CN116407618B - 一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法 - Google Patents
一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116407618B CN116407618B CN202310337739.0A CN202310337739A CN116407618B CN 116407618 B CN116407618 B CN 116407618B CN 202310337739 A CN202310337739 A CN 202310337739A CN 116407618 B CN116407618 B CN 116407618B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- temperature
- hydrogel
- chitosan
- polypeptide
- growth factor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 claims abstract description 59
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 53
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 50
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims abstract description 38
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims abstract description 20
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims abstract description 19
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- CUIJDJLRRFWTOC-BWDXOUPSSA-N NCC(O)=O.NCC(O)=O.OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N Chemical compound NCC(O)=O.NCC(O)=O.OC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N CUIJDJLRRFWTOC-BWDXOUPSSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 43
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 41
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 28
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 26
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 17
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 17
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 13
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 8
- 239000005457 ice water Substances 0.000 claims description 7
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 claims description 2
- 229920001499 Heparinoid Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002554 heparinoid Substances 0.000 abstract description 2
- 238000006068 polycondensation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 abstract description 2
- 229940025770 heparinoids Drugs 0.000 abstract 1
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011056 performance test Methods 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
- A61K38/1866—Vascular endothelial growth factor [VEGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及生物凝胶技术领域，且公开了一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法，以甘氨酸‑精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸‑丝氨酸五肽和牛磺酸为反应物，利用1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐缩合剂发生缩聚反应，生成一种新型的含磺酸多肽链。然后将壳聚糖溶液、甘油磷酸盐溶液、含磺酸多肽链三者共混，得到一种多肽壳聚糖温敏性水凝胶。血管内皮生长因子对类肝素分子具有较好的亲和力，因此利用范德华力等通过物理吸附使之负载于多肽壳聚糖温敏性水凝胶，得到缓释生长因子温敏性凝胶具有优异的温度‑pH响应性。
Description
技术领域
本发明涉及生物凝胶技术领域，具体为一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法。
背景技术
随着科学技术的发展，为了控制疾病对人生命安全造成的巨大影响，人们对生长因子进行了研究和探索，其中血管内皮生长因子对细胞的修复、再生等具有重要意义。血管内皮生长因子最初是从牛垂体滤泡星状细胞培养物中纯化分离出的一种高度特异的结合因子，可以直接作用于血管内皮细胞，促进血管形成。
传统水凝胶存在成本较高、生物相容性较差、性能单一、响应速度慢等一些缺点，导致其应用领域受限，因此近年来，智能型水凝胶受到了众多科学家的青睐。主要有温度响应性水凝胶、pH响应性水凝胶、光响应性水凝胶、压敏感性水凝胶等，其中多重响应性水凝胶以温度-pH敏感性最为常见。然而温度-pH敏感性水凝胶大多是利用N-异丙基丙烯酰胺来制备，但这种方法制备的水凝胶生物相容性较差，降解速率慢。文献《控释生长因子型温敏水凝胶的制备及其生物相容性研究》报道了如何制备类肝素单体联合N-异丙基丙烯酰胺，采用半互穿技术合成一种温敏性水凝胶，并负载生长因子，改善了生长因子在酸环境，热环境条件下的生物活性。因此本发明以壳聚糖-甘油磷酸盐和含磺酸多肽链单体，负载血管内皮生长因子，制备了一种新型的缓释生长因子温敏性凝胶。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种缓释生长因子温敏性凝胶及其制备方法。
(二)技术方案
一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法，所述制备方法如下：
(1)将甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和牛磺酸同时溶解于碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，0-5℃搅拌30-40min后取出，在20-30℃下继续搅拌24-36h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链；
(2)将壳聚糖溶解于0.08-0.12mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于0.01-0.05mol/L氢氧化钠溶液中，再将壳聚糖溶液、甘油磷酸盐溶液、含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，保温反应，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶；
(3)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，再将灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶放入无菌缓冲溶液中浸泡2-3d，待溶胀平衡后加入血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中2-6℃静置吸附24-48h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
优选的，所述(1)中碳酸氢钠溶液的浓度为0.3-0.6mol/L。
优选的，所述(1)中甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸、牛磺酸和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的质量比为1:3.6-4.2:2.8-3.5。
优选的，所述(2)中壳聚糖、甘油磷酸盐和含磺酸多肽链的质量比为1:15-22:0.1-0.3。
优选的，所述(2)中保温反应的温度为30-40℃，时间为5-30min。
优选的，所述(3)中凝胶的灭菌处理为：将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，7-9d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，30-40℃下保温24-36h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1-2h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中2-3d，并且3-4次/天更换一次缓冲溶液。
优选的，所述(3)中含多肽壳聚糖温敏性水凝胶和血管内皮生长因子的质量比为1:0.5-0.8。
(三)有益的技术效果
以甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和牛磺酸为反应物，利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐缩合剂发生缩聚反应，生成一种新型的含磺酸多肽链，这种含磺酸多肽链能保护生长因子的生物活性。然后将壳聚糖溶液、甘油磷酸盐溶液、含磺酸多肽链三者共混，得到一种多肽壳聚糖温敏性水凝胶，这种水凝胶不仅对温度敏感，而且能响应pH。血管内皮生长因子对含磺酸多肽分子具有较好的亲和力，因此利用范德华力等通过物理吸附使之负载于多肽壳聚糖温敏性水凝胶，得到的缓释生长因子温敏性凝胶具有优异的温度-pH响应性。
具体实施方式
实施例1
(1)将0.15g甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和0.63g牛磺酸同时溶解于30mL的0.6mol/L碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入0.53g的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，5℃搅拌40min后取出，在30℃下继续搅拌36h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链。
(2)将壳聚糖溶解于27mL的0.12mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于6mL的0.03mol/L氢氧化钠溶液中，再将0.45g壳聚糖溶液、9.9g甘油磷酸盐溶液、0.135g含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，30℃反应5min，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶。
(3)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，8d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，35℃下保温30h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中2d，并且4次/天更换一次缓冲溶液，把酒精完全除去。将0.3g灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶再次放入无菌缓冲溶液中浸泡2d，待溶胀平衡后加入0.2g血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中5℃静置吸附36h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
实施例2
(1)将0.15g甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和0.63g牛磺酸同时溶解于30mL的0.3mol/L碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入0.53g的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，0℃搅拌40min后取出，在20℃下继续搅拌36h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链。
