CN111471732A - 一种新型富硒茶源ace抑制肽及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新型富硒茶源ACE抑制肽及其制备方法，属于富硒茶精深加工领域。该新型富硒茶源ACE抑制肽制备原料包括低档富硒茶、粗老的富硒茶、富硒茶下脚料、富硒茶渣、富硒茶花、富硒茶籽和富硒茶粕，其制备工艺包括富硒茶源蛋白的分离纯化、富硒茶蛋白的复合酶解、新型ACE抑制肽的超滤分离工序。与现有技术相比，本发明既可克服富硒茶源ACE抑制肽硒含量低、收率低的问题，又可实现富硒茶废弃资源高值化利用；所制备的ACE抑制肽兼具有机硒与普通茶源ACE抑制肽的优势，既可补充机体所必需的有机硒，又具强效ACE抑制活性。本发明工艺简单，经济价值高，其制备的新型富硒茶源ACE抑制肽在心血管疾病防治方面极具应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及富硒茶精深加工领域，尤其是涉及一种新型富硒茶源ACE抑制肽及其制备方法。
背景技术
硒，人体必需的微量元素，是谷胱甘肽等抗氧化酶的活性中心，具有抗氧化、抗衰老、提高人体免疫力、预防心血管疾病等多种生物活性。机体缺硒会导致克山病、大骨病，容易降低免疫力，诱发肝病、心血管疾病。中国有72％的地区，处于缺硒或低硒状态。无机硒具有生物利用度低、蓄积毒性高等缺点，安全有效的补硒剂的研究与开发是当前研究的重要课题之一。
茶树具有极强的富硒能力，能吸收土壤的无机态硒并将其转化为有机态硒。富硒茶富含有机硒，能弥补人体有机硒摄取量不足，且又不存在无机硒的生物利用度低、蓄积毒性强等副作用。富硒茶生产过程中产生大量抵挡富硒茶及富硒茶茶渣。富硒茶茶渣是富硒茶提取富硒茶多糖、富硒茶多酚等功能活性物质后的副产物，其中含有20～30％(干基)的富硒茶蛋白。
目前资料记载的富硒茶、低档富硒茶、富硒茶茶渣的开发利用，包括以下几个方面：(i)开发富硒茶饮料，如中国专利CN201911161797.2、CN201810000915.0、CN94100049.4、CN02113242.9、CN200810236887.9、CN201611230262.2、CN201710007053.X公开了采用富硒茶及有机硒、甜菊苷、维生素C、天然香精等食品添加剂开发富硒茶液体饮料的技术，如中国专利CN201711034347.8公开了一种利用富硒茶生产富硒茶酸奶的制备技术，如中国专利CN201110411061.3公开了一种富硒茶提取液的制备方法；(ii)提取富硒茶蛋白等天然活性成分，如中国专利CN201410650029.4、CN201410405068.8、CN201810782651.9公开了一种从富硒茶叶中低温超声连续提取速溶富硒蛋白粉生产工艺；(iii)制备生物活性肽，如中国专利CN201710412960.2、CN201811641092.6公开了利用富硒茶叶开发富硒茶叶蛋白活性多肽、富硒茶叶蛋白抗氧化肽。此外，中国专利CN201811571359.9公开了一种利用富硒茶下脚料制备营养强化腐竹的技术。这些技术发明在一定程度上提高了低档富硒茶、粗老的富硒茶、富硒茶下脚料、提取功能成分后的富硒茶渣、富硒茶花、富硒茶籽或富硒茶粕的开发利用效率，但是存在技术含量低、产品附加值低、利用不充分等问题。
血压持续升高或突然升高，会出现严重的心、脑、肾等器官的损害和病变，如脑中风、心肌梗死、肾衰竭等。化学合成的ACE抑制药物如卡托普利、赖诺普利等降血压效果好，但往往伴有一定的副作用，如咳嗽、皮疹、哮喘等。目前，很多研究表明植物源的ACE抑制肽表现出显著的降压效果，且无明显的毒副作用。
目前，已广泛利用天然动植物材料制备ACE抑制肽，如中国专利CN200610097201.3公开了一种燕麦蛋白ACE抑制肽的制备方法，如中国专利CN201610517689.4公开了一种榛仁ACE抑制肽的制备方法，如中国专利CN201811032768.1、CN201810416252.0公开了一种茶叶ACE抑制肽的制备方法。大量科学研究表明，硒蛋白不仅补充人体必需的微量元素硒，提高硒营养摄入水平，而且兼具优于普通蛋白的生物活性。在已公开ACE抑制肽开发利用的技术发明中，尚无硒源ACE抑制肽相关的制备技术。
发明内容
本发明在于克服现有硒蛋白制备ACE抑制肽技术的不足，充分利用低档富硒茶、富硒茶茶渣制备一种新型ACE抑制肽，实现低档富硒茶、富硒茶茶渣高值化利用，解决低档富硒茶、富硒茶茶渣利用率低、茶资源浪费、污染环境等难题；制备的新型ACE抑制肽，既可补充机体所必需的有机硒，又具有强效的ACE抑制活性。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：
1)富硒茶蛋白的提取：将富硒茶原料粉碎后与碱性溶液混合，并依次经过搅拌提取、趁热过滤后，收集滤液并将滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后再经过离心过程，收集上清液，记为富硒茶蛋白溶液；
2)富硒茶蛋白的分离：将富硒茶蛋白溶液与消泡剂混合，并依次经过浓缩、静置沉淀、离心过程后，得到富硒茶蛋白粗品；
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品配制成溶液，经超滤分离后，收集截留液，记为纯化后的富硒茶蛋白溶液；
4)富硒茶蛋白的复合酶解：调节纯化后的富硒茶蛋白溶液pH，并加入复合酶进行酶解反应，得到酶解液；
