CN102441023B - 一种治疗骨科疾病的注射用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗骨科疾病的注射用组合物，其原料为猪四肢骨和甜瓜籽经分别提取制成的。其主要含有多肽类骨代谢因子、甜瓜籽提取物、多种游离氨基酸以及无机盐及微量元素，含多种骨代谢的活性肽类，具有治疗多种骨科疾病的作用。尤其值得关注的是，本发明原料中优选采用猪后胫骨，其提取液含有的多肽类成分的紫外吸收峰在258nm左右，普通猪四肢骨含有的多肽类成分的紫外吸收峰在240-250nm左右。实验证明，采用猪后胫骨作为药品原料，能够更好地发挥治疗效果。且通过制备过程中，分别对甜瓜籽提取物溶液和猪后胫骨提取液在紫外258nm进行监控，前置药品标准监控环节，提高了药品标准，更加有效地保证了药品的有效性和安全性。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，具体地说是治疗骨科疾病的注射用组合物及制备方法。
背景技术
骨瓜提取物注射液含有多种活性多肽和游离氨基酸，具有调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防止骨质疏松等作用。
多肽类骨代谢因子的作用多肽类骨代谢因子可有效促进机体内影响骨形成和吸收的骨源性生长因子的合成，包括骨形态发生蛋白(BMPs)，β-转化生长因子(TGF-β)，成纤维细胞生长因子(FGF)等，从而具有多种生物活性，其主要药理作用有：促进细胞有丝分裂、分化作用、趋化作用和溶骨活性。其中BMPs是一组酸性低分子量糖蛋白，作为一种高效骨诱导物质，BMPs是间充质细胞向骨系细胞分化的最初信号分予，能诱导血管周围游动的间充质细胞转化为不可逆性的骨系细胞，即软骨细胞和成骨细胞，从而促进骨痂形成，诱导新骨形成，促进骨折修复；此外，BMPS还可调节细胞外基质成分的改变，并通过与TGF-β和FGF相互之间的协调作用更好地诱导新骨形成，使骨组织更成熟。TGF-β则是一组具有多种功能的蛋白多肽，对成骨细胞及成软骨细胞具有促进分化或降低分化的双重调节作用，与多种因子如细胞外基质和其他分化调节生长因子一起协同参与对细胞分化的调节；TGF-β可促进细胞外基质合成，可以直接刺激成纤维细胞外基质的合成，并对其新合成的基质降解有显著抑制作用；对于成骨细胞，TGF-β可促进其合成I型胶原、骨粘连素和骨折蛋白；同时，TGF-β对淋巴细胞和巨噬细胞的作用表明，它既能缓解炎性反应的破坏性，又能协助巨噬细胞来源的某些细胞因子在组织修复中发挥作用。FGF是一组肝素黏合多肽，可刺激细胞的趋向移动、增殖和分化，增加合成胶原细胞的数量，促进骨胶原蛋白及非胶原蛋白的合成，增加骨钙素的合成。
甜瓜籽提取物的作用甜瓜籽提取物是从葫芦科植物甜瓜(CucumismeloL.)的成熟干燥的种子经特殊工艺提取而成的，能降低骨折局部毛细血管通透性，减少炎性渗出，促进局部血运障碍的恢复；同时还能降低全血黏度及细胞聚集程度，改善骨痂局部的血液循环，为骨细胞提供一个良好的血供环境，另外还能抑制前列腺素的释放，达到止痛效果；在促进骨折早期愈合中，甜瓜籽提取物与补充的多肽类骨代谢因子具有协同作用，促进骨源性生长因子的合成。
其他成分的作用骨瓜提取物注射液富含的多种游离氨基酸，为骨细胞合成BMPs、TGF-β、FGF等骨源性生物因子提供原料，促进骨源性生物因子的合成。有机钙、磷因子可参与钙磷代谢，维持骨容量。
发明内容
发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种治疗骨科疾病的注射用组合物，原料包括以下成分：猪四肢骨提取液和甜瓜籽提取物溶液。
猪后胫骨(注释：猪后胫骨相当于人的小腿骨中的内侧的骨)与猪的前肢骨的多肽含量有所不同，猪四肢骨含有的多肽类成分的紫外吸收峰在240-250nm左右，而猪后胫骨提取液含有的多肽类成分的紫外吸收峰在258nm左右，而甜瓜籽提取物溶液的多肽类成分的紫外吸收峰也在258nm左右。
因此，本发明对治疗骨科疾病的注射用组合物的质量标准要求中的多肽的紫外吸收峰确定为258nm，且在两种溶液合并成药的前后，均对258nm进行监控，加强药物制备的过程监控，保证了药品的安全和有效性，提高了药品指控的目的性和准确性。
尤其值得关注的是，本发明原料中优选采用猪后胫骨，其提取液含有的多肽类成分的紫外吸收峰在258nm左右，普通猪四肢骨含有的多肽类成分的紫外吸收峰在240-250nm左右。实验证明，采用猪后胫骨作为药品原料，能够更好地发挥治疗效果。且通过制备过程中，分别对甜瓜籽提取物溶液和猪后胫骨提取液的多肽类成分在紫外258nm进行监控，前置药品标准监控环节，提高了药品标准，更加有效地保证了药品的有效性和安全性。
