CN116926191A - 用于肺腺癌筛查的标志物、探针组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种用于肺腺癌筛查的标志物、探针组合物及其应用，所述标志物选自38个标志物中的任一种。本申请使用所述的标志物，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离DNA的检测，并且，本申请所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，降低了侵入性检测造成的危害，所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度，能够实现实时监测。

Description

用于肺腺癌筛查的标志物、探针组合物及其应用
技术领域
本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于肺腺癌筛查的标志物、探针组合物及其应用。
背景技术
常规的筛查肺癌的手段除了低剂量螺旋CT(LDCT)，还有一些蛋白标志物，例如：癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)等。但这些手段在灵敏性和特异性方面各参差不齐。目前，DNA甲基化已被证明具有组织特异性，可用于早期癌症检测，并可根据循环肿瘤DNA(ctDNA)甲基化特征追踪到肿瘤原发部位。
发明内容
本申请的目的在于提供了一种检测肺腺癌的标志物以及探针组合物，可以用于肺腺癌的筛查，所述的标志物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，以及癌症患者的预后检测，降低了侵入性检测造成的危害，并且具有更高的灵敏度和准确性。
本申请具体技术方案如下：
1.一种用于检测肺腺癌的标志物，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、 MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、 HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、 RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、 SOX18、GATD3和SBF1。
2.根据项1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-38所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向项1或2 所述标志物甲基化的探针。
4.根据项3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域杂交；
优选地，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
优选地，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
优选地，n和m均是1-10中的任意整数；
优选地，第n-1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选地， x1为0-100中的任意整数；
优选地，第m-1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选地， x2为0-100中的任意整数；
进一步优选地，所述第一探针组合物包括如SEQ ID NO:39-114中的一种或两种，所述第二探针组合物包括如SEQ ID NO:115-190中的一种或两种。
5.标志物在制备用于检测肺腺癌的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、 ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、 TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、 ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、 LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、 MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
6.根据项5所述的用途，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如 SEQ IDNO:1-38所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物；
优选地，所述探针组合物用于靶向肺腺癌的甲基化后的标志物；
优选地，所述探针组合物为项3或4所述的探针组合物。
7.一种用于肺腺癌检测的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测选自下述标志物对应的基因中的任一种甲基化的核酸：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、 HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、 SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、 MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、 MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
8.根据项7所述的组合物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-38所示的一种。
9.根据项7或8所述的组合物，其特征在于，所述核酸包括项3或4 所述的探针组合物；
优选地，所述核酸包括：
引物，所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列；
优选地，所述核酸还包括：
探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷酸片段杂交，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列；
优选地，所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂；
优选地，所述用于检测标志物的靶序列甲基化的核酸还包括：
优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
10.一种试剂盒，其特征在于，其包含用于检测项1或2所述的标志物的试剂或者项3或4所述的探针组合物或者项7-9中任一项所述的组合物。
11.一种芯片，其特征在于，其包含项1或2所述的标志物或者项3或 4所述的探针组合物或者项7或8所述的组合物。
发明的效果
本申请的发明人利用表观基因组和生物信息学技术，通过分析肺腺癌的基因组甲基化数据，寻找到了多个与肺腺癌相关的甲基化基因，并确定了肺腺癌甲基化基因发生甲基化异常的靶序列，并且通过这个甲基化基因的靶序列，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离DNA的检测。
本申请所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，降低了侵入性检测造成的危害，所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度，能够实现实时监测。
具体实施方式
下面对本申请做以详细说明。虽然显示了本申请的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本申请而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本申请，并且能够将本申请的范围完整的传达给本领域的技术人员。
需要说明的是，在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本申请提供了一种检测肺腺癌的标志物，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、MIR4774、 SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、HLA-G、 KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、 PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、RPA1、 ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、SOX18、 GATD3和SBF1。所述对应的基因指的是标志物相对应的基因。
在一个实施方案中，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1-38 所示的一种，优选地，所述标志物为甲基化后的标志物。
其中，LMNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；NDUFS2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；TPO的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示； LINC01913的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；ABCG8的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；LIMS1的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；MIR4774的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；SPHKAP的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示； CCK的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；EPHA6的核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示；HHIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示；KIAA0825的核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；TSPAN17的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；JARID2的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；HLA-G的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；KHDRBS2的核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示； ADGRA2的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；SPAG1的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示；PWWP2B的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示；ALDH3B2 的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示；LHX5的核苷酸序列如SEQID NO:21 所示；LOC100130238的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示；PDX1的核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示；POU4F1的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示； MYO16-AS1的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示；ACOT4的核苷酸序列如 SEQ ID NO:26所示；LRRC74A的核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示；FBLN5 的核苷酸序列如SEQ ID NO:28所示；RPA1的核苷酸序列如SEQID NO:29 所示；ANKRD13B的核苷酸序列如SEQ ID NO:30所示；MIR4733的核苷酸序列如SEQID NO:31所示；MIR2909的核苷酸序列如SEQ ID NO:32所示； RNF126P1的核苷酸序列如SEQID NO:33所示；MAP2K2的核苷酸序列如 SEQ ID NO:34所示；DCAF15的核苷酸序列如SEQ IDNO:35所示；SOX18 的核苷酸序列如SEQ ID NO:36所示；GATD3的核苷酸序列如SEQ ID NO:37 所示；SBF1的核苷酸序列如SEQ ID NO:38所示。
其中，上述所述标志物的序列是未经重亚硫酸盐转化的序列。
本申请提供了一种探针组合物，所述探针组合物包括靶向所述标志物甲基化的探针。
所述甲基化指的是发生在CpG二核苷酸中胞嘧啶上第5位碳原子的甲基化过程，作为一种对稳定的修饰状态，在DNA甲基转移酶的作用下，可随DNA的复制过程遗传给新生的子代DNA，是一种重要的表观遗传机制， DNA甲基化时，基因启动子区的甲基化可导致抑癌基因转录沉寂，因此它与肿瘤的发生关系密切。异常甲基化包括抑癌基因和DNA修复基因的高甲基化、重复序列DNA的低甲基化、某些基因的印记丢失，其与多种肿瘤的发生有关。
本申请所述的甲基化可以为甲基化水平、甲基化程度或甲基化状态，当分析这样的靶序列的甲基化时，本领域技术人员可以使用定量测定方法来确定甲基化。
所述探针为长度在几十到几百甚至上千碱基对的单链或双链DNA，其可利用分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性，能与待测样本中互补的非标记单链DNA或RNA以氢键结合(杂交)，形成双链复合物(杂交体)。将未配对结合的探针洗去后，可用放射自显影或酶联反应等检测系统检测杂交反应结果。在本申请中，与探针互补结合或杂交的区域为特异性靶区域，多个探针组合成探针组合物。
在一个实施方案中，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域杂交。
所述高甲基化指的是标志物经重亚硫酸盐转化后，碱基C变成碱基U，但是如果是碱基CG，则碱基C保持不变；
所述低甲基化指的是标志物经重亚硫酸盐转化后，所有的碱基CG都没有发生甲基化，碱基C均变成碱基U。
由于每个人的甲基化状态不同，标志物经重亚硫酸盐转化得到的序列也不同，在此示出了每个标志物的一种极端情况，即该区段所有的CG都处于高甲基化状态，并示出了其互补链的高甲基化状态序列：
SEQ ID NO:1的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:191所示；
SEQ ID NO:1互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:192所示；
SEQ ID NO:2的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:193所示；
SEQ ID NO:2互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:194所示；
SEQ ID NO:3的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:195所示；
SEQ ID NO:3互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:196所示；
SEQ ID NO:4的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:197所示；
SEQ ID NO:4互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:198所示；
SEQ ID NO:5的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:199所示；
SEQ ID NO:5互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:200所示；
SEQ ID NO:6的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:201所示；
SEQ ID NO:6互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:202所示；
SEQ ID NO:7的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:203所示；
SEQ ID NO:7互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:204所示；
SEQ ID NO:8的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:205所示；
SEQ ID NO:8互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:206所示；
SEQ ID NO:9的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:207所示；
SEQ ID NO:9互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:208所示；
SEQ ID NO:10的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:209所示；
SEQ ID NO:10互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:210所示；
SEQ ID NO:11的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:211所示；
SEQ ID NO:11互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:212所示；
SEQ ID NO:12的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:213所示；
SEQ ID NO:12互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:214所示；
SEQ ID NO:13的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:215所示；
SEQ ID NO:13互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:216所示；
SEQ ID NO:14的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:217所示；
SEQ ID NO:14互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:218所示；
SEQ ID NO:15的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:219所示；
SEQ ID NO:15互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:220所示；
SEQ ID NO:16的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:221所示；
SEQ ID NO:16互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:222所示；
SEQ ID NO:17的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:223所示；
SEQ ID NO:17互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:224所示；
SEQ ID NO:18的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:225所示；
SEQ ID NO:18互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:226所示；
SEQ ID NO:19的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:227所示；
SEQ ID NO:19互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:228所示；
SEQ ID NO:20的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:229所示；
SEQ ID NO:20互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:230所示；
SEQ ID NO:21的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:231所示；
SEQ ID NO:21互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:232所示；
SEQ ID NO:22的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:233所示；
SEQ ID NO:22互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:234所示；
SEQ ID NO:23的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:235所示；
SEQ ID NO:23互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:236所示；
SEQ ID NO:24的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:237所示；
SEQ ID NO:24互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:238所示；
SEQ ID NO:25的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:239所示；
SEQ ID NO:25互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:240所示；
SEQ ID NO:26的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:241所示；
SEQ ID NO:26互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:242所示；
SEQ ID NO:27的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:243所示；
SEQ ID NO:27互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:244所示；
SEQ ID NO:28的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:245所示；
SEQ ID NO:28互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:246所示；
SEQ ID NO:29的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:247所示；
SEQ ID NO:29互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:248所示；
SEQ ID NO:30的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:249所示；
SEQ ID NO:30互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:250所示；
SEQ ID NO:31的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:251所示；
SEQ ID NO:31互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:252所示；
SEQ ID NO:32的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:253所示；
SEQ ID NO:32互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:254所示；
SEQ ID NO:33的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:255所示；
SEQ ID NO:33互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:256所示；
SEQ ID NO:34的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:257所示；
SEQ ID NO:34互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:258所示；
SEQ ID NO:35的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:259所示；
SEQ ID NO:35互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:260所示；
SEQ ID NO:36的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:261所示；
SEQ ID NO:36互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:262所示；
SEQ ID NO:37的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:263所示；
SEQ ID NO:37互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:264所示；
SEQ ID NO:38的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:265所示；
SEQ ID NO:38互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:266所示。
同理，由于每个人的甲基化状态不同，在此示出了一种极端的情况，即所有的CG都处于低甲基化状态，也示出了其互补链的低甲基化状态序列：
SEQ ID NO:1的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:267所示；
SEQ ID NO:1互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:268所示；
SEQ ID NO:2的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:269所示；
SEQ ID NO:2互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:270所示；
SEQ ID NO:3的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:271所示；
SEQ ID NO:3互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:272所示；
SEQ ID NO:4的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:273所示；
SEQ ID NO:4互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:274所示；
SEQ ID NO:5的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:275所示；
SEQ ID NO:5互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:276所示；
SEQ ID NO:6的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:277所示；
SEQ ID NO:6互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:278所示；
SEQ ID NO:7的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:279所示；
SEQ ID NO:7互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:280所示；
SEQ ID NO:8的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:281所示；
SEQ ID NO:8互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:282所示；
SEQ ID NO:9的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:283所示；
SEQ ID NO:9互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:284所示；
SEQ ID NO:10的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:285所示；
SEQ ID NO:10互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:286所示；
SEQ ID NO:11的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:287所示；
SEQ ID NO:11互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:288所示；
SEQ ID NO:12的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:289所示；
SEQ ID NO:12互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:290所示；
SEQ ID NO:13的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:291所示；
SEQ ID NO:13互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:292所示；
SEQ ID NO:14的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:293所示；
SEQ ID NO:14互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:294所示；
SEQ ID NO:15的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:295所示；
SEQ ID NO:15互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:296所示；
SEQ ID NO:16的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:297所示；
SEQ ID NO:16互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:298所示；
SEQ ID NO:17的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:299所示；
SEQ ID NO:17互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:300所示；
SEQ ID NO:18的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:301所示；
SEQ ID NO:18互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:302所示；
SEQ ID NO:19的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:303所示；
SEQ ID NO:19互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:304所示；
SEQ ID NO:20的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:305所示；
SEQ ID NO:20互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:306所示；
SEQ ID NO:21的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:307所示；
SEQ ID NO:21互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:308所示；
SEQ ID NO:22的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:309所示；
SEQ ID NO:22互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:310所示；
SEQ ID NO:23的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:311所示；
SEQ ID NO:23互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:312所示；
SEQ ID NO:24的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:313所示；
SEQ ID NO:24互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:314所示；
SEQ ID NO:25的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:315所示；
SEQ ID NO:25互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:316所示；
SEQ ID NO:26的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:317所示；
SEQ ID NO:26互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:318所示；
SEQ ID NO:27的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:319所示；
SEQ ID NO:27互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:320所示；
SEQ ID NO:28的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:321所示；
SEQ ID NO:28互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:322所示；
SEQ ID NO:29的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:323所示；
SEQ ID NO:29互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:324所示；
SEQ ID NO:30的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:325所示；
SEQ ID NO:30互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:326所示；
SEQ ID NO:31的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:327所示；
SEQ ID NO:31互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:328所示；
SEQ ID NO:32的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:329所示；
SEQ ID NO:32互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:330所示；
SEQ ID NO:33的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:331所示；
SEQ ID NO:33互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:332所示；
SEQ ID NO:34的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:333所示；
SEQ ID NO:34互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:334所示；
SEQ ID NO:35的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:335所示；
SEQ ID NO:35互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:336所示；
SEQ ID NO:36的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:337所示；
SEQ ID NO:36互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:338所示；
SEQ ID NO:37的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:339所示；
SEQ ID NO:37互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:340所示；
SEQ ID NO:38的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:341所示；
SEQ ID NO:38互补链的一种极端情况的序列如SEQ ID NO:342所示；
在一个实施方案中，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交。
所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交。
对于第一探针组合物和第二探针组合物中探针的个数，本申请不作任何限制，本领域技术人员可以根据需要进行选择，例如，m和n可以为1-10 中的任意整数，m和n既可以是相同的，也可以是不同的。
例如，m和n可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10的任意整数，优选地，m＝n＝2。
在一个实施方案中，第n-1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选地，x1为0-100中的任意整数；
优选地，第m-1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选地， x2为0-100中的任意整数。
其中，x1和x2可以是相同的，也可以是不同的，当x1为0时，表明第 n-1探针的尾部与第n个探针的首部相连接，同理，当x2为0时，表明第 m-1探针的尾部与第m个探针的首部相连接。
本申请通过将探针组合物与经过重亚硫酸盐转化的标志物进行杂交，其中，高甲基化的第一探针组合物与高甲基化的区域杂交，低甲基化的第二探针组合物与低甲基化的区域杂交，从而能够高效准确地检测靶序列的甲基化水平，进而能够用于肺腺癌筛查。
在一个实施方案中，所述高甲基化的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:39-114中的一种或两种。
所述低甲基化的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:115-190中的一种或两种。
其中，用于与LMNA甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:39-40所示的核苷酸序列；
用于与NDUFS2甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:41-42所示的核苷酸序列；
用于与TPO甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:43-44 所示的核苷酸序列；
用于与LINC01913甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:45-46所示的核苷酸序列；
用于与ABCG8甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:47-48所示的核苷酸序列；
用于与LIMS1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:49-50所示的核苷酸序列；
用于与MIR4774甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:51-52所示的核苷酸序列；
用于与SPHKAP甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:53-54所示的核苷酸序列；
用于与CCK甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:55-56所示的核苷酸序列；
用于与EPHA6甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:57-58所示的核苷酸序列；
用于与HHIP甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:59-60所示的核苷酸序列；
用于与KIAA0825甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:61-62所示的核苷酸序列；
用于与TSPAN17甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:63-64所示的核苷酸序列；
用于与JARID2甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:65-66所示的核苷酸序列；
用于与HLA-G甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:67-68所示的核苷酸序列；
用于与KHDRBS2甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:69-70所示的核苷酸序列；
用于与ADGRA2甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:71-72所示的核苷酸序列；
用于与SPAG1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:73-74所示的核苷酸序列；
用于与PWWP2B甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:75-76所示的核苷酸序列；
用于与ALDH3B2甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:77-78所示的核苷酸序列；
用于与LHX5甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:79-80所示的核苷酸序列；
用于与LOC100130238甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:81-82所示的核苷酸序列；
用于与PDX1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:83-84所示的核苷酸序列；
用于与POU4F1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:85-86所示的核苷酸序列；
用于与MYO16-AS1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:87-88所示的核苷酸序列；
用于与ACOT4甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:89-90所示的核苷酸序列；
用于与LRRC74A甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:91-92所示的核苷酸序列；
用于与FBLN5甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:93-94所示的核苷酸序列；
用于与RPA1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:95-96所示的核苷酸序列；
用于与ANKRD13B甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:97-98所示的核苷酸序列；
用于与MIR4733甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:99-100所示的核苷酸序列；
用于与MIR2909甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:101-102所示的核苷酸序列；
用于与RNF126P1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:103-104所示的核苷酸序列；
用于与MAP2K2甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:105-106所示的核苷酸序列；
用于与DCAF15甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:107-108所示的核苷酸序列；
用于与SOX18甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:109-110所示的核苷酸序列；
用于与GATD3甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:111-112所示的核苷酸序列；
用于与SBF1甲基化序列杂交的第一探针组合物包括如SEQ ID NO:113-114所示的核苷酸序列；
用于与LMNA甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:115-116所示的核苷酸序列；
用于与NDUFS2甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:117-118所示的核苷酸序列；
用于与TPO甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:119-120所示的核苷酸序列；
用于与LINC01913甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:121-122所示的核苷酸序列；
用于与ABCG8甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:123-124所示的核苷酸序列；
用于与LIMS1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:125-126所示的核苷酸序列；
用于与MIR4774甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:127-128所示的核苷酸序列；
用于与SPHKAP甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:129-130所示的核苷酸序列；
用于与CCK甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:131-132所示的核苷酸序列；
用于与EPHA6甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:133-134所示的核苷酸序列；
用于与HHIP甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:135-136所示的核苷酸序列；
用于与KIAA0825甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:137-138所示的核苷酸序列；
用于与TSPAN17甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:139-140所示的核苷酸序列；
用于与JARID2甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:141-142所示的核苷酸序列；
用于与HLA-G甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:143-144所示的核苷酸序列；
用于与KHDRBS2甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:145-146所示的核苷酸序列；
用于与ADGRA2甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:147-148所示的核苷酸序列；
用于与SPAG1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:149-150所示的核苷酸序列；
用于与PWWP2B甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:151-152所示的核苷酸序列；
用于与ALDH3B2甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:153-154所示的核苷酸序列；
用于与LHX5甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:155-156所示的核苷酸序列；
用于与LOC100130238甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:157-158所示的核苷酸序列；
用于与PDX1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:159-160所示的核苷酸序列；
用于与POU4F1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:161-162所示的核苷酸序列；
用于与MYO16-AS1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:163-164所示的核苷酸序列；
用于与ACOT4甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:165-166所示的核苷酸序列；
用于与LRRC74A甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:167-168所示的核苷酸序列；
用于与FBLN5甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:169-170所示的核苷酸序列；
用于与RPA1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:171-172所示的核苷酸序列；
用于与ANKRD13B甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:173-174所示的核苷酸序列；
用于与MIR4733甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:175-176所示的核苷酸序列；
用于与MIR2909甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:177-178所示的核苷酸序列；
用于与RNF126P1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:179-180所示的核苷酸序列；
用于与MAP2K2甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:181-182所示的核苷酸序列；
用于与DCAF15甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:183-184所示的核苷酸序列；
用于与SOX18甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:185-186所示的核苷酸序列；
用于与GATD3甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:187-188所示的核苷酸序列；
用于与SBF1甲基化序列杂交的第二探针组合物包括如SEQ ID NO:188-189所示的核苷酸序列。
本申请提供了标志物在制备用于检测肺腺癌的试剂盒中的用途，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、 ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、 TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、 LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、 MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
在一个实施方案中，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1-38 所示的一种，优选地，所述标志物为甲基化后的标志物。
本申请提供了探针组合物在制备用于检测肺腺癌的试剂盒中的用途，所述探针组合物用于靶向肺腺癌甲基化后的标志物。
在一个实施方案中，所述探针组合物为上述所述的探针组合物。
本申请还提供了一种用于肺腺癌检测的组合物，所述组合物包括用于检测选自下述标志物对应的基因中的任一种甲基化的核酸：LMNA、NDUFS2、 TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、 SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、 MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、 MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。优选地，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1-38所示的一种。
在一个实施方案中，所述核酸包括上述所述的探针组合物。
在一个实施方案中，所述核酸包括：
引物，所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。