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：将酶解液依次进行超滤分离、浓缩、冷冻干燥后，即得到所述的ACE抑制肽。
进一步地，步骤1)中，所述的富硒茶原料包括富硒茶下脚料、富硒茶渣、富硒茶花、富硒茶籽、富硒茶粕中的至少一种；
所述的碱性溶液为0.01-0.09M的氢氧化钠溶液；
所述的富硒茶与碱性溶液的料液比为1:(15-50)g/mL；
所述的搅拌提取过程中，提取温度为45-85℃，提取时间为0.5-5h。
作为优选的技术方案，所述的碱性溶液为0.08M的氢氧化钠溶液，所述的富硒茶与碱性溶液的质量比为1:30。
作为优选的技术方案，所述的搅拌提取过程中，提取温度为60℃，提取时间为1h。
进一步地，步骤2)中，所述的消泡剂包括正庚醇、正辛醇或正癸醇；
所述的消泡剂相对于上清液的加入量为1-3％(v/v)。
作为优选的技术方案，所述的消泡剂为正辛醇。
进一步地，步骤2)中，所述的浓缩过程具体为：通过真空旋蒸将富硒茶蛋白溶液与消泡剂的混合溶液浓缩至原体积的1/6-1/4，得到浓缩液；
所述的浓缩过程后，将浓缩液pH调节至3-5(优选pH为3.5)，再进行静置沉淀过程；
所述的静置沉淀过程中，静置时间为8-12h。
进一步地，步骤1)及步骤2)中，所述的离心过程中，离心转速为5000r/min，离心时间为10-15min。
进一步地，步骤3)具体为：将富硒茶蛋白粗品溶解于pH 9-10氢氧化钠溶液，并经过截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离后，收集截留液，记为纯化后的富硒茶蛋白溶液。
进一步地，步骤4)中，将纯化后的富硒茶蛋白溶液pH调节至7-9；
所述的复合酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶以质量比5:2组成的混合物；
所述的复合酶用量为3000-6000U/g富硒茶蛋白；
所述的酶解反应中，酶解温度为45-80℃，酶解时间为2-8h。
作为优选的技术方案，所述的复合酶用量为5000U/g富硒茶蛋白，所述的酶解反应中，pH为8，酶解温度为60℃，酶解时间为3h。
进一步地，步骤5)具体为：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，所得透过液(<10kDa)经真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，再经过冷冻干燥，即得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
进一步地，步骤5)中，所述的酶解液经超滤分离后，所得透过液记为初透过液，所得截留液(>10kDa)重复步骤4)进行再次酶解，将再次酶解所得酶解液采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离后，所得透过液记为再透过液，将初透过液与再透过液混合并依次经过真空旋蒸、冷冻干燥后，即得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
一种新型富硒茶源ACE抑制肽，采用如上所述的方法制备而成。
本发明的关键在于(a)富硒茶蛋白的提取纯化：既要极大的溶出富硒茶废料中的富硒茶蛋白，又要去除杂质得到较高纯度的富硒茶蛋白。(b)富硒茶蛋白的复合酶解工艺：使富硒茶蛋白充分酶解，得到具有高水解度、强ACE抑制活性的酶解液。(c)新型ACE抑制肽的超滤分离：既要分离得到具有强效ACE抑制活性的组分，又要避免现有技术因反复分离而造成有机硒的损失，使制备的新型ACE抑制肽兼具有机硒与普通茶源ACE抑制肽的双重优势。
与现有技术相比，本发明具有以下特点：
1)富硒茶蛋白的提取分离，采用低浓度碱液一步提取，可克服现有技术中因多次前处理而造成富硒茶蛋白提取率极低的问题，且采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜去除富硒茶蛋白粗品中的杂质，得到较高纯度的富硒茶蛋白。
2)富硒茶蛋白的酶解工艺，步骤(5)中，卷式超滤膜分离得到的截留液(>10kDa)，返回步骤(4)再次酶解，可实现富硒茶蛋白的最大化利用；
3)酶解液的超滤分离，采用分子量为10kDa的卷式超滤膜超滤分离富硒茶蛋白酶解液，既可一步分离出具有强效ACE抑制活性的组分，又可避免现有技术因反复分离而造成有机硒的损失，使分离得到的新型ACE抑制肽兼具有机硒与普通茶源ACE抑制肽的双重优势(有机硒含量1.60-2.56g/kg，ACE抑制活性为IC501.14-2.02mg/mL)。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：
本实施例以低档茶富硒茶为原料制备富硒茶蛋白源ACE抑制肽，具体制备方法包括以下步骤：
1)富硒茶蛋白的提取：将低档茶富硒茶粉碎后与0.08M的氢氧化钠溶液以料液比1:30g/mL混合均匀，并在60℃下搅拌提取0.5h，之后趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液并将滤渣重新作为富硒茶原料，再在相同条件下重复依次进行氢氧化钠溶液混合、搅拌提取、过滤，之后将两次收集的滤液混合，冷却后于5000r/min的转速下离心15min，取上层清液；
