CN116555497A - 用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法 - Google Patents

用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法 Download PDF

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Abstract

本公开涉及一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法，试剂盒包括引物对集和探针集；引物对集包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和第四引物对，第一引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物；第二引物包括由如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物；第三引物对包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物；第四引物对包括如SEQ ID NO.10所示的正向引物和如SEQ ID NO.11所示的反向引物；探针集包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第二探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的第四探针。根据本公开，提供一种灵敏度高的用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法。

Description

用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法
本申请是申请日为2022年01月27日、申请号为202210098504.6、发明名称为检测 新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒和方法的专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体地说本发明涉及一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法。
背景技术
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是一种单股正链RNA病毒，容易发生变异。在临床上，新冠病毒感染者的症状差异较大，从无症状到危重症都有可能发生。除了个体因素的差异外，病毒变异也可能是导致感染患者症状差异大的重要因素。
研究表明，新型冠状病毒突变速率约为每月2～4个突变，目前在已知的株系发现了超过25个突变的变异株。相继在多个国家发现Alpha新冠变异株、Beta新冠变异株、Gamma新冠变异株、Delta新冠变异株、Omicron新冠变异株，它们在病毒表面刺突蛋白的受体结合域(RBD)发生了突变，使其与人体细胞表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)受体更容易结合，病毒的变异会显著影响其传播能力和致病能力。
新冠病毒奥密克戎变异株在病毒刺突(Spike)蛋白突变较多，同时具有前4个变异株Alpha(阿尔法)、Beta(贝塔)、Gamma(伽玛)和Delta(德尔塔)刺突蛋白的重要氨基酸突变位点，包括增强细胞受体亲和力和病毒复制能力的突变位点，导致其具有极强的传播能力。
因此，开发一种能够同时检测新型冠状病毒以及Omicron变异株的联合筛查试剂盒，对于疫情防控和确诊患者的治疗具有非常积极的意义。
发明内容
本发明针对新型冠状病毒及其Omicron变异株开发了快速检测新型冠状病毒及Omicron突变株的组合物、试剂盒、方法及用途。
在本发明的第一方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒及其Omicron变异株的引物对集，所述引物对集包括第一引物：
所述第一引物对包括：如SEQ ID NO.7所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.8所示的反向引物。
在另一优选例中，所述引物对集还包括检测新型冠状病毒的其它引物对。
在另一优选例中，所述引物对集还包括检测新型冠状病毒ORF1ab基因、和/或N基因的引物对。
在另一优选例中，所述引物对集还包括第二引物对，所述第二引物对特异性扩增新型冠状病毒ORF1ab基因，所述第二引物对包括：
如SEQ ID NO.1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.2所示的反向引物。
在另一优选例中，所述引物对集还包括第三引物对，所述第三引物对特异性扩增新型冠状病毒N基因，所述第三引物对包括：
如SEQ ID NO.4所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.5所示的反向引物。
在另一优选例中，所述引物对集还包括第四引物对，所述第四引物对特异性扩增内参RNase P基因，所述第四引物对包括：
如SEQ ID NO.10所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.11所示的反向引物。
本发明的第二方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的探针集，所述探针集包括：
