CN113105388A - 一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用 - Google Patents

一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用 Download PDF

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Abstract

一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用，属于中药提取领域，具体涉及一种从千金子中分离的如通式所示的千金二萜烷类化合物及其该化合物的提取方法，同时还提供该化合物或该化合物的异构体，或该化合物在药学上可接受的盐，或包含该化合物的药物组合物对LPS诱导的RAW264.7细胞中NO产生的抑制作用，可以用于制备抗炎药物。

Description

一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用
技术领域
本发明属于中药提取领域，具体涉及一种从千金子中分离的千金二萜烷化合物及其提取方法和在制备抗炎药物中的应用。
背景技术
千金子为大戟科植物续随子Euphorbia lathyris的干燥成熟种子，分布广泛，主产于河南、河北、浙江、四川、吉林等省。千金子是我国的传统中药材之一，始载于《蜀本草》，原名续随子。2020版《中华人民共和国药典》(一部)中记载：千金子味辛，性温，有毒；归肝、肾、大肠经。具有泻下逐水，破血消癓，外用疗癣蚀疣的功效。国内外学者通过体内、体外实验证实了千金子的抗肿瘤作用(Itokawa H,Ichihara Y,Watanabe K,et al.An antitumorprinciple from Euphorbia lathyris[J].Planta Medica,1989,55(3):271-272.)，抗肿瘤多药耐药作用(Appendino G,Conseil G,Pietro AD,et al.A new p-glycoproteininhibitor from the caper spurge(Euphorbia lathyris)[J].Journal of NaturalProducts,2003,66(1):140-142.)，抗炎作用(李群,王琦,李涛.高效液相色谱法测定千金子中七叶树贰的含量[J].中国中药杂志,1994,19(7):403-404.)，致泻作用(宋卫国,孙付军,张敏,等.千金子和千金子霜及其主要成分泻下作用研究[J].中药药理与临床,2010,26(4):40-42.)，以及美白淡斑作用(Yukimitsu M,Hideya A,Yoshiyuki M,et al.Mushroomtyrosinase inhibitory activity of esculetin isolated from seeds of Euphorbialathyris L.[J].Bioscience Biotechnology and Biochemistry,2003,67(3):631-634.)等作用。为了将千金子的药用价值发挥到最大，对千金子的种子进行了系统的成分研究，提取了新的千金二萜烷化合物，利用核磁、紫外、质谱等手段对化合物的结构进行了确证，并检测提取到的化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞中NO产生的抑制作用。
发明内容
本发明的首要目的是提供一种千金二萜烷化合物。
本发明的第二个目的是提供一种千金二萜烷化合物的提取方法。
本发明的第三个目的是提供一种含有千金二萜烷化合物的药物组合物。
本发明的第四个目的是提供上述千金二萜烷化合物或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐或包含该化合物的药物组合物在制备抗炎药物中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
一种千金二萜烷化合物，其为如通式(I)所示的化合物或该化合物的异构体、或该化合物在药学上可接受的盐。
所述的通式(I)为：
Figure BDA0003010422090000021
其中：R1，R2和R3各自独立地为H，Cinnamoyl，Acetyl，Benzoyl，Nicotinoyl或Hexanoyl。
进一步的，所述的千金二萜烷化合物，其为如下结构式1～4所示的化合物中的任一种或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐；
Figure BDA0003010422090000022
所述的在药学上可接受的盐，包括：钠盐、钾盐、氨盐、盐酸盐及硫酸盐。
所述的异构体，包括：光学异构体、顺反异构体、外消旋体以及它们的混合物。
本发明还提供了上述千金二萜烷化合物1～4的提取方法，包括如下步骤：
(1)以千金子干燥种子为原料，加入原料1～5质量倍的石油醚，室温下浸泡12～24小时，脱脂，过滤，滤液用体积浓度为70％～85％的乙醇水溶液进行萃取，萃取液减压回收溶剂，得到70％～85％乙醇层浸膏。而滤渣则加入3～8质量倍的体积浓度为90％～95％乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次提取2～4小时，合并所得提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到90％～95％乙醇层浸膏，合并70％～85％乙醇层浸膏和90％～95％乙醇层浸膏得到总浸膏；
(2)将总浸膏分散到2～6质量倍的水中，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取浓缩液；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、10:1、10:1和5:1的馏分，依次记为E4、E5、E6和E7；
(4)馏分E4、E5、E6和E7浓缩后进一步纯化，得到所述千金二萜烷化合物1～4。
上述提取方法中，所述步骤(4)中对馏分E4、E5、E6和E7的具体分离纯化过程为：
馏分E4浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1的馏分，记为E44；
馏分E44浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～5:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E44-12；
馏分E44-12浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为75:25的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物2；
馏分E5浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为20:1的馏分，记为E54；
馏分E54浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70～100:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为60:40的馏分，记为E543；
馏分E543浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1～1:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为30:1的馏分，记为E5433；
馏分E5433浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为80:20的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物4；
馏分E6浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为20:1的馏分，记为E61；
馏分E61浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70～100:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为70:30的馏分，记为E614；
馏分E614浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为75:25的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物3；
馏分E7浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E75；
馏分E75浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70～90:10的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为80:20的馏分，记为E752；
馏分E752浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为90:10的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物1；
所述千金二萜烷化合物为来自千金子种子部分提取物。
所述千金子种子部分提取物在制备抗炎药物中应用。
一种药物组合物，其包括所述的千金二萜烷化合物、该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐中的一种或多种；还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂中的一种或它们的组合。所述药物组合物的给药途径为口服或注射给药，剂型包括：片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂和针剂。
所述的千金二萜烷化合物、该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐或所述的药物组合物对LPS诱导的RAW264.7细胞中NO产生抑制作用，应用于制备抗炎药物。
本发明的优点：
本发明的千金二萜烷化合物或其异构体或其在药学上可接受的盐或其药物组合物对LPS诱导的RAW264.7细胞中NO产生的抑制作用，应用于制备治疗炎症的药物。本发明方法进一步丰富千金子活性物质的结构多样性，在此基础上，为后续得到的单体化合物进行相关生物活性测试奠定基础，为新药开发提供活性先导化合物，同时也为千金子药材的深层次研究与开发提供理论依据。
附图说明
图1不同浓度的化合物1对RAW264.7细胞的存活率。
图2化合物1对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7分泌的细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的抑制作用。
图3化合物1对iNOS、COX-2、NF-κB及其通路蛋白IκBα和磷酸化水平P-IκBα表达的情况。
图4化合物1对NF-κB核转位的影响。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行进一步描述。
实施例1
千金子中千金二萜烷化合物1～4的提取方法，包括如下步骤：
(1)以总干重为20.0kg的千金子种子为原料，加入原料1质量倍的石油醚20L，室温下浸泡15小时，脱脂，过滤，滤液用体积浓度为85％的乙醇水溶液进行萃取，萃取液减压回收溶剂，得到85％乙醇层浸膏。滤渣则加入3质量倍的体积浓度为95％的乙醇水溶液60L，回流提取3次，每次提取2小时，合并所得提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到95％乙醇层浸膏，合并85％乙醇层浸膏和95％乙醇层浸膏，得到总浸膏(2.5kg)；
(2)将总浸膏分散到2质量倍的水(5L)中，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浓缩液1.1kg；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、10:1、10:1和5:1的馏分，依次记为E4、E5、E6和E7；
(4)馏分E4、E5、E6和E7浓缩后进一步纯化，得到23.3mg化合物1、5.0mg化合物2、2.9mg化合物3和3.4mg化合物4。具体分离纯化过程为：
馏分E4浓缩后得到75.8g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:0、100:1、80:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1的馏分，记为E44；
馏分E44浓缩后得到17.0g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:0、100:1、80:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E44-12；
