CN116889545A - 一种重组人酸性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备工艺 - Google Patents
一种重组人酸性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的凝胶剂包含凝胶基质、增稠剂和保护剂，且所述的凝胶剂基质选自羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、透明质酸钠、聚乙二醇、明胶中的一种或多种，所述的凝胶剂增稠剂选自聚乙烯醇，所述保护剂选自组氨酸和低分子量肝素钠的组合。本发明选用凝胶基质和增稠剂聚乙烯醇的组合，在此基础之上选用组氨酸和低分子量肝素钠作为蛋白保护剂，以上辅料协同提高了重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂的稳定性。研究发现组氨酸和肝素钠的组合可作为人血白蛋白可替代的蛋白保护剂，在较低的浓度条件下依然可以获得较高的保护效果，有效的降低了生产成本。
Description
【技术领域】
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种重组人酸性成纤维细胞生长因子凝胶剂及其制备工艺。
【背景技术】
酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)是一种对来源于中胚层及神经外胚层的细胞，系成纤维细胞生长因子(FGF)家族成员之一，是一种多功能细胞生长因子，有广泛促分裂作用的微量活性物质，主要分布于脑、垂体、神经组织、视网膜、肾上腺、心脏和骨等器官或组织内，其他组织含量很少，在血清和体液中以极低的浓度存在。它是一种与组织创伤的愈合过程密切相关的内源性活性因子，对组织创伤愈合、神经损伤修复及血管再生有显著的促进作用。用于下述创面：深II度烧伤创面、慢性溃疡创面(包括外伤后残余创面、糖尿病溃疡、血管性溃疡和褥疮)，以促进创面愈合。
酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)的常用剂型包括冻干粉、滴眼剂和凝胶剂，其中冻干粉需要将包装中所配置的溶媒倒入装有rhaFGF冻干粉的瓶中，盖(卡)上包装中所配置的喷雾器头后即可开始使用，使用时将药液直接喷于清创后的伤患处；滴眼剂和凝胶剂则可直接使用。凝胶剂结合高分子材料的特性，可以有效延长添加的活性因子在特定部位的滞留时间，提高药物吸收及生物利用度，具有靶向功能并可缓慢释放药物，可减少临床给药次数并应用方便，具有广阔的市场竞争力。
凝胶剂具有易涂展，舒适感好，无油腻感、易洗除，能吸收组织渗出液，不妨碍皮肤的正常生理作用，具有一定的保水作用，也能促进药物的透皮吸收的优点，但酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)水性凝胶剂对温度等外界条件比较敏感，室温长期放置容易变性失活。为了解决上述技术问题，中国发明专利申请202111189805.1使用卡波姆940作为凝胶基质，使用人血白蛋白、肝素钠等作为保护剂，获得了一种对温度条件不敏感的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，该专利申请虽然解决了酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)水性凝胶剂稳定性不佳的问题，但是大量保护剂的使用无疑会增加产品的成本。
【发明内容】
针对现有技术的不足，本发明提供了一种全新的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，以解决现有技术中的产品稳定性不佳和制备成本过高的问题。
具体的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的凝胶剂包含凝胶基质、增稠剂和保护剂，且所述的凝胶剂基质选自羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、透明质酸钠、聚乙二醇、明胶中的一种或多种，所述的凝胶剂增稠剂选自聚乙烯醇，所述保护剂选自组氨酸和肝素钠的组合。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的保护剂选自组氨酸和肝素钠的组合，且所述肝素钠选自低分子量肝素钠，优选的所述低分子量肝素钠的平均分子量为3000～8000。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述组氨酸的质量为所述凝胶剂质量的0.8-2‰，优选为1-1.6‰；所述肝素钠的的质量为所述凝胶剂质量的0.05-1‰，优选为0.08-0.2‰。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的凝胶剂基质的质量为所述凝胶剂质量的0.5-5％，优选为1-3％。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的增稠剂的质量为所述凝胶剂质量的0.5-3％，优选为1-2％。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的凝胶剂中还包含缓冲液，所述的缓冲盐选自磷酸盐缓冲体系、柠檬酸盐缓冲体系、Tris缓冲体系，优选为磷酸盐缓冲体系，优选的所述缓冲盐的pH值为6.0-7.0，浓度为0.01-0.05mol/L，优选的浓度0.02mol/L。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述的凝胶剂中重组人酸性成纤维细胞生长因子的相对量为2-8×103IU/g。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述凝胶剂中还包含保湿剂和防腐剂，优选的所述保湿剂选自甘油；所述防腐剂选自对羟基苯甲酸酯类防腐剂，优选的所述防腐剂选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯中的一种或多种；所述保湿剂兼具助溶剂作用。
进一步的，本发明提供一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，所述防腐剂的质量为所述凝胶剂质量的0.1-3‰，优选为0.2-1‰；所述保湿剂的质量为所述凝胶剂质量的0.2-4％，优选为0.5-2％。
本发明具有以下有益效果：
本发明选用凝胶基质和增稠剂聚乙烯醇的组合；在此基础之上选用组氨酸和肝素钠作为蛋白保护剂，以上辅料协同提高了重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂的稳定性，制备得到的凝胶剂产品在较高的温度条件下依然保持了较高的稳定性和相对活性。
经过筛选，确定了组氨酸和肝素钠的组合可作为人血白蛋白的可替代的蛋白保护剂，在较低的浓度条件下依然可以获得较高的保护效果，有效的降低了生产成本。
【具体实施方式】
