CN116348481A - 使用工程化配体的材料和方法 - Google Patents

使用工程化配体的材料和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116348481A
CN116348481A CN202180070239.4A CN202180070239A CN116348481A CN 116348481 A CN116348481 A CN 116348481A CN 202180070239 A CN202180070239 A CN 202180070239A CN 116348481 A CN116348481 A CN 116348481A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tl1a
amino acid
engineered
acid sequence
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180070239.4A
Other languages
English (en)
Inventor
A·兹沃拉克
S·陈
R·甘尼桑
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Janssen Biotech Inc
Original Assignee
Janssen Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Biotech Inc filed Critical Janssen Biotech Inc
Publication of CN116348481A publication Critical patent/CN116348481A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本文描述了包含工程化TL1A配体的组合物和试剂盒，该工程化TL1A配体表现出高稳定性、与诱饵受体DcR3的结合最小，同时通过与其细胞表面受体DR3的结合保持功能活性，以及具有在体外和体内活化T细胞的能力。还提供了制备工程化TL1A配体的方法和通过施用工程化TL1A配体来治疗受试者的疾病或病症的方法。

Description

使用工程化配体的材料和方法
相关申请的交叉引用
本专利申请要求2020年8月19日提交的美国序列号63/067,808、2020年8月19日提交的美国序列号63/067,803、2020年8月19日提交的美国序列号63/067,820、2020年8月19日提交的美国序列号63/067,833、2020年8月19日提交的美国序列号63/067,813、2021年2月12日提交的美国序列号63/149,171、2021年2月12日提交的美国序列号63/149,173、2021年2月12日提交的美国序列号63/149,174、2021年2月12日提交的美国序列号63/149,175和2021年2月12日提交的美国序列号63/149,177的权益，这些专利中的每一篇的公开内容全文以引用方式并入本文。
1.技术领域
本文描述了包含工程化TL1A配体的组合物和试剂盒，该工程化TL1A配体表现出高稳定性、与诱饵受体DcR3的结合最小，同时通过与其细胞表面受体DR3的结合保持功能活性，以及具有在体外和体内活化T细胞的能力。还提供了制备工程化TL1A配体的方法和通过施用工程化TL1A配体来治疗受试者的疾病或病症的方法。
2.以电子方式提交的参考序列表
本申请包含序列表，该序列表作为ASCII格式的序列表经由EFS-Web以电子方式递交，文件名为“14620-570-228_SEQ_LISTING.txt”，创建日期为2021年8月12日，并且大小为324,373字节。经由EFS-Web提交的该序列表是本说明书的一部分并且全文以引用方式并入本文。
3.背景技术
肿瘤坏死因子家族成员TNF样因子1A(TL1A)共刺激受体(也称为TNF超家族成员15(TNFSF15))在多种细胞类型上作为II型单次跨膜蛋白而表达。它可以从细胞表面裂解，并且可溶性或膜结合性TL1A与共刺激死亡受体3(DR3)结合。TL1A也可以被可溶性诱饵受体DcR3(TNFRSF6B)结合，该受体模拟细胞表面受体的结构但缺乏跨膜区或胞质区。DcR3在结构上与DR3同源，但与DR3仅共享约20％的序列同一性。DcR3在多种肿瘤中上调并与转移有关(Hsieh和Lin,2017；Lin和Hsieh,2011；Wei等人,2019；Zhang等人,2017)。DcR3诱饵受体可以用作防止TNF配体活化T细胞的库，并且可溶性诱饵受体可以被肿瘤上调。具体地，诱饵受体DcR3可以以比其细胞表面受体DR3更高的亲和力结合TL1A，并且可以防止基于TL1A的T细胞共刺激(Hsieh和Lin,2017；Lin和Hsieh,2011)。
TL1A阻断抗体已在临床上用于治疗溃疡性结肠炎(Banfield等人,2020)。TL1A与DR3之间的相互作用有助于T细胞活化，导致炎性细胞因子产生和T细胞增殖增加。TL1A:DR3轴的治疗靶向仍然存在重大挑战。结合的3:3化学计量和相互作用的精细调整的亲和力表明，与基于抗体的方法相比，基于配体的方法可以更适于T细胞活化。然而，高水平的DcR3需要更高的给药方案或工程化以消除DcR3结合。因此，存在对产生工程化TL1A配体的尚未满足的需要，这些工程化TL1A配体将形成能够结合DR3但不结合DcR3的稳定三聚体，并且将适合于T细胞活化的治疗性开发。
4.发明内容
在一个方面，本文提供了一种工程化TL1A配体，其中该工程化TL1A配体包含三聚复合物，该三聚复合物包含：三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体形成非共价TL1A三聚体；或三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体共价连接形成单链TL1A(scTL1A)三聚体。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体还包含蛋白质稳定区。在一些实施方案中，该蛋白质稳定化区包含Fc区或人血清白蛋白(HSA)区。
在一些实施方案中，本文提供了一种工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含：非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含：两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；两个scTL1A三聚体和一个Fc区；一个scTL1A三聚体和一个Fc区；一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体通过接头共价结合。在一些实施方案中，该接头为肽接头。在一些实施方案中，该接头具有Gly-Ser或其多个重复的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。在一些实施方案中，该非共价TL1A三聚体或该scTL1A三聚体与Fc区的C端融合。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的氨基酸残基72-251。
在一些实施方案中，本文提供了一种工程化TL1A配体，其中该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的残基72-251的至少一个氨基酸改变。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体在SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处具有一个或多个改变，该一个或多个改变选自由R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241组成的组。
在一些实施方案中，SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处的一个或多个改变是选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q的改变。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的一个或多个氨基酸改变，该一个或多个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含：在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ IDNO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ IDNO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包括双特异性抗体。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体与异源多肽融合。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体与药剂缀合。在一些实施方案中，该药剂为毒素。
在一个方面，本文提供了一种工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含：能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体具有比野生型TL1A更长的血清半衰期。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体与野生型TL1A相比具有高单分散性和/或稳定性。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体可以在体外共刺激T细胞。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体可以在受试者中共刺激T细胞。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体可以增加有需要的受试者中一种或多种细胞因子的产生。在一些实施方案中，该一种或多种细胞因子包括IFNγ和TNFα。
在一些实施方案中，受试者患有自身免疫病症或癌症。在一些实施方案中，该自身免疫病症或癌症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，包括横纹肌肉瘤。
本文进一步提供了一种编码工程化TL1A配体的核酸。在一些实施方案中，本文提供了一种药物组合物，该药物组合物包含工程化TL1A配体或核酸以及药学上可接受的赋形剂。
在一个方面，本文提供了一种治疗受试者的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的工程化TL1A配体，其中该工程化TL1A配体是三聚复合物，该三聚复合物包含：三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体形成非共价TL1A三聚体；或三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体共价连接形成单链TL1A(scTL1A)三聚体。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体还包含蛋白质稳定区。在一些实施方案中，该蛋白质稳定化区包含Fc区或HSA区。
在一些实施方案中，本文提供了一种方法，其中多聚工程化TL1A配体包含工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含：非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
在一些实施方案中，该多聚工程化TL1A配体包含：两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；两个scTL1A三聚体和一个Fc区；一个scTL1A三聚体和一个Fc区；一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
在一些实施方案中，该方法的工程化TL1A配体包含scTL1A三聚体，并且其中所述三个TL1A单体通过接头共价结合。在一些实施方案中，该接头为肽接头。在一些实施方案中，该接头具有Gly-Ser或其多个重复的氨基酸序列。在一些实施方案中，该Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。在一些实施方案中，该非共价TL1A三聚体或该scTL1A三聚体与Fc区的C端融合。
在一些实施方案中，该TL1A单体包含SEQ ID NO:94的氨基酸残基72-251。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的残基72-251的至少一个氨基酸改变。
在一些实施方案中，该方法的工程化TL1A配体在SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处具有一个或多个改变，该一个或多个改变选自由R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241组成的组。
在一些实施方案中，该一个或多个残基位置处的一个或多个改变是选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q的改变。
在一些实施方案中，该氨基酸改变包括SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的一个或多个氨基酸改变，该一个或多个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。在该方法的一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含：在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ IDNO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ IDNO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体在治疗中使用。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体在治疗自身免疫病症或癌症中使用。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体在治疗自身免疫病症或癌症中使用，其中该自身免疫病症或癌症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、IBD、COPD、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，其中任选地该肉瘤是横纹肌肉瘤。
在一些实施方案中，本文提供了一种方法，其中该工程化TL1A配体包含双特异性抗体。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体与异源多肽融合。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体与药剂缀合。在一些实施方案中，该药剂为毒素。
在一个方面，本文提供了一种治疗受试者的疾病或病症的方法，该方法包括向受试者施用有效量的工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含：能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件。
在一些实施方案中，本文提供了一种方法，其中该工程化TL1A配体具有比野生型TL1A更长的血清半衰期。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体与野生型TL1A相比具有高单分散性和/或稳定性。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体可以在体外共刺激T细胞。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体可以在该受试者中共刺激T细胞。在一些实施方案中，该工程化TL1A配体可以增加有需要的受试者中一种或多种细胞因子的产生。在一些实施方案中，该一种或多种细胞因子包括IFNγ和TNFα。
在一些实施方案中，本文提供了一种方法，其中该疾病或病症是自身免疫病症或癌症。在一些实施方案中，该疾病或病症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，包括横纹肌肉瘤。
在一个方面，本文提供了一种制备工程化TL1A配体的方法，该方法包括(i)执行引入SEQ ID NO:94的氨基酸序列的至少一个氨基酸改变的功能的步骤，该至少一个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F；以及(ii)执行产生工程化TL1A配体群的功能的步骤。在一些实施方案中，该方法还包括将工程化TL1A配体与异源多肽融合的步骤。
在一些实施方案中，该异源多肽包含蛋白质稳定区。在一些实施方案中，该蛋白质稳定化区包含Fc区或HSA区。
在一些实施方案中，该方法还包括生成多聚工程化TL1A配体的步骤。在一些实施方案中，该多聚工程化TL1A配体包含：非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
在一些实施方案中，该方法还包括生成多聚工程化TL1A配体的步骤，其中该多聚工程化TL1A配体包含：两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；两个scTL1A三聚体和一个Fc区；一个scTL1A三聚体和一个Fc区；一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
在一些实施方案中，本文提供了一种方法，其中该工程化TL1A配体包含SEQ IDNO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
在一些实施方案中，该工程化TL1A配体包含：在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ IDNO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ IDNO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列。
4.1术语和缩写
如本文所用，术语“可溶性蛋白质”是指可以以可溶形式从细胞膜释放或从细胞分泌的蛋白质或其片段。
如本文所用，术语“融合蛋白”或“融合多肽”是指通过肽键或通过接头(例如，融合到Fc的C端上的单链TL1A)连接的两个或更多个单独的氨基酸序列。
如本文所用，术语“接头”或“接头区”是指插入第一氨基酸序列与第二氨基酸序列之间的间隔区(例如，通过Gly-Ser接头连接形成单链scTL1A的TL1A单体)。在一些实施方案中，该接头为肽接头。接头不应不利地影响多肽的表达、分泌或生物活性。优选地，接头不是抗原性的并且不引发免疫应答。在一些实施方案中，接头是内源氨基酸序列、外源氨基酸序列(例如，富含GS的序列)或非肽化学接头。
术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区域，包括例如天然序列Fc区、重组Fc区和变异Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但人IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226的氨基酸残基或从Pro230(根据EU编号系统)延伸到其羧基端。Fc区的C端赖氨酸(残基447根据EU编号系统)可例如在抗体的生产或纯化期间或通过重组工程化编码抗体重链的核酸来去除。提供了以下示例性Fc区序列：GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP(SEQ ID NO:188)。
术语“选择性结合”或“特异性结合”是指多肽或分子与表位、蛋白质或靶分子的相互作用比与替代物质(包括相关和不相关的蛋白质)的相互作用更频繁、更快速、具有更长的持续时间、具有更大的亲和力或具有上述的一些组合。在一些实施方案中，“特异性结合”是指例如多肽或分子以约0.1mM或更小、但更通常小于约1μM的KD结合蛋白质或靶标。在一些实施方案中，“特异性结合”是指多肽或分子以至少约0.1μM或更小、至少约0.01μM或更小、或至少约1nM或更小的KD结合靶标。由于不同物种中同源蛋白质之间的序列同一性，特异性结合可以包括识别多于一个物种中的蛋白质或靶标的多肽或分子。同样地，由于不同蛋白质的多肽序列的某些区域内的同源性，特异性结合可以包括识别多于一种蛋白质或靶标的多肽或分子。应当理解，在一些实施方案中，特异性结合第一靶标(例如，DR3)的多肽或分子可以特异性结合或不特异性结合第二靶标(例如，DcR3)。因此，“特异性结合”不一定需要(尽管它可以包括)排他性结合，即结合到单个靶标。因此，在一些实施方案中，多肽或分子可以特异性结合多于一种靶标。在一些实施方案中，多个靶标可以被多肽或分子上的相同抗原结合位点结合。例如，在某些情况下，抗体可以包含两个相同的抗原结合位点，每个抗原结合位点特异性结合两种或更多种蛋白质上的相同表位。在某些另选的实施方案中，抗体可以是双特异性的并且包含至少两个具有不同特异性的抗原结合位点。一般来讲，但不一定，提及“结合定”是指“特异性结合”。
在两个或更多个核酸或多肽的上下文中，术语“相同”或“同一性”百分比是指当进行比较和比对(在常规情况下引入缺口)以获得最大对应性时，相同的或具有相同的核苷酸或氨基酸残基的指定百分比的两条或更多条序列或子序列，不考虑任何保守氨基酸取代作为序列同一性的一部分。同一性百分比可以使用序列比较软件或算法或通过视觉检查来测量。可用于获得氨基酸或核苷酸序列比对的各种算法和软件是本领域熟知的。这些包括但不限于BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin Package及其变体。在一些实施方案中，本发明的两个核酸或多肽是基本上相同的，这意味着当以最大对应性进行比较和比对时，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％并且在一些实施方案中至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的核苷酸或氨基酸残基同一性，如使用序列比较算法或通过目视检查所测量的。在一些实施方案中，同一性存在于氨基酸序列的长度为至少约10个残基、至少约20个残基、至少约40-60个残基、至少约60-80个残基或它们之间的任何整数值的区域上。在一些实施方案中，同一性存在于比60-80个残基更长的区域上，诸如至少约80-100个残基，并且在一些实施方案中，序列在被比较的序列的全长上是基本上相同的，诸如靶蛋白或抗体的编码区。在一些实施方案中，同一性存在于核苷酸序列的长度为至少约10个碱基、至少约20个碱基、至少约40-60个碱基、至少约60-80个碱基或它们之间的任何整数值的区域上。在一些实施方案中，同一性存在于比60-80个碱基更长的区域上，诸如至少约80-1000个碱基或更多，并且在一些实施方案中，序列在被比较的序列的全长上是基本上相同的，诸如编码感兴趣的蛋白质的核苷酸序列。
“保守氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被具有带类似化学特性的侧链的另一个氨基酸残基替换的取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中一般定义，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。例如，用苯丙氨酸取代酪氨酸是保守取代。一般来讲，本公开的多肽、可溶性蛋白质和/或抗体的序列中的保守取代不会消除含有氨基酸序列的多肽、可溶性蛋白质或抗体与靶结合位点的结合。鉴定不消除结合的氨基酸保守取代的方法是本领域熟知的。
术语“多肽”是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可为直链或支链的，其可包含经修饰的氨基酸，并且其可夹杂有非氨基酸。该术语还涵盖已被天然修饰或通过干预修饰的氨基酸聚合物；天然修饰或干预修饰为例如二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，诸如与标记组分缀合。该定义还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸)以及本领域已知的其他修饰的多肽。应当理解，因为本发明的多肽可以基于抗体或免疫球蛋白超家族的其他成员，所以在一些实施方案中，多肽可以作为单链出现。术语“多肽”还包括作为天然存在的结构变体的氨基酸的相关聚合物，以及通过肽键连接的其合成的非天然存在的类似物。合成多肽可例如使用自动多肽合成器合成。
如本文所用，术语“免疫应答”包括来自先天免疫系统和适应性免疫系统的应答。它包括细胞介导的和/或体液免疫应答。它包括T细胞和B细胞应答，以及来自免疫系统的其他细胞诸如自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、巨噬细胞等的应答。
术语“受试者”是指任何动物(例如，哺乳动物)，包括但不限于人、非人灵长类动物、犬科动物、猫科动物、啮齿动物等，其将成为特定治疗的接受者。通常，术语“受试者”和“患者”在本文中在提及人类受试者时互换使用。
术语“药学上可接受的”是指由联邦政府或州政府的监管机构批准的或者在美国药典或其他公认的药典中批准或列出的用于在动物(包括人)中使用的物质。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂”是指可以与本公开的至少一种药剂一起施用于受试者并且当以足以递送治疗效果的剂量施用时不破坏其药理学活性并且无毒的赋形剂、载体或佐剂。一般来讲，本领域技术人员和美国FDA认为药学上可接受的赋形剂、载体或佐剂是任何制剂的非活性成分。
术语“有效量”或“治疗有效量”或“治疗效果”是指本文所述的多肽或分子(例如，融合蛋白、可溶性配体、抗体、多肽、多核苷酸)有效“治疗”受试者诸如哺乳动物的疾病或病症的量。在癌症或肿瘤的情况下，治疗有效量的多肽或分子(例如，多肽、可溶性TL1A蛋白或TL1A融合体)具有治疗效果，并且因此可以增强免疫应答、增强抗肿瘤应答、增加免疫细胞的溶细胞活性、增加免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤、减少肿瘤细胞的数量；降低致瘤性、致瘤发生率或致瘤能力；减少癌症干细胞的数量或频率；减小肿瘤尺寸；减少癌细胞数量；抑制或阻止癌细胞浸润到外周器官中，包括例如癌症扩散到软组织和骨中；抑制和终止肿瘤或癌细胞转移；抑制和终止肿瘤或癌细胞生长；在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状；降低发病率和死亡率；提高生活质量；增加实体瘤/肿瘤中肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL，包括CD8+/细胞毒性T细胞)的数量；在实体瘤中形成三级淋巴样结构或这些作用的组合。
术语“肿瘤性疾病”是指以细胞不受控制的异常生长为特征的病症。肿瘤性疾病包括癌症。癌症的示例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。这些癌症的更具体示例包括乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、结肠直肠癌、宫颈癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、皮肤癌、黑色素瘤、脑癌、卵巢癌、成神经细胞瘤、骨髓瘤、各种类型的头颈癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓样白血病、尤文肉瘤和外周神经上皮瘤。本文列出的所有可能的癌症都作为单独的种类包括在本发明中，或者可以从本发明中排除。
当用于本文所述的任何多肽或核酸时，如本文所用，“工程化”或“变体”是指与亲本序列相比在氨基酸位置或核酸位置具有至少一个变化或改变的序列。亲本序列可以是例如未修饰的野生型序列、其同源物或例如野生型序列或其同源物的修饰变体。
如本文所用，术语“分子建模算法”是指用于大分子结构预测的计算方法。例如，这些可以包括比较蛋白质建模方法，包括同源建模方法或蛋白质线程建模方法，并且还可以包括从头计算或从头计算蛋白质建模方法，或任何此类方法的组合。
如本文所用，术语“TL1A配体”包括TL1A配体的变体、同种型和物种同系物。TL1A配体可以指TL1A的任何功能片段，例如，可以结合TL1A的受体(例如，DR3)的片段。示例性人TL1A的完整氨基酸序列具有Swiss-Prot登录号095150(hTL1A 1-251(SEQ ID NO:94))。TL1A也称为TNFSF15、TNF样蛋白1A、VEGI、TNFyP。人TL1A被Entrez Gene命名为GenelD:9966，被HGNC命名为15HGNC:11931。TL1A可以由命名为TNFSF15/TL1A的基因编码。
术语“蛋白质稳定区”是指可以连接或融合至蛋白质或多肽(例如，共价连接)并且可以赋予蛋白质或多肽增加的半衰期或稳定性的外源区。融合技术广泛用于蛋白质-药物开发以增加蛋白质治疗剂的活性、稳定性和生物利用度，并且许多蛋白质稳定部分是本领域已知的。蛋白质稳定区可以是本领域已知的任何部分，例如，肽/多肽、核酸、碳水化合物、脂肪酸、有机分子或它们的组合。作为非限制性示例，本文所述的蛋白质稳定区可以是HSA或免疫球蛋白G的Fc区。例如，HSA是一种高度丰富且充分研究的血清蛋白，其半衰期为19-22天(Peters,T.The Albumin Molecule in All About Albumin 9–75(Elsevier,1995))。
5.附图说明
图1A至图1E描述了构建体的设计。(A)TL1A的示意图，包括残基35至56的跨膜区(TM)和残基80至250的肿瘤坏死因子同源结构域(TNFHD)。残基N133和N229是糖基化位点，残基C162和C202形成二硫键。(B)TL1A单体的带状图描述。(C)具有C端His标签的TL1A配体作为非共价三聚体(TL1A)或单链三聚体(scTL1A)表达(分别为左图和右图)。(D)TL1A作为与人IgG1 Fc(Fc-TL1A)的C端的融合体(Fc-scTL1A)而表达，或通过Fc-TL1A与His-TL1A的共表达(Fc-His-TL1A)而表达(分别为左图、中图和右图)。(E)TL1A被表达为HSA单体(HSA-TL1A)或HSA-scTL1A(分别为左图和右图)。
图2A至图2F描述了TL1A构建体的寡聚状态和功能的分析。(A)所示TL1A构建体的制备性凝胶过滤分析。重组TNFα(His-scTNFα)用作对照以示出三聚体和寡聚体的数量。(B)所示TL1A构建体在制备性凝胶过滤纯化后用于分离所需的寡聚物质的分析型SEC分析。纯化的物质用于功能测定。(C)-(D)TL1A构建体结合固定的DR3(C)或DcR3(D)的能力的ELISA分析。将每个构建体的TL1A的摩尔浓度归一化为每个分子中TL1A三聚体的浓度。(E)-(F)来自健康供体的Pan T细胞与板结合的抗CD3抗体(0.01μg/mL)一起孵育。将所示TL1A配体以0nM、0.03nM、0.1nM、0.3nM、1nM、3nM、10nM、30nM或100nM(三聚体摩尔浓度)添加到α-CD3活化的T细胞(从左至右的柱)。示出了由活化的T细胞产生的IFNγδ(E)和TNFαδ(F)的水平。
图3描述了Fc-TL1A配体在体内活化T细胞。用抗CD3抗体和Fc-TL1A或Fc-scTL1A处理小鼠，并测量IFNγ的血清浓度。IFNγδ水平以pg/mL示出，构建体示出在图上。
图4A至图4G描述了TL1A单分散性的优化。(A)TL1A三聚体的晶体结构的结构描述，改编自示出了TL1A的三个亚基的蛋白质数据库(PDB)ID 2RE9。一个亚基示出为带状，而其他两个亚基示出为灰色表面。对于维持DR3结合至关重要的C162-C202二硫键的位置用箭头表示。(B)示出靶二聚体物质(中灰色填充)、不期望的四聚体物质(浅灰色填充)和不期望的异质寡聚体物质(深灰色填充)的蛋白A捕获后Fc-scTL1A(TL1W14；SEQ ID NO:87)的分析型SEC分析(灰色线)。Fc-scTL1A在还原条件下的洗脱曲线示出为黑色迹线。(C)C162/C202突变体结合DR3的能力的ELISA分析。TL1A变体被设计为His-TL1A(非共价三聚体)，并且在图中指出同一性。(D)TL1A-C162S、C202S可以结合DcR3但不能结合DR3。通过表面等离子共振(SPR)分析所选择的His-TL1A形式的TL1A变体结合DR3(左)和DcR3(右)的能力。使用山羊抗人Fc固定Fc-DR3/DcR3，并指示TL1A变体流过固定的受体。(E)Fc-scTL1A(TL1W14；SEQ IDNO:87)在非还原缓冲液中蛋白A纯化后(黑色迹线)、在1X PBS中氧化还原后(中灰色迹线，峰在左侧)和在低盐缓冲液中氧化还原后(浅灰色迹线)的分析型SEC分析。(F)通过凝胶过滤纯化的或在氧化还原后回收二聚靶物质的Fc-scTL1A(TL1W14；SEQ ID NO:87)的结合的ELISA比较。这些柱表明TL1A配体从左至右从0nM至300nM增加。(G)示出scTL1A部分远离Fc取向的Fc-scTL1A(TL1W14；SEQ ID NO:87)分子的溶液X射线散射分析。
图5A至图5F描述了特异性降低DcR3结合的构建体的设计。(A)基于PDB ID 3K51的与TL1A结合的DcR3复合物的草图表示。DcR3分子示出为条带，TL1A亚基示出为表面。在相邻单体之间的界面处，TL1A上对DcR3的结合表面被框起来。加框区域在图5B中示出。(B)基于PDB ID 3K51与DcR3(左)、或基于TL1A:DR3复合物的结构模型与DR3(右)相互作用的TL1A上的残基的图示。本研究中突变的残基以深灰色圈出。(C-F)所示TL1A的单点突变体(C-D)或组合突变体(E-F)结合DR3(C、E)或DcR3(D、F)的能力的ELISA分析。图中示出了突变。
图6A至图6B描述了Fc-TL1A-AKALFF对基于DcR3的抑制具有免疫力。(A)TL1A变体Fc-scTL1A-AKALFF共刺激T细胞和抵抗DcR3介导的竞争的示意图。(B)用0.1δμg固定的抗CD3抗体单独或在存在外源DcR3的情况下以10δμg/mL处理T细胞。Fc-scTL1A(SEQ ID NO:87)(深灰色，中图)或Fc-scTL1A AKALFF(SEQ ID NO:91)(浅灰色，左图)用于共刺激T细胞。使用抗CD28 Ab作为共刺激阳性对照。没有共刺激信号的抗CD3活化的T细胞用作阴性对照。IFNγ水平通过MSD测定法(Meso Scale Discovery电化学发光测定法)测量。
图7A至图7D描绘了溶液x射线散射分析。(A)减去缓冲液的由AAP产生的散射曲线在Primus中显示，并基于点10-100彼此按比例缩放。显示了点1-170。插图显示了其在低q范围的相同放大倍数。曲线表明样本在11.85mg/mL时几乎没有聚集。(B)散射数据的距离分布(P(r))和Kratky图。(C)散射数据的Guinier分析。(D)将TL1W14(SEQ ID NO:87)的TL1A和Fc组分手动对接到珠模型中，达到11.85mg/mL浓度。由PDB ID 1L6X产生的Fc二聚体。来自PDBID 2RE9的TL1A三聚体。
图8A至图8C描述了TL1A变体对DR3结合的基于ELISA的分析。
(A)所示TL1A的单点变体与DR3结合的ELISA分析。(B)所示TL1A的单点变体与DcR3结合的ELISA分析。(C)设计用于评估糖基化对结合的作用的所示TL1A突变体的DR3结合的ELISA分析。
6.具体实施方式
肿瘤坏死因子家族成员TNF样因子1A(TL1A)，也称为TNF样蛋白1A(TNFSF15)，是同源三聚TNF超家族配体。TL1A在多种细胞类型上作为II型单次跨膜蛋白而表达。它可以作为可溶性配体从细胞表面裂解进入循环，并结合T细胞共刺激死亡受体3(DR3)。TL1A还可以被可溶性诱饵受体DcR3(TNFRSF6B)结合，后者在结构上与DR3同源，但与DR3仅共享约20％的序列同一性。
本公开至少部分基于对促进特异性TL1A配体结合DR3而不是DcR3的治疗策略的认识。它作为共刺激受体来克服实体瘤中的T细胞衰竭的潜力使DR3成为有吸引力的免疫检查点靶标。
6.1TL1A配体
在一些实施方案中，用于本文所述方法的工程化TL1A配体能够结合TNFRSF成员死亡受体3(DR3)。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体能够以与DR3受体相互作用的3:3化学计量结合DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体特异性结合DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以与野生型TL1A的亲和力类似的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力更高的亲和力结合DR3，例如，高至少约10％的亲和力、高至少约20％的亲和力、高至少约30％的亲和力、高至少约40％的亲和力、高至少约50％的亲和力、高至少约60％的亲和力、高至少约70％的亲和力、高至少约80％的亲和力、高至少约90％的亲和力、高至少100％的亲和力、高至少200％的亲和力、高至少400％的亲和力或更多。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约10％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约20％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约30％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约40％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约50％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约60％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约70％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约80％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少约90％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少100％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少200％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高至少400％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约10％至约100％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约10％至约50％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约10％至约20％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约20％至约400％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约50％至约400％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约100％至约400％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约20％至约50％的亲和力结合DR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力高约50％至约100％的亲和力结合DR3。也考虑了这些百分比的其他中间范围。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A以比野生型TL1A的亲和力更低的亲和力结合DcR3，例如，低至少约10％的亲和力、低至少约20％的亲和力、低至少约30％的亲和力、低至少约40％的亲和力、低至少约50％的亲和力、低至少约60％的亲和力、低至少约70％的亲和力、低至少约80％的亲和力、低至少约90％的亲和力、低至少100％的亲和力、低至少200％的亲和力或更多。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约10％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约20％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约30％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约40％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约50％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约60％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约70％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约80％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少约90％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少100％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少200％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低至少400％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约10％至约100％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约10％至约50％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约10％至约20％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约20％至约400％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约50％至约400％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约100％至约400％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约20％至约50％的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体以比野生型TL1A的亲和力低约50％至约100％的亲和力结合DcR3。也考虑了这些百分比的其他中间范围。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体不结合DcR3。在一些实施方案中，工程化TL1A配体不显示可测量的与DcR3的结合。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含三聚配体。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含通过三聚界面特异性结合DR3的三聚配体。在一些实施方案中，工程化TL1A配体通过天然的非共价相互作用三聚化。在一些实施方案中，工程化TL1A配体三聚化为单链(sc)，例如，使用接头。接头可以是本领域已知的任何接头。在一些实施方案中，该接头为肽接头。在一些实施方案中，接头不会不利地影响工程化TL1A配体的表达、分泌或生物活性。在一些实施方案中，接头不会不利地影响工程化TL1A配体的表达。在一些实施方案中，接头不会不利地影响工程化TL1A配体的分泌。在一些实施方案中，接头不会不利地影响工程化TL1A配体的生物活性。在一些实施方案中，接头不是抗原性的并且不引发免疫应答。在一些实施方案中，接头不是抗原性的。在一些实施方案中，接头不引发免疫应答。在一些实施方案中，接头是内源氨基酸序列、外源氨基酸序列(例如，富含GS的序列)或非肽化学接头。在一些实施方案中，接头是内源性氨基酸序列。在一些实施方案中，接头是外源性氨基酸序列。在一些实施方案中，接头是富含GS的序列。在一些实施方案中，接头是非肽化学接头。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含TL1A的C端胞外结构域，其包含形成果冻卷折叠的TNF同源结构域。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含野生型人TL1A氨基酸序列的残基72-251的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含能够特异性结合DR3的TL1A的功能片段。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含能够特异性结合DR3的SEQ ID NO:94的功能片段。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含能够形成DR3的可溶性配体的TL1A的功能片段。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含相对于TL1A的野生型氨基酸序列的一个或多个氨基酸改变(例如，SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变)。
6.2TL1A配体的生物活性
在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体结合CD4+T细胞上的DR3。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体结合CD8+T细胞上的DR3。在一些实施方案中，T细胞是效应T细胞。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3(例如，CD4+或CD8+效应T细胞上的DR3)的结合。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3(例如，CD4+或CD8+效应T细胞上的DR3)的结合可以诱导DR3依赖性信号传导途径。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合可以促进DR3介导的促炎、促进存活的信号传导级联的活化。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合触发受体的膜远端CRD结构域(称为前配体组装结构域(PLAD))重新组织。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合破坏PLAD相互作用。在一些实施方案中，中心CRD与本文所述的工程化TL1A配体相互作用。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合触发一种或多种衔接蛋白的募集(例如，TNFR相关死亡结构域(TRADD)通过其DD到DR3的细胞质DD的募集)。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合能够触发DR3的构象重排。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合能够增强DR3内化。在一些实施方案中，构象变化通过每个受体亚单位的跨膜螺旋传递，以允许细胞质TRADD结构域的顺式相互作用。在一些实施方案中，由本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合产生的构象变化能够导致NF-kB信号传导和T细胞活化。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与T细胞(例如，CD4+或CD8+效应T细胞)上的DR3的结合诱导下游信号传导途径(例如，NF-κB信号传导)。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与CD4+或CD8+效应T细胞上的DR3的结合导致T细胞增殖。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与T细胞上的DR3的结合导致一种或多种细胞因子(例如，IL-2、IFNγδ和TNFα
Figure BDA0004176187780000211
δδ)的产生和/或分泌的增加。
在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合充当T细胞上的共刺激物。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合导致DR3活化。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合导致DR3-TL1A轴的活化。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合能够增加免疫效应细胞的共刺激。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合导致增强的抗肿瘤免疫力。
应当理解，本文公开的工程化TL1A配体对DR3活化的作用将在T细胞亚群之间变化。在一些实施方案中，结合导致白介素-2(IL-2)信号传导的增加。在一些实施方案中，IL-2信号传导的增加是活化T细胞中IL-2产生的增加。在一些实施方案中，IL-2信号传导的增加是活化T细胞中IL-2受体表达的增加。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与DR3的结合能够上调IFNγ。在一些实施方案中，结合不限于Th1免疫应答，但是可以促进IL-4以及其他Th2型细胞因子。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以调节免疫应答。作为非限制性示例，调节免疫应答可以包括免疫增加T细胞活化(例如，CD8+T细胞活化)、增加T细胞增殖和/或增加细胞因子产生。在一些实施方案中，免疫应答的调节包括增加T细胞活化。在一个实施方案中，T细胞活化是CD8+T细胞活化。在一些实施方案中，免疫应答的调节包括增加T细胞增殖。在一些实施方案中，免疫应答的调节包括增加细胞因子的产生。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体形成稳定的靶寡聚体。在一个实施方案中，稳定的靶寡聚体是单体。在一个实施方案中，稳定的靶寡聚体是二聚体。在一个实施方案中，稳定的靶寡聚体是三聚体。在一个实施方案中，稳定的靶寡聚体是六聚体。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体形成稳定的靶寡聚体，其中该靶寡聚体是单体(例如，HSA-scTL1A，诸如SEQ ID NO:84或HIS-scTL1A，诸如SEQ ID NO:86)。在一个实施方案中，稳定的靶单体是HSA-scTL1A。在一个实施方案中，稳定的靶单体是包含SEQ ID NO:84的HSA-scTL1A。在一个实施方案中，稳定的靶单体是HIS-scTL1A。在一个实施方案中，稳定的靶单体是包含SEQ ID NO:86的HIS-scTL1A。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体形成稳定的靶寡聚体，其中该靶寡聚体是二聚体(例如，Fc-His-TL1A诸如SEQ IDNO:92或Fc-scTL1A诸如SEQ ID NO:87)。在一个实施方案中，稳定的靶二聚体包含Fc-His-TL1A。在一个实施方案中，稳定的靶二聚体包含Fc-His-TL1A，其包含SEQ ID NO:92。在一个实施方案中，稳定的靶二聚体包含Fc-scTL1A。在一个实施方案中，稳定的靶二聚体包含Fc-scTL1A，其包含SEQ ID NO:87。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体形成稳定的靶寡聚体，其中该靶寡聚体是三聚体(例如，His-TL1A诸如SEQ ID NO:20或HSA-TL1A诸如SEQ ID NO:85)。在一个实施方案中，稳定的靶三聚体包含His-TL1A。在一个实施方案中，稳定的靶三聚体包含His-TL1A，其包含SEQ ID NO:20。在一个实施方案中，稳定的靶三聚体包含HSA-TL1A。在一个实施方案中，稳定的靶三聚体包含HSA-TL1A，其包含SEQ ID NO:85。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体形成稳定的靶寡聚体，其中该靶寡聚体是六聚体(例如，Fc-TL1A诸如SEQ ID NO:93)。在一个实施方案中，稳定的靶六聚体包含Fc-TL1A。在一个实施方案中，稳定的靶六聚体包含Fc-TL1A，其包含SEQ ID NO:93。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体表现出高单分散性和稳定性。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体表现出比野生型TL1A配体的单分散性和稳定性高的单分散性和稳定性。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体表现出高单分散性。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体表现出高稳定性。在一些实施方案中，例如在制备性凝胶过滤分析后纯化的本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或更多。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约40％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约50％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约60％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约70％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约80％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的靶物质的数量大于约90％。在某些实施方案中，百分比是纯化后的。在一些实施方案中，百分比遵循制备性凝胶过滤分析。
在一些实施方案中，例如在制备性凝胶过滤分析后纯化的本文公开的工程化TL1A配体的脱靶物质的数量(即，％高分子量物质和/或低分子量物质)小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约10％或更小。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的脱靶物质的数量小于约50％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的脱靶物质的数量小于约40％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的脱靶物质的数量小于约30％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的脱靶物质的数量小于约20％。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体的脱靶物质的数量小于约10％。在某些实施方案中，百分比是纯化后的。在一些实施方案中，百分比遵循制备性凝胶过滤分析。
在一些实施方案中，可以使用本文公开的或本领域已知的任何方法来改善本文公开的工程化TL1A配体的单分散性(例如，通过减少HMW和/或LMW物质)。作为非限制性示例，可以通过改变多肽序列以改变二硫键来改善单分散性。在一些实施方案中，可以通过在工程化TL1A配体的纯化过程中采用本领域已知的任何方法(例如，通过改变缓冲液条件)来改善本文公开的工程化TL1A配体的单分散性(例如，通过减少HMW和/或LMW物质)。在一些实施方案中，可以通过在纯化过程中采用氧化还原方法来改善本文公开的工程化TL1A配体的单分散性(例如，可以防止HMW物质的形成)。作为非限制性示例，在某些实施方案中，可以使用包括在仅由20mM磷酸钠、pH 6.8(不添加NaCl)组成的缓冲液中氧化还原的方法来纯化本文公开的工程化TL1A配体。
可以使用本文描述的和本领域已知的各种测定法来证明本文公开的工程化TL1A配体的生物活性。测试工程化TL1A配体与DR3或DcR3的结合的测定法的非限制性示例是本领域已知的并在本文中描述(例如，免疫组织化学、免疫测定、免疫沉淀、ELISA、流式细胞术、CyTOF等)。用于确定工程化TL1A配体是否调节DR3介导的应答的体内和体外测定法是本领域已知的或正在开发的。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约1μM或更小、约100nM或更小、约40nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约1nM或更小或约0.1nM或更小的半最大有效浓度(EC50)结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约1μM或更小的EC50结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约100nM或更小的EC50结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约40nM或更小的EC50结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约20nM或更小的EC50结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约10nM或更小的EC50结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约1nM或更小的EC50结合人DR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以约0.1nM或更小的EC50结合人DR3。
不受理论的限制，本文公开的工程化TL1A配体还可以是T细胞的有效共刺激物并以剂量依赖性方式增加细胞增殖。在一些实施方案中，工程化TL1A配体还可以对CD8+T细胞亚群比对CD4+T细胞亚群具有更大的共刺激作用。此外，这些化合物可以具有抗骨髓细胞应答的抗炎特性，同时有效地共刺激T细胞产生更大量的IL-2、IFN-γ，并增强T细胞增殖和CD8+T细胞细胞毒活性。可以使用本领域已知的测定T细胞共刺激、T细胞活化或T细胞增殖的任何方法来评估工程化TL1A配体对T细胞的作用。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以增加一种或多种细胞因子的产生和/或分泌。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体增加一种或多种细胞因子的产生。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体增加一种或多种细胞因子的分泌。作为非限制性示例，本文公开的工程化TL1A配体可以增加IL2、TNFα和/或IFNγ的产生和/或分泌。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以增加CD3活化的T细胞中一种或多种细胞因子(例如，IL-2、IFN-γTNFα)的产生和/或分泌。在一个实施方案中，细胞因子是IL-2。在一个实施方案中，细胞因子是IFN-γ。在一个实施方案中，细胞因子是TNFα。在一个实施方案中，细胞因子是CD3活化的细胞因子。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体以剂量依赖性方式增强抗原特异性T细胞活化(例如，CD4+或CD8+T细胞活化)。在一个实施方案中，T细胞是CD4+T细胞。在一个实施方案中，T细胞是CD8+T细胞。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体增强抗原特异性T细胞活化，如使用巨细胞病毒抗原回忆测定法(例如，在CD3存在下)测量的。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体保留与DR3的特异性结合，同时表现出与DcR3的结合减少。在一个实施方案中，DcR3是循环DcR3。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含与DR3相比与DcR3进行不同接触的氨基酸残基。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含破坏工程化TL1A配体与DcR3的相互作用的氨基酸残基(例如，相对于野生型TL1A氨基酸序列改变的残基)。