馏分E44-12浓缩后得到54.7mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，以体积比为75:25的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到5.0mg化合物2；
馏分E5浓缩后得到8.0g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1、5:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为20:1的馏分，记为E54；
馏分E54浓缩后得到2.5g浓缩液，经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70、60:40、50:50、70:30、80:20、90:10、100:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为60:40的馏分，记为E543；
馏分E543浓缩后得到600.0mg浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1、60:1、50:1、40:1、35:1、25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为30:1的馏分，记为E5433；
馏分E5433浓缩后得到50.2mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，以体积比为80:20的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到3.4mg化合物4；
馏分E6浓缩后得到35.4g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1、80:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1、8:1、6:1、4:1、0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为20:1的馏分，记为E61；
馏分E61浓缩后得到7.1g浓缩液，经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为70:30的馏分，记为E614；
馏分E614浓缩后得到20.0mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，以体积比为75:25的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到2.9mg化合物3；
馏分E7浓缩后得到24.2g浓缩液，经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1、60:1、50:1、40:1、30:1、20:1、15:1、10:1、5:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E75；
馏分E75浓缩后得到2.62g浓缩液，经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为80:20的馏分，记为E752；
馏分E752浓缩后得到99.8mg浓缩液，经制备型HPLC色谱，以体积比为90:10的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到23.3mg化合物1；
得到的化合物1～4的物理化学性质数据如下：
化合物1：白色无定型粉末；HRESIMS m/z:522.2500[M-H]-(calcd for C30H36NO7,522.2497)，确定化合物1的分子式为C30H37NO7；
Figure BDA0003010422090000061
UV(MeOH)λmax(logε)207.0(7.2)nm；1H-NMR(600MHz,CDCl3)和13C-NMR(150MHz,CDCl3)的数据见表1。
化合物2：白色无定型粉末；HRESIMS m/z:479.2450[M-H]-(calcd for C29H35O6,479.2439)，确定化合物2的分子式为C29H36O6；
Figure BDA0003010422090000062
UV(MeOH)λmax(logε)230(3.9),276(3.8)nm；1H-NMR(600MHz,CDCl3)和13C-NMR(150MHz,CDCl3)的数据见表2。
化合物3：白色无定型粉末；HRESIMS m/z:603.2565[M+Na]+(calcd forC33H40NaO9,603.2565)，确定化合物3的分子式为C33H40O9；
Figure BDA0003010422090000063
UV(MeOH)λmax(logε)230(4.2),274(4.2)nm；1H-NMR(600MHz,CDCl3)和13C-NMR(150MHz,CDCl3)的数据见表3。
化合物4：白色无定型粉末；HRESIMS m/z:641.2761[M-H]-(calcd for C38H41O9,641.2756)，确定化合物4的分子式C38H42O9；
Figure BDA0003010422090000064
UV(MeOH)λmax(logε)230(4.6),274(4.4)nm；1H-NMR(600MHz,CDCl3)和13C-NMR(150MHz,CDCl3)的数据见表4。
表1化合物1的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0003010422090000071
表2化合物2的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0003010422090000072
表3化合物3的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0003010422090000081
表4化合物4的碳谱和氢谱数据
Figure BDA0003010422090000082
Figure BDA0003010422090000091
通过理化常数和现代波谱学手段(HRESIMS和NMR)，结合文献相关数据，鉴定化合物1～4的结构，确定化合物1、2、3和4均为未见文献报道的新化合物，如下所示：
Figure BDA0003010422090000092