(2)将壳聚糖溶解于27mL的0.12mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于6mL的0.05mol/L氢氧化钠溶液中，再将0.45g壳聚糖溶液、9.9g甘油磷酸盐溶液、0.135g含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，40℃反应30min，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶。
(3)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，7d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，30℃下保温24h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中2d，并且3次/天更换一次缓冲溶液，把酒精完全除去。将0.3g灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶再次放入无菌缓冲溶液中浸泡2d，待溶胀平衡后加入0.15g血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中2℃静置吸附24h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
实施例3
(1)将0.15g甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和0.6g牛磺酸同时溶解于30mL的0.5mol/L碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入0.5g的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，2℃搅拌35min后取出，在25℃下继续搅拌30h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链。
(2)将壳聚糖溶解于27mL的0.12mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于6mL的0.05mol/L氢氧化钠溶液中，再将0.45g壳聚糖溶液、6.75g甘油磷酸盐溶液、0.045g含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，37℃反应30min，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶。
(3)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，7d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，37℃下保温24h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中3d，并且3次/天更换一次缓冲溶液，把酒精完全除去。将0.3g灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶再次放入无菌缓冲溶液中浸泡3d，待溶胀平衡后加入0.15g血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中4℃静置吸附48h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
实施例4
(1)将0.15g甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和0.63g牛磺酸同时溶解于30mL的0.6mol/L碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入0.42g的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，2℃搅拌30min后取出，在25℃下继续搅拌24h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链。
(2)将壳聚糖溶解于27mL的0.08mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于6mL的0.01mol/L氢氧化钠溶液中，再将0.45g壳聚糖溶液、6.75g甘油磷酸盐溶液、0.045g含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，30℃反应5min，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶。
(3)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，7d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，40℃下保温24h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中3d，并且3次/天更换一次缓冲溶液，把酒精完全除去。将0.3g灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶再次放入无菌缓冲溶液中浸泡2d，待溶胀平衡后加入0.2g血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中6℃静置吸附48h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
实施例5
(1)将0.15g甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和0.54g牛磺酸同时溶解于30mL的0.3mol/L碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入0.42g的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，0℃搅拌30min后取出，在20℃下继续搅拌24h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链。
(2)将壳聚糖溶解于27mL的0.1mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于6mL的0.03mol/L氢氧化钠溶液中，再将0.45g壳聚糖溶液、8.1g甘油磷酸盐溶液、0.1g含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，35℃反应15min，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶。
(3)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，9d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，40℃下保温36h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射2h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中3d，并且4次/天更换一次缓冲溶液，把酒精完全除去。将0.3g灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶再次放入无菌缓冲溶液中浸泡3d，待溶胀平衡后加入0.24g血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中6℃静置吸附48h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
对比例1
(1)将壳聚糖溶解于27mL的0.1mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于6mL的0.03mol/L氢氧化钠溶液中，再将0.45g壳聚糖溶液和8.1g甘油磷酸盐溶液二者混合，搅拌均匀后注入模具中，37℃反应6min，得到壳聚糖温敏性水凝胶。
(2)将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，7d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，37℃下保温24h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中3d，并且4次/天更换一次缓冲溶液，把酒精完全除去。将0.3g灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶再次放入无菌缓冲溶液中浸泡3d，待溶胀平衡后加入0.2g血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中2℃静置吸附48h，得到缓释生长因子温敏性凝胶。
缓释生长因子温敏性凝胶的温度敏感性测定：将凝胶放在40℃的真空干燥箱内干燥，直至凝胶重量不变，然后将凝胶在0、25、30、32、34、36、38、40、45、50℃的蒸馏水中放置24h，溶胀平衡后迅速将凝胶取出、擦干、称重，计算溶胀度SR＝(WT-WD)/WD，得出最低临界温度。WT：对应温度下溶胀平衡时水凝胶重量，g；WD：水凝胶干重，g。
缓释生长因子温敏性凝胶的pH敏感性测定：将凝胶放在40℃的真空干燥箱内干燥，直至凝胶重量不变，然后将凝胶在pH为2、4、6、7、8、10、12的缓冲溶液中放置24h，溶胀平衡后迅速将凝胶取出、擦干、称重，计算溶胀度SR＝(WP-WD)/WD，得出溶胀度峰值。WP：对应pH下溶胀平衡时水凝胶重量，g；WD：水凝胶干重，g。
缓释生长因子温敏性凝胶的接触角测试：设置环境湿度为60-65％，温度为34℃，测定介质为超纯水，利用接触角测定仪在凝胶样品上五个不同的位置进行测定，结果取平均值。
| 最低临界温度(℃) | 溶胀度峰值 | 接触角(°) | |
| 实施例1 | 34.31 | 12.4 | 75.6 |
| 实施例2 | 33.89 | 12.5 | 84.3 |
| 实施例3 | 34.98 | 11.9 | 90.7 |
| 实施例4 | 34.12 | 11.7 | 92.8 |
| 实施例5 | 34.27 | 12.0 | 84.3 |
| 对比例1 | 33.01 | 9.3 | 95.1 |
缓释生长因子温敏性凝胶的体外释放生长因子性能测试：将凝胶浸泡在无菌磷酸盐缓冲溶液中，待溶胀平衡取出，用无菌磷酸盐缓冲溶液洗涤三次，然后放入装有无菌磷酸盐缓冲溶液的离心管中，在34℃的空气气氛中恒温振荡，分别在2、4、8、16、24、72、144、240h取样离心，并补充同量的无菌磷酸盐缓冲溶液，用ELISA法测定凝胶释放出的血管内皮生长因子的量。采用SPSS17.0软件进行统计学分析，再先后用F检验和t检验对数据进行处理，以P<0.05为差异有统计学意义。
各实施例中血管内皮生长因子的累计释放率随着时间的增加而缓慢增加，然而对比例中的血管内皮生长因子的累计释放率随着时间的增加而快速增加，并且无法释放完全，说明含磺酸多肽链的温敏性凝胶能有效控制生长因子缓慢释放。
Claims (1)
1.一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法，其特征在于：所述制备方法如下：
（1）将甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸五肽和牛磺酸同时溶解于碳酸氢钠溶液中，然后把混合物放入冰水浴中，再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，0-5 ℃搅拌30-40 min后取出，在20-30 ℃下继续搅拌24-36 h，然后透析除去未反应完全的反应物，将产物冷冻干燥，得到含磺酸多肽链；
（2）将壳聚糖溶解于0.08-0.12 mol/L盐酸溶液中，甘油磷酸盐溶解于0.01-0.05 mol/L氢氧化钠溶液中，再将壳聚糖溶液、甘油磷酸盐溶液、含磺酸多肽链三者混合，搅拌均匀后注入模具中，保温反应，得到含多肽壳聚糖温敏性水凝胶；
（3）将pH7.4的磷酸盐缓冲溶液用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌处理，再将灭菌后的含多肽壳聚糖温敏性水凝胶放入无菌缓冲溶液中浸泡2-3 d，待溶胀平衡后加入血管内皮生长因子，在低温冷藏箱中2-6 ℃静置吸附24-48 h，得到缓释生长因子温敏性凝胶；
所述（1）中碳酸氢钠溶液的浓度为0.3-0.6 mol/L；
所述（1）中甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸、牛磺酸和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的质量比为1:3.6-4.2:2.8-3.5；
所述（2）中壳聚糖、甘油磷酸盐和含磺酸多肽链的质量比为1:15-22:0.1-0.3；
所述（2）中保温反应的温度为30-40 ℃，时间为5-30 min；
所述（3）中凝胶的灭菌为：将含多肽壳聚糖温敏性水凝胶浸泡在超纯无菌水中，7-9 d后取出并浸泡在磷酸盐缓冲溶液中，30-40 ℃下保温24-36 h，然后再次取出浸泡在酒精中，同时放在紫外光灯下照射1-2 h，灭菌后将水凝胶浸泡在已灭菌的磷酸盐缓冲溶液中2-3 d；
所述（3）中含多肽壳聚糖温敏性水凝胶和血管内皮生长因子的质量比为1:0.5-0.8。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310337739.0A CN116407618B (zh) | 2023-03-31 | 2023-03-31 | 一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310337739.0A CN116407618B (zh) | 2023-03-31 | 2023-03-31 | 一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116407618A CN116407618A (zh) | 2023-07-11 |
| CN116407618B true CN116407618B (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=87054322
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310337739.0A Active CN116407618B (zh) | 2023-03-31 | 2023-03-31 | 一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116407618B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103948962A (zh) * | 2014-05-09 | 2014-07-30 | 天津工业大学 | 一种结合生长因子型温敏水凝胶生物载体的制备方法 |
| CN106479965A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-03-08 | 武汉枫霖科技有限公司 | 一种增强聚乙二醇水凝胶生物相容性和降解性的方法 |
| KR20200060666A (ko) * | 2018-11-22 | 2020-06-01 | 광주과학기술원 | 플라그 표적화 펩타이드 및 키토산이 결합된 플루로닉 고분자를 포함하는 플라그 표적화 나노전달체 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101138634A (zh) * | 2006-09-07 | 2008-03-12 | 于保法 | 用于治疗肿瘤的组合物 |
| US11261271B2 (en) * | 2018-08-09 | 2022-03-01 | Korea Institute Of Science And Technology | Thermosensitive phosphazene-based polymer comprising sulfate moiety, and preparation method and use thereof |
-
2023
- 2023-03-31 CN CN202310337739.0A patent/CN116407618B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103948962A (zh) * | 2014-05-09 | 2014-07-30 | 天津工业大学 | 一种结合生长因子型温敏水凝胶生物载体的制备方法 |
| CN106479965A (zh) * | 2016-10-12 | 2017-03-08 | 武汉枫霖科技有限公司 | 一种增强聚乙二醇水凝胶生物相容性和降解性的方法 |
| KR20200060666A (ko) * | 2018-11-22 | 2020-06-01 | 광주과학기술원 | 플라그 표적화 펩타이드 및 키토산이 결합된 플루로닉 고분자를 포함하는 플라그 표적화 나노전달체 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Hydrogel Scaffolds:Towards Restitution of Ischemic Stroke-Injured Brain;Aswathi Gopalakrishnan等;Translational Stroke Research;20180827;第10卷;第1-18页 * |
| 谷氨酰胺转氨酶催化的自组装短肽(ImKn)水凝胶表面功能化及其应用;王景新;中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）;20180615(第6期);B016-415页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116407618A (zh) | 2023-07-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2023280235A1 (zh) | 含at结合序列和连续2-o-葡糖醛酸残基的肝素分子及其制备方法与应用 | |
| CN116407618B (zh) | 一种缓释生长因子温敏性凝胶的制备方法 | |
| CN114796620A (zh) | 一种用作医用植入材料的互穿网络水凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN113583455B (zh) | 一种胶原蛋白-改性壳聚糖双网络水凝胶、生物墨水、制备方法和应用 | |
| CN109481339B (zh) | 一种胶原基复合水凝胶面膜材料及其制备方法和应用 | |
| Acharya et al. | Performance evaluation of a silk protein‐based matrix for the enzymatic conversion of tyrosine to l‐DOPA | |
| CN103588981A (zh) | 酶解角蛋白基高分子水凝胶的制备及作为药物载体的应用 | |
| CN112608349A (zh) | 一种具有抗氧化活性的古罗糖醛酸寡糖的制备方法 | |
| CN106432548B (zh) | 基于硫醇-烯点击化学的脂肪酸化肝素的制备及表征 | |
| CN113354836B (zh) | 一种硫酸化甘露葡萄糖醛酸水凝胶的制备及应用 | |
| CN113663118B (zh) | 一种酯化改性淀粉止血材料的应用 | |
| CN106350562B (zh) | 藻蓝蛋白降血糖肽的制备方法 | |
| CN113024662B (zh) | 一种抗糖化的胶原蛋白肽及其制备方法 | |
| CN113350572B (zh) | 一种医用温敏型水凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN115160450A (zh) | 鳞杯伞多糖的快速制备方法及其应用 | |
| CN114652743A (zh) | 一种基于海藻酸钠的一氧化氮供体及其合成方法和应用 | |
| CN113599292A (zh) | 一种小分子寡糖保湿凝胶的制备方法 | |
| CN1152964C (zh) | 保护临床化学用质量控制血清中酶活性的方法 | |
| CN111617029A (zh) | 洛索洛芬钠凝胶及其制备方法 | |
| CN114106215A (zh) | 一种巯基修饰的透明质酸（钠）及其交联产物以及它们的制备方法和应用 | |
| CN114767935B (zh) | 一种镁基复合凝胶材料、制备方法及应用 | |
| CN110152060A (zh) | 一种应用于损伤修复的人工骨修复复合材料及其制备方法 | |
| CN110777129A (zh) | 一种单宁酶的共交联固定化方法 | |
| CN113045760B (zh) | 一种基于透明质酸和α-D-半乳糖的聚合物刷及其制备方法和应用 | |
| CN108276484B (zh) | 阶梯控温水解制备柞蚕丝素肽的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |