待测样品工作液,设空白对照组和阴性对照组;
3)给药处理48h后,每孔加入20μL 5mg/mL的MTT溶液,放入培养箱中孵育4h;移除孔中液体,每孔中加入150μL DMSO溶解,于酶标仪490nm波长下测定OD值;采用两点法(Reedand Muench法)、Graphpad Prism 9进行数据分析并作图。
2. 实验结果
图2为化合物Artemilavanin F及其桉烷型倍半萜类似物对胰腺癌PANC-1细胞的肿瘤细胞毒活性图,从图2可知,在胰腺癌PANC-1细胞中,与对照组相比较,实施例1~2制备的化合物处理组后,具有式I所示结构的化合物Artemilavanin F可明显抑制胰腺癌肿瘤细胞的增殖能力,对胰腺癌肿瘤细胞具有显著的抑制活性,而其他结构类似物均IC50>20µM,证明化合物Artemilavanin F的化学结构重排不仅是Artemilavanin F与其他桉烷型倍半萜类似物的结构上的重要区别,也是其具有抗肿瘤活性的关键。
测试例2
实施例1制备的化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞的肿瘤细胞毒活性:
2. 材料和方法
2.1 实验材料:AGS(人胃癌细胞);HCT-116(人结肠癌细胞);PANC-1(人胰腺癌细胞);细胞培养于高糖DMEM完全培养基中,置于37℃、5%CO2的细胞培养箱,细胞贴壁后密度达到80-90%,胰酶消化传代。MTT溶液:将250mg MTT粉末溶解于50mL的PBS中,配置为5mg/mL的MTT溶液,待用。
2.2 实验步骤
1)对数生长期细胞接种于96孔培养板中,每孔接种5×103个细胞,细胞悬液体积为100μL,置于二氧化碳细胞培养箱中培养。
2)设紫杉醇组、待测样品组:①紫杉醇给药浓度:最高浓度筛选为500nM,5倍梯度稀释;②待测样品最高给药浓度为50μM,5倍梯度稀释。细胞贴壁后(悬浮细胞接种于96孔板中),分别加入100μL待测样品工作液,设空白对照组和阴性对照组;
3)给药处理48h后,每孔加入20μL 5mg/mL的MTT溶液,放入培养箱中孵育4h;移除孔中液体,每孔中加入150μL DMSO溶解,于酶标仪490nm波长下测定OD值;采用两点法(Reedand Muench法)、Graphpad Prism 9进行数据分析并作图。
2. 实验结果
图3为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞的肿瘤细胞毒活性图,从图3可知,在胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞中,与对照组相比较,实施例1制备的化合物处理组后3种肿瘤细胞的增殖能力明显下降,对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞的半数抑制率(IC50)分别为23.58μM、15.31μM和7.30μM,且增殖抑制活性呈剂量依赖性,说明化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞均具有肿瘤细胞毒活性。
测试例3
实施例1制备的化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞克隆形成的抑制活性。
1. 材料和方法
1.1 实验材料:AGS(人胃癌细胞);HCT-116(人结肠癌细胞);PANC-1(人胰腺癌细胞),细胞培养于高糖DMEM完全培养基中,置于37℃、5%CO2的细胞培养箱,细胞贴壁后密度达到80-90%,胰酶消化传代。4%多聚甲醛固定液(武汉赛维尔生物科技有限公司),结晶紫(生工生物股份有限公司)。
1.2 实验步骤
1)将对数生长期的PANC-1细胞接种于6孔培养板中,每孔接种1000个,于二氧化碳细胞培养箱中培养。待细胞贴壁后,每孔分别加入0、0.625、1.25、2.5、5、10μM浓度的化合物Artemilavanin F处理细胞。处理24h后,去除含药培养基,更换2mL完全培养基继续培养。
2)细胞培养14d后,去除各孔培养基,用PBS润洗,后加入4%多聚甲醛固定液,静置30min。移除固定液,用PBS润洗后加入0.5%结晶紫染色液,静置15min。弃染液,缓慢冲洗去除多余染料。晾干并拍照,并使用Image J分析每孔形成的克隆数。
2. 实验结果
图4为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞克隆形成的抑制活性图,从图4可知,实施例1制备的化合物Artemilavanin F可有效地抑制胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞克隆形成,且在较低剂量下即可发挥抑制作用,在0.625~1.25μM的浓度下剂量下即可显著减少肿瘤细胞克隆形成数量,证明化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞均具有增殖抑制活性,可抑制以上消化道肿瘤的增殖和侵袭。
测试例4
实施例1制备的化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞周期的调控作用。
1. 材料和方法
1.1 实验材料:AGS(人胃癌细胞);HCT-116(人结肠癌细胞);PANC-1(人胰腺癌细胞),细胞培养于高糖DMEM完全培养基中,置于37℃、5%CO2的细胞培养箱,细胞贴壁后密度达到80-90%,胰酶消化传代。RNAse A(Beyotime);碘化丙啶(PI,生工工生物股份有限公司)
