CN116687953A - 一种火龙果枝条的多糖的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种火龙果枝条的多糖的应用，涉及药物技术领域。本发明提供了一种火龙果枝条的多糖在治疗骨质疏松中的应用，该多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。该火龙果枝条的多糖，具有促进成骨细胞的增殖、分化的效果，能够改善其骨生物力学状况，防治骨质疏松症的效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及药物技术领域，特别是涉及一种火龙果枝条的多糖的应用。
背景技术
骨质疏松症是50岁以上中老年人群常见骨退行性疾病之一，其主要病理表现为单位体积骨量减少，骨小梁变细、稀疏，骨强度降低，易发骨折。据统计，当前国内50岁以上人群骨质疏松症的患病率约为19.2％，65岁以上绝经后女性患病率更是达到了51.6％。另外，在50岁以上人群中，骨质疏松症的高危人群低骨量患者占比46.4％，已然成为骨质疏松队伍强大后备力量。随着国内人口老龄化加剧，骨质疏松症患者及低骨量人群数量还将逐年上升，骨质疏松症的患病率也将呈上升趋势。预计到2050年，国内由于骨质疏松导致的各类骨折患者将达到599万，且由此带来的医疗费用开支将达到1745亿元。另一方面，目前全球骨质疏松症患者则高达10.2亿人，患病率也正在急剧上升，对人类的生活质量和社会经济带来了巨大的负面影响，现已成为全球关注的公共卫生问题。
现代医学对于骨质疏松症的治疗药物主要可分为骨矿化促进剂、骨形成促进剂、骨吸收抑制剂，但这些药物具有不同程度的不良反应。钙剂为骨矿化促进剂的代表，为临床中治疗骨质疏松症最基础的药物之一，但长期服用钙剂亦能导致上腹部不适感、便秘、高钙血症、甚至发生肾结石。且最新研究还表明，钙剂的大量应用尚有增加前列腺癌发生的风险。双膦酸盐为骨吸收抑制剂的代表，临床应用中除明显胃肠道反应外，发热、全身骨痛、下颌骨坏死、肾功能衰竭、休克等不良反应也不容忽视。因此，寻求经济方便且安全有效的抗骨质疏松药物具有重要的临床意义。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种火龙果枝条的多糖在治疗骨质疏松中的应用，该火龙果枝条的多糖，具有促进成骨细胞的增殖、分化的效果，能够改善其骨生物力学状况，防治骨质疏松症的效果显著。
为了达到上述目的，本发明提供了一种火龙果枝条的多糖在治疗骨质疏松中的应用，该多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。
本发明人在研究过程中发现火龙果枝条通过水提法得到的多糖，药理作用明显，具有促进成骨细胞增殖、分化的效果，能够增加去卵巢骨质疏松大鼠的椎骨骨密度，改善骨生物力学状况，防治骨质疏松症的效果显著。
本发明还提供了一种火龙果枝条的多糖在制备用于治疗骨质疏松的药物中的应用，该多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。
上述多糖来源于火龙果枝条，无任何毒副作用，可长期安全使用。
在其中一个实施例中，所述骨质疏松包括原发性骨质疏松，或继发性骨质疏松。
在其中一个实施例中，所述药物包括药学上可接受的辅料和所述多糖。
在其中一个实施例中，所述药物为口服制剂或注射制剂。
在其中一个实施例中，所述应用包括口服或注射所述药物，所述多糖的每千克体重用量为1-1000mg。
本发明还提供了一种用于治疗骨质疏松的药物，该药物包括药学上可接受的辅料和多糖，所述多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。
在其中一个实施例中，所述辅料包括以下原料中的至少1种：赋形剂，润滑剂，抗氧剂，防腐剂，黏合剂，填充剂，或增稠剂。
在其中一个实施例中，所述药物的剂型为口服制剂或注射制剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的一种火龙果枝条的多糖的应用，该多糖取自火龙果枝条，无任何毒副作用，可长期安全使用，且药理作用明显，具有促进成骨细胞增殖、分化的效果，改善骨生物力学状况，防治骨质疏松症的效果显著。同时，制备火龙果枝条的多糖的原料易得、价格便宜，通过水提法得到多糖冻干粉，制备工艺简单、工序少，生产效率高；患者使用安全、方便，可采用多种剂型，缓解症状，解决患者痛苦，疗效显著，费用低廉。
附图说明
图1为实施例2中火龙果枝条多糖对MC3T3-E1细胞增殖的影响结果图(火龙果枝条多糖各剂量组与空白组比较1)P<0.05，2)P<0.01)；
