CN111943914B - 一种具有抗炎活性的化合物及其应用 - Google Patents

一种具有抗炎活性的化合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种在青蒿中发现的新化学成分。本发明还通过理化性质和现代波谱学手段，对分离得到的化合物进行了结构鉴定。本发明还运用LPS诱导RAW 264.7细胞炎症模型的活性筛选体系进行对其进行活性评价，发现该化合物对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7有一定的保护作用，显示出较强的抗炎作用。

Description

一种具有抗炎活性的化合物及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种具有抗炎活性的化合物及其应用。
背景技术
青蒿为菊科植物黄花蒿(Artemisia annua L.)的干燥地上部分，秋季花盛开时采割，除去老茎，阴干。味苦性辛寒，归肝、胆经，具有清虚热、除骨蒸、解暑热、截拒、退黄等作用。用于温邪伤阴、夜热早凉、阴虚发热、骨蒸劳热、暑邪发热、疟疾寒热、湿热黄疸。
临床治疗中抗炎药物是仅次于抗感染药物的第二大类药物,其中包括甾体类抗炎药物(SAID)与非甾体类抗炎药物(NSAID)。但是由于许多合成药物有较强的毒副反应，人们愈来愈重视从天然药物中开发抗炎药物。
发明内容
本发明旨在对青蒿抗炎活性新成分进行更深入的研究，发现其发挥抗炎作用的活性成分，并进一步提出具有抗炎活性的化合物及其应用。
本发明提出了一种具有抗炎活性的式I化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，其特征在于，式I结构如下：
其中，‘C-3和‘C-4中至少一者被R1取代，R1选自CHO、COOR001或可选被R01取代的CH3或＝CH；R01选自OR001、SR001或NR001；其中，R001选自H、可选被取代的C1-10烃基或杂烃基、可选被取代的C3-10环烃基或杂环烃基、可选被取代的C6-C20芳基或可选被取代的5-12元杂芳基；R001上的取代基选自但不限于H、F、Cl、Br、I、OH、SH、NH2、CHO、COOH或酯、＝O、＝S、＝NH；
‘C-1、‘C-9和‘C-10中至少一者被R2取代，R2选自CHO、COOR001或可选被R01取代的CH3或＝CH；R01选自OR001、SR001或NR001；其中，R001选自H、可选被取代的C1-10烃基或杂烃基、可选被取代的C3-10环烃基或杂环烃基、可选被取代的C6-C20芳基或可选被取代的5-12元杂芳基；R001上的取代基选自但不限于H、F、Cl、Br、I、OH、SH、NH2、CHO、COOH或酯、＝O、＝S、＝NH；
‘C-6和‘C-7中至少一者被R3取代，R3选自RaC(Rb)Rc，其中，Ra选自CHO、COOR001或可选被R01取代的CH3或＝CH；R01选自OR001、SR001或NR001；其中，R001选自H、可选被取代的C1-10烃基或杂烃基、可选被取代的C3-10环烃基或杂环烃基、可选被取代的C6-C20芳基或可选被取代的5-12元杂芳基；R001上的取代基选自但不限于H、F、Cl、Br、I、OH、SH、NH2、CHO、COOH或酯、＝O、＝S、＝NH；当Ra并非＝CH时，Rb选自H、F、Cl、Br、I、OH、SH或NH2；Rc选自COOR001，R001如前述定义；
式I环上任一相邻两个C之间选自单键或双键；式I环上未被R1、R2和R3取代的任一位置可选地被包括但不限于H、F、Cl、Br、I、OH、SH、NH2、＝O、＝S、＝NH等取代基所取代；当环上取代基以及Rb选自OH或SH时，OH或SH可选地键合形成3～6元环醚；当RC选自羧基时，该羧基可选地和式I环上的OH取代基形成5～6元内酯。
进一步地，对于上述化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，‘C-3和‘C-4中，仅‘C-3被R1取代；‘C-1、‘C-9和‘C-10中，仅‘C-9被R2取代；‘C-6和‘C-7中，仅‘C-6被R3取代；或者，‘C-3和‘C-4中，仅‘C-4被R1取代；‘C-1、‘C-9和‘C-10中，仅‘C-1被R2取代；‘C-6和‘C-7中，仅‘C-7被R3取代。
进一步地，对于上述化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，R001选自H、可选被取代的C1-3烃基或杂烃基、可选被取代的C3-6环烃基或杂环烃基、可选被取代的C6芳基或可选被取代的C5-6元杂芳基。
优选地，对于上述化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，R001选自H。
进一步地，对于上述化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，当Ra非＝CH时，Rb选自H或OH；式I环上未被R1、R2和R3取代的任一位置可选地被H、OH或＝O取代。
优选地，式I化合物选自如下化合物1-12任一种：
更优选地，式I化合物选自：化合物3、4、7、8、11或12。
本发明还提出了包括上述任一化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐的抗炎药物。
本发明还提出了上述任一化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐在制备抗炎药物中的应用。
本发明中，所述药学上可接受的盐包括但不限于化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1-99％，优选为0.5-90％的本发明化合物，其余为其它抗炎药物或者药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型、如液体制剂(注射剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂等)、固体制剂(片剂、胶囊剂、颗粒剂，冲剂等)、喷剂、气雾剂等。本发明的药物可经注射(静脉注射、静脉滴注、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射)和口服、舌下给药、粘膜透析等给药途径进行抗炎的治疗。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本发明研究人员基于对青蒿中化学成分的研究，通过理化性质和现代波谱学手段(如CD、MS、1H-NMR、13C-NMR等等)，对上述方法分离得到的化合物进行了结构鉴定。本发明还运用LPS诱导RAW 264.7细胞炎症模型等活性筛选体系进行活性评价，发现这些化合物对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7有一定的保护作用，显示出较强的抗炎作用，因此本发明为新颖的天然抗炎药物的开发提供了新的选择。
附图说明
图1为化合物1的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图(Key 1H-1H COSYHMBC/>and NOESY/>correlations)。
图2为化合物1的单晶衍射(X-ray crystallographic analysis)图。
