CN116829711A - 包含具有改进的稳定性的黄原胶裂解酶和内切葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物 - Google Patents
包含具有改进的稳定性的黄原胶裂解酶和内切葡聚糖酶变体的洗涤剂组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种包含内切葡聚糖酶变体和黄原胶裂解酶变体的洗涤剂组合物以及所述组合物的使用方法。
Description
序列表的引用
本申请含有计算机可读形式的序列表,其通过引用并入本文。
发明背景
技术领域
本发明涉及一种洗涤剂组合物,例如衣物洗涤组合物和餐具洗涤组合物,包括手动洗涤和自动餐具洗涤组合物,该组合物包含黄原胶裂解酶或内切葡聚糖酶或其混合物和至少一种酶稳定组分,以便改进包括洗涤剂稳定性(例如在洗涤剂组合物中的改进的稳定性)和/或储存稳定性(例如在洗涤剂组合物中的改进的储存稳定性)在内的至少一种或多种性质。本发明还涉及用于产生和使用此类组合物的方法,以及特异性的酶稳定组分用于改进黄原胶裂解酶或内切葡聚糖酶或其混合物的储存稳定性的用途。本文描述的变体特别适用于清洁方法和洗涤剂组合物,特别是衣物洗涤剂。
背景技术
黄原胶是一种来自野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)的细菌外壳的多糖。它是通过野油菜黄单胞菌细菌对葡萄糖、蔗糖或乳糖进行发酵而产生的。在发酵期之后,将所述多糖用异丙醇从生长培养基中沉淀出来、干燥并研磨成精细粉末。随后,将其添加到液体介质中以形成黄原胶。黄原胶是一种由不同的糖组成的天然多糖,这些不同的糖通过若干个不同的键连接,例如β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡萄糖醛酸基键以及β-D-葡萄糖基-β-D-1,4-葡萄糖基键。黄原胶至少部分地可溶于水并且形成高粘性溶液或凝胶。黄原胶的完全酶降解需要几种酶活性,包括黄原胶裂解酶活性和内切-β-1,4-葡聚糖酶活性。黄原胶裂解酶是裂解黄原胶的β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡萄糖醛酸基键的酶,并且已经在文献中进行了描述。黄原胶裂解酶是本领域已知的,例如已经从解藻朊类芽孢杆菌(Paenibacillus alginolyticus)XL-1中分离出两种黄原胶裂解酶(例如,Ruijssenaars等人(1999)‘A pyruvated mannose-specific xanthan lyase involved in xanthandegradation by Paenibacillus alginolyticus XL-1’,Appl.Environ.Microbiol.65(6):2446-2452,以及Ruijssenaars等人(2000),‘A novel gene encoding xanthan lyaseof Paenibacillus alginolyticus strain XL-1’,Appl.Environ.Microbiol.66(9):3945-3950)。
糖苷水解酶是催化糖基键的水解以释放较小糖的酶。已经分类的糖苷水解酶有100多种,参见例如Henrissat等人(1991)‘A classification of glycosyl hydrolasesbased on amino-acid sequence similarities’,J.Biochem.280:309-316以及位于www.cazy.org的Uniprot网站。糖苷水解酶家族9(GH9)由70多种不同的酶组成,这些酶主要是内切葡聚糖酶(EC 3.2.1.4)、纤维二糖水解酶(EC 3.2.1.91)、β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)和外切-β-氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.165)。
近年来,黄原胶已被用作许多消费者产品中的成分,这些消费者产品包括食品(例如用作沙拉酱和乳制品中的增稠剂)和化妆品(例如用作牙膏和化妆品、乳膏和乳液中的稳定剂和增稠剂,以防止成分分离并且提供合适的产品质地)。此外,已发现黄原胶被用作石油工业中的添加剂,以调节钻井液等的粘度。黄原胶的广泛使用导致需要降解含有黄原胶的溶液、凝胶或混合物,从而允许更容易地去除副产物。用于降解黄原胶的内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶以及此类酶用于清洁目的(例如去除含有黄原胶的污渍)的用途和在钻井和石油工业中的用途在本领域是已知的,例如WO 2013/167581、WO 2018/037064、WO 2018/037065或WO 2019/162000。
已发现,已知的具有SEQ ID NO:1的内切葡聚糖酶和已知的具有SEQ ID NO:2的黄原胶裂解酶二者都对洗涤剂的存在敏感,特别是对于某些洗涤剂组分(例如螯合剂和/或表面活性剂和/或其他酶(如蛋白酶))敏感。为了改进此类酶的可用性和/或成本和/或性能,正在持续寻找具有改变的性质的变体,例如增加的稳定性,例如在这类洗涤剂组合物中的改进的稳定性或储存后的改进的稳定性。然而,对大型酶进行诱变、随后对突变体文库进行纯化和功能分析,可能是非常昂贵和费时费力的。因此,一直需要用于洗涤剂组合物的稳定的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体,用于具有改进的酶稳定性的洗涤剂组合物,特别是其中含有内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶的酶混合物显示出了改进的稳定性的洗涤剂组合物。
发明内容
在一些方面,本发明涉及一种洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含:
(A)内切葡聚糖酶变体,其在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变(优选取代):对应于SEQ ID NO:1的氨基酸612至660的区域7、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸95至105的区域1、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸115至138的区域2、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸210至251的区域3、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸267至301的区域4、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸339至361的区域5、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸547至595的区域6、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸806至828的区域8,对应于SEQ ID NO:1的氨基酸839至1042的区域9、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1至94的区域10、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸106至114的区域11、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸139至209的区域12、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸252至266的区域13、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸302至338的区域14、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸362至546的区域15、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸596至611的区域16、对应于SEQID NO:1的氨基酸661至805的区域17、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸829至838的区域18和对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1043至1055的区域19;和/或
(B)黄原胶裂解酶变体,其在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变(优选取代):对应于SEQ ID NO:2的氨基酸731至803的区域3、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸154至176的区域1、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸614至658的区域2、对应于SEQ IDNO:2的氨基酸807至846的区域4、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸872至885的区域5、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸903至1004的区域6、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1至153的区域7、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸177至613的区域8,对应于SEQ ID NO:2的氨基酸659至730的区域9、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸804至806的区域10、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸847至871的区域11、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸886至902的区域12和对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1005至1037的区域13;以及
(C)酶稳定组分。
在各个方面,内切葡聚糖酶变体(A)与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性;优选地,所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性;和/或黄原胶裂解酶变体(B)与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地,所述黄原胶裂解酶变体对黄原胶具有活性。
在进一步的方面,所述酶稳定组分选自下述:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇(isomalt)、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地所述酶稳定组分选自甘油和甲酸钠,更优选地是甲酸钠。
在一些方面,如本文所定义,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
在一些方面,如本文所定义,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):
4,17,18,20,51,53,55,56,60,63,71,79,87,92,99,120,125,126,130,137,182,186,189,192,213,216,221,226,228,230,231,232,233,235,240,243,247,249,278,279,281,283,285,289,292,294,298,302,311,313,333,346,353,358,386,387,388,390,403,408,410,416,441,448,451,471,472,476,489,507,512,515,538,555,556,557,558,559,560,561,562,563,564,567,568,570,575,578,579,580,581,583,589,590,591,592,593,595,598,599,602,603,605,607,609,616,627,630,631,635,636,638,639,640,641,642,643,644,651,676,683,688,690,694,698,699,706,711,713,719,720,744,749,754,756,760,781,786,797,810,811,812,815,823,824,825,827,828,833,834,835,837,843,848,868,869,870,871,872,873,874,880,881,883,884,885,887,888,890,892,894,898,905,906,912,920,921,924,926,927,928,932,933,934,935,937,938,939,940,941,942,943,946,948,950,952,953,954,956,957,960,966,971,972,980,989,991,994,995,998,999,1006,1009,1010,1011,1029,1030,1031,1032,1035,1037,1038,1040,1041,1042,1044,1045和1048,
优选地包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):17、20、216、283、302、311、313、408、476、579、602、627、636、638、651、688、697、719、756、880、881、883、887、906、921、934、937和956,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):
9,15,18,46,58,66,89,95,100,106,109,155,159,183,188,190,203,204,221,229,234,238,240,242,243,257,258,284,291,293,316,317,320,324,329,333,339,341,352,354,360,372,377,399,400,419,440,450,451,454,458,481,492,505,533,567,568,576,578,579,582,620,624,626,631,635,649,650,656,664,672,703,722,726,727,728,738,745,752,753,754,757,769,775,777,779,782,786,789,792,796,799,801,819,824,843,851,855,856,867,875,887,892,899,900,901,902,903,911,912,915,919,921,923,925,927,928,930,933,941,966,991,1008和1016,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在一些方面,上述变体与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地所述黄原胶裂解酶变体对黄原胶具有活性。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含选自下述的酶稳定组分:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁。
在特定的方面,本发明的洗涤剂组合物包含选自下述的酶稳定组分:甘油和甲酸钠,更优选甲酸钠。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在下述区域中的一个或多个位置处的改变(优选取代):(i)区域6和17;(ii)区域6、15和17;(iii)区域10、12和15;(iv)区域6、7、16和17;(v)区域6、9、10、12、15和17;(vi)区域14和15;(vii)区域9;(viii)区域6、7、9、14、15、16和17;或(ix)区域3、6、7、9、14、15、16和17;其中所述变体优选地在所提及的那些区域之外的其他区域中没有改变。
在进一步的方面,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:
V4T,S17A,N18G,F20P,F20N,F20G,F20Y,K51Q,K51H,E53Y,E53P,E53G,Y55M,Y55D,V56M,Y60F,S63F,A71E,T87R,T92S,K99R,A120P,I125V,A126R,S128X,N129D,K130R,F137L,H182Y,A186P,N189K,K192N,K213R,N216D,N216Q,N216R,A221R,L226K,K228E,K228I,G230F,G230L,G230A,G230H,G230N,G230W,G230T,F231Y,F231N,V232R,V232G,L233H,H235D,N240Q,G243K,G243R,D247N,A249N,A278S,G279E,K281F,K281V,K281Y,K281H,K281Q,K281N,K281W,K281T,K281R,A283D,N285G,N285L,N285M,N285S,N285P,N285T,N285Y,N285H,N285K,N285D,N285W,N285R,Q289E,T292A,T292F,T292L,T292I,T292V,T292S,T292P,T292Y,T292Q,T292N,T292K,T292D,T292G,A294V,F297L,Q298E,I302D,I302H,I302V,I302M,H311N,S313D,W333L,A346H,A346D,T353D,A386P,I387T,K388R,K390Q,I403Y,E408D,E408N,E408S,E408P,E408A,E408G,P410G,Q416S,Q416D,N441G,A448E,A448W,A448S,K451Q,K451S,G471S,S472Y,D476R,Q489P,K507R,K512P,S515V,S538C,L555Q,G556S,G557R,N558P,N558F,N558K,N558D,N558M,N558Q,N558I,N558Y,N558H,N558E,A559N,A559F,A559M,A559P,A559Y,A559H,A559Q,A559D,A559R,A559G,A559I,A559S,A559K,S560F,S560P,S560K,S560G,S560D,T561E,T561Q,T561S,T561D,T561P,G562W,G562P,G563E,A564I,A564Y,A564H,A564Q,A564K,A564E,A564D,E565M,V567F,V567P,K568R,L569F,L569Y,L569D,L569E,P570F,P570L,P570I,P570M,P570V,P570S,P570T,P570A,P570Y,P570H,P570Q,P570N,P570K,P570E,P570W,P570R,P570G,I575V,I575M,I575A,I575D,I575E,I576F,I576M,I576P,D578R,Y579F,Y579W,V580L,T581M,D583M,Q589G,P590S,P590T,P590E,E591L,G592D,S593P,S593H,S593Q,S593N,S593K,S593D,S593E,S593R,S595L,S598Q,A599S,I602T,I602D,V603P,S605T,S607C,G609E,S616G,S616D,K627L,K627M,K627V,K627S,K627T,K627Q,K627R,I630F,I630V,I630Y,K631R,K631A,T633V,D635L,D635M,D635T,D635A,D635P,D635N,D635K,D635E,D635G,D635W,S636L,S636M,S636A,S636H,S636Q,S636N,S636K,S636R,F638N,F638Y,T639D,F638I,F638V,F638T,F638L,F638H,F638M,T639V,T639S,T639L,T639I,T639M,T639A,T639E,T639W,T639G,T639Y,T639P,T640S,Y641E,S642T,S642N,N643D,N643H,N643T,T644F,A651P,A651S,D676H,Q683E,A688G,Y690F,T694A,T697G,R698W,T699A,T706Q,T711S,T711V,T711Y,K713R,W719R,K720H,K744H,K744Q,A749T,K754R,V756Y,V756H,S760G,T781M,N786K,T797S,S810Q,S810R,A811S,V812F,V812I,V812M,V812W,V812R,N815V,N815Y,N815E,N815W,N815R,S823Q,A824T,A824D,T825G,T825N,T825W,T825A,T825D,V827I,V827M,V827S,N828D,N833D,Q834E,S835A,S835D,V837I,T843V,N848D,A868E,A869V,D870F,D870L,D870I,D870M,D870V,D870S,D870T,D870Y,D870H,D870Q,D870N,D870K,D870E,D870W,D870R,D870G,P871F,P871L,P871I,P871M,P871V,P871S,P871T,P871A,P871Y,P871H,P871Q,T872S,T872F,T872A,T872Y,T872H,T872Q,T872N,T872K,T872D,T872E,T872W,T872R,T872G,D873K,D873E,T874V,T874S,T874P,T874A,T874H,T874Q,T874N,T874K,R880K,V881Q,V881T,T883R,T883V,T883C,T883K,Y884H,A885F,A885Q,A885N,T887L,T887I,T887S,T887H,T887R,T887K,L888M,V890R,T892P,T892V,K894E,R898Q,N905D,F906A,Q912V,N920P,N920D,K921R,K921E,K921D,A924D,V926F,V926P,K927R,S928D,T932A,N933V,N933S,Y934G,Y934M,Y934S,Y934A,Y934Q,Y934N,Y934E,Y934W,Y934R,T935W,A937F,A937V,A937S,A937T,A937Q,A937D,A937E,V938I,K939I,K939V,D940E,N941S,N941H,N941D,A942P,A942E,D943Y,D943H,G946R,K948R,K948E,R950V,R950H,R950N,F952S,F952W,N953Y,G954L,Q956Y,Q956S,A957L,A957P,Y960F,A964N,A964C,N966P,N966C,G971A,T972K,Q974K,Q974C,M980I,Q989I,Q991L,Q991I,Q991M,Q991V,Q991T,Q991K,Q991C,G994D,G994N,S995I,S995V,S995Q,S995R,S995C,G998V,G998A,T999R,S1006T,S1006A,S1006K,S1006R,K1009E,Y1010W,L1011M,L1011S,L1011A,L1011Q,L1011N,L1011D,L1011E,R1029N,F1030M,K1031I,K1031S,K1031T,K1031H,V1032G,K1035A,A1037E,A1037W,S1038L,S1038I,S1038G,L1040N,L1040E,G1041F,G1041R,Y1042N,L1044F,L1044S,L1044N,L1044W,P1045Q,P1045W,和F1048W,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在进一步的方面,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一组改变:A559K+N558K+S560F+T561P+G562W,A559N+P570Q,A559N+P570T,A559N+Y579F,A559N+Y579F+K627R,A559N+Y579W,A559N+Y579W+K99R,A559N+Y579W+S128X+K627R,A559N+Y579W+S128X+S636N,A559N+Y579W+K281R,A559N+Y579W+Q416D+S636N,A559N+Y579W+S560P,A559N+Y579W+A564I,A559N+Y579W+P570N,A559N+Y579W+P570K,A559N+Y579W+P570R,A559N+Y579W+P570A,A559N+Y579W+P570T,A559N+Y579W+P570S,A559N+Y579W+P570Q,A559N+Y579W+P570H,A559N+Y579W+S616D,A559N+Y579W+S616D+K627R,A559N+Y579W+S616D+S636K,A559N+Y579W+S616D+A651P,A559N+Y579W+S616D+K921R,A559N+Y579W+S616D+K921R+Y934G,A559N+Y579W+K627R,A559N+Y579W+K627R+S636N+A651P,A559N+Y579W+K627R+S636N+K921R,A559N+Y579W+K627R+K921R,A559N+Y579W+K627M,A559N+Y579W+K627M+A651P,A559N+Y579W+S636N,A559N+Y579W+S636N+A651P,A559N+Y579W+S636N+K921R,A559N+Y579W+S636K+A651P,A559N+Y579W+S636K+K921R,A559N+Y579W+S636L,A559N+Y579W+F638I,A559N+Y579W+A651P,A559N+Y579W+A651P+K921R+Y934G,A559N+Y579W+A651P+Y934G,A559N+Y579W+D870M,A559N+Y579W+K921R,A559N+Y579W+K921R+A651P,A559N+Y579W+K921R+Y934G,A559N+Y579W+Y934G,A559N+Y579W+K948E,A559N+Y579W+K1009E,A559N+K627R,Y579F+A564E,Y579W+K99R,Y579W+G562P,Y579W+A564D,579W+P570K,Y579W+P570Q,Y579W+K627R,Y579W+S636N,Y579W+F638I,Y579W+A651P,Y579W+K921R,Y579W+Y934G,Y579W+K948E,Y579W+K1009E,K627R+K51Q,K627R+K451S,K627R+P570Q,K627R+P570T,K627R+S636N,K627R+F638I,K627R+A885F,K627R+Y934G,S636N+P570T,S636N+K921R,S636N+Y934G,F638I+P570K,F638I+P570Q,F638I+P570T,F638I+A651P,F638I+Y934G,F638I+K921R,A651P+P570Q,A651P+P570T,A885F+P570T,A885F+Y934G,K921R+P570Q,K921R+P570T,Y934G+P570T,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在优选的方面,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):
S17A,F20P,N216D,N216Q,A283D,I302D,H311N,S313D,E408D,D476R,Y579W,I602T,K627R,S636N,S636K F638I,F638N,A651P,A688G,T697G,W719R,V756Y,R880K,V881Q,T883R,T887K,F906A,K921R,Y934G,A937E,和Q956Y,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在进一步优选的方面,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一组改变:A559N+Y579W+T697G,K512P+A559N+Y579W+T697G,N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,S313D+E408D,R880K+N905D+K921R+Y934G,1302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,a和I216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性的内切葡聚糖酶变体;优选地,所述活性包含内切葡聚糖酶EC 3.2.1.4活性,进一步优选地,所述活性是内切葡聚糖酶EC 3.2.1.4活性。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含分离的GH9内切葡聚糖酶变体,该变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性。
在一些方面,如本文所描述的黄原胶裂解酶变体是包含在下述区域中的一个或多个位置处的改变(优选取代)的变体:(i)区域3和5;(ii)区域3、5和12;(iii)区域8和9;(iv)区域2、3和5;(v)区域2、3、5和12;(vi)区域3、5、8、9和12;(vii)区域2、3、5、8和9;(viii)区域3、5、8、9和12;(ix)区域2、3、5、8、9和12;(x)区域3;(xi)区域3、4、5;(xii)区域7、8和9:(xiii)区域12和13;(xiv)区域3、4、5、8、9和12;(xv)区域8、9、12和13;(xvi)区域7、8、9、12和13;(xvii)区域3、4、5、7、8、9和12;和(xviii)区域3、4、5、7、8、9、12和13,其中所述变体优选地在所提及的那些区域之外的其他区域中没有改变。
在进一步的方面,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:
K9R,N15T,T18D,L46D,A58L,S66H,Q89Y,K95E,S100D,N106Y,Q109R,Q109D,Q109F,Q109K,Q109A,Y155E,A159P,K183Q,K183R,V188I,A190Q,A203P,K204R,A221P,E229N,E229S,E229V,I234V,1238W,I238L,I238M,I240W,N242S,G243V,Y257W,R258E,R284G,K291R,A293G,A293P,K316R,R317K,K320R,L324Q,K329R,K333R,L339M,I341P,V352I,S354P,K360G,K360R,Q372H,F377Y,N399K,K400R,F419Y,N440K,D450P,K451E,K451R,A454V,D458S,K481R,A492H,A492L,T505I,L533I,K567R,G568A,S578K,S578N,S578R,S579R,S579K,S582K,K620R,A624E,A626Q,T631N,S635E,S635T,T649V,T649K,Q650G,I656V,T664K,N672D,I703L,I722F,P726Q,T727P,M728V,G738L,K745R,P752R,P752K,G753E,G753Q,G753S,S754E,S754L,S754Q,S754R,S757D,S757P,S757E,A769D,A769T,A769R,L775A,L775F,L775I,L775M,L775Q,L775S,L775Y,D777R,P779V,Y782I,N786K,G789R,K792W,K792Y,K792V,K792A,N796Q,A799H,D801G,K819R,K824R,A843P,S851F,K855R,E856D,P867S,K875T,K875E,K887R,N892Y,N892W,N892F,G899S,I900G,D901A,T902F,T903A,T903Q,A911M,A911V,A911S,A912T,A912I,A912Y,T915S,T915V,T915Q,T919D,T919F,T919G,T921R,T921S,T923D,T923H,T925D,T925Q,T925R,T927K,D928W,Y930F,Y930H,Y930L,D933M,G941D,G941E,A966P,N991D,V998K,N1008D和K1016T,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在优选的方面,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变:624、631、635、649、656、738、752、753、754、757、769、775、777、800、801、843、875、911和915,和/或包含在选自下述的一个或多个位置处的改变:89、100、190、229、234、352、360、399、440、458、492、567、582、664、672、703、728、892、1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在进一步优选的方面,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个取代:Q89Y、S100D、A190Q、E229S、I234V、V352I、K360G、N399K、N440K、D458S、A492H、A492L、K567R、S582K、T664K、N672D、I703L、M728V、N892Y、N1008D和K1016T,和/或包含选自下述的一个或多个取代:A624E、T631N、S635E、T649K、I656V、G738L、P752K、P752R、G753E、S754E、S754R、S757D、A769D、L775A、D777R、V800P、D801G、A843P、K875T、A911V和T915A,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
此类变体的非限制性实例包括:A190Q+E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+I703L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+I703L+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+V352I+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+T664K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+A911V+N1008D+K1016T,E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,Q89Y+E229S+N440K+S582K+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,E229S+N440K+S582K+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,A190Q+E229S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+N672D+P752R+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S582K+S635E+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+I234V+A492L+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+T664K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+T915A+N1008D,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+D458S+T631N+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754R+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,E229S+D458S+S582K+T631N+S635E+N672D+M728V+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+A492L+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,S100D+A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N399K+D458S+A492H+K567R+S582K+S635E+T649K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,E229S+D458S+A492L+T631N+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+D458S+A492H+K567R+S582K+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,E229S+N399K+D458S+K567R+S582K+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y.
在优选的方面,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含对黄原胶具有活性的黄原胶裂解酶变体;优选地,所述活性包含黄原胶裂解酶EC 4.2.2.12活性,进一步优选地,所述活性是黄原胶裂解酶EC 4.2.2.12活性。
在一些方面,如本文所定义,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,其与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性并包含选自下述的一组改变:A559K+N558K+S560F+T561P+G562W,A559N+P570Q,A559N+P570T,A559N+Y579F,A559N+Y579F+K627R,A559N+Y579W,A559N+Y579W+K99R,A559N+Y579W+S128X+K627R,A559N+Y579W+S128X+S636N,A559N+Y579W+K281R,A559N+Y579W+Q416D+S636N,A559N+Y579W+S560P,A559N+Y579W+A564I,A559N+Y579W+P570N,A559N+Y579W+P570K,A559N+Y579W+P570R,A559N+Y579W+P570A,A559N+Y579W+P570T,A559N+Y579W+P570S,A559N+Y579W+P570Q,A559N+Y579W+P570H,A559N+Y579W+S616D,A559N+Y579W+S616D+K627R,A559N+Y579W+S616D+S636K,A559N+Y579W+S616D+A651P,A559N+Y579W+S616D+K921R,A559N+Y579W+S616D+K921R+Y934G,A559N+Y579W+K627R,A559N+Y579W+K627R+S636N+A651P,A559N+Y579W+K627R+S636N+K921R,A559N+Y579W+K627R+K921R,A559N+Y579W+K627M,A559N+Y579W+K627M+A651P,A559N+Y579W+S636N,A559N+Y579W+S636N+A651P,A559N+Y579W+S636N+K921R,A559N+Y579W+S636K+A651P,A559N+Y579W+S636K+K921R,A559N+Y579W+S636L,A559N+Y579W+F638I,A559N+Y579W+A651P,A559N+Y579W+A651P+K921R+Y934G,A559N+Y579W+A651P+Y934G,A559N+Y579W+D870M,A559N+Y579W+K921R,A559N+Y579W+K921R+A651P,A559N+Y579W+K921R+Y934G,A559N+Y579W+Y934G,A559N+Y579W+K948E,A559N+Y579W+K1009E,A559N+K627R,Y579F+A564E,Y579W+K99R,Y579W+G562P,Y579W+A564D,579W+P570K,Y579W+P570Q,Y579W+K627R,Y579W+S636N,Y579W+F638I,Y579W+A651P,Y579W+K921R,Y579W+Y934G,Y579W+K948E,Y579W+K1009E,K627R+K51Q,K627R+K451S,K627R+P570Q,K627R+P570T,K627R+S636N,K627R+F638I,K627R+A885F,K627R+Y934G,S636N+P570T,S636N+K921R,S636N+Y934G,F638I+P570K,F638I+P570Q,F638I+P570T,F638I+A651P,F638I+Y934G,F638I+K921R,A651P+P570Q,A651P+P570T,A885F+P570T,A885F+Y934G,K921R+P570Q,K921R+P570T,Y934G+P570T,优选地,包含选自下述的一组改变:A559N+Y579W+T697G,K512P+A559N+Y579W+T697G,N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,S313D+E408D,R880K+N905D+K921R+Y934G,I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在特定的方面,所述内切葡聚糖酶变体除前述改变之外,相对于SEQ ID NO:1的亲本酶没有进一步的改变,即,剩余序列与SEQ ID NO:1相同。
在一些方面,如本文所定义,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性并包含选自下述的一组改变:A190Q+E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+I703L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+I703L+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+V352I+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+T664K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+A911V+N1008D+K1016T,E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,Q89Y+E229S+N440K+S582K+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,E229S+N440K+S582K+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,A190Q+E229S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+N672D+P752R+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S582K+S635E+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+I234V+A492L+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+T664K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+T915A+N1008D,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+D458S+T631N+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754R+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,E229S+D458S+S582K+T631N+S635E+N672D+M728V+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+A492L+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,S100D+A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N399K+D458S+A492H+K567R+S582K+S635E+T649K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,E229S+D458S+A492L+T631N+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+D458S+A492H+K567R+S582K+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,E229S+N399K+D458S+K567R+S582K+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,优选地,包含选自下述的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在特定的方面,所述黄原胶裂解酶变体除前述改变之外,相对于SEQ ID NO:2的亲本酶没有进一步的改变,即,剩余序列与SEQ ID NO:2相同。
在一个方面,本发明的洗涤剂组合物包含优选的内切葡聚糖酶变体和优选的黄原胶裂解酶变体。
因此,在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含:
(A)内切葡聚糖酶变体,其与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G,(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G,(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,(A5)S313D+E408D,(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G,(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;和/或
(B)黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,和(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ IDNO:2的氨基酸位置;以及
(C)酶稳定组分。
在特定的方面,本发明的洗涤剂组合物包含:
(A)内切葡聚糖酶变体,其与sEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G,(A2)K512P+A559N+Y579VV+T697G,(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,(A5)S313D+E408D,(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G,(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQID NO:1的氨基酸位置;以及
(B)黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,an和8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ IDNO:2的氨基酸位置;以及
(C)酶稳定组分,其中该酶稳定组分选自下述:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地,所述酶稳定组分选自甘油和甲酸钠,更优选地是甲酸钠。
在一些方面,内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶变体不包含除上文明确提及的那些取代之外的任何进一步的取代,即,序列的其余部分分别与如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2中所述的亲本酶的序列的其余部分相同。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种以及如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种,其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地,除了本文明确提及的取代之外与其相应的亲本序列相同。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物还另外包含一种或多种其他的洗涤剂组分,优选表面活性剂。
在一些方面,本发明的洗涤剂组合物包含0.000001至10重量%,例如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至03重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述内切葡聚糖酶变体(每ml洗涤剂组合物的活性酶),和/或0.000001至10%,例如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述黄原胶裂解酶变体(每ml洗涤剂组合物的活性酶),和/或0.001至20重量%,例如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至53重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%的所述酶稳定剂(以洗涤剂组合物的重量计)。
在一些方面,以洗涤剂组合物的重量计,本发明的洗涤剂组合物包含0.1至5.5重量%、优选0.25至1.5重量%的甲酸钠。
在进一步的方面,本发明的洗涤剂组合物以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)包含所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
在一个方面,本发明的洗涤剂组合物以0.0005∶1至0.001∶1、优选0.001∶1至0.02∶1、更优选0.005∶1至0.01∶1的重量比(酶∶甲酸钠)包含所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和甲酸钠。
因此,在特定的方面,本发明的洗涤剂组合物包含:
(A)0.0005至0.5重量%、优选0.001至0.1重量%的内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G,(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G,(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+YS79W+I602T+A651P+A688G+V756Y,(A4)N18G+N189K+E408D+AS59N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,(A5)S313D+E408D,(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G,(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;
(B)0.0005至0.5重量%、优选0.001至0.1重量%的黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,和(B8)s100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;
(C)0.1至5.5重量%、优选0.25至1.5重量%的酶稳定组分,其中该酶稳定组分选自下述:甘油和甲酸盐,优选地是甲酸钠;以及
(D)0至99重量%的至少一种其他的洗涤剂组分,优选表面活性剂。
在一些方面,本发明涉及本发明的组合物的用途,其中所述用途选自下述:用于降解黄原胶的用途和用于清洁过程(例如衣物或硬表面清洁,如餐具洗涤)的用途。
在一些方面,本发明进一步涉及本发明的洗涤剂组合物用于降解黄原胶、用于洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(例如餐具洗涤)的用途,其中该组合物具有酶去污益处。
在一些方面,本发明还涉及使用本发明的洗涤剂组合物降解黄原胶的方法,其中黄原胶是在硬表面或纺织品的表面上。
在一些方面,本发明涉及酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中、特别是在液体衣物洗涤剂组合物中的稳定性的用途,其中该内切葡聚糖酶变体和/或该黄原胶裂解酶变体如上文所定义,并且其中该酶稳定组分选自下述:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地,所述酶稳定组分选自甘油和甲酸钠,更优选地是甲酸钠。
在特定的方面,本发明涉及酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途,其中该内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:A559N+Y579W+T697G,K512P+A559N+Y579W+T697G,N16G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,S313D+E408D,R880K+N905D+K921R+Y934G,I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;其中该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+1234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;并且其中所述酶稳定组分选自下述:甘油和甲酸钠。
序列表概述
SEQ ID NO:1是来自类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp.)菌株的亲本的成熟内切葡聚糖酶的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2是来自类芽孢杆菌属菌株的亲本的成熟黄原胶裂解酶的氨基酸序列。
定义
清洁或洗涤剂应用:术语“清洁或洗涤剂应用”是指出于清洁或洗涤的目的,通过手动、机器或自动化,将本发明的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体以任何组合物的形式应用于硬表面或纺织品上。
颜色澄清:在洗涤和穿着期间,松散或破碎的纤维可累积在织物的表面上。一个结果可能是,织物的颜色由于表面污染而显得不那么明亮或不那么强烈。从纺织品中去除松散或破碎的纤维将部分地恢复纺织品的原始颜色和外观。如本文所用,术语“颜色澄清”意味着纺织品的初始颜色的部分恢复。
对应于:如本文所用,术语“对应于”是指确定序列的具体氨基酸的方法,其中引用了具体氨基酸序列。例如,出于本发明的目的,当涉及具体氨基酸位置时,本领域技术人员能够将另一氨基酸序列与已经引用的所述氨基酸序列比对,以便确定在所述另一氨基酸序列中哪个特定氨基酸可能是所关注的。本文其他地方已经描述了另一氨基酸序列与例如SEQ ID NO:1或2所述的序列的比对。可以使用替代的比对方法,并且该方法对于本领域技术人员来说是众所周知的。
降解黄原胶和黄原胶降解活性:术语“降解黄原胶”和“黄原胶降解活性”可互换地使用,并且被定义为将黄原胶解聚、降解或分解成较小的组分。黄原胶的降解可以是去除一种或多种侧链糖、将黄原胶的主链切割成较小的组分、或者去除一种或多种侧链糖并且将黄原胶的主链切割成较小的组分。用于测量黄原胶降解的优选测定是如本文实例2和3中所描述的还原糖测定。黄原胶降解活性的非限制性实例包括内切葡聚糖酶EC 3.2.1.4活性和/或黄原胶裂解酶EC 4.2.2.12活性。
洗涤剂组分:术语“洗涤剂组分”在本文中被定义为是指可以用于洗涤剂组合物的化学品的类型。洗涤剂组分的实例是表面活性剂、助水溶物(hydrotrope)、助洗剂(builder)、共助洗剂(cobuilder)、螯合剂或络合剂、漂白系统或漂白剂组分、聚合物、色调调节剂(hueingagent)、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种任何类型的洗涤剂组分。
洗涤剂组合物:术语“洗涤剂组合物”(或“清洁组合物”)是指可用于去除待清洁的物品例如纺织品、餐具和硬表面等中的不期望的化合物的组合物。洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品、餐具和用于家居清洁和工业清洁二者的硬表面。该术语涵盖被选择用于所期望的清洁组合物的特定类型以及产品的形式(例如液体、凝胶、粉末、颗粒、糊剂或喷剂组合物)的任何材料/化合物,并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如液体和/或固体衣物洗涤剂和细薄织物洗涤剂;硬表面清洁制剂,例如用于玻璃、木材、陶瓷和金属台面以及窗户的制剂;地毯清洁剂;烤箱清洁剂;织物清新剂;织物柔顺剂;以及纺织品和衣物预除污剂(pre-spotter),以及餐具洗涤洗涤剂)。除含有如本文所描述的内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶之外,洗涤剂制剂还可以含有一种或多种额外的酶(例如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤素过加氧酶、氧化还原酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶或其任何混合物),和/或其他的洗涤剂组分。
餐具洗涤:术语“餐具洗涤”是指洗涤餐具的所有形式,例如通过手动或自动餐具洗涤。洗涤餐具包括但不限于清洁所有形式的陶器例如盘子、杯子、玻璃杯、碗,所有形式的刀叉餐具例如勺子、刀子、叉子和服务器具,以及陶瓷制品、塑料制品、金属制品、瓷器、玻璃制品和丙烯酸树脂制品。
餐具洗涤组合物:术语“餐具洗涤组合物”是指用于清洁硬表面的组合物的所有形式。本发明不局限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。
内切葡聚糖酶:术语“内切葡聚糖酶”或“EG”是指内切-1,4-(1,3;1,4)-B-D-葡聚糖4-葡聚糖水解酶(EC 3.2.1.4),其催化以下各项的内切水解:纤维素、纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素和羟乙基纤维素)、地衣聚糖中的1,4-β-D-糖苷键,混合的β-1,3葡聚糖(例如谷物β-D-葡聚糖)、木葡聚糖、黄原胶和其他含有纤维素组分的植物材料中的β-1,4键。用于测量内切葡聚糖酶活性的优选测定是如本文实施例2中所描述的还原糖测定。内切葡聚糖酶的非限制性实例包括具有SEQ ID NO:1的成熟的亲本内切葡聚糖酶。
对用黄原胶裂解酶预处理过的黄原胶具有活性的内切葡聚糖酶变体:术语“对用黄原胶裂解酶预处理过的黄原胶具有活性的内切葡聚糖酶变体”或“对用黄原胶裂解酶预处理过的黄原胶具有活性且属于糖基水解酶的GH9类别的内切葡聚糖酶”被定义为一种多肽,该多肽包含属于糖基水解酶的GH9类别的结构域,并且对用黄原胶裂解酶预处理过的黄原胶具有活性(例如酶促活性、黄原胶降解活性、内切葡聚糖酶EC 3.2.1.4活性)。在本文的实施例2中公开了用于测量对用黄原胶裂解酶预处理过的黄原胶的活性的优选测定。
酶去污益处:术语“酶去污益处”在本文中被定义为与不含酶的相同洗涤剂相比,酶可以添加到洗涤剂中的有利效果。可以通过酶提供的重要去污益处是:在洗涤和/或清洁之后在没有污垢或有极少可见污垢的情况下去除污渍、防止或减少洗涤过程中所释放的污垢的再沉积(该效果也被称为抗再沉积)、完全或部分地恢复纺织品的白度,该纺织品最初是白色的,但在反复使用和洗涤之后其外观变成了淡灰色或淡黄色(该效果也被称为增白)。纺织品护理益处不与催化去除污渍或防止污垢再沉积直接相关,对酶去污益处也很重要。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一种织物转移到另一织物或同一织物的另一部分(该效果也被称为染料转移抑制或抗返染)、从织物表面去除突出或破碎的纤维以降低起球趋势或去除已经存在的球粒或绒毛(该效果也被称为抗起球)、改进织物柔软性、澄清织物的颜色,以及去除陷入织物或服装的纤维中的颗粒污垢。酶漂白是进一步的酶去污益处,其中催化活性通常用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。
硬表面清洁:术语“硬表面清洁”在本文中被定义为硬表面的清洁,其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等,以及硬物体(如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤))的表面。
改进的属性:术语“改进的属性”是指与变体相关的特征,该变体与亲本相比有所改进。此类改进的属性包括但不限于催化效率、催化速率、化学稳定性、氧化稳定性、pH活性、pH稳定性、比活性、储存条件下的稳定性、螯合剂稳定性、底物结合、底物裂解、底物特异性、底物稳定性、表面属性、热活性、热稳定性、洗涤性能或去除污渍。
衣物洗涤:术语“衣物洗涤”涉及家居衣物洗涤和工业衣物洗涤二者,并且是指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液来处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以使用例如家居或工业洗涤机进行,或者可以通过手动进行。
成熟多肽:术语“成熟多肽”是指在翻译和任何翻译后修饰(如N-末端加工、C-末端截短、糖基化、磷酸化等)之后的最终形式的多肽。在一个方面,成熟多肽是SEQ ID NO:1的氨基酸1至1055或SEQ ID NO:2的氨基酸1至1037。
亲本:术语“亲本”或“亲本内切葡聚糖酶”或“亲本黄原胶裂解酶”是指具有内切葡聚糖酶或黄原胶裂解酶活性的任何多肽,可以对其进行改变以产生本发明的酶变体。在一个方面,亲本是具有变体的相同氨基酸序列但不具有在所指定的位置中的一个或多个处的改变的内切葡聚糖酶(或黄原胶裂解酶)。将理解,表达“具有相同氨基酸序列”涉及100%的序列相同性。亲本内切葡聚糖酶的非限制性实例包括具有SEQ ID NO:1的成熟亲本内切葡聚糖酶。亲本黄原胶裂解酶的非限制性实例包括具有SEQ ID NO:2的成熟亲本黄原胶裂解酶。
序列相同性:通过参数“序列相同性”描述两个氨基酸之间的相关性。出于本发明的目的,使用Needleman-Wunsch算法确定两个氨基酸序列之间的序列相同性(Needlemanand Wunsch,1970,J.Mol.Biol.48:443-453),如在EMBOSS包装件的Needle程序中所实施的(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite,Rice et al.,2000,Trends Genet.16:276-277),优选版本5.0.0或更高版本。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。标记为“最长相同性”的Needle输出(使用-nobrief选项获得)用作百分比相同性,并且如下计算:(相同的残基x 100)/(比对的长度-比对中的空位总数)。
稳定性:术语“稳定性”是指对变化、展开、崩解、变性或活性丧失的抗性或抗性程度。稳定性的非限制性实例包括构象稳定性、储存稳定性和使用期间(例如洗涤过程期间)的稳定性,并且反映多肽(例如根据本发明的内切葡聚糖酶变体或黄原胶裂解酶变体)作为时间的函数的稳定性,例如当将所述多肽(例如所述内切葡聚糖酶变体或黄原胶裂解酶变体)保持在溶液中,特别是在洗涤剂溶液中时保留了多少活性。稳定性受到许多因素的影响,例如螯合剂的存在、pH、温度、洗涤剂组合物,例如助洗剂、表面活性剂、螯合剂的量等。可如本文实施例2和3所述测量内切葡聚糖酶或黄原胶裂解酶稳定性。
纺织品:术语“纺织品”是指包括纱线、纱线中间体、纤维、无纺材料、天然材料、合成材料和任何其他纺织品材料在内的任何纺织品材料、由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如服装和其他物品)。纺织品或织物可以是针织物、机织物、牛仔布、无纺物、毛毡、纱线和毛巾的形式。纺织品可以是纤维素基的,如天然纤维素,包括棉、胡麻/亚麻、黄麻、苎麻、剑麻或椰纤维,或者人造纤维素(例如源自木浆),包括粘胶/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(tricell)、莱赛尔纤维或其混合物。纺织品或织物也可以是非纤维素基的,如天然聚酰胺,包括羊毛、驼绒、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝,或者合成聚合物,如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维,或其共混物,以及纤维素基纤维和非纤维素基纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶与一种或多种伴随材料(如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳纶纤维))的共混物,以及含纤维素的纤维(如人造丝/粘胶、苎麻、胡麻/亚麻、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是传统的可洗涤衣物,例如有污渍的家居衣物。当使用术语织物或服装时,它也意在包括更广泛的术语纺织品。
变体:术语“变体”是指在一个或多个(例如若干个)位置处包含改变即取代、插入和/或缺失的多肽(例如内切葡聚糖酶多肽或黄原胶裂解酶多肽)。取代是指用不同的氨基酸替换占据某个位置的氨基酸;缺失是指去除占据某个位置的氨基酸;以及插入是指添加一个或多个(例如若干个)氨基酸,例如1-5个氨基酸,其与占据某个位置的氨基酸相邻并且紧靠在该氨基酸之后。如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体的非限制性实例包括对黄原胶(用于黄原胶裂解酶)和用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶(用于内切葡聚糖酶)具有活性的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体。本文描述的变体的非限制性实例进一步包括具有成熟亲本的至少20%例如至少40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%内切葡聚糖酶活性的变体,该成熟亲本具有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在本文的实施例2和3中公开了用于测量对(任选地用黄原胶裂解酶预处理)黄原胶的活性的优选测定。
变体定名的惯例:出于本发明的目的,SEQ ID NO:1中所公开的成熟多肽用于确定另一内切葡聚糖酶中的对应氨基酸残基,并且SEQ ID NO:2中所公开的成熟多肽用于确定另一黄原胶裂解酶中的对应氨基酸残基。将另一内切葡聚糖酶/黄原胶裂解酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1中所公开的成熟多肽比对,或者基于比对,使用Needleman-Wunsch算法(如上文所描述)确定对应于SEQ ID NO:1或2中所公开的成熟多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号。另一内切葡聚糖酶或黄原胶裂解酶中的对应氨基酸残基的鉴定可以通过使用本领域技术人员已知的若干计算机程序对多个多肽序列进行比对来确定。在描述本发明的变体时,下文描述的命名法被改编以便于参考。采用公认的IUPAC单字母或三字母氨基酸缩写。
取代:对于氨基酸取代,使用以下的命名法:原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。因此,位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代被定名为“Thr226Ala”或“T226A”。多个突变由加成标记(“+”)分开,例如“Gly205Arg+Set411Phe”或“G205R+S411F”,其表示位置205和411处的取代,其中分别地,甘氨酸(G)被精氨酸(R)取代并且丝氨酸(S)被苯丙氨酸(F)取代。
缺失:对于氨基酸缺失,使用以下的命名法:原始氨基酸、位置、*。因此,位置195处的甘氨酸缺失被定名为“Gly195*”或“G195*”。多个缺失由加成标记(“+”)分开,例如“Gly195*+Ser411*”或“G195*+S411*”。
插入:对于氨基酸插入,使用以下的命名法:原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。因此,在位置195处的甘氨酸之后的赖氨酸插入被定名为“Gly195GlyLys”或“G195GK”。将多个氨基酸的插入定名为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2等]。例如,在位置195处的甘氨酸之后的赖氨酸和丙氨酸插入被指示为“Gly195GlyLysAla”或“G195GKA”。特定位置处的插入的指示被理解为是在原始氨基酸残基之后的插入。例如,“位置195处的插入”被理解为是在位置195中的原始残基之后的插入。
在此种情况中,通过将小写字母添加到插入的氨基酸残基前面的氨基酸残基的位置编号中来对插入的氨基酸残基进行编号。在上述实例中,序列因此可能会为:
多个改变:包含多个改变的变体由加成标记(“+”)分开,例如“Arg170Tyr+Gly195Glu”或“R170Y+G195E”,其表示位置170和195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
不同的改变:如果可以在某个位置处引入不同的改变,则不同的改变由逗号分开,例如,“Arg170Tyr,Glu”表示位置170处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此,“Tyr167Gly,Ala+Arg170Gly,Ala”表示以下的变体:“Tyr167Gly+Arg170Gly”、“Tyr167Gly+Arg170Ala”、“Tyr167Ala+Arg170Gly”和“Tyr167Ala+Arg170Ala”。可替代地,可以使用括号指示不同的改变,例如Arg170[Tyr,Gly]或以一个字母代码R170[Y,G]。
洗涤性能:术语“洗涤性能”是指在例如洗涤或硬表面清洁期间,酶去除待清洁物体上的污渍的能力。可以通过计算“用于衣物的自动机械应力测定(AMSA)”中所谓的强度值(Int)或者简算值(Rem)来量化洗涤性能的改进。
对黄原胶具有活性的黄原胶裂解酶变体:术语“对黄原胶具有活性的黄原胶裂解酶变体”被定义为一种裂解黄原胶的β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡糖醛酰基键的多肽(例如黄原胶裂解酶EC 4.2.2.12活性)。在本文的实施例3中公开了用于测量对黄原胶的活性的优选测定。对黄原胶具有活性的黄原胶裂解酶变体的实例是如此的黄原胶裂解酶多肽。因此,裂解黄原胶的β-D-甘露糖基-β-D-1,4-葡糖醛酰基键的多肽。
发明详述
已知的具有SEQ ID NO:1的黄原胶内切葡聚糖酶和具有SEQ ID NO:2的黄原胶裂解酶都是大的酶(>1000个氨基酸残基)。因此,例如在表面活性剂或螯合剂的存在下,将上述已知酶的属性作为目标以改进例如在洗涤剂组合物中的稳定性是极其费时费力和昂贵的。
本发明的发明人令人惊讶地发现,特异性内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体在洗涤剂组合物中的稳定性可以通过添加例如选自下组的某些酶稳定组分,特别是通过添加甲酸钠来改进,该组由以下各项组成:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地所述酶稳定组分选自甘油和甲酸盐。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变(优选取代):对应于SEQ ID NO:1的氨基酸95至105的区域1、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸115至138的区域2、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸210至251的区域3、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸267至301的区域4、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸339至361的区域5、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸547至595的区域6、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸612至660的区域7、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸806至828的区域8,对应于SEQ IDNO:1的氨基酸839至1042的区域9、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1至94的区域10、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸106至114的区域11、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸139至209的区域12、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸252至266的区域13、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸302至338的区域14、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸362至546的区域15、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸596至611的区域16、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸661至805的区域17、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸829至838的区域18和对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1043至1055的区域19。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变(优选取代):对应于SEQ ID NO:2的氨基酸154至176的区域1、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸614至658的区域2、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸731至803的区域3、对应于SEQ IDNO:2的氨基酸807至846的区域4、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸872至885的区域5、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸903至1004的区域6、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1至153的区域7、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸177至613的区域8,对应于SEQ ID NO:2的氨基酸659至730的区域9、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸804至806的区域10、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸847至871的区域11、对应于SEQ IDNO:2的氨基酸886至902的区域12和对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1005至1037的区域13。
在一个实施方案中,本发明提供了包含如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和黄原胶裂解酶变体的洗涤剂组合物,这两种变体由于酶稳定组分的添加而在所述洗涤剂组合物中都具有显著改进的稳定性。
在一个实施方案中,酶稳定组分选自:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地所述酶稳定组分选自甘油和甲酸盐。
在优选的实施方案中,酶稳定组分是甘油和/或甲酸钠。
内切葡聚糖酶变体
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变(优选取代):对应于SEQ ID NO:1的氨基酸95至105的区域1、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸115至138的区域2、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸210至251的区域3、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸267至301的区域4、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸339至361的区域5、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸547至595的区域6、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸612至660的区域7、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸806至828的区域8,对应于SEQ ID NO:1的氨基酸839至1042的区域9、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1至94的区域10、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸106至114的区域11、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸139至209的区域12、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸252至266的区域13、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸302至338的区域14、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸362至546的区域15、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸596至611的区域16、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸661至805的区域17、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸829至838的区域18和对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1043至1055的区域19。
在一个实施方案中,此种变体与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性,进一步优选地所述活性是黄原胶降解活性。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体在选自下组的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变,优选取代,或在选自下组的一个区域中包含多个改变(如2、3、4、5、6、7、8、9或10),或在选自下组的多个区域(例如2、3、4,5、6,7、8或9)中包含多个改变(例如2、3、4、5、6、7,8、9或10),该组由以下各项组成:对应于SEQ ID NO:1的氨基酸95至105的区域1、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸115至138的区域2、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸210至251的区域3、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸267至301的区域4、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸339至361的区域5、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸547至595的区域6、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸612至660的区域7、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸806至828的区域8,对应于SEQ ID NO:1的氨基酸839至1042的区域9、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1至94的区域10、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸106至114的区域11、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸139至209的区域12、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸252至266的区域13、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸302至338的区域14、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸362至546的区域15、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸596至611的区域16、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸661至805的区域17、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸829至838的区域18和对应于SEQ IDNO:1的氨基酸1043至1055的区域19,其中所述变体与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性,进一步优选地所述活性是黄原胶降解活性。
在一个实施方案,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在下述区域中的一个或多个位置处的改变(优选取代):(i)区域6和17;(ii)区域6、15和17;(iii)区域10、12和15;(iv)区域6、7、16和17;(v)区域6、9、10、12、15和17;(vi)区域14和15;(Vii)区域9;(viii)6、7、9、14、15、16和17;或(ix)3、6、7、9、14、15、16和17;其中所述变体优选地在所提及的那些区域之外的其他区域中没有改变。
在一个实施方案,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60%例如至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):
4,17,18,20,51,53,55,56,60,63,71,79,87,92,99,120,125,126,130,137,182,186,189,192,213,216,221,226,228,230,231,232,233,235,240,243,247,249,278,279,281,283,285,289,292,294,298,302,311,313,333,346,353,358,386,387,388,390,403,408,410,416,441,448,451,471,472,476,489,507,512,515,538,555,556,557,558,559,560,561,562,563,564,567,568,570,575,578,579,580,581,583,589,590,591,592,593,595,598,599,602,603,605,607,609,616,627,630,631,635,636,638,639,640,641,642,643,644,651,676,683,688,690,694,698,699,706,711,713,719,720,744,749,754,756,760,781,786,797,810,811,812,815,823,824,825,827,828,833,834,835,837,843,848,868,869,870,871,872,873,874,880,881,883,884,885,887,888,890,892,894,898,905,906,912,920,921,924,926,927,928,932,933,934,935,937,938,939,940,941,942,943,946,948,950,952,953,954,956,957,960,966,971,972,980,989,991,994,995,998,999,1006,1009,1010,1011,1029,1030,1031,1032,1035,1037,1038,1040,1041,1042,1044,1045和1048,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在选自下述的2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个位置处的改变(优选取代):4,17,18,20,51,53,55,56,60,63,71,79,87,92,99,120,125,126,130,137,182,186,189,192,213,216,221,226,228,230,231,232,233,235,240,243,247,249,278,279,281,283,285,289,292,294,298,302,311,313,333,346,353,358,386,387,388,390,403,408,410,416,441,448,451,471,472,476,489,507,512,515,538,555,556,557,558,559,560,561,562,563,564,567,568,570,575,578,579,580,581,583,589,590,591,592,593,595,598,599,602,603,605,607,609,616,627,630,631,635,636,638,639,640,641,642,643,644,651,676,683,688,690,694,698,699,706,711,713,719,720,744,749,754,756,760,781,786,797,810,811,812,815,823,824,825,827,828,833,834,835,837,843,848,868,869,870,871,872,873,874,880,881,883,884,885,887,888,890,892,894,898,905,906,912,920,921,924,926,927,928,932,933,934,935,937,938,939,940,941,942,943,946,948,950,952,953,954,956,957,960,966,971,972,980,989,991,994,995,998,999,1006,1009,1010,1011,1029,1030,1031,1032,1035,1037,1038,1040,1041,1042,1044,1045和1048,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):17、20、216、283、302、311、313、408、476、579、602、627、636、638、651、688、697、719、756、880、881、883、887、906、921、934、937和956,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在更优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体在对应于位置17、20、216、283、302、311、313、408、476、579、602、627、636、638、651、688、697、719、756、880、881、883、887、906、921、934、937和956的每个位置(或至少四个位置)处包含改变,优选取代,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:
V4T,S17A,N18G,F20P,F20N,F20G,F20Y,K51Q,K51H,E53Y,E53P,E53G,Y55M,Y55D,V56M,Y60F,S63F,A71E,T87R,T92S,K99R,A120P,I125V,A126R,S128X,N129D,K130R,F137L,H182Y,A186P,N189K,K192N,K213R,N216D,N216Q,N216R,A221R,L226K,K228E,K228I,G230F,G230L,G230A,G230H,G230N,G230W,G230T,F231Y,F231N,V232R,V232G,L233H,H235D,N240Q,G243K,G243R,D247N,A249N,A278S,G279E,K281F,K281V,K281Y,K281H,K281Q,K281N,K281W,K281T,K281R,A283D,N285G,N285L,N285M,N285S,N285P,N285T,N285Y,N285H,N285K,N285D,N285W,N285R,Q289E,T292A,T292F,T292L,T292I,T292V,T292S,T292P,T292Y,T292Q,T292N,T292K,T292D,T292G,A294V,F297L,Q298E,I302D,I302H,I302V,I302M,H311N,S313D,W333L,A346H,A346D,T353D,A386P,I387T,K388R,K390Q,I403Y,E408D,E408N,E408S,E408P,E408A,E408G,P410G,Q416S,Q416D,N441G,A448E,A448W,A448S,K451Q,K451S,G471S,S472Y,D476R,Q489P,K507R,K512P,S515V,S538C,L555Q,G556S,G557R,N558P,N558F,N558K,N558D,N558M,N558Q,N558I,N558Y,N558H,N558E,A559N,A559F,A559M,A559P,A559Y,A559H,A559Q,A559D,A559R,A559G,A559I,A559S,A559K,S560F,S560P,S560K,S560G,S560D,T561E,T561Q,T561S,T561D,T561P,G562W,G562P,G563E,A564I,A564Y,A564H,A564Q,A564K,A564E,A564D,E565M,V567F,V567P,K568R,L569F,L569Y,L569D,L569E,P570F,P570L,P570I,P570M,P570V,P570S,P570T,P570A,P570Y,P570H,P570Q,P570N,P570K,P570E,P570W,P570R,P570G,I575V,I575M,I575A,I575D,I575E,I576F,I576M,I576P,D578R,Y579F,Y579W,V580L,T581M,D583M,Q589G,P590S,P590T,P590E,E591L,G592D,S593P,S593H,S593Q,S593N,S593K,S593D,S593E,S593R,S595L,S598Q,A599S,I602T,1602D,V603P,S605T,S607C,G609E,S616G,S616D,K627L,K627M,K627V,K627S,K627T,K627Q,K627R,I630F,I630V,I630Y,K631R,K631A,T633V,D635L,D635M,D635T,D635A,D635P,D635N,D635K,D635E,D635G,D635W,S636L,S636M,S636A,S636H,S636Q,S636N,S636K,S636R,F638N,F638Y,T639D,F638I,F638V,F638T,F638L,F638H,F638M,T639V,T639S,T639L,T639I,T639M,T639A,T639E,T639W,T639G,T639Y,T639P,T640S,Y641E,S642T,S642N,N643D,N643H,N643T,T644F,A651P,A651S,D676H,Q683E,A688G,Y690F,T694A,T697G,R698W,T699A,T706Q,T711S,T711V,T711Y,K713R,W719R,K720H,K744H,K744Q,A749T,K754R,V756Y,V756H,S760G,T781M,N786K,T797S,S810Q,S810R,A811S,V812F,V812I,V812M,V812W,V812R,N815V,N815Y,N815E,N815W,N815R,S823Q,A824T,A824D,T825G,T825N,T825W,T825A,T825D,V827I,V827M,V827S,N828D,N833D,Q834E,S835A,S835D,V837I,T843V,N848D,A868E,A869V,D870F,D870L,D870I,D870M,D870V,D870S,D870T,D870Y,D870H,D870Q,D870N,D870K,D870E,D870W,D870R,D870G,P871F,P871L,P871I,P871M,P871V,P871S,P871T,P871A,P871Y,P871H,P871Q,T872S,T872F,T872A,T872Y,T872H,T872Q,T872N,T872K,T872D,T872E,T872W,T872R,T872G,D873K,D873E,T874V,T874S,T874P,T874A,T874H,T874Q,T874N,T874K,R880K,V881Q,V881T,T883R,T883V,T883C,T883K,Y884H,A885F,A885Q,A885N,T887L,T887I,T887S,T887H,T887R,T887K,L888M,V890R,T892P,T892V,K894E,R898Q,N905D,F906A,Q912V,N920P,N920D,K921R,K921E,K921D,A924D,V926F,V926P,K927R,S928D,T932A,N933V,N933S,Y934G,Y934M,Y934S,Y934A,Y934Q,Y934N,Y934E,Y934W,Y934R,T935W,A937F,A937V,A937S,A937T,A937Q,A937D,A937E,V938I,K939I,K939V,D940E,N941S,N941H,N941D,A942P,A942E,D943Y,D943H,G946R,K948R,K948E,R950V,R950H,R950N,F952S,F952W,N953Y,G954L,Q956Y,Q956S,A957L,A957P,Y960F,A964N,A964C,N966P,N966C,G971A,T972K,Q974K,Q974C,M980I,Q989I,Q991L,Q991I,Q991M,Q991V,Q991T,Q991K,Q991C,G994D,G994N,S995I,S995V,S995Q,S995R,S995C,G998V,G998A,T999R,S1006T,S1006A,S1006K,S1006R,K1009E,Y1010W,L1011M,L1011S,L1011A,L1011Q,L1011N,L1011D,L1011E,R1029N,F1030M,K1031I,K1031S,K1031T,K1031H,V1032G,K1035A,A1037E,A1037W,S1038L,S1038I,S1038G,L1040N,L1040E,G1041F,G1041R,Y1042N,L1044F,L1044S,L1044N,L1044W,P1045Q,P1045W和F1048W,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在优选的实施方案,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:S17A、F20P、N216D、N216Q、A283D、I302D、H311N、S313D、E408D、D476R、Y579W、I602T、K627R、S636N、S636K F638I、F638N、A651P、A688G、T697G、W719R、V756Y、R880K、V881Q、T883R、,T887K、F906A、K921R、Y934G、A937E和Q956Y,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在进一步优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一组改变:
A559K+N558K+S560F+T561P+G562W,A559N+P570Q,A559N+P570干A559N+Y579F,A559N+Y579F+K627R,A559N+Y579W,A559N+Y579W+K99R,A559N+Y579W+S128X+K627R,A559N+Y579W+S128X+S636N,A559N+Y579W+K281R,A559N+Y579W+Q416D+S636N,A559N+Y579W+S560P,A559N+Y579W+A564I,A559N+Y579W+P570N,A559N+Y579W+P570K,A559N+Y579W+P570R,A559N+Y579W+P570A,A559N+Y579W+P570T,A559N+Y579W+P570S,A559N+Y579W+P570Q,A559N+Y579W+P570H,A559N+Y579W+S616D,A559N+Y579W+S616D+K627R,A559N+Y579W+S616D+S636K,A559N+Y579W+S616D+A651P,A559N+Y579W+S616D+K921R,A559N+Y579W+S616D+K921R+Y934G,A559N+Y579W+K627R,A559N+Y579W+K627R+S636N+A651P,A559N+Y579W+K627R+S636N+K921R,A559N+Y579W+K627R+K921R,A559N+Y579W+K627M,A559N+Y579W+K627M+A651P,A559N+Y579W+S636N,A559N+Y579W+S636N+A651P,A559N+Y579W+S636N+K921R,A559N+Y579W+S636K+A651P,A559N+Y579W+S636K+K921R,A559N+Y579W+S636L,A559N+Y579W+F638I,A559N+Y579W+A651P,A559N+Y579W+A651P+K921R+Y934G,A559N+Y579W+A651P+Y934G,A559N+Y579W+D870M,A559N+Y579W+K921R,A559N+Y579W+K921R+A651P,A559N+Y579W+K921R+Y934G,A559N+Y579W+Y934G,A559N+Y579W+K948E,A559N+Y579W+K1009E,A559N+K627R,Y579F+A564E,Y579W+K99R,Y579W+G562P,Y579W+A564D 579W+P570K,Y579W+P570Q,Y579W+K627R,Y579W+S636N,Y579W+F638I,Y579W+A651P,Y579W+K921R,Y579W+Y934G,Y579W+K948E,Y579W+K1009E,K627R+K51Q,K627R+K451S,K627R+P570Q,K627R+P570T,K627R+S636N,K627R+F638I,K627R+A885F,K627R+Y934G,S636N+P570T,S636N+K921R,S636N+Y934G,F638I+P570K,F638I+P570Q,F638I+P570T,F638I+A651P,F638I+Y934G,F638I+K921R,A651P+P570Q,A651P+P570T,A885F+P570T,A885F+Y934G,K921R+P570Q,K921R+P570干Y934G+P570T,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在甚至更优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一组改变:
559N+Y579W+T697G,K512P+A559N+Y579W+T697G,N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,S313D+E408D,R880K+N905D+K921R+Y934G,I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,and N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+VV719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