1.2 实验步骤
1)将对数生长期的AGS、HCT-116、PANC-1细胞接种于6孔培养板中,2.5×105个/孔,于二氧化碳细胞培养箱中培养,待细胞贴壁后,每孔分别加入0、2.5、5、10μM浓度的结构式I所示化合物处理细胞,并设置浓度为500nM的紫杉醇作为阳性对照组,继续于二氧化碳细胞培养箱中培养处理;
2)处理18h后,收集细胞沉淀,加入适量70%无水乙醇固定细胞,4℃固定30min后,1000rpm离心5min,移上清,加入500μL PBS,混匀后加入25μL 1mg/mL RNAse A,上下颠倒混匀后37℃孵育30min,后加入30μL 1mg/mL PI溶液,室温避光孵育20min后,流式细胞仪进行细胞周期检测。
2. 实验结果
图5为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS细胞周期的调控作用图,图6为化合物Artemilavanin F对结肠癌HCT-116细胞周期的调控作用图,图7为化合物Artemilavanin F对胰腺癌PANC-1细胞周期的调控作用图,从图5~7可知,化合物Artemilavanin F可有效地阻滞AGS、HCT-116、PANC-1细胞周期于G2/M期,与阴性对照组相比,当作用浓度为5 μM时,即具显著性差异,且呈剂量依赖性,证明实施例1制备的化合物可以调控AGS、HCT-116、PANC-1细胞周期,提示化合物Artemilavanin F可通过影响细胞周期以抑制以上消化道肿瘤细胞的增殖。
测试例5
实施例1制备的化合物Artemilavanin F对胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞凋亡的诱导作用。
1. 材料和方法
1.1 实验材料:AGS(人胃癌细胞);HCT-116(人结肠癌细胞);PANC-1(人胰腺癌细胞),细胞培养于高糖DMEM完全培养基中,置于37℃、5% CO2的细胞培养箱,细胞贴壁后密度达到80-90%,胰酶消化传代。Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(Proteintech)
1.2 实验步骤:
1)将对数生长期的AGS、HCT-116、PANC-1细胞接种于6孔培养板中,2.5×105个细胞/孔,于二氧化碳细胞培养箱中培养,细胞贴壁后,每孔分别加入0、2.5、5、10 μM浓度的结构式 (I) 所示化合物处理细胞,并设置浓度为500 nM的紫杉醇作为阳性对照组。
2)细胞处理24h后,收集细胞沉淀,每个处理孔细胞别加入200μL 1×BindingBuffer 重悬细胞,转移至流式管中,分别加入5μL Annexin V-FITC溶液和5μL PI溶液,混匀后室温避光孵育15min,流式细胞仪进行细胞凋亡检测。
2 实验结果
图8为化合物Artemilavanin F对胃癌AGS细胞凋亡的诱导活性图,图9为化合物Artemilavanin F对结肠癌HCT-116细胞凋亡的诱导活性图,图10为化合物ArtemilavaninF对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的诱导活性图,从图8~10可知,与阴性对照组相比,化合物Artemilavanin F可诱导AGS、HCT-116、PANC-1细凋亡率增加,且作用浓度在5 μM时就具有显著性差异,证明化合物Artemilavanin F可以诱导消化道肿瘤细胞AGS、HCT-116、PANC-1细胞发生凋亡,进而发挥杀伤肿瘤细胞的作用。
测试例6
实施例1制备的化合物Artemilavanin F抑制胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞迁移活性。
1. 材料和方法
1.1 实验材料:AGS(人胃癌细胞);HCT-116(人结肠癌细胞);PANC-1(人胰腺癌细胞),细胞培养于高糖DMEM完全培养基中,置于37℃、5% CO2的细胞培养箱,细胞贴壁后密度达到80-90%,胰酶消化传代。划痕插件(规格:2孔,ibidi)。
1.2 实验步骤
1)将划痕插件置于6孔培养皿中,标准划痕宽度为500 μM,配制1.25×105个/mL细胞混悬液,插件每孔接种100 μL 细胞混悬液,于二氧化碳细胞培养箱中培养过夜。待细胞贴壁后,用0、1.25、2.5、5、10 μM浓度的化合物Artemilavanin F处理细胞。
2)处理24h后,移除划痕插件,PBS润洗一次去除漂浮细胞,加入2mL完全培养基继续培养,并于0、24、48h在显微镜下观察划痕融合情况。拍照并采用Image J定量划痕宽度,GraphPad Prism 9作图并采用SPSS软件进行统计分析。
2 实验结果
图11为化合物Artemilavanin F抑制胃癌AGS细胞迁移活性图,图12为化合物Artemilavanin F抑制结肠癌HCT-116细胞迁移活性图,图13为化合物Artemilavanin F抑制胰腺癌PANC-1细胞迁移活性图,从图11~13可知,在24h时间点,胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞对照组划痕基本完全融合,而化合物Artemilavanin F处理组细胞划痕融合受到明显抑制,在48h时间点,10 μM化合物Artemilavanin F处理的胃癌AGS、结肠癌HCT-116、胰腺癌PANC-1细胞划痕仍不能完全融合,提示化合物Artemilavanin F可明显抑制肿瘤细胞迁移,具有抑制消化道肿瘤侵袭转移的活性。
应用例1
将实施例1制备的化合物Artemilavanin F与赋形剂按照质量比分别为1:5、1:5.5、1:6、1:6.5、1:7、1:7.5、1:8、1:8.5、1:9、1:9.5、1:10和3:1的比例混合均匀,制粒压片,得到药物组合物片剂。
其中,赋形剂包括粘合剂(聚维酮K30、微晶纤维素和褐藻酸钠中的一种或几种)、填充剂(无水乳糖、淀粉、葡萄糖和乳糖珠粒中的一种或几种)、崩解剂(羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和海藻酸钠中的一种或几种)和润滑剂(十二烷基硫酸镁和/或硬脂酸镁),黏合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂的质量比为1:0.5:0.4:0.06。
应用例2
将实施例1制备的化合物Artemilavanin F与赋形剂按照质量比为3:1的比例混合均匀,制成胶囊。
其中,赋形剂包括粘合剂(聚维酮K30、微晶纤维素和褐藻酸钠中的一种或几种)、填充剂(无水乳糖、淀粉、葡萄糖和乳糖珠粒中的一种或几种)、崩解剂(羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和海藻酸钠中的一种或几种)、润滑剂(十二烷基硫酸镁和/或硬脂酸镁)和湿润剂(蒸馏水),黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂和湿润剂的质量比为1:2:2:2:1。
应用例3
将实施例1制备的化合物Artemilavanin F与赋形剂按照质量比为3:1的比例混合均匀,制成颗粒剂。
其中,赋形剂包括粘合剂(聚维酮K30、微晶纤维素和褐藻酸钠中的一种或几种)、填充剂(无水乳糖、淀粉、葡萄糖和乳糖珠粒中的一种或几种)、崩解剂(羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和海藻酸钠中的一种或几种)和润滑剂(十二烷基硫酸镁和/或硬脂酸镁),黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂和湿润剂的质量比为1:0.25:1:0.8。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本发明实施例在不经创造性劳动前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物,具有式I所示的结构:
式I。
2.权利要求1所述四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物的制备方法,包括以下步骤:
利用乙醇水溶液对野艾蒿进行醇提,得到醇提物;所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40~100%;
将所述醇提物溶解于水中,进行乙酸乙酯提取,得到乙酸乙酯提取物;
将所述乙酸乙酯提取物进行第一硅胶柱层析,得到Fr2组分;所述第一硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-丙酮混合溶液,所述洗脱剂中石油醚和丙酮的体积比为9:1~5:5;
将所述Fr2组分进行MCI-gel色谱柱分级,得到Fr2.3组分;所述MCI-gel色谱柱分级采用的洗脱剂为40~100v/v%甲醇水溶液;
将所述Fr2.3组分进行第二硅胶柱层析,得到Fr2.3.3组分;所述第二硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为20:1~7:3;
将所述Fr2.3.3组分进行第三硅胶柱层析,得到Fr2.3.3.3组分;所述第三硅胶柱层析采用的洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯混合溶剂,所述洗脱剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为35:1~9:1;
将所述Fr2.3.3.3组分进行重结晶,得到四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述醇提的温度为20~80℃,所述醇提的次数为2~4次,单次醇提的时间为24~72h;
所述野艾蒿的干重与单次醇提用乙醇水溶液的体积比为1kg:2~5L。
4.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述乙酸乙酯提取的次数为2~4次;
所述醇提物的质量与单次提取用乙酸乙酯的体积之比为1kg:4~10L。
5.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述第一硅胶柱层析为梯度洗脱,所述梯度洗脱过程中石油醚和丙酮的体积比依次为9:1、8:2、7:3、6:4和5:5。
6.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述重结晶采用的溶剂包括甲醇。
7.一种药物组合物,其特征在于,包括活性组分以及药学上可接受的载体和/或辅料;所述活性组分为权利要求1所述的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物或权利要求2~6任一项所述制备方法制得的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物。
8.根据权利要求7所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物的剂型包括注射剂、片剂、胶囊、丸剂或颗粒剂。
9.权利要求1所述的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物、权利要求2~6任一项所述制备方法制得的四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物或权利要求7~8任一项所述药物组合物在制备预防肿瘤的药物或治疗肿瘤的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述肿瘤包括消化道肿瘤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311211532.5A CN116947794B (zh) | 2023-09-20 | 2023-09-20 | 一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311211532.5A CN116947794B (zh) | 2023-09-20 | 2023-09-20 | 一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116947794A true CN116947794A (zh) | 2023-10-27 |
CN116947794B CN116947794B (zh) | 2023-11-28 |
Family
ID=88454958
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202311211532.5A Active CN116947794B (zh) | 2023-09-20 | 2023-09-20 | 一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116947794B (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103570545A (zh) * | 2013-09-17 | 2014-02-12 | 南京师范大学 | 一种从野艾蒿中制备咖啡酰奎尼酸的方法 |
CN103848843A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-11 | 贵州大学 | 魁蒿有效成分提取方法及该成分在抗植物病害中的应用 |
CN111635380A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 野艾蒿中倍半萜及其药物组合物与其制备方法和应用 |
CN112034084A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-04 | 暨南大学 | 艾油中挥发性成分的检测方法及其应用 |
CN113143913A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-07-23 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种桉烷型倍半萜类化合物在制备抗胰腺癌药物中的应用 |
CN114788822A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-07-26 | 云南中医药大学 | 野黄芩素在制备治疗胰腺癌药物中的应用 |
WO2023125956A1 (zh) * | 2021-12-30 | 2023-07-06 | 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 | 重组黄花蒿花粉i型变应原及其制备方法和应用 |
-
2023
- 2023-09-20 CN CN202311211532.5A patent/CN116947794B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103570545A (zh) * | 2013-09-17 | 2014-02-12 | 南京师范大学 | 一种从野艾蒿中制备咖啡酰奎尼酸的方法 |
CN103848843A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-11 | 贵州大学 | 魁蒿有效成分提取方法及该成分在抗植物病害中的应用 |
CN111635380A (zh) * | 2020-06-17 | 2020-09-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 野艾蒿中倍半萜及其药物组合物与其制备方法和应用 |
CN112034084A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-04 | 暨南大学 | 艾油中挥发性成分的检测方法及其应用 |
CN113143913A (zh) * | 2021-04-28 | 2021-07-23 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种桉烷型倍半萜类化合物在制备抗胰腺癌药物中的应用 |
WO2023125956A1 (zh) * | 2021-12-30 | 2023-07-06 | 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 | 重组黄花蒿花粉i型变应原及其制备方法和应用 |
CN114788822A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-07-26 | 云南中医药大学 | 野黄芩素在制备治疗胰腺癌药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
J JAKUPOVIC, ET AL: ""LUMIYOMOGIN, FERREYRANTHOLIDE, FRUTICOLIDE AND OTHER SESQUITERPENE LACTONES FROM FERREYRANTHUS FRUTZCOSUS "", 《PHYTOCHEMUSTRY》, vol. 27, no. 4, pages 1113 - 1120, XP026633819, DOI: 10.1016/0031-9422(88)80285-1 * |
丁林芬,等。: ""野艾蒿中 1个新的倍半萜"", 《中草药》, vol. 49, no. 9, pages 1995 - 1999 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116947794B (zh) | 2023-11-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
WO2015090180A1 (zh) | 一种三七花阿拉伯半乳聚糖及其制备方法和用途 | |
US20190322638A1 (en) | Dipyridyl alkaloid, preparation method therefor and use thereof | |
CN113150049B (zh) | 青钱柳的提取物及其抗痛风和降尿酸应用 | |
WO2021164155A1 (zh) | 一种隐丹参酮衍生物及其制备方法与在抗神经炎症和神经保护中的应用 | |
CN110563679B (zh) | 一种倍半萜内酯类化合物及其制备方法和在制备防治鼻咽癌的药物中的应用 | |
CN115894418B (zh) | 蒙古蒿内酯a-f及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN116947794B (zh) | 一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 | |
CN107674054B (zh) | 一类新骨架杂萜化合物,其制备方法、药物组合物和抗肿瘤应用 | |
CN109419787B (zh) | 一种松香烷型二萜类化合物的用途 | |
CN106928299B (zh) | 一类来源于地骨皮的化合物,其制法及在降糖方面的应用 | |
CN113262229B (zh) | 诸葛菜碱d在制备抗辐射损伤的药物中的应用 | |
CN111646965B (zh) | 一种化合物Sinkiangenol E及其在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN108948040B (zh) | 一种烟管头草中提取的吉玛烷型倍半萜化合物及其应用 | |
CN108358947B (zh) | 一种笼状呫吨酮类化合物及其制备方法和用途 | |
CN116478176B (zh) | 蒙古蒿素a–k及其药物组合物和其制备方法与应用 | |
CN113278025B (zh) | 一类新骨架二萜二聚体化合物及其制备方法、药物组合物和应用 | |
CN108997473A (zh) | 一种非海参烷型海参皂苷及其制备方法与应用 | |
CN111494397B (zh) | 麦冬皂苷类化合物在制备预防和治疗肿瘤的药物中的用途 | |
CN111991410B (zh) | 洋橄榄叶素衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用 | |
CN108159041B (zh) | 一种占吨酮类化合物c的药物用途 | |
CN114853712B (zh) | 一种色烷型或色烯型杂萜类化合物及其提取方法和应用 | |
CN113321631B (zh) | 双穿心莲内酯g及其制备方法和在药物上的应用 | |
CN114288342B (zh) | 胆木提取物在制备抑制肺通透性增加和/或肺损伤的药物中的应用 | |
CN115991649A (zh) | 一种制备乙酰阿卡宁的方法及作为抗肿瘤转移药物的应用 | |
CN116410201A (zh) | 一种从黑桑植物中提取的黄酮类化合物及其制备方法与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |