CN115919950B

CN115919950B - 一种改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药及其制备方法

Info

Publication number: CN115919950B
Application number: CN202211645346.8A
Authority: CN
Inventors: 罗朵生; 郭姣
Original assignee: Guangdong Pharmaceutical University
Current assignee: Guangdong Pharmaceutical University
Priority date: 2022-12-16
Filing date: 2022-12-16
Publication date: 2024-01-30
Anticipated expiration: 2042-12-16
Also published as: CN115919950A

Abstract

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药及其制备方法。本发明要解决的技术问题是为动脉粥样硬化和骨质疏松症单病或合并患者提供一种新选择。本发明的技术方案是一种同时改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药，包括如下成分：熟地、锁阳、黄芪、杜仲、葛根、红花和三七。发明在临床经验的基础上，结合最新药理进展，组方中药复方，组方如下：熟地、锁阳、黄芪、杜仲、葛根、红花、三七，具有补肾强骨、活血化瘀之功效，可用于同时治疗骨质疏松症和动脉粥样硬化。

Description

一种改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药及其制备方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种同时改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药及其制备方法。

背景技术

骨质钙丢失而成骨不足，血管壁钙异位沉积而骨化增加，这两种相反的病理状态称为“钙化悖论”，Cell提出了“骨-血管轴”的概念。临床上骨质疏松症患者也常同时存在血管钙化，大量临床研究表明，主动脉钙化和骨质疏松之间存在显著的相关性。80％的血管损伤和90％的冠状动脉疾病患者伴有血管钙化，已经成为充血性心衰、心绞痛、心律失常、猝死的重要病因。因此，基于“骨-血管轴”对话深入揭示骨质疏松与血管钙化的分子病理机制，寻找安全、有效、兼具抗骨质疏松症和血管钙化的药物成为研究热点和难点。中医药在治疗上述复杂疾病具有特色和优势，因此，开发一种中药可以为上述疾病的治疗提供一种新选择。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为改善动脉粥样硬化和骨质疏松症单病或合并提供一种新选择。

本发明的技术方案是一种同时改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药，包括如下成分：熟地、锁阳、黄芪、杜仲、葛根、红花和三七。

进一步的，各成分用量如下：熟地9～15重量份、锁阳5～10重量份、黄芪10～20重量份、杜仲6～10重量份、葛根10～15重量份、红花5～10重量份和三七5～9重量份。

优选的，各成分用量如下：熟地15重量份、锁阳10重量份、黄芪10重量份、杜仲10重量份、葛根10重量份、红花6重量份和三七6重量份。

本发明还提供了所述中药的制备方法，包括如下步骤：称取熟地、锁阳、黄芪、杜仲、葛根、红花和三七，加10倍处方量的水加热至沸腾提取2小时；过滤，药渣加8倍处方量的水，加热至沸腾提取1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩成干浸膏，粉碎备用。

本发明的有益效果：本发明在临床经验的基础上，结合最新药理进展，组方中药复方，组方如下：熟地、锁阳、黄芪、杜仲、葛根、红花克、三七，具有补肾强骨、活血化瘀之功效，可用于同时治疗骨质疏松症和动脉粥样硬化。为了进一步评估其药理作用，建立ApoE^-/-去势小鼠模型，同时具备动脉粥样硬化和骨质疏松症特征。将骨质疏松症评价指标(血清生化指标、骨生物力学、骨形态计量学及骨微结构测定)和动脉粥样硬化评价指标(血清TC、TG、LDL-C和主动脉油红o染色、HE染色和Masson染色等)相结合，客观全面评价中药复方同时改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的药效。

附图说明

图1.各组主动脉油红O染色情况。

图2.各组主动脉瓣HE染色情况。

图3.各组主动脉瓣油红O染色情况。

图4.各组主动脉瓣Masson染色情况。

图5.各组小鼠主动脉瓣血管内膜钙化情况。

具体实施方式

实施例1本发明药物的制备

称取中药复方合适处方量(处方组成：熟地15克、锁阳10克、黄芪10克、杜仲10克、葛根10克、红花6克、三七6克)，提取2次，第一次加处方量10倍的水，加热至沸腾提取2小时；过滤，药渣加处方量8倍的水，加热至沸腾提取1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩成干浸膏，粉碎备用。

实施例2本发明药物的制备

称取中药复方合适处方量(处方组成：熟地9克、锁阳8克、黄芪15克、杜仲8克、葛根15克、红花10克、三七9克)，提取2次，第一次加处方量10倍的水，加热至沸腾提取2小时；过滤，药渣加处方量8倍的水，加热至沸腾提取1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩成干浸膏，粉碎备用。

实施例3本发明药物的制备

称取中药复方合适处方量(处方组成：熟地12克、锁阳5克、黄芪20克、杜仲6克、葛根10克、红花5克、三七5克)，将熟地、三七加8倍量50％乙醇，加热回流提取1.5小时，过滤，减压回收乙醇，得浓缩液；药渣与其他剩余药材一起，加处方量15倍的水，加热至沸腾提取2小时；过滤，将滤液与浓缩液合并混匀，减压浓缩成干浸膏，粉碎备用。

实施例4本发明药物的效果实验

选用7～8周雌性ApoE^-/-小鼠，体重18～22g(购自常州卡文斯实验动物中心)。将所有小鼠根据体重按随机数字表法随机分为空白对照组、模型组、复方低剂量组、复方高剂量组、辛伐他汀组、仙灵骨葆组。小鼠适应性喂养1周后，将ApoE^-/-小鼠适应性喂养一周后，0.3％的戊巴比妥钠腹腔麻醉，行腹部两侧距离腰椎旁1.5cm处纵行切口入腹，切除双侧卵巢，术后置于温暖环境，抗生素皮下注射3天，看护观察。实验全程给予高脂饮食(高脂饲料购买于Dyets公司，产品号为HFHC 100244)。12周建立动脉粥样硬化模型和骨质疏松症模型，随后给予药物干预。复方高剂量组(实施例1的复方)：1.86g生药/kg，低剂量组(实施例1的复方)0.93g生药/kg，辛伐他汀组：5mg·kg^-1·d^-1，仙灵骨葆组：0.43g·kg^-1·d^-1，空白对照组、模型组给与蒸馏水。给药时间为12周。

各组禁食不禁水12小时，取材，采用异氟烷麻醉，行摘眼球取血。取血后，使用生理盐水进行心脏灌流：将胸腔的皮肤和肋骨剪开，暴露出心脏和肝脏；将注射针头插入小鼠左心室，使用止血钳固定，同时将右心耳剪破，以使血液流出，灌流速度为1mL/min。灌流后，依次将心脏和主动脉取出。通过血脂四项的检测确定各组小鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平。

取小鼠的左右股骨、胫骨，剔除皮肤和肌肉。其中左侧股骨用0.9％生理盐水浸透的纱布包裹，于20℃保存。①采用试剂盒检测血清雌激素、CTX、PINP含量；②组织形态计量学测量采用Micro-CT检测股骨干骺端骨小梁微观结构变化情况，得到骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、相对骨小梁骨量(BV/TV，％)等骨组织形态计量学参数。③骨生物力学的测定：采用质构仪对小鼠股骨进行三点弯曲实验。从操纵工作站直接读出弹性载荷、弹性挠度、最大载荷和最大挠度等数据。

组织病理学检测：①油红O染色观察主动脉脂质沉积情况，制作主动脉冰冻切片，油红O染色，100倍显微镜下拍照。用Image-pro plus 6.0图片分析软件计算斑块面积均值。②Masson染色观察主动脉钙沉积情况制作主动脉石蜡切片，置入Masson染色染液于强阳光处照射，经苏木素染液复染、盐酸酒精分化、稀氨水溶液返蓝、脱水透明、封固等过程，光学显微镜下观察钙盐沉积及分布规律情况。③HE染色观察。

采用SPSS25.0进行分析，首先检验正态分布，然后使用单因素方差分析进行统计比较，P<0.05为有差异。数据以平均值±标准差(Mean±SD)的形式表示。

(一)中药复方改善动脉粥样硬化

各组小鼠体脂率见表1，可知与ApoE^-/-模型组相比，中药复方A高低剂量组和阳性药组体脂率显著降低。

表1.各组体脂率统计表(n＝10)

组别	体脂率(％)
		空白对照组(Control)	11.046±0.361
模型组(Model)	11.792±1.070
		复方低剂量组(A-L)	10.099±0.649^**
复方高剂量组(A-H)	10.125±0.907^**
		辛伐他汀组(Sim)	9.416±0.485^****

各组小鼠主动脉油红O染色结果见图1、2，表2，与空白对照组相比，ApoE^-/-模型组小鼠升主动脉、主动脉弓和腹主动脉脂质沉积显著，与ApoE^-/-模型组相比，中药复方A组和辛伐他汀组升主动脉、主动脉弓和腹主动脉脂质沉积显著降低(P<0.05)。

表2.各组主动脉油红O染色统计结果(n＝3)

(注：与空白组相比，P<0.0001****；与模型组相比，P<0.0001^####)

各组小鼠血脂情况见表3，与空白对照组相比，ApoE^-/-模型组小鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高；与ApoE^-/-模型组小鼠相比，中药复方A组和辛伐他汀组TC、TG、LDL-C水平显著降低。

表3.各组小鼠血清血脂四项水平(n＝10)

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001

与模型组相比，^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001，^####P<0.0001

各组小鼠主动脉根部HE染色结果(图2)显示，与空白对照组比较，模型组小鼠镜下可见内皮之下有大量泡沫细胞聚集于血管壁，有脂质蓄积形成的粥糜样斑块，中膜变薄，即主动脉壁可清晰观察到粥样沉积、纤维增生、内膜增厚等病变；给予复方和辛伐他汀后，上述病变情况减轻，复方和辛伐他汀效果显著。

各组小鼠主动脉根部油红O染色结果(图3)显示，与空白对照组相比，模型组鲜红色面积显著增加；与模型组相比，复方和辛伐他汀组鲜红色面积显著减少，表明脂质沉积显著减少。

各组小鼠主动脉根部Masson染色结果(图4)显示，与对照组相比，模型组胶原含量显著降低；与模型组相比，复方和辛伐他汀组胶原含量显著升高。

与Model组相比，复方高剂量组和辛伐他汀(Sim)组小鼠血清中TNF-α、IL-6、MCP-1、IL-1β、IL-18水平显著降低，IFN-γ水平显著上升(P<0.05)，说明复方具有抗炎作用(表4)。

表4.各组小鼠血清炎症因子水平(n＝9))

注：与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001

与模型组相比，^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001，^####P<0.0001

与Model组相比，复方高剂量组和辛伐他汀(Sim)组小鼠血清中ET-1水平显著降低，NO水平显著上升(P＜0.05)，说明复方具有改善内皮功能的作用。

表5.各组小鼠血清ET-1和NO水平(n＝9)

注：与ApoE^-/-组相比，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001

与Normal组相比，^#P<0.05，^##P<0.01，^###P<0.001，^####P<0.0001

Von Kossa染色显示(图5)，ApoE^-/-组可见明显的血管内膜钙沉积(黑色颗粒)，给予复方和辛伐他汀治疗后，血管钙化面积减少。

(二)中药复方改善骨质疏松症

结果显示(表6)，模型组小鼠的血清雌二醇水平较正常显著降低(p<0.05)。与模型组相比，复方组和仙

灵骨葆组治疗后雌二醇水平显著增高(p<0.05)。

表6.小鼠血清雌二醇水平(n＝6)

组别	血清雌二醇水平(ng/mL)	CTX(ng/mL)	PINP(μg/mL)
				正常组(Control)	33.26±2.05	11.62±2.8	0.12±0.02
模型组(Model)	18.79±4.60*	18.9±3.2*	0.25±0.03*
				仙灵骨葆(XLGB)	21.96±2.62^#	13.6±1.7^#	0.14±0.04^#
复方高剂量(A-H)	25.65±4.83^#	13.5±1.9^#	0.15±0.03^#
				复方低剂量(A-L)	21.05±1.62^#	12.3±2.1^#	0.17±0.02^#

注:与正常组相比，*p<0.05,**p<0.01；与模型组相比，^#p<0.05,^##p<0.01

对小鼠胫骨上段态计量学的影响(表7):与正常组相比，模型组小鼠的骨小梁的面积百分比显著减少(Tb.Ar)(P＜0.01)，骨小梁数目(Tb.N)明显降低(P＜0.01)，分离度明显增大(Tb.Sp)(P＜0.01)，表现出明显的骨质疏松症；与模型组相比，复方组小鼠的骨小梁面积百分比、骨小梁数目显著增加(P＜0.05)，骨小梁分离度显著降低(P＜0.05)，表明中药复方可有效改善骨质疏松症小鼠骨结构。

表7.小鼠PTM形态计量学(n＝6)

与正常组相比，*p<0.05,**p<0.01；与模型组相比，^#p<0.05,^##p<0.01

对小鼠骨微结构的影响(表8):采用Micro-CT测定大鼠右侧股骨近端及远端骨微结构变化，骨微结构参数结果表明，与正常对照相比，模型组小鼠骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数(Tb.N)、骨密度(BMD)均显著下降(P<0.01)，而骨小梁分离度(Tb.SP)、骨结构模型指数(SMI)均明显增加(P<0.05)；与模型组相比，复方组的BV/TV、Tb.Th和Th.N显著增加(P<0.05)，而Tb.SP、SMI均显著下降(P<0.05)。结果表明中药复方具有改善骨质疏松症的作用。

表8.小鼠股骨松质骨骨微结构参数(n＝6)

与正常组相比，*p<0.05,**p<0.01；与模型组相比，^#p<0.05,^##p<0.01

采用三点弯曲检测小鼠股骨干的生物力学参数。结果(表9)表明，与正常对照组相比，模型组小鼠的弹性载荷(Elastic load)、弯曲能量(Bending energy)、断裂载荷(Fracture loda)和刚性系数(Stiffiiess)均显著降低(P＜0.01)；与模型组相比，复方组小鼠的弯曲能量、断裂载荷和刚性系数均显著增加(P＜0.05)。结果提示，模型小鼠骨生物力学性能降低，而中药复方可在一定程度上逆转。

表9.小鼠股骨骨生物力学(n＝6)

与正常组相比，*p<0.05,**p<0.01；与模型组相比，^#p<0.05,^##p<0.01。

Claims

1.一种改善动脉粥样硬化和骨质疏松症的中药，其特征在于，由以下成分组成：熟地9～15重量份、锁阳5～10重量份、黄芪10～20重量份、杜仲6～10重量份、葛根10～15重量份、红花5～10重量份和三七5～9重量份。

2.如权利要求1所述中药，其特征在于，各成分用量如下：熟地15重量份、锁阳10重量份、黄芪10重量份、杜仲10重量份、葛根10重量份、红花6重量份和三七6重量份。

3.权利要求1或2所述中药的制备方法，包括如下步骤：称取熟地、锁阳、黄芪、杜仲、葛根、红花和三七，加10倍处方量的水加热至沸腾提取2小时；过滤，药渣加8倍处方量的水，加热至沸腾提取1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩成干浸膏，粉碎备用。