在特定的方面,内切葡聚糖酶变体除前述改变之外,相对于SEQ ID NO:1的亲本酶没有进一步的改变,即,剩余序列与SEQ ID NO:1相同。
黄原胶裂解酶变体
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变(优选取代):对应于SEQ ID NO:2的氨基酸154至176的区域1、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸614至658的区域2、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸731至803的区域3、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸807至846的区域4、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸872至885的区域5、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸903至1004的区域6、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1至153的区域7、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸177至613的区域8,对应于SEQ ID NO:2的氨基酸659至730的区域9、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸804至806的区域10、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸847至871的区域11、对应于SEQID NO:2的氨基酸886至902的区域12和对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1005至1037的区域13。
在一个实施方案中,所述变体与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地,所述黄原胶裂解酶变体对黄原胶具有活性,进一步优选地,所述活性是黄原胶降解活性。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体在选自下组的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变,优选取代,或在选自下组的一个区域中包含多个改变(如2、3、4、5、6、7、8、9或10),或在选自下组的多个区域(例如2、3、4,5、6,7、8或9)中包含多个改变(例如2、3、4、5、6、7,8、9或10),该组由以下各项组成:对应于SEQ ID NO:2的氨基酸154至176的区域1、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸614至658的区域2、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸731至803的区域3、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸807至846的区域4、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸872至885的区域5、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸903至1004的区域6,对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1至153的区域7、对应于SEQ IDNO:2的氨基酸177至613的区域8、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸659至730的区域9、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸804至806的区域10、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸847至871的区域11、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸886至902的区域12和对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1005至1037的区域13,其中所述变体与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地所述黄原胶裂解酶变体对黄原胶具有活性,进一步优选地所述活性是黄原胶降解活性。
在一个实施方案,如本文所描述的黄原胶裂解酶变体是包含在下述区域中的一个或多个位置处的改变(优选取代)的变体:(i)区域3和5;(ii)区域3、5和12;(iii)区域8和9;(iv)区域2、3和5;(v)区域2、3、5和12;(vi)区域3、5、8、9和12;(vii)区域2、3、5、8和9;(viii)3、5、8、9和12;(ix)2、3、5、8、9和12;(x)区域3;(xi)区域3、4、5;(xii)区域7、8和9;(xiii)区域12和13;(xiv)区域3、4、5、8、9和12;(xv)区域8、9、12和13;(xvi)区域7、8、9、12和13;(xvii)区域3、4、5、7、8、9和12;和(xvii)区域3、4、5、7、8、9、12和13,其中所述变体优选地在所提及的区域之外的其他区域中没有改变。
在一个实施方案,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少60%例如至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变(优选取代):
9,15,18,46,58,66,89,95,100,106,109,155,159,183,188,190,203,204,221,229,234,238,240,242,243,257,258,284,291,293,316,317,320,324,329,333,339,341,352,354,360,372,377,399,400,419,440,450,451,454,458,481,492,505,533,567,568,576,578,579,582,620,624,626,631,635,649,650,656,664,672,703,722,726,727,728,738,745,752,753,754,757,769,775,777,779,782,786,789,792,796,799,801,819,824,843,851,855,856,867,875,887,892,899,900,901,902,903,911,912,915,919,921,923,925,927,928,930,933,941,966,991,1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含在选自下述的2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或更多个位置处的改变(优选取代):9,15,18,46,58,66,89,95,100,106,109,155,159,183,188,190,203,204,221,229,234,238,240,242,243,257,258,284,291,293,316,317,320,324,329,333,339,341,352,354,360,372,377,399,400,419,440,450,451,454,458,481,492,505,533,567,568,576,578,579,582,620,624,626,631,635,649,650,656,664,672,703,722,726,727,728,738,745,752,753,754,757,769,775,777,779,782,786,789,792,796,799,801,819,824,843,851,855,856,867,875,887,892,899,900,901,902,903,911,912,915,919,921,923,925,927,928,930,933,941,966,991,1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变:624、631、635、649、656、738、752、753、754、757、769、775、777、800、801、843、875、911和915,和/或包含在选自下述的一个或多个位置处的改变:89、100、190、229、234、352、360、399、440、458、492、567、582、664、672、703、728、892、1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:
K9R,N15T,T18D,L46D,A58L,S66H,Q89Y,K95E,S100D,N106Y,Q109R,Q109D,Q109F,Q109K,Q109A,Y155E,A159P,K183Q,K183R,V188I,A190Q,A203P,K204R,A221P,E229N,E229S,E229V,I234V,I238W,I238L,I238M,I240W,N242S,G243V,Y257W,R258E,R284G,K291R,A293G,A293P,K316R,R317K,K320R,L324Q,K329R,K333R,L339M,I341P,V352I,S354P,K360G,K360R,Q372H,F377Y,N399K,K400R,F419Y,N440K,D450P,K451E,K451R,A454V,D458S,K481R,A492H,A492L,T505I,L533I,K567R,G568A,S578K,S578N,S578R,S579R,S579K,S582K,K620R,A624E,A626Q,T631N,S635E,S635T,T649V,T649K,Q650G,I656V,T664K,N672D,I703L,I722F,P726Q,T727P,M728V,G738L,K745R,P752R,P752K,G753E,G753Q,G753S,S754E,S754L,S754Q,S754R,S757D,S757P,S757E,A769D,A769T,A769R,L775A,L775F,L775I,L775M,L775Q,L775S,L775Y,D777R,P779V,Y782I,N786K,G789R,K792W,K792Y,K792V,K792A,N796Q,A799H,D801G,K819R,K824R,A843P,S851F,K855R,E856D,P867S,K875T,K875E,K887R,N892Y,N892W,N892F,G899S,I900G,D901A,T902F,T903A,T903Q,A911M,A911V,A911S,A912T,A912I,A912Y,T915S,T915V,T915Q,T919D,T919F,T919G,T921R,T921S,T923D,T923H,T925D,T925Q,T925R,T927K,D928W,Y930F,Y930H,Y930L,D933M,G941D,G941E,A966P,N991D,V998K,N1008D和K1016T,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个取代:Q89Y、S100D、A190Q、E229S、I234V、V352I、K360G、N399K、N440K、D458S、A492H、A492L、K567R、S582K、T664K、N672D、I703L、M728V、N892YN1008D和K1016T,和/或包含选自下述的一个或多个取代:A624E、T631N、S635E、T649K、I656V、G738L、P752K、P752R、G753E、S754E、S754R、S757D、A769D、L775A、D777R、V800P、D801G、A843P、K875T、A911V和T915A,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一组改变:A190Q+E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+I703L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+I703L+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+V352I+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+T664K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+A911V+N1008D+K1016T,E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,Q89Y+E229S+N440K+S582K+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,E229S+N440K+S582K+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+V800P+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,A190Q+E229S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+N672D+P752R+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S582K+S635E+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+I234V+A492L+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+T664K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+T915A+N1008D,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+D458S+T631N+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S754R+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y,E229S+D458S+S582K+T631N+S635E+N672D+M728V+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,E229S+A492L+S635E+T649K+I656V+N672D+G753E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,S100D+A190Q+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y+N1008D,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N399K+D458S+A492H+K567R+S582K+S635E+T649K+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,E229S+D458S+A492L+T631N+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+D458S+A492H+K567R+S582K+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y,S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,E229S+N399K+D458S+K567R+S582K+S635E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D777R+D801G+K875T+N892Y.
在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
在特定的方面,黄原胶裂解酶除前述改变之外,相对于SEQ ID NO:2的亲本酶没有进一步的改变,即,剩余序列与SEQ ID NO:2相同。
进一步优选的实施方案
在各个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与优选的黄原胶裂解酶变体组合的优选的内切葡聚糖酶变体。
在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物因此包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G、(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G、(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、(A5)S313D+E408D、(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G、(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;和/或
(B)黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;以及
(C)酶稳定组分。
在进一步优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其与sEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G、(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G、(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、(A5)S313D+E408D、(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G、(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;以及
(B)黄原胶裂解酶变体,其与sEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置:以及
(C)酶稳定组分,其中该酶稳定组分选自:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地所述酶稳定组分选自甘油和甲酸盐,更优选地是甲酸钠。
在特别优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其与SEQ ID NO:1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G、(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G、(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、(A5)S313D+E408D、(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G、(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;以及
(B)黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQID NO:2的氨基酸位置;以及
(C)酶稳定组分,其中该酶稳定组分选自甘油和甲酸钠,优选地是甲酸钠。
在一个实施方案,内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶不包含除上文明确提及的那些取代之外的任何进一步的取代,即序列的其余部分分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的亲本酶的序列的其余部分相同。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A2),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A3),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A4),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2}、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A5),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A6),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A7),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1)、(B2)、(B3)、(B4)、(B5)、(B6)、(B7)和(B8)中的任何一种组合的如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A8),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B1),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B2),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B3),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B4),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B5),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B6),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B7),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含与如上文所定义的内切葡聚糖酶变体(A1)、(A2)、(A3)、(A4)、(A5)、(A6)、(A7)和(A8)中的任何一种组合的如上文所定义的黄原胶裂解酶变体(B8),其中相应的酶优选地分别与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,优选地与其相应的亲本序列相同,而本文明确提及的取代除外。
如果不另外明确指示,则如上文所描述的所有内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶变体可以进一步在如本文所描述的任何区域中的一个或多个(例如若干个)其他位置处包含一个或多个额外改变。
氨基酸变化可能是轻微的,即不会显著影响蛋白质的折叠和/或活性的保守性氨基酸取代或插入、通常1-30个氨基酸的小缺失、小的氨基或羧基末端延伸(如氨基末端甲硫氨酸残基)、至多20-25个残基的小接头肽或者通过改变净电荷或另一功能(如多组氨酸通道、抗原表位或结合结构域)促进纯化的小延伸。
保守性取代的实例在由以下各项构成的组中:碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)和小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和蛋氨酸)。通常不改变特异性活性的氨基酸取代是本领域已知的。常见的取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu和Asp/Gly。
可替代地,氨基酸变化的性质是,多肽的物理化学属性被改变。例如,氨基酸变化可以改进多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变pH最佳值等。
多肽中的必需氨基酸可以根据本领域已知的程序来鉴定,如定点诱变或丙氨酸扫描诱变。酶的活性位点或其他生物相互作用也可以通过结构的物理分析来确定,如通过将核磁共振、晶体学、电子衍射或光亲和标记等技术与假定的接触位点氨基酸的突变相结合来确定。必需氨基酸的相同性也可以从与相关多肽的比对中推断出来。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物还另外包含一种或多种其他的洗涤剂组分,优选表面活性剂。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含0.000001至10重量%,如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述内切葡聚糖酶变体(每ml洗涤剂组合物的活性酶),和/或0.000001至10%,如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述黄原胶裂解酶变体(每ml洗涤剂组合物的活性酶),和/或0.001至20重量%,如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%的所述酶稳定剂(以洗涤剂组合物的重量计)。
在一个实施方案中,本发明的洗涤剂组合物以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)包含所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
在不受理论约束的情况下,可以想象的是,酶稳定组分的添加直接与天然折叠的酶相互作用和/或影响酶与其他洗涤剂成分(如表面活性剂、螯合剂、水等)的相互作用。
在一个实施方案中,与不含有此种酶稳定组分的洗涤剂组合物相比,优选的内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶变体在含有此种酶稳定组分的洗涤剂组合物中具有改进的稳定性。
在这方面,在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含
(A)0.0005至0.5重量%、优选0.001至0.1重量%的内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G、(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G、(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、(A5)S313D+E408D、(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G、(A7)1302D+S313D+E408D+Y579W+1602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;
(B)0.0005至0.5重量%、优选0.001至0.1重量%的黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;
(C)0.1至5.5重量%、优选0.25至1.5重量%的酶稳定组分,其中该酶稳定组分选自:甘油和甲酸盐,优选地是甲酸钠;以及
(D)0至99重量%的至少一种其他的洗涤剂组分,优选表面活性剂。
在特别优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含
(A)0.0005至0.5重量%、优选0.001至0.1重量%的内切葡聚糖酶变体,该内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(A1)A559N+Y579W+T697G、(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G、(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、(A5)S313D+E408D、(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G、(A7)1302D+S313D+E408D+Y579W+1602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;
(B)0.0005至0.5重量%、优选0.001至0.1重量%的黄原胶裂解酶变体,该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性,并且包含选自下述的一组改变:(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;
(C)0.1至5.5重量%、优选0.25至1.5重量%的酶稳定组分,其中该酶稳定组分是甲酸钠;以及
(D)0至99重量%的至少一种其他的洗涤剂组分,优选表面活性剂。
洗涤剂组合物
在一个特定的方面,与不含有选自下组的酶稳定组分的洗涤剂组合物相比,优选的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体在含有选自下组的酶稳定组分的洗涤剂组合物中具有改进的稳定性,该组由以下各项组成:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地所述酶稳定组分选自甘油和甲酸盐,更优选地是甲酸钠,其中洗涤剂中的活性和/或稳定性如本文实施例2和3所述测量。
除所述内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体之外,本发明的洗涤剂组合物还可以包含额外的组分。额外的组分的选择在本领域技术人员的技能内,并且包括进一步的酶和常规成分,包括下文所阐述的示例性非限制性组分。对于织物护理,组分的选择可以包括考虑待清洁织物的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度以及洗涤剂产品的配制。尽管下文提及的组分根据特定的功能通过通用首部进行分类,但这不应被解释为限制,因为组分可以包含如本领域技术人员将理解的额外功能。
本发明的洗涤剂组合物可以适用于洗涤纺织品如织物、布或亚麻布或者可以适用于清洁硬表面如地板、桌子或餐具洗涤。
在一个实施方案中,可以将如本文所描述的内切葡聚糖酶变体以对应于每升洗涤液0.0001至200mg如0.0005至100mg、优选0.001至30mg、更优选0.005至8mg、甚至更优选0.01至2mg的酶蛋白的量添加到洗涤剂组合物中。
在一个实施方案中,可以将如本文所描述的黄原胶裂解酶变体以对应于每升洗涤液0.0001至200mg如0.0005至100mg、优选0.001至30mg、更优选0.005至8mg、甚至更优选0.01至2mg的酶蛋白的量添加到本发明的洗涤剂组合物中。
在一个实施方案中,可以将每种如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和如本文所描述的黄原胶裂解酶变体各自以对应于每升洗涤液0.0001至200mg的酶蛋白如0.0005至100mg、优选0.001至30mg、更优选0.005至8mg、甚至更优选0.01至2mg的酶蛋白的量添加到本发明的洗涤剂组合物中。
用于自动餐具洗涤(ADW)的组合物可以包括0.0001至50重量%如0.001至20重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.05至5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的每种酶蛋白,按组合物的重量计。
用于衣物洗涤造粒的组合物或固体/颗粒状衣物洗涤组合物通常可以包括0.0001至50重量%如0.001至20重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.05至5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的每种酶蛋白,按组合物的重量计。
用于衣物洗涤液的组合物可以包括0.0001至10重量%如0.001至7重量%、优选0.1至5重量%、更优选0.001至0.1重量%的每种酶蛋白,按组合物的重量计。
用于自动餐具洗涤(ADW)的组合物可以包括0.01至20重量%如0.1至10重量%、优选0.2至8重量%、更优选0.5至5重量%、甚至更优选0.75至2.5重量%的所述酶稳定组分,按组合物的重量计。