2)富硒茶蛋白的分离：向上清液中加入3％(v/v)正辛醇混合均匀，经真空旋蒸浓缩至原体积的1/6，之后调节浓缩液pH至3.5，并在室温下静置沉淀12h，之后在5000r/min的转速下离心15min，得到富硒茶蛋白粗品；
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解于pH 9-10氢氧化钠溶液，并经过截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离后，收集截留液，即为纯化后的富硒茶蛋白溶液；
4)富硒茶蛋白的复合酶解：调节纯化后的富硒茶蛋白溶液pH至8.5，再在60℃下与复合酶混合并进行酶解反应8h，得到酶解液；其中复合酶由中性蛋白酶与碱性蛋白酶以质量比5:2混合组成，复合酶的加入量为3000U/g富硒茶蛋白沉淀物；
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤4)再次酶解，透过液经真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，再经过冷冻干燥，即得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例2：
粗老的富硒茶中新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法
1)富硒茶蛋白的分离：将粗老的富硒茶粉碎后，按料液比1:45的比例与0.04M氢氧化钠溶液混合并混匀，65℃搅拌提取2.5h。趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液。滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后于5000r/min离心10min，取上清液；
2)富硒茶蛋白的沉淀：上清液中加入3％(v/v)的正辛醇，真空旋蒸浓缩至1/4体积；调节浓缩液pH 3.5，静置9h。然后5000r/min离心10min，得到富硒茶蛋白粗品。
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解在氢氧化钠溶液(pH 9-10)中，采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离，收集截留液，得到纯化后的富硒茶蛋白溶液。
4)富硒茶蛋白的复合酶解：将纯化后的富硒茶蛋白溶液，调节pH 9，温度70℃，加复合酶(中性蛋白酶:碱性蛋白酶，5:2)量6000U/g蛋白，酶解2h，得到酶解液。
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤(4)再次酶解，透过液(<10kDa)真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，冷冻干燥，得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例3：
富硒茶下脚料中新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法
1)富硒茶蛋白的分离：将富硒茶下脚料粉碎后，按料液比1:50的比例与0.09M氢氧化钠溶液混合并混匀，70℃搅拌提取60min。趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液。滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后于5000r/min离心10min，取上清液；
2)富硒茶蛋白的沉淀：上清液中加入3％(v/v)的正庚醇，真空旋蒸浓缩至1/4体积；调节浓缩液pH 3，静置沉淀8h。然后4000r/min离心10min，得到富硒茶蛋白粗品。
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解在氢氧化钠溶液(pH 9-10)中，采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离，收集截留液，得到纯化后的富硒茶蛋白溶液。
4)富硒茶蛋白的复合酶解：将纯化后的富硒茶蛋白溶液，调节pH 8，温度60℃，加复合酶(中性蛋白酶:碱性蛋白酶，5:2)量4000U/g蛋白，酶解2h，得到酶解液。
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤(4)再次酶解，透过液(<10kDa)真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，冷冻干燥，得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例4：
提取功能成分后的富硒茶渣中新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法
1)富硒茶蛋白的分离：将提取功能成分后的富硒茶渣粉碎后，按料液比1:15的比例与0.06M氢氧化钠溶液混合并混匀，65℃搅拌提取70min。趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液。滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后于4500r/min离心15min，取上清液；
2)富硒茶蛋白的沉淀：上清液中加入1.5％(v/v)的正辛醇，真空旋蒸浓缩至1/5体积；调节浓缩液pH 3，静置沉淀10h。然后4500r/min离心10min，得到富硒茶蛋白粗品。
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解在氢氧化钠溶液(pH 9-10)中，采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离，收集截留液，得到纯化后的富硒茶蛋白溶液。
4)富硒茶蛋白的复合酶解：将纯化后的富硒茶蛋白溶液，调节pH 8.5，温度80℃，加复合酶(中性蛋白酶:碱性蛋白酶，5:2)量4500U/g蛋白，酶解2.5h，得到酶解液。
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤(4)再次酶解，透过液(<10kDa)真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，冷冻干燥，得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例5：
富硒茶花中新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法
1)富硒茶蛋白的分离：将富硒茶花粉碎后，按料液比1:50的比例与0.01M氢氧化钠溶液混合并混匀，45℃搅拌提取30min。趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液。滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后于5000r/min离心10min，取上清液；
2)富硒茶蛋白的沉淀：上清液中加入2.5％(v/v)的正辛醇，真空旋蒸浓缩至1/5体积；调节浓缩液pH 5，静置沉淀10h。然后5000r/min离心10min，得到富硒茶蛋白粗品。
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解在氢氧化钠溶液(pH 9-10)中，采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离，收集截留液，得到纯化后的富硒茶蛋白溶液。
4)富硒茶蛋白的复合酶解：将纯化后的富硒茶蛋白溶液，调节pH 7，温度45℃，加复合酶(中性蛋白酶:碱性蛋白酶，5:2)量4000U/g蛋白，酶解3h，得到酶解液。
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤(4)再次酶解，透过液(<10kDa)真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，冷冻干燥，得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例6：
富硒茶籽中新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法
1)富硒茶蛋白的分离：将富硒茶籽粉碎后，按料液比1:45的比例与0.06M氢氧化钠溶液混合并混匀，85℃搅拌提取70min。趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液。滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后于4000r/min离心15min，取上清液；
2)富硒茶蛋白的沉淀：上清液中加入1％(v/v)的正癸醇，真空旋蒸浓缩至1/5体积；调节浓缩液pH 3.5，静置沉淀10h。然后5000r/min离心10min，得到富硒茶蛋白粗品。
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解在氢氧化钠溶液(pH 9-10)中，采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离，收集截留液，得到纯化后的富硒茶蛋白溶液。
4)富硒茶蛋白的复合酶解：将纯化后的富硒茶蛋白溶液，调节pH 8.5，温度65℃，加复合酶(中性蛋白酶:碱性蛋白酶，5:2)量4500U/g蛋白，酶解2.5h，得到酶解液。
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤(4)再次酶解，透过液(<10kDa)真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，冷冻干燥，得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例7：
富硒茶粕中新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法
1)富硒茶蛋白的分离：将富硒茶粕粉碎后，按料液比1:40的比例与0.05M氢氧化钠溶液混合并混匀，65℃搅拌提取5h。趁热用尼龙纱布过滤，收集滤液。滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后于4000r/min离心15min，取上清液；
2)富硒茶蛋白的沉淀：上清液中加入1.5％(v/v)的正辛醇，真空旋蒸浓缩至1/5体积；调节浓缩液pH 3.5，静置沉淀10h。然后5000r/min离心10min，得到富硒茶蛋白粗品。