核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针。
在另一优选例中，所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第二探针。
在另一优选例中，所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针。
在另一优选例中，所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的第四探针。
在另一优选例中，各探针的5’端包含有荧光报告基团；和/或，各探针的3’端包含有荧光淬灭基团。
在另一优选例中，所述各探针标记的荧光报告基团互不相同。
本发明的第三方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测新型冠状病毒及其Omicron变异株的引物对，所述引物对包括：如SEQ ID NO.7所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.8所示的反向引物。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括探针，所述探针特异性靶向SEQ ID NO.7所示的正向引物和SEQ ID NO.8所示的反向引物的PCR扩增产物。
在另一优选例中，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的引物对集。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括本发明第二方面所述的探针集。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括选自下组的一种或多种成分：热启动Taq酶、逆转录酶、UDG酶(尿嘧啶-N-糖基化酶)、dNTPs、MgCl2。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括阴性质控品。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括阳性质控品。
在另一优选例中，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内包含引物探针混合液，所述引物探针混合液包括：SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列。
在另一优选例中，所述第一容器内还包含：MgCl2和dNTPs。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内包含酶混合液，所述酶混合液包含热启动Taq酶、逆转录酶、和尿嘧啶糖基化酶(UNG))。
在另一优选例中，所述试剂盒包括第三容器，所述第三容器内包含阴性质控品。
在另一优选例中，所述试剂盒包括第四容器，所述第四容器内包含阳性质控品。
本发明的第四方面，提供了一种检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的方法，所述方法包括步骤：
(1)提供待检测对象的样本；
(2)制备荧光定量PCR反应体系并进行荧光定量PCR检测：
其中，所述荧光定量PCR反应体系包括：步骤(1)提供的所述样本、本发明第一方面所述的引物对集、和本发明第二方面所述的探针集。
在另一优选例中，所述样本为核酸样本。
在另一优选例中，所述样本可来自咽拭子样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、痰液样本、粪便样本或环境样本。
在另一优选例中，所述方法为非诊断目的的检测方法。
在另一优选例中，所述荧光定量PCR反应体系还包括阳性质控品，和/或阴性质控品。
在另一优选例中，所述PCR反应体系还包括PCR反应酶系。
本发明的第五方面，提供了本发明第一方面所述的引物对集、和/或本发明第二方面所述的探针集的用途，用于制备PCR检测试剂盒，所述PCR检测试剂盒用于检测新型冠状病毒及其Omicron突变株。
在另一优选例中，所述PCR为荧光定量PCR。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1和图2分别为使用多重引物探针组合1(包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。
图3和图4分别为使用多重引物探针组合2(包括SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.15，SEQ ID NO.28～SEQ ID NO.30，SEQ ID NO.43～SEQ ID NO.45，SEQ ID NO.52，SEQ IDNO.51，SEQ ID NO.42)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。
图5和图6分别为使用多重引物探针组合3(包括SEQ ID NO.16～SEQ ID NO.18，SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.33，SEQ ID NO.46～SEQ ID NO.48，SEQ ID NO.24、SEQ IDNO.23、SEQ ID NO.12)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。
