CN116425900B - 一种栗蘑多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种栗蘑多糖的提取方法，属于多糖提取技术领域。本发明通过提取时在水中添加维生素C，最大程度地促进了栗蘑多糖的溶出，同时避免了栗蘑多糖的降解，提高了栗蘑多糖的抗氧化活性。利用本发明的提取方法，栗蘑多糖得率高，可达到14.5％；栗蘑多糖的抗氧化活性高，DPPH自由基清除率可达89.5％。本发明的提取方法工艺简单，方便操作，制备过程中所使用的试剂易得，不会对环境造成污染，生产成本低。
Description
技术领域
本发明涉及多糖提取技术领域，尤其涉及一种栗蘑多糖的提取方法。
背景技术
栗蘑(Grifolafrondosa)，又名灰树花、贝叶多孔菌、舞茸、莲花菌、云蕈，是一种珍贵的药食同源两用真菌。栗蘑的营养价值极高，含有大量的糖类、蛋白质、微量元素，被称为“菇中王者”，深受大家的喜爱。现代研究表明，栗蘑不仅富含营养物质，还含有许多活性成分，如栗蘑多糖、栗蘑多酚、栗蘑黄酮等。栗蘑多糖具有抗氧化、降血压、抗肿瘤、免疫调节等多种功效。
目前，栗蘑多糖的提取方法主要有水提法、酸提法、碱提法、酶提法。其中，水提法的栗蘑多糖得率较低并且杂质较多；酸提法提取得到的栗蘑多糖纯度相对较高，但在酸性条件下会引起栗蘑多糖中糖苷键的断裂，造成栗蘑多糖降解或使栗蘑多糖的生物活性降低；栗蘑多糖在碱性溶液中稳定，但提取液中含有其他杂质，并且栗蘑多糖在碱液中粘性较大，不利于提纯；同时，酸液和碱液还会对环境造成危害。酶提法存在提取时间长、成本高的缺陷。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高栗蘑多糖得率及抗氧化活性的提取方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种栗蘑多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1.将栗蘑、维生素C与水混合获得混合液，进行提取，得栗蘑多糖提取液；所述栗蘑与水的比例为1g:30～50mL，所述混合液中维生素C的浓度为19～21mmol/L，所述提取的温度为48～52℃，所述提取的时间为18～22min；
S2.将S1获得的栗蘑提取液浓缩至原体积的30～35％，得栗蘑多糖提取浓缩液；
S3.将所述栗蘑多糖提取浓缩液与乙醇混合，静置，得混合物；
S4.将所述混合物离心，收集沉淀，得栗蘑多糖。
优选的，S1所述提取在微波辅助下进行，所述微波的功率为188～210W。
优选的，S2所述浓缩为旋转蒸发浓缩。
优选的，所述旋转蒸发的转速为100～120rpm，所述旋转蒸发的温度为60～80℃。
优选的，S1所述提取的次数为2～3次。
优选的，S3所述乙醇为无水乙醇，所述静置温度为3～5℃，静置时间为11～13h。
优选的，S4所述离心的转速为6300～6700rpm，离心的时间为8～12min。
优选的，所述S4得栗蘑多糖后，进行真空冷冻干燥。
优选的，所述真空冷冻干燥的温度为-10℃～-5℃，真空度为2～20Pa。
优选的，S3所述栗蘑多糖提取浓缩液与乙醇的体积比为1:2.5～3.5。
通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：
本发明在提取栗蘑多糖的过程中添加了维生素C进行提取，最大程度地促进了栗蘑多糖的溶出，同时避免了栗蘑多糖的氧化和降解失活，提高了栗蘑多糖的抗氧化活性。利用本发明的提取方法，栗蘑多糖得率高，可达到14.5％；栗蘑多糖的抗氧化活性高，DPPH自由基清除率可达89.5％。本发明的提取方法工艺简单，方便操作，制备过程中所使用的试剂易得，不会对环境造成污染，生产成本低。
具体实施方式
本发明提供了一种栗蘑多糖的提取方法，包括以下步骤：
S1.将栗蘑、维生素C与水混合获得混合液，进行提取，得栗蘑多糖提取液；所述栗蘑与水的比例(g:ml)为1g:30～50mL，所述混合液中维生素C的浓度为19～21mmol/L，所述提取的温度为48～52℃，所述提取的时间为18～22min，
S2.将S1获得的栗蘑提取液浓缩至原体积的30～35％，得栗蘑多糖提取浓缩液；
S3.将所述栗蘑多糖提取浓缩液与乙醇混合，静置，得混合物；
S4.将所述混合物离心，收集沉淀，得栗蘑多糖。
在本发明中，栗蘑的提取部位优选栗蘑子实体，栗蘑子实体采集于湖北金顶生态农业科技有限公司栗蘑栽培基地。
本发明在获得栗蘑子实体后，将栗蘑子实体烘干，所述烘干温度优选为58～62℃，进一步优选为60℃；烘干时间优选为9～11h，进一步优选为10h，烘干至恒重，所述烘干优选的在烘箱中进行。烘干后，将栗蘑子实体粉碎，过100目筛，得栗蘑粉末，所述粉碎优选在粉碎机中进行。
在本发明中，将栗蘑粉末与水混合，进行浸泡，得栗蘑浸泡液；所述栗蘑粉末与水的比例优选为1g:30～50mL，进一步优选为1g:35～45mL；更优选为1g:40mL，所述水优选为蒸馏水，所述浸泡的时间为50～70min，更优选为60min。浸泡完成后，将栗蘑浸泡液与维生素C溶液混合，进行微波提取。维生素C可以促进栗蘑多糖的溶出，同时避免了栗蘑多糖的氧化与降解失活。所述微波提取的温度优选为48～52℃，进一步优选为49～51℃，更优选为50℃；所述维生素C的浓度优选为19～21mmol/L，进一步优选为20mmol/L；所述微波提取的功率优选为188～210W，进一步优选为192～205W，更优选为200W；所述微波提取的时间优选为18～22min，更优选为20min，提取次数优选为2～4次，更优选为3次，本发明在提取完成后抽滤，合并滤液，得栗蘑多糖提取液。
本发明将栗蘑多糖提取液进行浓缩，得栗蘑多糖提取浓缩液；所述浓缩优选为旋转蒸发浓缩，所述旋转蒸发的转速优选为100～120rpm，更优选为110rpm；所述旋转蒸发的温度为60～80℃，更优选为70℃，优选浓缩至原栗蘑多糖提取液体积的30～35％，更优选为33％；所述旋转蒸发浓缩优选在旋转蒸发仪中进行。
本发明在获得栗蘑多糖提取浓缩液后，将栗蘑多糖提取浓缩液与乙醇混合，静置得混合物；所述乙醇优选为无水乙醇，所述乙醇的体积优选为栗蘑多糖提取浓缩液的2.5～3.5倍，更优选为3倍；所述静置的温度优选为3～5℃，更优选为4℃，所述静置的时间为11～13h，更优选为12h，所述静置优选在冰箱中进行。
本发明将静置后的混合物进行离心，收集沉淀，得栗蘑多糖。所述离心的转速优选为6300～6700rpm，进一步优选为6400～6600rpm，更优选为6500rpm；所述离心的时间为8～12min，进一步优选为9～11min，更优选为10min。
本发明在获得栗蘑多糖后，优选将所述栗蘑多糖进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的温度优选为-10～-5℃，更优选为-8～-6℃，进一步优选为-7℃，所述真空冷冻干燥的真空度优选为2～20Pa，进一步优选为8～15Pa，更优选为12Pa。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
以下实施例选用硫酸-苯酚滴定法，绘制葡萄糖标准曲线，用紫外分光光度计于490nm下读取吸光度值，根据回归曲线方程，对栗蘑多糖得率进行计算，计算公式如下：
注：C——栗蘑多糖浓度
V——溶液体积
M——栗蘑粉末质量
配制不同浓度的栗蘑多糖水溶液进行DPPH自由基清除率的计算，用紫外分光光度计于517nm处测定吸光度值，同时用无水乙醇代替样品测定吸光度值A空白，用无水乙醇代替DPPH测定吸光度值A对照，测定栗蘑多糖的抗氧化活性，计算公式如下：
实施例1
(1)材料预处理：将栗蘑子实体于烘箱中，控制温度为60℃烘干10h至恒重，用粉碎机粉碎，过100目筛，得到栗蘑粉末。
(2)超声提取：取5.0g栗蘑粉末，按料液比为1:40(g/mL)，将栗蘑粉末浸泡在蒸馏水中60min后，于50℃微波提取3次，微波功率为200W，体系中Vc浓度为20mmol/L，每次提取20min，抽滤，合并滤液。
(3)浓缩：将步骤(2)所得滤液用旋转蒸发仪浓缩至原体积的33％，得到栗蘑多糖提取液，旋转蒸发的转速为100r/min，旋转蒸发的温度为80℃。
(4)醇沉：向中加入3倍体积无水乙醇，于4℃冰箱中静置12h分层。
(5)冷冻干燥：将提取液进行离心，离心条件为6500rpm，10min，弃去上清液，将沉淀进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥机温度为-10℃，真空度为10Pa，即得到栗蘑多糖。
实施例2
(1)材料预处理：将栗蘑子实体于烘箱中，控制温度为58℃烘干11h至恒重，用粉碎机粉碎，过100目筛，得到栗蘑粉末。
(2)超声提取：取5.0g栗蘑粉末，按料液比为1:30(g/mL)，将栗蘑粉末浸泡在蒸馏水中50min后，于48℃微波提取2次，微波功率为188W，体系中Vc浓度为19mmol/L，每次提取18min，抽滤，合并滤液。