治疗骨科疾病的注射用组合物是复方制剂，其组份为新鲜或冷冻的猪四肢骨和甜瓜的成熟干燥种子，经分别提取制成的灭菌水溶液。主要含有多肽类骨代谢因子、甜瓜籽提取物、多种游离氨基酸以及有机钙、无机钙、无机盐及微量元素。
本发明的治疗骨病的治疗骨科疾病的注射用组合物，原料包括以下成分：猪四肢骨的提取液10-100重量份，甜瓜籽的提取液10-30重量份。
本发明的治疗骨科疾病的注射用组合物，其中，原料含有如下辅料：
缓冲液，选自：磷酸盐缓冲液或甘氨酸-HCl缓冲溶液 1-10重量份
pH调节剂，选自：碳酸氢钠，碳酸钠或醋酸钠 1-4重量份
稳定剂、选自：乙二胺四乙酸二钠，甘露糖醇，乳糖 0.05-5重量份。
本发明治疗骨科疾病的注射用组合物，按照如下方法制备：
(1)猪骨提取液的制备：
检疫合格的猪的四肢骨，剪去残肉，断开去脂，粉碎，按照骨渣1∶2量纯化水，120℃热压2小时，过滤，沉渣同法再次提取2次，合并滤液，2-8℃，冷藏24小时，离心15分钟，脱脂，上清液，用超滤器超滤，浓缩原体积1/4，调节PH5.9-6.3，
超滤，收集滤液，得到猪骨提取液，备用；
(2)甜瓜籽提取物溶液的制备：
漂洗2-3次，漂洗净的甜瓜籽1∶2量纯化水，120℃热压2小时，过滤，沉渣同法再次提取2次，合并滤液，2-8度，冷藏24小时，离心15分钟，脱脂，上清液，用超滤器超滤，浓缩原体积1/4，调节PH5.9-6.3，超滤，收集滤液，得到甜瓜籽提取物溶液；
(3)将猪骨提取液、甜瓜籽提取物溶液混合，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
本发明的治疗骨科疾病的注射用组合物，还可以按照如下方法制备：
(1)猪骨提取液的制备：
采集检疫合格的猪的四肢骨，保持新鲜或于-20℃条件下冷冻保存。
取四肢骨，用剪刀剪去残肉，断开去脂，无菌水冲洗，控去水分，置粉碎机中粉碎。
骨渣置加热锅中，按1∶1量加无菌水，121℃热压60分钟，2～3层纱布过滤，沉渣同法再次提取2次，合并三次滤液。低温静置，脱脂。
向溶液中加入乙醇使醇浓度达到80％，调节pH值为4.5～5.0，低温静置24小时，过滤，药液再次加乙醇沉淀2次，加热回收乙醇，调节pH值至6.5～7.1。
药液浓缩，用超滤器超滤，膜相对分子量优选为1×104。121℃灭菌30分钟。
(2)甜瓜籽提取物溶液
取干燥成熟甜瓜种子，置粉碎机中粉碎。
粉碎物置加热锅中，按1∶1量加无菌水，121℃热压30分钟，2～3层纱布过滤，沉渣同法再次提取2次，合并三次滤液。
向滤液中加入乙醇使醇浓度达到80％，调节pH值为4.5～5.0，低温静置24小时，过滤，药液再次加乙醇沉淀2次，加热回收乙醇，调节pH值至6.5～7.1。
药液浓缩，用超滤器超滤，膜相对分子量优选为1×104。121℃灭菌30分钟。质控要求：按甜瓜籽提取物溶液质控要求进行检查，应符合规定。
治疗骨科疾病的注射用组合物生产工艺：将检测合格的骨提取物溶液和甜瓜籽提取物溶液混合，加注射用水稀释，优选至80％处方量，调节pH值，pH优选为6.0～6.5，补充注射用水至全量，测定半成品含量，灌装于安瓿中，优选为2、5、10ml，熔封，121℃灭菌30分钟。灯检。取样全检。合格品包装。
治疗骨科疾病的注射用组合物优选生产工艺：将猪骨提取液、甜瓜籽提取物溶液混合，加入本发明的辅料，加注射用水稀释，优选至80％处方量，调节pH值，pH优选为6.0～6.5，补充注射用水至全量，测定半成品含量，灌装于安瓿中，优选为2、5、10ml，熔封，121℃灭菌30分钟。灯检。取样全检。合格品包装。
新生猪四肢骨的原料标准：所选用原料是优选健康新生猪(出生12个月内)四肢骨，应根据下列原料的质量标准选取和处理。原料来源于猪科、猪属、猪种的新生猪。健康新生猪由动脉放血处死后立即取出四肢骨，整个过程于1小时内完成。健康新生猪四肢骨，处着附肉，呈鲜红色，骨质洁白，无腐臭，骨端软，骨质丰满，骨端较大，骨长适度(20～40cm)。四肢骨用洁净塑料袋包装，-18℃冷冻保存，备用。使用期限为一年。
检查：
布鲁氏杆菌虎红平板凝集试验在阴、阳性血清对照成立的条件下，受检血清不得出现阳性反应。
轮状病毒酶联免疫吸附试验(ELISA)在阴、阳性血清对照成立的条件下，受检血清不得出现阳性反应。
口蹄疫液相阻断-酶联免疫吸附试验对照组成立的条件下受检血清不得出现阳性反应。
流行性乙型脑炎血凝抑制试验对照组成立的条件下受检血清不得有流行性乙型脑炎污染。
伪狂犬病胶乳凝集试验对照组成立的条件下受检血清不得出现阳性反应。
猪瘟过氧化物酶联中和试验受检血清不得出现阳性反应。
所选用原料优选采用健康新生猪(出生12个月内)，优选猪后胫骨，优选健康新生猪的后胫骨。