图2为实施例3中火龙果枝条多糖促进成骨矿化的茜素红染色结果图；
图3为实施例3中半定量检测火龙果枝条多糖对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响(火龙果枝条多糖各剂量组与空白组比较1)P<0.05，2)P<0.01)。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本实施例所用试剂、材料、设备如无特殊说明，均为市售来源；试验方法如无特殊说明，均为本领域的常规试验方法。
实施例1
一种火龙果枝条的多糖。
该多糖的制备方法具体如下：
1、红心火龙果枝条切片，减压烘干至质量恒定；
2、先后用石油醚和95％乙醇浸泡提取4h，除去色素等脂溶性以及小分子成分，挥干溶剂得到预处理样品；
3、准确称取预处理样品，按照料液比1∶20比例加入水，置于高压锅提取设备中，121度提取30min；
4、提取上清液浓缩至原体积1/5，加5倍体积无水乙醇，醇沉24h，离心得沉淀；
5、沉淀用适量去离子水溶解后除去不溶蛋白质，去离子水透析除去小分子杂质、冻干得多糖组分。
实施例2
火龙果枝条的多糖对小鼠前体成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。
1、细胞培养。
将小鼠前体成骨细胞MC3T3-E1接种于含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DNEM高糖培养基中。孵箱培养条件设定为温度37℃、气体条件为5％CO2，每48h进行换液。
2、CCK-8细胞增殖实验。
将MC3T3-E1细胞在96孔板中以5000个细胞/孔的密度铺板，并设置没有加入细胞的孔作为空白对照，每个实验组设置6个复孔，每孔中培养基的体积为100μL。贴壁后，更换培养基，新培养基中含不同剂量的火龙果枝条多糖。分别在培养24h、48h、72h的时间点处，每孔加入10μL CCK-8检测液，37℃孵箱内进行孵育2h，在450nm处采用酶标仪测量吸光度值(A)，计算出各组复孔的平均值后代入公式：细胞的相对活力(％)＝A处理组/A对照组×100％。
3、统计学处理。
结果数据采用SPSS 12.0软件进行统计计算，采用单因素方差分析检测组间差异，数据以表示，P＜0.05时差异具有统计学意义。
4、结果。
CCK-8结果显示，无论是培养24h，还是48h、72h，所有剂量的火龙果枝条多糖均可显著促进小鼠前体成骨细胞MC3T3-E1增殖，如图1所示。
实施例3
火龙果枝条多糖对MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化的影响。
1、茜素红染色测定检测细胞矿化能力。
将MC3T3-E1细胞接种于24孔板种，5000个细胞/孔，当细胞融合度达到60～70％时，弃掉DNEM高糖培养基，加入含有不同浓度火龙果枝条多糖的细胞成骨诱导分化完全培养基(购自赛业生物)OriCell MC3T3-E1继续培养。每隔3天换用新鲜的OriCell MC3T3-E1细胞成骨诱导分化完全培养基，诱导15天后用茜树红进行染色。弃掉培养基，PBS洗涤2次，4％中性甲醛溶液固定30min，弃掉甲醛，PBS冲洗2次，茜树红染色5min，弃掉茜树红，PBS冲洗3次。倒置显微镜下观察橙红色钙化结节。为了定量分析矿化区域，将染色样品溶解在含10％十六烷基氯化吡啶的10mmol/L磷酸钠水溶液中，采用酶标仪测测定562nm处吸光度。
2、统计学处理。
结果数据采用SPSS 12.0软件进行统计计算，采用单因素方差分析检测组间差异，数据以表示，P＜0.05时差异具有统计学意义。
3、结果。
由图2、3可知，与对空白照组相比，火龙果枝条多糖干预下，MC3T3-E1成骨细胞能够形成更多的钙结节，茜素红染色后可见更多的红色矿化沉着物。
实施例4
火龙果枝条多糖干预对骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学指标的影响。
1、实验动物。
6月龄SPF级SD雌性大鼠80只，体质量(350±30)g，购于广东医科大学实验动物中心，许可证号为：SCXK(粤)2018-0008。
2、动物分组、造模及给药。
将60只大鼠随机分为手术组(n＝45)和假手术组(n＝15)，适应性喂养1周，自由进水及饮食。所有动物采用10％水合氯醛溶液腹腔麻醉后，使大鼠仰卧于手术台上并将其四肢固定，于腹部正中偏下处常规备皮消毒，沿腹正中线逐层进入腹腔，寻找“Y”型子宫，在肾脏后下方脂肪团中暴露两侧“桑椹样”卵巢组织，分离周围脂肪，切除双侧卵巢，逐层缝合手术切口。假手术组大鼠仅切除双侧卵巢组织周围部分脂肪即可，其他手术操作方法不作改变。术后予以青霉素肌内注射，80000U/d，连续3d，防止感染。术后12周，分别从两组大鼠中随机选取5只，腹腔麻醉后处死，均取右侧股骨，并去除周围多余软组织，采用骨密度仪进行骨矿密度(bone mineral density，BMD)检测，验证模型是否制备成功。建模成功后，手术组剩余40只，假手术组剩余10只。将手术组剩余的40只模型大鼠随机分为模型组，以及火龙果枝条多糖低、中、高剂量组，每组10只。低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予25，50，100mg/(kg·d)的火龙果枝条多糖，假手术组及模型组给予生理盐水灌胃，连续灌胃3个月，1次/d。实验结束时，心脏抽血处死大鼠并马上取材。
3、骨矿密度检测。
右股骨剔除肌肉及软组织，以纱布蘸生理盐水包好，锡纸包裹，置入小袋中，
置于－20℃冻存。之后经双能X线骨密度仪进行离体骨矿密度(bone mineraldensity，BMD)的测定，股骨测定部位为全股骨，并使用所附软件对测量结果进行分析。
4、生物力学参数测定。
左侧股骨剔除肌肉及软组织，以纱布蘸生理盐水包好，锡纸包裹，置入小袋中，置于－20℃冻存。之后分别在MTS电子万能材料试验机进行生物力学检测。股骨进行三点弯曲力学实验，支点跨距18mm；中点为加压点，加载速率5.0mm/min；温度23℃；湿度60％～70％，得出最大载荷、断裂载荷、弹性载荷及弹性模量等参数。
5、统计学处理。
结果数据采用SPSS 12.0软件进行统计计算，采用单因素方差分析检测组间差异，数据以表示，P＜0.05时差异具有统计学意义。
6、结果。
与假手术组比较，模型组大鼠股骨BMD含量均显著降低；与模型组比较，火龙果枝条多糖各剂量组大鼠股骨BMD含量均明显升高，见表1。
与假手术组相比，模型组最大载荷、断裂载荷、弹性载荷、弹性模量均显著降低；与模型组相比，火龙果枝条多糖各剂量组4个生物力学参数出现上升趋势，但差异有无显著性意义，见表2。
表1火龙果枝条多糖对绝经后骨质疏松症大鼠BMD的影响
| 组别 | 剂量/mg·kg-1 | BMD/g·cm-2 |
| 假手术组 | / | 0.272±0.013 |
| 模型组 | / | 0.206±0.0092) |
| 火龙果枝条多糖低剂量组 | 25 | 0.246±0.0074) |
| 火龙果枝条多糖中剂量组 | 50 | 0.253±0.0144) |
| 火龙果枝条多糖高剂量组 | 100 | 0.266±0.0124) |
注：与假手术组比较1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较3)P<0.05，4)P<0.01。
表2火龙果枝条多糖对绝经后骨质疏松症大鼠左股骨生物力学参数的影响
注：与假手术组比较1)P<0.05，2)P<0.01；与模型组比较3)P<0.05，4)P<0.01。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (9)
1.一种火龙果枝条的多糖在治疗骨质疏松中的应用，其特征在于，该多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。
2.一种火龙果枝条的多糖在制备用于治疗骨质疏松的药物中的应用，其特征在于，该多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述骨质疏松包括原发性骨质疏松，或继发性骨质疏松。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述药物包括药学上可接受的辅料和所述多糖。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物为口服制剂或注射制剂。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括口服或注射所述药物，所述多糖的每千克体重用量为1-1000mg。
7.一种用于治疗骨质疏松的药物，其特征在于，该药物包括药学上可接受的辅料和多糖，所述多糖为火龙果枝条通过水提法得到的提取物。
8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述辅料包括以下原料中的至少1种：赋形剂，润滑剂，抗氧剂，防腐剂，黏合剂，填充剂，或增稠剂。
9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为口服制剂或注射制剂。
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