实施例2
千金子中千金二萜烷化合物1～4的提取方法，包括如下步骤：
(1)以总干重为10.0kg的千金子种子为原料，加入原料2质量倍的石油醚20L，室温下浸泡18小时，脱脂，过滤，滤液用体积浓度为85％的乙醇水溶液进行萃取，萃取液减压回收溶剂，得到85％乙醇层浸膏。而滤渣则加入5质量倍的体积浓度为95％乙醇水溶液50L，回流提取4次，每次提取3小时，合并所得提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到95％乙醇层浸膏，合并85％乙醇层浸膏和95％乙醇层浸膏，得到总浸膏(1.0kg)；
(2)将总浸膏分散到3质量倍的水(3L)中，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浓缩液489.5g；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、10:1、10:1和5:1的馏分，依次记为E4、E5、E6和E7；
(4)馏分E4、E5、E6和E7浓缩后进一步纯化，得到10.3mg化合物1、2.4mg化合物2、1.5mg化合物3和1.5mg化合物4。具体分离纯化过程同实施例1。
实施例3
千金子中千金二萜烷化合物1～4的提取方法，包括如下步骤：
(1)以总干重为25.0kg的千金子种子为原料，加入原料2质量倍的石油醚50L，室温下浸泡20小时，脱脂，过滤，滤液用体积浓度为85％的乙醇水溶液进行萃取，萃取液减压回收溶剂，得到85％乙醇层浸膏。而滤渣则加入3质量倍的体积浓度为95％乙醇水溶液75L，回流提取2次，每次提取3小时，合并所得提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到95％乙醇层浸膏，合并85％乙醇层浸膏和95％乙醇层浸膏，得到总浸膏(3.1kg)；
(2)将总浸膏分散到3质量倍的水(9L)中，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯层浸膏(1.6kg)；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、10:1、10:1和5:1的馏分，依次记为E4、E5、E6和E7；
(4)馏分E4、E5、E6和E7浓缩后进一步纯化，得到28.2mg化合物1、7.1mg化合物2、3.5mg化合物3和4.0mg化合物4。具体分离纯化过程同实施例1。
试验实施例1
上述制备得到的化合物1～4对RAW264.7细胞生成NO的影响研究
将RAW264.7细胞接种在96孔板中，用浓度为20μM的化合物1～4处理3小时，然后与LPS(1μg/mL)一起温育24小时。将具有或不具有LPS的DMSO作为媒介物对照或模型对照处理。使用Griess试剂在540nm下用酶标仪测量培养基中的亚硝酸盐积累。分别计算化合物1～4处理组的抑制率(％)以评价NO抑制活性。具体数据见表5。
表5化合物1～4抑制RAW264.7细胞NO生成抑制率(％)值
化合物 抑制率(％)
化合物1 76.82
化合物2 74.36
化合物3 62.57
化合物4 74.92
本发明方法制备得到的化合物1在RAW264.7细胞中的抗炎作用与机制的研究
(1)CCK8法检测化合物1对细胞存活率的影响
对数生长期的RAW264.7细胞以25000个/孔接种于96孔板中培养12h。换不同浓度的化合物1(100、50、25、12.5、6.25和3.125μmol/L)处理细胞。以加入相应体积的DMSO的细胞孔作为空白对照。24h后弃掉培养基，每孔均加入100μL的含10％CCK8的培养基，培养20min后，酶标仪检测450nm处各孔的OD值计算实验组细胞存活率(以空白对照组细胞存活率为100％)。结果如图1所示，由图1可知，化合物1对RAW264.7细胞的存活率没有显著影响。
(2)ELISA法检测化合物1对白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的生成的抑制作用
对数生长期的RAW264.7细胞接种于96孔板培养12h。实验组用不同浓度化合物1(5、10、20和40μmol/L)处理。3h后，模型对照组和实验组加入LPS，使其终浓度为1μg/mL，而空白对照组加入等体积的DMEM培养基，继续培养24h。每孔均取细胞上清，按照ELISA试剂盒操作手册，于酶标仪检测450nm处各孔的OD值，计算每组的细胞因子含量。结果如图2所示，由图2可知，化合物1可以抑制LPS引起的巨噬细胞RAW264.7分泌的细胞因子含量，并且，其抑制作用呈现剂量依赖性。
(3)Western Blot检测化合物1对炎症相关蛋白的表达的抑制作用
RAW264.7细胞接种于96孔板培养12h。实验组用不同浓度化合物1(5、10、20和40μmol/L)处理。3h后，模型对照组和实验组加入LPS，使其终浓度为1μg/mL，而空白对照组加入等体积的DMEM培养基，继续培养24h。弃掉培养基，清洗并收集细胞进行Western Blot实验，测定蛋白iNOS、COX-2、NF-κB及其通路蛋白IκBα和磷酸化水平P-IκBα的表达情况，曝光条带用Gel-Pro analyzer进行灰度分析。结果如图3所示。由图3可知，化合物1可以抑制iNOS和COX-2的表达，同时也降低了NF-κB及其通路蛋白IκBα的表达，以及IκBα的磷酸化水平。
(4)化合物1对NF-κB核转位的影响
将RAW264.7细胞接种到每孔8×104细胞的24孔板中，培养12h，然后用DMSO或1(40μM)预处理2h，并用0.5μg/mLLPS激活12h。用新鲜制备的4％多聚甲醛固定细胞10min，用PBS洗涤3次，接着用0.2％Triton X-100通透10分钟。在室温下用5％牛血清白蛋白(BSA)封闭1h后，加入1:400稀释的NF-κB(Proteintech，Cat#10745-1-AP)抗体，并在4℃下孵育过夜。通过PBS洗涤后，在室温下和暗处以1:400的稀释度添加二抗孵育1h。最后，在室温和暗处下用DAPI染色5min。然后PBS清洗并加入抗荧光淬灭封片液，在免疫荧光显微镜下观察并拍照，并获取图像。结果如图4所示。化合物1(40μM)可以显着防止LP-激活的RAW264.7细胞中NF-κB的p65亚基从胞浆转移到细胞核。

Claims (9)

1.一种千金二萜烷化合物或该化合物的异构体、或该化合物在药学上可接受的盐，其特征在于，所述千金二萜烷化合物为如通式(I)所示的化合物；
Figure FDA0003010422080000011
其中：R1，R2和R3各自独立地为H，Cinnamoyl，Acetyl，Benzoyl，Nicotinoyl或Hexanoyl。
2.根据权利要求1所述的一种千金二萜烷化合物或该化合物的异构体、或该化合物在药学上可接受的，其特征在于，所述千金二萜烷化合物为如下结构式1～4所示的化合物中的任一种或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐；
Figure FDA0003010422080000012
3.权利要求2所述的千金二萜烷化合物的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以千金子干燥种子为原料，加入原料1～5质量倍的石油醚，室温下浸泡12～24小时，脱脂，过滤，滤液用体积浓度为70％～85％的乙醇水溶液进行萃取，萃取液减压回收溶剂，得到70％～85％乙醇层浸膏；而滤渣则加入3～8质量倍的体积浓度为90％～95％乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次提取2～4小时，合并所得提取液，减压回收溶剂，浓缩后得到90％～95％乙醇层浸膏，合并70％～85％乙醇层浸膏和90％～95％乙醇层浸膏得到总浸膏；
(2)将总浸膏分散到2～6质量倍的水中，用乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯萃取液减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取浓缩液；
(3)乙酸乙酯萃取浓缩液经硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1、10:1、10:1和5:1的馏分，依次记为E4、E5、E6和E7；
(4)馏分E4、E5、E6和E7浓缩后进一步纯化，得到所述千金二萜烷化合物1～4。
4.根据权利要求3所述的千金二萜烷化合物的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中对馏分E4、E5、E6和E7的具体分离纯化过程为：
馏分E4浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为50:1的馏分，记为E44；
馏分E44浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～5:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E44-12；
馏分E44-12浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为75:25的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物2；
馏分E5浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为20:1的馏分，记为E54；
馏分E54浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70～100:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为60:40的馏分，记为E543；
馏分E543浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1～1:1的石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为30:1的馏分，记为E5433；
馏分E5433浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为80:20的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物4；
馏分E6浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为100:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为20:1的馏分，记为E61；
馏分E61浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70～100:0的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为70:30的馏分，记为E614；
馏分E614浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为75:25的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物3；
馏分E7浓缩后经过硅胶柱色谱分离，以体积比为80:1～0:1的石油醚-丙酮为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为10:1的馏分，记为E75；
馏分E75浓缩后经ODS柱色谱分离，依次以体积比为30:70～90:10的甲醇-水为洗脱剂梯度洗脱，收集体积比为80:20的馏分，记为E752；
馏分E752浓缩后经制备型HPLC色谱，以体积比为90:10的甲醇-水为流动相，进行纯化，得到化合物1。
5.权利要求1或2所述的千金二萜烷化合物或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐的应用，其特征在于，所述千金二萜烷化合物或该化合物的异构体、该化合物在药学上可接受的盐应用于制备治疗炎症的药物。
6.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1～2任一项所述的千金二萜烷化合物或该化合物的异构体、或该化合物在药学上可接受的盐中的一种或多种；还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂中的一种或它们的组合；所述药物组合物的给药途径为口服或注射给药，剂型包括：片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂和针剂。
7.权利要求6所述的一种药物组合物的应用，其特征在于，所述药物组合物应用于制备治疗炎症的药物。
8.一种千金子种子提取物，其特征在于，所述千金子种子提取物包含权利要求1或2所述的千金二萜烷化合物。
9.权利要求8所述的一种千金子种子提取物的应用，其特征在于，所述千金子种子提取物应用于制备抗炎症的药物。
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