(3)浓缩：将步骤(2)所得滤液用旋转蒸发仪浓缩至原体积的30％，得到栗蘑多糖提取液，旋转蒸发的转速为120r/min，旋转蒸发的温度为60℃。
(4)醇沉：向中加入3倍体积无水乙醇，于3℃冰箱中静置11h分层。
(5)冷冻干燥：将提取液进行离心，离心条件为6300rpm，8min，弃去上清液，将沉淀进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥机温度为-8℃，真空度为2Pa，即得到栗蘑多糖。
实施例3
(1)材料预处理：将栗蘑子实体于烘箱中，控制温度为62℃烘干9h至恒重，用粉碎机粉碎，过100目筛，得到栗蘑粉末。
(2)超声提取：取5.0g栗蘑粉末，按料液比为1:50(g/mL)，将栗蘑粉末浸泡在蒸馏水中70min后，于52℃微波提取4次，微波功率为210W，体系中Vc浓度为21mmol/L，每次提取22min，抽滤，合并滤液。
(3)浓缩：将步骤(2)所得滤液用旋转蒸发仪浓缩至原体积的35％，得到栗蘑多糖提取液；旋转蒸发的转速为110r/min，旋转蒸发的温度为70℃。
(4)醇沉：向中加入3倍体积无水乙醇，于5℃冰箱中静置13h分层。
(5)冷冻干燥：将提取液进行离心，离心条件为6700rpm，12min，弃去上清液，将沉淀进行冷冻干燥，冷冻干燥机温度为-5℃，真空度为22Pa，即得到栗蘑多糖。
对比例1
与实施例1不同的是，对比例1在提取过程中未添加维生素C，其它提取条件与实施例1相同。
实施例1～3以及对比例1的多糖得率和DPPH自由基清除率如表1所示：
表1实施例1～3和对比例1的多糖得率和DPPH自由基清除率比较
| 实验例 | 多糖得率(％) | DPPH自由基清除率(％) |
| 实施例1 | 14.5 | 89.5 |
| 实施例2 | 13.8 | 87.3 |
| 实施例3 | 14.2 | 88.6 |
| 对比例1 | 12.9 | 85.2 |
由表1可以看出，按照本发明的方法提取栗蘑多糖，多糖得率高，并且提取得到的栗蘑多糖抗氧化能力更强。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种栗蘑多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将栗蘑、维生素C与水混合获得混合液，进行提取，得栗蘑多糖提取液；所述栗蘑与水的比例为1g:30～50mL，所述混合液中维生素C的浓度为19～21mmol/L，所述提取的温度为48～52℃，所述提取的时间为18～22min；
S2.将S1获得的栗蘑提取液浓缩至原体积的30～35％，得栗蘑多糖提取浓缩液；
S3.将所述栗蘑多糖提取浓缩液与乙醇混合，静置，得混合物；
S4.将所述混合物离心，收集沉淀，得栗蘑多糖；
S1所述提取在微波辅助下进行，所述微波的功率为188～210W；
S3所述栗蘑多糖提取浓缩液与乙醇的体积比为1:2.5～3.5。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，S2所述浓缩为旋转蒸发浓缩。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述旋转蒸发的转速为100～120r/min，所述旋转蒸发的温度为60～80℃。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，S1所述提取的次数为2～3次。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，S3所述乙醇为无水乙醇，所述静置温度为3～5℃，静置时间为11～13h。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，S4所述离心的转速为6300～6700rpm，离心的时间为8～12min。
7.根据权利要求1～6任意一项所述的提取方法，其特征在于，所述S4得栗蘑多糖后，进行真空冷冻干燥。
8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥的温度为-10℃～-5℃，真空度为2～20Pa。
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