图7和图8分别为使用多重引物探针组合4(包括SEQ ID NO.19～SEQ ID NO.21，SEQ ID NO.34～SEQ ID NO.36，SEQ ID NO.49，SEQ ID NO.50，SEQ ID NO.9，SEQ ID NO.10～SEQ ID NO.12)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。
图9显示了新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF 1ab靶基因浓度梯度扩增结果。
图10显示了新型冠状病毒(2019-nCoV)N靶基因浓度梯度扩增结果。
图11显示了新型冠状病毒(2019-nCoV)S基因浓度梯度(野生型)扩增结果。
图12显示了针对人类冠状病毒(HKU1)的假病毒的特异性检测结果。
图13显示了阴性样本(-)的检测结果；
图14显示了Omicron变异株样本的检测结果；
图15显示了新冠Delta变异株样本的检测结果。
具体实施方式
本发明开发了一种快速检测新型冠状病毒并对Omicron变异株进行鉴别的试剂盒或方法，对于疫情防控和确诊患者的治疗具有非常积极的意义。通过在1管中同时对新冠ORF1ab、N、S三靶标基因进行联合检测对新型冠状病毒进行定性检测，同时S基因检测靶标区域覆盖Omicron变异株的特异性突变位点，如若新型冠状病毒为Omicron变异株，因突变位点的发生会导致S基因丢失无信号，因此可进一步通过判断S基因是否丢失从而对Omicron变异株与非Omicron变异株进行鉴别。本发明的检测试剂，能够高效率、高特异性、高稳定性、低成本的对新型冠状病毒及其Omicron突变株感染患者进行检测。
在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
虽然在本发明的实施或测试中可以使用与本发明中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处例举优选的方法和材料。
实时荧光PCR
是基于荧光共振能量转移(FRET)原理的技术。其中，以TaqMan荧光标记探针为基础的实时荧光PCR技术利用热稳定DNA聚合酶Taq酶在具有5’-3’方向的聚合酶活性的同时，还具有对聚合延伸过程中遇到的与靶序列结合的核苷酸序列的5’-3’方向的核酸外切酶活性。TaqMan荧光探针在5’和3’端分别标记荧光发射基团和淬灭基团，探针的3’末端被磷酸化以防止探针在PCR扩增过程中被延伸。当探针保持完整时，淬灭基团抑制发射基团的荧光发射。发射基团一旦与淬灭基团发生分离，抑制作用即被解除，荧光发射基团发射波长处的光密度增加而被荧光探测系统检测到。复性期探针与模板DNA发生杂交，延伸期Taq酶随引物延伸沿DNA模板移动，当移动至探针位置时，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性能降解特异性荧光标记探针，荧光报告基团和淬灭基团分离，荧光发射出来。
多重PCR
多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。
影响多重PCR反应的因素有很多，比如：
(1)反应体系不平衡，反应体系的不平衡导致在前期的几轮反应中某些优势引物及其模板迅速扩增，获得大量的扩增产物，而这些扩增产物同时又是DNA聚合酶的良好抑制剂。所以，随着扩增产物的大量出现，聚合酶的聚合能力被越来越强烈的抑制，因此，前期处于劣势的引物及其模板，这时就更加难以反应，最终导致扩增产物量非常之小，以至于无法检测。
(2)引物特异性，如果引物与体系中其他非目的基因片段结合力更强，那么目的基因结合引物的能力就会受到竟争，从而导致扩增效率下降。
(3)最佳退火温度不一致，将多对引物放置入一个体系中扩增，由于进行PCR反应的退火温度相同，所以要求每一对引物的最佳退火温度接近。
(4)引物二聚体，包括引物间的二聚体以及引物自身所形成的发卡结构，还有一类是第三方DNA介导的聚体，这些二聚体和非特异引物一样都会干扰引物与目标结合位点的竟争，影响扩增效率。
虽然上述提及了影响扩增效率的几个因素，但更多的因素尚不清楚。到目前为止，还没有一个可以明确预测扩增效率的有效方法。
在本发明的一个优选地实施方式中，本发明提供了特异性好、扩增效率高并且能够进行多重检测的检测新型冠状病毒、及其Omicron突变株和内参基因的引物、探针组合：
在本发明的另一个优选地实施方式中，本发明提供了包含上述引物、探针组合的试剂盒，试剂盒包括：
RT-PCR反应液，包括：MgCl2、dNTPs，以及本发明的引物、探针组合；
酶混合液，包括：热启动Taq酶、逆转录酶、尿嘧啶糖基化酶(UNG))；
阴性质控品：DEPC H2O；
阳性质控品：含新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF 1ab靶基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)N靶基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)Omicron特异性突变位点及内参基因目的片段质粒。
在一个优选地实施方式中，各引物的浓度均为0.3μM。
在一个优选地实施方式中，各探针的浓度均为0.15μM。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明建立了可同时检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的检测方法及核酸检测试剂盒。
(2)本发明的新型冠状病毒及其Omicron突变株检测试剂盒具有极高的灵敏度。
(3)本发明的检测方法和试剂盒针对新型冠状病毒Omicron突变株具有极强的特异性，检测结果稳定可靠。
(4)本发明针对新型冠状病毒及其Omicron突变株的特异性检测引物、探针进行了大量的设计、筛选，获得了能够特异性鉴别Omicron突变株突变位点的引物对，经过反复验证，意外发现该引物对对野生型新型冠状病毒及其他新冠变异株无非特异性扩增，不仅极大地简化了新型冠状病毒Omicron突变株的检测流程，而且显著提高了鉴别新型冠状病毒Omicron突变株的准确性。
本发明适用于对新型冠状病毒的检测，为病毒鉴定分型和防控提供可靠的依据，值得推广应用。另外，本发明的方法同样适用于非诊断的目的，例如，在疫情防控过程中，使用本发明的检测方法对环境中的病毒核酸进行检测，这些病毒核酸信息可以作为公众健康管理之需。
下面结合具体实施例，进一步详陈本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件如美国Sambrook.J等著《分子克隆实验室指南》(黄培堂等译，北京：科学出版社，2002年)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。例如，本发明实施例中涉及的热启动Taq酶、UDG酶、C-MMLV酶可购自Invitrogen公司。
实施例1用于多重快速检测新型冠状病毒(2019-nCoV)并鉴定Omicron突变株的试剂盒
为获得特异性及灵敏度较好的多重引物探针体系组合，本发明人在研发过程中设计了数十条引物及探针，并分别组合进行多重试验。
同时，还设计人源内参基因对标本采集、核酸提取过程及PCR扩增过程进行监控。
最终确定了一套灵敏度和特异性最优的引物、探针序列。
由于内容过多，选择部分结果进行呈现，部分引物探针如下表1所示，部分引物探针组合试验结果如图1、图2、图3、图4所示。
表1.设计的部分引物探针
本发明实验发现，由于新型冠状病毒Omicron突变株和新型冠状病毒野生型的核酸差异极小，针对Omicron突变株的不同突变位点所设计的绝大部分引物对会对野生型表现出非特异性扩增，因而很难准确鉴别出Omicron突变株。
本发明针对新型冠状病毒Omicron突变株的特异性检测引物、探针进行了大量的设计、筛选，获得了能够特异性鉴别Omicron突变株对应突变位点的引物对(SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8)，该引物对特异性扩增非Omicron突变株核酸中存在的对应于Omicron突变株突变位点的核酸片段，当检测结果中存在该引物对的扩增产物时，则说明样本中不存在Omicron突变株核酸，反之则说明样本中存在Omicron突变株核酸。
经过反复验证，意外发现该引物对对Omicron突变株无非特异性扩增，不仅极大地简化了新型冠状病毒Omicron突变株的检测流程，而且显著提高了鉴别新型冠状病毒Omicron突变株的准确性。
多重引物探针组合1包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12；
多重引物探针组合2包括SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.15，SEQ ID NO.28～SEQ IDNO.30，SEQ ID NO.43～SEQ ID NO.45，SEQ ID NO.52，SEQ ID NO.51，SEQ ID NO.42；
多重引物探针组合3包括SEQ ID NO.16～SEQ ID NO.18，SEQ ID NO.31～SEQ IDNO.33，SEQ ID NO.46～SEQ ID NO.48，SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.12；
多重引物探针组合4包括SEQ ID NO.19～SEQ ID NO.21，SEQ ID NO.34～SEQ IDNO.36，SEQ ID NO.49～SEQ ID NO.50，SEQ ID NO.9，SEQ ID NO.10～SEQ ID NO.12；
多重引物探针组合5包括SEQ ID NO.22，SEQ ID NO.17，SEQ ID NO.18，SEQ IDNO.40，SEQ ID NO.41，SEQ ID NO.39，SEQ ID NO.43，SEQ ID NO.44，SEQ ID NO.45，SEQ IDNO.10，SEQ ID NO.11，SEQ ID NO.12；
多重引物探针组合6包括SEQ ID NO.25～27，SEQ ID NO.4～6，SEQ ID NO.7～9，SEQ ID NO.51，SEQ ID NO.42，SEQ ID NO.24。
多重检测结果表明，引物探针组合1、引物探针组合5、引物探针组合6的扩增效率较高，可以进行进一步性能测试。引物探针组合2、引物探针组合3、引物探针组合4在多重扩增时，部分靶标扩增效率受到明显抑制导致灵敏度差，并且针对Omicron变异株有非特异性信号。
图1至图8显示了部分代表性的多重引物探针组合的检测结果。
图1和图2分别为使用多重引物探针组合1(包括SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.12)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。新型冠状病毒野生型标准物质核酸浓度为100copies/mL，野生型100％检出，且Omicron变异株表现为S基因丢失无信号，能准确鉴别Omicron变异株。
图3和图4分别为使用多重引物探针组合2(包括SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.15，SEQ ID NO.28～SEQ ID NO.30，SEQ ID NO.43～SEQ ID NO.45，SEQ ID NO.52，SEQ IDNO.51，SEQ ID NO.42)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。新型冠状病毒野生型标准物质核酸浓度为100copies/mL，组合效果表现为野生型检测灵敏度差，且Omicron变异株S基因丢失后仍有非特异性信号，无法准确鉴别Omicron变异株。
图5和图6分别为使用多重引物探针组合3(包括SEQ ID NO.16～SEQ ID NO.18，SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.33，SEQ ID NO.46～SEQ ID NO.48，SEQ ID NO.24、SEQ IDNO.23、SEQ ID NO.12NO.)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。新型冠状病毒野生型标准物质核酸浓度为100copies/mL，组合效果表现为野生型检测灵敏度差，且Omicron变异株S基因丢失后仍有非特异性信号，无法准确鉴别Omicron变异株。
图7和图8分别为使用多重引物探针组合4(包括SEQ ID NO.19～SEQ ID NO.21，SEQ ID NO.34～SEQ ID NO.36，SEQ ID NO.49，SEQ ID NO.50，SEQ ID NO.9，SEQ ID NO.10～SEQ ID NO.12)检测新型冠状病毒和Omicron突变株的扩增结果。新型冠状病毒野生型标准物质核酸浓度为100copies/mL，组合效果表现为野生型检测灵敏度差，且Omicron变异株S基因丢失后仍有非特异性信号，无法准确鉴别Omicron变异株。
基于上述大量工作，最终优选出特异性好、扩增效率高的新型冠状病毒引物探针组合(包括内参)如表2所示：
表2.优选引物探针组合
本实施例提供的一种用于多重快速检测新型冠状病毒(2019-nCoV)并鉴定Omicron突变株的试剂盒，包括：
RT-PCR反应液(925μl)：MgCl2(4.5mM)、dNTPs(0.2mM)，新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF 1ab靶基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)N靶基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)Omicron特异性突变位点的引物浓度均为0.3μM，探针浓度为0.15μM。
酶混合液(75μL)：包括热启动Taq酶、逆转录酶、尿嘧啶糖基化酶(UNG)；
阴性质控品：DEPC H2O。
阳性质控品：含新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF 1ab靶基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)N靶基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)Omicron特异性突变位点及内参基因目的片段质粒。
实施例2多重快速检测新型冠状病毒(2019-nCoV)并鉴定Omicron突变株的方法
本实施例提供了使用实施例1中的试剂盒，进行多重快速检测新型冠状病毒(2019-nCoV)和突变株Omicron鉴定。
1.标本类型：口咽拭子、鼻咽拭子。
2.核酸提取：
采用商品化RNA提取试剂盒，如基于硅胶膜离心柱法的核酸提取试剂或基于磁珠法核酸提取的试剂，并按试剂盒说明书进行操作，最后收集到80μL RNA溶液，直接进行检测。
或保存于80℃。阴性质控品、阳性质控品均需进行提取。
3.体系配置：
根据检测所需总反应数N(包括待检样本数、阴性质控品、阳性质控品)，每管PCR加入18.5μl RT-PCR扩增液及1.5μl的酶混合液。计算所需的总量，混匀后再分装到特制的PCR反应管中。
4.加样：
向已分装有试剂的PCR反应管中分别加入阴性质控品，样本RNA溶液，阳性质控品，加样量均为10μL，盖紧管盖，混匀，离心收集溶液置管底。
5.上机扩增检测：
荧光检测通道的设定如表3所示：
表3
RT-PCR扩增程序的设定如表4所示：
表4
6.结果分析：
在满足扩增有效的前提下，靶标基因阳性结果判定依据如表5所示：
表5
新冠Omicron变异株判断依据如下表6所示：
表6
实施例3灵敏度检测
使用购于中国计量院的野生型新型冠状病毒非Omicron变异株基因组RNA标准物质(标物编号：GBW(E)091099)，稀释到合适浓度后再进行10倍倍比稀释，浓度分别为1×106copies/mL、1×105copies/mL、1×104copies/mL、1×103copies/mL、1×102copies/mL、1×101copies/mL。
用上述确定的检测体系和循环参数对上述新型冠状病毒基因组RNA标准物质稀释的6个梯度浓度进行检测。扩增结果Ct如图9至图11所示。
结果显示灵敏度数据为1×102copies/mL。表明该检测方法具较高的灵敏度，检测结果CT值如下表7所示。
表7
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图9至图11：中国计量院的新型冠状病毒基因组RNA标准物质10倍倍比稀释浓度分别为1×106copies/mL、1×105copies/mL、1×104copies/mL、1×103copies/mL、1×102copies/mL、1×101copies/mL的扩增图。图9显示了新型冠状病毒(2019-nCoV)ORF 1ab靶基因浓度梯度扩增结果；图10显示了新型冠状病毒(2019-nCoV)N靶基因浓度梯度扩增结果；图11显示了新型冠状病毒(2019-nCoV)S基因浓度梯度(野生型)扩增结果。
实施例4特异性检测
将地方性人类冠状病毒(HKU1，OC43，NL63和229E)、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒、甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、甲型H5N1流感病毒、甲型H7N9流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、鼻病毒、腺病毒、肠病毒的假病毒稀释至1×106copies/mL作为特异性检测样本进行检测。
检测结果表明，人类冠状病毒(HKU1，OC43，NL63和229E)、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒、甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、甲型H5N1流感病毒、甲型H7N9流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、鼻病毒、腺病毒、肠病毒，共16种病原体，检测结果均为阴性，阴阳性质控品正常检出，表明本试剂盒特异性良好。
图12：人类冠状病毒(HKU1)的假病毒特异性检测图。
实施例5鉴别检测
为验证Omicron检测试剂盒与新冠病毒其他变异株的鉴别诊断的准确性和有效性，将新冠野生型及其他变异株Alpha、Beta、Gamma、Delta、Lambda、Mu、Kappa、Iota的假病毒样本进行验证，Omicron检测试剂盒结果显示Omicron变异株有S基因丢失为阴性，野生型及其他变异株S基因未丢失为阳性，结果显示无交叉反应，说明试剂盒能准确的将Omicron变异株与非Omicron变异株进行鉴别诊断。部分检测结果如图13至图15所示：
图13显示了阴性样本(-)的检测结果；
图14显示了Omicron变异株样本的检测结果；
图15显示了新冠Delta变异株样本的检测结果。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
虽然以上结合附图和实施例对本公开进行了具体说明，但是可以理解，上述说明不以任何形式限制本公开。本领域技术人员在不偏离本公开的实质精神和范围的情况下可以根据需要对本公开进行变形和变化，这些变形和变化均落入本公开的范围内。

Claims (10)

1.一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒包括引物对集和探针集；所述引物对集包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和第四引物对，
所述第一引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物，所述第一引物对特异性扩增新型冠状病毒Omicron特异性突变位点；
所述第二引物包括由如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物，所述第二引物对特异性扩增新型冠状病毒ORF1ab基因；
所述第三引物对包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物，所述第三引物对特异性扩增新型冠状病毒N基因；
所述第四引物对包括如SEQ ID NO.10所示的正向引物和如SEQ ID NO.11所示的反向引物，所述第四引物对特异性扩增内参RNase P基因；
所述探针集包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针、核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示的第二探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针和核苷酸序列如SEQ IDNO.12所示的第四探针。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒还包括酶混合液、MgCl2和dNTPs，其中MgCl2的浓度为4.5mM，dNTPs的浓度为0.2mM。
3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，
各个引物的浓度为0.3μM，各个探针的浓度为0.15μM。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒还包括阴性质控品，所述阴性质控品为DEPC H2O。
5.如权利要求1或4所述的试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒还包括阳性质控品，所述阳性质控品为新型冠状病毒ORF1ab靶基因、新型冠状病毒N靶基因、新型冠状病毒Omicron特异性突变位点及内参基因目的片段质粒。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
所述试剂盒包括人源内参基因，所述人源内参基因用于对标本采集、核酸提取过程及PCR扩增过程进行监控。
7.一种非诊断目的的检测新型冠状病毒的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)提供待检测对象的样本；
(2)制备荧光定量PCR反应体系并进行荧光定量PCR检测；
所述荧光定量PCR反应体系包括：步骤(1)提供的所述样本、引物对集和探针集；
所述第一引物对特异性扩增新型冠状病毒Omicron特异性突变位点，所述第二引物对特异性扩增新型冠状病毒ORF1ab基因，所述第三引物对特异性扩增新型冠状病毒N基因，所述第四引物对特异性扩增内参RNase P基因；
所述引物对集包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和第四引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物；所述第二引物包括由如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物；所述第三引物对包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物；所述第四引物对包括如SEQ ID NO.10所示的正向引物和如SEQ ID NO.11所示的反向引物；
所述探针集包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针、核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示的第二探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针和核苷酸序列如SEQ IDNO.12所示的第四探针。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，
还包括根据所述荧光定量PCR的扩增结果对检测结果进行判定，包括对新型冠状病毒检测结果进行判定以及对新型冠状病毒Omicron株检测结果进行判定。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，
若新型冠状病毒Omicron特异性突变位点、新型冠状病毒ORF1ab基因或新型冠状病毒N基因扩增的Ct≤38，则判定新型冠状病毒检测结果为阳性；
若新型冠状病毒Omicron特异性突变位点、新型冠状病毒ORF1ab基因或新型冠状病毒N基因扩增的Ct＞40，则判定新型冠状病毒检测结果为阴性。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，
若新型冠状病毒ORF1ab基因和新型冠状病毒N基因检测结果阳性且新型冠状病毒Omicron特异性突变位点检测结果阳性，则判定新型冠状病毒Omicron株测结果为阴性；
若新型冠状病毒ORF1ab基因和新型冠状病毒N基因检测结果阳性且新型冠状病毒Omicron特异性突变位点检测结果阴性，则判定新型冠状病毒Omicron株测结果为阳性。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114107574B (zh) * 2022-01-27 2023-05-12 深圳联合医学科技有限公司 检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒和方法
WO2023170297A1 (en) * 2022-03-10 2023-09-14 Genxpro Gmbh Methods for detecting genomic variants of sars-cov-2 in multiplex assays
CN114369688B (zh) * 2022-03-22 2022-06-03 深圳联合医学科技有限公司 检测SARS-CoV-2奥密克戎变异株的组合物、试剂盒、方法及其用途
CN114592097B (zh) * 2022-05-07 2022-07-29 北京生物制品研究所有限责任公司 鉴别新型冠状病毒Omicron株BA.1和/或BA.3亚系的引物、探针及其应用
CN115948609B (zh) * 2022-08-05 2023-10-20 深圳市儿童医院 检测SARS-CoV-2的组合物及其试剂盒和应用

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111719016A (zh) * 2020-05-25 2020-09-29 深圳市疾病预防控制中心 检测新冠病毒2019-nCoV以及甲型、乙型流感病毒的组合物及应用
CN112662809A (zh) * 2020-12-02 2021-04-16 湖州市中心医院 一种用于新型冠状病毒covid-19检测的核酸组合物及其应用
CN112695134A (zh) * 2020-12-02 2021-04-23 湖州市中心医院 一种新型冠状病毒covid-19核酸检测引物组、探针组及检测试剂盒和检测方法
CN113308574A (zh) * 2021-06-01 2021-08-27 上海伯杰医疗科技有限公司 一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针组合、试剂盒及分型检测方法
KR20210122632A (ko) * 2020-04-01 2021-10-12 주식회사 시선바이오머티리얼스 RT-LAMP를 이용한 코로나바이러스감염증-19을 일으키는 SARS-CoV-2의 검출용 PNA 프로브와 프라이머 및 이를 이용한 감염여부 판별방법
CN113913561A (zh) * 2021-12-15 2022-01-11 中国农业大学 基于引物设计和铜纳米簇的SARS-CoV-2德尔塔变异株检测方法
CN113943838A (zh) * 2021-12-09 2022-01-18 常州国药医学检验实验室有限公司 基于多重荧光定量arms-pcr技术的新冠病毒奥密克戎突变序列检测技术及其应用
CN114107574A (zh) * 2022-01-27 2022-03-01 深圳联合医学科技有限公司 检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒和方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021176099A1 (en) * 2020-03-05 2021-09-10 Institut Pasteur Methods and reagents for the specific and sensitive detection of sars-cov-2
CN111270013A (zh) * 2020-03-12 2020-06-12 宁波海尔施基因科技有限公司 一种检测2019新型冠状病毒的多重实时荧光定量pcr试剂盒、方法及引物探针组合物
US11634762B2 (en) * 2020-05-14 2023-04-25 Chemgenes Corporation RT-qPCR molecular detection and diagnosis
CN113025748A (zh) * 2021-01-14 2021-06-25 复旦大学附属华山医院北院 一种快速检测新型冠状病毒69-70del突变的引物组合物及试剂盒
CN112981011B (zh) * 2021-05-12 2021-08-17 广东凯普生物科技股份有限公司 一种检测SARS-CoV-2的引物组合物及其应用
CN113481325A (zh) * 2021-07-06 2021-10-08 广州达安基因股份有限公司 检测新型冠状病毒b.1.1.7突变株的方法和试剂盒

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210122632A (ko) * 2020-04-01 2021-10-12 주식회사 시선바이오머티리얼스 RT-LAMP를 이용한 코로나바이러스감염증-19을 일으키는 SARS-CoV-2의 검출용 PNA 프로브와 프라이머 및 이를 이용한 감염여부 판별방법
CN111719016A (zh) * 2020-05-25 2020-09-29 深圳市疾病预防控制中心 检测新冠病毒2019-nCoV以及甲型、乙型流感病毒的组合物及应用
CN112662809A (zh) * 2020-12-02 2021-04-16 湖州市中心医院 一种用于新型冠状病毒covid-19检测的核酸组合物及其应用
CN112695134A (zh) * 2020-12-02 2021-04-23 湖州市中心医院 一种新型冠状病毒covid-19核酸检测引物组、探针组及检测试剂盒和检测方法
CN113308574A (zh) * 2021-06-01 2021-08-27 上海伯杰医疗科技有限公司 一种用于新型冠状病毒突变株检测的引物探针组合、试剂盒及分型检测方法
CN113943838A (zh) * 2021-12-09 2022-01-18 常州国药医学检验实验室有限公司 基于多重荧光定量arms-pcr技术的新冠病毒奥密克戎突变序列检测技术及其应用
CN113913561A (zh) * 2021-12-15 2022-01-11 中国农业大学 基于引物设计和铜纳米簇的SARS-CoV-2德尔塔变异株检测方法
CN114107574A (zh) * 2022-01-27 2022-03-01 深圳联合医学科技有限公司 检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒和方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTOPHER DÄCHERT 等: "Rapid and sensitive identification of omicron by variant-specific PCR and nanopore sequencing: paradigm for diagnostics of emerging SARS-CoV-2 variants", MEDICAL MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, vol. 211, no. 1, pages 71 - 77, XP037697133, DOI: 10.1007/s00430-022-00728-7 *
EMMANUEL THOMAS 等: "SARS-CoV-2 and Variant Diagnostic Testing Approaches in the United States", VIRUSES, vol. 13, no. 12, pages 1 - 14 *
冯兆民 等: "应高度关注新型冠状病毒变异株奥密克戎", 首都公共卫生, vol. 15, no. 6, pages 313 - 318 *

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