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品溶解在氢氧化钠溶液(pH 9-10)中，采用截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离，收集截留液，得到纯化后的富硒茶蛋白溶液。
4)富硒茶蛋白的复合酶解：将纯化后的富硒茶蛋白溶液，调节pH 8.5，温度65℃，加复合酶(中性蛋白酶:碱性蛋白酶，5:2)量4500U/g蛋白，酶解2.5h，得到酶解液。
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，截留液(>10kDa)返回步骤(4)再次酶解，透过液(<10kDa)真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，冷冻干燥，得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
实施例8：
本实施例用于对实施例1-7中所制备的ACE抑制肽进行有机硒含量及ACE抑制活性测定，测定方法分别为氢化物-原子荧光法(参照GB/T 21729-2008)和HPLC法(参考：草鱼源ACE抑制肽的分离纯化及定量构效研究，王毅梅，2011)，测定结果如表1所示。
表1新型富硒茶源ACE抑制肽的有机硒含量及ACE抑制活性
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)富硒茶蛋白的提取：将富硒茶原料粉碎后与碱性溶液混合，搅拌提取，趁热过滤，收集滤液并将滤渣再重复上述操作一次，合并两次滤液，冷却后离心，收集上清液，记为富硒茶蛋白溶液；
2)富硒茶蛋白的分离：上清液中加入消泡剂，并依次经过真空旋蒸浓缩、静置沉淀、离心过程后，得到富硒茶蛋白粗品；
3)富硒茶蛋白的纯化：将富硒茶蛋白粗品配制成溶液，经超滤分离后，收集截留液，记为纯化后的富硒茶蛋白溶液；
4)富硒茶蛋白的复合酶解：调节纯化后的富硒茶蛋白溶液pH，并加入复合酶进行酶解反应，得到酶解液；
5)新型ACE抑制肽的超滤分离：将酶解液依次进行超滤分离、浓缩、冷冻干燥后，即得到所述的ACE抑制肽。
2.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的富硒茶原料包括富硒茶下脚料、富硒茶渣、富硒茶花、富硒茶籽、富硒茶粕中的至少一种；
所述的碱性溶液为0.01-0.09M的氢氧化钠溶液；
所述的富硒茶与碱性溶液的料液比为1:(15-50)g/mL；
所述的搅拌提取过程中，提取温度为45-85℃，提取时间为0.5-5h。
3.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的消泡剂包括正庚醇、正辛醇或正癸醇；
所述的消泡剂相对于上清液的加入量为1-3％(v/v)。
4.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的浓缩过程具体为真空旋蒸浓缩富硒茶蛋白溶液至原体积的1/6-1/4，得到浓缩液；
所述的浓缩过程后，将浓缩液pH调节至3-5，再进行静置沉淀过程；
所述的静置沉淀过程中，静置时间为8-12h。
5.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤1)及步骤2)中，所述的离心过程中，离心转速为4000-5000r/min，离心时间为10-15min。
6.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤3)具体为：将富硒茶蛋白粗品溶解于pH 9-10氢氧化钠溶液，并经过截留分子量为1kDa的卷式超滤膜分离后，收集截留液，记为纯化后的富硒茶蛋白溶液。
7.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤4)中，将纯化后的富硒茶蛋白溶液pH调节至7-9；
所述的复合酶为中性蛋白酶与碱性蛋白酶以质量比5:2组成的混合物；
所述的复合酶用量为3000-6000U/g富硒茶蛋白；
所述的酶解反应中，酶解温度为45-80℃，酶解时间为2-8h。
8.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤5)具体为：采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离酶解液，所得透过液经真空旋蒸浓缩至原体积的1/6-1/4，再经过冷冻干燥，即得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
9.根据权利要求1所述的一种新型富硒茶源ACE抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤5)中，所述的酶解液经超滤分离后，所得透过液记为初透过液，所得截留液重复步骤4)进行再次酶解，将再次酶解所得酶解液采用截留分子量为10kDa的卷式超滤膜分离后，所得透过液记为再透过液，将初透过液与再透过液混合并依次经过真空旋蒸、冷冻干燥后，即得到新型富硒茶源ACE抑制肽。
10.一种新型富硒茶源ACE抑制肽，其特征在于，采用如权利要求1至9任一项所述的方法制备而成。
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