作为非限制性示例，在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含人TL1A(例如，SEQ ID NO:94)的残基R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241处的破坏与DcR3的相互作用的一个或多个氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基R103处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K111处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基N112处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基F114处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基E120处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基L123处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基G124处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基R156处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基M158处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基Q167处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基R170处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K173处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基S176处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基T185处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基D186处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基S187处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基Y188处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基P189处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基E190处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基T192处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基S206处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基F209处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基Y238处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基T239处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K240处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基E241处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。在某些实施方案中，氨基酸改变破坏与DcR3的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K111、L123、M158、Q167、S187、E190和N207处的破坏与DcR3的相互作用的一个或多个氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K111处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基L123处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基M158处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基Q167处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基S187处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基E190处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。在某些实施方案中，氨基酸改变破坏与DcR3的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F的破坏与DcR3的相互作用的一个或多个氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K111A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基L123K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基M158Y处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基Q167A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基S187L处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基E190F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基N207F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。在某些实施方案中，氨基酸改变破坏与DcR3的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的两个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的三个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的四个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的五个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的六个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的七个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的多于两个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的多于三个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的多于四个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的多于五个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的多于六个改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的多于七个改变。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含野生型人TL1A(例如，SEQ IDNO:94)的残基K111、L123、M158、Q167、S187、E190和N207的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K111处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基L123处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基M158处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基Q167处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基S187处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基E190处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含两种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含三种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含四种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含五种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含六种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含七种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含两种或更多种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含三种或更多种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含四种或更多种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含五种或更多种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含六种或更多种上述氨基酸改变。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含七种或更多种上述氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。在某些实施方案中，氨基酸改变破坏与DcR3的相互作用。
6.3具有TL1A配体能力的多肽
TNF配体由三聚化形成功能性信号传导单元的果冻卷型结构域组成。TNF配体通常以3:3的化学计量与其TNF家族受体结合，这些TNF家族受体由三个或四个富含半胱氨酸的结构域(CRD)组成。一些TNF配体(诸如TRAIL和TL1A)可以被可溶性诱饵受体结合，这些可溶性诱饵受体是模拟细胞表面受体结构但缺乏跨膜或胞质区的含CRD结构域的蛋白质。这些诱饵受体可以用作防止TNF配体活化T细胞的库，并且实际上可溶性诱饵受体可以被肿瘤上调。DcR3可以结合Fas配体(FasL)、LIGHT(与淋巴毒素同源，表现出可诱导的表达，并且与HSV糖蛋白D竞争疱疹病毒进入介质(HVEM)，一种在T淋巴细胞上表达的受体)或TL1A，并且在几种肿瘤环境中被上调。不受理论的束缚，在一些实施方案中，DcR3在多种实体瘤类型(例如，结肠癌、胰腺癌或胃癌)中被上调，表明这些肿瘤中的DcR3可能是T细胞抑制的机制，并且这些肿瘤内的T细胞可以被可以克服DcR3介导的库的TL1A配体刺激。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含TL1A C端胞外结构域，其包含TNF同源结构域。在一些实施方案中，本公开的工程化TL1A配体包含三聚复合物，其中所述三聚复合物包含三个TL1A单体。在一些实施方案中，三个TL1A单体形成非共价TL1A三聚体。在一些实施方案中，三个TL1A单体共价连接形成单链TL1A(scTL1A)三聚体。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体是单链配体(例如，包含通过接头连接的TL1AC端胞外结构域的三个拷贝)。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体是单链配体(例如，包含含有SEQ ID NO:94的氨基酸残基72-251的三个拷贝的氨基酸序列)。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含人TL1A(例如，SEQ ID NO:94)的残基R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241处的一个或多个氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R103处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N112处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基F114处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E120处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基G124处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R156处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Q167处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R170处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K173处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S176处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T185处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基D186处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y188处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基P189处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E190处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T192处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S206处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基F209处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y238处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T239处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K240处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E241处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含残基K111、L123、M158、Q167、S187、E190和N207处的一个或多个氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Q167处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E190处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F的一个或多个氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158Y处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Q167A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187L处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E190F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207F处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的两个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的三个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的四个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的五个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的六个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的七个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少三个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少四个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少五个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少六个改变。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少七个改变。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含野生型人TL1A(例如，SEQ IDNO:94)的残基K111、L123、M158、Q167、S187、E190和N207的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Q167处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E190处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207处的氨基酸改变。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含TL1A氨基酸序列的一个或多个残基位置处的一个或多个改变，其中该一个或多个改变选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R103A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R103H处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R103Q处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R103E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R103E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K111E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N112E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基F114A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E120A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E120K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E120H处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123G处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基L123K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基G124S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基G124K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基G124D处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R156A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R156Y处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R156K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R156E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158Y处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基M158E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Q167A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基R170E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K173S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K173R处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S176A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S176L处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S176处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S176K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T185A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T185L处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T185N处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T185D处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基D186Y处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187L处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S187D处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y188A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y188S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基P189A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基P189K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基P189F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基P189S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E190G处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E190F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T192A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T192F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T192K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T192E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S206A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S206F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S206K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基S206E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基N207E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基F209A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基F209W处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y238A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y238S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y238K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y238R处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基Y238E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T239A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T239E处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T239F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T239K处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基T239W处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K240A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K240F处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K240S处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基K240D处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E241A处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E241L处的氨基酸改变。在一个实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含残基E241Q处的氨基酸改变。还考虑了两种或更多种上述氨基酸改变的组合。在某些实施方案中，氨基酸改变是人TL1A的氨基酸改变。在某些实施方案中，人TL1A是野生型TL1A。在某些实施方案中，人TL1A包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列，其包含氨基酸改变K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。
在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的任何两种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的任何三种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的任何四种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的任何五种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的任何六种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的任何七种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的至少两种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的至少三种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的至少四种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的至少五种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的至少六种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的至少七种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的一至十种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的一至七种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的一至五种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的二至十种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的二至五种。在一些实施方案中，本文提供的工程化TL1A配体包含上述氨基酸改变中的五至七种。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列，或其能够形成可溶性TL1A配体的片段。在一些实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ IDNO:1-93中的任一者的氨基酸序列，或其能够结合DR3的片段。
在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:8的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:17的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:31的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:45的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:59的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:73的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQID NO:87的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列。在一个实施方案中，工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与上文鉴定的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与上文鉴定的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与上文鉴定的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与上文鉴定的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与上文鉴定的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQID NO:8的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少85％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少95％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少98％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少100％相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:79、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:91或SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQID NO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:90的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ IDNO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少80％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少85％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少90％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少95％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少98％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体包含在其全长上与包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的最小片段的氨基酸至少100％相同的氨基酸序列，其中该最小片段能够形成特异性结合DR3的三聚复合物。
6.4Fc和HSA融合蛋白
本文还描述了工程化TL1A配体，其重组连接或缀合(直接或间接共价或非共价缀合)至异源蛋白质或多肽(或其片段)，例如，至(例如，约10个或更多个、约20个或更多个、约30个或更多个、约40个或更多个、约50个或更多个、约60个或更多个、约70个或更多个、约80个或更多个、约90个或更多个、或约100个或更多个氨基酸的)多肽以产生融合蛋白，以及其用途。具体地，本文描述了包含工程化TL1A配体和异源蛋白、多肽或肽的融合蛋白。在一些实施方案中，异源多肽或蛋白质包含蛋白质稳定区。可以使用本文所述或本领域已知的任何蛋白质稳定区。
不受理论的束缚，蛋白质与某些多肽(例如，Fc或HSA区)的融合已经是延长蛋白质治疗剂的半衰期的成功方法，该Fc或HSA区由于它们能够进行FcRn介导的再循环而显示出较长的血清半衰期。本领域已知或本文描述的任何蛋白质融合技术均可用于本文公开的组合物或方法中。作为非限制性示例，可以使用Fc融合蛋白、与人血清白蛋白的融合、与羧基端肽的融合以及其他多肽融合方法。此外，可以采用本领域已知的其他半衰期延长方法，例如聚乙二醇化或糖基化。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以与Fc区的N端或C端融合。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以与HSA区的N端或C端融合。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体与一种或多种异源蛋白质或多肽的融合可以增加工程化TL1A配体的血清半衰期，其中该一种或多种异源蛋白质或多肽是蛋白质稳定区。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体与一个或多个蛋白稳定区的融合可以使本文公开的工程化TL1A配体的血清半衰期增加约2倍或更多、约3倍或更多、约4倍或更多、约5倍或更多、约10倍或更多、约20倍或更多、约40倍或更多、约60倍或更多、约80倍或更多、约100倍或更多、约200倍或更多或约500倍或更多。
在一些实施方案中，与工程化TL1A配体融合的异源蛋白质、多肽或肽可用于将工程化TL1A配体靶向特定细胞(例如，肿瘤细胞)。
此外，本文所述的工程化TL1A配体可以(直接或间接)连接到标记或“标签”序列，诸如肽，以促进纯化。在一些实施方案中，标记物或标签氨基酸序列是六聚组氨酸肽，诸如在载体中提供的标签(参见例如，QIAGEN,Inc.)，其中许多是可商购获得的。例如，如Gentz等人，1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:821-24中所述，六聚组氨酸提供了便利的融合蛋白纯化。用于纯化的其他肽标签包括但不限于血凝素(“HA”)标签，其对应于衍生自流感血凝素蛋白的表位(Wilson等人，1984,Cell 37:767-78)和“FLAG”标签。
将部分(包括多肽)连接或缀合(直接或间接)到抗体的方法是本领域熟知的，其中任何一种都可用于制备本文所述的融合蛋白。
在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体是融合蛋白。如本文所用，术语“融合蛋白”是指包含工程化TL1A配体的氨基酸序列和异源多肽或蛋白质(例如，通常不是TL1A的一部分的多肽或蛋白质)的氨基酸序列的多肽。在某些实施方案中，融合蛋白保留了本文公开的工程化TL1A配体的生物活性。
本领域技术人员应当理解，本公开还包括本文所述的工程化TL1A配体的功能片段，其中所述功能片段不包含任何异源多肽或蛋白质(例如，接头、标签、Fc区或HAS区)，并且其中所述功能片段能够形成TL1A三聚体并特异性结合DR3。
融合蛋白可例如通过基因改组、基序改组、外显子改组和/或密码子改组(统称为“DNA改组”)的技术来生成。如本文所述，DNA改组可用于改变工程化TL1A配体的活性，包括例如对受体具有较高亲和力和/或较低解离速率的TL1A配体。在一些实施方案中，工程化TL1A配体可以在重组前通过易错PCR、随机核苷酸插入或其他方法进行随机诱变而改变。编码本文所述的工程化TL1A配体的多核苷酸可以与一种或多种异源分子的一种或多种组分、基序、区段、部分、结构域、片段等重组。
本文所述的工程化TL1A配体也可以连接到固体支持物上，这可用于靶抗原的免疫测定或纯化。此类固体支持物包括但不限于玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
本文所述的工程化TL1A配体还可以连接或缀合(直接或间接)到第二抗体以形成抗体异源缀合物。
在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体是多聚工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含：非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区、非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区、scTL1A三聚体和一个或多个Fc区或scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体是多聚工程化TL1A配体，其包含：两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区、两个scTL1A三聚体和一个Fc区、一个scTL1A三聚体和一个Fc区、一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区或一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
在一些实施方案中，该Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以包含免疫球蛋白的Fc区。本领域技术人员应当理解，当与包含天然或未改变的Fc区的具有大约相同免疫原性的融合蛋白相比时，本文所述的一些分子、多肽或药剂将包含融合蛋白或其他多肽，其中Fc区的至少一部分已被缺失或以其他方式改变，以提供期望的生物化学特征，诸如增加的癌细胞定位、增加的肿瘤穿透、缩短的血清半衰期或延长的血清半衰期。对Fc区的修饰可以包括在一个或多个结构域中一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代。本文公开的修饰的融合蛋白或其他多肽可以包含对两个重链恒定结构域(CH2或CH3)中的一个或多个或对铰链区的改变或修饰。在其他实施方案中，可以除去整个CH2结构域(ΔCH2构建体)。在一些实施方案中，缺失的恒定区结构域被短氨基酸间隔区(例如，10个氨基酸残基)替换，该短氨基酸间隔区提供通常由缺失的恒定区结构域赋予的一些分子灵活性。
在一些实施方案中，经修饰的融合蛋白或其他多肽可以仅具有恒定结构域的部分缺失或几个或甚至单个氨基酸的取代。例如，CH2结构域的选定区域中单个氨基酸的突变可以足以显著降低Fc结合，从而增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。类似地，在一些实施方案中，可能期望简单地缺失控制特定效应子的一个或多个恒定区结构域的那部分。恒定区的这种部分缺失可以改善多肽或分子的选定特征(例如，血清半衰期)，同时保留与完整的主题恒定区结构域相关的其他期望功能。
6.5编码多核苷酸
本文进一步提供了编码本文公开的工程化TL1A配体的多核苷酸。在一些实施方案中，可以使用重组DNA技术以多种不同方式修饰本文公开的多核苷酸以产生替代或变体蛋白质。蛋白质的定点或高密度诱变可用于优化重组蛋白质的特异性、亲和力、稳定性等。
在某些方面，本文提供了包含编码特异性结合DR3的工程化TL1A配体或其片段的核苷酸序列的多核苷酸，以及载体，例如包含用于在宿主细胞(例如，大肠杆菌和哺乳动物细胞)中重组表达的此类多核苷酸的载体。本文提供了包含编码本文提供的任何工程化TL1A配体的核苷酸序列的多核苷酸，以及包含此类多核苷酸序列的载体，例如用于它们在宿主细胞例如哺乳动物细胞中有效表达的表达载体。
如本文所用，“分离的”多核苷酸或核酸分子是与存在于该核酸分子的天然来源(例如，小鼠或人)中的其他核酸分子分离的多核苷酸或核酸分子。此外，“分离的”核酸分子，诸如cDNA分子，当通过重组技术产生时可基本上不含其他细胞材料或培养基，或当化学合成时基本上不含化学前体或其他化学品。例如，用语“基本上不含”包括具有少于约15％、10％、5％、2％、1％、0.5％或0.1％(特别是少于约10％)的其他材料(例如，细胞材料、培养基、其他核酸分子、化学前体和/或其他化学物质)的多核苷酸或核酸分子的制剂。在一个具体实施方案中，编码本文所述工程化TL1A配体的核酸分子被分离或纯化。
在具体的方面，本文提供了包含编码工程化TL1A配体或其DR3结合片段的核苷酸序列的多核苷酸，其特异性结合DR3蛋白(例如，人DR3)并包含如本文所述的氨基酸序列。
在某些方面，本文提供了包含编码本文所述的工程化TL1A配体的核苷酸序列的多核苷酸。在某些实施方案中，本文所述的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:94的氨基酸残基72-251的核苷酸序列。在某些实施方案中，本文所述的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:94的氨基酸序列的残基72-251的至少一个氨基酸改变的核苷酸序列。
在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码在SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处具有一个或多个改变的工程化TL1A配体，该一个或多个改变选自由R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241组成的组。
在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码工程化TL1A配体，其中SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处的一个或多个改变是选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q的改变。
在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的一个或多个氨基酸改变，该一个或多个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列或其任何片段。
在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码工程化TL1A配体，该工程化TL1A配体包含：在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列；在其全长上与SEQ IDNO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的氨基酸序列。
本文还公开了编码与异源多肽融合的工程化TL1A配体的多核苷酸。在一些实施方案中，本文公开的多核苷酸编码包含本文公开的工程化TL1A配体的双特异性抗体。
在一些实施方案中，本文提供的多核苷酸包含编码本文描述的工程化TL1A配体(或其片段)的核苷酸序列，其特异性结合DR3多肽，例如，人DR3多肽，其中该工程化TL1A配体抗体包含Fc区。在一些实施方案中，该Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。
在一些实施方案中，本文提供了编码工程化TL1A配体的多核苷酸，其中该多核苷酸包含SEQ ID NO:95-SEQ ID NO:187的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文提供了编码工程化TL1A配体的多核苷酸，其中该多核苷酸包含在其全长上与SEQ ID NO:173的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:166的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:102的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:159的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:146的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:108的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:130的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:184的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:182的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；在其全长上与SEQ ID NO:185的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列；或在其全长上与SEQ ID NO:183的核酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％相同的核酸序列。
在一些实施方案中，本文提供了编码工程化TL1A配体的多核苷酸，其中该多核苷酸包含SEQ ID NO:95-SEQ ID NO:187的核苷酸序列的片段，其中该片段编码能够结合DR3的工程化TL1A配体。
本领域技术人员应当理解，本文所述的一些多核苷酸将包含编码标签、融合蛋白或其他多肽(例如，标签，诸如聚组氨酸)的序列、被TEV蛋白酶(例如，Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-(Gly/Ser))识别的序列，并且这些序列可以被切割或不被切割。在一些实施方案中，融合蛋白或其他多肽(例如，标签，诸如聚组氨酸)可以被本领域已知的另一个标签取代。
6.6制备多肽的方法
在一些实施方案中，工程化TL1A配体为多肽。所述多肽包含结合DR3的重组多肽、天然多肽或合成多肽。
本文提供了制备本文公开的工程化TL1A配体的方法，其中该方法包括执行引入SEQ ID NO:94的氨基酸序列的至少一个氨基酸改变的功能的步骤。在一些实施方案中，至少一个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。在一些实施方案中，氨基酸改变为K111A。在一些实施方案中，氨基酸改变为L123K。在一些实施方案中，氨基酸改变为M158Y。在一些实施方案中，氨基酸改变为Q167A。在一些实施方案中，氨基酸改变为S187L。在一些实施方案中，氨基酸改变为E190F。在一些实施方案中，氨基酸改变为N207F。本文进一步提供了制备本文公开的工程化TL1A配体的方法，所述方法包括执行产生工程化TL1A配体群的功能的步骤。
本领域将认识到，本文所述的一些氨基酸序列可以变化而不显著影响蛋白质的结构或功能。因此，在一些实施方案中，本文提供了表现出对DR3的显著结合活性的多肽变体。在一些实施方案中，多肽的氨基酸序列变化包括缺失、插入、倒位、重复和/或其他类型的取代。
多肽、其类似物和变体可以被进一步修饰以含有通常不是多肽的一部分的另外的化学部分。衍生部分可以提高多肽的溶解度、生物半衰期和/或吸收。这些部分还可以减少或消除多肽和变体的不期望的副作用。关于化学部分的综述可见于The Science andPractice of Pharmacy，第22版，2012,Pharmaceutical Press,London中。
在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以被修饰以延长血清半衰期。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体可以被修饰以提高配体的结构稳定性。
本文所述的多肽可以通过本领域已知的任何合适的方法产生。这些方法包括从直接蛋白质合成方法到构建编码多肽序列的DNA序列并在合适的宿主中表达这些序列。在一些实施方案中，使用重组技术通过分离或合成编码感兴趣的野生型蛋白质的DNA序列来构建DNA序列。任选地，可以通过位点特异性诱变来诱变该序列以提供其功能类似物。
在一些实施方案中，编码感兴趣的多肽的DNA序列可以通过使用寡核苷酸合成仪的化学合成来构建。寡核苷酸可以基于所需多肽的氨基酸序列并选择在将产生感兴趣的重组多肽的宿主细胞中偏爱的那些密码子来设计。可以应用标准方法来合成编码分离的感兴趣的多肽的多核苷酸序列。例如，完整的氨基酸序列可用于构建反向翻译的基因。此外，可以合成含有编码特定分离多肽的核苷酸序列的DNA寡聚体。例如，可以合成编码所需多肽的部分的几个小寡核苷酸，然后连接。单个寡核苷酸通常含有用于互补组装的5'或3'突出端。
本文提供的方法还可以包括将工程化TL1A配体与异源多肽融合的步骤。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体可以被进一步修饰以含有额外的异源多肽或通常不是多肽的一部分的部分。衍生的异源多肽或部分可以提高配体的溶解度、生物半衰期(例如，血清半衰期)、稳定性、表达水平、单分散性、结合活性、吸收和/或活化T细胞的能力。异源多肽或部分还可以减少或消除多肽和变体的不期望的副作用。在一些实施方案中，异源部分是化学部分。关于化学部分的综述可见于The Science and Practice ofPharmacy，第22版，2012,Pharmaceutical Press,London中。
本文所述的多肽可以通过本领域已知的任何合适的方法产生。这些方法包括从直接蛋白质合成方法到构建编码多肽序列的DNA序列并在合适的宿主中表达这些序列。在一些实施方案中，使用重组技术通过分离或合成编码感兴趣的野生型蛋白质的DNA序列来构建DNA序列。任选地，可以通过位点特异性诱变来诱变该序列以提供其功能类似物。
在一些实施方案中，使用本领域已知或本文公开的分子建模算法的方法可用于对本文公开的工程化TL1A配体的蛋白质结构进行建模。在一些实施方案中，使用本领域已知或本文公开的分子建模算法的方法可用于对本文公开的与受体(例如，DR3和/或DcR3)结合的工程化TL1A配体的蛋白质结构进行建模。在一些实施方案中，使用本领域已知或本文公开的分子建模算法的方法可用于进一步引入对本文公开的工程化TL1A配体的进一步修饰以改变其特征中的一个或多个(例如，稳定性、单分散性、与DR3结合、与DcR3结合、血清半衰期)。在一些实施方案中，使用本领域已知或本文公开的分子建模算法的方法可以与额外的序列和/或结构信息结合使用以对本文公开的未结合或结合受体(例如，DR3和/或DcR3)的工程化TL1A配体的蛋白质结构进行建模。
6.7靶向细胞
在一些实施方案中，本文提供了活化或增强细胞中的DR3信号传导的方法，包括使细胞与有效量的本文所述的工程化TL1A配体(例如，结合DR3的单链或非共价TL1A三聚体)接触。在一些实施方案中，活化或增强细胞中的DR3信号传导的方法包括使细胞与有效量的本文所述的工程化TL1A配体接触。在一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体包含结合细胞表面上的抗原(例如，肿瘤相关抗原)的靶向部分。在一些实施方案中，该方法是体内方法，其中使细胞与本文所述的工程化TL1A配体接触的步骤包括向受试者施用治疗有效量的工程化TL1A配体。在一些实施方案中，该方法是体外或体内方法。在一些实施方案中，细胞是肿瘤细胞。
可以使用本领域已知的用于确定肿瘤或癌症是否具有升高水平的核酸或蛋白质(例如，肿瘤相关抗原)表达的任何方法，并且可以使用多种样本。在一些实施方案中，样本取自患有肿瘤或癌症的受试者。在一些实施方案中，样本是新鲜的肿瘤/癌症样本。在一些实施方案中，样本是冷冻的肿瘤/癌症样本。在一些实施方案中，样本是福尔马林固定石蜡包埋样本。在一些实施方案中，样本是血液样本。在一些实施方案中，样本是血浆样本。在一些实施方案中，将样本加工成细胞裂解物。在一些实施方案中，将样本加工成DNA或RNA。
在另一方面，本文提供了确定靶标即肿瘤相关抗原(TAA)的表达水平的方法。在一些实施方案中，确定TAA的表达水平。用于确定细胞、肿瘤或癌症中核酸表达水平的方法是本领域技术人员已知的。这些方法包括但不限于基于PCR的测定、微阵列分析和核苷酸测序(例如，NextGen测序)。用于确定细胞、肿瘤或癌症中蛋白质表达水平的方法包括但不限于蛋白质印迹分析、蛋白质阵列、ELISA、免疫组织化学(IHC)和FACS。
6.8治疗方法
本文提供了本文公开的工程化TL1A配体在介导细胞因子诸如IFN-γ的增加的生产中的用途。因此，本文提供了此类工程化TL1A配体在治疗可用细胞因子治疗的疾病和病症(诸如癌症)中的用途。在一些实施方案中，本文提供了工程化TL1A配体在介导增加的T细胞(例如，CD4+或CD8+T细胞)活性或增殖中的用途。因此，在一些实施方案中提供了本文公开的工程化TL1A配体在治疗可通过增加T细胞活性或增殖来治疗的疾病和病症(诸如癌症)中的用途。在一些实施方案中，本文提供了如本文所述的工程化TL1A配体用于介导增加的T细胞活性和增加的T细胞增殖两者的用途。
本领域技术人员将理解，可以根据本文公开的方法使用本文公开的任何TL1A配体来活化T细胞。作为非限制性示例，在一些实施方案中，Fc-scTL1A-AKALFF TL1A变体(SEQID NO:91)可以在体外和/或体内活化T细胞。在一些实施方案中，本文公开的TL1A配体(例如，Fc-scTL1A-AKALFF变体)可以与野生型TL1A类似的水平共刺激抗CD3活化的T细胞。在一些实施方案中，其中本文公开的TL1A配体(例如，Fc-scTL1A-AKALFF变体)可以在存在DcR3的情况下共刺激抗CD3活化的T细胞。
在癌症的治疗中免疫系统的上调是特别需要的。另外，DcR3诱饵受体可以用作防止TNF配体诸如TL1A配体活化T细胞的库，并且可溶性诱饵受体可以被肿瘤上调。例如，DcR3可以以比其细胞表面受体DR3更高的亲和力结合TL1A，并防止基于TL1A的T细胞共刺激。在某些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体可以共刺激T细胞，从而克服实体瘤中的T细胞衰竭。因此，本文提供了癌症治疗的方法。癌症是指由异常不受控制的细胞生长导致的赘生物或肿瘤。癌症可以是原发性癌症或转移性癌症。
另外，在一些实施方案中，本文提供了抑制受试者中肿瘤生长的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的工程化TL1A配体。在一些实施方案中，肿瘤包含癌症干细胞。另外，在一些实施方案中，本文提供了减少受试者中肿瘤的致瘤性的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的工程化TL1A配体。
在本文所述方法的一些实施方案中，肿瘤是实体瘤。作为非限制性示例，在一些实施方案中，肿瘤是选自由以下组成的组的肿瘤：结肠直肠肿瘤、肾肿瘤、前列腺肿瘤、神经内分泌肿瘤、胰腺肿瘤、肺肿瘤、卵巢肿瘤、肝肿瘤、乳腺肿瘤、胃肠肿瘤、黑色素瘤、宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、成胶质细胞瘤和头颈部肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是结肠直肠肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是卵巢肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是肺肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是胰腺肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是黑色素瘤。在一些实施方案中，肿瘤是膀胱肿瘤。
在一些方面，本文提供了用于治疗受试者的癌的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的工程化TL1A配体，其中实体瘤不具有微卫星不稳定性或不具有错配修复蛋白表达的损失。
在一些方面，本文公开的方法在以下方面是有效的：将肿瘤浸润性淋巴细胞募集到赘生物、癌症或实体瘤；和/或促进和/或增强肿瘤或肿瘤微环境内淋巴结构的形成；和/或提高肿瘤或肿瘤微环境内的细胞毒性T细胞活性；和/或减小赘生物、癌症或实体瘤的大小；和/或抑制肿瘤或赘生物的生长；和/或提高肿瘤对用第二治疗剂治疗的反应性。不受理论的束缚，肿瘤通过促进共抑制信号(诸如CTLA-4)或者通过破坏共刺激信号传导来利用共信号传导级联来逃避免疫监视。在某个方面，本文提供了施用本文公开的工程化TL1A配体能够共刺激肿瘤中的T细胞，从而允许针对肿瘤细胞的活化的方法。在一些实施方案中，本文公开的工程化TL1A配体降低肿瘤免疫抑制。
在一些方面，本文提供了用于治疗受试者的疾病或病症的方法，其中该疾病或病症是自身免疫疾病或炎性病症。作为非限制性示例，该疾病或病症可以选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病或动脉粥样硬化。
本文提供了用于治疗的如本文所述的工程化TL1A配体。本文还提供了如本文所述的工程化TL1A配体，其用于治疗自身免疫病症或癌症。该自身免疫病症或癌症可以选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、IBD、COPD、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，其中任选地所述肉瘤是横纹肌肉瘤。
6.9施用
本文进一步提供了包含本文所述的工程化TL1A配体的组合物(例如，药物组合物)。在一些实施方案中，本文还提供了包含本文所述的工程化TL1A配体和药学上可接受的载体或媒介物的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物可用于免疫疗法。在一些实施方案中，药物组合物可用于免疫肿瘤学。在一些实施方案中，组合物可用于抑制肿瘤生长。在一些实施方案中，药物组合物可用于抑制受试者(例如，人类患者)的肿瘤生长。在一些实施方案中，组合物可用于治疗癌症。在一些实施方案中，药物组合物可用于治疗受试者(例如，人类患者)的癌症。在一些实施方案中，工程化TL1A配体被配制在适于向受试者(例如，人类受试者)施用的药物组合物中。
用于特定受试者的工程化TL1A配体的特定施用方案将部分地取决于所使用的工程化TL1A配体、所施用的工程化TL1A配体的量、施用途径以及任何副作用的原因和程度。向受试者(例如，哺乳动物，诸如人)施用的工程化TL1A配体的量应足以在合理的时间范围内实现期望的应答。因此，在一些实施方案中，向受试者施用的本文所述的工程化TL1A配体或药物组合物的量是有效量。在一些实施方案中，向受试者施用的本文所述的工程化TL1A配体或药物组合物的量是治疗有效量。在一些方面，该方法包括施用例如约0.1μg/kg至高达约100mg/kg或更多。在一些实施方案中，剂量范围为约1μg/kg至高达约100mg/kg；或约5μg/kg至高达约100mg/kg；或约10μg/kg至高达约100mg/kg；或约1mg/kg至高达约50mg/kg；或约2mg/kg至高达约30mg/kg；或约3mg/kg至高达约25mg/kg；或约3mg/kg至高达约25mg/kg；或约5mg/kg至高达约10mg/kg；或约10mg/kg至高达约20mg/kg；或约10mg/kg至高达约30mg/kg。一些病症或疾病状态可能需要多次施用(例如，每天、每周三次、每周一次、每两周一次或每月一次，治疗期为三天、七天、两周、三周、一个月、三个月、六个月、九个月、12个月、15个月、18个月、21个月、两年或更长时间)。
施用药物组合物的合适途径是本领域熟知的。作为非限制性示例，可以通过静脉内、皮下、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、肌内、眼内、动脉内、门静脉内、病灶内、髓内、鞘内、心室内、透皮、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、尿道、阴道或直肠方式，通过缓释系统或通过植入装置注射来施用。尽管可以使用多于一种途径来施用工程化TL1A配体，但特定途径可以提供比另一条途径更直接且更有效的反应。
在一些实施方案中，本公开提供了一种组合物，诸如药物组合物，其包含本文公开的工程化TL1A配体和载体(例如，药学上可接受的载体)。所采用的特定载体可以取决于化学-物理考虑因素，诸如溶解度和缺乏与工程化TL1A配体或联合疗法的反应性，以及施用途径。在一些实施方案中，本文提供了工程化TL1A配体和本领域已知的任何药学上可接受的载体。