用于衣物洗涤造粒的组合物或固体/颗粒状衣物洗涤组合物通常可以包括0.01至20重量%如0.1至10重量%、优选0.2至8重量%、更优选0.5至5重量%、甚至更优选0.75至2.5重量%的所述酶稳定组分,按组合物的重量计。
用于衣物洗涤液的组合物可以包括0.01至20重量%如0.1至10重量%、优选0.2至8重量%、更优选0.5至5重量%、甚至更优选0.75至2.5重量%的所述酶稳定组分,按组合物的重量计。
用于自动餐具洗涤(ADW)的组合物可以以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)包括所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
用于衣物洗涤造粒的组合物或固体/颗粒状衣物洗涤组合物通常可以以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)包括所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
用于衣物洗涤液的组合物可以以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)包括所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
进一步关于如本文所描述的特异性酶稳定组分,本发明的洗涤剂组合物的酶可以使用常规稳定剂(例如多元醇例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物例如芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸(4-FPBA))来稳定,并且该组合物可以如例如WO 92/19709和WO 92/19708中所描述进行配制。
在某些市场中,由于使用不同的洗涤条件,因此使用不同类型的洗涤剂。这公开在例如EP1025240中。在亚洲(日本)使用低洗涤剂浓度系统,而美国使用中等洗涤剂浓度系统,并且欧洲使用高洗涤剂浓度系统。低洗涤剂浓度系统包括其中少于约800ppm的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。日本洗涤剂通常被认为是低洗涤剂浓度系统,因为其具有大约667ppm的存在于洗涤水中的洗涤剂组分。中等洗涤剂浓度包括其中约800ppm至约2000ppm之间的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。北美洗涤剂通常被认为是中等洗涤剂浓度系统,因为其具有大约975ppm的存在于洗涤水中的洗涤剂组分。高洗涤剂浓度系统包括其中大于约2000ppm的洗涤剂组分存在于洗涤水中的洗涤剂。欧洲洗涤剂通常被认为是高洗涤剂浓度系统,因为其具有大约4500至5000ppm的存在于洗涤水中的洗涤剂组分。拉丁美洲洗涤剂通常是高泡沫磷酸盐助洗剂洗涤剂,并且拉丁美洲所使用的洗涤剂的范围可以落在中等和高洗涤剂浓度二者内,因为其存在于洗涤水中的洗涤剂组分在1500至6000ppm的范围内。此类洗涤剂组合物全部都是本发明的实施方案。也可以将本发明的多肽掺入WO 97/07202中公开的洗涤剂制剂中。
表面活性剂
本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种表面活性剂,其可以是阴离子和/或阳离子和/或非离子和/或半极性和/或两性离子的或其混合物。在优选的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包含至少一种表面活性剂。在特定的实施方案中,本发明的洗涤剂组合物包括一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。表面活性剂通常以约0.1至60重量%如1至40重量%、3至20重量%或3至10重量%的水平存在。表面活性剂是基于期望的清洁应用来选择的,并且包括本领域已知的任何常规表面活性剂。可以使用用于洗涤剂的本领域已知的任何表面活性剂。
当包括阴离子表面活性剂时,洗涤剂将通常包含约1至40重量%如5至30重量%、5至15重量%或20至25重量%的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,特别是线性烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支化烷基苯磺酸盐、苯基烷烃磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、烷烃-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基烷烃磺酸盐和二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES,也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲烷烃磺酸盐(SAS)、链烷烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化脂肪酸甘油酯、α-磺基脂肪酸甲基酯(a-SFMe或SES)(包括甲基酯磺酸盐(MES))、烷基或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸或皂的二酯和单酯及其组合。
当包括阳离子表面活性剂时,洗涤剂通常将包含约0至10重量%的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇胺季铵盐(alkyl dimethylethanolamine quat,ADMEAQ)、鲸蜡基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂基氯化铵(DSDMAC)和烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物及其组合。
当包括非离子表面活性剂时,洗涤剂将通常包含约0.2至40重量%的非离子表面活性剂,例如0.5至30重量%,特别是1至20%重量、3至10重量%、3至5重量%或8至12重量%。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯(如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯)、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基聚糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化脂酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺,GA,或脂肪酸葡糖酰胺,FAGA)以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品及其组合。
当包括半极性表面活性剂时,洗涤剂通常将包含约0至10重量%的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括胺氧化物(AO),如烷基二甲基胺氧化物、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基胺氧化物和N-(牛脂烷基)-N,N-双-(2-羟乙基)胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺和乙氧基化脂肪酸烷醇酰胺及其组合。
当包括两性离子表面活性剂时,洗涤剂通常将包含约0至10重量%的两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。
助水溶物
助水溶物是一种使水性溶液中的疏水性化合物溶解(或反向地,使非极性环境中的极性物质溶解)的化合物。通常,助水溶物具有亲水性和疏水性特性二者(如从表面活性剂中所已知的所谓两亲性属性);然而,助水溶物的分子结构通常不利于自发的自聚集。如对于表面活性剂和脂质形成胶束、层片状中间相或其他定义明确的中间相所发现的,助水溶物不显示出临界浓度,高于该临界浓度会发生自聚集。相反,许多助水溶物示出连续型聚集过程,其中聚集体的尺寸随着浓度的增加而增加。然而,许多助水溶物改变含有极性和非极性特性物质(包括水、油、表面活性剂和聚合物的混合物)的系统的相行为、稳定性和胶体属性。助水溶物常规用于从制药、个人护理、食品到技术应用等行业。助水溶物在本发明的洗涤剂组合物中的用途允许表面活性剂的更浓缩的制剂(如在通过去除水来压实液体洗涤剂的过程中),而不会诱导不期望的现象,如相分离或高粘度。
洗涤剂可以包含0至5重量%如0.5至5重量%或3至5重量%的助水溶物。可以使用用于洗涤剂的本领域已知的任何助水溶物。助水溶物的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基硫酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
本发明的洗涤剂组合物可以包含约0至65重量%如5至45重量%的洗涤剂助洗剂或共助洗剂或其混合物。在餐具洗涤洗涤剂中,助洗剂的水平通常为40至65重量%,特别是50至65重量%。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca2+和Mg2+形成水溶性复合物的螯合剂。可以使用用于衣物洗涤剂的本领域已知的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自Hoechst的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA,也被称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA,也被称为2,2’,2”-氮基三乙醇)和羧甲基菊粉(CMI)及其组合。
本发明的洗涤剂组合物还可以包含0至20重量%如5至10重量%的洗涤共助洗剂或其混合物。本发明的洗涤剂组合物可以包括单独的共助洗剂或与助洗剂(例如沸石助洗剂)组合的共助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物,如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。进一步的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐和膦酸盐,以及烷基或烯基琥珀酸。额外的具体实例包括2,2’,2”-氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、亚乙基二胺-N,N'-二琥珀酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、亚乙基二胺四-(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMPA或DTMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺基甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺基乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺基甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺基乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、a-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二.乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二-乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)和磺基甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸酯(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。进一步的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述在例如WO 2009/102854、US 5977053中。
漂白系统
洗涤剂可以包含0至50重量%如0.1至25重量%的漂白系统。可以使用用于衣物洗涤剂的本领域已知的任何漂白系统。合适的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠、预形成过酸及其混合物。
合适的预形成过酸包括但不限于过氧羧酸和盐、过碳酸和盐、过亚胺酸和盐、过氧单硫酸和盐,例如及其混合物。
漂白系统的非限制性实例包括基于过氧化物的漂白系统,其可以包含例如无机盐,包括与形成过酸的漂白活化剂组合的碱金属盐如过硼酸盐(通常为一水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐。
术语漂白活化剂在本文中意味着与过氧漂白剂如过氧化氢反应形成过酸的化合物。由此形成的过酸构成活化漂白剂。待在本文中使用的合适漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。合适的实例是四鲸蜡基亚乙基二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰基)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧十二烷酸、4-(十二烷酰基氧基)苯磺酸酯(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸酯、4-(癸酰基氧基)苯甲酸酯(DOBS)、4-(壬酰基氧基)苯磺酸酯(NOBS)和/或WO 98/17767中所公开的那些。在EP 0624154中公开了所关注漂白活化剂的特定家族,并且在该家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酯(如三乙酸甘油酯)的优势是它对环境友好,因为它最终降解为柠檬酸和醇。此外,乙酰柠檬酸三乙酯和三乙酸甘油酯在储存时的产品中具有良好的水解稳定性,并且它是一种有效的漂白活化剂。最后,ATC为衣物洗涤添加剂提供了良好的构建能力。
可替代地,漂白系统可以包含例如酰胺、酰亚胺或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包括过酸,如6-(酞菁基酰亚胺基)过氧己酸(PAP)。
漂白系统还可以包括漂白剂催化剂。在一些实施方案中,漂白剂组分可以是选自下述的具有以下分子式的有机催化剂:
(i)
(ii)
(iii)以及它们的混合物;
其中每个R1独立地是含有9至24个碳的支化烷基基团或含有11至24个碳的线性烷基基团,优选地每个R1独立地是含有9至18个碳的支化烷基基团或含有11至18个碳的线性烷基基团,更优选地每个R1独立地选自:2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正十二烷基、正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、异壬基、异癸基、异十三烷基和异十五烷基。
其他的示例性漂白系统描述在例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259和WO 2007/087242中。
合适的光漂白剂可以是例如磺化锌酞菁染料。
聚合物
洗涤剂可以包含0至10重量%如0.5至5重量%、2至5重量%、0.5至2重量%或0.2或1重量%的聚合物。可以使用用于洗涤剂的本领域已知的任何聚合物。聚合物可以起到如上文所提及的共助洗剂的作用,或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁和/或抗起泡属性。一些聚合物可能具有多于一种的上文提及的属性和/或多于一种的下文提及的基序。示例性聚合物包括羧甲基纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)和聚羧酸酯(如PAA、PAA/PMA)、聚天冬氨酸和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和寡聚二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸亚乙酯)和聚(对苯二甲酸氧基亚乙酯)(PET-POET)的共聚物、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)和聚乙烯基吡咯烷酮乙烯基咪唑(PVPVI)。进一步的示例性聚合物包括磺化聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵。在例如WO 2006/130575中公开了其他的示例性聚合物。还考虑了上述聚合物的盐。
织物色调调节剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包含织物色调调节剂,如染料或颜料,当将该色调调节剂配制在本发明的洗涤剂组合物中时,当所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时,该色调调节剂可以沉积到织物上,并且因此通过可见光的吸收/反射来改变所述织物的色调。荧光增白剂发出至少一些可见光。相比之下,织物色调调节剂改变表面的色调,因为其吸收至少一部分的可见光光谱。合适的织物色调调节剂包括染料和染料-粘土缀合物,并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自下组的小分子染料,该组由落入直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红或其混合物的颜色索引(C.I.)分类中的染料组成,如例如WO 2005/003274、WO 2005/003275、WO 2005/003276和EP 1876226中所描述的。
本发明的洗涤剂组合物优选地包含约0.00003至0.2重量%如0.00008至0.05重量%或0.0001至0.04重量%的织物色调调节剂。组合物可以包含0.0001至0.2重量%的织物色调调节剂,当组合物是单位剂量小袋的形式时,这可能是特别优选的。还在例如WO2007/087257和WO 2007/087243中公开了合适的色调调节剂。
额外的酶
本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种额外的酶,如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤素过加氧酶、氧化还原酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶或其任何混合物。
一般来说,所选酶的属性应与所选洗涤剂相容(即pH-最佳值、与其他酶成分和非酶成分的相容性等),并且酶应以有效量存在。
纤维素酶
合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰或蛋白质工程突变体。合适的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、腐质霉属(Humicola)、镰刀菌属(Fusarium)、梭孢壳属(Thielavia)、枝顶孢属(Acremonium)的纤维素酶,或产生自特异腐质霉(Humicola insolens)、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的真菌纤维素酶,其公开在US4435307、US 5648263、US 5691178、US 5776757和WO 89/09259中。
特别合适的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例描述在EP 0495257、EP 0531372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中。其他的实例是纤维素酶变体,其描述在WO 94/07998、EP 0531315、US 5457046、US 5686593、US5763254、WO 95/24471、WO 98/12307和WO 99/01544中。
表现出内切-β-1,4-葡聚糖酶活性(EC 3.2.1.4)的纤维素酶的实例描述在WO2002/099091中。
纤维素酶的其他实例包括描述在WO 96/29397中的GH45纤维素酶,尤其是其变体,该变体在对应于WO 2002/099091的SEQ ID NO:8中的以下位置的位置中的一个或多个处具有取代、插入和/或缺失:2、4、7、8、10、13、15、19、20、21、25、26、29、32、33、34、35、37、40、42、42a、43、44、48、53、54、55、58、59、63、64、65、66、67、70、72、76、79、80、82、84、86、88、90、91、93、95、95d、95h、95j、97、100、101、102、103、113、114、117、119、121、133、136、137、138、139、140a、141、143a、145、146、147、150e、150j、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160c、160e、160k、161、162、164、165,168、170、171、172、173、175、176、178、181、183、184、185、186、188、191、192、195、196、200和/或20,其优选地选自P19A、G20K、Q44K、N48E、Q119H或Q146R。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(Novozymes A/S)、ClazinaseTM和Puradax HATM(Genencor International Inc./DuPont)以及KAC-500(B)TM(KaoCorporation)。
蛋白酶
蛋白酶可以是动物、植物或微生物来源的蛋白酶,包括化学或遗传修饰突变体。优选微生物来源。它可以是碱性蛋白酶,如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以是S1家族的丝氨酸蛋白酶,如胰蛋白酶,或S8家族的丝氨酸蛋白酶,如枯草杆菌蛋白酶。金属蛋白酶可以是来自例如家族M4、M5、M7或M8的嗜热菌蛋白酶。
术语“枯草杆菌酶(subtilase)”是指丝氨酸蛋白酶的亚组。丝氨酸蛋白酶是蛋白酶的亚组,其特征在于在活性位点具有丝氨酸,该丝氨酸与底物形成共价加合物。枯草杆菌酶可以被分为6个亚类,即枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫细菌素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。在一个方面,蛋白酶可以是枯草杆菌酶,如枯草杆菌蛋白酶或其变体。进一步地,枯草杆菌酶(和丝氨酸蛋白酶)的特征在于具有除丝氨酸之外的两个活性位点氨基酸残基,即组氨酸和天冬氨酸残基。
枯草杆菌蛋白酶的实例是衍生自芽孢杆菌的那些,如描述在WO 89/06279中的迟缓枯草杆菌蛋白酶、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及蛋白酶PD138(WO 93/18140)。进一步的丝氨酸蛋白酶实例描述在WO 98/20115、WO 2001/044452、WO 2001/058275、WO 2001/058276、WO 2003/006602和WO 2004/099401中。
枯草杆菌酶变体的实例可以是在以下任何位置中具有突变的那些变体:3、4、9、15、27、36、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、217、218、222、232、235、236、245、248、252和274(使用BPN′编号)。更优选的枯草杆菌酶变体可以包含选自下组的突变中的一个:S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R、S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K和T274A(使用BPN′编号)。
进一步优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶,如在例如WO95/23221中所描述的,以及其变体,其描述在例如WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147和EP 1921148中。
胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的胰蛋白酶)和镰刀菌属蛋白酶,其描述在WO 89/06270和WO 94/25583中。有用的蛋白酶的实例是描述在WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116和WO 98/34946中的变体,尤其是在以下位置中的一个或多个中具有取代的变体:27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235和274。
金属蛋白酶的实例是如WO 2007/044993中所描述的中性金属蛋白酶。
优选的可商购的蛋白酶包括AlcalaseTM、Blaze EvityTM、CoronaseTM、DuralaseTM、DurazymTM、EsperaseTM、EverlaseTM、KannaseTM、LiquanaseTM、Liquanase UltraTM、OvozymeTM、PolarzymeTM、PrimaseTM、RelaseTM、SavinaseTM和Savinase UltraTM(Novozymes A/S)、AxapemTM(Gist-Brocases N.V.)、BLAP及其变体(Henkel AG&Co.KGaA)、ExcellaseTM、FN2TM、FN3TM、FN4TM、MaxacaTM、MaxapemTM、MaxataseTM、ProperaseTM、PurafastTM、PurafectTM、Purafect OxPTM、Purafect PrimeTM和PuramaxTM(Genencor int./DuPont)。
脂肪酶和角质酶
合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰或蛋白质工程突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属(Thermomyces),例如来自疏棉状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)(先前被命名为绵毛状腐质菌(Humicola lanuginosa))的脂肪酶,如EP0258068和EP 0305216中所描述的;来自腐质霉属,例如特异腐质霉的角质酶(WO 96/13580);来自假单胞菌(其中一些现已被更名为伯克霍尔德菌(Burkholderia)),例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或假产碱假单孢菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 0218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 0331376)菌株、P.sp.菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)的脂肪酶;GDSL型链霉菌属(Streptomyces)脂肪酶(WO 2010/065455);来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO 2010/107560);来自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(US5389536);来自嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 2011/084412);嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)脂肪酶(WO 201I/084417);来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的脂肪酶(WO 2011/084599);以及来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(WO 2011/150157)和始旋链霉菌(Streptomycespristinaespiralis)(WO 2012/137147)的脂肪酶。
进一步的实例是有时被称为酰基转移酶或过氧水解酶(perhydrolases)的脂肪酶,例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO2010/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 2005/056782)、来自CE 7家族的过氧水解酶(WO 2009/067279),以及耻垢分枝杆菌过氧水解酶的变体,特别是用于来自Huntsman Textile Effects Pte Ltd的商用产品Gentle PowerBleach的S54V变体(WO 2010/100028)。其他实例是脂肪酶变体,如EP 0407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 2000/034450、WO 2000/060063、WO2001/092502、WO 2007/087508和WO 2009/109500中所描述的那些。
优选的商用脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM、LipolexTM和LipocleanTM(Novozymes A/S)、Lumafast(Genencor/DuPont)以及Lipomax(Gist-Brocades)。
淀粉酶
淀粉酶可以是α-淀粉酶、B-淀粉酶或葡糖淀粉酶,并且可以是细菌或真菌来源的淀粉酶。包括化学修饰或蛋白质工程突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌例如地衣芽孢杆菌获得的α-淀粉酶(GB 1296839)。
淀粉酶的实例是具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:3的那些淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90%序列相同性的变体,优选的变体描述在WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424;和WO 99/019467的SEQ ID NO:4中,以及在以下位置的一个或多个中具有取代的变体:WO 95/10603中的SEQ ID NO:3的15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。
可以使用的进一步的淀粉酶是具有WO 2002/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列相同性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些变体。
其他的淀粉酶实例是杂合α-淀粉酶,其包含WO 2006/066594的SEQ ID NO:6所示的衍生自解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)的α-淀粉酶的残基1至33和WO 2006/066594的SEQ ID NO:4所示的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36至483,或其具有90%序列相同性的变体。这种杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些变体:G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、1201、A209和Q264。包含WO2006/066594的SEQ ID NO:6的残基1至33和WO 2006/066594的WO 2006/066594的SEQ IDNO:4的残基36至483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些变体:M197T、H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S或G48+T49+G107+H156+A181+N190+I201+A209+Q264。
进一步的淀粉酶实例是具有WO 99/19467中的SEQ ID NO:6的那些淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90%序列相同性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些变体:R181、G182、H183、G184、N195、1206、E212、E216和K269。特别优选的淀粉酶是在位置G182+H183或H183+G184中具有缺失的那些淀粉酶。
额外的淀粉酶是具有WO 96/23873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的那些淀粉酶或者其与SEQ ID NO:1、2或7具有90%序列相同性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:7的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些变体:140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476。最优选的变体是在位置182+183或183+184中具有缺失的那些变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID No:7的最优选淀粉酶变体是在位置183+184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476中具有取代的那些变体。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 2008/153815的SEQ ID NO:2、WO 2001/066712中的SEQ ID NO:10的那些淀粉酶,或者其与WO 2008/153815的SEQ ID NO:2具有90%序列相同性或与WO 2001/066712中的SEQ ID NO:10具有90%序列相同性的变体。WO 2001/066712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些变体:176、177、178、179、190、201、207、211和264。
可以使用的进一步的淀粉酶是具有WO 2009/061380的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ ID NO:2具有90%序列相同性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些变体:Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444和G475。SEQ ID NO:2的最优选变体是在以下位置:Q87E、R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E、R和N272E、R,S243Q、A、E、D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E和G475K的一个或多个中具有取代和/或在位置R180和/或S181中具有缺失的那些变体。SEQ ID NO:2的最优选淀粉酶变体是具有以下取代的那些变体:N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K、N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K、S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K,其中该变体任选地进一步在位置243处包含取代和/或在位置180和/或181处包含缺失。
其他的淀粉酶是WO 2016/203064的SEQ ID NO:1的变体,该变体与其SEQ ID NO:1具有至少75%的序列相同性。优选的变体是在对应于SEQ ID NO:1的位置1、54、56、72、109、113、116、134、140、159、167、169、172、173、174、181、182、183、184、189、194、195、206、255、260、262、265、284、289、304、305、347、391、395、439、469、444、473、476或477的一个或多个位置中包含修饰的变体,其中所述α-淀粉酶变体与SEQ ID NO:1具有至少75%但小于100%的序列相同性。
淀粉酶的其他实例是具有WO 2001/066712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQID NO:12具有至少90%序列相同性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 2001/066712的SEQID NO:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些变体:R28、R118、N174;R181、G182、D183、G184、G186、W189、N195、M202、Y298、N299、K302、S303、N306、R310、N314;R320、H324、E345、Y396、R400、W439、R444、N445、K446、Q449、R458、N471、N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有取代R118K、N195F、R320K和R458K的变体,以及在选自下组的一个或多个位置中额外地具有取代的变体:M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345和A339,最优选的是在所有这些位置中额外地具有取代的变体。
可商购的淀粉酶是Amplify 12LTM、Amplify Prime 100LTM、DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、StainzymeTM、Stainzyme PlusTM、NatalaseTM和BANTM(Novozymes A/S)、Preferenz S210TM、Excellenz S3300TM、RapidaseTM和PurastarTM(Genencor/DuPont)。
过氧化物酶/氧化酶
合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰或蛋白质工程突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞菌(Coprinus)例如灰盖鬼伞菌(C.cinereus)的过氧化物酶及其变体,如WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中所描述的那些。可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(Novozymes A/S)。
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂,或通过添加包含所有这些酶的组合添加剂,将洗涤剂酶包括在本发明的洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂,即单独添加剂或组合添加剂,可以被配制成例如颗粒、液体、浆料等。优选的洗涤剂添加剂制剂是颗粒(特别是无粉尘颗粒)、液体(特别是稳定的液体)或浆料。
无粉尘颗粒可以例如如US 4106991和US 4661452中所公开进行生产,并且可以任选地通过本领域已知的方法进行涂覆。蜡质涂覆材料的实例是平均摩尔重量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇,PEG);具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚;乙氧基化脂肪醇,其中醇含有12至20个碳原子并且其中有15至80个环氧乙烷单元;脂肪醇;脂肪酸;以及脂肪酸的单、二和三甘油酯。适合于通过流化床技术应用的成膜涂覆材料的实例在GB 1483591中给出。
液体酶制备剂可以例如通过根据成熟方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。受保护的酶可以根据EP 0238216中所公开的方法来制备。
辅助剂材料
也可以使用用于衣物洗涤剂的本领域已知的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括抗腐蚀剂、抗收缩剂、抗污垢再沉积剂、抗起皱剂、杀细菌剂、粘合剂、阻蚀剂、崩解剂/崩解制剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇例如丙二醇)、织物调理剂包括粘土、填料/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(肥皂泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、柔软剂、抑肥皂泡剂、晦暗抑制剂和芯吸剂,单独使用或组合使用均可。可以使用用于衣物洗涤剂的本领域已知的任何成分。此类成分的选择完全在本领域技术人员的技能范围内。
分散剂:本发明的洗涤剂组合物也可以含有分散剂。具体地,粉末状的洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚合物酸或共聚合物酸或它们的盐,其中多元羧酸包含至少两个彼此分离不超过两个碳原子的羧基。合适的分散剂描述在例如PowderedDetergents,Surfactant science series volume 71,Marcel Dekker,Inc中。
染料转移抑制剂:本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚胺-N-氧化物聚合物、N-乙烯基吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基恶唑烷酮和聚乙烯基咪唑或其混合物。当存在于洗涤剂组合物中时,染料转移抑制剂可以以约0.0001至10重量%如0.01至5重量%或0.1至3重量%的水平存在。
荧光增白剂:本发明的洗涤剂组合物还可以含有可以使正被清洁的物品着色的额外组分,如荧光增白剂或光学增亮剂。在存在的情况下,增亮剂的水平优选地为约0.01至0.5重量%。适用于衣物洗涤剂组合物的任何荧光增白剂都可以用于洗涤剂组合物。最常用的荧光增白剂是属于二氨基二苯乙烯磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和双苯基联苯乙烯衍生物中的类别的那些。荧光增白剂的二氨基二苯乙烯磺酸衍生物类型的实例包括4,4′-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐、4,4′-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐、4,4′-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐、4,4′-双-(4-苯基-2,1,3-三唑-2-基)二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐、4,4′-双-(2-苯胺基-4-(1-甲基-2-羟乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯-2,2′-二磺酸盐和2-(二苯乙烯基-4”萘酚基-1,2′,4,5)-1,2,3-三唑-2”-磺酸盐的钠盐。优选的荧光增白剂是Tinopal DMS和Tinopal CBS(Ciba-Geigy AG)。Tinopal DMS是4,4′-双-(2-吗啉基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)二苯乙烯二磺酸盐的二钠盐。Tinopal CBS是2,2′-双(苯基苯乙烯基)二磺酸盐的二钠盐。同样优选的荧光增白剂是可商购的Parawhite KX(Paramount Minerals and Chemicals)。适用于本发明的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷基氨基香豆素。合适的荧光增亮剂水平包括约0.01重量%如0.05重量%、0.1重量%或0.2重量%的较低水平至0.5重量%或0.75重量%的较高水平。
污垢释放聚合物:本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物,其有助于从织物如棉和聚酯基织物中去除污垢,特别是从聚酯基织物中去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以是非离子或阴离子对苯二甲酸酯基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺(参见例如Chapter 7 in PowderedDetergents,Surfactant science series volume 71,Marcel Dekker,Inc)。污垢释放聚合物的另一类型是两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物,其包含核心结构和多个附接到该核心结构的烷氧基化物基团。核心结构可以包含如WO 2009/087523中所详细描述的聚亚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构。此外,无规接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述在WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314中。其他的污垢释放聚合物是取代的多糖结构,尤其是取代的纤维素结构,如经修饰的纤维素衍生物,如EP1867808或WO 2003/040279中所描述的那些。合适的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。合适的纤维素聚合物包括经阴离子修饰的纤维素、经非离子修饰的纤维素、经阳离子修饰的纤维素、经两性离子修饰的纤维素及其混合物。合适的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂:本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂,如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙烯亚胺。在上述污垢释放聚合物下描述的纤维素基聚合物也可以起到抗再沉积剂的作用。
其他合适的辅助剂材料包括但不限于抗收缩剂、抗起皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔顺剂、填料、泡沫调节剂、助水溶物、香料、颜料、抑肥皂泡剂、用于液体洗涤剂的溶剂和结构剂和/或结构增弹剂。
洗涤剂产品的配制
洗涤剂组合物可以是任何方便的形式例如条剂、均质片剂、具有两层或更多层的片剂、具有一个或多个隔室的小袋、规则或紧凑的粉末、颗粒、糊剂、凝胶,或规则、紧凑或浓缩的液体。有多种洗涤剂配制形式,如层(相同或不同相)、小袋,以及机器给料单元的形式。
小袋可以被配置成单个或多个隔室。它可以是适合于保持组合物(例如在与水接触之前不允许组合物从小袋中释放)的任何形式、形状和材料。小袋由包围内体积的水溶性薄膜制成。所述内体积可以被分为小袋的隔室。优选的薄膜是聚合物材料,优选形成为薄膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、钠糊精、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯,最优选聚乙烯醇共聚物和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地,薄膜中聚合物的水平为至少约60%。优选的平均分子量将通常为约20000至约150000。薄膜也可以是包含可水解降解和水溶性聚合物共混物的共混物组合物,如聚乳酸和聚乙烯醇(其在如由Chris Craft In.Prod.Of Gary,Ind.,US出售的贸易参考M8630下已知)加上增塑剂如甘油、亚乙基甘油、丙二醇、山梨醇及其混合物。小袋可以包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性薄膜分离的部分组分。用于液体组分的隔室在组成上可以不同于含有固体的隔室(US2009/011970)。
洗涤剂成分可以由可水溶性小袋中或片剂不同层中的隔室彼此物理地分离。从而可以避免组分之间的负存储(negative storage)相互作用。每个隔室的不同溶解属性也可能引起所选组分在洗涤溶液中的延迟溶解。
非单元给料的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的,通常含有至少20重量%至至多95重量%如至多70重量%、65重量%、55重量%、45重量%或35重量%的水。可以将包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚和多元醇的液体的其他类型包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有0至30重量%的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
可以将本发明的酶添加到衣物洗涤皂条中并且用于手动洗涤衣物、织物和/或纺织品。术语衣物洗涤皂条包括衣物洗涤条、皂条、组合条、合成洗涤剂条和洗涤剂条。条的类型通常在其含有的表面活性剂的类型方面不同,并且术语衣物洗涤皂条包括含有脂肪酸皂和/或合成皂的那些。衣物洗涤皂条具有在室温下为固体而不是液体、凝胶或粉末的物理形式。术语固体被定义为一种不会随着时间而显著改变的物理形式,即如果将固体物体(例如衣物洗涤皂条)放置在容器内部,则该固体物体不会改变以填充放置其的容器。条是一种通常呈条形式的固体,但可以是其他的固体形状,如圆形或椭圆形。
生产组合物的方法
本发明还涉及生产组合物的方法。该方法可能与洗涤剂组合物的(储存)稳定性有关,例如皂条预混合方法(WO 2009/155557)。
使用
本发明还涉及使用其洗涤剂组合物的方法。本发明可以用于例如需要黄原胶降解的任何洗涤剂应用。
用于降解黄原胶
黄原胶已经被用作包括食品和化妆品在内的许多消费品的成分并且已经被用于石油行业。因此,黄原胶的降解可以导致改进的清洁过程,如更容易地去除含有胶(如黄原胶)的污渍。因此,包含如本文所描述的内切葡聚糖酶和/或黄原胶裂解酶的本发明的洗涤剂组合物可以用于降解黄原胶。黄原胶的降解可以优选地使用粘度降低测定(例如ViPr测定)或可替代地如本文实施例2和3所述来测量。
内切葡聚糖酶活性可以可替代地通过使用由Lever开发的比色测定评估用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶上的还原端来测量(Anal.Biochem.47:273-279,1972)。优选的实施方案是使用0.1%的用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶。用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶的降解可以通过计算空白和样品之间的差异来确定,其中超过0.5mAU、优选超过0.6mAU、更优选超过0.7mAU或甚至更优选超过0.8mAU的差异示出用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶的降解。
黄原胶裂解酶活性可以可替代地通过使用由Lever开发的比色测定评估从黄原胶释放出来的还原端来测量(Anal.Biochem.47:273-279,1972)。优选的实施方案是使用0.1%的黄原胶。黄原胶的降解可以通过计算空白和样品之间的差异来确定,其中超过0.1mAU、优选超过0.15mAU、更优选超过0.2mAU或甚至更优选超过0.25mAU的差异示出黄原胶的降解。
内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶活性可以可替代地通过使用由Lever开发的比色测定评估从黄原胶释放出来的还原端来测量(Anal.Biochem.47:273-279,1972)。优选的实施方案是使用0.1%的黄原胶。黄原胶的降解可以通过计算空白和样品之间的差异来确定,其中超过0.4mAU、优选超过0.5mAU、更优选超过0.6mAU或甚至更优选超过0.8mAU的差异示出黄原胶的降解。
本发明还涉及用于降解黄原胶的方法,该方法包含应用洗涤剂组合物,该洗涤剂组合物包含如本文所描述的一种或多种内切葡聚糖酶变体和/或如本文所描述的一种或多种黄原胶裂解酶变体。
在洗涤剂中的应用
本发明尤其涉及包含如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体的洗涤剂组合物在清洁过程中的用途,如纺织品和织物的衣物洗涤(例如家居衣物洗涤和工业衣物洗涤)以及家居和工业硬表面清洁如餐具洗涤。为此,可以将内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体添加到包含一种或多种洗涤剂组分的洗涤剂组合物中。
如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体可以被添加到洗涤剂组合物中,并且因此成为该洗涤剂组合物的组分。洗涤剂组合物可以被配制为例如用于家居和工业衣物清洁二者的手动或机器衣物洗涤剂组合物,其包括适用于预处理有污渍的织物的衣物添加剂组合物和添加漂洗剂的织物柔顺剂组合物,或被配制为用于一般家居或工业硬表面清洁操作的洗涤剂组合物,或被配制成用于手动或机器(家居和工业二者)餐具洗涤操作。在具体的方面,本发明涉及一种洗涤剂添加剂,该洗涤剂添加剂包含如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体。
本发明还涉及用于降解纺织品表面或硬表面(如餐具洗涤)上的黄原胶的方法,该方法包含将如本文所描述的洗涤剂组合物应用于黄原胶。
已经考虑到,如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体的单独使用具有酶去污益处,优选对黄原胶具有酶去污益处。
在一些方面,本发明涉及洗涤剂组合物的用途,该洗涤剂组合物包含一种或多种洗涤剂组分和本文所描述的内切葡聚糖酶变体以及本文所描述的黄原胶裂解酶变体。
酶稳定组分的用途
在特定的方面,本发明涉及酶稳定组分用于改进如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或如本文所描述的黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中、特别是在液体衣物洗涤剂组合物中的稳定性的用途,并且其中该酶稳定组分选自:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁,优选地所述酶稳定组分选自甘油和甲酸钠,更优选地是甲酸钠。
在优选的实施方案中,本发明涉及甘油和/或甲酸钠用于改进如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或如本文所描述的黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途。
在特别优选的实施方案中,本发明涉及甲酸钠用于改进如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和/或如本文所描述的黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途。
在进一步优选的实施方案中,本发明涉及甲酸钠用于改进如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和如本文所描述的黄原胶裂解酶变体在洗涤剂组合物中的稳定性的用途。
在甚至优选的实施方案中,本发明涉及甲酸钠用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体在如本文所描述的洗涤剂组合物中的稳定性的用途,
其中该内切葡聚糖酶与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变,该组由以下各项组成:A559N+Y579W+T697G、K512P+A559N+Y579W+T697G、N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+1602T+A651P+A688G+V756Y、N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、S313D+E408D、R880K+N905D+K921R+Y934G、I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;
其中该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变,该组由以下各项组成:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
优选的实施方案
1.一种洗涤剂组合物,其包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变、优选取代:对应于SEQ ID NO:1的氨基酸612至660的区域7、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸95至105的区域1、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸115至138的区域2、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸210至251的区域3、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸267至301的区域4、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸339至361的区域5、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸547至595的区域6、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸806至828的区域8,对应于SEQ ID NO:1的氨基酸839至1042的区域9、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1至94的区域10、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸106至114的区域11、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸139至209的区域12、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸252至266的区域13、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸302至338的区域14、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸362至546的区域15、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸596至611的区域16、对应于SEQID NO:1的氨基酸661至805的区域17、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸829至838的区域18和对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1043至1055的区域19;和/或
(B)黄原胶裂解酶变体,其在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变、优选取代:对应于SEQ ID NO:2的氨基酸731至803的区域3、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸154至176的区域1、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸614至658的区域2、对应于SEQ IDNO:2的氨基酸807至846的区域4、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸872至885的区域5、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸903至1004的区域6、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1至153的区域7、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸177至613的区域8,对应于SEQ ID NO:2的氨基酸659至730的区域9、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸804至806的区域10、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸847至871的区域11、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸886至902的区域12和对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1005至1037的区域13;以及
(C)酶稳定组分;
其中该内切葡聚糖酶变体(A)与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性;优选地所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性;
其中该黄原胶裂解酶变体(B)与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地所述黄原胶裂解酶变体对黄原胶具有活性;并且
其中该酶稳定组分选自:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁。
2.根据实施方案1所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体与SEQ IDNO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93&、94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
3.根据实施方案1至2中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体在选自下述的一个或多个位置处包含改变、优选取代:4、17、18、20、51、53、55、56、60、63、71、79、87、92、99、120、125、126、130、137、182、186、189、192、213、216、221、226、228、230、231、232、233、235、240、243、247、249、278、279、281、283、285、289、292、294、298、302、311、313、333、346、353、358、386、387、388、390、403、408、410、416、441、448、451、471、472、476、489、507、512、515、538、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、567、568、570、575、578、579、580、581、583、589、590、591、592、593、595、598、599、602、603、605、607、609、616、627、630、631、635、636、638、639、640、641、642、643、644、651、676、683、688、690、694、698、699、706、711、713、719、720、744、749、754、756、760、781、786、797、810、811、812、815、823、824、825、827、828、833、834、835、837、843、848、868、869、870、871、872、873、874、880、881、883、884、885、887、888、890、892、894、898、905、906、912、920、921、924、926、927、928、932、933、934、935、937、938、939、940、941、942、943、946、948、950、952、953、954、956、957、960、966、971、972、980、989、991、994、995、998、999、1006、1009、1010、1011、1029、1030、1031、1032、1035、1037、1038、1040、1041、1042、1044、1045和1048,优选地在选自下述的一个或多个位置处包含改变、优选取代:17、20、216、283、302、311、313、408、476、579、602、627、636、638、651、688、697、719、756、880、881、883、887、906、921、934、937和956,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
4.根据实施方案1至3中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:V4T、S17A、N18G、F20P、F20N、F20G、F20Y、K51Q、K51H、E53Y、E53P、E53G、Y55M、Y55D、V56M、Y60F、S63F、A71E、T87R、T92S、K99R、A120P、I125V、A126R、S128X、N129D、K130R、F137L、H182Y、A186P、N189K、K192N、K213R、N216D、N216Q、N216R、A221R、L226K、K228E、K228I、G230F、G230L、G230A、G230H、G230N、G230W、G230T、F231Y、F231N、V232R、V232G、L233H、H235D、N240Q、G243K、G243R、D247N、A249N、A278S、G279E、K281F、K281V、K281Y、K281H、K281Q、K281N、K281W、K281T、K281R、A283D、N285G、N285L、N285M、N285S、N285P、N285T、N285Y、N285H、N285K、N285D、N285W、N285R、Q289E、T292A、T292F、T292L、T292I、T292V、T292S、T292P、T292Y、T292Q、T292N、T292K、T292D、T292G、A294V、F297L、Q298E、I302D、I302H、I302V、I302M、H311N、S313D、W333L、A346H、A346D、T353D、A386P、I387T、K388R、K390Q、I403Y、E408D、E408N、E408S、E408P、E408A、E408G、P410G、Q416S、Q416D、N441G、A448E、A448W、A448S、K451Q、K451S、G471S、S472Y、D476R、Q489P、K507R、K512P、S515V、S538C、L555Q、G556S、G557R、N558P、N558F、N558K、N558D、N558M、N558Q、N558I、N558Y、N558H、N558E、A559N、A559F、A559M、A559P、A559Y、A559H、A559Q、A559D、A559R、A559G、A559I、A559S、A559K、S560F、S560P、S560K、S560G、S560D、T561E、T561Q、T561S、T561D、T561P、G562W、G562P、G563E、A564I、A564Y、A564H、A564Q、A564K、A564E、A564D、E565M、V567F、V567P、K568R、L569F、L569Y、L569D、L569E、P570F、P570L、P570I、P570M、P570V、P570S、P570T、P570A、P570Y、P570H、P570Q、P570N、P570K、P570E、P570W、P570R、P570G、I575V、I575M、I575A、I575D、I575E、I576F、I576M、I576P、D578R、Y579F、Y579W、V580L、T581M、D583M、Q589G、P590S、P590T、P590E、E591L、G592D、S593P、S593H、S593Q、S593N、S593K、S593D、S593E、S593R、S595L、S598Q、A599S、I602T、I602D、V603P、S605T、S607C、G609E、S616G、S616D、K627L、K627M、K627V、K627S、K627T、K627Q、K627R、I630F、I630V、I630Y、K631R、K631A、T633V、D635L、D635M、D635T、D635A、D635P、D635N、D635K、D635E、D635G、D635W、S636L、S636M、S636A、S636H、S636Q、S636N、S636K、S636R、F638N、F638Y、T639D、F638I、F638V、F638T、F638L、F638H、F638M、T639V、T639S、T639L、T639I、T639M、T639A、T639E、T639W、T639G、T639Y、T639P、T640S、Y641E、S642T、S642N、N643D、N643H、N643T、T644F、A651P、A651S、D676H、Q683E、A688G、Y690F、T694A、T697G、R698W、T699A、T706Q、T711S、T711V、T711Y、K713R、W719R、K720H、K744H、K744Q、A749T、K754R、V756Y、V756H、S760G、T781M、N786K、T797S、S810Q、S810R、A811S、V812F、V812I、V812M、V812W、V812R、N815V、N815Y、N815E、N815W、N815R、S823Q、A824T、A824D、T825G、T825N、T825W、T825A、T825D、V827I、V827M、V827S、N828D、N833D、Q834E、S835A、S835D、V837I、T843V、N848D、A868E、A869V、D870F、D870L、D870I、D870M、D870V、D870S、D870T、D870Y、D870H、D870Q、D870N、D870K、D870E、D870W、D870R、D870G、P871F、P871L、P871I、P871M、P871V、P871S、P871T、P871A、P871Y、P871H、P871Q、T872S、T872F、T872A、T872Y、T872H、T872Q、T872N、T872K、T872D、T872E、T872W、T872R、T872G、D873K、D873E、T874V、T874S、T874P、T874A、T874H、T874Q、T874N、T874K、R880K、V881Q、V881T、T883R、T883V、T883C、T883K、Y884H、A885F、A885Q、A885N、T887L、T887I、T887S、T887H、T887R、T887K、L888M、V890R、T892P、T892V、K894E、R898Q、N905D、F906A、Q912V、N920P、N920D、K921R、K921E、K921D、A924D、V926F、V926P、K927R、S928D、T932A、N933V、N933S、Y934G、Y934M、Y934S、Y934A、Y934Q、Y934N、Y934E、Y934W、Y934R、T935W、A937F、A937V、A937S、A937T、A937Q、A937D、A937E、V938I、K939I、K939V、D940E、N941S、N941H、N941D、A942P、A942E、D943Y、D943H、G946R、K948R、K948E、R950V、R950H、R950N、F952S、F952W、N953Y、G954L、Q956Y、Q956S、A957L、A957P、Y960F、A964N、A964C、N966P、N966C、G971A、T972K、Q974K、Q974C、M980I、Q989I、Q991L、Q991I、Q991M、Q991V、Q991T、Q991K、Q991C、G994D、G994N、S995I、S995V、S995Q、S995R、S995C、G998V、G998A、T999R、S1006T、S1006A、S1006K、S1006R、K1009E、Y1010W、L1011M、L1011S、L1011A、L1011Q、L1011N、L1011D、L1011E、R1029N、F1030M、K1031I、K1031S、K1031T、K1031H、V1032G、K1035A、A1037E、A1037W、S1038L、S1038I、S1038G、L1040N、L1040E、G1041F、G1041R、Y1042N、L1044F、L1044S、L1044N、L1044W、P1045Q、P1045W和F1048W,优选地包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:S17A、F20P、N216D、N216Q、A283D、I302D、H311N、S313D、E408D、D476R、Y579W、I602T、K627R、S636N、S636K F638I、F638N、A651P、A688G、T697G、W719R、V756Y、R880K、V881Q、T883R、T887K、F906A、K921R、Y934G、A937E和Q956Y,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
5.根据实施方案1至4中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一组改变:A559K+N558K+S560F+T561P+G562W、A559N+P570Q、A559N+P570T、A559N+Y579F、A559N+Y579F+K627R、A559N+Y579W、A559N+Y579W+K99R、A559N+Y579W+S128X+K627R、A559N+Y579W+S128X+S636N、A559N+Y579W+K281R、A559N+Y579W+Q416D+S636N、A559N+Y579W+S560P、A559N+Y579W+A564I、A559N+Y579W+P570N、A559N+Y579W+P570K、A559N+Y579W+P570R、A559N+Y579W+P570A、A559N+Y579W+P570T、A559N+Y579W+P570S、A559N+Y579W+P570Q、A559N+Y579W+P570H、A559N+Y579W+S616D、A559N+Y579W+S616D+K627R、A559N+Y579W+S616D+S636K、A559N+Y579W+S616D+A651P、A559N+Y579W+S616D+K921R、A559N+Y579W+S616D+K921R+Y934G、A559N+Y579W+K627R、A559N+Y579W+K627R+S636N+A651P、A559N+Y579W+K627R+S636N+K921R、A559N+Y579W+K627R+K921R、A559N+Y579W+K627M、A559N+Y579W+K627M+A651P、A559N+Y579W+S636N、A559N+Y579W+S636N+A651P、A559N+Y579W+S636N+K921R、A559N+Y579W+S636K+A651P、A559N+Y579W+S636K+K921R、A559N+Y579W+S636L、A559N+Y579W+F638I、A559N+Y579W+A651P、A559N+Y579W+A651P+K921R+Y934G、A559N+Y579W+A651P+Y934G、A559N+Y579W+D870M、A559N+Y579W+K921R、A559N+Y579W+K921R+A651P、A559N+Y579W+K921R+Y934G、A559N+Y579W+Y934G、A559N+Y579W+K948E、A559N+Y579W+K1 009E、A559N+K627R、Y579F+A564E、Y579W+K99R、Y579W+G562P、Y579W+A564D、Y579W+P570K、Y579W+P570Q、Y579W+K627R、Y579W+S636N、Y579W+F638I、Y579W+A651P、Y579W+K921R、Y579W+Y934G、Y579W+K948E、Y579W+K1009E、K627R+K51Q、K627R+K451S、K627R+P570Q、K627R+P570T、K627R+S636N、K627R+F638I、K627R+A885F、K627R+Y934G、S636N+P570T、S636N+K921R、S636N+Y934G、F638I+P570K、F638I+P5700、F638I+P570T、F638I+A651P、F638I+Y934G、F638I+K921R、A651P+P570Q、A651P+P570T、A885F+P570T、A885F+Y934G、K921R+P570Q、K921R+P570T、Y934G+P570T,优选地包含选自下述的一组改变:A559N+Y579W+T697G、K512P+A559N+Y579W+T697G、N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、S313D+E408D、R880K+N905D+K921R+Y934G、I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
6.根据实施方案1至5中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性,优选地所述活性是黄原胶降解活性,进一步优选地所述黄原胶降解活性是内切葡聚糖酶EC 3.2.1.4活性。
7.根据实施方案1至6中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%。94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
8.根据实施方案1至7中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体在选自下述的一个或多个位置处包含改变、优选取代:9、15、18、46、58、66、89、95、100、106、109、155、159、183、188、190、203、204、221、229、234、238、240、242、243、257、258、284、291、293、316、317、320、324、329、333、339、341、352、354、360、372、377、399、400、419、440、450、451、454、458、481、492、505、533、567、568、576、578、579、582、620、624、626、631、635、649、650、656、664、672、703、722、726、727、728、738、745、752、753、754,757、769、775、777、779、782、786、789、792、796、799、801、819、824、843、851、855、856、867、875、887、892、899、900、901、902、903、911、912、915、919、921、923、925、927、928、930、933、941、966、991、1008和1016,其中所述位置对应于sEQ ID NO:2的氨基酸位置。
9.根据实施方案1至8中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:K9R、N15T、T18D、L46D、A58L、S66H、Q89Y、K95E、S100D、N106Y、Q109R、Q109D、Q109F、Q109K、Q109A、Y155E、A159P、K183Q、K183R、V188I、A190Q、A203P、K204R、A221P、E229N、E229S、E229V、I234V、I238W、I238L、I238M、I240W、N242S、G243V、Y257W、R258E、R284G、K291R、A293G、A293P、K316R、R317K、K320R、L324Q、K329R、K333R、L339M、1341P、V352I、S354P、K360G、K360R、Q372H、F377Y、N399K、K400R、F419Y、N440K、D450P、K451E、K451R、A454V、D458S、K481R、A492H、A492L、T505I、L533I、K567R、G568A、S578K、S578N、S578R、S579R、S579K、S582K、K620R、A624E、A626Q、T631N、S635E、S635T、T649V、T649K、Q650G、I656V、T664K、N672D、1703L、I722F、P726Q、T727P、M728V、G738L、K745R、P752R、P752K、G753E、G753Q、G753S、S754E、S754L、S754Q、S754R、S757D、S757P、S757E、A769D、A769T、A769R、L775A、L775F、L775I、L775M、L775Q、L775S、L775Y、D777R、P779V、Y782I、N786K、G789R、K792W、K792Y、K792V、K792A、N796Q、A799H、D801G、K819R、K824R、A843P、S851F、K855R、E856D、P867S、K875T、K875E、K887R、N892Y、N892W、N892F、G899S、I900G、D901A、T902F、T903A、T903Q、A911M、A911V、A911S、A912T、A912I、A912Y、T915S、T915V、T915Q、T919D、T919F、T919G、T921R、T921S、T923D、T923H、T925D、T925Q、T925R、T927K、D928W、Y930F、Y930H、Y930L、D933M、G941D、G941E、A966P、N991D、V998K、N1008D和K1016T,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
10.根据实施方案1至9中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含在选自下述的一个或多个位置处的改变:624、631、635、649、656、738、752、753、754、757、769、775、777、800、801、843、875、911和915,和/或包含在选自下述的一个或多个位置处的改变:89、100、190、229、234、352、360、399、440、458、492、567、582、664、672、703、728、892、1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
11.根据实施方案1至10中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个取代:Q89Y、S100D、A190Q、E229S、I234V、V352I、K360G、N399K、N440K、D458S、A492H、A492L、K567R、S582K、T664K、N672D、I703L、M728V、N892YN1008D和K1016T,和/或包含选自下述的一个或多个取代:A624E、T631N、S635E、T649K、I656V、G738L、P752K、P752R、G753E、S754E、S754R、S757D、A769D、L775A、D777R、V800P、D801G、A843P、K875T、A911V和T915A,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
12.根据实施方案1至11中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
13.根据实施方案1至12中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该酶稳定组分选自:甘油和甲酸盐,优选地是甲酸钠。
14.根据实施方案1至13中任一项所述的洗涤剂组合物,其包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变:
(A1)A559N+Y579W+T697G、
(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G、
(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、
(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、
(A5)S313D+E408D、
(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G、
(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和
(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;
(B)黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变:
(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、
(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、
(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、
(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、
(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、
(B6)A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、
(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和
(B8)S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;以及
(C)酶稳定组分,其中该酶稳定组分选自:甘油和甲酸盐,优选地是甲酸钠。
15.根据实施方案14所述的洗涤剂组合物,其中该内切葡聚糖酶变体和/或该黄原胶裂解酶变体不包含任何进一步的取代。
16.根据实施方案1至15中任一项所述的洗涤剂组合物,其中在所述酶稳定组分、特别是甲酸钠和/或甘油的存在下,所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体具有改进的稳定性。
17.根据实施方案1至16中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述洗涤剂组合物包含0.000001至10重量%如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述内切葡聚糖酶变体,和/或00.000001至10重量%如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述黄原胶裂解酶变体,和/或0.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%的所述酶稳定剂;和/或其中所述洗涤剂组合物以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)包含所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
18.根据实施方案1至17中任一项所述的洗涤剂组合物,其中该洗涤剂组合物是自动餐具洗涤组合物、手动餐具洗涤组合物或衣物洗涤剂组合物,特别是衣物洗涤剂组合物,优选液体衣物洗涤剂组合物。
19.根据实施方案1至18中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述洗涤剂组合物优选地为单位剂量,特别是小袋或帽。
20.根据实施方案1至19中任一项所述的洗涤剂组合物的用途,其中所述用途是用于衣物洗涤或餐具洗涤过程,或者所述用途是用于降解黄原胶。
21.使用根据实施方案1至19中任一项所述的洗涤剂组合物降解黄原胶的方法,其中黄原胶在硬表面或纺织品的表面上。
22.酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中、特别是在液体衣物洗涤剂组合物中的稳定性的用途,其中该内切葡聚糖酶变体和/或该黄原胶裂解酶变体如实施方案1至19中任一项所定义,并且其中该酶稳定组分选自:多元醇例如甘油或1,2-丙二醇,糖醇例如具有式HOCH2[CH(OH)]nCH2OH的非环状多元醇、甘露醇、异麦芽酮糖醇、乳糖醇、山梨醇、木糖醇、苏糖醇、赤藓糖醇或阿拉伯糖醇,烷醇胺例如乙醇胺,或者甲酸盐例如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁。
23.根据实施方案22所述的酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途,
其中该内切葡聚糖酶与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变:A559N+Y579W+T697G、K512P+A559N+Y579W+T697G、N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、S313D+E408D、R880K+N905D+K921R+Y934G、I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQID NO:1的氨基酸位置;
其中该黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;并且
其中该酶稳定组分是甘油和/甲酸钠,优选地是甲酸钠。
24.根据实施方案22或23所述的酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途,其中所述内切葡聚糖酶变体的存在量为0.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%,和/或所述黄原胶裂解酶变体的存在量为00.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%,和/或所述酶稳定剂的存在量为0.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%;和/或其中所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂以0.00001∶1至0.1∶2、优选0.0001∶1至0.01∶1、更优选0.0005∶1至0.001∶1的重量比(酶∶稳定剂)存在。
实施例
实施例1:内切葡聚糖酶变体和黄原胶裂解酶变体的构建、表达和纯化
如本文所描述的内切葡聚糖酶变体和如本文所描述的黄原胶裂解酶变体已经如WO 2018/037064、WO 2018/037065和WO 2019/162000所述进行构建和生产(所有三个申请均通过引用并入本文)。
实施例2:内切葡聚糖酶的洗涤剂稳定性测定
GH9内切葡聚糖酶(EG)活性(EC 3.2.1.4)通过使用由Lever开发的比色测定评估用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶上的还原端来确定(Anal.Biochem.47:273-279,1972)。预处理的黄原胶是黄原胶糖的经修饰形式,其中侧链上的末端丙酮酸化甘露糖被去除(根据Nankai等人(1999)从来源Keltran制备)。GH9成熟亲本内切葡聚糖酶及其变体在预处理的黄原胶的葡聚糖主链中的β-(1,4)-葡糖基键处裂解,释放具有还原端的葡聚糖,该还原端可以通过与对羟基苯甲酸酰肼(PAHBA)的反应来确定。颜色的增加与酶活性成比例。将酶样品与洗涤剂(如表1中所例示)混合并且在30℃储存8周。孵育后,将酶-洗涤剂样品在测定缓冲液(50mM MOPS、4mM CaCl2、0.01%Triton X-100、pH 7.0)中稀释100倍。
为了评估酶活性,将50μl稀释的酶-洗涤剂样品与50μl的4mg/ml经修饰的黄原胶混合。然后将样品在50℃孵育1小时。最后,通过添加75μl的PAHBAH溶液(15mg/ml PAHBAH、50g/L酒石酸钾钠四水合物、20g/LNaOH)来估计还原端的水平,然后将样品在95℃孵育10分钟。冷却至室温后,测量405nm处的吸光度。
表1.液体衣物洗涤剂基质
活性物质原材料% | 配方中的活性物质% | |
去矿物质水 | 100 | 2-8 |
1,2-丙二醇 | 100 | 3-7 |
甘油 | 99.5 | 7-11 |
单乙醇胺 | 4-8 | |
LAS(阴离子表面活性剂) | 96 | 12-28 |
FAEO(非离子表面活性剂) | 100 | 12-28 |
烷氧基化烷醇胺 | 100 | 3-7 |
棕榈仁油脂肪酸 | 100 | 3-8 |
聚乙烯亚胺 | 80 | 2-6 |
CP对苯二甲酸丙二醇酯液体 | 100 | 1-4 |
二亚硫酸钠 | 98.6 | 0.01-0.3 |
DTPMP-xNa7 | 40 | 0.1-1.0 |
光学增亮剂 | 90 | 0.1-1 |
香料 | 100 | 1-5 |
染料 | t.q. | 0.001-0.005 |
不含酶;用量:1g/L;pH=8 |
实施例3:黄原胶裂解酶的洗涤剂稳定性测定
将酶样品与洗涤剂(如表1中所例示)混合并且在30℃储存8周。孵育后,将酶-洗涤剂样品在稀释缓冲液(50mM MOPS、1mM CaCl2、pH 7.5)中稀释50倍。
为了测量稀释的酶-洗涤剂样品的酶活性,将50μl稀释的样品与50μl新鲜制备的底物溶液混合(通过将400mg黄原胶溶解在100ml的Milli Q水中来新鲜制备0.4%w/v黄原胶)并且在40℃孵育1小时。
孵育后,添加75μl的PAHBAH试剂(通过将1.5g的对羟基苯甲酸酰肼溶解在储备溶液混合物(通过将106.99g的Na2CO3、47.98g的酒石酸钾钠和2.42mg的(Bi(NO3)3x5H2O)溶解在Milli Q水中至最终体积达到1000mL来制备含有1.0M的Na2CO3、0.17M的酒石酸钾钠和5mM的(Bi(NO3)3 x 5H20)的储备溶液混合物)中来新鲜制备1.5%PAHBAH试剂),并且将样品在90℃孵育10分钟,随后在10℃冷却。此后,在405nm处测量吸光度(Infinite M1000读取器;TECAN,Switzerland)。
实施例4:残留活性
在将酶添加到洗涤剂中之后以及在将含有酶的洗涤剂在30℃储存之后,通过测量存在于新鲜洗涤剂中的酶活性来确定洗涤剂中的稳定性。
残留活性(RA)计算为在30℃孵育后剩余的酶活性相对于新鲜配制酶后的酶活性的百分比。
表2.残留活性
S1:如表1中所示出的洗涤剂基质,其具有0.7重量%(t.q.)的含有如本文所描述的内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶的酶混合物;pH=8
S2:如表1中所示出的洗涤剂基质,其具有额外的5重量%甘油和0.7重量%(t.q.)的含有内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶的酶混合物;pH=8
S3:如表1中所示出的洗涤剂基质,其具有1重量%甲酸钠和0.7重量%(t.q.)的含有内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶的酶混合物:pH=8
将所有三个样品S1、S2和S3在30℃储存8周。储存后,如上文所描述确定内切葡聚糖酶和黄原胶裂解酶的残留活性。
从表2可以看出,内切葡聚糖酶以及黄原胶裂解酶可以通过相当低的甲酸钠浓度来稳定,而升高的甘油浓度仅对黄原胶裂解酶具有稳定作用。
使用尽可能低浓度的酶稳定剂在紧凑型用量形式(例如特别是单位剂量、小袋和帽)中是尤其有利的。在这方面,甲酸钠在以相当低的浓度应用时示出了令人惊讶的良好稳定结果。
Claims (24)
1.一种洗涤剂组合物,其包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变、优选取代:对应于SEQ ID NO:1的氨基酸612至660的区域7、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸95至105的区域1、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸115至138的区域2、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸210至251的区域3、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸267至301的区域4、对应于SEQ IDNO:1的氨基酸339至361的区域5、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸547至595的区域6、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸806至828的区域8,对应于SEQ ID NO:1的氨基酸839至1042的区域9、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1至94的区域10、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸106至114的区域11、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸139至209的区域12、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸252至266的区域13、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸302至338的区域14、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸362至546的区域15、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸596至611的区域16、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸661至805的区域17、对应于SEQ ID NO:1的氨基酸829至838的区域18和对应于SEQ ID NO:1的氨基酸1043至1055的区域19;和/或
(B)黄原胶裂解酶变体,其在选自下述的一个或多个区域中的一个或多个位置处包含改变、优选取代:对应于SEQ ID NO:2的氨基酸731至803的区域3、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸154至176的区域1、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸614至658的区域2、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸807至846的区域4、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸872至885的区域5、对应于SEQID NO:2的氨基酸903至1004的区域6、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1至153的区域7、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸177至613的区域8,对应于SEQ ID NO:2的氨基酸659至730的区域9、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸804至806的区域10、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸847至871的区域11、对应于SEQ ID NO:2的氨基酸886至902的区域12和对应于SEQ ID NO:2的氨基酸1005至1037的区域13;以及
(C)酶稳定组分;
其中所述内切葡聚糖酶变体(A)与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性;优选地所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性;
其中所述黄原胶裂解酶变体(B)与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,优选地所述黄原胶裂解酶变体对黄原胶具有活性;并且
其中所述酶稳定组分选自:甲酸盐,如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁。
2.根据权利要求1所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
3.根据权利要求1至2中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体在选自下述的一个或多个位置处包含改变、优选取代:4、17、18、20、51、53、55、56、60、63、71、79、87、92、99、120、125、126、130、137、182、186、189、192、213、216、221、226、228、230、231、232、233、235、240、243、247、249、278、279、281、283、285、289、292、294、298、302、311、313、333、346、353、358、386、387、388、390、403、408、410、416、441、448、451、471、472、476、489、507、512、515、538、555、556、557、558、559、560、561、562、563、564、567、568、570、575、578、579、580、581、583、589、590、591、592、593、595、598、599、602、603、605、607、609、616、627、630、631、635、636、638、639、640、641、642、643、644、651、676、683、688、690、694、698、699、706、711、713、719、720、744、749、754、756、760、781、786、797、810、811、812、815、823、824、825、827、828、833、834、835、837、843、848、868、869、870、871、872、873、874、880、881、883、884、885、887、888、890、892、894、898、905、906、912、920、921、924、926、927、928、932、933、934、935、937、938、939、940、941、942、943、946、948、950、952、953、954、956、957、960、966、971、972、980、989、991、994、995、998、999、1006、1009、1010、1011、1029、1030、1031、1032、1035、1037、1038、1040、1041、1042、1044、1045和1048,优选地在选自下述的一个或多个位置处包含改变、优选取代:17、20、216、283、302、311、313、408、476、579、602、627、636、638、651、688、697、719、756、880、881、883、887、906、921、934、937和956,其中所述位置对应于SEQ IDNO:1的氨基酸位置。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:V4T、S17A、N18G、F20P、F20N、F20G、F20Y、K51Q、K51H、E53Y、E53P、E53G、Y55M、Y55D、V56M、Y60F、S63F、A71E、T87R、T92S、K99R、A120P、I125V、A126R、S128X、N129D、K130R、F137L、H182Y、A186P、N189K、K192N、K213R、N216D、N216Q、N216R、A221R、L226K、K228E、K228I、G230F、G230L、G230A、G230H、G230N、G230W、G230T、F231Y、F231N、V232R、V232G、L233H、H235D、N240Q、G243K、G243R、D247N、A249N、A278S、G279E、K281F、K281V、K281Y、K281H、K281Q、K281N、K281W、K281T、K281R、A283D、N285G、N285L、N285M、N285S、N285P、N285T、N285Y、N285H、N285K、N285D、N285W、N285R、Q289E、T292A、T292F、T292L、T292I、T292V、T292S、T292P、T292Y、T292Q、T292N、T292K、T292D、T292G、A294V、F297L、Q298E、I302D、I302H、I302V、I302M、H311N、S313D、W333L、A346H、A346D、T353D、A386P、I387T、K388R、K390Q、I403Y、E408D、E408N、E408S、E408P、E408A、E408G、P410G、Q416S、Q416D、N441G、A448E、A448W、A448S、K451Q、K451S、G471S、S472Y、D476R、Q489P、K507R、K512P、S515V、S538C、L555Q、G556S、G557R、N558P、N558F、N558K、N558D、N558M、N558Q、N558I、N558Y、N558H、N558E、A559N、A559F、A559M、A559P、A559Y、A559H、A559Q、A559D、A559R、A559G、A559I、A559S、A559K、S560F、S560P、S560K、S560G、S560D、T561E、T561Q、T561S、T561D、T561P、G562W、G562P、G563E、A564I、A564Y、A564H、A564Q、A564K、A564E、A564D、E565M、V567F、V567P、K568R、L569F、L569Y、L569D、L569E、P570F、P570L、P570I、P570M、P570V、P570S、P570T、P570A、P570Y、P570H、P570Q、P570N、P570K、P570E、P570W、P570R、P570G、I575V、I575M、I575A、I575D、I575E、I576F、I576M、I576P、D578R、Y579F、Y579W、V580L、T581M、D583M、Q589G、P590S、P590T、P590E、E591L、G592D、S593P、S593H、S593Q、S593N、S593K、S593D、S593E、S593R、S595L、S598Q、A599S、I602T、I602D、V603P、S605T、S607C、G609E、S616G、S616D、K627L、K627M、K627V、K627S、K627T、K627Q、K627R、I630F、I630V、I630Y、K631R、K631A、T633V、D635L、D635M、D635T、D635A、D635P、D635N、D635K、D635E、D635G、D635W、S636L、S636M、S636A、S636H、S636Q、S636N、S636K、S636R、F638N、F638Y、T639D、F638I、F638V、F638T、F638L、F638H、F638M、T639V、T639S、T639L、T639I、T639M、T639A、T639E、T639W、T639G、T639Y、T639P、T640S、Y641E、S642T、S642N、N643D、N643H、N643T、T644F、A651P、A651S、D676H、Q683E、A688G、Y690F、T694A、T697G、R698W、T699A、T706Q、T711S、T711V、T711Y、K713R、W719R、K720H、K744H、K744Q、A749T、K754R、V756Y、V756H、S760G、T781M、N786K、T797S、S810Q、S810R、A811S、V812F、V812I、V812M、V812W、V812R、N815V、N815Y、N815E、N815W、N815R、S823Q、A824T、A824D、T825G、T825N、T825W、T825A、T825D、V827I、V827M、V827S、N828D、N833D、Q834E、S835A、S835D、V837I、T843V、N848D、A868E、A869V、D870F、D870L、D870I、D870M、D870V、D870S、D870T、D870Y、D870H、D870Q、D870N、D870K、D870E、D870W、D870R、D870G、P871F、P871L、P871I、P871M、P871V、P871S、P871T、P871A、P871Y、P871H、P871Q、T872S、T872F、T872A、T872Y、T872H、T872Q、T872N、T872K、T872D、T872E、T872W、T872R、T872G、D873K、D873E、T874V、T874S、T874P、T874A、T874H、T874Q、T874N、T874K、R880K、V881Q、V881T、T883R、T883V、T883C、T883K、Y884H、A885F、A885Q、A885N、T887L、T887I、T887S、T887H、T887R、T887K、L888M、V890R、T892P、T892V、K894E、R898Q、N905D、F906A、Q912V、N920P、N920D、K921R、K921E、K921D、A924D、V926F、V926P、K927R、S928D、T932A、N933V、N933S、Y934G、Y934M、Y934S、Y934A、Y934Q、Y934N、Y934E、Y934W、Y934R、T935W、A937F、A937V、A937S、A937T、A937Q、A937D、A937E、V938I、K939I、K939V、D940E、N941S、N941H、N941D、A942P、A942E、D943Y、D943H、G946R、K948R、K948E、R950V、R950H、R950N、F952S、F952W、N953Y、G954L、Q956Y、Q956S、A957L、A957P、Y960F、A964N、A964C、N966P、N966C、G971A、T972K、Q974K、Q974C、M980I、Q989I、Q991L、Q991I、Q991M、Q991V、Q991T、Q991K、Q991C、G994D、G994N、S995I、S995V、S995Q、S995R、S995C、G998V、G998A、T999R、S1006T、S1006A、S1006K、S1006R、K1009E、Y1010W、L1011M、L1011S、L1011A、L1011Q、L1011N、L1011D、L1011E、R1029N、F1030M、K1031I、K1031S、K1031T、K1031H、V1032G、K1035A、A1037E、A1037W、S1038L、S1038I、S1038G、L1040N、L1040E、G1041F、G1041R、Y1042N、L1044F、L1044S、L1044N、L1044W、P1045Q、P1045W和F1048W,优选地包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:S17A、F20P、N216D、N216Q、A283D、I302D、H311N、S313D、E408D、D476R、Y579W、I602T、K627R、S636N、S636K F638I、F638N、A651P、A688G、T697G、W719R、V756Y、R880K、V881Q、T883R、T887K、F906A、K921R、Y934G、A937E和Q956Y,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体包含选自下述的一组改变:A559K+N558K+S560F+T561P+G562W、A559N+P570Q、A559N+P570T、A559N+Y579F、A559N+Y579F+K627R、A559N+Y579W、A559N+Y579W+K99R、A559N+Y579W+S128X+K627R、A559N+Y579W+S128X+S636N、A559N+Y579W+K281R、A559N+Y579W+Q416D+S636N、A559N+Y579W+S560P、A559N+Y579W+A564I、A559N+Y579W+P570N、A559N+Y579W+P570K、A559N+Y579W+P570R、A559N+Y579W+P570A、A559N+Y579W+P570T、A559N+Y579W+P570S、A559N+Y579W+P570Q、A559N+Y579W+P570H、A559N+Y579W+S616D、A559N+Y579W+S616D+K627R、A559N+Y579W+S616D+S636K、A559N+Y579W+S616D+A651P、A559N+Y579W+S616D+K921R、A559N+Y579W+S616D+K921R+Y934G、A559N+Y579W+K627R、A559N+Y579W+K627R+S636N+A651P、A559N+Y579W+K627R+S636N+K921R、A559N+Y579W+K627R+K921R、A559N+Y579W+K627M、A559N+Y579W+K627M+A651P、A559N+Y579W+S636N、A559N+Y579W+S636N+A651P、A559N+Y579W+S636N+K921R、A559N+Y579W+S636K+A651P、A559N+Y579W+S636K+K921R、A559N+Y579W+S636L、A559N+Y579W+F638I、A559N+Y579W+A651P、A559N+Y579W+A651P+K921R+Y934G、A559N+Y579W+A651P+Y934G、A559N+Y579W+D870M、A559N+Y579W+K921R、A559N+Y579W+K921R+A651P、A559N+Y579W+K921R+Y934G、A559N+Y579W+Y934G、A559N+Y579W+K948E、A559N+Y579W+K1009E、A559N+K627R、Y579F+A564E、Y579W+K99R、Y579W+G562P、Y579W+A564D、Y579W+P570K、Y579W+P570Q、Y579W+K627R、Y579W+S636N、Y579W+F638I、Y579W+A651P、Y579W+K921R、Y579W+Y934G、Y579W+K948E、Y579W+K1009E、K627R+K51Q、K627R+K451S、K627R+P570Q、K627R+P570T、K627R+S636N、K627R+F638I、K627R+A885F、K627R+Y934G、S636N+P570T、S636N+K921R、S636N+Y934G、F638I+P570K、F638I+P570Q、F638I+P570T、F638I+A651P、F638I+Y934G、F638I+K921R、A651P+P570Q、A651P+P570T、A885F+P570T、A885F+Y934G、K921R+P570Q、K921R+P570T、Y934G+P570T,优选地包含选自下述的一组改变:A559N+Y579W+T697G、K512P+A559N+Y579W+T697G、N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、S313D+E408D、R880K+N905D+K921R+Y934G、I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体对用黄原胶裂解酶预处理的黄原胶具有活性,优选地所述活性是黄原胶降解活性,进一步优选地所述黄原胶降解活性是内切葡聚糖酶EC 3.2.1.4活性。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体在选自下述的一个或多个位置处包含改变、优选取代:9、15、18、46、58、66、89、95、100、106、109、155、159、183、188、190、203、204、221、229、234、238、240、242、243、257、258、284、291、293、316、317、320、324、329、333、339、341、352、354、360、372、377、399、400、419、440、450、451、454、458、481、492、505、533、567、568、576、578、579、582、620、624、626、631,635、649、650、656、664、672、703、722、726、727、728、738、745、752、753、754,757、769、775、777、779、782、786、789、792、796、799、801、819、824、843、851、855、856、867、875、887、892、899、900、901、902、903、911、912、915、919、921、923、925、927、928、930、933、941、966、991、1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个氨基酸取代:K9R、N15T、T18D、L46D、A58L、S66H、Q89Y、K95E、S100D、N106Y、Q109R、Q109D、Q109F、Q109K、Q109A、Y155E、A159P、K183Q、K183R、V188I、A190Q、A203P、K204R、A221P、E229N、E229S、E229V、I234V、I238W、I238L、I238M、I240W、N242S、G243V、Y257W、R258E、R284G、K291R、A293G、A293P、K316R、R317K、K320R、L324Q、K329R、K333R、L339M、I341P、V352I、S354P、K360G、K360R、Q372H、F377Y、N399K、K400R、F419Y、N440K、D450P、K451E、K451R、A454V、D458S、K481R、A492H、A492L、T505I、L533I、K567R、G568A、S578K、S578N、S578R、S579R、S579K、S582K、K620R、A624E、A626Q、T631N、S635E、S635T、T649V、T649K、Q650G、I656V、T664K、N672D、I703L、I722F、P726Q、T727P、M728V、G738L、K745R、P752R、P752K、G753E、G753Q、G753S、S754E、S754L、S754Q、S754R、S757D、S757P、S757E、A769D、A769T、A769R、L775A、L775F、L775I、L775M、L775Q、L775S、L775Y、D777R、P779V、Y782I、N786K、G789R、K792W、K792Y、K792V、K792A、N796Q、A799H、D801G、K819R、K824R、A843P、S851F、K855R、E856D、P867S、K875T、K875E、K887R、N892Y、N892W、N892F、G899S、I900G、D901A、T902F、T903A、T903Q、A911M、A911V、A911S、A912T、A912I、A912Y、T915S、T915V、T915Q、T919D、T919F、T919G、T921R、T921S、T923D、T923H、T925D、T925Q、T925R、T927K、D928W、Y930F、Y930H、Y930L、D933M、G941D、G941E、A966P、N991D、V998K、N1008D和K1016T,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体在选自下述的一个或多个位置处包含改变:624、631、635、649、656、738、752、753、754、757、769、775、777、800、801、843、875、911和915,和/或在选自下述的一个或多个位置处包含改变:89、100、190、229、234、352、360、399、440、458、492、567、582、664、672、703、728、892、1008和1016,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一个或多个取代:Q89Y、S100D、A190Q、E229S、I234V、V352I、K360G、N399K、N440K、D458S、A492H、A492L、K567R、S582K、T664K、N672D、I703L、M728V、N892Y N1008D和K1016T,和/或包含选自下述的一个或多个取代:A624E、T631N、S635E、T649K、I656V、G738L、P752K、P752R、G753E、S754E、S754R、S757D、A769D、L775A、D777R、V800P、D801G、A843P、K875T、A911V和T915A,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述黄原胶裂解酶变体包含选自下述的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述酶稳定组分是甲酸钠。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的洗涤剂组合物,其包含
(A)内切葡聚糖酶变体,其与SEQ ID NO:1具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变:
(A1)A559N+Y579W+T697G,
(A2)K512P+A559N+Y579W+T697G,
(A3)N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y,
(A4)N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G,
(A5)S313D+E408D,
(A6)R880K+N905D+K921R+Y934G,
(A7)I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G,和
(A8)N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置;
(B)黄原胶裂解酶变体,其与SEQ ID NO:2具有至少61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%,94%、95%、96%、97%、98%或99%且小于100%的序列相同性,并且具有选自下组的一组改变:
(B1)E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,
(B2)E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,
(B3)E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,
(B4)A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T,
(B5)A190Q+E229S+T631N+N672D+1703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T,
(B6)A190Q+E229S+1234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y,
(B7)E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801 G+K875T+N892Y,和
(B8)S1 00D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,
其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;以及
(C)酶稳定组分,其中所述酶稳定组分是甲酸钠。
15.根据权利要求14所述的洗涤剂组合物,其中所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体不包含任何进一步的取代。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的洗涤剂组合物,其中在所述酶稳定组分、特别是甲酸钠的存在下,所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体具有改进的稳定性。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述洗涤剂组合物包含0.000001至10重量%如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述内切葡聚糖酶变体和/或00.000001至10重量%如0.00001至5重量%、优选0.0001至1重量%、更优选0.0005至0.5重量%、甚至更优选0.001至0.1重量%的所述黄原胶裂解酶变体和/或0.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%的所述酶稳定剂;和/或其中所述洗涤剂组合物以0.00001:1至0.1:2、优选0.0001:1至0.01:1、更优选0.0005:1至0.001:1的重量比(酶:稳定剂)包含所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述洗涤剂组合物是自动餐具洗涤组合物、手动餐具洗涤组合物或衣物洗涤剂组合物,特别是衣物洗涤剂组合物,优选液体衣物洗涤剂组合物。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的洗涤剂组合物,其中所述洗涤剂组合物优选地为单位剂量,特别是小袋或帽。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的洗涤剂组合物的用途,其中所述用途是用于衣物洗涤或餐具洗涤过程,或者所述用途是用于降解黄原胶。
21.使用根据权利要求1至19中任一项所述的洗涤剂组合物降解黄原胶的方法,其中黄原胶在硬表面或纺织品的表面上。
22.酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中、特别是在液体衣物洗涤剂组合物中的稳定性的用途,其中所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体如权利要求1至19中任一项所定义,并且其中所述酶稳定组分选自:甲酸盐,如甲酸钠、甲酸钾、甲酸钙或甲酸镁。
23.根据权利要求22所述的酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途,
其中所述内切葡聚糖酶与SEQ ID NO:1具有至少60%且小于100%的序列相同性,并且具有选自以下的一组改变:A559N+Y579W+T697G、K512P+A559N+Y579W+T697G、N18G+A71E+A186P+E408D+Y579W+I602T+A651P+A688G+V756Y、N18G+N189K+E408D+A559N+Y579W+A688G+T697G+V756Y+K921R+Y934G、S313D+E408D、R880K+N905D+K921R+Y934G、I302D+S313D+E408D+Y579W+I602T+A651P+T697G+R880K+K921R+Y934G和N216Q+S313D+E408D+D476R+Y579W+I602T+F638N+A651P+T697G+W719R+R880K+T887K+K921R+Y934G,其中所述位置对应于SEQID NO:1的氨基酸位置;
其中所述黄原胶裂解酶变体与SEQ ID NO:2具有至少60%且小于100%的序列相同性,并且具有选自以下的一组改变:E229N+N672D+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N672D+P752R+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、A190Q+E229S+I234V+A624E+N672D+G753E+S754E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+T631N+N672D+I703L+P752K+G753E+A769D+L775A+D801G+K875T、A190Q+E229S+I234V+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y、E229S+N440K+S582K+A624E+S635E+N672D+G738L+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A+D801G+K875T+N892Y和S100D+E229S+K360G+D458S+S582K+N672D+G753E+S754E+S757D+A769D+L775A +D801G+A843P+K875T+N892Y+N1008D,其中所述位置对应于SEQ ID NO:2的氨基酸位置;并且
其中所述酶稳定组分是甲酸钠。
24.根据权利要求22或23所述的酶稳定组分用于改进内切葡聚糖酶变体和/或黄原胶裂解酶变体和/或其混合物在洗涤剂组合物中的稳定性的用途,其中所述内切葡聚糖酶变体的存在量为0.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%,和/或所述黄原胶裂解酶变体的存在量为00.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%,和/或所述酶稳定剂的存在量为0.001至20重量%如0.005至15重量%、优选0.01至10重量%、更优选0.1至5.5重量%、甚至更优选0.25至1.5重量%;和/或其中所述内切葡聚糖酶变体和/或所述黄原胶裂解酶变体和所述酶稳定剂以0.00001:1至0.1:2、优选0.0001:1至0.01:1、更优选0.0005:1至0.001:1的重量比(酶:稳定剂)存在。
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