其中，如果使用重亚硫酸盐对待测样本NDA进行转化，则用于检测标志物的靶序列甲基化的核酸包括对标志物的靶序列进行重亚硫酸盐转化后的序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。
在一个实施方案中，所述核酸还包括：
探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷酸片段杂交，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列。
在一个实施方案中，所述所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂，例如试剂可以为重亚硫酸盐等；优选地，所述用于检测标志物的靶序列甲基化的核酸还包括：
优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
所述阻断剂是为了提高PCR扩增引物的扩增特异性，阻断剂核苷酸序列的5’端与正向或反向引物的3’端核苷酸序列有大于或等于5个核苷酸的重叠区域，阻断剂与正向或反向引物互补与目标基因靶序列DNA的同一条链，阻断剂的解链温度高于正向或者反向引物超过(包括)5℃，阻断剂的核苷酸序列包含至少一个CpG二核苷酸序列，并与重亚硫酸盐转化后的未发生甲基化的目标基因靶序列DNA的序列互补。因此，当所要检测的生物样本的基因组DNA是处于甲基化和非甲基化状态的混合物时，尤其是处于甲基化状态的DNA远远少于处于非甲基化状态的DNA的情况下，处于非甲基化状态的DNA经重亚硫酸盐转化后，会优先与阻断剂相结合，从而以及DNA 模板与PCR义务结合，因而不发生PCR扩增，而处于甲基化状态的DNA 不与阻断剂相结合，因而与引物集合，发生PCR扩增，之后直接或间接地检测通过扩增获得的片段。
本申请提供了一种试剂盒，其包括用于检测上述所述的标志物的试剂或者上述所述的探针组合物或者上述所述的组合物。
在一个实施方案中，所述试剂盒还包含用于容纳受试者生物样品的容器。
在一个实施方案中，所述试剂盒还包括使用和解释检测结果的说明。
所述生物样品例如可以为外周血全血、血浆或血清。
对于使用上述所述的试剂盒检测靶序列甲基化水平的方法，本申请不作任何限制，本领域技术人员可以根据需要进行选择，例如本申请提供了一种使用上述所述的试剂盒检测标志物靶序列甲基化水平的方法，其包括下述步骤：
采集受试者样品；
提取纯化所述样品中的DNA；
针对纯化的DNA样品构建用于测序的DNA文库；
用重亚硫酸盐转化所述构建的DNA文库；
预PCR扩增所述经重亚硫酸盐转化的DNA文库；
利用探针组合物对经预PCR扩增的样品进行杂交捕获；
利用PCR扩增经杂交捕获后的产物；
对PCR扩增后的经杂交捕获后的产物进行高通量二代测序；
对测序数据进行分析，确定样本的甲基化水平；
基于已有样本的甲基化情况计算每个标志物的阈值，基于所述样本的某个标志物甲基化水平判读所述患者的患病情况，如果样本的某个标志物的甲基化水平超过阈值为癌症样本，如果低于阈值为健康人样本。
还例如，本申请提供了一种使用上述所述的试剂盒检测标志物的靶序列甲基化水平的方法，其包括下述步骤：
(1)抽取受试者外周血，分离血浆或血清；
(2)抽取血浆或血清中的游离DNA；
(3)使用试剂处理步骤(2)所得到的游离DNA，使5位未甲基化的胞嘧啶碱基转为为尿嘧啶或其他碱基，即标志物的靶序列的5位未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶或其他碱基，转化后的碱基在杂交性能方面不同于 5位未甲基化的胞嘧啶碱基，并且是可检测的；
(4)将经步骤(3)处理过的游离DNA与DNA聚合酶和所述标志物的靶序列的引物接触，使得所述经处理的标志物的靶序列被扩增以产生扩增产物或不被扩增；所述经处理的标志物的靶序列如果发生DNA聚合反应，会产生扩增产物；所述经处理的标志物的靶序列如果不发生DNA聚合反应，则不被扩增；
(5)用探针检测扩增产物；
(6)基于所述扩增产物是否存在，确定所述标志物的靶序列的至少一个CpG二核苷酸的甲基化状态，从而确定标志物的靶序列的甲基化水平。
本申请提供了一种芯片，其包含上述所述的标志物或者上述所述的探针组合物或者上述所述的组合物。
所述芯片又称为基因芯片，其测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。
所述芯片的制备主要是以玻璃片或硅片为载体，采用原位合成和微矩阵的方法将寡核苷酸片段或cDNA作为探针按顺序排列在载体上。
本申请所述芯片是基于重亚硫酸盐处理后的DNA序列杂交的信号探测，重亚硫酸盐处理是将非甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则保持不变，然后再将尿嘧啶转化为胸腺嘧啶，最后进行芯片杂交；最后根据荧光颜色判断加入碱基的类型，进而确定该位点是否被甲基化。
本申请提供了一种肺腺癌筛查的方法，其包括：
检测标志物的甲基化水平，以及
基于所述甲基化水平来判断受试者罹患肺腺癌的风险，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、 LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、 JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、 LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、 FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、 DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
实施例
本申请对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，如果无其他特别的说明，％表示wt％，即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
实施例1
筛选标志物
1)样本搜集：从合作的医院收集肺腺癌患者的血浆样本共55例，另外收集健康人血浆样本30例。进行如下的实验(详见1.1)。
2)候选标志物分析：针对测序数据得到的甲基化位点使用DSS软件进行健康人和肺腺癌患者的差异分析。过滤的标准：P<0.05，两组均值的差异大于0.1。得到454个差异甲基化区域。
3)标志物验证：针对上述的454个差异甲基化区域设计探针捕获，利用博尔诚血浆样本数据(肺腺癌样本个数＝2，健康人样本个数＝22)进行验证，最终得到38个能区分开肺腺癌与健康人的标志物。其序列分别为SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:38所示。
根据所得到的靶序列区域，定制探针组合物(panel)。
然后在血浆样本中验证，实验中采用Circulating NucleicAcidKit进行cfDNA制备，货号为55114。使用IDT的xGen Methyl-Seq LibKIT进行文库的制备，货号为10009824，其实验检测方法如下，
1.1.cfDNA提取纯化：
1.1.1.血浆样本制备：
4℃、2000g离心血液样本10min，将血浆转移到一个新的离心管中。4℃、 16000g离心血浆样本10min，根据使用的收集管类型，执行下一步，本实验中使用的收集管类型为其他。
1.1.2.裂解和结合：
1.1.2.1.吸取100μl、200μl、300μl、400μl、500μl QIAGEN蛋白酶K到 50ml离心管中。
1.1.2.2.加入1ml、2ml、3ml、4ml、5ml血浆或血清到上述50ml离心管中。
1.1.2.3.加入0.8ml、1.6ml、2.4ml、3.2ml、4.0ml Buffer ACL(含1.0μg carrierRNA)，盖上盖子并涡旋30s；注意：充分混匀保证裂解充分；立即进行下一步。
1.1.2.4.在60℃孵育30min。
1.1.2.5.取出离心管置于试验台上，旋开管盖。
1.1.2.6.加入1.8ml、3.6ml、5.4ml、7.2ml、9.0ml的Buffer ACB到50ml 离心管中；盖上盖子，混匀15-30s。
1.1.2.7.在冰上孵育裂解混合物5min。
1.1.2.8.在真空泵接头适配器上插入QIAampMini column，将20ml tubeextender插在柱子上；注：确保tube extender牢固的插在QIAamp Mini column 上，避免样本泄露。
1.1.2.9.将步骤7中的裂解物-缓冲液ACB混合物小心地加到QIAamp Mini column的tube extender中，打开真空泵；当所有裂解物完全从Mini column中抽出后，关闭真空泵，将压力释放至0mbar；小心地拆下并丢弃扩管器。
1.1.3.洗涤：
1.1.3.1.加入600μl Buffer ACW1到Mini column中，开盖状态，开启真空泵；所有液体通过柱膜后，关闭真空泵，释放压力到0mbar。
1.1.3.2.加入750μl Buffer ACW2到Mini column中，开盖状态，开启真空泵；所有液体通过柱膜后，关闭真空泵，释放压力到0mbar。
1.1.3.3.加入750μl乙醇(96-100％)到Mini column中，开盖状态，开启真空泵；所有液体通过柱膜后，关闭真空泵，释放压力到0mbar。
1.1.3.4.盖上QIAamp Mini column盖子，从适配器上取下，丢弃 VacConnector。将QIAamp Mini column放到干净的2ml收集管中，高速离心(20000g；14000rpm)离心3min。
1.1.3.5.将QIAamp Mini column放到新的2ml收集管中。打开管盖，室温孵育5min使膜完全干燥。
1.1.4.洗脱cfDNA：
1.1.4.1.将QIAamp Mini column放到1.5ml洗脱管中，丢弃14步中的 2ml收集管。加入20-150μl的Buffer AVE到Mini membrane的中心；盖上管盖，室温孵育3min。
1.1.4.2.离心机中全速(20000g；14000rpm)离心1min以洗脱核酸。
对于cfDNA样品，Agilent2100进行片段检测，直接Qubit用于后续的实验。
1.2.Bisulfite转化及纯化：
1.2.1..准备CT Conversion Reagent：
1.2.1.1..将700μl NF水、300μl M-Dilution Buffer和50μl M-DissolvingBuffer加入一管CT转化试剂中，室温混匀，频繁涡旋或摇晃10min。
1.2.1.2.混匀后进行分装，配置一次为10个反应量。
1.2.2.对DNA文库进行重亚硫酸盐转化，根据下表配制反应体系。
表1
组分 高浓度样本(1ng-2μg)体积
上步反应结束的样品 40μl
CT Conversion Reagent 110μl
Total volume 150μl
1.2.3.将移液器调至100μl，轻轻吸打混匀6次，然后分成两管，置于PCR仪上。
1.2.4.设置以下程序在PCR仪上进行反应：热盖温度105℃。
表2
温度 时间
98℃ 10min
64℃ 2.5h
4℃ ∞
1.2.5.取一个新的1.5ml离心管，加入600μl的M-Binding Buffer。
1.2.6.PCR结束后，简短离心将两管相同样本分别转移至上述对应的1.5 ml离心管中，混匀。
1.2.7.将上述混合好的样本加入Zymo-SpinTMIC Column中，颠倒混匀， 10,000x g离心30s。
1.2.8.向柱子中加入100μl的M-Wash Buffer，10,000x g离心30s。
1.2.9.向柱子中加入200μl的M-Desulphonation Buffer，室温静置15-20 min，10,000x g离心30s。
1.2.10.向柱子中加入200μl的M-Wash Buffer，10,000x g离心30s。
1.2.11.重复上一步一次。
1.2.12.将柱子放入一个新的收集管中，10,000x g再次离心30s。
1.2.13.将回收柱放入一个新的1.5ml EP管中，加入15μl LOW EDTA缓冲液到柱膜中央，10,000x g离心30s。
1.3.变性：
1.3.1.将PCR仪预热至95℃。
1.3.2.设置以下程序在PCR仪上进行反应：热盖温度105℃。
表3
温度 时间
95℃ ∞
95℃ 2min
95℃ ∞
1.3.3.孵育完成后，立即将试管放在冰上2min。
1.4.接头连接及纯化：
1.4.1.参照下表配置反应体系：
表4
1.4.2.设置以下程序在PCR仪上进行反应：热盖温度105℃。
表5
温度 时间
37℃ ∞
37℃ 15min
95℃ 2min
4℃ ∞
1.5.样本延伸及纯化：
1.5.1.参照下表配置反应体系：
表6
组分 体积
Reagent Y1 2μl
Enzyme Y2 42μl
totalVolume 44μl
1.5.2.设置以下程序在PCR仪上进行反应：热盖温度105℃。
表7
温度 时间
98℃ ∞
98℃ 1min
62℃ 2min
65℃ 5min
4℃ ∞
1.5.3.DNA保护缓冲液加入液体变成蓝色。轻轻吸打混匀，然后分成两管至于PCR仪上。
1.5.4.设置以下程序，并运行：热盖105℃。
表8
1.5.5.根据下表制备纯化体系：
表9
投入量 反应体积 磁珠量 体积
200bp(SeqCap Epi) 84μl 101μl(ratio:1.2) 15μl
1.5.6.向每个样本中加入上述比例磁珠进行回收，震荡混匀瞬离。
1.5.7.室温静置孵育5min。
1.5.8.震荡混匀瞬时离心放置在磁力架上吸附直至溶液呈请(～2min)，待溶液澄清后吸走上清。
1.5.9.加入200μl的80％乙醇清洗30s磁珠，丢弃上清液，小心地从中清除所有滴管内壁剩余的乙醇。
1.5.10.重复上述步骤。
1.5.11.加入上表推荐的low EDTA TE缓冲液最佳体积洗脱，后震荡混匀。
1.5.12.在室温下孵育2min。
1.5.13.放置磁力架上吸附直至溶液澄清(～2min)待溶液澄清后吸走上清。
1.5.14.将整个洗脱液转移到新的0.2mL PCR管中，确保洗脱液不包含磁珠。
1.6.接头连接及纯化：
1.6.1.根据下表制备文库反应体系：
表10
组分 体积
Buffer B1 3μl
Reagent B2 10μl
Enzyme B3 2μl
TotalVolume 15μl
1.6.2.设置以下程序，并运行：热盖0℃：
表11
温度 时间
25℃ ∞
25℃ 15min
4℃ ∞
1.6.3.根据下表制备纯化体系：
表12
投入量 反应体积 磁珠量 体积
200bp(SeqCap Epi) 30μl 36μl(ratio:1.2) 20μl
1.6.4.向每个样本中加入上述比例磁珠进行回收，震荡混匀瞬离。
1.6.5.室温静置孵育5min。
1.6.6.震荡混匀瞬时离心放置在磁力架上吸附直至溶液呈请(～2min)，待溶液澄清后吸走上清。
1.6.7.加入200μl的80％乙醇清洗30s磁珠，丢弃上清液，小心地从中清除所有滴管内壁剩余的乙醇。
1.6.8.重复上述步骤。
1.6.9.加入上表推荐的low EDTA TE缓冲液最佳体积洗脱，后震荡混匀。
1.6.10.在室温下孵育2min。
1.6.11.放置磁力架上吸附直至溶液澄清(～2min)待溶液澄清后吸走上清。
1.6.12.将整个洗脱液转移到新的0.2mL PCR管中，确保洗脱液不包含磁珠。
1.7.文库扩增及纯化：
1.7.1.根据下表制备文库反应体系：
表13
1.7.2.设置以下程序，并运行：热盖105℃：
表14
1.7.3.推荐循环数如下表：
表15
投入量 推荐循环数
20ng cfDNA 10-11
100ng gDNA 9-10
20ng gDNA 11-12
1.7.4.根据下表制备纯化体系：
表16
投入量 反应体积 磁珠量 体积
200bp(SeqCap Epi) 50μl 60μl(ratio:1.2) 22μl
1.7.5.将PCR产物转入1.5ml离心管中。
1.7.6.向每个样本中加入上述比例磁珠进行回收，震荡混匀瞬离。
1.7.7.室温静置孵育5min。
1.7.8.震荡混匀瞬时离心放置在磁力架上吸附直至溶液呈请(～2min)，待溶液澄清后吸走上清。
1.7.9.加入500μl的80％乙醇清洗30s磁珠，丢弃上清液，小心地从中清除所有滴管内壁剩余的乙醇。
1.7.10.重复上述步骤。
1.7.11.磁力架上放置5-10分钟，直到珠子干燥(避免过度干燥，过度干燥可能会导致DNA回收率降低)。
1.7.12.加入上表推荐的low EDTA TE缓冲液最佳体积洗脱，后震荡混匀。
1.7.13.在室温下孵育2min。
1.7.14.放置磁力架上吸附直至溶液澄清(～2min)待溶液澄清后吸走上清。
1.7.15.将整个洗脱液转移到新的0.2mL PCR管中，确保洗脱液不包含磁珠。
1.7.16.吸出1μl进行qubit标定并进行2100质检。
1.8.样本与探针杂交：
1.8.1.混合样本：
1.8.1.1.DNA文库用量参考下表，总用量可以用超过1500ng总量，但不大于4μg；
表17
混合样本数量 每个文库的用量 每个反应文库总量
1 500ng 500ng
2 500ng 1000ng
3 500ng 1500ng
4 375ng 1500ng
8 187.5ng 1500ng
1.8.1.2.计算好不同样本用量，在离心管中混合均匀。
1.8.1.3.在混合好的样本中分别加入以下预杂交试剂，混匀，尽量不要产生气泡。
表18
组分 体积
探针panel 4μl
通用封闭剂 8μl
封闭剂溶液 5μl
Methylation Enhancer 2μl
1.8.1.4.将以上混合好的预杂交试剂在真空浓缩仪中常温(如需加热，请用低温)烘干。
1.8.2.杂交：
1.8.2.1.将Fast Hybridization Mix在65℃孵育10min或直至所有沉淀溶解，迅速涡旋并加20μl至上步冻干的样本中重悬样本(请不要让杂交液恢复至室温)，指尖轻弹混匀，避免产生气泡。
1.8.2.2.快速离心去除气泡，加入30μl Hybridization Enhancer至以上试剂表面。
1.8.2.3.将PCR管放入预热好的PCR仪中杂交。
1.8.2.4.设置以下程序，并运行：热盖85℃。
表19
温度 时间
95℃ ∞
95℃ 5min
60℃ 15min-4h
1.8.3.结合：
1.8.3.1.震荡预平衡的链霉亲和素磁珠直至完全混匀，加入100μl磁珠至 1.5ml离心管中。
1.8.3.2.加入200μl结合缓冲液并用枪头吹打混匀。
1.8.3.3.将离心管置于磁力架上1min或至溶液澄清，弃去上清，取下离心管。
1.8.3.4.重复以上洗涤步骤2次，共3次。
1.8.3.5.最后一次清洗后，加入200μl结合缓冲液，震荡重悬使充分混匀。
1.8.3.6.杂交结束后，打开PCR仪盖子并迅速将杂交液全部转移至平衡好的磁珠中。
1.8.3.7.将加入了杂交液的磁珠在Shaker，rocker或rotator上室温充分混匀30min。
1.8.3.8.将离心管从混匀仪上取下，快速离心后在磁力架上放置1min，去上清，取下管子。
1.8.3.9.加入200μl预热的洗液1，混匀。
1.8.3.10.63℃或65℃孵育5min。
1.8.3.11.将离心管放置于磁力架上1min，去上清，取下管子。
1.8.3.12.重复以上步骤，再次加入200μl预热的洗液1，混匀。
1.8.3.13.在63℃或65℃孵育5min。
1.8.3.14.转移液体至一个新管子；磁力架上放置1min，去上清，取下管子。
1.8.3.15.加入200μl预热过的wash buffer 2，枪头混匀。
1.8.3.16.48℃孵育5min。
1.8.3.17.磁力架上放置1min，去上清，取下管子。
1.8.3.18.重复(步骤3.15-3.17)洗2次，共三次。
1.8.3.19.最后一次，用10μl枪头吸干净洗液。
1.8.3.20.加入45μl水，混匀，冰上孵育该溶液。
1.8.4.捕获后PCR扩增、纯化和质检：
1.8.4.1.设置以下程序，并运行：热盖105℃。
表20
1.8.4.2.混合1.3中的磁珠混合物，吸取22.5μl至0.2mlPCR管中。
1.8.4.3.将0.2ml PCR管中加入2.5μl扩增引物，25μl KAPA HiFiHotStartReadyMix，共50μl反应体系。
1.8.4.4.用枪头温和混匀，快速离心后放入PCR仪中，开始扩增。
1.8.4.5.涡旋充分混匀预平衡的DNA纯化磁珠。
1.8.4.6.在扩增后的PCR产物中加入90μl(1.8*)DNA纯化磁珠，涡旋充分混匀。
1.8.4.7.室温孵育5min。
1.8.4.8.将离心管置于磁力架上1min，待溶液澄清后去上清。
1.8.4.9.不用将离心管从磁力架上取下，直接加入现配的200μl 80％乙醇，孵育1min，弃上清；重复一次80％乙醇洗涤(共2次)，保持离心管在磁力架上。
1.8.4.10.用10μl枪头小心去除残留的乙醇，室温放置5-10min或至磁珠干燥，请注意不要使磁珠过干。
1.8.4.11.从磁力架上取下管子并加入32μl水，用枪头吹打充分混匀，室温孵育2min
1.8.4.12.将离心管置于磁力架上3min或至溶液澄清。
1.8.4.13.转移30μl上清至干净的0.2ml离心管。
1.8.4.14.取1μl文库使用Qubit进行定量，记录文库浓度。
1.8.4.15.取1μl样品使用Agilent2100进行文库片段长度测定。
1.8.4.16.使用Illumina高通量测序平台进行测序。
1.9.甲基化生信分析流程。大致如下：使用fastp质控软件查看测序质量，去除低质量的读段，然后采用Bismark比对软件将质控后的干净的数据比对到参考基因组上，采用Bismark_methylation_extractor软件提取相应的甲基化位点。最后，计算出靶区域的甲基化水平，该值结果如果超过阈值判读为癌症，如果低于阈值判读为正常。
实施例2
基于22例肺腺癌样本和22例正常人样本的数据集，利用实施例1所述甲基化建库方法，利用在不同组别(肺腺癌和正常)的甲基化水平差异筛选出与肺腺癌相关的生物标记物，并对位点数据在正常与肺腺癌样本中进行独立数据集的验证，一共筛选出38个最显著区分正常与癌症样本的DNA 片段，该38个甲基化生物标记物(以下简称位点或者marker)及判别阈值见表21。
其中甲基化水平阈值计算方法为：根据数据集(包含每个样本的类型和甲基化水平)绘制ROC曲线，ROC曲线上的最佳阈值点所对应的混淆矩阵将是我们计算敏感度(sensitivity)、特异度(specificity)以及准确度等指标的依据。通常情况下我们会通过约登指数(Youden index)进行选择。约登指数也称正确指数，是指敏感度和特异度之和减去1：约登指数＝敏感度+特异度–1。约登指数范围取值介于0-1之间，代表分类模型发现真正病人与非病人的总能力。约登指数越大，表示分类模型性能越好，每个标志物的敏感度和特异度如表21所示。从表21可以看出，本申请所述标志物的AUC值较高。
表21 38个甲基化标记物的具体表现数据
/>
实施例3
利用额外收集的6例人样本(S1-3为健康人样本，S4-6为肺腺癌患者样本)，采用本申请的甲基化标志物检测方法，按实施例1的方法采集外周血；建库，并通过Illumina平台测序；测序数据经上述生物信息的分析流程，得到每个标志物的甲基化水平，根据每个标志物的阈值，预测所述患者的患病情况，如果超过阈值为癌症样本，如果低于阈值为健康人样本，具体结果如下表22所示：
其中判读结果，0代表分类为正常，即健康；1代表分类为异常，即肿瘤。
表22样本的甲基化值以及判读结果
/>
综上所述，本申请的发明人获得了与肺腺癌相关的甲基化基因，并确定了肺腺癌甲基化基因发生甲基化异常的靶序列，并且，通过这些甲基化基因的靶序列，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离DNA的检测，并且本申请所述的组合物能够实现实时监测，具有更高的灵敏度和准确度。
以上所述，仅是本申请的较佳实施例而已，并非是对本申请作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本申请技术方案内容，依据本申请的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本申请技术方案的保护范围。
本申请使用的序列表如表23所示：
表23
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
序列表
<110> 博尔诚（北京）科技有限公司
<120> 用于肺腺癌筛查的标志物、探针组合物及其应用
<130> PF02263
<160> 342
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 86
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 1
cgtgttgggc ggcaggggtc ggggtgatcc caagaggtgc gtgtatggag gggtatagct 60
cagcctccca gctcgggtgg ggagcg 86
<210> 2
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 2
cgggaagcct ggaggatgtc agggtcaccc acagaggacc tccactcccc catctgggat 60
gaggtggctc ctacacaccc cgacactccc ctccg 95
<210> 3
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 3
gctataccag taaaccagcc gctacaccag tatgccagcc gctacaccag taagccaacc 60
g 61
<210> 4
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 4
gagcaaatgt gagctcctgg ggagtccgtc agaaggagcc cagatggaat ggac 54
<210> 5
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 5
cggcctccca aagtgctggg attacaggca tgagccaccg tgcctggcca gtttcgcttt 60
ttccg 65
<210> 6
<211> 84
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 6
cgagggaagg tctcatgaag tttcggtgca gtctgggact ctagctgttt tcgtaacaag 60
ttgtttggca tgagacccag tcac 84
<210> 7
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 7
cgtcatgttt ctatagattc tcctcaactg tattggaatg ggaccaaaaa ttctacaatt 60
acg 63
<210> 8
<211> 67
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 8
ggattaaagc aatcaatctg ttatcaaaaa tctctgtcgg aagattatta ggaccaccca 60
attcacc 67
<210> 9
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 9
gccctgctct ttcttccgat cccacaggaa gtgcccctgc actgtcatca ctctcacgag 60
gacg 64
<210> 10
<211> 98
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 10
cgataggttt gtcgcctcta cctataaatc ttcccactat tttgctacat agacgggtgt 60
gctcttttag ctgttcttag gtagctcgtc tggtttcg 98
<210> 11
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 11
cgcctctgtt tctacaccca ggggaacctc tccccaggga ctgcgcgcgc gtgc 54
<210> 12
<211> 117
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 12
cgccttctca tcaatcgccc acatcacctg agacgtaaac catggctgaa tcatccgcta 60
cctccacgct aacggtgcct caatattctt catctgcctc ttcctacaca tcggccg 117
<210> 13
<211> 91
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 13
cgtggtttct tactgctcct agagtactgt cggcctccag ggccccgcgg ggccgggctg 60
tccgcccttc agtttgttcc ttgaactaga c 91
<210> 14
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 14
gcgccatcgc ccaggtgaca gtgcgagact ccatctcaaa aaaaaaaaaa aaacccg 57
<210> 15
<211> 116
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 15
gttaaagtaa aaacagaaaa atttctggcc ttgtcgtgta tacattctag atgcaagctt 60
gtccaacctg cagctctcgg gatgcatgtg gcccaggaca gctttagaat gtgacg 116
<210> 16
<211> 110
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 16
cggcaaatct taccccgcct gtttaccaaa aacatcacct ctagcattac cagtattaga 60
ggcaccgcct gcccagtgac atatgtttaa cggccgtggt accctaaccg 110
<210> 17
<211> 91
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 17
cggcctccca ttcagggaag cgggggtgcc caccacgcag gctgcccacc taggggagaa 60
gaggctgtct gccgcaggtg tgcctagcac g 91
<210> 18
<211> 114
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 18
cgccaccggg catccgggcg gcgggcaggg cgcggagaac cctgccggcc tgaagagcca 60
gggcaacgag ctgttccgaa gcgggcagtt cgccgaggcg gccggcaagt actc 114
<210> 19
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 19
cgagtgacca gtgctgtgtg gaggaggcca agggcggccc ctgggaaacc gggcttcaac 60
agtacaagga aaagaaactt gctctgtttt gtaagagcg 99
<210> 20
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 20
gtggatgtac aacaggccac ttgctcctac catatgctcc gtgaggcaga gaccaaaata 60
tctgctccaa atgtcacg 78
<210> 21
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 21
cggccccact ctacccagcc ctctctgccc ctggcccgga gcagccccgg gtgggggac 59
<210> 22
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 22
ggccgtcatc tcccggccag agcccgacca cacagccaca gccatggcca cagccacagc 60
cacggacacg gccacggcca cagccacagc cacg 94
<210> 23
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 23
cgcccggcta atttttgtat ttttagtaga gacagggttt cgccatgatg gccaggctga 60
tcagggtcta tttttttcg 79
<210> 24
<211> 103
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 24
gcacatgcac gcatgcgcgc gcgcgcgcgc gcgcgcacac acacacacac acacacacac 60
acaattgcgt tcttcatgac ataatcactt aagttcatat ccg 103
<210> 25
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 25
cggggtttat cgattacaga acaggctcct ctagagggat atgaagcacc gccaggtcct 60
ttgagtttta agctgtggct cgtagtgttc tggcg 95
<210> 26
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 26
cgcttctgtg cctgccccag aagatttgct gagggcaatc gcttcctggt gccg 54
<210> 27
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 27
cgcactgtcg cccgagctgg tgtgcagtgg tgcaatctca actcactgca acctccgcct 60
cccggcttca agc 73
<210> 28
<211> 85
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 28
cggcttggtt agctttctag agaatctttg catagctctg gcatgagtag cggagtgata 60
gagaactctg tgggagtgtg cgtgc 85
<210> 29
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 29
cgacactcac tgtcgcccag gctggagtgc agaggcgcga tctcggctca ctgcaacctc 60
cgtctcccg 69
<210> 30
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 30
cgcccccata cgcgtgtgcc gcgcgtgtac ccaaccccca atccctgcag cagcaaaagg 60
cccg 64
<210> 31
<211> 97
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 31
cgccctggaa acagaaaccg tctgtcattc taaggccatt gtggttggga gtgattcaga 60
ctcattgcag ctccttccag ccttcaaaga tctcacc 97
<210> 32
<211> 100
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 32
cgaggtagat ttgcaactct ggctggtggg gtggcccgag ccaggggggc ccacgttcgg 60
ctgctgacgg cggtccacag gaggggaggg tctgttgggc 100
<210> 33
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 33
cgctgctcca ccagtgctgc gagcgccgtc agaataggcc gcgtgggctc ccagccttcc 60
cctcg 65
<210> 34
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 34
cgaggatgga cagaactcct gagtagcgag ggtgcctgcc gggcgcgagg aggaggggga 60
agacgaggaa gac 73
<210> 35
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 35
cgggttgctg agcgcgcacg cagccacccg agggaagatc cccgccgccc ggggtctcgg 60
agaggggtta gaactgaccc agggccacg 89
<210> 36
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 36
gcagcgcgca gtcctcgggc gccgcgggcg gtgggaagaa ggcagcctcg cc 52
<210> 37
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 37
cgtaagggga tttctaaagc aggcaatccc tgtagccgca gagaataaac g 51
<210> 38
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 38
ggccccaaag ccccggcccg gccaggggtg ggagagtctc ctccagcacc tcttttgtgg 60
gcccg 65
<210> 39
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 39
acacaaacct aaaccaccgc tccccacccg aactaaaaaa ctaaactata cccctccata 60
cacgcacctc ttaaaatcac cccgacccct accgcccaac acgcccaaac taacaatata 120
<210> 40
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 40
catattacca acttaaacgt attaaacgac aaaaatcgaa ataatcccaa aaaatacgta 60
tataaaaaaa tataactcaa cctcccaact cgaataaaaa acgataactc aaacctatat 120
<210> 41
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 41
aacattaata atacgaaaaa aaatatcgaa atatataaaa accacctcat cccaaataaa 60
aaaataaaaa tcctctataa ataaccctaa catcctccaa acttcccgaa cctacaaaat 120
<210> 42
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 42
attctataaa ttcgaaaaac ctaaaaaata tcaaaatcac ccacaaaaaa cctccactcc 60
cccatctaaa ataaaataac tcctacacac cccgacactc ccctccgcac caccaatacc 120
<210> 43
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 43
actaatataa taattaacat actaatataa cgattaactt actaatataa cgactaacat 60
actaatataa cgactaattt actaatataa cgactaacat actaatataa cgactaacat 120
<210> 44
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 44
ataccaaccg ctacaccaat ataccaaccg ctataccaat aaaccaaccg ctacaccaat 60
ataccaaccg ctacaccaat aaaccaaccg ctacaccaat ataccaacca ctacaccaat 120
<210> 45
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 45
tctatctaca tccctctaat cacccccaac ctcgtccatt ccatctaaac tccttctaac 60
gaactcccca aaaactcaca tttactcgac ctctttatct aatttatcac tttaacaact 120
<210> 46
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 46
aattatcaaa ataacaaatt aaacaaaaaa accgaacaaa tataaactcc taaaaaatcc 60
gtcaaaaaaa acccaaataa aataaacgaa actaaaaata accaaaaaaa tacaaacaaa 120
<210> 47
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 47
aaacacattt ctataataaa atctcattcg aaaaaaacga aactaaccaa acacgataac 60
tcatacctat aatcccaaca ctttaaaaaa ccgaaaaaaa taaataacct aaaatcaaaa 120
<210> 48
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 48
tcctaacctc aaattaccca ccctcctcga cctcccaaaa tactaaaatt acaaacataa 60
accaccgtac ctaaccaatt tcgctttttc cgaataaaac tccatcataa aaatatactc 120
<210> 49
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 49
caatcacgaa aaacactcgt aactaaatct cataccaaac aacttattac gaaaacaact 60
aaaatcccaa actacaccga aacttcataa aaccttccct cgctatacac gaacaaatat 120
<210> 50
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 50
acacttatcc gtacacaacg aaaaaaaatc tcataaaatt tcgatacaat ctaaaactct 60
aactattttc gtaacaaatt atttaacata aaacccaatc acgaataccc ttcgtaacta 120
<210> 51
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 51
ttctattcat ttaaataaat ctaacaatcc gtaattataa aatttttaat cccattccaa 60
tacaattaaa aaaaatctat aaaaacataa cgtaacactc tacattttaa ctctcaaata 120
<210> 52
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 52
tacctaaaaa ttaaaatata aaatattacg tcatatttct ataaattctc ctcaactata 60
ttaaaataaa accaaaaatt ctacaattac gaattatcaa acccattcaa ataaacaaaa 120
<210> 53
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 53
aaaacaaata atcattaaaa ttaaaacgat aaattaaata atcctaataa tcttccgaca 60
aaaattttta ataacaaatt aattacttta atccgatttt acaaaccaat ataactacgc 120
<210> 54
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 54
acgcaactat attaatctat aaaaccgaat taaaacaatc aatctattat caaaaatctc 60
tatcgaaaaa ttattaaaac cacccaattc accgtttcaa ttctaataac catttaccct 120
<210> 55
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 55
ccaccttccc ccaaattaac acaaataacg tcctcgtaaa aataataaca atacaaaaac 60
acttcctata aaatcgaaaa aaaaaacaaa acgaacacaa aatctccaaa tcctatatac 120
<210> 56
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 56
atacataaaa cttaaaaacc ttatatccgc cctactcttt cttccgatcc cacaaaaaat 60
acccctacac tatcatcact ctcacgaaaa cgtcacctat actaacctaa aaaaaaataa 120
<210> 57
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 57
actaaaaccc ccgaaaccaa acgaactacc taaaaacaac taaaaaaaca cacccgtcta 60
tataacaaaa taataaaaaa atttataaat aaaaacgaca aacctatcga acctaataat 120
<210> 58
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 58
atcaccaaac tcgataaatt tatcgcctct acctataaat cttcccacta ttttactaca 60
taaacgaata tactctttta actattctta aataactcgt ctaatttcga aaaccttaac 120
<210> 59
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 59
cacacacaca cacacacaca cacacaccta cacgcacgcg cgcgcaatcc ctaaaaaaaa 60
attcccctaa atataaaaac aaaaacgtta aatctaaaaa aaaaattaaa tacaaatcta 120
<210> 60
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 60
caaacttaca tctaattctt tctccaaatc taacgcctct atttctacac ccaaaaaaac 60
ctctccccaa aaactacgcg cgcgtacgta caaatatata tatatatata tatatatata 120
<210> 61
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 61
ctcgaccgat atataaaaaa aaacaaataa aaaatattaa aacaccgtta acgtaaaaat 60
aacgaataat tcaaccataa tttacgtctc aaataatata aacgattaat aaaaaaacga 120
<210> 62
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 62
ccgccttctc atcaatcgcc cacatcacct aaaacgtaaa ccataactaa atcatccgct 60
acctccacgc taacgatacc tcaatattct tcatctacct cttcctacac atcgaccgaa 120
<210> 63
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 63
ctaacacaaa accacgtcta attcaaaaaa caaactaaaa aacgaacaac ccgaccccgc 60
gaaaccctaa aaaccgacaa tactctaaaa acaataaaaa accacgaaca aaataaccga 120
<210> 64
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 64
ccgaccatcc tactcgtaat ttcttactac tcctaaaata ctatcgacct ccaaaacccc 60
gcgaaaccga actatccgcc cttcaattta ttccttaaac taaacgtaat cttatatcaa 120
<210> 65
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 65
tcaaacccca atttttacct ataaatttat aacgaatttt tttttttttt ttaaaataaa 60
atctcgcact atcacctaaa cgataacgcg atctcgactc actacaacct ccacctcccg 120
<210> 66
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 66
cgaaaaataa aaattacaat aaaccgaaat cgcgccatcg cccaaataac aatacgaaac 60
tccatctcaa aaaaaaaaaa aaaacccgtt ataaatccat aaacaaaaat taaaatttaa 120
<210> 67
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 67
atcgtcacat tctaaaacta tcctaaacca catacatccc gaaaactaca aattaaacaa 60
acttacatct aaaatatata cacgacaaaa ccaaaaattt ttctattttt actttaacga 120
<210> 68
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 68
tcgttaaaat aaaaacaaaa aaatttctaa ccttatcgta tatacattct aaatacaaac 60
ttatccaacc tacaactctc gaaatacata taacccaaaa caactttaaa atataacgat 120
<210> 69
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 69
ttacacgatt aaaataccac gaccgttaaa catatatcac taaacaaacg atacctctaa 60
tactaataat actaaaaata atatttttaa taaacaaacg aaataaaatt taccgaattc 120
<210> 70
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 70
aaactcgaca aatcttaccc cgcctattta ccaaaaacat cacctctaac attaccaata 60
ttaaaaacac cgcctaccca ataacatata tttaacgacc gtaataccct aaccgtacaa 120
<210> 71
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 71
caaaaaaacc caacccgtac taaacacacc tacgacaaac aacctcttct cccctaaata 60
aacaacctac gtaataaaca cccccgcttc cctaaataaa aaaccgaaca aattaaaaat 120
<210> 72
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 72
accctcaacc tactcgacct cccattcaaa aaaacgaaaa tacccaccac gcaaactacc 60
cacctaaaaa aaaaaaaact atctaccgca aatataccta acacgaacta aattcttcta 120
<210> 73
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 73
accgaatact taccgaccgc ctcgacgaac tacccgcttc gaaacaactc gttaccctaa 60
ctcttcaaac cgacaaaatt ctccgcgccc tacccgccgc ccgaataccc gataacgccg 120
<210> 74
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 74
cgacgccacc gaacatccga acgacgaaca aaacgcgaaa aaccctaccg acctaaaaaa 60
ccaaaacaac gaactattcc gaaacgaaca attcgccgaa acgaccgaca aatactcgac 120
<210> 75
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 75
aaaaaaaaac acgctcttac aaaacaaaac aaatttcttt tccttatact attaaaaccc 60
gatttcccaa aaaccgccct taacctcctc cacacaacac taatcactcg taacaacatc 120
<210> 76
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 76
aatactacta cgaataacca atactatata aaaaaaacca aaaacgaccc ctaaaaaacc 60
gaacttcaac aatacaaaaa aaaaaaactt actctatttt ataaaaacgt attccttttc 120
<210> 77
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 77
aacttaccct aacattattt tcgtaacatt taaaacaaat attttaatct ctacctcacg 60
aaacatataa taaaaacaaa taacctatta tacatccacg acataaatac aaacataaac 120
<210> 78
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 78
acccatatct atatctatac cgtaaatata caacaaacca cttactccta ccatatactc 60
cgtaaaacaa aaaccaaaat atctactcca aatatcacga aaacaatacc aaaataaacc 120
<210> 79
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 79
caattacata atacttaatt ctcctcccca cgtcccccac ccgaaactac tccgaaccaa 60
aaacaaaaaa aactaaataa aataaaaccg aaaacttaaa aacaaaaatc ttctctaaaa 120
<210> 80
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 80
tcccaaaaaa aactcctacc tccaaactcc cgaccccact ctacccaacc ctctctaccc 60
ctaacccgaa acaaccccga ataaaaaacg taaaaaaaaa aactaaacat catataatta 120
<210> 81
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 81
ccttacaaaa tatcgtaact ataactataa ccgtaaccgt atccgtaact ataactataa 60
ccataactat aactatataa tcgaactcta accgaaaaat aacgaccgac aactccacct 120
<210> 82
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 82
aaataaaact atcgaccgtc atctcccgac caaaacccga ccacacaacc acaaccataa 60
ccacaaccac aaccacgaac acgaccacga ccacaaccac aaccacgaca ccctacaaaa 120
<210> 83
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 83
ctaatttttc ctaattaata ccgaaaaaaa taaaccctaa tcaacctaac catcataacg 60
aaaccctatc tctactaaaa atacaaaaat taaccgaacg taataatata aacctataat 120
<210> 84
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 84
attacaaact tacaccacca cgcccgacta atttttatat ttttaataaa aacaaaattt 60
cgccataata accaaactaa tcaaaatcta tttttttcga tactaatcaa aaaaaatcaa 120
<210> 85
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 85
ttactattac gaatataaac ttaaataatt atatcataaa aaacgcaatt atatatatat 60
atatatatat atatatacgc gcgcgcgcgc gcgcgcgcat acgtacatat acgtacatac 120
<210> 86
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 86
atatacacgc acatacacgc atacgcgcgc gcgcgcgcgc gcgcacacac acacacacac 60
acacacacac aattacgttc ttcataacat aatcacttaa attcatatcc gtaacaacaa 120
<210> 87
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 87
caacaaaact actcgccaaa acactacgaa ccacaactta aaactcaaaa aacctaacga 60
tacttcatat ccctctaaaa aaacctattc tataatcgat aaaccccgat caacctcaaa 120
<210> 88
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 88
tttaaaatta atcgaaattt atcgattaca aaacaaactc ctctaaaaaa atataaaaca 60
ccgccaaatc ctttaaattt taaactataa ctcgtaatat tctaacgaac aattttatta 120
<210> 89
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 89
tctaaatatc ccaataaata acctcaaaaa actcgacacc aaaaaacgat taccctcaac 60
aaatcttcta aaacaaacac aaaaacgaat ttacccacat cctacattca taataaatca 120
<210> 90
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 90
taatttatca taaatacaaa atataaacaa actcgcttct atacctaccc caaaaaattt 60
actaaaaaca atcgcttcct aataccgaac tccttaaaat tatttactaa aacatctaaa 120
<210> 91
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 91
ttaaaaaact aaaacaaaaa aatcgcttaa aaccgaaaaa cgaaaattac aataaattaa 60
aattacacca ctacacacca actcgaacga caatacgaaa ctccatctca aaaaaaaaaa 120
<210> 92
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 92
tttttttttt taaaataaaa tctcgcacta tcgcccgaac taatatacaa taatacaatc 60
tcaactcact acaacctccg cctcccgact tcaaacgatt ctcctacctc aacctcccaa 120
<210> 93
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 93
acacacacac acacacacgc acgcacactc ccacaaaatt ctctatcact ccgctactca 60
taccaaaact atacaaaaat tctctaaaaa actaaccaaa ccgaaaatta aatcaaaatt 120
<210> 94
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 94
aaccctaact caactctcga cttaattaac tttctaaaaa atctttacat aactctaaca 60
taaataacga aataataaaa aactctataa aaatatacgt acgtatatat atatatatat 120
<210> 95
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 95
actaaaacaa aaaactcact tacacccgaa aaacgaaaat tacaataaac cgaaatcgcg 60
cctctacact ccaacctaaa cgacaataaa tatcgcccaa actaaaaaaa aaaaaaaaaa 120
<210> 96
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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tttctttttt tttctccaac ctaaacgaca ctcactatcg cccaaactaa aatacaaaaa 60
cgcgatctcg actcactaca acctccgtct cccgaataca aataaatctc ctatctcaac 120
<210> 97
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 97
tctaccctct ccccacaaac aaaatacccg aaccttttac tactacaaaa attaaaaatt 60
aaatacacgc gcgacacacg cgtataaaaa cgcatactca atacgaaaac tacgctcata 120
<210> 98
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 98
cataaacgca acccccgcac taaacatacg cccccatacg cgtataccgc gcgtataccc 60
aacccccaat ccctacaaca acaaaaaacc cgaacactct acttataaaa aaaaaataaa 120
<210> 99
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 99
aaactcttat ccgataaaat ctttaaaaac taaaaaaaac tacaataaat ctaaatcact 60
cccaaccaca ataaccttaa aataacaaac gatttctatt tccaaaacgt attctaaatt 120
<210> 100
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 100
aatttaaaac acgccctaaa aacaaaaacc gtctatcatt ctaaaaccat tataattaaa 60
aataattcaa actcattaca actccttcca accttcaaaa atctcaccga ataaaaacct 120
<210> 101
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 101
aaactccccc gcccaacaaa ccctcccctc ctataaaccg ccgtcaacaa ccgaacgtaa 60
acccccctaa ctcgaaccac cccaccaacc aaaattacaa atctacctcg acccacttac 120
<210> 102
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 102
acaaataaac cgaaataaat ttacaactct aactaataaa ataacccgaa ccaaaaaaac 60
ccacgttcga ctactaacga cgatccacaa aaaaaaaaaa tctattaaac gaaaaaacct 120
<210> 103
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 103
cccccaaact ccaaatccta aaaacaaccg aaaaaaaaac taaaaaccca cgcgacctat 60
tctaacgacg ctcgcaacac taataaaaca acgatacccc gtcttaccac aaatcataca 120
<210> 104
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 104
tacataatct ataacaaaac gaaacaccgc tactccacca atactacgaa cgccgtcaaa 60
ataaaccgcg taaactccca accttcccct cgactacctc caaaacctaa aatttaaaaa 120
<210> 105
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 105
taatactccc tattcctcct cctcgtcttc ctcgtcttcc ccctcctcct cgcgcccgac 60
aaacaccctc gctactcaaa aattctatcc atcctcgttt tatataacta actcaattct 120
<210> 106
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 106
aaaactaaat caaccacaca aaacgaaaat aaacaaaact cctaaataac gaaaatacct 60
accgaacgcg aaaaaaaaaa aaaaaacgaa aaaaacgaaa aaaaaaaata aaaaacacca 120
<210> 107
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 107
cccctcttct ttcttacgta accctaaatc aattctaacc cctctccgaa accccgaacg 60
acgaaaatct tccctcgaat aactacgtac gcgctcaaca acccgataaa taaaaaccta 120
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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caaacctcca cccaccgaat tactaaacgc gcacgcaacc acccgaaaaa aaatccccgc 60
cgcccgaaat ctcgaaaaaa aattaaaact aacccaaaac cacgcaaaaa aaaaaaaaaa 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 109
acccgaacgc tcgcctctaa acgacctaaa acccgacgaa actaccttct tcccaccgcc 60
cgcgacgccc gaaaactacg cgctacgacc cttccgcgcg ccctacgcgc ccaccgaatt 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 110
aactcgataa acgcgtaaaa cgcgcgaaaa aaccgcaacg cgcaatcctc gaacgccgcg 60
aacgataaaa aaaaaacaac ctcgccgaac tccaaaccgt ccaaaaacga acgctcgaac 120
<210> 111
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 111
aaatataact ataaaaaatt accattttaa aaaaacgttt attctctacg actacaaaaa 60
ttacctactt taaaaatccc cttacgctaa ttaactcaaa aatcccttca aaatcaaaaa 120
<210> 112
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 112
ttcttaactc taaaaaaact tttaaattaa tcaacgtaaa aaaatttcta aaacaaacaa 60
tccctataac cgcaaaaaat aaacgccttc ccaaaataac aacttcccac aaccacattt 120
<210> 113
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 113
attacacgaa aataacgcta aaaaataacg aacccacaaa aaaaatacta aaaaaaactc 60
tcccacccct aaccgaaccg aaactttaaa accgaaaaat tcacaatacg cgatttatcc 120
<210> 114
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 114
aaacaaaccg cgtactataa accttccgac cccaaaaccc cgacccgacc aaaaataaaa 60
aaatctcctc caacacctct tttataaacc cgccaccccc caacgttatc cccgtataat 120
<210> 115
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 115
acacaaacct aaaccaccac tccccaccca aactaaaaaa ctaaactata cccctccata 60
cacacacctc ttaaaatcac cccaacccct accacccaac acacccaaac taacaatata 120
<210> 116
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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catattacca acttaaacat attaaacaac aaaaatcaaa ataatcccaa aaaatacata 60
tataaaaaaa tataactcaa cctcccaact caaataaaaa acaataactc aaacctatat 120
<210> 117
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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aacattaata atacaaaaaa aaatatcaaa atatataaaa accacctcat cccaaataaa 60
aaaataaaaa tcctctataa ataaccctaa catcctccaa acttcccaaa cctacaaaat 120
<210> 118
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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attctataaa ttcaaaaaac ctaaaaaata tcaaaatcac ccacaaaaaa cctccactcc 60
cccatctaaa ataaaataac tcctacacac cccaacactc ccctccacac caccaatacc 120
<210> 119
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 119
actaatataa taattaacat actaatataa caattaactt actaatataa caactaacat 60
actaatataa caactaattt actaatataa caactaacat actaatataa caactaacat 120
<210> 120
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 120
ataccaacca ctacaccaat ataccaacca ctataccaat aaaccaacca ctacaccaat 60
ataccaacca ctacaccaat aaaccaacca ctacaccaat ataccaacca ctacaccaat 120
<210> 121
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 121
tctatctaca tccctctaat cacccccaac ctcatccatt ccatctaaac tccttctaac 60
aaactcccca aaaactcaca tttactcaac ctctttatct aatttatcac tttaacaact 120
<210> 122
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 122
aattatcaaa ataacaaatt aaacaaaaaa accaaacaaa tataaactcc taaaaaatcc 60
atcaaaaaaa acccaaataa aataaacaaa actaaaaata accaaaaaaa tacaaacaaa 120
<210> 123
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 123
aaacacattt ctataataaa atctcattca aaaaaaacaa aactaaccaa acacaataac 60
tcatacctat aatcccaaca ctttaaaaaa ccaaaaaaaa taaataacct aaaatcaaaa 120
<210> 124
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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tcctaacctc aaattaccca ccctcctcaa cctcccaaaa tactaaaatt acaaacataa 60
accaccatac ctaaccaatt tcactttttc caaataaaac tccatcataa aaatatactc 120
<210> 125
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 125
caatcacaaa aaacactcat aactaaatct cataccaaac aacttattac aaaaacaact 60
aaaatcccaa actacaccaa aacttcataa aaccttccct cactatacac aaacaaatat 120
<210> 126
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 126
acacttatcc atacacaaca aaaaaaaatc tcataaaatt tcaatacaat ctaaaactct 60
aactattttc ataacaaatt atttaacata aaacccaatc acaaataccc ttcataacta 120
<210> 127
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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ttctattcat ttaaataaat ctaacaatcc ataattataa aatttttaat cccattccaa 60
tacaattaaa aaaaatctat aaaaacataa cataacactc tacattttaa ctctcaaata 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 128
tacctaaaaa ttaaaatata aaatattaca tcatatttct ataaattctc ctcaactata 60
ttaaaataaa accaaaaatt ctacaattac aaattatcaa acccattcaa ataaacaaaa 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 129
aaaacaaata atcattaaaa ttaaaacaat aaattaaata atcctaataa tcttccaaca 60
aaaattttta ataacaaatt aattacttta atccaatttt acaaaccaat ataactacac 120
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 130
acacaactat attaatctat aaaaccaaat taaaacaatc aatctattat caaaaatctc 60
tatcaaaaaa ttattaaaac cacccaattc accatttcaa ttctaataac catttaccct 120
<210> 131
<211> 120
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 131
ccaccttccc ccaaattaac acaaataaca tcctcataaa aataataaca atacaaaaac 60
acttcctata aaatcaaaaa aaaaaacaaa acaaacacaa aatctccaaa tcctatatac 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 132
atacataaaa cttaaaaacc ttatatccac cctactcttt cttccaatcc cacaaaaaat 60
acccctacac tatcatcact ctcacaaaaa catcacctat actaacctaa aaaaaaataa 120
<210> 133
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 133
actaaaaccc ccaaaaccaa acaaactacc taaaaacaac taaaaaaaca cacccatcta 60
tataacaaaa taataaaaaa atttataaat aaaaacaaca aacctatcaa acctaataat 120
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 134
atcaccaaac tcaataaatt tatcacctct acctataaat cttcccacta ttttactaca 60
taaacaaata tactctttta actattctta aataactcat ctaatttcaa aaaccttaac 120
<210> 135
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 135
cacacacaca cacacacaca cacacaccta cacacacaca cacacaatcc ctaaaaaaaa 60
attcccctaa atataaaaac aaaaacatta aatctaaaaa aaaaattaaa tacaaatcta 120
<210> 136
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 136
caaacttaca tctaattctt tctccaaatc taacacctct atttctacac ccaaaaaaac 60
ctctccccaa aaactacaca cacatacata caaatatata tatatatata tatatatata 120
<210> 137
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 137
ctcaaccaat atataaaaaa aaacaaataa aaaatattaa aacaccatta acataaaaat 60
aacaaataat tcaaccataa tttacatctc aaataatata aacaattaat aaaaaaacaa 120
<210> 138
<211> 120
<212> DNA
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<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 138
ccaccttctc atcaatcacc cacatcacct aaaacataaa ccataactaa atcatccact 60
acctccacac taacaatacc tcaatattct tcatctacct cttcctacac atcaaccaaa 120
<210> 139
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 139
ctaacacaaa accacatcta attcaaaaaa caaactaaaa aacaaacaac ccaaccccac 60
aaaaccctaa aaaccaacaa tactctaaaa acaataaaaa accacaaaca aaataaccaa 120
<210> 140
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 140
ccaaccatcc tactcataat ttcttactac tcctaaaata ctatcaacct ccaaaacccc 60
acaaaaccaa actatccacc cttcaattta ttccttaaac taaacataat cttatatcaa 120
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 141
tcaaacccca atttttacct ataaatttat aacaaatttt tttttttttt ttaaaataaa 60
atctcacact atcacctaaa caataacaca atctcaactc actacaacct ccacctccca 120
<210> 142
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 142
caaaaaataa aaattacaat aaaccaaaat cacaccatca cccaaataac aatacaaaac 60
tccatctcaa aaaaaaaaaa aaaacccatt ataaatccat aaacaaaaat taaaatttaa 120
<210> 143
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 143
atcatcacat tctaaaacta tcctaaacca catacatccc aaaaactaca aattaaacaa 60
acttacatct aaaatatata cacaacaaaa ccaaaaattt ttctattttt actttaacaa 120
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<212> DNA
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 144
tcattaaaat aaaaacaaaa aaatttctaa ccttatcata tatacattct aaatacaaac 60
ttatccaacc tacaactctc aaaatacata taacccaaaa caactttaaa atataacaat 120
<210> 145
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 145
ttacacaatt aaaataccac aaccattaaa catatatcac taaacaaaca atacctctaa 60
tactaataat actaaaaata atatttttaa taaacaaaca aaataaaatt taccaaattc 120
<210> 146
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 146
aaactcaaca aatcttaccc cacctattta ccaaaaacat cacctctaac attaccaata 60
ttaaaaacac cacctaccca ataacatata tttaacaacc ataataccct aaccatacaa 120
<210> 147
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 147
caaaaaaacc caacccatac taaacacacc tacaacaaac aacctcttct cccctaaata 60
aacaacctac ataataaaca cccccacttc cctaaataaa aaaccaaaca aattaaaaat 120
<210> 148
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 148
accctcaacc tactcaacct cccattcaaa aaaacaaaaa tacccaccac acaaactacc 60
cacctaaaaa aaaaaaaact atctaccaca aatataccta acacaaacta aattcttcta 120
<210> 149
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 149
accaaatact taccaaccac ctcaacaaac tacccacttc aaaacaactc attaccctaa 60
ctcttcaaac caacaaaatt ctccacaccc tacccaccac ccaaataccc aataacacca 120
<210> 150
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 150
caacaccacc aaacatccaa acaacaaaca aaacacaaaa aaccctacca acctaaaaaa 60
ccaaaacaac aaactattcc aaaacaaaca attcaccaaa acaaccaaca aatactcaac 120
<210> 151
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 151
aaaaaaaaac acactcttac aaaacaaaac aaatttcttt tccttatact attaaaaccc 60
aatttcccaa aaaccaccct taacctcctc cacacaacac taatcactca taacaacatc 120
<210> 152
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 152
aatactacta caaataacca atactatata aaaaaaacca aaaacaaccc ctaaaaaacc 60
aaacttcaac aatacaaaaa aaaaaaactt actctatttt ataaaaacat attccttttc 120
<210> 153
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 153
aacttaccct aacattattt tcataacatt taaaacaaat attttaatct ctacctcaca 60
aaacatataa taaaaacaaa taacctatta tacatccaca acataaatac aaacataaac 120
<210> 154
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 154
acccatatct atatctatac cataaatata caacaaacca cttactccta ccatatactc 60
cataaaacaa aaaccaaaat atctactcca aatatcacaa aaacaatacc aaaataaacc 120
<210> 155
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 155
caattacata atacttaatt ctcctcccca catcccccac ccaaaactac tccaaaccaa 60
aaacaaaaaa aactaaataa aataaaacca aaaacttaaa aacaaaaatc ttctctaaaa 120
<210> 156
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 156
tcccaaaaaa aactcctacc tccaaactcc caaccccact ctacccaacc ctctctaccc 60
ctaacccaaa acaaccccaa ataaaaaaca taaaaaaaaa aactaaacat catataatta 120
<210> 157
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 157
ccttacaaaa tatcataact ataactataa ccataaccat atccataact ataactataa 60
ccataactat aactatataa tcaaactcta accaaaaaat aacaaccaac aactccacct 120
<210> 158
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 158
aaataaaact atcaaccatc atctcccaac caaaacccaa ccacacaacc acaaccataa 60
ccacaaccac aaccacaaac acaaccacaa ccacaaccac aaccacaaca ccctacaaaa 120
<210> 159
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 159
ctaatttttc ctaattaata ccaaaaaaaa taaaccctaa tcaacctaac catcataaca 60
aaaccctatc tctactaaaa atacaaaaat taaccaaaca taataatata aacctataat 120
<210> 160
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 160
attacaaact tacaccacca cacccaacta atttttatat ttttaataaa aacaaaattt 60
caccataata accaaactaa tcaaaatcta tttttttcaa tactaatcaa aaaaaatcaa 120
<210> 161
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 161
ttactattac aaatataaac ttaaataatt atatcataaa aaacacaatt atatatatat 60
atatatatat atatatacac acacacacac acacacacat acatacatat acatacatac 120
<210> 162
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 162
atatacacac acatacacac atacacacac acacacacac acacacacac acacacacac 60
acacacacac aattacattc ttcataacat aatcacttaa attcatatcc ataacaacaa 120
<210> 163
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 163
caacaaaact actcaccaaa acactacaaa ccacaactta aaactcaaaa aacctaacaa 60
tacttcatat ccctctaaaa aaacctattc tataatcaat aaaccccaat caacctcaaa 120
<210> 164
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 164
tttaaaatta atcaaaattt atcaattaca aaacaaactc ctctaaaaaa atataaaaca 60
ccaccaaatc ctttaaattt taaactataa ctcataatat tctaacaaac aattttatta 120
<210> 165
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 165
tctaaatatc ccaataaata acctcaaaaa actcaacacc aaaaaacaat taccctcaac 60
aaatcttcta aaacaaacac aaaaacaaat ttacccacat cctacattca taataaatca 120
<210> 166
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 166
taatttatca taaatacaaa atataaacaa actcacttct atacctaccc caaaaaattt 60
actaaaaaca atcacttcct aataccaaac tccttaaaat tatttactaa aacatctaaa 120
<210> 167
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 167
ttaaaaaact aaaacaaaaa aatcacttaa aaccaaaaaa caaaaattac aataaattaa 60
aattacacca ctacacacca actcaaacaa caatacaaaa ctccatctca aaaaaaaaaa 120
<210> 168
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 168
tttttttttt taaaataaaa tctcacacta tcacccaaac taatatacaa taatacaatc 60
tcaactcact acaacctcca cctcccaact tcaaacaatt ctcctacctc aacctcccaa 120
<210> 169
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 169
acacacacac acacacacac acacacactc ccacaaaatt ctctatcact ccactactca 60
taccaaaact atacaaaaat tctctaaaaa actaaccaaa ccaaaaatta aatcaaaatt 120
<210> 170
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 170
aaccctaact caactctcaa cttaattaac tttctaaaaa atctttacat aactctaaca 60
taaataacaa aataataaaa aactctataa aaatatacat acatatatat atatatatat 120
<210> 171
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 171
actaaaacaa aaaactcact tacacccaaa aaacaaaaat tacaataaac caaaatcaca 60
cctctacact ccaacctaaa caacaataaa tatcacccaa actaaaaaaa aaaaaaaaaa 120
<210> 172
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 172
tttctttttt tttctccaac ctaaacaaca ctcactatca cccaaactaa aatacaaaaa 60
cacaatctca actcactaca acctccatct cccaaataca aataaatctc ctatctcaac 120
<210> 173
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 173
tctaccctct ccccacaaac aaaataccca aaccttttac tactacaaaa attaaaaatt 60
aaatacacac acaacacaca catataaaaa cacatactca atacaaaaac tacactcata 120
<210> 174
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 174
cataaacaca acccccacac taaacataca cccccataca catataccac acatataccc 60
aacccccaat ccctacaaca acaaaaaacc caaacactct acttataaaa aaaaaataaa 120
<210> 175
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 175
aaactcttat ccaataaaat ctttaaaaac taaaaaaaac tacaataaat ctaaatcact 60
cccaaccaca ataaccttaa aataacaaac aatttctatt tccaaaacat attctaaatt 120
<210> 176
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 176
aatttaaaac acaccctaaa aacaaaaacc atctatcatt ctaaaaccat tataattaaa 60
aataattcaa actcattaca actccttcca accttcaaaa atctcaccaa ataaaaacct 120
<210> 177
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 177
aaactccccc acccaacaaa ccctcccctc ctataaacca ccatcaacaa ccaaacataa 60
acccccctaa ctcaaaccac cccaccaacc aaaattacaa atctacctca acccacttac 120
<210> 178
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 178
acaaataaac caaaataaat ttacaactct aactaataaa ataacccaaa ccaaaaaaac 60
ccacattcaa ctactaacaa caatccacaa aaaaaaaaaa tctattaaac aaaaaaacct 120
<210> 179
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 179
cccccaaact ccaaatccta aaaacaacca aaaaaaaaac taaaaaccca cacaacctat 60
tctaacaaca ctcacaacac taataaaaca acaatacccc atcttaccac aaatcataca 120
<210> 180
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 180
tacataatct ataacaaaac aaaacaccac tactccacca atactacaaa caccatcaaa 60
ataaaccaca taaactccca accttcccct caactacctc caaaacctaa aatttaaaaa 120
<210> 181
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 181
taatactccc tattcctcct cctcatcttc ctcatcttcc ccctcctcct cacacccaac 60
aaacaccctc actactcaaa aattctatcc atcctcattt tatataacta actcaattct 120
<210> 182
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 182
aaaactaaat caaccacaca aaacaaaaat aaacaaaact cctaaataac aaaaatacct 60
accaaacaca aaaaaaaaaa aaaaaacaaa aaaaacaaaa aaaaaaaata aaaaacacca 120
<210> 183
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 183
cccctcttct ttcttacata accctaaatc aattctaacc cctctccaaa accccaaaca 60
acaaaaatct tccctcaaat aactacatac acactcaaca acccaataaa taaaaaccta 120
<210> 184
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 184
caaacctcca cccaccaaat tactaaacac acacacaacc acccaaaaaa aaatccccac 60
cacccaaaat ctcaaaaaaa aattaaaact aacccaaaac cacacaaaaa aaaaaaaaaa 120
<210> 185
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 185
acccaaacac tcacctctaa acaacctaaa acccaacaaa actaccttct tcccaccacc 60
cacaacaccc aaaaactaca cactacaacc cttccacaca ccctacacac ccaccaaatt 120
<210> 186
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 186
aactcaataa acacataaaa cacacaaaaa aaccacaaca cacaatcctc aaacaccaca 60
aacaataaaa aaaaaacaac ctcaccaaac tccaaaccat ccaaaaacaa acactcaaac 120
<210> 187
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 187
aaatataact ataaaaaatt accattttaa aaaaacattt attctctaca actacaaaaa 60
ttacctactt taaaaatccc cttacactaa ttaactcaaa aatcccttca aaatcaaaaa 120
<210> 188
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 188
ttcttaactc taaaaaaact tttaaattaa tcaacataaa aaaatttcta aaacaaacaa 60
tccctataac cacaaaaaat aaacaccttc ccaaaataac aacttcccac aaccacattt 120
<210> 189
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 189
attacacaaa aataacacta aaaaataaca aacccacaaa aaaaatacta aaaaaaactc 60
tcccacccct aaccaaacca aaactttaaa accaaaaaat tcacaataca caatttatcc 120
<210> 190
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 190
aaacaaacca catactataa accttccaac cccaaaaccc caacccaacc aaaaataaaa 60
aaatctcctc caacacctct tttataaacc caccaccccc caacattatc cccatataat 120
<210> 191
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 191
ttgggcgtgt tgggcggtag gggtcggggt gattttaaga ggtgcgtgta tggaggggta 60
tagtttagtt ttttagttcg ggtggggagc ggtggt 96
<210> 192
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 192
gttatcgttt tttattcgag ttgggaggtt gagttatatt tttttatata cgtatttttt 60
gggattattt cgatttttgt cgtttaatac gtttaa 96
<210> 193
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 193
aggttcggga agtttggagg atgttagggt tatttataga ggatttttat ttttttattt 60
gggatgaggt ggtttttata tatttcgata ttttttttcg tatta 105
<210> 194
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 194
tggtgcggag gggagtgtcg gggtgtgtag gagttatttt attttagatg ggggagtgga 60
ggttttttgt gggtgatttt gatatttttt aggtttttcg aattt 105
<210> 195
<211> 71
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 195
tagtcgttat attagtaaat tagtcgttat attagtatgt tagtcgttat attagtaagt 60
taatcgttat a 71
<210> 196
<211> 71
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 196
tgtagcggtt ggtttattgg tgtagcggtt ggtatattgg tgtagcggtt ggtttattgg 60
tatagcggtt g 71
<210> 197
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 197
aggtcgagta aatgtgagtt tttggggagt tcgttagaag gagtttagat ggaatggacg 60
aggt 64
<210> 198
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 198
gtttcgttta ttttatttgg gttttttttg acggattttt taggagttta tatttgttcg 60
gttt 64
<210> 199
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 199
tttttcggtt ttttaaagtg ttgggattat aggtatgagt tatcgtgttt ggttagtttc 60
gtttttttcg aatga 75
<210> 200
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 200
ttattcggaa aaagcgaaat tggttaggta cggtggttta tgtttgtaat tttagtattt 60
tgggaggtcg aggag 75
<210> 201
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 201
tatagcgagg gaaggtttta tgaagtttcg gtgtagtttg ggattttagt tgttttcgta 60
ataagttgtt tggtatgaga tttagttacg agtg 94
<210> 202
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 202
tattcgtgat tgggttttat gttaaataat ttgttacgaa aatagttaga gttttagatt 60
gtatcgaaat tttatgagat tttttttcgt tgtg 94
<210> 203
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 203
tgttacgtta tgtttttata gatttttttt aattgtattg gaatgggatt aaaaatttta 60
taattacgga ttg 73
<210> 204
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 204
taattcgtaa ttgtagaatt tttggtttta ttttaatata gttgaggaga atttatagaa 60
atatgacgta ata 73
<210> 205
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 205
aaatcggatt aaagtaatta atttgttatt aaaaattttt gtcggaagat tattaggatt 60
atttaattta tcgtttt 77
<210> 206
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 206
gaaacggtga attgggtggt tttaataatt tttcgataga gatttttgat aatagattga 60
ttgttttaat tcggttt 77
<210> 207
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 207
tgttcgtttt gttttttttt tcgattttat aggaagtgtt tttgtattgt tattattttt 60
acgaggacgt tatt 74
<210> 208
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 208
ggtgacgttt tcgtgagagt gatgatagtg taggggtatt ttttgtggga tcggaagaaa 60
gagtagggcg gata 74
<210> 209
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 209
aggttcgata ggtttgtcgt ttttatttat aaattttttt attattttgt tatatagacg 60
ggtgtgtttt tttagttgtt tttaggtagt tcgtttggtt tcgggggt 108
<210> 210
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 210
gttttcgaaa ttagacgagt tatttaagaa tagttaaaag agtatattcg tttatgtagt 60
aaaatagtgg gaagatttat aggtagaggc gataaattta tcgagttt 108
<210> 211
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 211
tttaacgttt ttgtttttat atttagggga attttttttt agggattgcg cgcgcgtgcg 60
tgta 64
<210> 212
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 212
tgtacgtacg cgcgcgtagt ttttggggag aggttttttt gggtgtagaa atagaggcgt 60
taga 64
<210> 213
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 213
ttaatcgttt ttttattaat cgtttatatt atttgagacg taaattatgg ttgaattatt 60
cgttattttt acgttaacgg tgttttaata ttttttattt gttttttttt atatatcggt 120
cgaggtt 127
<210> 214
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 214
agtttcggtc gatgtgtagg aagaggtaga tgaagaatat tgaggtatcg ttagcgtgga 60
ggtagcggat gatttagtta tggtttacgt tttaggtgat gtgggcgatt gatgagaagg 120
cggttga 127
<210> 215
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 215
ttgttcgtgg ttttttattg tttttagagt attgtcggtt tttagggttt cgcggggtcg 60
ggttgttcgt tttttagttt gttttttgaa ttagacgtgg t 101
<210> 216
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 216
attacgttta gtttaaggaa taaattgaag ggcggatagt tcggtttcgc ggggttttgg 60
aggtcgatag tattttagga gtagtaagaa attacgagta g 101
<210> 217
<211> 67
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 217
agatcgcgtt atcgtttagg tgatagtgcg agattttatt ttaaaaaaaa aaaaaaaatt 60
cgttata 67
<210> 218
<211> 67
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 218
tataacgggt tttttttttt tttttgagat ggagtttcgt attgttattt gggcgatggc 60
gcgattt 67
<210> 219
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 219
atatcgttaa agtaaaaata gaaaaatttt tggttttgtc gtgtatatat tttagatgta 60
agtttgttta atttgtagtt ttcgggatgt atgtggttta ggatagtttt agaatgtgac 120
gatttt 126
<210> 220
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 220
aaaatcgtta tattttaaag ttgttttggg ttatatgtat ttcgagagtt gtaggttgga 60
taagtttgta tttagaatgt atatacgata aggttagaaa tttttttgtt tttattttaa 120
cgatgt 126
<210> 221
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 221
gaattcggta aattttattt cgtttgttta ttaaaaatat tatttttagt attattagta 60
ttagaggtat cgtttgttta gtgatatatg tttaacggtc gtggtatttt aatcgtgtaa 120
<210> 222
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 222
ttgtacggtt agggtattac ggtcgttaaa tatatgttat tgggtaggcg gtgtttttaa 60
tattggtaat gttagaggtg atgtttttgg taaataggcg gggtaagatt tgtcgagttt 120
<210> 223
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 223
ttgttcggtt ttttatttag ggaagcgggg gtgtttatta cgtaggttgt ttatttaggg 60
gagaagaggt tgtttgtcgt aggtgtgttt agtacgggtt g 101
<210> 224
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 224
tagttcgtgt taggtatatt tgcggtagat agtttttttt tttttaggtg ggtagtttgc 60
gtggtgggta ttttcgtttt tttgaatggg aggtcgagta g 101
<210> 225
<211> 124
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 225
ggcggcgtta tcgggtattc gggcggcggg tagggcgcgg agaattttgt cggtttgaag 60
agttagggta acgagttgtt tcgaagcggg tagttcgtcg aggcggtcgg taagtattcg 120
gcgg 124
<210> 226
<211> 124
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 226
tcgtcgagta tttgtcggtc gtttcggcga attgttcgtt tcggaatagt tcgttgtttt 60
ggttttttag gtcggtaggg tttttcgcgt tttgttcgtc gttcggatgt tcggtggcgt 120
cgtt 124
<210> 227
<211> 109
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 227
tgttacgagt gattagtgtt gtgtggagga ggttaagggc ggtttttggg aaatcgggtt 60
ttaatagtat aaggaaaaga aatttgtttt gttttgtaag agcgtgttt 109
<210> 228
<211> 109
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 228
gaatacgttt ttataaaata gagtaagttt tttttttttg tattgttgaa gttcggtttt 60
ttaggggtcg tttttggttt tttttatata gtattggtta ttcgtagta 109
<210> 229
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 229
atgtcgtgga tgtataatag gttatttgtt tttattatat gtttcgtgag gtagagatta 60
aaatatttgt tttaaatgtt acgaaaat 88
<210> 230
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 230
gttttcgtga tatttggagt agatattttg gtttttgttt tacggagtat atggtaggag 60
taagtggttt gttgtatatt tacggtat 88
<210> 231
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 231
gttttcggtt ttattttatt tagttttttt tgtttttggt tcggagtagt ttcgggtggg 60
ggacgtggg 69
<210> 232
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 232
tttacgtttt ttattcgggg ttgtttcggg ttaggggtag agagggttgg gtagagtggg 60
gtcgggagt 69
<210> 233
<211> 104
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 233
ttgtcggtcg ttatttttcg gttagagttc gattatatag ttatagttat ggttatagtt 60
atagttacgg atacggttac ggttatagtt atagttacga tatt 104
<210> 234
<211> 104
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 234
ggtgtcgtgg ttgtggttgt ggtcgtggtc gtgttcgtgg ttgtggttgt ggttatggtt 60
gtggttgtgt ggtcgggttt tggtcgggag atgacggtcg atag 104
<210> 235
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 235
tattacgttc ggttaatttt tgtattttta gtagagatag ggtttcgtta tgatggttag 60
gttgattagg gtttattttt ttcggtatt 89
<210> 236
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 236
agtatcgaaa aaaatagatt ttgattagtt tggttattat ggcgaaattt tgtttttatt 60
aaaaatataa aaattagtcg ggcgtggtg 89
<210> 237
<211> 113
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 237
tgtacgtata tgtacgtatg cgcgcgcgcg cgcgcgcgcg tatatatata tatatatata 60
tatatataat tgcgtttttt atgatataat tatttaagtt tatattcgta ata 113
<210> 238
<211> 113
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 238
tgttacggat atgaatttaa gtgattatgt tatgaagaac gtaattgtgt gtgtgtgtgt 60
gtgtgtgtgt gtgcgcgcgc gcgcgcgcgc gcgtatgcgt gtatgtgcgt gta 113
<210> 239
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 239
ttgatcgggg tttatcgatt atagaatagg tttttttaga gggatatgaa gtatcgttag 60
gttttttgag ttttaagttg tggttcgtag tgttttggcg agtag 105
<210> 240
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 240
ttgttcgtta gaatattacg agttatagtt taaaatttaa aggatttggc ggtgttttat 60
atttttttag aggagtttgt tttgtaatcg ataaatttcg attaa 105
<210> 241
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 241
aaattcgttt ttgtgtttgt tttagaagat ttgttgaggg taatcgtttt ttggtgtcga 60
gttt 64
<210> 242
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 242
gagttcggta ttaggaagcg attgttttta gtaaattttt tggggtaggt atagaagcga 60
gttt 64
<210> 243
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 243
agtttcgtat tgtcgttcga gttggtgtgt agtggtgtaa ttttaattta ttgtaatttt 60
cgtttttcgg ttttaagcga ttt 83
<210> 244
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 244
gaatcgtttg aagtcgggag gcggaggttg tagtgagttg agattgtatt attgtatatt 60
agttcgggcg atagtgcgag att 83
<210> 245
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 245
attttcggtt tggttagttt tttagagaat ttttgtatag ttttggtatg agtagcggag 60
tgatagagaa ttttgtggga gtgtgcgtgc gtgtg 95
<210> 246
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 246
tatacgtacg tatattttta tagagttttt tattatttcg ttatttatgt tagagttatg 60
taaagatttt ttagaaagtt aattaagtcg agagt 95
<210> 247
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 247
ttgggcgata tttattgtcg tttaggttgg agtgtagagg cgcgatttcg gtttattgta 60
attttcgttt ttcgggtgt 79
<210> 248
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 248
gtattcggga gacggaggtt gtagtgagtc gagatcgcgt ttttgtattt tagtttgggc 60
gatagtgagt gtcgtttag 79
<210> 249
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 249
gtatgcgttt ttatacgcgt gtgtcgcgcg tgtatttaat ttttaatttt tgtagtagta 60
aaaggttcgg gtat 74
<210> 250
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 250
gtgttcgggt tttttgttgt tgtagggatt gggggttggg tatacgcgcg gtatacgcgt 60
atgggggcgt atgt 74
<210> 251
<211> 107
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 251
gaatacgttt tggaaataga aatcgtttgt tattttaagg ttattgtggt tgggagtgat 60
ttagatttat tgtagttttt tttagttttt aaagatttta tcggata 107
<210> 252
<211> 107
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 252
tattcggtga gatttttgaa ggttggaagg agttgtaatg agtttgaatt atttttaatt 60
ataatggttt tagaatgata gacggttttt gtttttaggg cgtgttt 107
<210> 253
<211> 110
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 253
tgggtcgagg tagatttgta attttggttg gtggggtggt tcgagttagg ggggtttacg 60
ttcggttgtt gacggcggtt tataggaggg gagggtttgt tgggcggggg 110
<210> 254
<211> 110
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 254
ttttcgttta atagattttt tttttttgtg gatcgtcgtt agtagtcgaa cgtgggtttt 60
tttggttcgg gttattttat tagttagagt tgtaaattta tttcggttta 110
<210> 255
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 255
ggtatcgttg ttttattagt gttgcgagcg tcgttagaat aggtcgcgtg ggtttttagt 60
ttttttttcg gttgt 75
<210> 256
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 256
gtagtcgagg ggaaggttgg gagtttacgc ggtttatttt gacggcgttc gtagtattgg 60
tggagtagcg gtgtt 75
<210> 257
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 257
taaaacgagg atggatagaa tttttgagta gcgagggtgt ttgtcgggcg cgaggaggag 60
ggggaagacg aggaagacga gga 83
<210> 258
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 258
ttttcgtttt tttcgttttt tttttttttt tcgcgttcgg taggtatttt cgttatttag 60
gagttttgtt tattttcgtt ttg 83
<210> 259
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 259
tttatcgggt tgttgagcgc gtacgtagtt attcgaggga agattttcgt cgttcggggt 60
ttcggagagg ggttagaatt gatttagggt tacgtaaga 99
<210> 260
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 260
ttttgcgtgg ttttgggtta gttttaattt tttttcgaga tttcgggcgg cggggatttt 60
ttttcgggtg gttgcgtgcg cgtttagtaa ttcggtggg 99
<210> 261
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 261
gggtcgtagc gcgtagtttt cgggcgtcgc gggcggtggg aagaaggtag tttcgtcggg 60
tt 62
<210> 262
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 262
agttcggcga ggttgttttt tttttatcgt tcgcggcgtt cgaggattgc gcgttgcggt 60
tt 62
<210> 263
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 263
attagcgtaa ggggattttt aaagtaggta atttttgtag tcgtagagaa taaacgtttt 60
t 61
<210> 264
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 264
gaaggcgttt attttttgcg gttataggga ttgtttgttt tagaaatttt tttacgttga 60
t 61
<210> 265
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 265
ttttcggttt taaagtttcg gttcggttag gggtgggaga gtttttttta gtattttttt 60
tgtgggttcg ttatt 75
<210> 266
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 266
ggtggcgggt ttataaaaga ggtgttggag gagatttttt tatttttggt cgggtcgggg 60
ttttggggtc ggaag 75
<210> 267
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 267
ttgggtgtgt tgggtggtag gggttggggt gattttaaga ggtgtgtgta tggaggggta 60
tagtttagtt ttttagtttg ggtggggagt ggtggt 96
<210> 268
<211> 96
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 268
gttattgttt tttatttgag ttgggaggtt gagttatatt tttttatata tgtatttttt 60
gggattattt tgatttttgt tgtttaatat gtttaa 96
<210> 269
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 269
aggtttggga agtttggagg atgttagggt tatttataga ggatttttat ttttttattt 60
gggatgaggt ggtttttata tattttgata tttttttttg tatta 105
<210> 270
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 270
tggtgtggag gggagtgttg gggtgtgtag gagttatttt attttagatg ggggagtgga 60
ggttttttgt gggtgatttt gatatttttt aggttttttg aattt 105
<210> 271
<211> 71
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 271
tagttgttat attagtaaat tagttgttat attagtatgt tagttgttat attagtaagt 60
taattgttat a 71
<210> 272
<211> 71
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 272
tgtagtggtt ggtttattgg tgtagtggtt ggtatattgg tgtagtggtt ggtttattgg 60
tatagtggtt g 71
<210> 273
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 273
aggttgagta aatgtgagtt tttggggagt ttgttagaag gagtttagat ggaatggatg 60
aggt 64
<210> 274
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 274
gttttgttta ttttatttgg gttttttttg atggattttt taggagttta tatttgtttg 60
gttt 64
<210> 275
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 275
ttttttggtt ttttaaagtg ttgggattat aggtatgagt tattgtgttt ggttagtttt 60
gttttttttg aatga 75
<210> 276
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 276
ttatttggaa aaagtgaaat tggttaggta tggtggttta tgtttgtaat tttagtattt 60
tgggaggttg aggag 75
<210> 277
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 277
tatagtgagg gaaggtttta tgaagttttg gtgtagtttg ggattttagt tgtttttgta 60
ataagttgtt tggtatgaga tttagttatg agtg 94
<210> 278
<211> 94
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 278
tatttgtgat tgggttttat gttaaataat ttgttatgaa aatagttaga gttttagatt 60
gtattgaaat tttatgagat ttttttttgt tgtg 94
<210> 279
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 279
tgttatgtta tgtttttata gatttttttt aattgtattg gaatgggatt aaaaatttta 60
taattatgga ttg 73
<210> 280
<211> 73
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 280
taatttgtaa ttgtagaatt tttggtttta ttttaatata gttgaggaga atttatagaa 60
atatgatgta ata 73
<210> 281
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 281
aaattggatt aaagtaatta atttgttatt aaaaattttt gttggaagat tattaggatt 60
atttaattta ttgtttt 77
<210> 282
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 282
gaaatggtga attgggtggt tttaataatt ttttgataga gatttttgat aatagattga 60
ttgttttaat ttggttt 77
<210> 283
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 283
tgtttgtttt gttttttttt ttgattttat aggaagtgtt tttgtattgt tattattttt 60
atgaggatgt tatt 74
<210> 284
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 284
ggtgatgttt ttgtgagagt gatgatagtg taggggtatt ttttgtggga ttggaagaaa 60
gagtagggtg gata 74
<210> 285
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 285
aggtttgata ggtttgttgt ttttatttat aaattttttt attattttgt tatatagatg 60
ggtgtgtttt tttagttgtt tttaggtagt ttgtttggtt ttgggggt 108
<210> 286
<211> 108
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 286
gtttttgaaa ttagatgagt tatttaagaa tagttaaaag agtatatttg tttatgtagt 60
aaaatagtgg gaagatttat aggtagaggt gataaattta ttgagttt 108
<210> 287
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 287
tttaatgttt ttgtttttat atttagggga attttttttt agggattgtg tgtgtgtgtg 60
tgta 64
<210> 288
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 288
tgtatgtatg tgtgtgtagt ttttggggag aggttttttt gggtgtagaa atagaggtgt 60
taga 64
<210> 289
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 289
ttaattgttt ttttattaat tgtttatatt atttgagatg taaattatgg ttgaattatt 60
tgttattttt atgttaatgg tgttttaata ttttttattt gttttttttt atatattggt 120
tgaggtt 127
<210> 290
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 290
agttttggtt gatgtgtagg aagaggtaga tgaagaatat tgaggtattg ttagtgtgga 60
ggtagtggat gatttagtta tggtttatgt tttaggtgat gtgggtgatt gatgagaagg 120
tggttga 127
<210> 291
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 291
ttgtttgtgg ttttttattg tttttagagt attgttggtt tttagggttt tgtggggttg 60
ggttgtttgt tttttagttt gttttttgaa ttagatgtgg t 101
<210> 292
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 292
attatgttta gtttaaggaa taaattgaag ggtggatagt ttggttttgt ggggttttgg 60
aggttgatag tattttagga gtagtaagaa attatgagta g 101
<210> 293
<211> 67
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 293
agattgtgtt attgtttagg tgatagtgtg agattttatt ttaaaaaaaa aaaaaaaatt 60
tgttata 67
<210> 294
<211> 67
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 294
tataatgggt tttttttttt tttttgagat ggagttttgt attgttattt gggtgatggt 60
gtgattt 67
<210> 295
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 295
atattgttaa agtaaaaata gaaaaatttt tggttttgtt gtgtatatat tttagatgta 60
agtttgttta atttgtagtt tttgggatgt atgtggttta ggatagtttt agaatgtgat 120
gatttt 126
<210> 296
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 296
aaaattgtta tattttaaag ttgttttggg ttatatgtat tttgagagtt gtaggttgga 60
taagtttgta tttagaatgt atatatgata aggttagaaa tttttttgtt tttattttaa 120
tgatgt 126
<210> 297
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 297
gaatttggta aattttattt tgtttgttta ttaaaaatat tatttttagt attattagta 60
ttagaggtat tgtttgttta gtgatatatg tttaatggtt gtggtatttt aattgtgtaa 120
<210> 298
<211> 120
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 298
ttgtatggtt agggtattat ggttgttaaa tatatgttat tgggtaggtg gtgtttttaa 60
tattggtaat gttagaggtg atgtttttgg taaataggtg gggtaagatt tgttgagttt 120
<210> 299
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 299
ttgtttggtt ttttatttag ggaagtgggg gtgtttatta tgtaggttgt ttatttaggg 60
gagaagaggt tgtttgttgt aggtgtgttt agtatgggtt g 101
<210> 300
<211> 101
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 300
tagtttgtgt taggtatatt tgtggtagat agtttttttt tttttaggtg ggtagtttgt 60
gtggtgggta tttttgtttt tttgaatggg aggttgagta g 101
<210> 301
<211> 124
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 301
ggtggtgtta ttgggtattt gggtggtggg tagggtgtgg agaattttgt tggtttgaag 60
agttagggta atgagttgtt ttgaagtggg tagtttgttg aggtggttgg taagtatttg 120
gtgg 124
<210> 302
<211> 124
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 302
ttgttgagta tttgttggtt gttttggtga attgtttgtt ttggaatagt ttgttgtttt 60
ggttttttag gttggtaggg ttttttgtgt tttgtttgtt gtttggatgt ttggtggtgt 120
tgtt 124
<210> 303
<211> 109
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 303
tgttatgagt gattagtgtt gtgtggagga ggttaagggt ggtttttggg aaattgggtt 60
ttaatagtat aaggaaaaga aatttgtttt gttttgtaag agtgtgttt 109
<210> 304
<211> 109
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 304
gaatatgttt ttataaaata gagtaagttt tttttttttg tattgttgaa gtttggtttt 60
ttaggggttg tttttggttt tttttatata gtattggtta tttgtagta 109
<210> 305
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 305
atgttgtgga tgtataatag gttatttgtt tttattatat gttttgtgag gtagagatta 60
aaatatttgt tttaaatgtt atgaaaat 88
<210> 306
<211> 88
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 306
gtttttgtga tatttggagt agatattttg gtttttgttt tatggagtat atggtaggag 60
taagtggttt gttgtatatt tatggtat 88
<210> 307
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 307
gtttttggtt ttattttatt tagttttttt tgtttttggt ttggagtagt tttgggtggg 60
ggatgtggg 69
<210> 308
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 308
tttatgtttt ttatttgggg ttgttttggg ttaggggtag agagggttgg gtagagtggg 60
gttgggagt 69
<210> 309
<211> 104
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 309
ttgttggttg ttattttttg gttagagttt gattatatag ttatagttat ggttatagtt 60
atagttatgg atatggttat ggttatagtt atagttatga tatt 104
<210> 310
<211> 104
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 310
ggtgttgtgg ttgtggttgt ggttgtggtt gtgtttgtgg ttgtggttgt ggttatggtt 60
gtggttgtgt ggttgggttt tggttgggag atgatggttg atag 104
<210> 311
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 311
tattatgttt ggttaatttt tgtattttta gtagagatag ggttttgtta tgatggttag 60
gttgattagg gtttattttt tttggtatt 89
<210> 312
<211> 89
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 312
agtattgaaa aaaatagatt ttgattagtt tggttattat ggtgaaattt tgtttttatt 60
aaaaatataa aaattagttg ggtgtggtg 89
<210> 313
<211> 113
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 313
tgtatgtata tgtatgtatg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tatatatata tatatatata 60
tatatataat tgtgtttttt atgatataat tatttaagtt tatatttgta ata 113
<210> 314
<211> 113
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 314
tgttatggat atgaatttaa gtgattatgt tatgaagaat gtaattgtgt gtgtgtgtgt 60
gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtatgtgt gtatgtgtgt gta 113
<210> 315
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 315
ttgattgggg tttattgatt atagaatagg tttttttaga gggatatgaa gtattgttag 60
gttttttgag ttttaagttg tggtttgtag tgttttggtg agtag 105
<210> 316
<211> 105
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 316
ttgtttgtta gaatattatg agttatagtt taaaatttaa aggatttggt ggtgttttat 60
atttttttag aggagtttgt tttgtaattg ataaattttg attaa 105
<210> 317
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 317
aaatttgttt ttgtgtttgt tttagaagat ttgttgaggg taattgtttt ttggtgttga 60
gttt 64
<210> 318
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 318
gagtttggta ttaggaagtg attgttttta gtaaattttt tggggtaggt atagaagtga 60
gttt 64
<210> 319
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 319
agttttgtat tgttgtttga gttggtgtgt agtggtgtaa ttttaattta ttgtaatttt 60
tgttttttgg ttttaagtga ttt 83
<210> 320
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 320
gaattgtttg aagttgggag gtggaggttg tagtgagttg agattgtatt attgtatatt 60
agtttgggtg atagtgtgag att 83
<210> 321
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 321
atttttggtt tggttagttt tttagagaat ttttgtatag ttttggtatg agtagtggag 60
tgatagagaa ttttgtggga gtgtgtgtgt gtgtg 95
<210> 322
<211> 95
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 322
tatatgtatg tatattttta tagagttttt tattattttg ttatttatgt tagagttatg 60
taaagatttt ttagaaagtt aattaagttg agagt 95
<210> 323
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 323
ttgggtgata tttattgttg tttaggttgg agtgtagagg tgtgattttg gtttattgta 60
atttttgttt tttgggtgt 79
<210> 324
<211> 79
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 324
gtatttggga gatggaggtt gtagtgagtt gagattgtgt ttttgtattt tagtttgggt 60
gatagtgagt gttgtttag 79
<210> 325
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 325
gtatgtgttt ttatatgtgt gtgttgtgtg tgtatttaat ttttaatttt tgtagtagta 60
aaaggtttgg gtat 74
<210> 326
<211> 74
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 326
gtgtttgggt tttttgttgt tgtagggatt gggggttggg tatatgtgtg gtatatgtgt 60
atgggggtgt atgt 74
<210> 327
<211> 107
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 327
gaatatgttt tggaaataga aattgtttgt tattttaagg ttattgtggt tgggagtgat 60
ttagatttat tgtagttttt tttagttttt aaagatttta ttggata 107
<210> 328
<211> 107
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 328
tatttggtga gatttttgaa ggttggaagg agttgtaatg agtttgaatt atttttaatt 60
ataatggttt tagaatgata gatggttttt gtttttaggg tgtgttt 107
<210> 329
<211> 110
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 329
tgggttgagg tagatttgta attttggttg gtggggtggt ttgagttagg ggggtttatg 60
tttggttgtt gatggtggtt tataggaggg gagggtttgt tgggtggggg 110
<210> 330
<211> 110
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 330
tttttgttta atagattttt tttttttgtg gattgttgtt agtagttgaa tgtgggtttt 60
tttggtttgg gttattttat tagttagagt tgtaaattta ttttggttta 110
<210> 331
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 331
ggtattgttg ttttattagt gttgtgagtg ttgttagaat aggttgtgtg ggtttttagt 60
tttttttttg gttgt 75
<210> 332
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 332
gtagttgagg ggaaggttgg gagtttatgt ggtttatttt gatggtgttt gtagtattgg 60
tggagtagtg gtgtt 75
<210> 333
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 333
taaaatgagg atggatagaa tttttgagta gtgagggtgt ttgttgggtg tgaggaggag 60
ggggaagatg aggaagatga gga 83
<210> 334
<211> 83
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 334
tttttgtttt ttttgttttt tttttttttt ttgtgtttgg taggtatttt tgttatttag 60
gagttttgtt tatttttgtt ttg 83
<210> 335
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 335
tttattgggt tgttgagtgt gtatgtagtt atttgaggga agatttttgt tgtttggggt 60
tttggagagg ggttagaatt gatttagggt tatgtaaga 99
<210> 336
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 336
ttttgtgtgg ttttgggtta gttttaattt ttttttgaga ttttgggtgg tggggatttt 60
tttttgggtg gttgtgtgtg tgtttagtaa tttggtggg 99
<210> 337
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 337
gggttgtagt gtgtagtttt tgggtgttgt gggtggtggg aagaaggtag ttttgttggg 60
tt 62
<210> 338
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 338
agtttggtga ggttgttttt tttttattgt ttgtggtgtt tgaggattgt gtgttgtggt 60
tt 62
<210> 339
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 339
attagtgtaa ggggattttt aaagtaggta atttttgtag ttgtagagaa taaatgtttt 60
t 61
<210> 340
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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gaaggtgttt attttttgtg gttataggga ttgtttgttt tagaaatttt tttatgttga 60
t 61
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<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 人工序列说明：人工合成的序列
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tttttggttt taaagttttg gtttggttag gggtgggaga gtttttttta gtattttttt 60
tgtgggtttg ttatt 75
<210> 342
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明：人工合成的序列
<400> 342
ggtggtgggt ttataaaaga ggtgttggag gagatttttt tatttttggt tgggttgggg 60
ttttggggtt ggaag 75

Claims (11)

1.一种用于检测肺腺癌的标志物，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-38所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化的探针。
4.根据权利要求3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域杂交；
优选地，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的高甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
优选地，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的低甲基化的区域的正义链和/或反义链的每个核苷酸杂交；
优选地，n和m均是1-10中的任意整数；
优选地，第n-1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选地，x1为0-100中的任意整数；
优选地，第m-1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选地，x2为0-100中的任意整数；
进一步优选地，所述第一探针组合物包括如SEQ ID NO:39-114中的一种或两种，所述第二探针组合物包括如SEQ ID NO:115-190中的一种或两种。
5.标志物在制备用于检测肺腺癌的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志物对应的基因选自下述中的一种：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-38所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物；
优选地，所述探针组合物用于靶向肺腺癌的甲基化后的标志物；
优选地，所述探针组合物为权利要求3或4所述的探针组合物。
7.一种用于肺腺癌检测的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测选自下述标志物对应的基因中的任一种甲基化的核酸：LMNA、NDUFS2、TPO、LINC01913、ABCG8、LIMS1、MIR4774、SPHKAP、CCK、EPHA6、HHIP、KIAA0825、TSPAN17、JARID2、HLA-G、KHDRBS2、ADGRA2、SPAG1、PWWP2B、ALDH3B2、LHX5、LOC100130238、PDX1、POU4F1、MYO16-AS1、ACOT4、LRRC74A、FBLN5、RPA1、ANKRD13B、MIR4733、MIR2909、RNF126P1、MAP2K2、DCAF15、SOX18、GATD3和SBF1。
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ IDNO:1-38所示的一种。
9.根据权利要求7或8所述的组合物，其特征在于，所述核酸包括权利要求3或4所述的探针组合物；
优选地，所述核酸包括：
引物，所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列；
优选地，所述核酸还包括：
探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷酸片段杂交，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列；
优选地，所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂；
优选地，所述用于检测标志物的靶序列甲基化的核酸还包括：
优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
10.一种试剂盒，其特征在于，其包含用于检测权利要求1或2所述的标志物的试剂或者权利要求3或4所述的探针组合物或者权利要求7-9中任一项所述的组合物。
11.一种芯片，其特征在于，其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组合物或者权利要求7或8所述的组合物。
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