图3为化合物2的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图4为化合物2的低能量构象图(The 7 lowest energy conformers of(1S,6S,7R,10R)-8(the relative populations are in parentheses))。
图5为化合物2的ECD图(Experimental ECD spectrum of 2,and calculated ECDspectra of(1S,6S,7R,10R)-2 and(1R,6R,7S,10S)-2)。
图6为化合物3的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图7为化合物3的低能量构象图。
图8为化合物3的ECD图。
图9为化合物4的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图10为化合物4的低能量构象图。
图11为化合物4的ECD图。
图12为化合物5的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图13为化合物5的单晶衍射图。
图14为化合物6的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图15为化合物6的单晶衍射图。
图16为化合物7的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图17为化合物7的低能量构象图。
图18为化合物7的ECD图。
图19为化合物8的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图20为化合物8的低能量构象图。
图21为化合物8的ECD图。
图22为化合物9的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图23为化合物9的低能量构象和ECD图。
图24为化合物10的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图25为化合物10的低能量构象图。
图26为化合物10的ECD图。
图27为化合物11的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图28为化合物11的低能量构象图。
图29为化合物11的ECD图。
图30为化合物12的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图31为化合物12的低能量构象图。
图32为化合物12的ECD图。
图33为化合物13的1H-1H COSYHMBC/>或NOESY/>图。
图34为化合物13的ECD图。
具体实施方式
下面用本发明实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明：
如本文所用，术语“包含”、“包括”、“含有”可互换使用，不仅包括封闭式定义，还包括半封闭、和开放式的定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
如本文所用，例如术语“C1-C10烃基”或“C1-C6烃基”或“C2-C6烃基”指具有1-10或1-6或2-10个碳原子的直链或支链烷基、烯烃基或炔烃基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基，乙烯基、(CH2＝CH-)、(C(CH3)2＝CH-)、或类似基团。
如本文所用，术语“C6-C20芳基”或“C6-C10芳基”指具有6-20或6-10个碳原子的芳香结构环状基团，例如苯基、萘基，或类似基团。
如本文所用，术语或“5-12元杂芳基”指具有5-12元的单环或稠合多环且环系上具有N、O或S的具有芳香性的基团，例如吡咯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、喹啉基，或类似基团。
如本文所用，“本发明化合物”、或“式I化合物”可互换使用，是指式I化合物、或其光学异构体、或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐。应理解，该术语还包括上述组分的混合物，在式I化合物中，如果存在手性碳原子，则手性碳原子可以为R构型，也可以为S构型，或二者的混合物。
实施例1化合物的提取和分离纯化
青蒿(Artemisia annua L.)干燥地上部分100Kg，经3倍量水热回流提取2次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂至原体积的十分之一，加入95％乙醇直至醇浓度达到80％，静置过夜，收集上清液减压浓缩得总浸膏(AA)5.2Kg。
将总浸膏(5.0Kg)经大孔吸附树脂HP-20进行粗分离，依次用水、50％乙醇、95％乙醇进行梯度洗脱，合并洗脱液并减压浓缩得到水洗脱部位(AA-1)3.2Kg，50％乙醇洗脱部位(AA-2)1.4Kg，以及95％乙醇部位(AA-3)240g。
选定活性部位AA-3为研究对象。AA-3经硅胶柱色谱分离，用环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱(98:2,95:5,90:10,85:15,80:20,70:30,60:40,50:50到0:100,v/v；每个梯度均为4个柱体积，下同)，收集得到Fr.3.1-3.10共10个馏分。
Fr.3.3(15.8g)经硅胶柱色谱分离(SiO2，200–300mesh，150g，φ4.2×27.0cm)，二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(98:2,95:5,93:7,9:1和0:100,v/v)得到8个馏分(Fr.3.3.1–3.3.8)。Fr.3.3.4(3.1g)进一步经过ODS柱色谱分离(φ2.2×27.0cm)，甲醇-水梯度洗脱(4:6,6:4,8:2和100:0,v/v)得到6子馏分(Fr.3.3.1.1–3.3.1.6)。Fr.3.3.4.4(0.8g)进一步通过半制备液相(28％MeCN–H2O)得到化合物2(9.2mg,tR＝28.2min,3mL/min)。
Fr.3.3.4.5(0.8g)通过半制备液相(32％MeCN–H2O)得到化合物7(22.3mg,tR＝24.8min,3mL/min)。
Fr.3.4(16.0g)进一步通过ODS柱色谱(φ3.6×72.0cm)甲醇-水梯度洗脱(35:65,40:60,50:50,60:40,75:25和90:10,v/v)得到20个子馏分(Fr.3.4.1–3.4.20)。Fr.3.4.4.(192.6mg)通过半制备液相(35％MeCN–H2O)得到化合物9(9.2mg,tR＝31.6min,3mL/min)。
Fr.3.3.6(1.3g)通过ODS柱色谱(φ2.2×24.0cm)甲醇-水梯度洗脱(3:7,4:6,6:4,7:3和100:0,v/v)得到11个子馏分(Fr.3.3.6.1–3.3.6.11).Fr.3.3.6.4(92.3mg)通过半制备液相(32％MeCN–H2O)得到化合物1(9.2mg,tR＝27.8min,3mL/min).Fr.3.3.6.5(92.3mg)通过半制备液相(32％MeCN–H2O)得到化合物8(7.2mg,tR＝33.2min,3mL/min)和化合物11(5.7mg,tR＝35.2min,3mL/min)。
Fr.3.3.7(2.2g)Fr.3.3.6(1.3g)通过ODS柱色谱(φ2.2×24.0cm)甲醇-水梯度洗脱(3:7,4:6,6:4,7:3and 100:0,v/v)得到14个子馏分(Fr.3.3.7.1–3.3.7.14)。Fr.3.3.7.4(392.3mg)通过半制备液相(28％MeCN–H2O)得到化合物12(9.3mg,tR＝36.2min,8mL/min),3(9.3mg,tR＝37.3min,8mL/min),13(9.3mg,tR＝38.2min,8mL/min)。
Fr.3.3.7.7(106.3mg)通过半制备液相(33％MeCN–H2O)得到化合物6(8.3mg,tR＝25.6min,3mL/min)。
Fr.3.4(16.0g)通过ODS柱色谱(φ3.6×72.0cm)，甲醇-水梯度洗脱(35:65,40:60,50:50,60:40,75:25和90:10,v/v)得到20个馏分(Fr.3.4.1–3.4.20)。Fr.3.4.6(128.5mg)通过半制备液相(30％MeCN–H2O)得到化合物5(8.3mg,tR＝30.9min,3mL/min)。
Fr.3.5(13.5g)进一步通过ODS柱色谱(φ3.6×60.0cm)，甲醇-水梯度洗脱(30:60,40:60,50:50,60:40,80:20和90:10,v/v)得到10个子馏分(Fr.3.5.1–3.5.10)。Fr.3.5.2(168.5mg)进一步通过半制备液相(28％MeCN–H2O)得到化合物4(15.2mg,tR＝31.8min,3mL/min)。
Fr.3.6(15.8g)进一步通过硅胶柱色谱(SiO2,200–300mesh,300g,φ4.2×27.0cm)二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(100:0,98:2,95:5,93:7,9:1和0:100,v/v)得到10个馏分(Fr.3.6.1-Fr.3.6.10)。Fr.3.6.3(68.3mg)通过半制备液相(32％CH3CN–H2O)得到化合物10(6.6mg,tR＝30.5min,3mL/min)。
实施例2化合物的结构鉴定
化合物1:Arteannoide F
化合物1，无色针状晶体，90％甲醇-水中缓慢结晶。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 249.1486[M+H]+(calcd 249.1491)，确定分子式为C15H20O3，计算不饱和度为6。UV(MeOH)光谱在λmax 210(4.88)给出最大吸收带，可归属于碳碳双键的π→π*电子跃迁。IR光谱提示有羧酸羰基(1708cm-1)的特征峰存在。
化合物1的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.44(1H,s,H-13a),δH 5.56(1H,s,H-13b),δH 4.89(1H,s,H-5)的烯氢信号，以及δH 1.74(3H,s,H3-15),δH 1.21(3H,s,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)谱结合DEPT-135谱(表1)，显示了15个碳信号，包括4个季碳信号(δC 81.8,142.1,144.5,171.8),5个次甲基碳信号(δC 40.0,41.4,43.5,76.0,120.1)，4个亚甲基碳信号(δC 21.5,35.9,36.0,127.1)以及2个甲基碳信号(δC21.4,30.0)。
在1H-1H COSY谱(图1)中，H-3/H-2a/H-1/H-6/H-5,H-6/H-7/H2-8/H2-9有相关，推测结构中含有C5结构单元(C-3-C-2-C-1-C-6-C-5)以及C4结构单元(C-6-C-7-C-8-C-9)；HMBC谱(图1)中，H-3与C-5，H-2与C-6，H-5与C-1/C-7，H-7与C-1，H-8与C-6以及H-9与C-7有相关，证实了以上推测的合理性。HMBC谱中H3-15与C-3/C-4/C-5，H-2/H-6与C-4，H-3与C-1，H-5与C-3以及H-6与C-4有相关，表明结构中存在一个环外甲基并通过C-4与C-3和C-5相连；H3-14与C-1/C-9/C-10以及H-6/H-8与C-10有相关，表明结构中存在另一个环外甲基并通过C-10与C-1和C-9相连；H2-13与C-7/C-11/C-12有相关，表明一个α-亚甲基-γ-羧酸片段连接在C-7位；另外结合化合物的分子式和不饱和度，以及C-3(76.0)、C-10(81.8)的化学位移值推测结构中含有呋喃环结构片段；这样确定了化合物1的平面结构。
在NOESY谱中，可以看到H-1与H-7/H3-14,H-3与H3-14有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同侧(图1)；H-6的取向是根据X-ray单晶衍射方法(图3)确定的，与H-1/H-3/H-7/H-14位于同一面。
化合物1的绝对构型是通过X-ray单晶衍射方法确定的(图2)。在X-ray单晶衍射测试中采用Cu Kα辐射，经计算单晶分析Flack常数为0.10(11)，确定其绝对构型为1R,3S,6R,7R,10S。
综合以上分析结果并结合HSQC和HMBC谱，将化合物1的所有碳氢信号进行了准确的归属(表1)。将该新化合物，命名为arteannoide F。
表1 NMR data of 1 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物2:Arteannoide G
化合物2，无色粉末状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 251.1638[M+H]+(calcd 251.1647)，确定分子式为C15H22O3，计算不饱和度为5。UV(MeOH)光谱在λmax 206(4.89)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羰基(1684cm-1)的特征峰存在。
化合物2的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.47(1H,s,H-13a),δH 5.58(1H,s,H-13b),δH 5.30(1H,s,H-5)的烯氢信号，以及δH 0.91(3H,d,J＝6.4Hz,H3-14)的甲基质子信号和δH 3.95(2H,q,J＝12.6,H2-15)的羟甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括3个季碳信号(δC 138.6,142.4,171.7)，5个次甲基碳信号(δC 27.8,37.9,41.6,42.0,122.3)，6个亚甲基碳信号(δC 22.0,25.3,26.2,35.2,67.8,127.0)以及1个甲基碳信号(δC 19.8)(表2)。
在1H-1H COSY谱中(图3)，H-1/H-10/H2-9/H2-8/H-7/H-6/H-1顺次相关，结合HMBC谱中(图3)H-1与C-7/C-9，H-10与C-6/C-8，H2-9与C-1/C-7，H2-8与C-6/C-10，H-7与C-1/C-9，H-6与C-8/C-10有相关，推测结构中含有六元环骨架片段C-1-C-10-C-9-C-8-C-7-C-6-C-1；1H-1H COSY谱中H2-3/H2-2/H-1有相关，H-5/H-6有相关，结合HMBC相关H2-2与C-4，H2-3与C-4/C-5，H-5与C-1/C-7，推测结构中存在另外一个六元环骨架片段(C-1-C-6-C-5-C-4-C-3-C-2-C-1)。此外，H3-14与H-10的COSY相关，结合H3-14与C-1/C-9/C-10的HMBC相关，确定甲基CH3-14通过C-10连接于六元环；HMBC谱中H2-13与C-7/C-11/C-12有相关，表明一个α-亚甲基-γ-羧酸片段连接在C-7位；H2-15与C-3/C-4/C-5的HMBC相关，表明羟甲基C-15取代在C-4位。这样确定了化合物2的平面结构。
在NOESY谱中(图3)，可以看到H-1与H-7/H3-14，H-6与H-10/H-13b有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同一面，而H-6、H-10和H-13b位于相反的一面，故而根据NOESY可以得到化合物2的相对构型为(1S*,6S*,7R*,10R*)-8。
化合物2的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物2实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,6S,7R,10R)-8构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,6S,7R,10R构型(图4和图5)。将该新化合物命名为arteannoide G。其核磁数据归属见表2。
表2 NMR data of 2 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物3:Arteannoide H
化合物3，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 231.1382[M+H]+(calcd231.1385)，确定分子式为C15H18O2，计算不饱和度为7。UV(MeOH)光谱在λmax 206(4.89),220(sh,4.65),276(3.66)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羰基(1693cm-1)的特征峰存在。
化合物3的1H-NMR(600MHz,in CD3OD)中给出[δH 7.10(1H,d,J＝7.9Hz,H-2),δH6.99(1H,d,J＝7.9Hz,H-3),δH 6.80(1H,brs,H-5)]的氢信号，提示结构中含有一个1,2,4-三取代苯环以及δH 6.46(1H,d,J＝1.1Hz,H-13a),δH 5.16(1H,brs,H-13b)的烯氢信号，以及δH 1.27(3H,d,J＝7.1Hz,H3-14),δH 2.27(3H,s,H3-15)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CD3OD)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括5个季碳信号(δC135.2,136.8,140.1,145.2,172.3)，5个次甲基碳信号(δC 31.8,40.3,127.4,128.5,130.4)，3个亚甲基碳信号(δC 24.5,26.6,129.9)以及2个甲基碳信号(δC 21.0,23.6)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表3。
综合分析1D和2D核磁图谱，推测化合物3结构，HMBC谱中(图6)H2-13与C-7/C-11/C-12有相关表明一个α-亚甲基-γ-羧酸片段连接在C-7位。这样确定了化合物3的平面结构。
在NOESY谱中(图6)，可以看到H-9a与H-13b，H-9b与H3-14，有相关，表明H-13b与H3-14位于异面，故而根据NOESY可以得到化合物3的相对构型为(7R*,10R*)-23。
化合物3的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物3实验所测得的CD谱与计算得到的(7R,10R)-23构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为7R,10R构型(图7和图8)。将该新化合物命名为arteannoide H。其核磁数据归属见表3。
表3 NMR data of 3 in CD3OD(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物4:Arteannoide I
化合物4，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 249.1489[M+H]+(calcd249.1491)，确定分子式为C15H20O3，计算不饱和度为6。UV(MeOH)光谱在λmax 204(4.48),246(4.56)nm给出最大吸收带。IR光谱给出2955,2923,2865,2361,1703,1664,1372cm-1的特征峰。
化合物4的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.68(1H,brs,H-5),6.39(1H,brs,H-13a),5.64(1H,brs,H-13b)的烯氢信号，以及δH 2.24(3H,s,H3-15),0.90(3H,d,J＝6.5,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括4个季碳信号(δC 143.4,146.2,171.8,197.6)，5个次甲基碳信号(δC36.0,42.0,55.3,55.4,146.2)，4个亚甲基碳信号(δC 34.0,34.4,35.7,126.0)以及2个甲基碳信号(δC20.1,26.2)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表4。
综合2D NMR(1H-1H COSY,HSQC和HMBC)图谱信息，确定了化合物4的平面结构。在NOESY谱中，可以看到H-1与H3-14，H-1与H-7，H-6与H-10有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同一面，H-6和H-10位于相反的一面，故而根据NOESY可以得到化合物4的相对构型为(1S*,6S*,7R*,10R*)-11。
化合物4的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物4实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,6S,7R,10R)-4构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,6S,7R,10R构型(图10和图11)。将该新化合物命名为arteannoide I。其核磁数据归属见表4。
表4 NMR data of 4 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物5:Arteannoide J
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化合物5，无色针状晶体，90％甲醇-水中缓慢结晶。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 251.1644[M+H]+(calcd 251.1647)，确定分子式为C15H22O3，计算不饱和度为5。UV(MeOH)光谱在λmax 207(4.82),282(sh,3.67)给出最大吸收带，可归属于碳碳双键的π→π*电子跃迁和羧酸羰基的n→π*电子跃迁。IR光谱提示有羧酸羰基(1717cm-1)的特征峰存在。
化合物5的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 4.83(1H,s,H-15a),δH 4.66(1H,s,H-15b)的烯氢信号，以及δH 1.47(3H,s,H3-13),δH 0.85(3H,d,J＝6.5Hz,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱(表5)，显示了15个碳信号，包括3个季碳信号(δC 87.4,148.1,176.2),5个次甲基碳信号(δC 28.6,41.5,46.7,49.0,79.3)，5个亚甲基碳信号(δC 23.9,29.0,29.6,34.3,101.8)以及2个甲基碳信号(δC 20.0,26.2)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表5。
在1H-1H COSY谱(图12)中，H2-3/H2-2/H-1/H-6/H-5,H-6/H-7/H2-8,H-8b/H2-9/H-10/H3-14以及H1/H10有相关，推测结构中含有六元环C6结构单元(C-1-C-6-C-7-C-8-C-9-C-10-C-1)；通过C1、C6连接于六元环的C5结构单元(C-3-C-2-C-1-C-6-C-5)；HMBC谱(图12)中，H3-14与C-1/C-9/C-10相关，H2-15与C-3/C-4/C-5，表明结构中CH3-14取代在C-10位，环外亚甲基CH2-15通过C-4与C-3和C-5相连。此外，H3-13与C-7/C-11/C-12有相关，表明一个α-甲基-γ-羧酸片段连接在C-7位；结合化合物的分子式和不饱和度，以及C-5(79.3)、C-11(87.4)的化学位移值，推测结构C-5和C-11通过氧原子相连，与C-6和C-7形成含有呋喃环的结构片段；这样确定了化合物5的平面结构。
在NOESY谱中，可以看到H-5与H-10有相关，H-1与H-7/H3-14有相关，表明H-1、H-7和H-14位于同一面，而H-5和H-10位于同一面，结合X-ray单晶衍射分析得到了化合物5的相对构型(图12)。
化合物5的绝对构型是通过X-ray单晶衍射方法确定的(图13)。在X-ray单晶衍射测试中采用Cu Kα辐射，经计算单晶分析Flack常数为0.04(6)，确定其绝对构型为1S,5S,6S,7R,10R,11S。
综合以上分析结果并结合HSQC和HMBC谱，将化合物5的所有碳氢信号进行了准确的归属(表5)。将该新化合物命名为arteannoide J。
表5 NMR data of 5 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物6:Arteannoide K
化合物6，无色块状结晶，90％甲醇-水中缓慢结晶。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 259.0978[M-H]-(calcd 259.0970)，确定分子式为C15H16O4，计算不饱和度为8。UV(MeOH)光谱在λmax 208(4.78),241(4.13)给出最大吸收带，可归属于苯环的π→π*电子跃迁。IR光谱提示有羧酸羰基(1673cm-1)和芳香环骨架(1624,1512和1404cm-1)的特征峰存在。
化合物6的1H-NMR(600MHz,in CD3OD)中给出δH 7.60(1H,d,J＝7.8Hz,H-2),δH7.04(1H,d,J＝7.8,H-3),δH 6.28(1H,s,H-13α),δH 5.64(1H,s,H-13β)的烯氢信号，以及δH2.25(1H,s,H3-15)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CD3OD)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括4个仲碳信号(δC 123.7,34.6,29.6,29.2)，3个叔碳信号(δC129.0,128.0,36.6)，1个甲基碳信号(δC 20.2)以及7个季碳信号(δC 172.1,170.6,147.1,142.0,138.5,137.0,129.9)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表6。
在1H-1H COSY谱中(图14)，H2-6/H-7/H2-8/H2-9有相关，结合HSQC谱，推测结构中含有C4结构单元(C-6-C-7-C-8-C-9)；以及H-2与H-3有相关。
HMBC谱中(图14)H-2与C-4/C-10，H-3与C-1/C-5有相关，结合1H-1H COSY谱H-2与H-3有相关，表明结构中存在一个苯环结构片段(C-1-C-2-C-3-C-4-C-5-C-10)；同时H-2与C-14，H-3与C-15，H3-15与C-3/C-4/C-5，表明C-14通过C-1，C-15取代在C-4位上；H-6与C-4，H-7与C-5，H-8与C-10，H-9与C-1有相关，表明C4结构单元(C-6-C-7-C-8-C-9)通过C-5和C-10连接于苯环片段；H2-13与C-7/C-11/C-12有相关，表明一个α-亚甲基-γ-羧酸片段连接在C-4位。
化合物6的绝对构型是通过X-ray单晶衍射方法确定的(图15)。在X-ray单晶衍射测试中采用Cu Kα辐射，经计算单晶分析Flack常数为-0.03(14)，确定其绝对构型为7R。
综合以上分析结果并结合HSQC和HMBC谱，将化合物6的所有碳氢信号进行了准确的归属(表6)。将该新化合物命名为arteannoide K。
表6 NMR data of 6 in CD3OD(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物7:Arteannoide L
化合物7，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 251.1651[M+H]+(calcd251.1647)，确定分子式为C15H22O3，计算不饱和度为5。UV(MeOH)光谱在λmax 208(4.78),247(4.35)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羟基(3490cm-1)和羰基(1697cm-1)的特征峰存在。
化合物7的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.48(1H,d,J＝1.1Hz,H-13a),δH5.87(1H,t,J＝1.2Hz,H-13b),δH 4.71(1H,t,J＝1.8Hz,H-15a),δH 4.65(1H,t,J＝1.8Hz,H-15b)的烯氢信号，以及δH 0.88(3H,d,J＝6.6Hz,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括3个季碳信号(δC142.6,151.8,172.2)，5个次甲基碳信号(δC 29.6,42.4,43.2,43.4,75.1)，6个亚甲基碳信号(δC25.7,27.5,29.5,36.0,109.1,126.8)以及1个甲基碳信号(δC 20.9)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表7。
1H-1H COSY谱结合HMBC谱(图16)，推测结构中含有六元环骨架片段C-1-C-10-C-9-C-8-C-7-C-6-C-1；1H-1H COSY谱中H3-14与H-10有相关，H3-14与C-1/C-9/C-10，表明甲基C-14通过C-10连接于六元环；HMBC谱中H3-13与C-7/C-11/C-12有相关表明一个α-亚甲基-γ-羧酸片段连接在C-7位。
HMBC谱中H2-2与C-4，H-3与C-4/C-5，H-5与C-1/C-7，H-6与C-4/C-5，结合1H-1HCOSY谱中H-5与H-6有相关，推测结构中存在另外一个六元环骨架片段(C-1-C-6-C-5-C-4-C-3-C-2-C-1)；同时H-3/H-5与C-15，H2-15与C-3/C-4/C-5有相关；表明甲基C-15通过C-4连接与六元环片段。这样确定了化合物7的平面结构。
在NOESY谱中(图16)，可以看到H-1与H3-14，H-1与H-7，H-6与H-10，H-5与H-13b有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同一面，而H-5、H-6、H-10位于相反的一面，故而根据NOESY可以得到化合物7的相对构型为(1S*,5S*,6R*,7R*,10R*)-7。
化合物7的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物7实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,5S,6R,7R,10R)-7构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,5S,6R,7R,10R构型(图17,图18)。将该新化合物命名为arteannoide L。其核磁数据归属见表7。
表7 NMR data of 7 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物8:Arteannoide M
化合物8，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 273.1478[M+Na]+(calcd273.1467)，确定分子式为C15H22O3，计算不饱和度为5。UV(MeOH)光谱在λmax 209(4.61)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羰基(1700cm-1)的特征峰存在。
化合物8的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.15(1H,s,H-13a),5.41(1H,s,H-13b)的烯氢信号，以及δH 0.93(3H,d,J＝6.5Hz,H3-14),0.94(3H,d,J＝6.5,H3-15)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括3个季碳信号(δC 145.7,172.4,213.2)，5个次甲基碳信号(δC 37.7,38.3,45.5,52.3,59.9)，5个亚甲基碳信号(δC 30.1,33.4,34.9,36.4,123.7)以及2个甲基碳信号(δC 14.5,20.1)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表8。
通过二维核磁数据(1H-1H COSY,HSQC和HMBC)分析证实了以上推断，核磁数据归属见表8。从而推断化合物8的平面结构。
在NOESY谱中，可以看到H-1与H3-14，H-1与H-7，H-6与H-10，H-6与H3-15有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同一面，而H-6、H-10和H3-15位与相反的一面，故而根据NOESY可以得到化合物8相对构型为(1S*,4S*,6S*,7R*,10R*)-8。
化合物8的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物8实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,4S,6S,7R,10R)-8构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,4S,6S,7R,10R构型(图20,图21)。将该新化合物命名为arteannoide M。其核磁数据归属见表8。
表8 NMR data of 8 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物9:Arteannoide N
化合物9，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 249.1493[M+H]+(calcd249.1491)，确定分子式为C15H20O3，计算不饱和度为6。UV(MeOH)光谱在λmax 206(4.78),288(3.82)nm给出最大吸收带。IR光谱给出2945,2897,2871,1650,1457,1381,1184cm-1的特征峰。
化合物9的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.10(1H,brs,H-13a),5.63(1H,brs,H-3),5.54(1H,brs,H-13b)的烯氢信号，以及δH 1.75(3H,s,H3-15),0.92(3H,d,J＝6.6,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括4个季碳信号(δC 85.2,131.4,141.9,170.6)，5个次甲基碳信号(δC 30.7,37.4,40.4,72.6,126.4)，4个亚甲基碳信号(δC 27.1,29.2,31.4,120.8)以及2个甲基碳信号(δC19.7,21.1)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表9。
通过分析化合物的1D和2D核磁数据(表9)，推测化合物9结构。1H-1H COSY谱中(图22)H3-14与H-10有相关，H3-14与C-1/C-9/C-10有相关，表明甲基C-14通过C-10连接于六元环；HMBC谱中H-7与C-12/C-13，H2-13与C-7/C-11/C-12有相关表明一个α-亚甲基-γ-羧酸片段连接在C-7位。同时H-3与C-15，H3-15与C-3/C-4/C-5有相关；表明甲基C-15通过C-4连接于六元环片段。另外结合化合物的分子式和不饱和度，以及C-5(72.6)、C-6(85.2)的化学位移值推测结构中含有三元氧环结构片段，这样确定了化合物9的平面结构。
在NOESY谱中，可以看到H-1与H3-14，H3-14与H-9a，H-9b与H-13b，H-13b与H-5有相关，表明H-1、H-9a和H3-14位于同一面，故而根据NOESY可以得到化合物9的相对构型为(1S*,5R*,6R*,7S*,10R*)-9。
化合物9的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物9实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,5R,6R,7S,10R)-9构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,5R,6R,7S,10R构型(图23)。将该新化合物命名为arteannoide N。其核磁数据归属见表9。
表9 NMR data of 9 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物10:Arteannoide O
化合物10，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 291.1574[M+Na]+(calcd 291.1572)，确定分子式为C15H24O4，计算不饱和度为4。UV(MeOH)光谱在λmax 204(4.62),246(sh,3.78)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羰基(1758cm-1)的特征峰存在。
化合物10的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 5.63(1H,brs,H-3)的烯氢信号，以及δH 1.75(3H,s,H3-15),1.10(3H,d,J＝6.8,H3-13),0.91(3H,d,J＝6.2,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括3个季碳信号(δC 85.6,131.3,179.9)，6个次甲基碳信号(δC 31.8,38.1,38.8,39.1,70.0,126.2)，3个亚甲基碳信号(δC 24.5,27.2,32.1)以及3个甲基碳信号(δC 9.3,19.9,21.3)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表10。
将化合物10与化合物9的核磁数据进行比对，发现二者结构比较相似。与化合物9相比，化合物10少了两个不饱和度，多了两个羟基，表明化合物10为化合物9氧环开裂产物。在HMBC谱中，H-7与C-11有相关，H3-13与C-7/C-11/C-12有相关，表明化合物10的C-11-C-13还原为碳碳单键。
在NOESY谱中，可以看到H-1与H3-14，H-1与H-7，H-5与H-11有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同一面，而H-和H-11位相反的一面。C-11位的绝对构型是通过与文献Me-13的13C核磁数据比对确定，当Me-13的碳化学位移值在8.0-10.0时，C-11位的构型为S，当Me-13的碳化学位移值在13.0-16.0时，C-11位的构型为R。[75-77]化合物10的Me-13的化学位移值为9.3，表明C-11位的构型为S。故而根据NOESY可以得到化合物10的相对构型为(1S*,5R*,6R*,7S*,10R*,11S*)-10。
化合物10的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。与实验所测得的CD谱进行比对，结果发现化合物10实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,5R,6R,7S,10R,11S)-10构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,5R,6R,7S,10R,11S构型(图25,图26)。将该新化合物命名为arteannoide O。其核磁数据归属见表10。
表10 NMR data of 10 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物11:Arteannoide P
化合物11，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 251.1635[M+H]+(calcd251.1647)，确定分子式为C15H22O3，计算不饱和度为5。UV(MeOH)光谱在λmax 204(4.56),236(4.88)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羰基(1697cm-1)的特征峰存在。
化合物11的1H-NMR(600MHz,in CDCl3)中给出δH 6.55(1H,dd,J＝4.1,1.4Hz,H-3)的烯氢信号，以及δH 1.74(3H,s,H3-15),1.19(3H,d,J＝7.0,H3-13),0.89(3H,d,J＝6.4,H3-14)的甲基质子信号。13C-NMR(150MHz,in CDCl3)图谱结合DEPT-135图谱，显示了15个碳信号，包括3个季碳信号(δC 135.6,181.7,203.7)，6个次甲基碳信号(δC 37.7,39.9,41.2,46.9,52.1,142.1)，3个亚甲基碳信号(δC 26.5,32.4,34.1)以及3个甲基碳信号(δC 14.8,16.1,19.4)。通过HSQC谱将直接相连的碳和氢信号进行归属见表11。
分析化合物11的1D 1H-NMR和13C-NMR数据，并结合2D1H-1H COSY和HMBC谱(图27)，确定了化合物11的平面结构。
在NOESY谱中，可以看到H-1与H3-14，H-1与H-7，H-6与H-10，H-6与H-11有相关，表明H-1、H-7和H3-14位于同一面，而H-6、H-10和H-11位相反的一面，化合物11的Me-13的化学位移值为14.8，表明C-11位的构型为R。故而根据NOESY可以得到化合物11的相对构型为(1S*,6R*,7R*,10R*,11R*)-11。
化合物11的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。与实验所测得的CD谱进行比对，结果发现化合物11实验所测得的CD谱与计算得到的(1S,6R,7R,10R,11R)-11构型的CD谱一致，因此确定化合物的绝对构型为1S,6R,7R,10R,11R构型(图28,图29)。将该新化合物命名为arteannoide P。其核磁数据归属见表11。
表11 NMR data of 11 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
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aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物12:Arteannoide Q
化合物12，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 247.1335[M+H]+(calcd247.1334)，确定分子式为C15H18O3，计算不饱和度为7。UV(MeOH)光谱在λmax 206(4.86),226(sh,4.84),308(4.57)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羰基(1706cm-1)的特征峰存在。
通过比较化合物12的C-6位和C-7位为碳碳双键(δC 134.7,C-6；145.6,C-7)，结合HMBC谱H-1/H2-9与C-7有相关，以及H2-8与C-6有相关，证实了上述推测。综合2D NMR(1H-1HCOSY,HSQC和HMBC)图谱信息，确定了化合物12的平面结构。
在NOESY谱中，可以看到H-1与H3-14有相关，表明H-1和H3-14位于同一面，这样得到了化合物12的相对构型为1S*,10R*(图30)。
化合物12的绝对构型是通过计算CD的方法确定的。结果发现化合物12实验所测得的CD谱与计算得到的1S,10R构型的CD谱一致，因此确定化合物12的绝对构型为1S,10R(图31,图32)。化合物命名为arteannoide Q。其核磁数据归属见表12。
表12 NMR data of 12 in CD3OD(600MHz for 1H；150MHz for13C)
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aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
化合物13:Arteannoide R
化合物13，黄色胶状固体。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 247.1339[M+H]+(calcd247.1334)，确定分子式为C15H18O3，计算不饱和度为7。UV(MeOH)光谱在λmax 206(4.85),224(sh,3.35),282(3.93),316(3.31)nm给出最大吸收带。IR光谱提示有羟基(3492cm-1)和羰基(1684cm-1)的特征峰存在。
通过对化合物131D和2D NMR数据的分析，以及比对化合物13和3的核磁数据，推测化合物13为化合物3的3位羟基化产物，由此确定了化合物13的平面结构。
在NOESY谱中(图33)，可以看到H-9a与H-13b，H-9b与H3-14，有相关，表明H-13b与H3-14位于异面，故而根据NOESY可以得到化合物13的相对构型为(7R*,10R*)-24。
化合物13的绝对构型是通过比对CD的方法确定的。化合物13的实测CD谱与化合物13的实测CD谱基本一致(图34)，因此可以推断化合物13与化合物3具有相同的绝对构型6R,9R。将该新化合物命名为arteannoide R。其核磁数据归属见表13。
表13 NMR data of 13 in CDCl3(600MHz for 1H；150MHz for13C)
aIndiscernible signals owing to overlapping or having complexmultiplicity are reported without designating multiplicity.
实施例3化合物的活性检测
1实验方法
细胞模型：小鼠巨噬细胞系RAW 264.7，来源于中医科学院，由江苏康缘药业股份有限公司提供；培养条件：DMEM+10％胎牛血清(FBS)，37℃，5％CO2。
1.1实验分组
实验设空白对照组，DMSO组，模型组，阳性药组(氢化可的松)和各化合物组。
1.2实验方法
将细胞以0.25％胰酶(含0.02％EDTA)消化，10％胎牛血清的DMEM培养基调整细胞密度为1*105个/ml，均匀接种至24孔板，每孔400μl，接板后放入培养箱培养24小时。24小时后，去除原培养基。加入450μl含药的无血清培养基DMEM，同时设空白对照组(每孔加入495μl无血清的DMEM培养基)，DMSO组(每孔加入495μl含千分之一DMSO的无血清DMEM培养基)，模型组(每孔加入495μl含千分之一DMSO的无血清DMEM培养基)和阳性药组(塞来昔布组，终浓度为3.3μM)，和各化合物组(各组加入终浓度为100μM的化合物)。
药物作用1h后，除空白对照组和DMSO组加入50μl的无血清培养基外，各孔分别加入50μl的LPS(革兰阴性菌外膜的脂多糖，美国Sigma公司，批号：114M4009)溶液(终浓度1μg/ml)，终体积为500μl，继续孵育18小时。18小时后收集细胞培养液，以无血清DMEM稀释5倍，按Elisa试剂盒说明书检测PGE2、NO、TNF-α、IL-6含量，检测完成后按以下方法计算抑制率：
抑制率＝(模型组PGE2平均含量-样品组因子平均含量)/(模型组因子平均含量-DMSO组因子平均含量)*100％
1.3实验结果
检测结果见下表所示，由结果可见，13种化合物对炎症因子均有一定的抑制效果，其中化合物3、4、7、8、11、12对PGE2、NO、TNF-α、IL-6均有更好的抑制作用。
表14 化合物对炎症因子的抑制率(％)
Compounds PGE2 NO TNF-α IL-6
塞来昔布 5.5±1.0 48.7±2.2 43.9±2.1 65.6±1.8
1 20.1±0.9 25.6±1.2 9.14±1.7 -
2 11.4±1.1 - 41.2±0.9 25.1±2.0
3 >100 74.0±3.2 39.9±1.6 43.2±2.5
4 >100 26.6±1.0 >100 21.7±1.1
5 8.5±2.4 12.6±0.8 - 26.5±2.1
6 20.3±1.3 - 18.9±0.6 8.1±0.9
7 >100 39.1±2.2 >100 28.7±1.6
8 26.3±2.1 >100 54.2±1.3 54.2±1.7
9 13.6±1.5 - 25.4±0.7 14.2±1.3
10 10.3±0.8 7.3±0.6 2.3±1.4 10.1±1.8
11 4.9±0.3 22.1±1.5 32.0±1.0 14.2±0.8
12 9.1±0.7 45.0±1.0 23.4±0.8 23.9±1.2
13 2.2±0.6 16.3±0.9 - 13.6±1.6
由以上实验可知，本发明提出的化合物有一定的抗炎活性，其为新颖的天然抗炎药物的开发提供了新的选择。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (4)

1.一种具有抗炎活性的的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自下列化合物1-13中的任一种：
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：化合物3、4、7、8、11或12。
3.包括权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐的抗炎药物。
4.权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗炎药物中的应用。
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