CN1166949C - 一种宫血宁胶囊质量的测定方法 - Google Patents

Abstract

一种宫血宁胶囊质量的测定方法，涉及药物有效成分的分析。取宫血宁胶囊内容物1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25毫升，密塞，称定重量，在功率250W，频率25KH_z的条件下超声处理40分钟，放冷后，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀。滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，产品中含重楼皂苷VI(C₃₉H₆₂O₁₃)不得少于0.4%，即可。

Description

一种宫血宁胶囊质量的测定方法

所属技术领域

本发明涉及一种药物的分析测定方法。更具体地说，本发明涉及一种对宫血宁胶囊主要有效成分的测定方法。

背景技术

宫血宁胶囊是百合科植物云南重楼或七叶一枝花的提取物制成的胶囊剂。它具有凉血止血、清热除湿，化瘀止痛的功能。用于崩漏下血、月经过多，产后或流产后宫缩不良出血及子宫功能性出血属血热妄行症者。以及慢性盆腔炎的湿热瘀结症所致小腹痛、腰骶痛、带下增多等。由于疗效显著，深受广大患者的欢迎，已被卫生部列为国家基本药物。但是，原产品的质量标准中一直沿用生物检定方法，即采用大鼠子宫收缩试验，测试繁琐，干扰因素多，且无量的概念，远远不能满足生产的实际需要。

发明内容

为了克服现有测定方法的不足，本发明提供一种宫血宁胶囊质量的测定方法。具体是采用液相色谱定量测定重楼皂苷VI的含量，从而方便、快捷、准确地对宫血宁胶囊的质量进行测定。

技术方案

本发明提供的宫血宁胶囊质量测定方法，包括下述顺序的步骤：

(1)取胶囊内容物0.13克，加乙醇10毫升，振摇10分钟，过滤，取滤液1毫升，置瓷蒸发皿中，蒸去乙醇，残渣加醋酐0.5毫升使溶解，加硫酸2滴，初显黄色，渐变红色、紫色、污绿色；

(2)取胶囊内容物0.13克，加水10毫升，混匀，置分液漏斗中，加正丁醇10毫升，振摇提取，取正丁醇液，用水5毫升洗涤，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1毫升使溶解，作为供试品溶液。另取重楼皂苷VI、重楼皂苷VII对照品，加甲醇制成每1毫升各含1毫克的溶液，作为对照品溶液。

(3)分别取步骤(2)中的两种溶液各5微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以重量比为5∶4∶3∶0.6的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量百分数为10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(4)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为45∶55的乙腈-水为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按重楼皂苷VI峰计算，应不低于5000。

(5)取宫血宁胶囊内容物1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25毫升，密塞，称定重量，在功率250W，频率25KHz的条件下超声处理40分钟，放冷后，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀。滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。精密称取重楼皂苷VI对照品适量，加甲醇制成每1毫升含0.4毫克的溶液，作为对照品溶液。

(6)分别精密吸取步骤(5)中的对照品溶液与供试品溶液各10微升，注入液相色谱仪测定，产品中含重楼皂苷VI(C₃₉H₆₂O₁₃)不得少于0.4％，即可。

有益效果：由于宫血宁胶囊中重楼的主要成分为多种甾体皂苷，有较强的生理活性，其中重楼皂苷VI为比较典型的成分，含量也较高，故选择其为测定对象。本发明采用辛烷基硅胶键合相色谱柱，建立了一种可靠的分析测定方法，可从原料、半成品、成品着手，进行全面的定量检测，然后根据测量数据采取相应生产措施，有效控制产品质量，成功地解决了宫血宁胶囊分析测定中长期存在的技术难题。

附图说明

图1是采用本发明测定宫血宁胶囊的液相色谱图。

在图1中，1-对照品，2-宫血宁样品，a-重楼皂苷VI。

具体实施方式

(1)仪器与试药：高效液相色谱仪，沃特斯M510泵、717自动进样器，PDA检测器，TCM柱温控制系统，2010工作站；分析纯甲醇，色谱纯乙腈，中科院昆明植物研究所提供的重楼皂苷VI对照品。

(2)色谱条件：色谱柱Symmetry C₈ 4.6×250mm；流动相为乙腈-水(45∶55)；检测波长203nm；柱温40℃；流量1ml/min。此条件下重楼皂VI与其它组份能达基线分离，如附图1所示。

(3)对照品溶液的制备：精密称取重楼皂苷VI对照品适量，加甲醇制成每1毫升含0.4毫克的溶液，作为对照品溶液。

(4)供试品溶液的制备：采用甲醇提取重楼甾体皂苷类成份，对冷浸提取17小时、索氏提取5小时和超声处理15、30、40、60、120分钟进行对比试验，实验结果表明前两种方法测定结果与超声处理40分钟大致相同，其中超声处理40分钟与处理120分钟结果一致，故选择操作简单、效率高的超声处理40分钟，试验中还采用硅胶、C₁₈、吸附树脂等材料进行样品纯化处理，但回收率不佳故未采用。从长期检测情况看，由于样品成分较单一，污染成分较少，未经纯化处理的供试品溶液对色谱柱的污染较小。

(5)线性关系的考察：精密吸取对照品溶液5，10，15，20和25μl按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，重楼皂苷VI进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程Y＝394432x-95464 r＝0.9995表明重楼皂苷VI在2.2～11.0μg范围内具有良好线性关系。

(6)稳定性试验：重楼皂苷VI的甲醇溶液室温放置考察43天，其峰面积值变化甚微，较为稳定。

(7)精密度试验：精密吸取上述对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，重复5次，测得重楼皂苷VI峰面积积分值的相对标准偏差＜2％，结果见表1。

(8)重复性试验：取同一供试品，分别进行供试溶液制备，测定，重复5次，按计算公式1计算重楼皂苷VI的含量，测得重楼皂苷VI含量相对标准偏差＜5％，结果列于表2。

计算公式1

    表1.精密度试验结果                      表2.重复性试验结果

次数     峰面积      RSD％             次数      含量％        RSD％

1        1629941                       1         0.760

2        1631148                       2         0.767

3        1635705     1.34              3         0.794         1.73

4        1679307                       4         0.769

5        1662263                       5         0.781

(9)回收率试验：采用加样回收法，取已知含量的宫血宁样品，添加重楼皂苷VI对照品，按上述供试品溶液制备方法制备，测定，按计算公式2计算回收率，平均回收率为97.1％，结果列于表3。

计算公式2.

(10)样品测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，按上述色谱条件测定，按计算公式1计算重楼皂苷VI含量，30批样品测定结果列于表4.测试结果表明，重楼皂苷VI含量最低为0.26％，最高为0.96％，大鼠子宫收缩检查均符合规定，为保证产品质量，按90％的合格率确定低限，故确定含量限度为产品中重楼皂苷VI的含量不得低于0.4％。

表3.回收率测定结果

序号    样品中苷VI的量    添加苷VI的量    测出苷VI的量     回收率％    平均回收率

        (mg)              (mg)            (mg)             (η＝3)     ％

1       4.593             2.00            6.373            96.8

2       4.567             2.40            6.887            96.7

3       4.654             2.80            7.502            101.7       97.1

4       4.577             4.40            8.715            94.0

5       4.549             5.50            9.833            96.1

表4.宫血宁样品测定结果

批号    重楼皂苷VI含量％  大鼠子宫收缩作用	批号    重楼皂苷VI含量％  大鼠子宫收缩作用
		1           0.84            符合规定2           0.58            符合规定3           0.69            符合规定4           0.55            符合规定5           0.46            符合规定6           0.94            符合规定7           0.76            符合规定8           0.78            符合规定9           0.89            符合规定10          0.68            符合规定11          0.54            符合规定12          0.41            符合规定13          0.46            符合规定14          0.57            符合规定15          0.95            符合规定	16         0.58              符合规定17         0.46              符合规定18         0.52              符合规定19         0.58              符合规定20         0.26              符合规定21         0.75              符合规定22         0.31              符合规定23         0.91              符合规定24         0.92              符合规定25         0.89              符合规定26         0.87              符合规定27         0.80              符合规定28         0.68              符合规定29         0.96              符合规定30         0.83              符合规定

Claims (1)

1.一种宫血宁胶囊质量的测定方法，该方法包括下述顺序的步骤：

(1)取胶囊内容物0.13克，加乙醇10毫升，振摇10分钟，过滤，取滤液1毫升，置瓷蒸发皿中，蒸去乙醇，残渣加醋酐0.5毫升使溶液，加硫酸2滴，初显黄色，渐变红色、紫色、污绿色；

(2)取胶囊内容物0.13克，加水10毫升，混匀，置分液漏斗中，加正丁醇10毫升，振摇提取，取正丁醇液，用水5毫升洗涤，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1毫升使溶液，作为供试品溶液；另取重楼皂苷VI、重楼皂苷VII对照品，加甲醇制成每1毫升各含1毫克的溶液，作为对照品溶液；

(3)分别取步骤(2)中的两种溶液各5微升，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以重量比为5∶4∶3∶0.6的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以重量百分数为10％的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为45∶55的乙腈-水为流动相，检测波长为203nm，理论塔板数按重楼皂苷VI峰计算，应不低于5000；

(5)取宫血宁胶囊内容物1克，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25毫升，密塞，称定重量，在功率250W，频率25KHz的条件下超声处理40分钟，放冷后，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀；滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液；精密称取重楼皂苷VI对照品适量，加甲醇制成每1毫升含0.4毫克的溶液，作为对照品溶液；

(6)分别精密吸取步骤(5)中的对照品溶液与供试品溶液各10微升，注入液相色谱仪测定，产品中含重楼皂苷VI不得少于0.4％，即可。