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
本发明所述的磷酸盐缓冲液为Na2HPO4、NaH2PO4·H2O缓冲液，浓度为0.02mol/L，pH值为6.0-7.0；试剂的称量和制剂的配置在无菌条件下进行；本发明实施例的低分子量肝素钠的平均分子量为3000～8000。
实施例1：以制备100g重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂为例，具体处方和制备方法如下：
(1)取约40ml注射用水，加入处方量的防腐剂和保湿剂，加热溶解后，再加入处方量的凝胶基质，过夜充分溶胀后在121℃条件下高压湿热灭菌30分钟，静置冷却至室温，获得溶液A备用；
(2)将处方量Na2HPO4、NaH2PO4·H2O、增稠剂和保护剂分别加入50ml注射用水中，搅拌溶解后加入处方量重组人酸性成纤维细胞生长因子原液，充分混匀，获得溶液B备用；
(3)将溶液B经0.22μm滤膜过滤除菌后加入溶液A中，加入余量注射用水至100g，充分搅拌后静置获得rhaFGF凝胶。
实施例2：以制备100g重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂为例，具体处方如下：
制备方法参照实施例1。
实施例3：以制备100g重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂为例，具体处方如下：
对比例1：以制备100g重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂为例，具体处方如下：
制备方法参照实施例1。
对比例2：以制备100g重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂为例，具体处方如下：
制备方法参照实施例1。
对比例3：以制备100g重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂为例，具体处方如下：
对制备的rhAFGF凝胶进行以下实验验证，测试结果如下表1
(1)rhAFGF凝胶剂稳定性实验
取实施例1-3和对比例1-3的凝胶剂5g，密封于铝管中，分别于25℃、40℃密闭保存，定时检查凝胶剂的外观，并取样测定凝胶剂中rh-aFGF的活性，计算相对活性值。
(2)rhAFGF活性测定方法(采用MTT法)
取rhAFGF活性测定工作标准品复溶后，用测试培养液先作3个16倍稀释，再作7个4倍稀释，将后8个稀释梯度上样检测，作2复孔，将供试品按标示量复溶后，用测试培养液先作3个16倍稀释，再作7个4倍稀释，将后8个稀释梯度上样检测，作2复孔。用完全培养液进行3T3细胞的培养和传代，将处于对数生长期的3T3细胞用胰酶充分消化成单个细胞，收集，用测试培养液将细胞密度调整至1.0×105个细胞/ml左右，制备成细胞悬液，将细胞悬液接种于已经加好样品的96孔板中，每孔50ul，于含5％CO2的37℃培养箱中培养66-72小时，每孔加10ulMTT溶液，于含5％CO2的37℃培养箱中培养4～6小时，每孔加100ul10％SDS，于含5％CO2的37℃培养箱中培养过夜在酶标仪上比色，波长为570nm或570nm/630nm，读取OD值并记录，作出对应的OD-rhAFGF浓度曲线，根据以下公式计算其活性：
样品生物学活性(U/ml)＝Pr×Ds×Es/(Dr×Er)
Pr为标准品生物学活性，U/ml；Ds为供试品预稀释倍数；
Dr为标准品预稀释倍数；Es为供试品相当于标准品半效量的稀释倍数；
Er为标准品半效量的稀释倍数。
表1：25℃稳定性考察相对活性结果(以0天时的相对活性为100％计)
表2：40℃稳定性考察相对活性结果(以0天时的相对活性为100％计)
以上内容不能认定本发明具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。
Claims (10)
1.一种重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述的凝胶剂包含凝胶基质、增稠剂和保护剂，且所述的凝胶剂基质选自羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、海藻酸钠、聚丙烯酸钠、透明质酸钠、聚乙二醇、明胶中的一种或多种，所述的凝胶剂增稠剂选自聚乙烯醇，所述保护剂选自组氨酸和低分子量肝素钠的组合；优选的所述低分子量肝素钠的平均分子量为3000～8000。
2.根据权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述的凝胶剂基质的质量为所述凝胶剂质量的0.5-5.0％，优选为1.0-3.0％。
3.根据权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述的增稠剂的质量为所述凝胶剂质量的0.5-3.0％，优选为1-2％。
4.根据权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述组氨酸的质量为所述凝胶剂质量的0.8-2‰，优选为1-1.6‰；所述低分子量肝素钠的质量为所述凝胶剂质量的0.05-1‰，优选为0.08-0.2‰。
5.根据权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述的凝胶剂中还包含缓冲液，所述的缓冲盐选自磷酸盐缓冲体系、柠檬酸盐缓冲体系、Tris缓冲体系，优选为磷酸盐缓冲体系，优选的所述缓冲盐的pH值为6.0-7.0，浓度为0.01-0.05mol/L，优选的浓度0.02mol/L。
6.根据权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述的凝胶剂中重组人酸性成纤维细胞生长因子的相对量为2-8×103IU/g。
7.根据权利要求1所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述凝胶剂中还包含保湿剂和防腐剂。
8.根据权利要求6所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述保湿剂选自甘油；所述防腐剂选自对羟基苯甲酸酯类防腐剂。
9.根据权利要求6所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，其特征在于所述防腐剂选自选自对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸异丙酯中的一种或多种。
10.根据权利要求6所述的重组人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)凝胶剂，
其特征在于所述防腐剂的质量为所述凝胶剂质量的0.1-3‰，优选为0.2-1‰；
所述保湿剂的质量为所述凝胶剂质量的0.2-4％，优选为0.5-2％。
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