CN116671441A - 一种白及高效繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种白及高效繁育方法，留种株选择品种特性纯正、生长健壮的植株，在4‑5月份盛花期进行授粉，母本在授粉后立即摘除唇瓣；于10月～11月，选取3年生优良母株，采集饱满、无病虫害，果龄5个月以上，尚未开裂的成熟蒴果；进行常规消毒；均匀抖落在播种培养基上；待初代培养中的小苗长到2cm高后，将聚集的小苗切分成小芽丛或单个壮芽，再将小芽丛接种到新鲜的增殖培养基上继续培养；继代培养周期为40d～60d；待继代培养中的幼苗或丛生芽长到4cm～8cm时，将其切分成单芽后接种到生根壮苗培养基中，培养30d～40d后，幼苗可生根3条以上；炼苗移栽。本发明利用白及种子为外植体，采用组织培养技术进行繁育，具有繁育速度快，效率高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及植物的组织培养技术领域，尤其是涉及一种白及高效繁育方法。
背景技术
由于白及种子细小，无胚乳，发育不完全，在自然条件下很难萌发生长，种子直播的栽培管理要求较高，仅靠分株繁育，繁育效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种白及高效繁育方法，利用白及种子为外植体，采用组织培养技术进行繁育，具有繁育速度快，效率高等优点。
根据本发明的一个目的，本发明提供一种白及高效繁育方法，包括如下步骤：
S1，种子来源
留种株选择品种特性纯正、生长健壮的植株，在4-5月份盛花期进行授粉，母本在授粉后立即摘除唇瓣，及时挂牌标志；
S2，种子质量检测方法及分级
对种子进行质量检测并进行分级；
S3，培养基配方
播种培养基：1/2MS+NAA 0mg·L-1～0.5mg·L-1，附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8；
增殖培养基：MS+6-BA 0.5mg·L-1～1.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1～0.5mg·L-1；附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8；
生根培养基：1/2MS+NAA 0.1mg·L-1～0.5mg·L-1+香蕉泥40g·L-1～80g·L-1+土豆泥40g·L-1～80g·L-1+活性炭2g·L-1；附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8；
S4，外植体的采集与消毒
S4.1外植体的采集
于10月～11月，选择连续3d以上的晴天，选取3年生优良母株，采集饱满、无病虫害，果龄5个月以上，尚未开裂的成熟蒴果；
S4.2外植体消毒
采用酒精、次氯酸钠或氯化汞等对白及蒴果进行常规消毒；
S5，播种培养
用消过毒的手术刀切开消毒后备用的蒴果顶部，用无菌镊子将种子均匀抖落在播种培养基上，立即盖上瓶盖，做好标记后，移至培养室进行培养；
S6，增殖培养
待初代培养中的小苗长到约2cm高后，在无菌的接种器皿中，将聚集的小苗切分成小芽丛或单个壮芽，再将小芽丛接种到新鲜的增殖培养基上继续培养；继代培养周期为40d～60d；
S7，生根壮苗培养
待继代培养中的幼苗或丛生芽长到约4cm～8cm时，将其切分成单芽后接种到生根壮苗培养基中，培养30d～40d后，幼苗可生根3条以上；
S8，炼苗移栽
S8.1炼苗
生根壮苗培养后，初步形成假鳞茎和根系，叶片数≥2片的组培苗即可进入炼苗；
S8.2移栽
移栽苗标准：组培苗炼苗20d～40d后，假鳞茎直径≥3mm，株高≥6cm，根≥3条，叶片数≥2片，叶色浓绿，植株生长健壮的苗即可移栽至基质中驯化；
移栽季节：移栽应避开寒冷的11月至次年2月，选择风小、阳光弱的天气或时段进行；
移栽步骤：小心从培养瓶中轻轻取出试管苗，清水洗去粘附于苗上的培养基，用500倍的50％多菌灵或75％百菌清浸泡5min，晾至根系发白，即可植入疏松、保水、透气的基质中驯化；
S8.3移栽后管理
光照强度不超过20000lx，温度10℃～30℃，湿度65％～90％；新根萌动后可喷施叶面肥，氮、磷、钾比例分别为30﹕10﹕10和20﹕20﹕20的两种叶面肥1000倍液交替喷施，每7d～10d一次。同时做好红蜘蛛、蜗牛等病虫害防治；
S9，出圃标准
植入基质后假鳞茎直径≥6mm，株高≥9cm，根≥5条，叶片≥2片，茎粗≥1.0mm，植株生长健壮的苗即可出圃。
进一步地，S4.1中，采集后的蒴果自然阴干后，装于透气的容器中，置于通风、凉爽、干燥的环境中保存，保存时间不超过12个月为宜；或者置于4±1℃冰箱中保存，其保存时间不超过24个月。
进一步地，S4.2中，将蒴果用75％的乙醇浸泡30s后，用无菌水冲洗3次；用0.1％氯化汞消毒液浸泡材料10min后，用无菌水冲洗3～5次，并用无菌滤纸将蒴果上的水分吸干备用。
进一步地，S5中，培养条件为：温度为(28±2)℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h～16h/d；培养10d后种子开始萌发，20d～30d后肉眼可见一片小叶片，50d～70d后芽可长至1～2cm高；初代培养阶段，污染率应低于30％。
进一步地，S6中，每个培养瓶中接种小芽丛或单芽的数量为15～20株，并分布均匀；继代培养的温度、光照强度和光照时间同播种培养。
进一步地，S7中，生根壮苗培养的温度、光照强度和光照时间同播种培养。
进一步地，S8.1中，将组培苗连同容器一起移至与栽培环境相近的环境中，透光率50％～70％，温度10℃～30℃，自然光照炼苗20d～40d，以使组培苗适应自然光照和昼夜温差。
有益效果
本发明利用白及种子为外植体，采用组织培养技术进行繁育，具有繁育速度快，效率高等优点。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语"中心"、"纵向"、"横向"、"长度"、"宽度"、"厚度"、"上"、"下"、"前"、"后"、"左"、"右"、"竖直"、"水平"、"顶"、"底"、"内"、"外"、"顺时针"、"逆时针"等指示的方位或位置关系仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，术语"第一"、"第二"仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有"第一"、"第二"的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个所述特征。在本发明的描述中，"多个"的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。此外，术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体的连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
实施例1
一种白及高效繁育方法，包括如下步骤：
1种子来源
用于白及组织培养的种子母株原植物应符合《中国植物志》收载的白及的植物特征和基源(Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.)，经过鉴定确认。留种株应选择品种特性纯正、生长健壮的植株，在4-5月份盛花期进行授粉，母本在授粉后立即摘除唇瓣，及时挂牌标志。
2种子质量检测及分级
对种子进行质量检测并进行分级。
3培养基配方
以下培养基为推荐配方，均附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8。
播种培养基：1/2MS+NAA 0mg·L-1～0.5mg·L-1。
增殖培养基：MS+6-BA 0.5mg·L-1～1.5mg·L-1+NAA
0.1mg·L-1～0.5mg·L-1。
生根培养基：1/2MS+NAA 0.1mg·L-1～0.5mg·L-1+香蕉泥40g·L-1～80g·L-1+土豆泥40g·L-1～80g·L-1+活性炭2g·L-1。
4外植体的采集与消毒
4.1外植体的采集
于10月～11月，选择连续3d以上的晴天，选取3年生优良母株，采集饱满、无病虫害，果龄5个月以上，尚未开裂的成熟蒴果。采集后的蒴果自然阴干后，装于透气的容器中，置于通风、凉爽、干燥的环境中保存，保存时间不超过12个月为宜。也可置于(4±1)℃冰箱中保存，其保存时间不超过24个月。
4.2外植体消毒
可采用酒精、次氯酸钠或氯化汞等对白及蒴果进行常规消毒。将蒴果用75％的乙醇浸泡30s后，用无菌水冲洗3次。用0.1％氯化汞消毒液浸泡材料10min后，用无菌水冲洗3～5次，并用无菌滤纸将蒴果上的水分吸干备用。
5播种培养
用消过毒的手术刀切开消毒后备用的蒴果顶部，用无菌镊子将种子均匀抖落在播种培养基上，立即盖上瓶盖，做好标记后，移至培养室进行培养。培养条件为：温度为(28±2)℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h～16h/d。培养10d后种子开始萌发，20d～30d后肉眼可见一片小叶片，50d～70d后芽可长至1～2cm高。初代培养阶段，污染率应低于30％。
6增殖培养
待初代培养中的小苗长到约2cm高后，在无菌的接种器皿中，将聚集的小苗切分成小芽丛或单个壮芽，再将小芽丛接种到新鲜的增殖培养基上继续培养。每个培养瓶中接种小芽丛或单芽的数量为15～20株，并分布均匀。
继代培养周期为40d～60d。继代培养的温度、光照强度和光照时间同播种培养。
7生根壮苗培养
待继代培养中的幼苗或丛生芽长到约4cm～8cm时，将其切分成单芽后接种到生根壮苗培养基中，培养30d～40d后，幼苗可生根3条以上。
生根壮苗培养的温度、光照强度和光照时间同播种培养。
8炼苗移栽
8.1炼苗
生根壮苗培养后，初步形成假鳞茎和根系，叶片数≥2片的组培苗即可进入炼苗。将组培苗连同容器一起移至与栽培环境相近的环境中，透光率50％～70％，温度10℃～30℃，自然光照炼苗20d～40d，以使组培苗适应自然光照和昼夜温差。
8.2移栽
移栽苗标准：组培苗炼苗20d～40d后，假鳞茎直径≥3mm，株高≥6cm，根≥3条，叶片数≥2片，叶色浓绿，植株生长健壮的苗即可移栽至基质中驯化。
移栽季节：移栽应避开寒冷的11月至次年2月，选择风小、阳光弱的天气或时段进行。
移栽步骤：小心从培养瓶中轻轻取出试管苗，清水洗去粘附于苗上的培养基，用500倍的50％多菌灵或75％百菌清浸泡5min，晾至根系发白，即可植入疏松、保水、透气的基质中驯化。
8.3移栽后管理
光照强度不超过20000lx，温度10℃～30℃，湿度65％～90％。新根萌动后可喷施叶面肥，氮、磷、钾比例分别为30﹕10﹕10和20﹕20﹕20的两种叶面肥1000倍液交替喷施，每7d～10d一次。同时做好红蜘蛛、蜗牛等病虫害防治。
9出圃标准
植入基质后假鳞茎直径≥6mm，株高≥9cm，根≥5条，叶片≥2片，茎粗≥1.0mm，植株生长健壮的苗即可出圃。
本发明利用白及种子为外植体，采用组织培养技术进行繁育，具有繁育速度快，效率高等优点。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (7)
1.一种白及高效繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，种子来源
留种株选择品种特性纯正、生长健壮的植株，在4-5月份盛花期进行授粉，母本在授粉后立即摘除唇瓣，及时挂牌标志；
S2，种子质量检测方法及分级
对种子进行质量检测并进行分级；
S3，培养基配方
播种培养基：1/2MS+NAA0mg·L-1～0.5mg·L-1，附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8；
增殖培养基：MS+6-BA0.5mg·L-1～1.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1～0.5mg·L-1；附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8；
生根培养基：1/2MS+NAA0.1mg·L-1～0.5mg·L-1+香蕉泥40g·L-1～80g·L-1+土豆泥40g·L-1～80g·L-1+活性炭2g·L-1；附加蔗糖30g·L-1，琼脂粉7g·L-1，pH值为5.8；
S4，外植体的采集与消毒
S4.1外植体的采集
于10月～11月，选择连续3d以上的晴天，选取3年生优良母株，采集饱满、无病虫害，果龄5个月以上，尚未开裂的成熟蒴果；
S4.2外植体消毒
采用酒精、次氯酸钠或氯化汞等对白及蒴果进行常规消毒；
S5，播种培养
用消过毒的手术刀切开消毒后备用的蒴果顶部，用无菌镊子将种子均匀抖落在播种培养基上，立即盖上瓶盖，做好标记后，移至培养室进行培养；
S6，增殖培养
待初代培养中的小苗长到2cm高后，在无菌的接种器皿中，将聚集的小苗切分成小芽丛或单个壮芽，再将小芽丛接种到新鲜的增殖培养基上继续培养；继代培养周期为40d～60d；
S7，生根壮苗培养
待继代培养中的幼苗或丛生芽长到4cm～8cm时，将其切分成单芽后接种到生根壮苗培养基中，培养30d～40d后，幼苗生根3条以上；
S8，炼苗移栽
S8.1炼苗
生根壮苗培养后，初步形成假鳞茎和根系，叶片数≥2片的组培苗即可进入炼苗；
S8.2移栽
移栽苗标准：组培苗炼苗20d～40d后，假鳞茎直径≥3mm，株高≥6cm，根≥3条，叶片数≥2片，叶色浓绿，植株生长健壮的苗即可移栽至基质中驯化；
移栽季节：移栽应避开寒冷的11月至次年2月，选择风小、阳光弱的天气或时段进行；
移栽步骤：小心从培养瓶中轻轻取出试管苗，清水洗去粘附于苗上的培养基，用500倍的50％多菌灵或75％百菌清浸泡5min，晾至根系发白，即可植入疏松、保水、透气的基质中驯化；
S8.3移栽后管理
光照强度不超过20000lx，温度10℃～30℃，湿度65％～90％；新根萌动后可喷施叶面肥，氮、磷、钾比例分别为30﹕10﹕10和20﹕20﹕20的两种叶面肥1000倍液交替喷施，每7d～10d一次，同时做好红蜘蛛、蜗牛等病虫害防治；
S9，出圃标准
植入基质后假鳞茎直径≥6mm，株高≥9cm，根≥5条，叶片≥2片，茎粗≥1.0mm，植株生长健壮的苗即可出圃。
2.根据权利要求1所述的白及高效繁育方法，其特征在于，S4.1中，采集后的蒴果自然阴干后，装于透气的容器中，置于通风、凉爽、干燥的环境中保存，保存时间不超过12个月为宜；或者置于4±1℃冰箱中保存，其保存时间不超过24个月。
3.根据权利要求1所述的白及高效繁育方法，其特征在于，S4.2中，将蒴果用75％的乙醇浸泡30s后，用无菌水冲洗3次；用0.1％氯化汞消毒液浸泡材料10min后，用无菌水冲洗3～5次，并用无菌滤纸将蒴果上的水分吸干备用。
4.根据权利要求1所述的白及高效繁育方法，其特征在于，S5中，培养条件为：温度为(28±2)℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h～16h/d；培养10d后种子开始萌发，20d～30d后肉眼可见一片小叶片，50d～70d后芽可长至1～2cm高；初代培养阶段，污染率应低于30％。
5.根据权利要求1所述的白及高效繁育方法，其特征在于，S6中，每个培养瓶中接种小芽丛或单芽的数量为15～20株，并分布均匀；继代培养的温度、光照强度和光照时间同播种培养。
6.根据权利要求1所述的白及高效繁育方法，其特征在于，S7中，生根壮苗培养的温度、光照强度和光照时间同播种培养。
7.根据权利要求1所述的白及高效繁育方法，其特征在于，S8.1中，将组培苗连同容器一起移至与栽培环境相近的环境中，透光率50％～70％，温度10℃～30℃，自然光照炼苗20d～40d，以使组培苗适应自然光照和昼夜温差。
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