后胫骨经过提取所得猪骨提取液，其紫外特征吸收峰为258nm。
甜瓜籽的原料标准：本品为葫芦科植物甜瓜CucumismeloL.的干燥成熟种子。性状：本品呈扁平长卵形，长5～7mm，宽2～4mm。表面黄色或浅棕红色，平滑，微有光泽，一端稍尖，另端钝圆。种皮较硬而脆，内有膜质胚乳及子叶2片。气微，味淡。
鉴别：(1)取本品粉末5g，加水50ml，加热30分钟，滤过，取滤液2ml，加双缩脲试剂(取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠3.0g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10％氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml)4ml，室温放置15分钟，溶液应显蓝紫色至紫红色。贮藏：置干燥处，防蛀。
本发明所得的甜瓜籽提取物溶液，其紫外特征吸收峰为258nm。
将甜瓜籽提取物溶液和猪骨提取液合并而成的本发明的治疗骨科疾病的注射用组合物，其多肽的紫外吸收峰优选为258nm。
上述的治疗骨科疾病的注射用组合物，可以制成注射液、大输液和粉针。
治疗骨科疾病的注射用组合物的制药用途：在制备治疗骨科疾病的药物中的应用。在制备治疗增生性骨关节、骨关节炎疾病风湿、类风湿性关节炎、促进骨折的早期愈合、治疗创伤、恢复、调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，以及调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防治骨质疏松、抗炎、镇痛，股骨头缺血性坏死的药物中的应用。
本发明的猪骨提取液质量标准
本品由新鲜或冷冻的猪四肢骨骼提取制备，每1ml中含多肽类物质以牛血清白蛋白计，不得低于15.0mg。
性状本品为黄色的澄明液体。
鉴别取本品0.5ml，加双缩脲试剂(取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠3.0g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10％氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml)4ml，室温放置15分钟，溶液显紫红色。
检查
pH值应为6.5～7.1(中国药典2005年版二部附录VI H)。
蛋白质取本品1ml，加磺基水杨酸溶液(3→10)3ml，不得发生浑浊。
高分子量物质取本品适量，加水制成每1ml中含多肽1mg的溶液，作为供试品溶液；另取细胞色素C注射液适量，加水制成每1ml中含5mg的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。采用凝胶色谱柱(如TSKgelG2000SW，PROTEN PAK60)；以磷酸氢二钾13.93g、磷酸二氢钾5.32g，加异丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH值至7.0为流动相；流速为每分钟0.8ml，检测波长为280nm。对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中，各峰的保留时间均应大于对照溶液主峰的保留时间。
异常毒性取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含多肽5mg的溶液，依法检查(中国药典2005年版二部附录XIC)，按静脉注射给药，应符合规定。
热原取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI D)，剂量按家兔体重每1kg注射0.3ml，应符合规定。
过敏试验取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含多肽5mg的溶液，取
体重250～350g的健康合格豚鼠6只，连续3次隔日腹腔注射0.5ml，14天后，再自静脉注射2ml，注射后15分钟内，均不得出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难、干呕、咳嗽三声等现象中出现两种或两种以上者，或有啰音、搐抽、虚脱或死亡现象之一者，应判为阳性。
降压物质取本品，加0.9％氯化钠注射液制成每1ml中含多肽5mg的溶液，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI G)，应符合规定。
无菌取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI H)，应符合规定。
含量测定精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照福林酚测定法(见附件一)测定。
贮藏-20℃冷冻
本发明的甜瓜籽提取液质量标准
本品由葫芦科植物甜瓜Cucumis melo L.的干燥成熟种子提取制备，每1ml中含多肽类物质以牛血清白蛋白计，不得低于15.0mg。
性状本品为黄色的澄明液体。
鉴别
(1)取本品0.5ml，加双缩脲试剂(取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠3.0g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10％氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml)4ml，室温放置15分钟，溶液显紫红色。
(2)取本品0.3ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IV)测定，在258nm的波长处有最大吸收。
检查pH值应为6.5～7.1(中国药典2005年版二部附录VI H)。
蛋白质取本品1ml，加磺基水杨酸溶液(3→10)3ml，不得发生浑浊。
高分子量物质取本品适量，加水制成每1ml中含多肽1mg的溶液，作为供试品溶液；另取细胞色素C注射液适量，加水制成每1ml中含5mg的溶液，作为对照溶液。照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)测定。采用凝胶色谱柱(如TSKgelG2000SW，PROTEN PAK60)；以磷酸氢二钾13.93g、磷酸二氢钾5.32g，加异丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH值至7.0为流动相；流速为每分钟0.8ml，检测波长为280nm。对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中，各峰的保留时间均应大于对照溶液主峰的保留时间。
异常毒性取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含多肽5mg的溶液，依法检查(中国药典2005年版二部附录XIC)，按静脉注射给药，应符合规定。
热原取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI D)，剂量按家兔体重每1kg注射0.3ml，应符合规定。
过敏试验取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含多肽5mg的溶液，取体重250～350g的健康合格豚鼠6只，连续3次隔日腹腔注射0.5ml，14天后，再自静脉注射2ml，注射后15分钟内，均不得出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难、干呕、咳嗽三声等现象中出现两种或两种以上者，或有啰音、搐抽、虚脱或死亡现象之一者，应判为阳性。
降压物质取本品，加0.9％氯化钠注射液制成每1ml中含多肽5mg的溶液，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI G)，应符合规定。
无菌取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI H)，应符合规定。
含量测定精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照福林酚测定法测定。
贮藏-20℃冷冻保存。
本发明治疗骨科疾病的注射液的质量标准
本品为新鲜或冷冻的猪四肢骨骼和葫芦科植物甜瓜CucumismeloL.的干燥成熟种子，经单独提取后制成的灭菌水溶液。每1ml中含多肽类物质以牛血清白蛋白计，不得低于5.0mg。性状本品为微黄色至淡黄色的澄明液体。
鉴别：
(1)取本品2ml，加双缩脲试剂(取硫酸铜0.75g和酒石酸钾钠3.0g，加水250ml使溶解，在搅拌下加入10％氢氧化钠溶液150ml，加水至500ml)4ml，室温放置15分钟，溶液显紫红色。
(2)取本品1ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录IVA)测定，在258nm的波长处有最大吸收。
检查pH值应为5.5～7.0(中国药典2005年版二部附录VIH)。
蛋白质取本品1ml，加磺基水杨酸溶液(3→10)3ml，不得发生浑浊。
异常毒性取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XIC)，按静脉注射给药，应符合规定。
热原取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XID)，剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。
过敏试验取体重250～350g的健康合格豚鼠6只，连续3次隔日腹腔注射本品0.5ml，14天后，再自静脉注射本品2ml，注射后15分钟内，均不得出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难、干呕、咳嗽三声等现象中出现两种或两种以上者，或有啰音、搐抽、虚脱或死亡现象之一者，应判为阳性。
降压物质取本品，依法检查(中国药典2005年版二部附录XIG)，应符合规定。
其他应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版二部附录I B)。
含量测定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照福林酚测定法(见附件一)测定。
类别消炎镇痛药。
规格(1)5ml:25mg(2)10ml:50mg
贮藏密闭，25℃以下保存。
有效期18个月
本发明制备的治疗骨科疾病的注射用组合物与原骨瓜提取物注射液相比，有以下优势：药材的利用率高，成本少，活性成分高、疗效确切、安全性好。本发明治疗骨科疾病的注射用组合物，采用超滤技术，多肽含量达到50-100mg，鹿瓜多肽注射液中多肽含量是16-24mg，每日用量中骨瓜中多肽含量是鹿瓜多肽的3-5倍，而多肽含量的多少与临床疗效是正相关的，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物的疗效要明显优于鹿瓜多肽。
稳定性高，本品经过24个月的稳定性试验研究，结果表明本品稳定性良好。
质量可控，猪后胫骨(注释：猪后胫骨相当于人的小腿骨中的内侧的骨)与猪的其它四肢骨的多肽含量有所不同，猪四肢骨含有的多肽类成分的紫外吸收峰在240-250nm左右，而猪后胫骨含有的多肽类成分的紫外吸收峰在258nm左右，因此，本发明对治疗骨科疾病的注射用组合物的质量标准要求中的多肽的紫外吸收峰确定为258nm，增强了药品的安全性，提高了药品指控的目的性和准确性。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例1
(1)猪骨提取液的制备：
检疫合格的猪的四肢骨，剪去残肉，断开去脂，粉碎，按照骨渣1∶2量纯化水，120℃热压2小时，过滤，沉渣同法再次提取2次，合并滤液，5摄氏度，冷藏24小时，离心15分钟，脱脂，上清液，用超滤器超滤，浓缩原体积1/4，调节PH6.0，超滤，收集滤液，得到猪骨提取液，备用；紫外吸收峰为240-250nm。
(2)甜瓜籽提取物溶液的制备：
漂洗2-3次，按照洗净的甜瓜籽1∶2量纯化水，120℃热压2小时，过滤，沉渣同法再次提取2次，合并滤液，5摄氏度，冷藏24小时，离心15分钟，脱脂，上清液，用超滤器超滤，浓缩原体积1/4，调节PH6.0，超滤，收集滤液，得到甜瓜籽提取物溶液；紫外特征吸收峰为258nm。
(3)将50重量份猪骨提取液、10重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀释，加入碳酸氢钠适量，调节pH值为6.2，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
实施例2
在实施例1的基础上：将50重量份猪骨提取液、10重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀释，加入5重量份磷酸盐缓冲液，加入碳酸氢钠1重量份，加入乙二胺四乙酸二钠0.1重量份，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
实施例3
在实施例1的基础上：将50重量份猪骨提取液、10重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀释，加入5重量份甘氨酸-HCl缓冲溶液，加入醋酸钠2重量份，加入甘露糖醇0.2重量份，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
实施例4
(1)猪骨提取液的制备：
采集检疫合格的猪后胫骨(猪后胫骨相当于人的小腿骨中的内侧的骨)，保持新鲜或于-20℃条件下冷冻保存，取猪后胫骨，用剪刀剪去残肉，断开去脂，无菌水冲洗，控去水分，置粉碎机中粉碎，骨渣置加热锅中，按1∶1量加无菌水，121℃热压60分钟，3层纱布过滤，沉渣同法再次提取2次，合并三次滤液，低温静置，脱脂，向溶液中加入乙醇使醇浓度达到80％，调节pH值为4.8，低温静置24小时，过滤，药液再次加乙醇沉淀2次，加热回收乙醇，调节pH值至6.8，药液浓缩，用超滤器超滤，膜相对分子量为1×104，121℃灭菌30分钟。
质控要求：按说明书所述“本发明的猪骨提取液质量标准”质控要求进行检查，应符合规定，紫外特征吸收峰为258nm。
(2)甜瓜籽提取物溶液
取干燥成熟甜瓜种子，置粉碎机中粉碎，粉碎物置加热锅中，按1∶1量加无菌水，121℃热压30分钟，2～3层纱布过滤，沉渣同法再次提取2次，合并三次滤液，向滤液中加入乙醇使醇浓度达到80％，调节pH值为4.8，低温静置24小时，过滤，药液再次加乙醇沉淀2次，加热回收乙醇，调节pH值至6.8，药液浓缩，用超滤器超滤，膜相对分子量为1×104，121℃灭菌30分钟，
质控要求：按说明书所述“本发明的甜瓜籽提取液质量标准”质控要求进行检查，应符合规定，紫外特征吸收峰为258nm。
(3)合并：
将50重量份猪骨提取液、20重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀释，加入碳酸氢钠适量，调节pH值为6.2，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
质控要求：按说明书所述“治疗骨科疾病的注射液的质量标准”质控要求进行检查，应符合规定，紫外特征吸收峰为258nm。
实施例5
在实施例4的基础上：将50重量份猪骨提取液、20重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀释，加入5重量份磷酸盐缓冲液，加入碳酸氢钠1重量份，加入甘露糖醇0.1重量份，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
质控要求：同实施例4
实施例6
在实施例4的基础上：将50重量份猪骨提取液、20重量份甜瓜籽提取物溶液混合，加20重量份注射用水稀释，加入5重量份甘氨酸-HCl缓冲溶液，加入醋酸钠2重量份，加入乳糖0.5重量份，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
质控要求：同实施例4
实施例7：本发明治疗骨科疾病的注射用组合物的临床验证
本发明制剂治疗骨性关节炎的效果
方法：70例骨性关节炎患者(符合骨性关节炎诊断标准)随机分为7组。
本发明第1组，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物1
本发明第2组，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物2
本发明第3组，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物3
本发明第4组，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物4
本发明第5组，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物5
本发明第6组，本发明治疗骨科疾病的注射用组合物6
本发明第1-6组，每例患者用治疗骨科疾病的注射用组合物连续7天治疗，每天12mg静脉滴注。
对照组，用钙片和维生素D治疗，疗程7天，
疗效评价标准：
疼痛观察指标用视觉比量表(VAS)表示。
压痛、肿胀、功能障碍观察，每天评价1次。具体计分方法按内容计分。
显效：肿胀及压痛明显减轻，关节活动改善明显，治疗后总计分下降≥2/3；
有效：肿胀及压痛减轻，关节活动有明显，治疗后总计分下降≥1/3；
无效：症状无改善，治疗后总计分下降＜1/3。
统计学处理计量资料采用t检验，计数资料采用方差分析，等级资料用Ridit检验，所有资料用SPSS6.0处理。
压痛、肿胀、功能障碍计分标准：
| 程度 | 压痛 | 肿胀 | 功能障碍 | 结果 |
| 重度 | 拒按 | 严重、皮肤薄、亮 | 重度、关节功能受限 | 3 |
| 中度 | 按压后表情痛苦 | 中度、皮纹变少 | 中度、活动时疼痛 | 2 |
| 轻度 | 按压后疼痛 | 轻度、皮纹变浅 | 轻度、正常活动 | 1 |
| 无 | 无 | 无 | 无 | 0 |
结果：
| 效果 | 疼痛分数 | 疼痛分数 | 有效人数 | 显效人数 |
| 效期 | 治疗前 | 治疗后 | 治疗后 | 治疗后 |
| 本发明第1组 | 5.2±1.1 | 4.3±0.7 | 5 | 6 |
| 本发明第2组 | 5.4±1.2 | 4.7±0.5 | 6 | 6 |
| 本发明第3组 | 5.6±1.5 | 4.8±1.0 | 6 | 5 |
| 本发明第4组 | 5.7±1.3 | 4.6±1.4 | 8 | 7 |
| 本发明第5组 | 5.6±1.4 | 3.1±0.3 | 9 | 7 |
| 本发明第6组 | 5.2±1.1 | 3.4±1.0 | 9 | 8 |
| 对照组 | 5.8±1.0 | 5.2±0.7 | 5 | 3 |
本发明的药物能降低疼痛分数，能消肿，止痛，能调节骨代谢，安全性好，且整体而言，4-6组效果优于1-3组。
实施例8：本发明对骨折愈合的治疗作用
2005年8月份-2006年4月份分别采用，静滴本发明实施例4的治疗骨科疾病的注射用组合物，口服速效骨伤愈合剂治疗两组骨折患者，旨在观察治疗骨科疾病的注射用组合物，对骨折愈合的治疗作用。
一般资料84例均为骨科住院患者。随机分为2组。
对照组：41例，男26例，女15例；年龄(36±8)岁；包括股骨干骨折13例，胫腓骨骨折18例，肱骨骨折6例，尺桡骨骨折4例。
治疗组：43例，男28例，女17例；年龄(35±9)岁；包括股骨干骨折11例，胫腓骨骨折19例，肱骨骨折7例，尺桡骨骨折6例。两组具有可比性。
骨折诊断标准：有明确外伤史，均为新鲜骨折，3d内就诊；临床症状及体征：有疼痛，肿胀及功能障碍，局部有骨擦音，畸形活动；X线及三维CT重建显示，骨折线清晰，无骨痂形成。
治疗方法两组病例均行骨折复位内固定手术，术后对症及抗感染治疗、常规进行功能锻炼。在此基础上，治疗组应用实施例1组治疗骨科疾病的注射用组合物10mg溶入250mL生理盐水中，1次/d静滴；对照组口服速效骨伤愈合剂，20mL/次，3次/d口服，疗程均为2周。
疗效判断标准：骨折愈合标准，①骨折部位无疼痛，无反常活动，关节活动范围正常；②X线平片显示骨折线模糊，有连续骨痂通过骨折线；③接触外固定后，上肢向前伸持1kg重物大于1min，下肢不扶杖在平地连续行走3min，且不少于30步；④连续观察，2周后复查，一般活动骨无形变。
常见骨折愈合时间：肱骨外科颈骨折：4-6周；肱骨干骨折5-8周；肱骨髁上骨折3-4周；尺桡骨干骨折8-12周；桡骨远端骨折3-4周；股骨粗隆骨折6-10周；股骨干骨折8-14周；胫腓骨骨折8-12周。
疗效判断标准：
临床治愈：临床上用药时间比同类骨折愈合时间提前1/3以上，达到临床愈合标准者；
显效：临床用药时间比同类骨折愈合时间提前1/3-1/4，达到临床愈合标准者；
有效：临床上用药时间比同类骨折愈合时间提前1/4-1/5，达到临床愈合标准者；
无效：临床上用药时间与同类骨折正常愈合时间相同。
验证结果：
两种药物的疗效对比
| 组别(例) | 痊愈 | 显效 | 有效 | 无效 | 有效率(％) |
| 治疗组(43) | 19 | 15 | 6 | 3 | 93.02 |
| 对照组(41) | 8 | 13 | 3 | 17 | 78.24 |
治疗组治愈率93.02％，明显优于对照组(78.24％).结论治疗骨科疾病的注射用组合物对四肢骨折愈合有很好的疗效。
实施例9：本发明对股骨头缺血性坏死血液流变学的影响
股骨头缺血性坏死是临床难治疾病，由于股骨头缺血性坏死具有一个复杂的病理过程，如早期不能得到及时有效的治疗，就会使股骨头塌陷，关节间隙变窄，最后导致坏死性骨关节炎，使病人髋关节功能障碍而致残。所以股骨头坏死的治疗，目前仍是国内外医学界的一大难题。应用本发明实施例4的治疗骨科疾病的注射用组合物治疗168例股骨头缺血性坏死，并观察治疗前后血液流变学的变化。
一般资料：
治疗组168例患者中，男97例，女71例，年龄8-69岁，平均38岁；单侧病变113例(右侧56例，左侧57例)，双侧55例；病程2-36个月，平均10个月；85例有外伤史，48例有长期饮酒史或使用激素类药物史，35例无明显诱因。对照组35例，男22例，女13例，单侧病变15例，双侧病变20例。
两组在年龄、性别、病程病史等方面无显著性差异，具有可比性。临床表现为髋关节疼痛、大腿痛或膝关节痛，伴有不同程度的髋关节活动受限及跛行，患肢直腿抬高试验(+)。所有患者均经X线摄片、CT或MRI确诊为股骨头缺血性坏死。
治疗方法
治疗组在患肢静脉点滴治疗骨科疾病的注射用组合物(本发明实施例4)10mL(加入5％葡萄糖250mL中)。对照组单纯口服活血化瘀中药，一日一剂。15d为1疗程。血液流变学检测方法患者治疗前后空腹静脉抽血做血液流变学各项指标检测，采用北京世帝R80-A血液流变分析仪和日立7170A生化分析仪测定。
统计学方法实验数据用均数±标准差(x±s)表示采用SPSS10.0统计软件进行组间t检验。治疗前后血液流变学指标变化见表1。
表1治疗前后血液流变学指标的变化
注：*表示与治疗前比较，P＜0.05：#表示与对照组比较P＜0.05。
研究股骨头缺血性坏死治疗前后血液流变学指标的变化后发现：
对照组血浆粘度治疗后显著下降(P＜0.05)，表明单纯口服中药可降低血浆粘度；
治疗组高、低切全血粘度和红细胞聚集指数治疗后显著下降(P＜0.05)；
治疗组高切全血粘度和红细胞聚集指数比对照组也显著下降(P＜0.05)；
表明患肢静脉点滴本发明治疗骨科疾病的注射用组合物能有效扩张血管，改善微循环，减少红细胞聚集，能防止股骨头缺血性坏死。
实施例10：本发明药物注射液治疗绝经后妇女骨质疏松症
治疗绝经后妇女骨质疏松症：选择50岁以上，绝经5～10年的骨质疏松患者10例。静脉点滴治疗骨科疾病的注射用组合物(本发明实施例5)10mL(加入5％葡萄糖250mL中)，15d为1疗程。
其腰椎的骨密度低于正常绝经前妇女骨密度平均值两个标准差，腰痛持续时间3-8年。用药前及用药4周后，进行1次肝肾功能，血钙、磷、碱性磷酸酶，血沉，血常规，尿钙、磷、Ca/Cr检查。
采用双能X线吸收法测量腰椎的骨密度。有效：骨密度维持不变或上升；无效：患者的骨密度持续下降。结果显示：10例患者中有效9例，无效1例。
结论：本发明能用于治疗骨质疏松症、增加骨密度。
Claims (4)
1.一种治疗骨科疾病的注射用组合物，含有以下成分：猪四肢骨提取液10-100重量份和甜瓜籽提取物溶液10-30重量份，其特征在于以下方法制备：
(1)猪骨提取液的制备：
检疫合格的猪的四肢骨，剪去残肉，断开去脂，粉碎，按照骨渣1∶2量纯化水，120℃热压2小时，过滤，沉渣同法再次提取2次，合并滤液，2-8度，冷藏24小时，离心15分钟，脱脂，上清液，用超滤器超滤，浓缩原体积1/4，调节pH5.9-6.3，超滤，收集滤液，得到猪骨提取液，备用；
(2)甜瓜籽提取物溶液的制备：
漂洗2-3次，洗净的甜瓜籽1∶2量纯化水，120℃热压2小时，过滤，沉渣同法再次提取2次，合并滤液，2-8℃，冷藏24小时，离心15分钟，脱脂，上清液，用超滤器超滤，浓缩原体积1/4，调节pH5.9-6.3，超滤，收集滤液，得到甜瓜籽提取物溶液；
(3)将猪骨提取液、甜瓜籽提取物溶液混合，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
2.一种治疗骨科疾病的注射用组合物，含有以下成分：猪四肢骨提取液10-100重量份和甜瓜籽提取物溶液10-30重量份，其特征在于以下方法制备：
(1)猪骨提取液的制备：
采集检疫合格的猪的四肢骨，保持新鲜或于-20℃条件下冷冻保存，取四肢骨，用剪刀剪去残肉，断开去脂，无菌水冲洗，控去水分，置粉碎机中粉碎，骨渣置加热锅中，按1∶1量加无菌水，121℃热压60分钟，2～3层纱布过滤，沉渣同法再次提取2次，合并三次滤液，低温静置，脱脂，向溶液中加入乙醇使醇浓度达到80％，调节pH值为4.5～5.0，低温静置24小时，过滤，药液再次加乙醇沉淀2次，加热回收乙醇，调节pH值至6.5～7.1，药液浓缩，用超滤器超滤，121℃灭菌30分钟，
(2)甜瓜籽提取物溶液
取干燥成熟甜瓜种子，置粉碎机中粉碎，粉碎物置加热锅中，按1∶1量加无菌水，121℃热压30分钟，2～3层纱布过滤，沉渣同法再次提取2次，合并三次滤液，向滤液中加入乙醇使醇浓度达到80％，调节pH值为4.5～5.0，低温静置24小时，过滤，药液再次加乙醇沉淀2次，加热回收乙醇，调节pH值至6.5～7.1，药液浓缩，用超滤器超滤，121℃灭菌30分钟；
(3)将猪骨提取液、甜瓜籽提取物溶液混合，加注射用水稀释，121℃灭菌30分钟，灌装，检验，包装，得到成品。
3.根据权利要求1或2所述的治疗骨科疾病的注射用组合物，其特征在于辅料是：
缓冲液，选自：磷酸盐缓冲液或甘氨酸-HCl缓冲溶液 1-10重量份
pH调节剂，选自：碳酸氢钠，碳酸钠或醋酸钠 1-4重量份
稳定剂、选自：乙二胺四乙酸二钠，甘露糖醇，乳糖 0.05-5重量份。
4.权利要求1-3任意一项所述的治疗骨科疾病的注射用组合物在制备治疗增生性骨关节、骨关节炎疾病风湿、类风湿性关节炎、促进骨折的早期愈合、治疗创伤、恢复、调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成，调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，防治骨质疏松、抗炎、镇痛，股骨头缺血性坏死的药物中的应用。
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