6.10组合疗法
在一些实施方案中，除了向受试者施用本文所述的工程化TL1A配体之外，该方法或治疗还包括施用至少一种附加治疗剂。附加治疗剂可以在施用工程化TL1A配体之前、同时和/或之后施用。本文还提供了包含工程化TL1A配体和附加治疗剂的药物组合物。在一些实施方案中，至少一种附加治疗剂包含1、2、3或更多种附加治疗剂。
在一些实施方案中，使用两种或更多种治疗剂的组合疗法可以采用通过不同作用机制起作用的药剂。在一些实施方案中，使用具有不同作用机制的药剂的组合疗法可以产生累加或协同效应。在某些实施方案中，组合疗法可以允许比单一疗法中使用的每种药剂更低的剂量，从而减少毒性副作用和/或增加工程化TL1A配体和/或一种或多种附加治疗剂的治疗指数。在一些实施方案中，组合疗法可以降低耐药癌细胞将发展的可能性。在一些实施方案中，组合疗法包含影响免疫应答(例如，增强或活化应答)的治疗剂和影响(例如，抑制或杀死)肿瘤/癌细胞的治疗剂。
在本文所述的方法的一些实施方案中，本文所述的工程化TL1A配体与至少一种附加治疗剂的组合产生累加或协同作用的结果。在一些实施方案中，组合疗法导致工程化TL1A配体的治疗指数的增加和/或附加治疗剂的治疗指数的增加。
可以使用任何已知有用类别的附加治疗剂。作为非限制性示例，在本文所述的方法的一些实施方案中，工程化TL1A配体可以与免疫检查点抑制剂(例如，靶向PD-1、PD-L1和CTLA-4的免疫检查点阻断疗法)、TLR激动剂(例如，TLR7激动剂、TLR8激动剂、TLR9激动剂等)、DNA小沟结合剂、DNA复制抑制剂、蒽环霉素、抗生素、抗叶酸剂、抗代谢剂、化学疗法增敏剂、多卡霉素、依托泊苷、氟化嘧啶、离子载体、偏端霉素(lexitropsin)、亚硝基脲、顺铂、嘌呤抗代谢药、嘌呤霉素、辐射增敏剂、类固醇、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱等组合施用。在一些实施方案中，第二治疗剂可以是烷化剂、抗代谢剂、抗有丝分裂剂、拓扑异构酶抑制剂或血管生成抑制剂。在一些实施方案中，可以与本文所述的多肽或药剂组合施用的治疗剂包括化学治疗剂。
在一些实施方案中，该方法或治疗涉及与化学治疗剂组合或与化学治疗混合物组合施用本公开的工程化TL1A配体。工程化TL1A配体的治疗可以在施用化学治疗之前、同时或之后进行。组合施用可以包括以单一药物制剂或使用单独的制剂共同施用，或以任一顺序但通常在一段时间内连续施用，使得所有活性剂可以同时发挥其生物活性。此类化学治疗剂的制备和给药方案可以根据制造商的说明书使用或由熟练的医师根据经验确定。此类化学疗法的制备和给药方案也在The Chemotherapy Source Book，第4版，2008,M.C.Perry，编辑，Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,PA中进行了描述。
在本文描述的方法的一些实施方案中，治疗涉及与放射疗法组合施用本公开的工程化TL1A配体。在一些实施方案中，用工程化TL1A配体进行的治疗可以在施用放射疗法之前、同时或之后进行。这种放射疗法的给药方案可由熟练的医师确定。
在一些实施方案中，工程化TL1A配体与附加治疗剂(例如，多肽)的组合使用可以是TL1A双特异性化合物(例如，双特异性抗体)。在一些实施方案中，双特异性化合物包含工程化TL1A配体和肿瘤靶向部分。在一些实施方案中，包含本文公开的工程化TL1A配体的双特异性化合物能够靶向癌细胞或肿瘤。在一些实施方案中，包含本文公开的工程化TL1A配体的双特异性化合物可以表现出与通过全身或肿瘤外T细胞活化的细胞因子释放相关的降低的毒性。在一些实施方案中，包含本文公开的工程化TL1A配体的双特异性化合物可导致再活化诱导的T细胞死亡减少(例如，响应于双特异性T细胞接合剂(bsTCE)的过度活化，肿瘤浸润性T细胞(TILS)的细胞凋亡减少)。
在一些实施方案中，本文公开的双特异性化合物可以结合共刺激受体和肿瘤抗原两者。在一些实施方案中，本文公开的双特异性化合物可作为模块起作用，该模块可以与肿瘤靶向部分连接以特异性活化肿瘤微环境中的T细胞。在一些实施方案中，本文公开的双特异性化合物可以有效地介导受试者的抗肿瘤活性。本领域技术人员将理解，本文公开的任何TL1A配体可以被设计成作为模块起作用，该模块可以与肿瘤靶向部分连接以特异性活化T细胞。在一些实施方案中，具有有利的单分散性、稳定性和/或活性的TL1A配体可用于双特异性化合物中。作为非限制性示例，在一些实施方案中，Fc-scTL1A-AKALFF TL1A变体(SEQID NO:91)可用于双特异性化合物中(例如，与肿瘤靶向部分连接)。
6.11使用方法
在一些实施方案中，增加受试者中的免疫应答的方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合人DR3，并且以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3。在本文所述方法的一些实施方案中，激活或增强对肿瘤的持久或长期免疫应答的方法包括向受试者施用治疗有效量的工程化TL1A配体，所述工程化TL1A配体以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合人DR3，并且以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3。在本文所述方法的一些实施方案中，诱导抑制肿瘤复发或肿瘤再生长的持久或长期免疫力的方法包括向受试者施用治疗有效量的工程化TL1A配体，所述工程化TL1A配体以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合人DR3，并且以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3。
在本文所述方法的一些实施方案中，提高受试者中T细胞活性的方法包括向受试者施用治疗有效量的工程化TL1A配体，所述工程化TL1A配体以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合人DR3，并且以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3。在一些实施方案中，本文进一步提供了使用本文所述的工程化TL1A配体抑制肿瘤生长的方法。在一些实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括使细胞(例如，CD4+或CD8+T细胞)与本文所述的工程化TL1A配体在体内接触。
本文提供了治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件。本文进一步提供了治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件，并且其中所述工程化TL1A配体具有比野生型TL1A更长的血清半衰期。
在一些实施方案中，与野生型TL1A相比，根据本文公开的方法使用的工程化TL1A配体具有高单分散性和/或稳定性。在一些实施方案中，本文公开的方法提供了能够在体外和/或体内(例如，在受试者中)共刺激T细胞的工程化TL1A配体。
本文提供了治疗受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的工程化TL1A配体，其中所述疾病或病症是自身免疫病症或癌症。
本公开提供了包含本文所述的工程化TL1A配体(例如，多肽、分子、核酸)并且可用于执行本文所述的方法的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包含在一个或多个容器中的至少一种纯化试剂。在一些实施方案中，试剂盒包含执行本文公开的方法所必需和/或足够的所有组分。本领域技术人员将容易地认识到，本公开所公开的工程化TL1A配体可以容易地掺入本领域熟知的已建立的试剂盒形式之一。
还提供了包含工程化TL1A配体以及至少一种附加治疗剂的试剂盒。在一些实施方案中，附加治疗剂是本文公开的或本领域已知的(例如，化学治疗剂)。
本公开的实施方案可以通过参考以下非限制性实施例进一步限定，这些非限制性实施例详细描述了本公开的某些抗体的制备和使用本公开的抗体的方法。对本领域技术人员而言显而易见的是，在不脱离本公开的范围的情况下，可以对材料和方法进行许多修改。
7.实施方案
本发明提供了以下非限制性实施方案。
在一组实施方案中，提供了：
A1.一种工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含三聚复合物，所述三聚复合物包含：
a.三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体形成非共价TL1A三聚体；或
b.三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体共价连接形成单链TL1A(scTL1A)三聚体。
A2.根据实施方案A1所述的工程化TL1A配体，还包含蛋白质稳定区。
A3.根据实施方案A2所述的工程化TL1A配体，其中所述蛋白质稳定区包含Fc区或人血清白蛋白(HSA)区。
A4.根据实施方案A3所述的工程化TL1A配体，包含：
a.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；
b.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；
c.所述scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或
d.所述scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
A5.根据实施方案A4所述的工程化TL1A配体，包含：
a.两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；
b.两个scTL1A三聚体和一个Fc区；
c.一个scTL1A三聚体和一个Fc区；
d.一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或
e.一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
A6.根据实施方案A1-A5中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述三个TL1A单体通过接头共价结合。
A7.根据实施方案A6所述的工程化TL1A配体，其中所述接头是肽接头。
A8.根据实施方案A7所述的工程化TL1A配体，其中所述接头具有Gly-Ser或其多个重复的氨基酸序列。
A9.根据实施方案A1-A8中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。
A10.根据实施方案A9所述的工程化TL1A配体，其中非共价TL1A三聚体或所述scTL1A三聚体与所述Fc区的C端融合。
A11.根据实施方案A1-A10中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的氨基酸残基72-251。
A12.根据实施方案A11所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQID NO:94的氨基酸序列的残基72-251的至少一个氨基酸改变。
A13.根据实施方案A12所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体在SEQID NO:94的一个或多个残基位置处具有一个或多个改变，所述一个或多个改变选自由R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241组成的组。
A14.根据实施方案A13所述的工程化TL1A配体，其中SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处的所述一个或多个改变是选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q的改变。
A15.根据实施方案A12-A14中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。
A16.根据实施方案A12-A15中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的一个或多个氨基酸改变，所述一个或多个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。
A17.根据实施方案A12-A16中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
A18.根据实施方案A12-A17中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含：
a.在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
b.在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
c.在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
d.在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
e.在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
f.在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
g.在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
h.在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
i.在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
j.在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
k.在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。
A19.根据实施方案A1-A18中任一项所述的工程化TL1A配体，其包含双特异性抗体。
A20.根据实施方案A1-A19中任一项所述的工程化TL1A配体，其与异源多肽融合。
A21.根据实施方案A1-A20中任一项所述的工程化TL1A配体，其与药剂缀合。
A22.根据实施方案A21所述的工程化TL1A配体，其中所述药剂为毒素。
在第二组实施方案中，提供了：
B1.一种工程化TL1A配体，包含：能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件。
B2.根据实施方案B1所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体具有比野生型TL1A更长的血清半衰期。
B3.根据实施方案B1-B2中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体与野生型TL1A相比具有高单分散性和/或稳定性。
B4.根据实施方案B1-B3中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体能够在体外共刺激T细胞。
B5.根据实施方案B1-B4中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体能够在受试者中共刺激T细胞。
B6.根据实施方案B1-B5中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体能够增加有需要的受试者中一种或多种细胞因子的产生。
B7.根据实施方案B6所述的工程化TL1A配体，其中所述一种或多种细胞因子包含IFNγ和TNFα。
B8.根据实施方案B5-B6中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述受试者患有自身免疫病症或癌症。
B9.根据实施方案B8所述的工程化TL1A配体，其中所述自身免疫病症或癌症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，包括横纹肌肉瘤。
B10.一种核酸，编码根据实施方案B1-B9中任一项所述的工程化TL1A配体。
B11.一种药物组合物，包含根据实施方案B1-B9中任一项所述的工程化TL1A配体或根据实施方案B10所述的核酸，以及药学上可接受的赋形剂。
在第三组实施方案中，提供了：
C1.一种治疗受试者的疾病或病症的方法，包括向所述受试者施用有效量的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体是三聚复合物，所述三聚复合物包含：
a.三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体形成非共价TL1A三聚体；或
b.三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体共价连接形成单链TL1A(scTL1A)三聚体。
C2.根据实施方案C1所述的方法，其中所述工程化TL1A配体还包含蛋白质稳定区。
C3.根据实施方案C2所述的方法，其中所述蛋白质稳定区包含Fc区或HSA区。
C4.根据实施方案C3所述的方法，包含多聚工程化TL1A配体，所述多聚工程化TL1A配体包含根据实施方案C3所述的工程化TL1A配体，所述工程化TL1A配体包含：
a.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；
b.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；
c.所述scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或
d.所述scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
C5.根据实施方案C4所述的方法，其中所述多聚工程化TL1A配体包含：
a.两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；
b.两个scTL1A三聚体和一个Fc区；
c.一个scTL1A三聚体和一个Fc区；
d.一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或
e.一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
C6.根据实施方案C1-c5中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含所述scTL1A三聚体，并且其中所述三个TL1A单体通过接头共价结合。
C7.根据实施方案C6所述的方法，其中所述接头是肽接头。
C8.根据实施方案C7所述的方法，其中所述接头具有Gly-Ser或其多个重复的氨基酸序列。
C9.根据实施方案C1-C8中任一项所述的方法，其中所述Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。
C10.根据实施方案C9所述的方法，其中所述非共价TL1A三聚体或所述scTL1A三聚体与所述Fc区的C端融合。
C11.根据实施方案C1-C10中任一项所述的方法，其中所述TL1A单体包含SEQ IDNO:94的氨基酸残基72-251。
C12.根据实施方案C11所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列的残基72-251的至少一个氨基酸改变。
C13.根据实施方案C12所述的方法，其中所述工程化TL1A配体在SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处具有一个或多个改变，所述一个或多个改变选自由R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241组成的组。
C14.根据实施方案C13所述的方法，其中一个或多个残基位置处的所述一个或多个改变是选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q的改变。
C15.根据实施方案C12-C14中任一项所述的方法，其中所述氨基酸改变包括SEQID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。
C16.根据实施方案C12-C15中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的一个或多个氨基酸改变，所述一个或多个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。
C17.根据实施方案C12-C16中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
C18.根据实施方案C12-C17中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含：
a.在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
b.在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
c.在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
d.在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
e.在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
f.在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
g.在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
h.在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
i.在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
j.在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
k.在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。
C19.根据实施方案C1-C18中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含双特异性抗体。
C20.根据实施方案C1-C19中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体与异源多肽融合。
C21.根据实施方案C1-C20中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体与药剂缀合。
C22.根据实施方案C21所述的方法，其中所述药剂为毒素。
在第四组实施方案中，提供了：
D1.一种治疗受试者的疾病或病症的方法，包括向所述受试者施用有效量的工程化TL1A配体，所述工程化TL1A配体包含：能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件。
D2.根据实施方案D1所述的方法，其中所述工程化TL1A配体具有比野生型TL1A更长的血清半衰期。
D3.根据实施方案D1或D2中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体与野生型TL1A相比具有高单分散性和/或稳定性。
D4.根据实施方案D1或D2中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体能够在体外共刺激T细胞。
D5.根据实施方案D1或D2中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体能够在所述受试者中共刺激T细胞。
D6.根据实施方案D1-D5中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体能够增加有需要的受试者中一种或多种细胞因子的产生。
D7.根据实施方案D6所述的方法，其中所述一种或多种细胞因子包含IFNγ和TNFα。
D8.根据实施方案D1-D4中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫病症或癌症。
D9.根据实施方案D8所述的方法，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，包括横纹肌肉瘤。
在第五组实施方案中，提供了：
E1.一种制备工程化TL1A配体的方法，包括(i)执行引入SEQ ID NO:94的氨基酸序列的至少一个氨基酸改变的功能的步骤，所述至少一个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F；以及(ii)执行产生工程化TL1A配体群的功能的步骤。
E2.根据实施方案E1所述的方法，还包括将所述工程化TL1A配体与异源多肽融合的步骤。
E3.根据实施方案E2所述的方法，其中所述异源多肽包含蛋白质稳定区。
E4.根据实施方案E3所述的方法，其中所述蛋白质稳定区包含Fc区或HSA区。
E5.根据实施方案E4所述的方法，还包括生成多聚工程化TL1A配体的步骤。
E6.根据实施方案E5所述的方法，其中所述多聚工程化TL1A配体包含：
a.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；
b.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；
c.所述scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或
d.所述scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
E7.根据实施方案E6所述的方法，其中所述多聚工程化TL1A配体包含：
a.两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；
b.两个scTL1A三聚体和一个Fc区；
c.一个scTL1A三聚体和一个Fc区；
d.一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或
e.一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
E8.根据实施方案E1-E7中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含SEQID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
E9.根据实施方案E1-E8中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含：
a.在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
b.在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
c.在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
d.在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
e.在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
f.在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
g.在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
h.在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
i.在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
j.在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；或
k.在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。
E10.根据实施方案A1至A22、B1至B11、C1至C22、D1至D9和E1至E9中任一项所述的工程化TL1A配体，其在治疗中使用。
E11.根据实施方案A1至A22、B1至B11、C1至C22、D1至D9和E1至E9中任一项所述的工程化TL1A配体，其在治疗自身免疫病症或癌症中使用。
E12.根据实施方案E11所述使用的工程化TL1A配体，其中所述自身免疫病症或癌症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、IBD、COPD、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，其中任选地该肉瘤是横纹肌肉瘤。
8.实施例
8.1实施例1.重组TL1A配体的产生：His-scTL1A、Fc-scTL1A和HSA-scTL1A
TNFSF配体通常需要3:3的化学计量与其同源受体相互作用以诱导下游信号传导。为了开发TL1A配体作为治疗剂，产生了工程化TL1A配体，集中于C端胞外结构域(即，残基72-251)，其包含形成果冻卷折叠的TNF同源结构域(图1A、图1B)。果冻卷折叠由通过非结构化环连接的两组五个β片组成(图1B)。TL1A配体被设计成通过天然的非共价相互作用或使用接头肽(例如，Gly-Ser接头)作为单链(sc)三聚化(图1C、图1D、图1E)。评估了每种形式的表达水平、单分散性、结合活性和活化T细胞的能力。Fc+His-TL1A分子(SEQ ID NO:92)通过以1:2的DNA摩尔比共转染His-TL1A和Fc-TL1A产生，并且所需产物通过蛋白A和Ni-NTA串联亲和色谱法纯化。
由于预期可溶性TL1A(图1C)具有较短的血清半衰期，为了增加较短的血清半衰期，还将配体与IgG1 Fc或HSA融合(分别为图1D和图1E)。
简言之，将TL1A构建体和变体针对人类密码子使用进行了优化，并克隆到哺乳动物表达载体中。将构建体转染到Expi293细胞(Thermo)中，并根据制造商的方案表达。根据制造商的方案，通过Ni-NTA亲和色谱法(His-TL1A和HSA-TL1A)或通过mAbSelect SuRe(GEHealthcare Life Sciences)(Fc-TL1A)纯化蛋白质。
在表达和初始亲和捕获后，通过制备性凝胶过滤纯化蛋白质，并对每种分子的靶物质的相对数量进行定量。使用Sepax SRT-C SEC-300柱(Sepax Technologies,Inc.)进行制备性凝胶过滤。在由20mM磷酸钠、pH 6.8组成的缓冲液中进行凝胶过滤。
分子设计决定了Fc/HSA:TL1A三聚体的化学计量，使得对于Fc融合，Fc:TL1A三聚体的比率为3:2(图1D，左)，对于Fc-scTL1A，比率为1:2(图1D，中)，并且对于Fc-TL1A+TL1A单体的组合，比率为1:1(图1D，右)。对于HSA-TL1A，HSA与TL1A的比率为3:1(图1E，左)，并且对于HSA-scTL1A，比率为1:1(图1E，右)。
所示TL1A构建体的制备性凝胶过滤分析的示例性结果示出在图2A中。重组TNFαδ(His-scTNFα)用作对照以示出三聚体与寡聚体的数量。结果总结在表1中，示出了高分子量物质的百分比(％HMW物质)、％靶物质(即，单体、二聚体、三聚体或六聚体)和低分子量物质的百分比(％LMW物质)。
结果表明，TL1A亚基未与接头肽融合的所有构建体均表现出高水平的脱靶低分子量(LMW)物质，尽管亚基界面主要由疏水残基组成并且包含
Figure BDA0004176187780000832
Figure BDA0004176187780000833
2(基于PDB ID2RE9)。单链scTL1A构建体、His-scTL1A、Fc-scTL1A和HSA-scTL1A的比较表明，每一者都具有超过70种靶物质，其中Fc-和HSA-scTL1A表现出约80％的靶寡聚体(表1)。
表1.TL1A分子的单分散性的测量结果
Figure BDA0004176187780000831
通过凝胶过滤将分子纯化至>95％的靶寡聚体用于功能测试。图2B示出了在制备性凝胶过滤纯化以分离期望的寡聚物质后，所示TL1A构建体的分析型SEC分析的示例性结果。纯化的物质用于功能测定。
8.2实施例2.重组TL1A配体的DR3受体结合
使用ELISA测定测试每种TL1A配体结合重组DR3受体的能力。
所有基于ELISA的测量结果均一式三份收集，并且误差值报告测量结果之间的标准误差。重组DR3-Fc(R&D Systems，目录号943-D3)(二聚MW～92kDa)在100μL DR3-Fc中非特异性固定到板(Nunc maxisorp，目录号436110)上，在96孔White Maxisorp板(Nunc，目录号436110)上稀释至10μg/mL(O/N，4℃)。将板在室温处用250μl/孔酪蛋白缓冲液封闭1小时，并除去封闭缓冲液。将50μL的TL1A变体在StartingBlock PBS(Thermo FisherScientific)中以25μg/mL稀释，根据20160623的板图描述，在96孔White Maxisorp板(Nunc，目录号436110)上每孔稀释3倍(在4℃处过夜)。
TL1A变体浓度被归一化为每分子TL1A三聚体的摩尔数，因为三聚体形式是DR3结合的功能单元。这允许比较每种形式中每个TL1A三聚体的结合活性，并且因此允许评估具有两个TL1A三聚体的分子(Fc-TL1A或Fc-scTL1A)与具有单个TL1A三聚体的分子(His-TL1A、His-scTL1A、Fc-TL1A+His-TL1A、HSA-TL1A和HSA-scTL1A)相比是否表现出结合亲合力的增加(图1C、图1D和图1E)。例如，1个His-TL1A分子含有1个TL1A三聚体，并且因此25μg/mL的TL1W2(SEQ ID NO:20)含有376nM TL1A三聚体。相反，TL1W14(SEQ ID NO:87)每分子含有2个TL1A三聚体，并且具有不同的分子量。因此，25μg/mL TL1W14为290nM。因此，376nM相当于32.4μg/mL。
用TBST洗涤板三次。添加100μl/孔的多克隆兔抗人TL1A-生物素抗体(在StartingBlock PBS中以1:1000稀释)，并将板在室温处以150rpm振荡孵育1小时。除去TL1A-生物素抗体，并将100μl/孔链霉亲和素-HRP缀合物(在Starting Block PBS中以1:10,000稀释)添加到板中。将板在室温处以150rpm振荡孵育1小时。用TBST洗涤板三次。在使用延迟设置为100ms的Molecular Devices M5酶标仪读取板发光之前，立即添加100μl/孔POD化学发光底物(Roche，目录号：11582950001)。
所示TL1A配体结合DR3的能力的ELISA分析的示例性结果示出在图2C中，并且EC50值总结在表2中。“N.B.”表示没有结合。结果表明，大多数TL1A构建体显示出与固定化DR3结合的EC50为约24nM。HSA-scTL1A分子结合较弱，EC50为168nM，表明该分子的结构干扰了与TL1A的结合。
为了确认TL1A分子可以以反向形式结合DR3，将TL1A分子固定，并如上所述滴定DR3。示例性结果示出在图2D和表2中。在这种形式中，分子显示出的EC50值对于结合而言紧密大约3-7倍，但几种构建体未能显著结合，包括HSA-scTL1A和His-scTL1A分子。因此，将固定化的DR3用于进一步的ELISA分析。
两种HSA-TL1A蛋白(SEQ ID NO:84和85)在两种形式中都表现出明显较弱的结合，表明HSA融合伴侣可能抑制了TL1A部分结合其受体的能力(图2D)。另外，His-scTL1A分子(SEQ ID NO:86)具有比其他分子弱约3倍的EC50。作为阴性对照，证明了scTNFα没有显示出与DR3的显著结合。
表2.TL1A构建体与DR3结合的ELISA结果
Figure BDA0004176187780000851
8.3实施例3.T细胞共刺激和细胞因子产生以及体内T细胞活化
使用T细胞活化测定评估TL1A构建体共刺激T细胞和导致细胞因子产生的能力。96孔U型底组织培养板(Midwest Scientific，目录号TP92097)用10ng/ml抗CD3(BioLegend，目录号317304，克隆OKT3)的PBS溶液在4℃处过夜。然后用完全RPMI培养基(RPMI+10％FBS)洗涤板三次。使用阴性选择(Miltenyi Biotec，目录号130-096-535))从外周血单核细胞分离Pan T细胞。将30,000个泛T细胞接种在抗CD3预涂覆的96孔U型底板的每个孔中。将工程化TL1A配体和/或0.1δμg/mL抗CD28(BioLegend，目录号302914)添加到适当的孔中。为了评估DcR3介导的对T细胞活化的抑制，将重组DcR3蛋白(R&D，目录号142-DC-100)添加到最终浓度为30nM的具有或不具有TL1A配体的抗CD3刺激的T细胞中。
使用MSD电化学发光细胞因子测定(Meso Scale Discovery)测量细胞因子产生。简言之，用25μl细胞培养上清液将U-PLEX TH1 TH2细胞因子板(Meso Scale Discovery，目录号K15010B-2)在4℃处涂覆过夜。用含0.05％ Tween 20的PBS(PBST)洗涤板三次。将抗人Fc检测试剂以2μg/ml的最终浓度在室温处振荡施用一小时。用PBST洗涤板三次，向板中添加150μl的2X读数缓冲液，并在MSD仪器上收集数据。根据制造商的方案制作标准曲线。在MSD Discovery Workbench中处理原始数据并将其导入GraphPad Prism 8软件中。基于三个单独实验的结果对数据进行分析和绘图，并在GraphPad Prism 8程序中生成统计数据。
所示TL1A构建体诱导CD3活化的T细胞产生IFNγδ和TNFα的能力的示例性结果分别示出在图2E和图2F中。从左至右的柱表示0nM、0.03nM、0.1nM、0.3nM、1nM、3nM、10nM、30nM、100nM和300nM的TL1A配体浓度。如所预期的，在不存在抗CD3抗体(OKT3，Biolegend目录号317301)的情况下，由于缺乏T细胞受体刺激，TL1A分子无法刺激T细胞(图2E和图2F)。在存在亚最佳抗CD3抗体浓度(0.01μg/ml或0.1μg/ml)的情况下，TL1A分子可以刺激T细胞以剂量依赖性方式产生IFNγδ和TNFα。
结果表明，与其他TL1A构建体相比，仅表现出与DR3弱结合的HSA-TL1A分子(图2C和图2D)同样表现出最弱的共刺激活性。虽然His-TL1A分子表现出一些共刺激活性，但三种Fc标记的TL1A分子表现出共刺激T细胞产生细胞因子的最高能力。虽然所有三种Fc-TL1A形式都可以共刺激T细胞(图2E和图2F)，但Fc-scTL1A表现出最一致的T细胞共刺激功能和有利的单分散性(表1)。
评估了TL1A构建体在体内小鼠模型中共刺激T细胞产生细胞因子的能力。将次优剂量的抗小鼠CD3抗体(2μg/小鼠)(BioXCell，目录号BE0001-1FAB)静脉内注射到C57BL/6小鼠中。腹膜内注射Fc-TL1A W3或Fc-scTL1A W14(每只小鼠30μg)。在没有抗小鼠CD3刺激的情况下，还将Fc-TL1A W3(每只小鼠100μg)腹膜内注射到小鼠中(图3)。6小时后给小鼠放血。收集并冷冻血清。将冷冻血清解冻并以1:10稀释用于小鼠IFNγELISA(Invitrogen，目录号88-8314-86)。简言之，用捕获抗体在4℃处预涂覆Nunc MaxiSorp 96孔板过夜。洗涤板，然后在室温处用ELISA稀释剂封闭1小时。用洗涤缓冲液洗涤板。将稀释的样本装入板中，并在室温处孵育2小时。用洗涤缓冲液洗涤板3至5次。向每个孔中添加稀释的检测抗体，在室温处孵育1小时，并洗涤。添加稀释的链霉亲和素-HRP检测试剂，在室温处孵育30分钟，并洗涤。添加TMB底物溶液(四甲基联苯胺)，并在室温处孵育15分钟。向每个孔中添加终止溶液。在SpectraMax ELISA酶标仪(Molecular Devices)中读板。
结果表明，单独用抗CD3抗体或Fc-TL1A处理对T细胞活化没有影响，而用抗CD3抗体与Fc-TL1A或Fc-scTL1A组合处理导致类似水平的T细胞活化，如通过升高水平的血清IFNγ所确定的(图3)。
8.4实施例4.单分散性的优化
尽管Fc-scTL1A分子显示出对治疗开发最有利的性质，但重组蛋白为约20％寡聚体；因此，优化了分子的单分散性。一些TNFSF配体含有两个半胱氨酸残基，并且这些半胱氨酸残基在膜远端CD与EF环之间形成亚基内二硫键，但是暴露于溶剂并且可以在溶液中反应。
图4A描述了TL1A三聚体的晶体结构(改编自PDB ID 2RE9)，显示了TL1A的三个亚基。一个亚基在前景中以粗体显示，而另外两个亚基在背景中以浅灰色表面显示。对于维持DR3结合至关重要的C162-C202二硫键的位置用箭头表示。
使用分析型尺寸排阻色谱法(SEC)来确定高分子量物质是否由这些半胱氨酸残基的不适当的分子间二硫键介导。Fc-scTL1A(SEQ ID NO:87)的示例性结果示出在图4B中。在用20mM DTT还原后，Fc-scTL1A分子中的高分子量物质的数量从22％减少到小于10％，这表明不适当的分子间二硫键是造成高分子量物质的主要原因。
改变C162和C202残基，并使用ELISA分析来确定C162/C202突变体结合DR3的能力。令人惊奇的是，C162、C202或两个半胱氨酸突变为丝氨酸、亮氨酸或丙氨酸导致与DR3的结合完全丧失(图4C)。
使用表面等离子体共振(SPR)测试半胱氨酸突变体对DcR3结合的维持。简言之，将山羊抗人-Fc以30μg/ml、pH 5.0的乙酸盐缓冲液固定在垂直通道L1-L6上。DR3和DcR3以5或1δμg/mL固定。对于间接捕获形式或固定形式，期望的绝对配体水平是可以产生50-200个共振单元(RU)之间的最终分析物结合信号的范围。BSA用作非结合分析物对照。实验在25℃处进行，使用PBST(1X DPBS，0.005％ Tween)作为运行缓冲液。首先以1δμM对14种TL1A变体中的每一种进行koff筛选，以评估所需的最佳捕获水平、分析物浓度和解离时间。以0.1δμM的3倍稀释系列对每种变体进行分析，在DcR3上捕获了4种不同的配体密度。在ProteOnManager软件(BioRad，版本3.1.0.6)中处理和分析原始数据。通过将kon、koff和RUmax分组并保持折射率(RI)恒定且等于等来进行动力学分析。卡方(Chi2)值用于评估拟合的质量。为具有“良好”、“可接受”、“次优”和“差”质量的拟合定义了任意范围。由于与DR3的弱结合和与DcR3的双相结合，仅因此仅对数据进行了定性评估。
结果表明TL1W32(Y188A)与DcR3的结合最强，而TL1W34(C162S、C202S)也显示出强结合，并且TL1W35(C202S)和TL1W37(L123E)具有较弱的结合(图4D，右图)。基于SPR的结合分析证实C162S、C202S TL1A变体仅能结合DcR3而不能结合DR3(图4D，分别为右图和左图)。这些数据表明，半胱氨酸残基本身参与结合DR3而不是DcR3，或者二硫键是仅结合DR3所需的结构构象所必需的。
由于这两个半胱氨酸残基被证明是结合DR3所必需的，因此接下来要确定是否可以通过在Fc-scTL1A的纯化过程中采用氧化还原方法来防止高分子量(HMW)物质的形成。Fc-scTL1A(TL1W14；SEQ ID NO:87)在非还原缓冲液中蛋白A纯化后(黑色迹线)、在1×PBS中氧化还原后(深灰色迹线)和在低盐缓冲液中氧化还原后(浅灰色迹线)的分析型SEC分析的示例性结果示出于图4E中。
将Fc-scTL1A与20mM DTT一起孵育，然后透析到1×PBS中，产生约70％的HMW物质，表明分子间相互作用不仅仅是由于二硫键(图4E，“在1×PBS中的氧化还原”)。因此，如果TL1A可以形成有利于分子间二硫键形成的瞬时非共价相互作用，则可以通过改变缓冲液条件来抑制这些相互作用。在仅由20mM磷酸钠、pH 6.8组成的缓冲液(不含另外的NaCl)中的氧化还原产生大约90％的靶二聚体物质，其保持与SEC纯化的材料相同的结合特性(图4E和图4F，“在低盐中的氧化还原”)。
8.5实施例5.溶液X射线散射
尽管认为三聚体界面代表了TL1A三聚体单体亚基的紧密结合位点，但scTL1A形式的单个TL1A亚基可以与来自另一个TL1A分子的亚基或与来自相邻Fc亚基上的TL1A分子的亚基反式配对。为了解决后者，通过溶液x射线散射确定Fc-scTL1A的低分辨率结构模型。
简言之，在20℃处在X射线源上进行散射数据收集。在20mM HEPES HCl pH 6.5、100mM NaCl中分析Fc-scTL1A样本。为了限制辐射损伤，将样本在暴露期间在比色杯内连续振荡。从不同浓度(3mg/mL、6mg/mL或12mg/mL)的每个样本收集独立的测量结果，检查零角度散射强度的线性依赖性作为浓度的函数以确保没有聚集。使用BioXTAS RAW软件完成数据归一化、溶剂扣除和Guinier分析。使用ATSAS软件套件进行数据分析，包括用于计算距离分布函数P(r)的程序GNOM(Otwinnowski和Minor,1997)和用于形状确定的自动珠建模的DAMMIF(Franke和Svergun,2009)。为了生成Fc-scTL1A模型，施加双重对称约束，其通过减少噪音产生更可靠的包膜(Blanchet和Svergun,2013)。对于每个样本，使用DAMAVER对用DAMMIF计算的五个独立形状模型求平均以产生最终从头计算包膜。用嵌合体进行表面渲染(Pettersen等人,2004)。
通过溶液X射线散射确定的Fc-scTL1A的低分辨率结构模型的示例性结果示出在图4G、图7A至图7D和表3中。重建的分子包膜表明两个TL1A部分在结构中彼此分开，并且不太可能跨亚基配对。另外，三个浓度(3mg/mL、6mg/mL和12mg/mL)的散射曲线的一致性表明该分子没有发生浓度依赖性聚集。
表3.溶液X射线散射分析
Figure BDA0004176187780000901
8.6实施例6.工程化TL1A配体的设计和选择性的测试
TL1A介导的T细胞共刺激可以通过循环DcR3在体内抑制。TL1A配体被工程化以产生TL1A的变体，该变体将保留与DR3的结合但不会被DcR3结合。
可以在TL1A中进行突变以调节其与DcR3的相互作用。具体地，E120A、E122A、L123A、G124D、Y188F、K240A、E241A、D242A和K243A的突变已被证明会破坏与DcR3的相互作用，尽管这些突变对DR3结合的作用尚未经过测试(Zhan等人,2009)。尽管DR3和DcR3的富含半胱氨酸的结构域在结构上相似(图5A和5B)，但它们仅共有26％的序列同一性，从而提供了通过TL1A变体的差异结合的机会。
DR3的模型是使用MOE的蛋白质建模组件生成的(2016.08；Chemical ComputingGroup,Inc.,Montreal,QC,Canada)。DR3的序列(Uniprot ID O95407)和与DcR3结合的TL1A的结构(PDB ID 3K51)(Zhan等人,2011)被用作与DR3结合的TL1A模型的输入以指导诱变。
与DR3相比，TL1A中的几个残基似乎与DcR3的接触显著不同，并且选择这些残基用于诱变(图5B，圈出的残基)。选择突变的同一性以优化TL1A与DR3之间的侧链相互作用并同时破坏与DcR3的相互作用。
产生TL1A的变体，并通过所述ELISA测试与DR3和DcR3的结合。DR3和DcR3的示例性结果分别示出在图5C和图5D中，结果总结在表4中。
在以His-TL1A形式测试的83种变体中，几种保留或增强了与DR3的结合并破坏了与DcR3的结合(表4，分别为图5C和图5D，并且分别为图8A和图10B)。具体地，L123、Y188或E241的突变在两个实验中都显示出显著破坏与DcR3的结合。非抗体生物制剂通常表现出糖基化的异质性，这对临床批次的表征提出了挑战。突变体还被设计用于评估糖基化是否参与TL1A与DR3的结合。TL1A中N133Q而不是N229Q的突变可以维持对DR3的结合亲和力，而溶解度或表达没有明显变化(图8C)。
表4.TL1A变体与DR3和DcR3结合的ELISA结果
Figure BDA0004176187780000911
/>
Figure BDA0004176187780000921
/>
Figure BDA0004176187780000931
/>
Figure BDA0004176187780000941
/>
Figure BDA0004176187780000951
/>
Figure BDA0004176187780000961
选择七个TL1A单点突变以产生Fc-scTL1A形式的组合突变体，并通过ELISA筛选与DR3或DcR3的结合(图5C和图5D)。测试了这些组合突变体与DR3和DcR3的结合(分别为图5E和图5F)。示例性结果汇总于表5中。有利的组合突变体被表征为与野生型TL1A相比具有相当或增强的与DR3的结合(相对EC50<1)和与DcR3的较弱结合(相对EC50>1)。测试的组合突变体显示与DcR3没有显著结合，同时保持与DR3的类似结合(与野生型TL1A相比)，除了K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F变体(SEQ ID NO:88)，其表现出DR3结合适度降低(图5E)。携带K111A、L123K、Q167A、S187L、E190F、N207F突变的Fc-scTL1A-AKALFF变体(SEQ IDNO:91)与DR3结合的EC50值为9.0±2.7nM，并且与DcR3没有可检测的结合(表5)。
这些结果表明，增强TL1A的稳定性、单分散性和特异性的单独修饰可以组合以产生治疗上可行的分子。实际上，Fc-scTL1A-AKALFF变体(SEQ ID NO:91)表现出与DR3相同的结合(与野生型TL1A相比)，但没有表现出与DcR3的显著结合。
表5.TL1A变体与DR3结合的ELISA结果
Figure BDA0004176187780000971
8.7实施例7.由TL1A变体介导的T细胞共刺激
评估了TL1A变体Fc-scTL1A-AKALFF、Fc-scTL1A K111A、L123K、Q167A、S187L、E190F、N207F(SEQ ID NO:91)共刺激T细胞和抵抗DcR3介导的竞争的能力(图6A)。如实施例3所述，使用MSD电化学发光细胞因子测定法测量细胞因子的产生。该工程化TL1A变体Fc-scTL1A-AKALFF在存在或不存在外源可溶性DcR3的情况下共刺激CD-3活化的T细胞的能力的体外分析的示例性结果示出于图6B中。结果表明结合特异性在T细胞活化测定中得到了概括，其中添加外源性DcR3可以仅抑制Fc-scTL1A(图3，SEQ ID NO:87)而非Fc-scTL1A-AKALFF(SEQ ID NO:91)的T细胞活化(图6B)。这与显示AKALFF突变消除了与DcR3的结合而不影响与DR3的结合的结合数据一致(表5)。
这些发现表明，工程化TL1A配体对未接触抗原和接触过抗原的T细胞以及甚至对衰竭的T细胞都具有共刺激功能。此外，工程化TL1A配体与抗PD1检查点抑制剂组合是有效的共刺激剂，证明了它们的治疗潜力。
9.序列
下面提供了示例性序列。
TL1W81(His-TEV-TL1A K111S)氨基酸序列(SEQ ID NO:1)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFSNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W83(His-TEV-TL1A E120K)氨基酸序列(SEQ ID NO:2)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWKHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W84(His-TEV-TL1A E120H)氨基酸序列(SEQ ID NO:3)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWHHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W40(His-TEV-TL1A L123S)氨基酸序列(SEQ ID NO:4)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHESGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W85(His-TEV-TL1A G124S)氨基酸序列(SEQ ID NO:5)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELSLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W86(His-TEV-TL1A G124K)氨基酸序列(SEQ ID NO:6)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELKLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W89(His-TEV-TL1A R156Y)氨基酸序列(SEQ ID NO:7)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFY
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W92(His-TEV-TL1A M158Y)氨基酸序列(SEQ ID NO:8)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GYTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W97(His-TEV-TL1A K173S)氨基酸序列(SEQ ID NO:9)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNSPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W98(His-TEV-TL1A K173R)氨基酸序列(SEQ ID NO:10)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNRPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W107(His-TEV-TL1A D186Y)氨基酸序列(SEQ ID NO:11)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTYSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W113(His-TEV-TL1A P189S)氨基酸序列(SEQ ID NO:12)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYSEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W28(His-TEV-hTL1A 72-251E190G)氨基酸序列(SEQ ID NO:13)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPGPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W45(His-TEV-TL1A E190F)氨基酸序列(SEQ ID NO:14)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W123(His-TEV-TL1A N207S)氨基酸序列(SEQ ID NO:15)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSS
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W126(His-TEV-TL1A F209W)氨基酸序列(SEQ ID NO:16)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WWQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W46(His-TEV-TL1A T239W)氨基酸序列(SEQ ID NO:17)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYWKEDKTFFGAFLL
TL1W137(His-TEV-TL1A K240S)氨基酸序列(SEQ ID NO:18)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTSEDKTFFGAFLL
TL1W139(His-TEV-TL1A E241Q)氨基酸序列(SEQ ID NO:19)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKQDKTFFGAFLL
TL1W2(His-TEV-hTL1A 72-251)氨基酸序列(SEQ ID NO:20)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W47(His-TEV-TL1A E241A)氨基酸序列(SEQ ID NO:21)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKADKTFFGAFLL
TL1W136(His-TEV-TL1A K240F)氨基酸序列(SEQ ID NO:22)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTFEDKTFFGAFLL
TL1W138(His-TEV-TL1A K240D)氨基酸序列(SEQ ID NO:23)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTDEDKTFFGAFLL
TL1W135(His-TEV-TL1A K240A)氨基酸序列(SEQ ID NO:24)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTAEDKTFFGAFLL
TL1W134(His-TEV-TL1A T239K)氨基酸序列(SEQ ID NO:25)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYKKEDKTFFGAFLL
TL1W133(His-TEV-TL1A T239F)氨基酸序列(SEQ ID NO:26)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYFKEDKTFFGAFLL
TL1W27(His-TEV-hTL1A 72-251T239E)氨基酸序列(SEQ ID NO:27)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYEKEDKTFFGAFLL
TL1W132(His-TEV-TL1A T239A)氨基酸序列(SEQ ID NO:28)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYAKEDKTFFGAFLL
TL1W128(His-TEV-TL1A Y238S)氨基酸序列(SEQ ID NO:29)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDSTKEDKTFFGAFLL
TL1W130(His-TEV-TL1A Y238R)氨基酸序列(SEQ ID NO:30)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDRTKEDKTFFGAFLL
TL1W129(His-TEV-TL1A Y238K)氨基酸序列(SEQ ID NO:31)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDKTKEDKTFFGAFLL
TL1W131(His-TEV-TL1A Y238E)氨基酸序列(SEQ ID NO:32)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDETKEDKTFFGAFLL
TL1W127(His-TEV-TL1A Y238A)氨基酸序列(SEQ ID NO:33)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDATKEDKTFFGAFLL
TL1W24(His-TEV-hTL1A 72-251F209A)氨基酸序列(SEQ ID NO:34)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WAQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W124(His-TEV-TL1A N207K)氨基酸序列(SEQ ID NO:35)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSK
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W122(His-TEV-TL1A N207F)氨基酸序列(SEQ ID NO:36)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSF
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W125(His-TEV-TL1A N207E)氨基酸序列(SEQ ID NO:37)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSE
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W25(His-TEV-hTL1A 72-251N207A)氨基酸序列(SEQ ID NO:38)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSA
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W120(His-TEV-TL1A S206K)氨基酸序列(SEQ ID NO:39)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGK
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W119(His-TEV-TL1A S206F)氨基酸序列(SEQ ID NO:40)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGFN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W121(His-TEV-TL1A S206E)氨基酸序列(SEQ ID NO:41)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGE
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W118(His-TEV-TL1A S206A)氨基酸序列(SEQ ID NO:42)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGA
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W116(His-TEV-TL1A T192K)氨基酸序列(SEQ ID NO:43)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPKQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W115(His-TEV-TL1A T192F)氨基酸序列(SEQ ID NO:44)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPFQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W117(His-TEV-TL1A T192E)氨基酸序列(SEQ ID NO:45)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPEQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W114(His-TEV-TL1A T192A)氨基酸序列(SEQ ID NO:46)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPAQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W44(His-TEV-TL1A P189K)氨基酸序列(SEQ ID NO:47)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYKEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W112(His-TEV-TL1A P189F)氨基酸序列(SEQ ID NO:48)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYFEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W29(His-TEV-hTL1A 72-251P189A)氨基酸序列(SEQ ID NO:49)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYAEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W43(His-TEV-TL1A Y188S)氨基酸序列(SEQ ID NO:50)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSSPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W32(His-TEV-hTL1A 72-251Y188A)氨基酸序列(SEQ ID NO:51)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSAPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W109(His-TEV-TL1A S187L)氨基酸序列(SEQ ID NO:52)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W110(His-TEV-TL1A S187K)氨基酸序列(SEQ ID NO:53)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDKYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W111(His-TEV-TL1A S187D)氨基酸序列(SEQ ID NO:54)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDDYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W108(His-TEV-TL1A S187A)氨基酸序列(SEQ ID NO:55)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDAYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W105(His-TEV-TL1A T185N)氨基酸序列(SEQ ID NO:56)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVNDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W104(His-TEV-TL1A T185L)氨基酸序列(SEQ ID NO:57)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVLDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W106(His-TEV-TL1A T185D)氨基酸序列(SEQ ID NO:58)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVDDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W103(His-TEV-TL1A T185A)氨基酸序列(SEQ ID NO:59)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVADSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W101(His-TEV-TL1A S176N)氨基酸序列(SEQ ID NO:60)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDNITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W100(His-TEV-TL1A S176L)氨基酸序列(SEQ ID NO:61)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDLITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W102(His-TEV-TL1A S176K)氨基酸序列(SEQ ID NO:62)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDKITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W99(His-TEV-TL1A S176A)氨基酸序列(SEQ ID NO:63)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDAITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGS
NWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W96(His-TEV-TL1A R170E)氨基酸序列(SEQ ID NO:64)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGEPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W95(His-TEV-TL1A Q167A)氨基酸序列(SEQ ID NO:65)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W93(His-TEV-TL1A M158K)氨基酸序列(SEQ ID NO:66)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GKTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W94(His-TEV-TL1A M158E)氨基酸序列(SEQ ID NO:67)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GETSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W90(His-TEV-TL1A R156K)氨基酸序列(SEQ ID NO:68)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFK
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W91(His-TEV-TL1A R156E)氨基酸序列(SEQ ID NO:69)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFE
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W88(His-TEV-TL1A R156A)氨基酸序列(SEQ ID NO:70)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFA
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W87(His-TEV-TL1A G124D)氨基酸序列(SEQ ID NO:71)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHELDLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W38(His-TEV-TL1A L123K)氨基酸序列(SEQ ID NO:72)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W39(His-TEV-TL1A L123G)氨基酸序列(SEQ ID NO:73)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHEGGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W37(His-TEV-TL1A L123E)氨基酸序列(SEQ ID NO:74)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWEHEEGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W41(His-TEV-TL1A E120A)氨基酸序列(SEQ ID NO:75)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQFPALHWAHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W42(His-TEV-TL1A F114A)氨基酸序列(SEQ ID NO:76)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKNQAPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W30(His-TEV-hTL1A 72-251N112E)氨基酸序列(SEQ ID NO:77)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFKEQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSN
WFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W82(His-TEV-TL1A K111E)氨基酸序列(SEQ ID NO:78)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTP
TQHFENQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFR
GMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W80(His-TEV-TL1A K111A)氨基酸序列(SEQ ID NO:79)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W31(GD：CBIS中的单链MMB；His-TEV-hTL1A 72-251R103Q)氨基酸序列(SEQ IDNO:80)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVQQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W78(His-TEV-TL1A R103H)氨基酸序列(SEQ ID NO:81)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVHQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W79(His-TEV-TL1A R103E)氨基酸序列(SEQ ID NO:82)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVEQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W33(His-TEV-hTL1A 72-251R103A)氨基酸序列(SEQ ID NO:83)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVAQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W15(GD：CBIS中的单链蛋白质->HSA C端融合体；His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A)氨基酸序列(SEQ ID NO:84)
HHHHHHENLYFQGDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W9(GD：CBIS中的单链蛋白质->HSA C端融合体；His-TEV-G-HSA
(C34S)-2(G4S)-TL1A)氨基酸序列(SEQ ID NO:85)
HHHHHHENLYFQGDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPF
EDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYG
EMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEET
FLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKL
DELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEV
SKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEK
PLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMF
LYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKP
LVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRN
LGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCC
TESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTA
LVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLV
AASQAALGLGGGGSGGGGSLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLT
VVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIY
SQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSV
CEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFL
L
TL1W19(His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A)氨基酸序列(SEQ ID NO:86)
HHHHHHENLYFQGAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWE
HELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRP
NKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQ
EGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLAPLRADGDKPRAHLTVVRQ
TPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVT
FRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVG
SNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLAPLR
ADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNK
FLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYP
EPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W14(具有CD4 HC sp prim_转录物的Fc-scTL1A)氨基酸序列(SEQ ID NO:87)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W329(Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F)氨基酸序列(SEQID NO:88)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W327(Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F)氨基酸序列(SEQID NO:89)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W328(Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F)氨基酸序列(SEQID NO:90)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W331(Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F)氨基酸序列(SEQID NO:91)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W61(Fc-TL1A+His-TL1A)氨基酸序列(SEQ ID NO:92)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK
FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC
KVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKG
FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSLKGQEFAPSHQQVYAPLR
ADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNK
FLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYP
EPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDY
TKEDKTFFGAFLLHHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGD
KPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIP
ESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQL
LMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKED
KTFFGAFLL
TL1W3(GD：CBIS中的Fc融合体->同源二聚体Fc融合体；GS-huIgG1 Fc-2(G4S)-hTL1A 72-251)氨基酸序列(SEQ ID NO:93)GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
hTL1A(1-251)氨基酸序列(SEQ ID NO:94)
MAEDLGLSFGETASVEMLPEHGSCRPKARSSSARWALTCCLVLLPFLAG
LTTYLLVSQLRAQGEACVQFQALKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRA
HLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGD
YFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMG
TKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFF
GAFLL
TL1W81(His-TEV-TL1A K111S)核苷酸序列(SEQ ID NO:95)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAGCAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W83(His-TEV-TL1A E120K)核苷酸序列(SEQ ID NO:96)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGAAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W84(His-TEV-TL1A E120H)核苷酸序列(SEQ ID NO:97)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGCACCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W40(His-TEV-TL1A L123S)核苷酸序列(SEQ ID NO:98)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GTCGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W85(His-TEV-TL1A)核苷酸序列(SEQ ID NO:99)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGAGCCTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W86(His-TEV-TL1A G124K)核苷酸序列(SEQ ID NO:100)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGAAGCTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W89(His-TEV-TL1A R156Y)核苷酸序列(SEQ ID NO:101)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCTACGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W92(His-TEV-TL1A M158Y)核苷酸序列(SEQ ID NO:102)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCTACACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W97(His-TEV-TL1A K173S)核苷酸序列(SEQ ID NO:103)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAGCCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W98(His-TEV-TL1A K173R)核苷酸序列(SEQ ID NO:104)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATCGGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W107(His-TEV-TL1A D186Y)核苷酸序列(SEQ ID NO:105)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CTACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W113(His-TEV-TL1A P189S)核苷酸序列(SEQ ID NO:106)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACAGCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W28(His-TEV-hTL1A 72-251E190G)核苷酸序列(SEQ ID NO:107)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGGCCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W45(His-TEV-TL1A E190F)核苷酸序列(SEQ ID NO:108)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCTTTCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGT
GTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCA
TGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGAC
ATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCC
TTCCTGCTG
TL1W123(His-TEV-TL1A N207S)核苷酸序列(SEQ ID NO:109)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAGCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W126(His-TEV-TL1A F209W)核苷酸序列(SEQ ID NO:110)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTGGCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W46(His-TEV-TL1A T239W)核苷酸序列(SEQ ID NO:111)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACTGGAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W137(His-TEV-TL1A K240S)核苷酸序列(SEQ ID NO:112)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAGCGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W139(His-TEV-TL1A E241Q)核苷酸序列(SEQ ID NO:113)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGCAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W2(His-TEV-hTL1A 72-251)核苷酸序列(SEQ ID NO:114)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W47(His-TEV-TL1A E241A)核苷酸序列(SEQ ID NO:115)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGCGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W136(His-TEV-TL1A K240F)核苷酸序列(SEQ ID NO:116)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCTTCGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W138(His-TEV-TL1A K240D)核苷酸序列(SEQ ID NO:117)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCGACGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W135(His-TEV-TL1A K240A)核苷酸序列(SEQ ID NO:118)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCGCCGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W134(His-TEV-TL1A T239K)核苷酸序列(SEQ ID NO:119)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACAAGAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W133(His-TEV-TL1A T239F)核苷酸序列(SEQ ID NO:120)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACTTCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W27(His-TEV-hTL1A 72-251T239E)核苷酸序列(SEQ ID NO:121)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACGAAAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W132(His-TEV-TL1A T239A)核苷酸序列(SEQ ID NO:122)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACGCCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W128(His-TEV-TL1A Y238S)核苷酸序列(SEQ ID NO:123)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATAGCACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W130(His-TEV-TL1A Y238R)核苷酸序列(SEQ ID NO:124)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATCGGACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W129(His-TEV-TL1A Y238K)核苷酸序列(SEQ ID NO:125)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATAAGACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W131(His-TEV-TL1A Y238E)核苷酸序列(SEQ ID NO:126)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATGAGACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W127(His-TEV-TL1A Y238A)核苷酸序列(SEQ ID NO:127)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATGCCACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W24(His-TEV-hTL1A 72-251F209A)核苷酸序列(SEQ ID NO:128)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGGCCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W124(His-TEV-TL1A N207K)核苷酸序列(SEQ ID NO:129)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAAGTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W122(His-TEV-TL1A N207F)核苷酸序列(SEQ ID NO:130)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCTTCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCA
TGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGAC
ATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCC
TTCCTGCTG
TL1W125(His-TEV-TL1A N207E)核苷酸序列(SEQ ID NO:131)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCGAGTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W25(His-TEV-hTL1A 72-251N207A)核苷酸序列(SEQ ID NO:132)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCGCCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCA
TGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGAC
ATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCC
TTCCTGCTG
TL1W120(His-TEV-TL1A S206K)核苷酸序列(SEQ ID NO:133)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAAGAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W119(His-TEV-TL1A S206F)核苷酸序列(SEQ ID NO:134)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCTTCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCA
TGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGAC
ATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCC
TTCCTGCTG
TL1W121(His-TEV-TL1A S206E)核苷酸序列(SEQ ID NO:135)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCGAGAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W118(His-TEV-TL1A S206A)核苷酸序列(SEQ ID NO:136)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCGCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCA
TGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGAC
ATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCC
TTCCTGCTG
TL1W116(His-TEV-TL1A T192K)核苷酸序列(SEQ ID NO:137)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCAAGCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W115(His-TEV-TL1A T192F)核苷酸序列(SEQ ID NO:138)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCTTCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W117(His-TEV-TL1A T192E)核苷酸序列(SEQ ID NO:139)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCGAGCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W114(His-TEV-TL1A T192A)核苷酸序列(SEQ ID NO:140)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCGCCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W44(His-TEV-TL1A P189K)核苷酸序列(SEQ ID NO:141)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACAAAGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W112(His-TEV-TL1A P189F)核苷酸序列(SEQ ID NO:142)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACTTCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W29(His-TEV-hTL1A 72-251P189A)核苷酸序列(SEQ ID NO:143)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACGCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W43(His-TEV-TL1A Y188S)核苷酸序列(SEQ ID NO:144)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTCCCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W32(His-TEV-hTL1A 72-251Y188A)核苷酸序列(SEQ ID NO:145)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCGCCCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W109(His-TEV-TL1A S187L)核苷酸序列(SEQ ID NO:146)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACCTCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W110(His-TEV-TL1A S187K)核苷酸序列(SEQ ID NO:147)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAAGTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W111(His-TEV-TL1A S187D)核苷酸序列(SEQ ID NO:148)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACGACTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W108(His-TEV-TL1A S187A)核苷酸序列(SEQ ID NO:149)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACGCCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W105(His-TEV-TL1A T185N)核苷酸序列(SEQ ID NO:150)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAA
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W104(His-TEV-TL1A T185L)核苷酸序列(SEQ ID NO:151)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGCT
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W106(His-TEV-TL1A T185D)核苷酸序列(SEQ ID NO:152)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGGA
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W103(His-TEV-TL1A T185A)核苷酸序列(SEQ ID NO:153)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGGC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W101(His-TEV-TL1A S176N)核苷酸序列(SEQ ID NO:154)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACAACATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W100(His-TEV-TL1A S176L)核苷酸序列(SEQ ID NO:155)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACCTCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W102(His-TEV-TL1A S176K)核苷酸序列(SEQ ID NO:156)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACAAGATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W99(His-TEV-TL1A S176A)核苷酸序列(SEQ ID NO:157)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACGCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W96(His-TEV-TL1A R170E)核苷酸序列(SEQ ID NO:158)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
GAGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W95(His-TEV-TL1A Q167A)核苷酸序列(SEQ ID NO:159)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGAGCCGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W93(His-TEV-TL1A M158K)核苷酸序列(SEQ ID NO:160)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCAAGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGG
AAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGA
CCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGC
GTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGC
CATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCG
ACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCG
CCTTCCTGCTG
TL1W94(His-TEV-TL1A M158E)核苷酸序列(SEQ ID NO:161)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCGAGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGG
AAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGA
CCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGC
GTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGC
CATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCG
ACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCG
CCTTCCTGCTG
TL1W90(His-TEV-TL1A R156K)核苷酸序列(SEQ ID NO:162)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAAGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W91(His-TEV-TL1A R156E)核苷酸序列(SEQ ID NO:163)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCGAGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W88(His-TEV-TL1A R156A)核苷酸序列(SEQ ID NO:164)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCGCCGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W87(His-TEV-TL1A G124D)核苷酸序列(SEQ ID NO:165)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGACCTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W38(His-TEV-TL1A L123K)核苷酸序列(SEQ ID NO:166)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GAAGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W39(His-TEV-TL1A L123G)核苷酸序列(SEQ ID NO:167)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GGGGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W37(His-TEV-TL1A L123E)核苷酸序列(SEQ ID NO:168)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GGAGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W41(His-TEV-TL1A E120A)核苷酸序列(SEQ ID NO:169)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGCGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W42(His-TEV-TL1A F114A)核苷酸序列(SEQ ID NO:170)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGGCTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACG
AGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAG
TTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTG
ACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGG
AAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGA
CCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGC
GTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGC
CATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCG
ACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCG
CCTTCCTGCTG
TL1W30(His-TEV-hTL1A 72-251N112E)核苷酸序列(SEQ ID NO:171)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGGAACAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACG
AGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAG
TTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTG
ACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGG
AAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGA
CCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGC
GTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGC
CATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCG
ACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCG
CCTTCCTGCTG
TL1W82(His-TEV-TL1A K111E)核苷酸序列(SEQ ID NO:172)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCGAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W80(His-TEV-TL1A K111A)核苷酸序列(SEQ ID NO:173)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W31(GD：CBIS中的单链MMB；His-TEV-hTL1A 72-251R103Q)核苷酸序列(SEQ IDNO:174)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGCAACAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W78(His-TEV-TL1A R103H)核苷酸序列(SEQ ID NO:175)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGCACCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGC
CTTCCTGCTG
TL1W79(His-TEV-TL1A R103E)核苷酸序列(SEQ ID NO:176)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGC
CAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCC
GATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGGAGCAGACCCC
CACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGA
GCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGT
TTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGA
CCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGA
AGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAC
CGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCG
TGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCC
ATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGA
CATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W33(His-TEV-hTL1A 72-251R103A)核苷酸序列(SEQ ID NO:177)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGGCCCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W15(GD：CBIS中的单链蛋白质->HSA C端融合体；His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A)核苷酸序列(SEQ ID NO:178)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTGATGCTCACAAGTCCGAGGTGGCTCACAGGTTTAAAGACCTCGGCGAGGAGAACTTCAAGGCCCTCGTCCTGATTGCTTTCGCTCAGTACCTGCAGCAGTCCCCCTTCGAGGACCATGTCAAGCTGGTGAATGAGGTGACAGAATTCGCCAAGACCTGTGTGGCTGACGAATCCGCTGAGAACTGCGACAAGTCCCTGCACACCCTGTTCGGCGATAAACTGTGCACAGTGGCTACCCTCAGAGAAACCTATGGCGAAATGGCCGACTGTTGCGCCAAGCAAGAGCCCGAGAGGAACGAATGCTTCCTCCAGCACAAGGATGACAATCCTAACCTGCCCAGACTGGTGAGACCCGAGGTGGATGTCATGTGCACAGCCTTCCACGATAACGAGGAGACATTCCTGAAGAAATATCTCTATGAAATCGCCAGGA
GGCATCCCTACTTCTATGCCCCCGAGCTGCTCTTCTTCGCCAAGAGGT
ATAAAGCCGCTTTCACCGAGTGCTGCCAGGCTGCCGACAAGGCCGCTT
GTCTGCTGCCCAAGCTGGACGAGCTGAGGGACGAGGGAAAGGCTAGC
TCCGCTAAGCAGAGACTGAAGTGCGCCAGCCTGCAGAAATTCGGAGA
AAGGGCCTTCAAGGCCTGGGCCGTGGCTAGGCTGAGCCAGAGATTTC
CTAAGGCCGAGTTTGCCGAAGTGAGCAAGCTGGTGACCGACCTAACA
AAGGTCCACACAGAATGTTGCCACGGCGACCTGCTGGAGTGCGCCGA
TGATAGGGCCGATCTGGCCAAATACATCTGTGAGAACCAAGACTCCA
TCTCCTCCAAGCTGAAGGAGTGTTGCGAGAAGCCTCTGCTCGAGAAG
AGCCACTGCATCGCTGAAGTCGAGAACGACGAGATGCCTGCCGATCT
CCCCTCCCTGGCCGCCGATTTCGTGGAATCCAAGGACGTCTGTAAGAA
CTACGCCGAGGCCAAGGATGTGTTCCTGGGAATGTTCCTGTACGAGTA
CGCTAGGAGGCACCCTGACTATAGCGTGGTGCTCCTCCTGAGGCTGGC
CAAGACATATGAGACCACCCTGGAAAAGTGCTGCGCCGCTGCCGATC
CCCATGAGTGCTATGCCAAGGTCTTCGACGAGTTTAAGCCCCTGGTGG
AAGAGCCCCAGAACCTGATCAAACAGAACTGTGAGCTGTTCGAGCAG
CTCGGAGAGTACAAGTTCCAGAATGCCCTCCTCGTGAGGTACACAAA
GAAGGTCCCCCAGGTCTCCACACCTACCCTGGTGGAGGTCTCCAGAA
ACCTGGGCAAGGTGGGATCCAAGTGCTGCAAGCATCCTGAGGCCAAA
AGAATGCCCTGTGCTGAGGATTACCTGAGCGTGGTCCTGAATCAGCTG
TGCGTGCTGCATGAAAAAACCCCCGTCTCCGATAGGGTCACAAAGTG
CTGCACCGAGAGCCTGGTGAATAGAAGGCCCTGTTTCTCCGCCCTGGA
GGTGGACGAAACCTATGTCCCCAAAGAGTTCAACGCTGAAACATTTA
CCTTCCACGCTGACATTTGCACCCTGAGCGAGAAGGAGAGGCAGATC
AAGAAGCAGACAGCTCTCGTGGAGCTCGTGAAGCACAAACCTAAAGC
CACAAAGGAGCAACTGAAGGCCGTCATGGACGACTTTGCCGCTTTCG
TCGAGAAGTGCTGTAAGGCCGACGACAAGGAGACATGTTTCGCCGAG
GAGGGAAAGAAGCTGGTCGCTGCTAGCCAAGCTGCCCTGGGCCTGGG
AGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGC
CTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCA
AGAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAACTGGGCCTGGCC
TTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCC
GAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCATG
ACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGACAAGCCGGAAGACCCAACAAGCC
CGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATAGCTATCCTG
AACCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGA
AGCAACTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAA
GAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGAT
TATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGA
GGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAG
GGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAA
CCCCCACCCAACACTTTAAGAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGC
ATGAGCTGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAAT
AAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAG
GTCACCTTCAGGGGCATGACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGACAGGC
CGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAG
TGACAGACTCCTACCCCGAACCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAA
AGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGC
GCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCC
GACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGG
AGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCA
GCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCAT
CTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCAAAAACCAGTT
TCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGCTGGGACTGGCCTTCACCAAAA
ACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCG
ATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGAATGACCTCCGAAT
GTTCCGAAATCAGACAGGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATC
ACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCTACCCA
ACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGT
TCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGAC
AAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAG
GAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W9(GD：CBIS中的单链蛋白质->HSA C端融合体；His-TEV-G-HSA
(C34S)-2(G4S)-TL1A)核苷酸序列(SEQ ID NO:179)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTGATGCTCAC
AAGTCCGAGGTGGCTCACAGGTTTAAAGACCTCGGCGAGGAGAACTT
CAAGGCCCTCGTCCTGATTGCTTTCGCTCAGTACCTGCAGCAGTCCCC
CTTCGAGGACCATGTCAAGCTGGTGAATGAGGTGACAGAATTCGCCA
AGACCTGTGTGGCTGACGAATCCGCTGAGAACTGCGACAAGTCCCTG
CACACCCTGTTCGGCGATAAACTGTGCACAGTGGCTACCCTCAGAGA
AACCTATGGCGAAATGGCCGACTGTTGCGCCAAGCAAGAGCCCGAGA
GGAACGAATGCTTCCTCCAGCACAAGGATGACAATCCTAACCTGCCC
AGACTGGTGAGACCCGAGGTGGATGTCATGTGCACAGCCTTCCACGA
TAACGAGGAGACATTCCTGAAGAAATATCTCTATGAAATCGCCAGGA
GGCATCCCTACTTCTATGCCCCCGAGCTGCTCTTCTTCGCCAAGAGGT
ATAAAGCCGCTTTCACCGAGTGCTGCCAGGCTGCCGACAAGGCCGCTT
GTCTGCTGCCCAAGCTGGACGAGCTGAGGGACGAGGGAAAGGCTAGC
TCCGCTAAGCAGAGACTGAAGTGCGCCAGCCTGCAGAAATTCGGAGA
AAGGGCCTTCAAGGCCTGGGCCGTGGCTAGGCTGAGCCAGAGATTTC
CTAAGGCCGAGTTTGCCGAAGTGAGCAAGCTGGTGACCGACCTGACA
AAGGTCCACACAGAATGTTGCCACGGCGACCTGCTGGAGTGCGCCGA
TGATAGGGCCGATCTGGCCAAATACATCTGTGAGAACCAAGACTCCA
TCTCCTCCAAGCTGAAGGAGTGTTGCGAGAAGCCTCTGCTCGAGAAG
AGCCACTGCATCGCTGAAGTCGAGAACGACGAGATGCCTGCCGATCT
CCCCTCCCTGGCCGCCGATTTCGTGGAATCCAAGGACGTCTGTAAGAA
CTACGCCGAGGCCAAGGATGTGTTCCTGGGAATGTTCCTGTACGAGTA
CGCTAGGAGGCACCCTGACTATAGCGTGGTGCTCCTCCTGAGGCTGGC
CAAGACATATGAGACCACCCTGGAAAAGTGCTGCGCCGCTGCCGATC
CCCATGAGTGCTATGCCAAGGTCTTCGACGAGTTTAAGCCCCTGGTGG
AAGAGCCCCAGAACCTGATCAAACAGAACTGTGAGCTGTTCGAGCAG
CTCGGAGAGTACAAGTTCCAGAATGCCCTCCTCGTGAGGTACACAAA
GAAGGTCCCCCAGGTCTCCACACCTACCCTGGTGGAGGTCTCCAGAA
ACCTGGGCAAGGTGGGATCCAAGTGCTGCAAGCATCCTGAGGCCAAA
AGAATGCCCTGTGCTGAGGATTACCTGAGCGTGGTCCTGAATCAGCTG
TGCGTGCTGCATGAAAAGACCCCCGTCTCCGATAGGGTCACAAAGTG
CTGCACCGAGAGCCTGGTGAATAGAAGGCCCTGTTTCTCCGCCCTGGA
GGTGGACGAAACCTATGTCCCCAAAGAGTTCAACGCTGAAACATTTA
CCTTCCACGCTGACATTTGCACCCTGAGCGAGAAGGAGAGGCAGATC
AAGAAGCAGACAGCTCTCGTGGAGCTCGTGAAGCACAAACCTAAAGC
CACAAAGGAGCAACTGAAGGCCGTCATGGACGACTTTGCCGCTTTCG
TCGAGAAGTGCTGTAAGGCCGACGACAAGGAGACATGTTTCGCCGAG
GAGGGAAAGAAGCTGGTCGCTGCTAGCCAAGCTGCCCTGGGCCTGGG
AGGAGGAGGAAGCGGCGGAGGAGGATCCCTCAAGGGCCAGGAGTTC
GCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGAT
AAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCA
CTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACT
GGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCAT
CCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGG
CATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATA
AGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTAC
CCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGT
GGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCT
GCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGG
TCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W19(His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A)核苷酸序列(SEQ ID NO:180)
CATCATCATCACCACCACGAGAATCTCTATTTTCAGGGCGCTCCCCTG
AGAGCCGATGGCGATAAGCCTAGAGCCCACCTGACAGTGGTGAGACA
AACCCCTACACAGCACTTCAAAAATCAGTTCCCTGCCCTGCACTGGGA
ACATGAGCTGGGCCTGGCCTTCACCAAGAACAGGATGAATTACACAA
ATAAGTTCCTGCTCATCCCTGAGTCCGGCGACTACTTCATCTATAGCC
AAGTGACCTTCAGAGGCATGACCAGCGAGTGCTCCGAGATCAGGCAG
GCTGGAAGACCTAACAAGCCCGATAGCATCACCGTGGTGATTACAAA
GGTGACAGACAGCTATCCCGAGCCCACACAGCTGCTCATGGGCACCA
AAAGCGTGTGCGAAGTCGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTG
GGCGCCATGTTTAGCCTGCAGGAAGGAGATAAGCTGATGGTCAATGT
CTCCGATATCTCCCTGGTGGATTACACCAAGGAGGACAAAACCTTCTT
CGGCGCTTTTCTGCTGGCCCCTCTCAGGGCCGATGGAGATAAACCCAG
GGCTCACCTGACAGTCGTCAGGCAGACCCCTACACAACACTTCAAGA
ATCAATTCCCCGCCCTGCATTGGGAGCACGAACTGGGCCTGGCCTTCA
CAAAAAATAGGATGAACTATACCAACAAATTCCTGCTGATCCCTGAA
TCCGGCGATTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGAGGCATGACC
AGCGAATGCAGCGAAATCAGACAAGCTGGCAGACCCAACAAACCCG
ACAGCATTACCGTGGTCATCACCAAGGTCACAGATAGCTACCCCGAA
CCCACACAGCTCCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTCGGCAG
CAATTGGTTCCAGCCTATCTATCTGGGCGCCATGTTTAGCCTGCAAGA
GGGAGACAAACTGATGGTGAATGTGTCCGACATCTCCCTGGTGGATT
ACACCAAAGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTGGCTCCTC
TGAGGGCTGACGGCGACAAGCCCAGAGCTCACCTGACCGTCGTGAGG
CAAACCCCTACCCAGCACTTTAAGAACCAGTTTCCCGCCCTGCACTGG
GAGCATGAGCTGGGCCTGGCCTTTACCAAAAACAGAATGAACTACAC
CAACAAGTTTCTGCTGATCCCCGAAAGCGGCGACTATTTTATCTATAG
CCAGGTGACCTTTAGAGGCATGACCAGCGAGTGTAGCGAGATTAGAC
AGGCTGGCAGGCCTAACAAGCCTGACAGCATCACCGTGGTGATCACC
AAAGTGACCGACTCCTACCCCGAGCCCACCCAACTGCTCATGGGCAC
AAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTTCAACCCATCTATCT
GGGCGCCATGTTCAGCCTGCAAGAAGGAGACAAGCTCATGGTCAATG
TGAGCGACATCAGCCTGGTGGACTATACCAAAGAAGACAAGACCTTC
TTCGGAGCCTTTCTGCTG
TL1W14(具有CD4 HC sp prim_转录物的Fc-scTL1A)核苷酸序列(SEQ ID NO:181)GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGA
ACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCC
GAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGC
CAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCG
TGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAG
TACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAA
AACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACA
CACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTG
ACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATG
GGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCG
TGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGA
CAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGC
ACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCC
CCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGG
AGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCC
AACACTTCAAGAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAACTG
GGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCT
CCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTT
TAGGGGCATGACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGACAAGCCGGAAGAC
CCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGAT
AGCTATCCTGAACCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGT
GAGGTGGGAAGCAACTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTC
TCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCC
CTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTC
CTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGC
CCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGG
TGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTAAGAACCAGTTTCCTGCTCTGC
ATTGGGAGCATGAGCTGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAAC
TATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATC
TATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCATGACCTCCGAGTGCAGCGAGATT
AGACAGGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGAT
CACCAAAGTGACAGACTCCTACCCCGAACCTACACAACTCCTGATGG
GCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCAAAAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGCTGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGAATGACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGACAGGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W329(Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F)核苷酸序列(SEQID NO:182)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGC
ACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCC
CCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGG
AGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCC
AACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAG
GGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCT
CCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTT
TAGGGGCTACACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGAC
CCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGAT
AGCTATCCTTTCCCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGT
GAGGTGGGAAGCTTCTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTC
TCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCC
CTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTC
CTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGC
CCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGG
TGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGC
ATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAAC
TATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATC
TATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCTACACCTCCGAGTGCAGCGAGATT
AGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGAT
CACCAAAGTGACAGACTCCTACCCCTTCCCTACACAACTCCTGATGGG
CACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTA
CCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCA
ACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACC
TTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGC
GGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAG
AGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCA
ACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTC
ACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGA
ATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGATACAC
CTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCG
ATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACAGCTACCCCTTCC
CTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W327(Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F)核苷酸序列(SEQID NO:183)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCTACACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATCTGTATCCTTTCCCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCAACTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCTACACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACCTGTACCCCTTCCCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGATACACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACCTGTACCCCTTCCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W328(Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F)核苷酸序列(SEQID NO:184)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGC
CAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCG
TGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAG
TACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAA
AACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACA
CACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTG
ACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATG
GGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCG
TGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGA
CAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGC
ACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCC
CCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGG
AGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCC
AACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAG
GGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCT
CCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTT
TAGGGGCTACACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGAC
CCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGAT
CTGTATCCTGAACCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGT
GAGGTGGGAAGCTTCTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTC
TCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCC
CTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTC
CTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGC
CCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGG
TGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGC
ATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAAC
TATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATC
TATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCTACACCTCCGAGTGCAGCGAGATT
AGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGAT
CACCAAAGTGACAGACCTGTACCCCGAACCTACACAACTCCTGATGG
GCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCT
ACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTC
AACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGATACACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACCTGTACCCCGAGCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W331(Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F)核苷酸序列(SEQID NO:185)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGG
AGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCC
AACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAG
GGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCT
CCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTT
TAGGGGCATGACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGAC
CCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGAT
CTGTATCCTTTCCCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGT
GAGGTGGGAAGCTTCTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTC
TCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCC
CTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTC
CTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGC
CCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGG
TGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGC
ATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAAC
TATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATC
TATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCATGACCTCCGAGTGCAGCGAGATT
AGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGAT
CACCAAAGTGACAGACCTGTACCCCTTCCCTACACAACTCCTGATGGG
CACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTA
CCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCA
ACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACC
TTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGC
GGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAG
AGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCA
ACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTC
ACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGA
ATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGAATGAC
CTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCG
ATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACCTGTACCCCTTCC
CTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCC
TTCTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAG
GGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTAC
ACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W61(Fc-TL1A+His-TL1A)核苷酸序列(SEQ ID NO:186)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGC
GTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGA
ACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCC
GAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGC
CAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCG
TGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAG
TACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAA
AACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACA
CACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTG
ACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATG
GGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCG
TGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGA
CAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGC
ACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCC
CCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTC
CCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCA
GAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAG
AACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTT
ACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGA
GAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGAC
AAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCC
GACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGA
GCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCA
GCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGG
AGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGAT
TACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTGCATCAT
CACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGA
GTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGG
CGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCC
AGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTG
GGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCT
GCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTT
CAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGG
CCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGA
CAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGT
GCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATG
TTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACAT
TTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTT
CCTGCTG
TL1W3(GD：CBIS中的Fc融合体->同源二聚体Fc融合体；GS-huIgG1 Fc-2(G4S)-hTL1A 72-251)核苷酸序列(SEQ ID NO:187)GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCA GAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
*****
本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的广义的发明构思的情况下，可对上述实施方案作出修改。因此，应当理解，本发明不限于所公开的特定实施方案，而是旨在涵盖如本说明书所定义的本发明实质和范围内的修改。
背景以及说明书全篇中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献中的每一者全文均以引用方式并入本文。本说明书中包括的对文件、行为、材料、装置、文章等的讨论旨在为本发明提供上下文。此类讨论并不是承认这些事项中的任一事项或全部事项均相对于所公开或受权利要求书保护的任何发明形成现有技术的一部分。
序列表
<110> JANSSEN BIOTECH, INC.
<120> 使用工程化配体的材料和方法
<130> 14620-570-228 / JBI6385WOPCT1
<140>
<141>
<150> US 63/149,177
<151> 2021-02-12
<150> US 63/149,175
<151> 2021-02-12
<150> US 63/149,174
<151> 2021-02-12
<150> US 63/149,173
<151> 2021-02-12
<150> US 63/149,171
<151> 2021-02-12
<150> US 63/067,833
<151> 2020-08-19
<150> US 63/067,820
<151> 2020-08-19
<150> US 63/067,813
<151> 2020-08-19
<150> US 63/067,808
<151> 2020-08-19
<150> US 63/067,803
<151> 2020-08-19
<160> 188
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W81 (His-TEV-TL1A K111S)氨基酸序列
<400> 1
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Ser Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 2
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W83 (His-TEV-TL1A E120K)氨基酸序列
<400> 2
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Lys His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 3
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W84 (His-TEV-TL1A E120H)氨基酸序列
<400> 3
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp His His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 4
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W40 (His-TEV-TL1A L123S)氨基酸序列
<400> 4
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Ser Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 5
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W85 (His-TEV-TL1A G124S)氨基酸序列
<400> 5
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Ser Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 6
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W86 (His-TEV-TL1A G124K)氨基酸序列
<400> 6
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Lys Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 7
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W89 (His-TEV-TL1A R156Y)氨基酸序列
<400> 7
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 8
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W92 (His-TEV-TL1A M158Y)氨基酸序列
<400> 8
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 9
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W97 (His-TEV-TL1A K173S)氨基酸序列
<400> 9
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Ser Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 10
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W98 (His-TEV-TL1A K173R)氨基酸序列
<400> 10
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Arg Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 11
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W107 (His-TEV-TL1A D186Y)氨基酸序列
<400> 11
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Tyr
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 12
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W113 (His-TEV-TL1A P189S)氨基酸序列
<400> 12
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Ser Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 13
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W28 (His-TEV-hTL1A 72-251 E190G)氨基酸序列
<400> 13
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Gly Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 14
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W45 (His-TEV-TL1A E190F)氨基酸序列
<400> 14
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 15
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W123 (His-TEV-TL1A N207S)氨基酸序列
<400> 15
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Ser Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 16
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W126 (His-TEV-TL1A F209W)氨基酸序列
<400> 16
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Trp Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 17
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W46 (His-TEV-TL1A T239W)氨基酸序列
<400> 17
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Trp Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 18
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W137 (His-TEV-TL1A K240S)氨基酸序列
<400> 18
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Ser Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 19
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W139 (His-TEV-TL1A E241Q)氨基酸序列
<400> 19
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Gln Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 20
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W2 (His-TEV-hTL1A 72-251)氨基酸序列
<400> 20
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 21
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W47 (His-TEV-TL1A E241A)氨基酸序列
<400> 21
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Ala Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 22
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W136 (His-TEV-TL1A K240F)氨基酸序列
<400> 22
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Phe Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 23
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W138 (His-TEV-TL1A K240D)氨基酸序列
<400> 23
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Asp Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 24
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W135 (His-TEV-TL1A K240A)氨基酸序列
<400> 24
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Ala Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 25
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W134 (His-TEV-TL1A T239K)氨基酸序列
<400> 25
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Lys Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 26
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W133 (His-TEV-TL1A T239F)氨基酸序列
<400> 26
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Phe Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 27
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W27 (His-TEV-hTL1A 72-251 T239E)氨基酸序列
<400> 27
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Glu Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 28
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W132 (His-TEV-TL1A T239A)氨基酸序列
<400> 28
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Ala Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 29
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W128 (His-TEV-TL1A Y238S)氨基酸序列
<400> 29
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Ser Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 30
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W130 (His-TEV-TL1A Y238R)氨基酸序列
<400> 30
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Arg Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 31
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W129 (His-TEV-TL1A Y238K)氨基酸序列
<400> 31
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Lys Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 32
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W131 (His-TEV-TL1A Y238E)氨基酸序列
<400> 32
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Glu Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 33
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W127 (His-TEV-TL1A Y238A)氨基酸序列
<400> 33
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Ala Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 34
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W24 (His-TEV-hTL1A 72-251 F209A)氨基酸序列
<400> 34
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Ala Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 35
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W124 (His-TEV-TL1A N207K)氨基酸序列
<400> 35
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Lys Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 36
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W122 (His-TEV-TL1A N207F)氨基酸序列
<400> 36
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 37
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W125 (His-TEV-TL1A N207E)氨基酸序列
<400> 37
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Glu Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 38
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W25 (His-TEV-hTL1A 72-251 N207A)氨基酸序列
<400> 38
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Ala Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 39
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W120 (His-TEV-TL1A S206K)氨基酸序列
<400> 39
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Lys Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 40
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W119 (His-TEV-TL1A S206F)氨基酸序列
<400> 40
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Phe Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 41
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W121 (His-TEV-TL1A S206E)氨基酸序列
<400> 41
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Glu Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 42
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W118 (His-TEV-TL1A S206A)氨基酸序列
<400> 42
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ala Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 43
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W116 (His-TEV-TL1A T192K)氨基酸序列
<400> 43
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Lys Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 44
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W115 (His-TEV-TL1A T192F)氨基酸序列
<400> 44
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Phe Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 45
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W117 (His-TEV-TL1A T192E)氨基酸序列
<400> 45
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Glu Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 46
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W114 (His-TEV-TL1A T192A)氨基酸序列
<400> 46
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Ala Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 47
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W44 (His-TEV-TL1A P189K)氨基酸序列
<400> 47
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Lys Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 48
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W112 (His-TEV-TL1A P189F)氨基酸序列
<400> 48
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Phe Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 49
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W29 (His-TEV-hTL1A 72-251 P189A)氨基酸序列
<400> 49
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Ala Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 50
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W43 (His-TEV-TL1A Y188S)氨基酸序列
<400> 50
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Ser Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 51
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W32 (His-TEV-hTL1A 72-251 Y188A)氨基酸序列
<400> 51
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Ala Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 52
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W109 (His-TEV-TL1A S187L)氨基酸序列
<400> 52
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 53
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W110 (His-TEV-TL1A S187K)氨基酸序列
<400> 53
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Lys Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 54
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W111 (His-TEV-TL1A S187D)氨基酸序列
<400> 54
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Asp Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 55
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W108 (His-TEV-TL1A S187A)氨基酸序列
<400> 55
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ala Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 56
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W105 (His-TEV-TL1A T185N)氨基酸序列
<400> 56
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Asn Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 57
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W104 (His-TEV-TL1A T185L)氨基酸序列
<400> 57
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Leu Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 58
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W106 (His-TEV-TL1A T185D)氨基酸序列
<400> 58
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Asp Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 59
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W103 (His-TEV-TL1A T185A)氨基酸序列
<400> 59
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Ala Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 60
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W101 (His-TEV-TL1A S176N)氨基酸序列
<400> 60
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Asn Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 61
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W100 (His-TEV-TL1A S176L)氨基酸序列
<400> 61
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Leu Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 62
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W102 (His-TEV-TL1A S176K)氨基酸序列
<400> 62
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Lys Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 63
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W99 (His-TEV-TL1A S176A)氨基酸序列
<400> 63
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ala Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 64
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W96 (His-TEV-TL1A R170E)氨基酸序列
<400> 64
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Glu
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 65
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W95 (His-TEV-TL1A Q167A)氨基酸序列
<400> 65
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 66
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W93 (His-TEV-TL1A M158K)氨基酸序列
<400> 66
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Lys Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 67
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W94 (His-TEV-TL1A M158E)氨基酸序列
<400> 67
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Glu Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 68
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W90 (His-TEV-TL1A R156K)氨基酸序列
<400> 68
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Lys Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 69
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W91 (His-TEV-TL1A R156E)氨基酸序列
<400> 69
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Glu Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 70
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W88 (His-TEV-TL1A R156A)氨基酸序列
<400> 70
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Ala Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 71
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W87 (His-TEV-TL1A G124D)氨基酸序列
<400> 71
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Asp Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 72
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W38 (His-TEV-TL1A L123K)氨基酸序列
<400> 72
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 73
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W39 (His-TEV-TL1A L123G)氨基酸序列
<400> 73
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Gly Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 74
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W37 (His-TEV-TL1A L123E)氨基酸序列
<400> 74
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Glu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 75
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W41 (His-TEV-TL1A E120A)氨基酸序列
<400> 75
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Ala His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 76
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W42 (His-TEV-TL1A F114A)氨基酸序列
<400> 76
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Ala Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 77
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W30 (His-TEV-hTL1A 72-251 N112E)氨基酸序列
<400> 77
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Glu Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 78
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W82 (His-TEV-TL1A K111E)氨基酸序列
<400> 78
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Glu Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 79
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W80 (His-TEV-TL1A K111A)氨基酸序列
<400> 79
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 80
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W31 (GD: Single chain MMB in CBIS; His-TEV-hTL1A 72-251 R103Q)
氨基酸序列
<400> 80
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Gln Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 81
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W78 (His-TEV-TL1A R103H)氨基酸序列
<400> 81
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val His Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 82
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W79 (His-TEV-TL1A R103E)氨基酸序列
<400> 82
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Glu Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 83
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W33 (His-TEV-hTL1A 72-251 R103A)氨基酸序列
<400> 83
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly
1 5 10 15
Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala
20 25 30
Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Ala Gln Thr Pro
35 40 45
Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu
50 55 60
Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe
65 70 75 80
Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr
85 90 95
Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg
100 105 110
Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp
115 120 125
Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys
130 135 140
Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
145 150 155 160
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser
165 170 175
Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu
180 185 190
Leu
<210> 84
<211> 1131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W15（GD：CBIS中的单链蛋白质-> HSA C端融合体；His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A）氨基酸序列
<400> 84
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Asp Ala His
1 5 10 15
Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe
20 25 30
Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro
35 40 45
Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys
50 55 60
Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His
65 70 75 80
Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr
85 90 95
Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu
115 120 125
Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu
130 135 140
Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro
145 150 155 160
Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala
165 170 175
Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu
180 185 190
Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys
195 200 205
Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe
210 215 220
Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu
225 230 235 240
Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr
245 250 255
Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp
260 265 270
Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu
275 280 285
Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala
290 295 300
Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala
305 310 315 320
Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys
325 330 335
Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro
340 345 350
Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr
355 360 365
Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala
370 375 380
Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu
385 390 395 400
Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe
405 410 415
Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser
420 425 430
Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser
435 440 445
Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp
450 455 460
Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr
465 470 475 480
Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn
485 490 495
Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro
500 505 510
Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr
515 520 525
Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu
530 535 540
Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val
545 550 555 560
Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp
565 570 575
Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser
580 585 590
Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu
595 600 605
Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln
610 615 620
Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu
625 630 635 640
His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn
645 650 655
Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln
660 665 670
Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala
675 680 685
Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val
690 695 700
Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser
705 710 715 720
Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala
725 730 735
Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp
740 745 750
Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala
755 760 765
Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val
770 775 780
Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr
785 790 795 800
Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala
805 810 815
Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met
820 825 830
Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe
835 840 845
Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu
850 855 860
Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val
865 870 875 880
Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met
885 890 895
Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile
900 905 910
Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val
915 920 925
Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr
930 935 940
Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
945 950 955 960
Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg
965 970 975
Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn
980 985 990
Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr
995 1000 1005
Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu
1010 1015 1020
Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met
1025 1030 1035
Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys
1040 1045 1050
Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr
1055 1060 1065
Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu
1070 1075 1080
Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe
1085 1090 1095
Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile
1100 1105 1110
Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala
1115 1120 1125
Phe Leu Leu
1130
<210> 85
<211> 788
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W9（GD：CBIS中的单链蛋白质-> HSA C端融合体；His-TEV-G-HSA (C34S)-2(G4S)-TL1A）氨基酸序列
<400> 85
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Asp Ala His
1 5 10 15
Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe
20 25 30
Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro
35 40 45
Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys
50 55 60
Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His
65 70 75 80
Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr
85 90 95
Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu
115 120 125
Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu
130 135 140
Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro
145 150 155 160
Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala
165 170 175
Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu
180 185 190
Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys
195 200 205
Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe
210 215 220
Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu
225 230 235 240
Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr
245 250 255
Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp
260 265 270
Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu
275 280 285
Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala
290 295 300
Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala
305 310 315 320
Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys
325 330 335
Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro
340 345 350
Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr
355 360 365
Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala
370 375 380
Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu
385 390 395 400
Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe
405 410 415
Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser
420 425 430
Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser
435 440 445
Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp
450 455 460
Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr
465 470 475 480
Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn
485 490 495
Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro
500 505 510
Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr
515 520 525
Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu
530 535 540
Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val
545 550 555 560
Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp
565 570 575
Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser
580 585 590
Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
595 600 605
Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro
610 615 620
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
625 630 635 640
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
645 650 655
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
660 665 670
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
675 680 685
Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln
690 695 700
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
705 710 715 720
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
725 730 735
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
740 745 750
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
755 760 765
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
770 775 780
Ala Phe Leu Leu
785
<210> 86
<211> 511
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W19 (His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A)氨基酸序列
<400> 86
His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ala Pro Leu
1 5 10 15
Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln
20 25 30
Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu
35 40 45
His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn
50 55 60
Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln
65 70 75 80
Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala
85 90 95
Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val
100 105 110
Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser
115 120 125
Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala
130 135 140
Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala
165 170 175
Phe Leu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His
180 185 190
Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe
195 200 205
Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn
210 215 220
Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp
225 230 235 240
Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys
245 250 255
Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr
260 265 270
Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu
275 280 285
Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln
290 295 300
Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu
305 310 315 320
Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp
325 330 335
Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly
340 345 350
Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln
355 360 365
His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly
370 375 380
Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu
385 390 395 400
Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg
405 410 415
Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn
420 425 430
Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr
435 440 445
Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val
450 455 460
Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu
465 470 475 480
Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val
485 490 495
Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
500 505 510
<210> 87
<211> 756
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W14（具有CD4 HC sp prim_转录物的Fc-scTL1A）氨基酸序列
<400> 87
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro
225 230 235 240
Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys
245 250 255
Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu
275 280 285
Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr
290 295 300
Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp
305 310 315 320
Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro
325 330 335
Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn
340 345 350
Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly
355 360 365
Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr
370 375 380
Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser
385 390 395 400
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp
405 410 415
Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr
420 425 430
Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu
435 440 445
Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe
465 470 475 480
Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro
485 490 495
Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser
500 505 510
Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu
515 520 525
Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser
530 535 540
Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu
545 550 555 560
Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
565 570 575
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro
580 585 590
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
595 600 605
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
610 615 620
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
625 630 635 640
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
645 650 655
Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln
660 665 670
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
675 680 685
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
690 695 700
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
705 710 715 720
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
725 730 735
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
740 745 750
Ala Phe Leu Leu
755
<210> 88
<211> 756
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W3（GD：CBIS中的Fc融合体->同源二聚体Fc融合体；GS-huIgG1 Fc2(G4S)-hTL1A 72-251）氨基酸序列
<400> 88
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro
225 230 235 240
Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala
245 250 255
Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu
275 280 285
Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr
290 295 300
Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp
305 310 315 320
Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Phe Pro
325 330 335
Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe
340 345 350
Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly
355 360 365
Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr
370 375 380
Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser
385 390 395 400
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp
405 410 415
Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr
420 425 430
Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys
435 440 445
Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe
465 470 475 480
Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro
485 490 495
Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser
500 505 510
Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu
515 520 525
Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser
530 535 540
Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu
545 550 555 560
Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
565 570 575
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro
580 585 590
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
595 600 605
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
610 615 620
Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
625 630 635 640
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
645 650 655
Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala
660 665 670
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
675 680 685
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
690 695 700
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
705 710 715 720
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
725 730 735
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
740 745 750
Ala Phe Leu Leu
755
<210> 89
<211> 756
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W327 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F氨基酸序列
<400> 89
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro
225 230 235 240
Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala
245 250 255
Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu
275 280 285
Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr
290 295 300
Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp
305 310 315 320
Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro
325 330 335
Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn
340 345 350
Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly
355 360 365
Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr
370 375 380
Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser
385 390 395 400
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp
405 410 415
Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr
420 425 430
Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys
435 440 445
Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe
465 470 475 480
Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro
485 490 495
Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu
500 505 510
Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu
515 520 525
Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser
530 535 540
Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu
545 550 555 560
Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
565 570 575
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro
580 585 590
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
595 600 605
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
610 615 620
Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
625 630 635 640
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
645 650 655
Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala
660 665 670
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
675 680 685
Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
690 695 700
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
705 710 715 720
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
725 730 735
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
740 745 750
Ala Phe Leu Leu
755
<210> 90
<211> 756
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W328 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F) 氨基酸序列
<400> 90
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro
225 230 235 240
Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala
245 250 255
Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu
275 280 285
Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr
290 295 300
Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp
305 310 315 320
Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu Tyr Pro Glu Pro
325 330 335
Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe
340 345 350
Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly
355 360 365
Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr
370 375 380
Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser
385 390 395 400
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp
405 410 415
Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr
420 425 430
Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys
435 440 445
Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe
465 470 475 480
Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro
485 490 495
Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu
500 505 510
Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu
515 520 525
Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser
530 535 540
Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu
545 550 555 560
Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
565 570 575
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro
580 585 590
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
595 600 605
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
610 615 620
Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
625 630 635 640
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
645 650 655
Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala
660 665 670
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
675 680 685
Val Thr Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
690 695 700
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
705 710 715 720
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
725 730 735
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
740 745 750
Ala Phe Leu Leu
755
<210> 91
<211> 756
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W331 (Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F) 氨基酸序列
<400> 91
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro
225 230 235 240
Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala
245 250 255
Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe
260 265 270
Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu
275 280 285
Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr
290 295 300
Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp
305 310 315 320
Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro
325 330 335
Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe
340 345 350
Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly
355 360 365
Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr
370 375 380
Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser
385 390 395 400
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp
405 410 415
Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr
420 425 430
Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys
435 440 445
Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu
450 455 460
Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe
465 470 475 480
Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro
485 490 495
Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu
500 505 510
Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu
515 520 525
Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser
530 535 540
Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu
545 550 555 560
Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
565 570 575
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro
580 585 590
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
595 600 605
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
610 615 620
Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
625 630 635 640
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
645 650 655
Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala
660 665 670
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
675 680 685
Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
690 695 700
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
705 710 715 720
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
725 730 735
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
740 745 750
Ala Phe Leu Leu
755
<210> 92
<211> 601
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W61 (Fc-TL1A+His-TL1A)氨基酸序列
<400> 92
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln
225 230 235 240
Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu
245 250 255
Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro
260 265 270
Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg
275 280 285
Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr
290 295 300
Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser
305 310 315 320
Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val
325 330 335
Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu
340 345 350
Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro
355 360 365
Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met
370 375 380
Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys
385 390 395 400
Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu His His His His His His Glu Asn
405 410 415
Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln
420 425 430
Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His
435 440 445
Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe
450 455 460
Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn
465 470 475 480
Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp
485 490 495
Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys
500 505 510
Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr
515 520 525
Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu
530 535 540
Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln
545 550 555 560
Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu
565 570 575
Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp
580 585 590
Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
595 600
<210> 93
<211> 408
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W3（GD：CBIS中的Fc融合体->同源二聚体Fc融合体；GS-huIgG1 Fc2(G4S)-hTL1A 72-251）氨基酸序列
<400> 93
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Ser Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln
225 230 235 240
Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu
245 250 255
Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro
260 265 270
Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg
275 280 285
Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr
290 295 300
Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser
305 310 315 320
Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val
325 330 335
Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu
340 345 350
Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro
355 360 365
Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met
370 375 380
Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys
385 390 395 400
Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
405
<210> 94
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hTL1A (1-251)氨基酸序列
<400> 94
Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu
1 5 10 15
Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser
20 25 30
Ala Arg Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala
35 40 45
Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu
50 55 60
Ala Cys Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser
65 70 75 80
His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg
85 90 95
Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn
100 105 110
Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr
115 120 125
Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser
130 135 140
Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser
145 150 155 160
Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser
165 170 175
Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr
180 185 190
Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp
195 200 205
Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp
210 215 220
Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys
225 230 235 240
Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu
245 250
<210> 95
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W81 (His-TEV-TL1A K111S) 核苷酸序列
<400> 95
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcagca accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 96
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W83 (His-TEV-TL1A E120K) 核苷酸序列
<400> 96
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tggaagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 97
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W84 (His-TEV-TL1A E120H) 核苷酸序列
<400> 97
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tggcaccacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 98
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W40 (His-TEV-TL1A L123S) 核苷酸序列
<400> 98
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agtcgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 99
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W85 (His-TEV-TL1A) 核苷酸序列
<400> 99
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgagcct ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 100
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W86 (His-TEV-TL1A G124K) 核苷酸序列
<400> 100
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgaagct ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 101
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W89 (His-TEV-TL1A R156Y) 核苷酸序列
<400> 101
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt ctacggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 102
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W92 (His-TEV-TL1A M158Y) 核苷酸序列
<400> 102
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggctac 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 103
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W97 (His-TEV-TL1A K173S) 核苷酸序列
<400> 103
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta atagccccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 104
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W98 (His-TEV-TL1A K173R) 核苷酸序列
<400> 104
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta atcggcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 105
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W107 (His-TEV-TL1A D186Y) 核苷酸序列
<400> 105
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac ctacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 106
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W113 (His-TEV-TL1A P189S) 核苷酸序列
<400> 106
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac agcgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 107
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W28 (His-TEV-hTL1A 72-251 E190G) 核苷酸序列
<400> 107
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccggcccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 108
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W45 (His-TEV-TL1A E190F) 核苷酸序列
<400> 108
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac ccctttccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 109
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W123 (His-TEV-TL1A N207S) 核苷酸序列
<400> 109
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcagctgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 110
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W126 (His-TEV-TL1A F209W) 核苷酸序列
<400> 110
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg tggcagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 111
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W46 (His-TEV-TL1A T239W) 核苷酸序列
<400> 111
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
tggaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 112
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W137 (His-TEV-TL1A K240S) 核苷酸序列
<400> 112
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accagcgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 113
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W139 (His-TEV-TL1A E241Q) 核苷酸序列
<400> 113
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaagcagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 114
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W2 (His-TEV-hTL1A 72-251) 核苷酸序列
<400> 114
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 115
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W47 (His-TEV-TL1A E241A) 核苷酸序列
<400> 115
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggcgg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 116
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W136 (His-TEV-TL1A K240F) 核苷酸序列
<400> 116
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accttcgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 117
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W138 (His-TEV-TL1A K240D) 核苷酸序列
<400> 117
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accgacgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 118
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W135 (His-TEV-TL1A K240A) 核苷酸序列
<400> 118
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accgccgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 119
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W134 (His-TEV-TL1A T239K) 核苷酸序列
<400> 119
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
aagaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 120
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W133 (His-TEV-TL1A T239F) 核苷酸序列
<400> 120
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
ttcaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 121
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W27 (His-TEV-hTL1A 72-251 T239E) 核苷酸序列
<400> 121
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
gaaaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 122
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W132 (His-TEV-TL1A T239A) 核苷酸序列
<400> 122
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
gccaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 123
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W128 (His-TEV-TL1A Y238S) 核苷酸序列
<400> 123
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatagc 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 124
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W130 (His-TEV-TL1A Y238R) 核苷酸序列
<400> 124
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatcgg 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 125
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W129 (His-TEV-TL1A Y238K) 核苷酸序列
<400> 125
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgataag 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 126
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W131 (His-TEV-TL1A Y238E) 核苷酸序列
<400> 126
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatgag 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 127
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W127 (His-TEV-TL1A Y238A) 核苷酸序列
<400> 127
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatgcc 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 128
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W24 (His-TEV-hTL1A 72-251 F209A) 核苷酸序列
<400> 128
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg gcccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 129
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W124 (His-TEV-TL1A N207K) 核苷酸序列
<400> 129
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaagtgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 130
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W122 (His-TEV-TL1A N207F) 核苷酸序列
<400> 130
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcttctgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 131
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W125 (His-TEV-TL1A N207E) 核苷酸序列
<400> 131
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcgagtgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 132
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W25 (His-TEV-hTL1A 72-251 N207A) 核苷酸序列
<400> 132
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcgcctgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 133
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W120 (His-TEV-TL1A S206K) 核苷酸序列
<400> 133
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg caagaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 134
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W119 (His-TEV-TL1A S206F) 核苷酸序列
<400> 134
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cttcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 135
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W121 (His-TEV-TL1A S206E) 核苷酸序列
<400> 135
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cgagaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 136
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W118 (His-TEV-TL1A S206A) 核苷酸序列
<400> 136
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cgccaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 137
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W116 (His-TEV-TL1A T192K) 核苷酸序列
<400> 137
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca agcagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 138
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W115 (His-TEV-TL1A T192F) 核苷酸序列
<400> 138
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccct tccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 139
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W117 (His-TEV-TL1A T192E) 核苷酸序列
<400> 139
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagcccg agcagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 140
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W114 (His-TEV-TL1A T192A) 核苷酸序列
<400> 140
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagcccg cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 141
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W44 (His-TEV-TL1A P189K) 核苷酸序列
<400> 141
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac aaagagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 142
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W112 (His-TEV-TL1A P189F) 核苷酸序列
<400> 142
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac ttcgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 143
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W29 (His-TEV-hTL1A 72-251 P189A) 核苷酸序列
<400> 143
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac gccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 144
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W43 (His-TEV-TL1A Y188S) 核苷酸序列
<400> 144
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctcc cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 145
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W32 (His-TEV-hTL1A 72-251 Y188A) 核苷酸序列
<400> 145
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagcgcc cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 146
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W109 (His-TEV-TL1A S187L) 核苷酸序列
<400> 146
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacctctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 147
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W110 (His-TEV-TL1A S187K) 核苷酸序列
<400> 147
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacaagtac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 148
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W111 (His-TEV-TL1A S187D) 核苷酸序列
<400> 148
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacgactac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 149
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W108 (His-TEV-TL1A S187A) 核苷酸序列
<400> 149
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacgcctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 150
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W105 (His-TEV-TL1A T185N) 核苷酸序列
<400> 150
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgaa cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 151
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W104 (His-TEV-TL1A T185L) 核苷酸序列
<400> 151
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgct cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 152
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W106 (His-TEV-TL1A T185D) 核苷酸序列
<400> 152
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgga cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 153
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W103 (His-TEV-TL1A T185A) 核苷酸序列
<400> 153
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtggc cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 154
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W101 (His-TEV-TL1A S176N) 核苷酸序列
<400> 154
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga caacatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 155
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W100 (His-TEV-TL1A S176L) 核苷酸序列
<400> 155
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga cctcatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 156
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W102 (His-TEV-TL1A S176K) 核苷酸序列
<400> 156
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga caagatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 157
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W99 (His-TEV-TL1A S176A) 核苷酸序列
<400> 157
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga cgccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 158
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W96 (His-TEV-TL1A R170E) 核苷酸序列
<400> 158
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggagagccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 159
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W95 (His-TEV-TL1A Q167A) 核苷酸序列
<400> 159
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagagccgcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 160
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W93 (His-TEV-TL1A M158K) 核苷酸序列
<400> 160
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcaag 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 161
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W94 (His-TEV-TL1A M158E) 核苷酸序列
<400> 161
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcgag 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 162
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W90 (His-TEV-TL1A R156K) 核苷酸序列
<400> 162
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caagggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 163
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W91 (His-TEV-TL1A R156E) 核苷酸序列
<400> 163
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt cgagggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 164
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W88 (His-TEV-TL1A R156A) 核苷酸序列
<400> 164
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt cgccggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 165
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W87 (His-TEV-TL1A G124D) 核苷酸序列
<400> 165
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctggacct ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 166
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W38 (His-TEV-TL1A L123K) 核苷酸序列
<400> 166
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agaagggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 167
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W39 (His-TEV-TL1A L123G) 核苷酸序列
<400> 167
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg aggggggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 168
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W37 (His-TEV-TL1A L123E) 核苷酸序列
<400> 168
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg aggagggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 169
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W41 (His-TEV-TL1A E120A) 核苷酸序列
<400> 169
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggcgcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 170
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W42 (His-TEV-TL1A F114A) 核苷酸序列
<400> 170
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accaggctcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 171
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W30 (His-TEV-hTL1A 72-251 N112E) 核苷酸序列
<400> 171
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaagg aacagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 172
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W82 (His-TEV-TL1A K111E) 核苷酸序列
<400> 172
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcgaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 173
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W80 (His-TEV-TL1A K111A) 核苷酸序列
<400> 173
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcgcca accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 174
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W31 (GD: Single chain MMB in CBIS; His-TEV-hTL1A 72-251 R103Q)
核苷酸序列
<400> 174
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgcaacagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 175
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W78 (His-TEV-TL1A R103H) 核苷酸序列
<400> 175
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tgcaccagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 176
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W79 (His-TEV-TL1A R103E) 核苷酸序列
<400> 176
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tggagcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 177
<211> 579
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W33 (His-TEV-hTL1A 72-251 R103A) 核苷酸序列
<400> 177
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60
ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120
ctgaccgtcg tggcccagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180
tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240
ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300
acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360
gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420
aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480
agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540
accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579
<210> 178
<211> 3393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W15（GD：CBIS中的单链蛋白质-> HSA C端融合体；His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A)核苷酸序列
<400> 178
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtg atgctcacaa gtccgaggtg 60
gctcacaggt ttaaagacct cggcgaggag aacttcaagg ccctcgtcct gattgctttc 120
gctcagtacc tgcagcagtc ccccttcgag gaccatgtca agctggtgaa tgaggtgaca 180
gaattcgcca agacctgtgt ggctgacgaa tccgctgaga actgcgacaa gtccctgcac 240
accctgttcg gcgataaact gtgcacagtg gctaccctca gagaaaccta tggcgaaatg 300
gccgactgtt gcgccaagca agagcccgag aggaacgaat gcttcctcca gcacaaggat 360
gacaatccta acctgcccag actggtgaga cccgaggtgg atgtcatgtg cacagccttc 420
cacgataacg aggagacatt cctgaagaaa tatctctatg aaatcgccag gaggcatccc 480
tacttctatg cccccgagct gctcttcttc gccaagaggt ataaagccgc tttcaccgag 540
tgctgccagg ctgccgacaa ggccgcttgt ctgctgccca agctggacga gctgagggac 600
gagggaaagg ctagctccgc taagcagaga ctgaagtgcg ccagcctgca gaaattcgga 660
gaaagggcct tcaaggcctg ggccgtggct aggctgagcc agagatttcc taaggccgag 720
tttgccgaag tgagcaagct ggtgaccgac ctaacaaagg tccacacaga atgttgccac 780
ggcgacctgc tggagtgcgc cgatgatagg gccgatctgg ccaaatacat ctgtgagaac 840
caagactcca tctcctccaa gctgaaggag tgttgcgaga agcctctgct cgagaagagc 900
cactgcatcg ctgaagtcga gaacgacgag atgcctgccg atctcccctc cctggccgcc 960
gatttcgtgg aatccaagga cgtctgtaag aactacgccg aggccaagga tgtgttcctg 1020
ggaatgttcc tgtacgagta cgctaggagg caccctgact atagcgtggt gctcctcctg 1080
aggctggcca agacatatga gaccaccctg gaaaagtgct gcgccgctgc cgatccccat 1140
gagtgctatg ccaaggtctt cgacgagttt aagcccctgg tggaagagcc ccagaacctg 1200
atcaaacaga actgtgagct gttcgagcag ctcggagagt acaagttcca gaatgccctc 1260
ctcgtgaggt acacaaagaa ggtcccccag gtctccacac ctaccctggt ggaggtctcc 1320
agaaacctgg gcaaggtggg atccaagtgc tgcaagcatc ctgaggccaa aagaatgccc 1380
tgtgctgagg attacctgag cgtggtcctg aatcagctgt gcgtgctgca tgaaaaaacc 1440
cccgtctccg atagggtcac aaagtgctgc accgagagcc tggtgaatag aaggccctgt 1500
ttctccgccc tggaggtgga cgaaacctat gtccccaaag agttcaacgc tgaaacattt 1560
accttccacg ctgacatttg caccctgagc gagaaggaga ggcagatcaa gaagcagaca 1620
gctctcgtgg agctcgtgaa gcacaaacct aaagccacaa aggagcaact gaaggccgtc 1680
atggacgact ttgccgcttt cgtcgagaag tgctgtaagg ccgacgacaa ggagacatgt 1740
ttcgccgagg agggaaagaa gctggtcgct gctagccaag ctgccctggg cctgggagga 1800
ggaggaagcg tgtatgcccc cctgagagct gacggagata agcctagggc ccacctgacc 1860
gtcgtcagac agacccctac ccaacacttc aagaaccagt tccccgctct gcactgggag 1920
cacgaactgg gcctggcctt cacaaaaaac agaatgaatt acaccaacaa gttcctcctg 1980
attcccgaaa gcggcgatta ttttatctac agccaggtga cctttagggg catgacatcc 2040
gagtgctccg agatcagaca agccggaaga cccaacaagc ccgactccat cacagtggtc 2100
atcacaaagg tgacagatag ctatcctgaa cctacccagc tgctgatggg caccaagtcc 2160
gtctgtgagg tgggaagcaa ctggtttcaa cccatctacc tgggcgctat gttctccctg 2220
caagagggcg ataagctgat ggtgaatgtg tccgacattt ccctggtgga ttataccaaa 2280
gaggacaaga ccttctttgg cgcctttctc ctgggaggag gatccggcgg aggatccgga 2340
ggcggctccg tctatgcccc tctgagggct gacggagaca agcccagggc ccatctgacc 2400
gtggtgagac aaacccccac ccaacacttt aagaaccagt ttcctgctct gcattgggag 2460
catgagctgg gcctggcctt taccaaaaat aggatgaact ataccaataa gttcctgctg 2520
atccccgagt ccggagacta ctttatctat tcccaggtca ccttcagggg catgacctcc 2580
gagtgcagcg agattagaca ggccggcaga cccaataaac ccgacagcat caccgtcgtg 2640
atcaccaaag tgacagactc ctaccccgaa cctacacaac tcctgatggg caccaaaagc 2700
gtgtgcgaag tgggctccaa ctggttccag cccatctacc tgggcgctat gtttagcctg 2760
caagaaggcg ataaactgat ggtcaacgtg tccgacatca gcctggtcga ctacacaaaa 2820
gaggataaga ccttcttcgg agcctttctg ctcggaggag gatccggcgg cggcagcggc 2880
ggaggcagcg tctacgcccc cctgagagct gatggcgata aacctagagc ccatctgaca 2940
gtggtgagac agacccccac ccagcatttc aaaaaccagt ttcccgccct gcattgggaa 3000
cacgagctgg gactggcctt caccaaaaac aggatgaatt ataccaacaa atttctgctg 3060
atccccgaat ccggcgatta cttcatctac agccaagtga ccttcagggg aatgacctcc 3120
gaatgttccg aaatcagaca ggctggcagg cccaacaaac ccgattccat caccgtggtg 3180
atcaccaagg tgaccgacag ctaccccgag cctacccaac tgctgatggg aaccaagagc 3240
gtgtgtgagg tgggctccaa ttggttccag cccatctatc tgggcgccat gttcagcctg 3300
caggagggag acaaactgat ggtgaacgtg tccgatatct ccctcgtcga ctacaccaag 3360
gaggataaaa cctttttcgg cgccttcctg ctc 3393
<210> 179
<211> 2364
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W9（GD：CBIS中的单链蛋白质-> HSA C端融合体；His-TEV-G-HSA (C34S)-2(G4S)-TL1A）核苷酸序列
<400> 179
catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtg atgctcacaa gtccgaggtg 60
gctcacaggt ttaaagacct cggcgaggag aacttcaagg ccctcgtcct gattgctttc 120
gctcagtacc tgcagcagtc ccccttcgag gaccatgtca agctggtgaa tgaggtgaca 180
gaattcgcca agacctgtgt ggctgacgaa tccgctgaga actgcgacaa gtccctgcac 240
accctgttcg gcgataaact gtgcacagtg gctaccctca gagaaaccta tggcgaaatg 300
gccgactgtt gcgccaagca agagcccgag aggaacgaat gcttcctcca gcacaaggat 360
gacaatccta acctgcccag actggtgaga cccgaggtgg atgtcatgtg cacagccttc 420
cacgataacg aggagacatt cctgaagaaa tatctctatg aaatcgccag gaggcatccc 480
tacttctatg cccccgagct gctcttcttc gccaagaggt ataaagccgc tttcaccgag 540
tgctgccagg ctgccgacaa ggccgcttgt ctgctgccca agctggacga gctgagggac 600
gagggaaagg ctagctccgc taagcagaga ctgaagtgcg ccagcctgca gaaattcgga 660
gaaagggcct tcaaggcctg ggccgtggct aggctgagcc agagatttcc taaggccgag 720
tttgccgaag tgagcaagct ggtgaccgac ctgacaaagg tccacacaga atgttgccac 780
ggcgacctgc tggagtgcgc cgatgatagg gccgatctgg ccaaatacat ctgtgagaac 840
caagactcca tctcctccaa gctgaaggag tgttgcgaga agcctctgct cgagaagagc 900
cactgcatcg ctgaagtcga gaacgacgag atgcctgccg atctcccctc cctggccgcc 960
gatttcgtgg aatccaagga cgtctgtaag aactacgccg aggccaagga tgtgttcctg 1020
ggaatgttcc tgtacgagta cgctaggagg caccctgact atagcgtggt gctcctcctg 1080
aggctggcca agacatatga gaccaccctg gaaaagtgct gcgccgctgc cgatccccat 1140
gagtgctatg ccaaggtctt cgacgagttt aagcccctgg tggaagagcc ccagaacctg 1200
atcaaacaga actgtgagct gttcgagcag ctcggagagt acaagttcca gaatgccctc 1260
ctcgtgaggt acacaaagaa ggtcccccag gtctccacac ctaccctggt ggaggtctcc 1320
agaaacctgg gcaaggtggg atccaagtgc tgcaagcatc ctgaggccaa aagaatgccc 1380
tgtgctgagg attacctgag cgtggtcctg aatcagctgt gcgtgctgca tgaaaagacc 1440
cccgtctccg atagggtcac aaagtgctgc accgagagcc tggtgaatag aaggccctgt 1500
ttctccgccc tggaggtgga cgaaacctat gtccccaaag agttcaacgc tgaaacattt 1560
accttccacg ctgacatttg caccctgagc gagaaggaga ggcagatcaa gaagcagaca 1620
gctctcgtgg agctcgtgaa gcacaaacct aaagccacaa aggagcaact gaaggccgtc 1680
atggacgact ttgccgcttt cgtcgagaag tgctgtaagg ccgacgacaa ggagacatgt 1740
ttcgccgagg agggaaagaa gctggtcgct gctagccaag ctgccctggg cctgggagga 1800
ggaggaagcg gcggaggagg atccctcaag ggccaggagt tcgctccctc ccatcagcag 1860
gtgtacgctc ccctgagagc cgatggcgat aagcccagag cccacctgac cgtcgtgagg 1920
cagaccccca cccagcactt caagaaccag tttcccgccc tccactggga gcacgagctg 1980
ggactggcct ttaccaagaa cagaatgaat tacaccaaca agtttctgct catccccgag 2040
agcggagact acttcatcta ctcccaggtg accttcaggg gcatgacaag cgagtgcagc 2100
gagatcagac aggccggaag gcctaataag cccgactcca tcacagtggt gatcacaaag 2160
gtgaccgaca gctaccccga gcccacccag ctgctgatgg gcaccaagag cgtgtgcgaa 2220
gtgggcagca actggttcca gcccatctac ctgggcgcca tgttcagcct gcaggagggc 2280
gacaagctga tggtgaacgt gagcgacatt tccctggtcg attacaccaa ggaggataag 2340
accttcttcg gcgccttcct gctg 2364
<210> 180
<211> 1533
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W19 (His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A) 核苷酸序列
<400> 180
catcatcatc accaccacga gaatctctat tttcagggcg ctcccctgag agccgatggc 60
gataagccta gagcccacct gacagtggtg agacaaaccc ctacacagca cttcaaaaat 120
cagttccctg ccctgcactg ggaacatgag ctgggcctgg ccttcaccaa gaacaggatg 180
aattacacaa ataagttcct gctcatccct gagtccggcg actacttcat ctatagccaa 240
gtgaccttca gaggcatgac cagcgagtgc tccgagatca ggcaggctgg aagacctaac 300
aagcccgata gcatcaccgt ggtgattaca aaggtgacag acagctatcc cgagcccaca 360
cagctgctca tgggcaccaa aagcgtgtgc gaagtcggca gcaactggtt ccagcccatc 420
tacctgggcg ccatgtttag cctgcaggaa ggagataagc tgatggtcaa tgtctccgat 480
atctccctgg tggattacac caaggaggac aaaaccttct tcggcgcttt tctgctggcc 540
cctctcaggg ccgatggaga taaacccagg gctcacctga cagtcgtcag gcagacccct 600
acacaacact tcaagaatca attccccgcc ctgcattggg agcacgaact gggcctggcc 660
ttcacaaaaa ataggatgaa ctataccaac aaattcctgc tgatccctga atccggcgat 720
tacttcatct actcccaggt gaccttcaga ggcatgacca gcgaatgcag cgaaatcaga 780
caagctggca gacccaacaa acccgacagc attaccgtgg tcatcaccaa ggtcacagat 840
agctaccccg aacccacaca gctcctgatg ggcaccaagt ccgtctgtga ggtcggcagc 900
aattggttcc agcctatcta tctgggcgcc atgtttagcc tgcaagaggg agacaaactg 960
atggtgaatg tgtccgacat ctccctggtg gattacacca aagaggataa aacctttttc 1020
ggcgccttcc tgctggctcc tctgagggct gacggcgaca agcccagagc tcacctgacc 1080
gtcgtgaggc aaacccctac ccagcacttt aagaaccagt ttcccgccct gcactgggag 1140
catgagctgg gcctggcctt taccaaaaac agaatgaact acaccaacaa gtttctgctg 1200
atccccgaaa gcggcgacta ttttatctat agccaggtga cctttagagg catgaccagc 1260
gagtgtagcg agattagaca ggctggcagg cctaacaagc ctgacagcat caccgtggtg 1320
atcaccaaag tgaccgactc ctaccccgag cccacccaac tgctcatggg cacaaagagc 1380
gtgtgtgagg tgggctccaa ttggtttcaa cccatctatc tgggcgccat gttcagcctg 1440
caagaaggag acaagctcat ggtcaatgtg agcgacatca gcctggtgga ctataccaaa 1500
gaagacaaga ccttcttcgg agcctttctg ctg 1533
<210> 181
<211> 2268
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W14（具有CD4 HC sp prim_转录物的Fc-scTL1A）核苷酸序列
<400> 181
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720
agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcaagaa ccagttcccc 780
gctctgcact gggagcacga actgggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840
aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900
aggggcatga catccgagtg ctccgagatc agacaagccg gaagacccaa caagcccgac 960
tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatagctatc ctgaacctac ccagctgctg 1020
atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcaactggt ttcaacccat ctacctgggc 1080
gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140
gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200
ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260
agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttaagaa ccagtttcct 1320
gctctgcatt gggagcatga gctgggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380
aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440
aggggcatga cctccgagtg cagcgagatt agacaggccg gcagacccaa taaacccgac 1500
agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gactcctacc ccgaacctac acaactcctg 1560
atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccaactggt tccagcccat ctacctgggc 1620
gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680
gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740
ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800
agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcaaaaa ccagtttccc 1860
gccctgcatt gggaacacga gctgggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920
aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980
aggggaatga cctccgaatg ttccgaaatc agacaggctg gcaggcccaa caaacccgat 2040
tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacagctacc ccgagcctac ccaactgctg 2100
atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccaattggt tccagcccat ctatctgggc 2160
gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220
gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268
<210> 182
<211> 2268
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W329 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F)
核苷酸序列
<400> 182
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720
agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780
gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840
aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900
aggggctaca catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960
tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatagctatc ctttccctac ccagctgctg 1020
atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcttctggt ttcaacccat ctacctgggc 1080
gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140
gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200
ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260
agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320
gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380
aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440
aggggctaca cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500
agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gactcctacc ccttccctac acaactcctg 1560
atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccttctggt tccagcccat ctacctgggc 1620
gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680
gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740
ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800
agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860
gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920
aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980
aggggataca cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040
tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacagctacc ccttccctac ccaactgctg 2100
atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccttctggt tccagcccat ctatctgggc 2160
gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220
gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268
<210> 183
<211> 2268
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W327 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F)
核苷酸序列
<400> 183
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720
agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780
gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840
aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900
aggggctaca catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960
tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatctgtatc ctttccctac ccagctgctg 1020
atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcaactggt ttcaacccat ctacctgggc 1080
gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140
gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200
ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260
agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320
gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380
aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440
aggggctaca cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500
agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gacctgtacc ccttccctac acaactcctg 1560
atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccaactggt tccagcccat ctacctgggc 1620
gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680
gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740
ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800
agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860
gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920
aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980
aggggataca cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040
tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacctgtacc ccttccctac ccaactgctg 2100
atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccaattggt tccagcccat ctatctgggc 2160
gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220
gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268
<210> 184
<211> 2268
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W328 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F)
核苷酸序列
<400> 184
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720
agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780
gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840
aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900
aggggctaca catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960
tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatctgtatc ctgaacctac ccagctgctg 1020
atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcttctggt ttcaacccat ctacctgggc 1080
gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140
gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200
ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260
agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320
gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380
aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440
aggggctaca cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500
agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gacctgtacc ccgaacctac acaactcctg 1560
atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccttctggt tccagcccat ctacctgggc 1620
gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680
gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740
ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800
agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860
gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920
aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980
aggggataca cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040
tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacctgtacc ccgagcctac ccaactgctg 2100
atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccttctggt tccagcccat ctatctgggc 2160
gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220
gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268
<210> 185
<211> 2268
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W331 (Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F)
核苷酸序列
<400> 185
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720
agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780
gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840
aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900
aggggcatga catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960
tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatctgtatc ctttccctac ccagctgctg 1020
atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcttctggt ttcaacccat ctacctgggc 1080
gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140
gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200
ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260
agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320
gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380
aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440
aggggcatga cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500
agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gacctgtacc ccttccctac acaactcctg 1560
atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccttctggt tccagcccat ctacctgggc 1620
gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680
gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740
ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800
agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860
gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920
aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980
aggggaatga cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040
tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacctgtacc ccttccctac ccaactgctg 2100
atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccttctggt tccagcccat ctatctgggc 2160
gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220
gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268
<210> 186
<211> 1803
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W61 (Fc-TL1A+His-TL1A) 核苷酸序列
<400> 186
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcctcaag ggccaggagt tcgctccctc ccatcagcag 720
gtgtacgctc ccctgagagc cgatggcgat aagcccagag cccacctgac cgtcgtgagg 780
cagaccccca cccagcactt caagaaccag tttcccgccc tccactggga gcacgagctg 840
ggactggcct ttaccaagaa cagaatgaat tacaccaaca agtttctgct catccccgag 900
agcggagact acttcatcta ctcccaggtg accttcaggg gcatgacaag cgagtgcagc 960
gagatcagac aggccggaag gcctaataag cccgactcca tcacagtggt gatcacaaag 1020
gtgaccgaca gctaccccga gcccacccag ctgctgatgg gcaccaagag cgtgtgcgaa 1080
gtgggcagca actggttcca gcccatctac ctgggcgcca tgttcagcct gcaggagggc 1140
gacaagctga tggtgaacgt gagcgacatt tccctggtcg attacaccaa ggaggataag 1200
accttcttcg gcgccttcct gctgcatcat caccaccatc acgagaacct gtacttccaa 1260
ggtctcaagg gccaggagtt cgctccctcc catcagcagg tgtacgctcc cctgagagcc 1320
gatggcgata agcccagagc ccacctgacc gtcgtgaggc agacccccac ccagcacttc 1380
aagaaccagt ttcccgccct ccactgggag cacgagctgg gactggcctt taccaagaac 1440
agaatgaatt acaccaacaa gtttctgctc atccccgaga gcggagacta cttcatctac 1500
tcccaggtga ccttcagggg catgacaagc gagtgcagcg agatcagaca ggccggaagg 1560
cctaataagc ccgactccat cacagtggtg atcacaaagg tgaccgacag ctaccccgag 1620
cccacccagc tgctgatggg caccaagagc gtgtgcgaag tgggcagcaa ctggttccag 1680
cccatctacc tgggcgccat gttcagcctg caggagggcg acaagctgat ggtgaacgtg 1740
agcgacattt ccctggtcga ttacaccaag gaggataaga ccttcttcgg cgccttcctg 1800
ctg 1803
<210> 187
<211> 1224
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TL1W3（GD：CBIS中的Fc融合体->同源二聚体Fc融合体；GS-huIgG1 Fc2(G4S)-hTL1A 72-251）核苷酸序列
<400> 187
ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60
ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120
gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180
gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240
agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300
agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360
agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420
agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480
aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540
tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660
tcccctggcg gaggaggagg aagcctcaag ggccaggagt tcgctccctc ccatcagcag 720
gtgtacgctc ccctgagagc cgatggcgat aagcccagag cccacctgac cgtcgtgagg 780
cagaccccca cccagcactt caagaaccag tttcccgccc tccactggga gcacgagctg 840
ggactggcct ttaccaagaa cagaatgaat tacaccaaca agtttctgct catccccgag 900
agcggagact acttcatcta ctcccaggtg accttcaggg gcatgacaag cgagtgcagc 960
gagatcagac aggccggaag gcctaataag cccgactcca tcacagtggt gatcacaaag 1020
gtgaccgaca gctaccccga gcccacccag ctgctgatgg gcaccaagag cgtgtgcgaa 1080
gtgggcagca actggttcca gcccatctac ctgggcgcca tgttcagcct gcaggagggc 1140
gacaagctga tggtgaacgt gagcgacatt tccctggtcg attacaccaa ggaggataag 1200
accttcttcg gcgccttcct gctg 1224
<210> 188
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 示例性Fc区序列
<400> 188
Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
210 215 220

Claims (50)

1.一种工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含三聚复合物，所述三聚复合物包含：
a.三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体形成非共价TL1A三聚体；或
b.三个TL1A单体，其中所述三个TL1A单体共价连接形成单链TL1A(scTL1A)三聚体。
2.根据权利要求1所述的工程化TL1A配体，还包含蛋白质稳定区。
3.根据权利要求2所述的工程化TL1A配体，其中所述蛋白质稳定区包含Fc区或人血清白蛋白(HSA)区。
4.根据权利要求3所述的工程化TL1A配体，包含：
a.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；
b.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；
c.所述scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或
d.所述scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
5.根据权利要求4所述的工程化TL1A配体，包含：
a.两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；
b.两个scTL1A三聚体和一个Fc区；
c.一个scTL1A三聚体和一个Fc区；
d.一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或
e.一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述三个TL1A单体通过接头共价结合。
7.根据权利要求6所述的工程化TL1A配体，其中所述接头是肽接头。
8.根据权利要求7所述的工程化TL1A配体，其中所述接头具有Gly-Ser或其多个重复的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述Fc区是人IgG1、IgG2或IgG4 Fc区。
10.根据权利要求9所述的工程化TL1A配体，其中非共价TL1A三聚体或所述scTL1A三聚体与所述Fc区的C端融合。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的氨基酸残基72-251。
12.根据权利要求11所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ IDNO:94的氨基酸序列的残基72-251的至少一个氨基酸改变。
13.根据权利要求12所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体在SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处具有一个或多个改变，所述一个或多个改变选自由R103、K111、N112、F114、E120、L123、G124、R156、M158、Q167、R170、K173、S176、T185、D186、S187、Y188、P189、E190、T192、S206、N207、F209、Y238、T239、K240和E241组成的组。
14.根据权利要求13所述的工程化TL1A配体，其中SEQ ID NO:94的一个或多个残基位置处的所述一个或多个改变是选自R103A、R103H、R103Q、R103E、R103E、K111A、K111S、K111E、N112E、F114A、E120A、E120K、E120H、L123G、L123S、L123E、L123K、G124S、G124K、G124D、R156A、R156Y、R156K、R156E、M158Y、M158K、M158E、Q167A、R170E、K173S、K173R、S176A、S176L、S176、S176K、T185A、T185L、T185N、T185D、D186Y、S187A、S187L、S187K、S187D、Y188A、Y188S、P189A、P189K、P189F、P189S、E190G、E190F、T192A、T192F、T192K、T192E、S206A、S206F、S206K、S206E、N207A、N207F、N207S、N207K、N207E、F209A、F209W、Y238A、Y238S、Y238K、Y238R、Y238E、T239A、T239E、T239F、T239K、T239W、K240A、K240F、K240S、K240D、E241A、E241L和E241Q的改变。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的残基72-251的氨基酸序列的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或更多个改变。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:94的一个或多个氨基酸改变，所述一个或多个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ ID NO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
18.根据权利要求12至17中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体包含：
a.在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
b.在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
c.在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
d.在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
e.在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
f.在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
g.在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
h.在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；i.在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
j.在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
或
k.在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的工程化TL1A配体，其包含双特异性抗体。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的工程化TL1A配体，其与异源多肽融合。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的工程化TL1A配体，其与药剂缀合。
22.根据权利要求21所述的工程化TL1A配体，其中所述药剂为毒素。
23.一种工程化TL1A配体，包含：能够以与野生型TL1A的亲和力相当或更高的亲和力结合DR3的第一构件和能够以比野生型TL1A的亲和力低的亲和力结合DcR3的第二构件。
24.根据权利要求23所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体具有比野生型TL1A更长的血清半衰期。
25.根据权利要求23或24中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体与野生型TL1A相比具有高单分散性和/或稳定性。
26.根据权利要求23至25中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体在体外共刺激T细胞。
27.根据权利要求23至26中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体在受试者中共刺激T细胞。
28.根据权利要求23至27中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述工程化TL1A配体增加受试者中一种或多种细胞因子的产生。
29.根据权利要求28所述的工程化TL1A配体，其中所述一种或多种细胞因子包含IFNγ和TNFα。
30.根据权利要求27至29中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述受试者患有自身免疫病症或癌症。
31.根据权利要求30所述的工程化TL1A配体，其中所述自身免疫病症或癌症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，其中任选地所述肉瘤是横纹肌肉瘤。
32.根据权利要求27至31中任一项所述的工程化TL1A配体，其中所述受试者是有需要的受试者。
33.一种核酸，其编码根据权利要求1至32中任一项所述的工程化TL1A抗体。
34.一种药物组合物，包含根据权利要求1至32中任一项所述的工程化TL1A配体或根据权利要求33所述的核酸，以及药学上可接受的赋形剂。
35.一种治疗受试者的疾病或病症的方法，包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至33中任一项所述的工程化TL1A配体。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述疾病或病症是自身免疫病症或癌症。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、IBD、COPD、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，其中任选地所述肉瘤是横纹肌肉瘤。
38.根据权利要求35至37中任一项所述的方法，其中所述受试者是有需要的受试者。
39.一种制备工程化TL1A配体的方法，包括(i)执行引入SEQ ID NO:94的氨基酸序列的至少一个氨基酸改变的功能的步骤，所述至少一个氨基酸改变选自由以下组成的组：K111A、L123K、M158Y、Q167A、S187L、E190F和N207F；以及(ii)执行产生工程化TL1A配体群的功能的步骤。
40.根据权利要求39所述的方法，还包括将所述工程化TL1A配体与异源多肽融合的步骤。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述异源多肽包含蛋白质稳定区。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述蛋白质稳定区包含Fc区或HSA区。
43.根据权利要求42所述的方法，还包括生成多聚工程化TL1A配体的步骤。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述多聚工程化TL1A配体包含：
a.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个Fc区；
b.所述非共价TL1A三聚体和一个或多个HSA区；
c.所述scTL1A三聚体和一个或多个Fc区；或
d.所述scTL1A三聚体和一个或多个HSA区。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述多聚工程化TL1A配体包含：
a.两个非共价TL1A三聚体和三个Fc区；
b.两个scTL1A三聚体和一个Fc区；
c.一个scTL1A三聚体和一个Fc区；
d.一个非共价TL1A三聚体和三个HSA区；或
e.一个scTL1A三聚体和一个HSA区。
46.根据权利要求39至45中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含SEQ IDNO:1-93中的任一者的氨基酸序列。
47.根据权利要求39至46中任一项所述的方法，其中所述工程化TL1A配体包含：
a.在其全长上与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
b.在其全长上与SEQ ID NO:72的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
c.在其全长上与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
d.在其全长上与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
e.在其全长上与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
f.在其全长上与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
g.在其全长上与SEQ ID NO:36的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
h.在其全长上与SEQ ID NO:90的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；i.在其全长上与SEQ ID NO:88的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
j.在其全长上与SEQ ID NO:91的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列；
k.在其全长上与SEQ ID NO:89的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少100％相同的氨基酸序列。
48.根据权利要求1至33中任一项所述的工程化TL1A配体，其在治疗中使用。
49.根据权利要求1至33中任一项所述的工程化TL1A配体，其在治疗自身免疫病症或癌症中使用。
50.根据权利要求49所述使用的工程化TL1A配体，其中所述自身免疫病症或癌症选自由以下组成的组：溃疡性结肠炎、狼疮、IBD、COPD、关节炎、多发性硬化、糖尿病、移植排斥、中枢神经系统损伤、克罗恩氏病、银屑病、白血病或淋巴瘤、动脉粥样硬化、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、白血病、肺癌诸如非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胃癌、垂体腺瘤、卵巢癌、肾癌、膀胱癌和肉瘤，其中任选地该肉瘤是横纹肌肉瘤。
CN202180070239.4A 2020-08-19 2021-08-18 使用工程化配体的材料和方法 Pending CN116348481A (zh)

Applications Claiming Priority (21)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063067813P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067803P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067808P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067833P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067820P 2020-08-19 2020-08-19
US63/067813 2020-08-19
US63/067833 2020-08-19
US63/067808 2020-08-19
US63/067820 2020-08-19
US63/067803 2020-08-19
US202163149177P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149173P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149171P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149174P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149175P 2021-02-12 2021-02-12
US63/149174 2021-02-12
US63/149177 2021-02-12
US63/149173 2021-02-12
US63/149171 2021-02-12
US63/149175 2021-02-12
PCT/US2021/046488 WO2022040302A1 (en) 2020-08-19 2021-08-18 Materials and methods of using engineered ligands

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116348481A true CN116348481A (zh) 2023-06-27

Family

ID=80269366

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180070239.4A Pending CN116348481A (zh) 2020-08-19 2021-08-18 使用工程化配体的材料和方法

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11952411B2 (zh)
EP (1) EP4199953A1 (zh)
JP (1) JP2023538902A (zh)
KR (1) KR20230051581A (zh)
CN (1) CN116348481A (zh)
CA (1) CA3190012A1 (zh)
TW (1) TW202227475A (zh)
WO (1) WO2022040302A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116348481A (zh) 2020-08-19 2023-06-27 詹森生物科技公司 使用工程化配体的材料和方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2876099A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing monomeric and multimeric molecules and uses thereof
WO2014110258A1 (en) * 2013-01-09 2014-07-17 Podack Eckhard R Compositions and methods for the regulation of t regulatory cells using tl1a-ig fusion protein
CA3003511A1 (en) * 2015-10-28 2017-05-04 Apogenix Ag Single-chain tl1a receptor agonist proteins
CN116348481A (zh) 2020-08-19 2023-06-27 詹森生物科技公司 使用工程化配体的材料和方法

Also Published As

Publication number Publication date
CA3190012A1 (en) 2022-02-24
WO2022040302A1 (en) 2022-02-24
EP4199953A1 (en) 2023-06-28
TW202227475A (zh) 2022-07-16
US20220056104A1 (en) 2022-02-24
US11952411B2 (en) 2024-04-09
JP2023538902A (ja) 2023-09-12
KR20230051581A (ko) 2023-04-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7270001B2 (ja) Ｍｈｃクラスｉｉ拘束性ｍａｇｅ－ａ３を認識するｔ細胞受容体
JP2021500855A (ja) 抗原提示ポリペプチドおよびその使用方法
CN117986384A (zh) 与il-12和il-18的基于il-15的融合物
JP2018522571A (ja) Ｇｉｔｒｌ融合タンパク質およびその使用
EP2035452B1 (en) Soluble heterodimeric receptors and uses thereof
WO2018027025A1 (en) Cd40-binding agents and uses thereof
KR20200012907A (ko) 변형된 IgG1 Fc 도메인 및 그와의 항-CD40 도메인 항체 융합체
CN113544144A (zh) 变体cd80融合蛋白和相关构建体的方法和用途
MX2014004065A (es) Matrices de soporte derivadas de tn3 especificas para cd40l y sus metodos de empleo.
JP2022522404A (ja) Ｔ細胞調節抗原提示ポリペプチド及びその使用方法
JP2022528030A (ja) 多機能性融合タンパク質及びその使用
CN115768524A (zh) Ilt结合剂和其使用方法
KR20230029621A (ko) T 세포 억제 단백질을 포함하거나 포함하지 않는 april 및 baff 억제 면역조절 단백질 및 이의 사용 방법
CN115103852A (zh) Prame tcr受体和其用途
WO2021262597A9 (en) Lair-1-binding agents and methods of use thereof
CN113179631A (zh) 通过临近使能反应疗法开发的共价蛋白质药物
KR101243951B1 (ko) 가용성 종양 괴사 인자 수용체 돌연변이
JP2022538375A (ja) Ｐｄ－１と結合する抗体
US11952411B2 (en) Materials and methods of using engineered ligands
TW202208396A (zh) Ｔ細胞調控性多聚體多肽和使用彼之方法
JP2024512470A (ja) Ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法
CN117561280A (zh) 携带TGF-β的抗原呈递多肽复合物及其使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination