KR20230051581A - 조작된 리간드를 사용하는 물질 및 방법 - Google Patents

조작된 리간드를 사용하는 물질 및 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230051581A
KR20230051581A KR1020237009317A KR20237009317A KR20230051581A KR 20230051581 A KR20230051581 A KR 20230051581A KR 1020237009317 A KR1020237009317 A KR 1020237009317A KR 20237009317 A KR20237009317 A KR 20237009317A KR 20230051581 A KR20230051581 A KR 20230051581A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
tl1a
engineered
amino acid
acid sequence
ligand
Prior art date
Application number
KR1020237009317A
Other languages
English (en)
Inventor
아담 지월락
세만 찬
라즈쿠마르 가네산
Original Assignee
얀센 바이오테크 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 얀센 바이오테크 인코포레이티드 filed Critical 얀센 바이오테크 인코포레이티드
Publication of KR20230051581A publication Critical patent/KR20230051581A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

세포 표면 수용체, DR3에 대한 결합을 통한 기능적 활성, 및 시험관내(in vitro) 및 생체내(in vivo)에서 T 세포를 활성화하는 능력을 보유하면서, 유인(decoy) 수용체 DcR3에 최소한으로 결합하는 높은 안정성을 나타내는 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 조성물 및 키트가 본 명세서에 기재된다. 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법, 및 조작된 TL1A 리간드를 투여함으로써 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 또한 제공된다.

Description

조작된 리간드를 사용하는 물질 및 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2020년 8월 19일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/067,808호; 2020년 8월 19일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/067,803호; 2020년 8월 19일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/067,820호; 2020년 8월 19일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/067,833호; 2020년 8월 19일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/067,813호; 2021년 2월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/149,171호; 2021년 2월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/149,173호; 2021년 2월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/149,174호; 2021년 2월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/149,175호; 및 2021년 2월 12일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/149,177호의 이익을 주장하며, 이들 각각의 개시내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
기술분야
세포 표면 수용체, DR3에 대한 결합을 통한 기능적 활성, 및 시험관내(in vitro) 및 생체내(in vivo)에서 T 세포를 활성화하는 능력을 보유하면서, 유인(decoy) 수용체 DcR3에 최소한으로 결합하는 높은 안정성을 나타내는 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 조성물 및 키트가 본 명세서에 기재된다. 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법, 및 조작된 TL1A 리간드를 투여함으로써 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 또한 제공된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "14620-570-228_SEQ_LISTING.txt"이고, 작성일이 2021년 8월 12일이며, 크기가 324,373 바이트인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
종양 괴사 인자 패밀리 구성원 TNF-유사 인자 1A(TL1A) 공동자극성 수용체(TNF 슈퍼패밀리 구성원 15(TNFSF15)로도 알려짐)는 II형 단회-통과 막관통 단백질로서 다양한 세포 유형 상에서 발현된다. 이것은 세포 표면으로부터 절단될 수 있으며, 가용성 또는 막-결합된 TL1A는 공동자극성 사멸 수용체 3(DR3)에 결합한다. TL1A는 또한, 세포 표면 수용체의 구조를 모방하지만 막관통 또는 세포질 영역이 결여되어 있는 가용성 유인 수용체 DcR3(TNFRSF6B)에 결합될 수 있다. DcR3은 DR3과 구조적으로 상동이지만, DR3과 단지 대략 20%의 서열 동일성을 공유한다. DcR3은 다양한 종양에서 상향조절되고, 전이와 관련되어 있다(문헌[Hsieh and Lin, 2017]; 문헌[Lin and Hsieh, 2011]; 문헌[Wei et al., 2019]; 문헌[Zhang et al., 2017]). DcR3 유인 수용체는 TNF 리간드가 T 세포를 활성화시키는 것을 방해하도록 싱크(sink)로서의 역할을 할 수 있으며, 가용성 유인 수용체가 종양에 의해 상향조절될 수 있다. 구체적으로는, 유인 수용체 DcR3은 TL1A에 그의 세포 표면 수용체, DR3보다 더 높은 친화도로 결합할 수 있으며, TL1A-기반 T 세포 공동자극을 방해할 수 있다(문헌[Hsieh and Lin, 2017]; 문헌[Lin and Hsieh, 2011]).
TL1A 차단 항체가 궤양성 결장염을 치료하기 위해 클리닉에서 사용되어 왔다(문헌[Banfield et al., 2020]). TL1A와 DR3 사이의 상호작용은 T 세포 활성화에 기여하며, 이는 증가된 염증성 사이토카인 생성 및 T 세포 증식으로 이어진다. TL1A:DR3 축의 치료 표적화(therapeutic targeting)에 대해 상당히 어려운 문제가 남아 있다. 결합의 3:3 화학량론 및 상호작용의 미세하게 조정된 친화도는 리간드-기반 접근법이 항체-기반 접근법에 비해 T 세포 활성화에 더 적합할 수 있음을 시사한다. 그러나, 고수준의 DcR3은 DcR3 결합을 제거하기 위해 더 높은 투여 계획 또는 조작을 필요로 한다. 따라서, DR3에 결합할 수 있지만 DcR3에는 결합할 수 없는 안정한 삼량체를 형성하게 될, 그리고 T 세포 활성화를 위한 치료 개발에 적합하게 될 조작된 TL1A 리간드의 생성에 대한 충족되지 않은 필요성이 있다.
일 태양에서, 조작된 TL1A 리간드가 본 명세서에 제공되며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 삼량체 복합체를 포함하며, 상기 삼량체 복합체는 비공유적 TL1A 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체; 또는 공유적으로 연결되어 단일쇄 TL1A(scTL1A) 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 단백질 안정화 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 인간 혈청 알부민(HSA) 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 하기를 포함하는 조작된 TL1A 리간드가 제공된다: 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역; 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역; 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역; 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역; 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 3개의 TL1A 단량체를 포함하며, 여기서 3개의 TL1A 단량체는 링커(linker)에 의해 공유적으로 결합된다. 일부 실시 형태에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 Gly-Ser의 아미노산 서열 또는 이의 다수의 반복부를 갖는다.
일부 실시 형태에서, Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역이다. 일부 실시 형태에서, 비공유적 TL1A 삼량체 또는 scTL1A 삼량체는 Fc 영역의 C-말단에 융합된다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드가 본 명세서에 제공되며, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 적어도 하나의 아미노산 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경은 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택되는 변경이다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 이중특이성 항체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 이종성 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 작용제(agent)에 접합된다. 일부 실시 형태에서, 작용제는 독소이다.
일 태양에서, 조작된 TL1A 리간드가 본 명세서에 제공되며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A에 비해 높은 단분산도 및/또는 안정성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 시험관내에서 T 세포를 공동자극할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 대상체에서 T 세포를 공동자극할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 이를 필요로 하는 대상체에서 하나 이상의 사이토카인의 생성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IFNγ 및 TNFα를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 대상체는 자가면역 장애 또는 암을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, 염증성 장 질병(IBD), 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종(횡문근육종을 포함함)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 핵산이 본 명세서에 추가로 제공된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 조작된 TL1A 리간드 또는 핵산, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
일 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 삼량체 복합체이며, 상기 삼량체 복합체는 비공유적 TL1A 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체; 또는 공유적으로 연결되어 단일쇄 TL1A(scTL1A) 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 단백질 안정화 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 HSA 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 다량체성의 조작된 TL1A 리간드가 상기 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역; 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
일부 실시 형태에서, 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역; 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역; 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역; 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
일부 실시 형태에서, 상기 방법의 조작된 TL1A 리간드는 scTL1A 삼량체를 포함하며, 여기서 3개의 TL1A 단량체는 링커에 의해 공유적으로 결합된다. 일부 실시 형태에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 Gly-Ser의 아미노산 서열 또는 이의 다수의 반복부를 갖는다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역이다. 일부 실시 형태에서, 비공유적 TL1A 삼량체 또는 scTL1A 삼량체는 Fc 영역의 C-말단에 융합된다.
일부 실시 형태에서, TL1A 단량체는 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 적어도 하나의 아미노산 변경을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법의 조작된 TL1A 리간드는 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경은 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택되는 변경이다.
일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 상기 방법의 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 요법에 사용하기 위한 것이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 자가면역 장애 또는 암의 치료에 사용하기 위한 것이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 자가면역 장애 또는 암의 치료에 사용하기 위한 것이며, 여기서 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, IBD, COPD, 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 선택적으로 상기 육종은 횡문근육종이다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 이중특이성 항체인 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 이종성 폴리펩티드에 융합된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 작용제에 접합된다. 일부 실시 형태에서, 작용제는 독소이다.
일 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A에 비해 높은 단분산도 및/또는 안정성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 시험관내에서 T 세포를 공동자극할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 대상체에서 T 세포를 공동자극할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 이를 필요로 하는 대상체에서 하나 이상의 사이토카인의 생성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 사이토카인은 IFNγ 및 TNFα를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 질병 또는 장애는 자가면역 장애 또는 암인 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 질병 또는 장애는 궤양성 결장염, 루푸스, 염증성 장 질병(IBD), 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종(횡문근육종을 포함함)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 태양에서, 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 (i) K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 아미노산 서열의 적어도 하나의 아미노산 변경을 도입시키는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 (ii) 조작된 TL1A 리간드의 집단을 생성하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 상기 조작된 TL1A 리간드를 이종성 폴리펩티드에 융합하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시 형태에서, 이종성 폴리펩티드는 단백질 안정화 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 HSA 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 다량체성의 조작된 TL1A 리간드를 생성하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역; 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
일부 실시 형태에서, 상기 방법은 다량체성의 조작된 TL1A 리간드를 생성하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역; 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역; 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역; 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 방법이 본 명세서에 제공된다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함한다: 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
용어 및 약어
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "가용성 단백질"은 가용성 형태로 세포막으로부터 방출되거나 세포로부터 분비될 수 있는 단백질 또는 이의 단편을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "융합 단백질" 또는 "융합 폴리펩티드"는 펩티드 결합을 통해 또는 링커를 통해 연결된 2개 이상의 별개의 아미노산 서열(예를 들어, Fc의 C-말단 상에 융합된 단일쇄 TL1A)을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "링커"또는 "링커 영역"은 제1 아미노산 서열과 제2 아미노산 서열 사이에 삽입된 스페이서를 지칭한다(예를 들어, TL1A 단량체는 Gly-Ser 링커에 의해 연결되어 단일쇄 scTL1A를 형성함). 일부 실시 형태에서, 링커는 펩티드 링커이다. 링커는 폴리펩티드의 발현, 분비, 또는 생물활성에 악영향을 주지 않아야 한다. 바람직하게는, 링커는 항원성이 아니며 면역 반응을 이끌어내지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 내인성 아미노산 서열, 외인성 아미노산 서열(예를 들어, GS-풍부 서열), 또는 비-펩티드 화학적 링커이다.
본 명세서에서, 용어 "Fc 영역"은, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역, 및 변이체 Fc 영역을 포함한, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 한정하는 데 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 변동될 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230(EU 넘버링 체계에 따름)으로부터 이의 카르복실-말단까지 신장되도록 한정된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 체계에 따라 잔기 447)은, 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 동안에, 또는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 예시적인 Fc 영역 서열이 하기에 제공된다: GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP (서열 번호 188).
용어 "선택적으로 결합한다" 또는 "특이적으로 결합한다"는 폴리펩티드 또는 분자가, 관련 및 비관련 단백질을 포함한 대안적인 물질보다 더 빈번하게, 더 신속하게, 더 큰 지속기간으로, 더 큰 친화도로, 또는 상기의 몇몇 조합으로 에피토프, 단백질, 또는 표적 분자와 상호작용하는 것을 의미한다. 일부 실시 형태에서, "특이적으로 결합한다"는, 예를 들어, 폴리펩티드 또는 분자가 약 0.1 mM 이하, 그러나 더 통상적으로는 약 1 μM 미만의 KD로 단백질 또는 표적에 결합하는 것을 의미한다. 일부 실시 형태에서, "특이적으로 결합한다"는 폴리펩티드 또는 분자가 적어도 약 0.1 μM 또는 그 미만, 적어도 약 0.01 μM 또는 그 미만, 또는 적어도 약 1 nM 또는 그 미만의 KD로 표적에 결합하는 것을 의미한다. 상이한 종들에서 상동 단백질들 사이의 서열 동일성으로 인해, 특이적 결합은 하나 초과의 종에서 단백질 또는 표적을 인식하는 폴리펩티드 또는 분자를 포함할 수 있다. 마찬가지로, 상이한 단백질들의 폴리펩티드 서열의 소정 영역 내에서의 상동성으로 인해, 특이적 결합은 하나 초과의 단백질 또는 표적을 인식하는 폴리펩티드 또는 분자를 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제1 표적(예를 들어, DR3)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 또는 분자는 제2 표적(예를 들어, DcR3)에 특이적으로 결합할 수 있거나 없을 수 있음이 이해된다. 그러한 바와 같이, "특이적 결합"은 배타적인 결합, 즉, 단일 표적에 대한 결합을 반드시 필요로 하는 것은 아니다(그렇지만 이를 포함할 수 있다). 따라서, 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드 또는 분자는 하나 초과의 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 다수의 표적이 폴리펩티드 또는 분자 상의 동일한 항원-결합 부위에 의해 결합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 소정 경우에 2개의 동일한 항원-결합 부위를 포함할 수 있으며, 이들 각각은 2개 이상의 단백질 상의 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 소정의 대안적인 실시 형태에서, 항체는 이중특이성일 수 있고, 상이한 특이성을 갖는 적어도 2개의 항원-결합 부위를 포함할 수 있다. 반드시 그런 것은 아니지만 일반적으로, "결합"에 대한 언급은 "특이적 결합"을 의미한다.
2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드와 관련하여 용어 "동일한"또는 퍼센트 "동일성"은 최대 일치도(maximum correspondence)에 대해 비교되고 정렬될 때(관습적으로, 갭(gap)을 포함함), 동일하거나, 또는 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율을 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭하며, 이때 서열 동일성의 일부로서 어떠한 보존적 아미노산 치환도 고려하지 않는다. 퍼센트 동일성은 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘을 사용하여 또는 시각적 검사에 의해 측정될 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 정렬을 획득하는 데 사용될 수 있는 다양한 알고리즘 및 소프트웨어는 당업계에 잘 알려져 있다. 이들은 BLAST, ALIGN, Megalign, BestFit, GCG Wisconsin Package, 및 이들의 변형물을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 2개의 핵산 또는 폴리펩티드는 실질적으로 동일한데, 이는, 서열 비교 알고리즘을 사용하여 또는 시각적 검사에 의해 측정된 바와 같이, 최대 일치도에 대해 비교되고 정렬될 때, 이들이 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 및 일부 실시 형태에서 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 동일성을 갖는다는 것을 의미한다. 일부 실시 형태에서, 동일성은 적어도 약 10개의 잔기, 적어도 약 20개의 잔기, 적어도 약 40 내지 60개의 잔기, 적어도 약 60 내지 80개의 잔기 길이 또는 이들 사이의 임의의 정수값인 아미노산 서열의 영역에 걸쳐 존재한다. 일부 실시 형태에서, 동일성은 60 내지 80개의 잔기보다 더 긴 영역, 예컨대 적어도 약 80 내지 100개의 잔기에 걸쳐 존재하며, 일부 실시 형태에서 서열은 비교되는 서열, 예컨대 표적 단백질 또는 항체의 코딩 영역의 전장(full length)에 걸쳐 실질적으로 동일하다. 일부 실시 형태에서, 동일성은 적어도 약 10개의 염기, 적어도 약 20개의 염기, 적어도 약 40 내지 60개의 염기, 적어도 약 60 내지 80개의 염기 길이 또는 이들 사이의 임의의 정수값인 뉴클레오티드 서열의 영역에 걸쳐 존재한다. 일부 실시 형태에서, 동일성은 60 내지 80개의 염기보다 더 긴 영역, 예컨대 적어도 약 80 내지 1000개의 염기 또는 그 이상에 걸쳐 존재하며, 일부 실시 형태에서 서열은 비교되는 서열, 예컨대 관심 단백질을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열의 전장에 걸쳐 실질적으로 동일하다.
"보존적 아미노산 치환"은 하나의 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성을 가진 측쇄를 갖는 또 다른 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리가 당업계에 일반적으로 정의되어 있으며, 이에는 염기성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)이 포함된다. 예를 들어, 티로신의 페닐알라닌으로의 치환은 보존적 치환이다. 일반적으로, 본 발명의 폴리펩티드, 가용성 단백질, 및/또는 항체의 서열에서의 보존적 치환은 그러한 아미노산 서열을 함유하는 폴리펩티드, 가용성 단백질, 또는 항체의 표적 결합 부위에 대한 결합을 소실하지 않는다. 결합을 제거하지 않는 보존적 아미노산 치환을 확인하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
용어 "폴리펩티드"는 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 그것은 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 그것에는 비-아미노산이 개재될 수 있다. 이 용어는 또한 천연적으로 변형되었거나, 또는 개입에 의해, 예를 들어 이황화물 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화, 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지화 성분과의 접합에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, 아미노산의 하나 이상의 유사체(예를 들어, 비천연 아미노산을 포함함)를 함유하는 폴리펩티드뿐만 아니라 당업계에 알려진 다른 변형이 정의 내에 또한 포함된다. 본 발명의 폴리펩티드는 면역글로불린 슈퍼패밀리의 항체 또는 다른 구성원에 기반할 수 있기 때문에, 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드는 단일쇄로서 발생할 수 있음이 이해된다. 용어 "폴리펩티드"는 또한 펩티드 결합을 통해 연결된 자연 발생 구조적 변이체, 및 이의 합성 비자연 발생 유사체인 아미노산의 관련 중합체를 지칭한다. 합성 폴리펩티드는, 예를 들어, 자동화 폴리펩티드 합성기를 사용하여 합성될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "면역 반응"은 선천 면역 시스템 및 적응 면역 시스템 둘 모두로부터의 반응을 포함한다. 이는 세포-매개 면역 반응 및/또는 체액성 면역 반응 둘 모두를 포함한다. 이는 T-세포 반응 및 B-세포 반응 둘 모두뿐만 아니라, 자연 살해(NK) 세포, 단핵구, 대식세포 등과 같은 면역 시스템의 다른 세포로부터의 반응을 포함한다.
용어 "대상체"는 특정 치료의 수용자가 될, 인간, 비인간 영장류, 개, 고양이, 설치류 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 동물(예를 들어, 포유동물)을 지칭한다. 전형적으로, 용어 "대상체"와 "환자"는 인간 대상체에 대해 언급할 때 본 명세서에서 상호교환 가능하게 사용된다.
용어 "약제학적으로 허용되는"은 인간을 포함한 포유동물에서의 사용에 대해 미연방 정부 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되어 있거나 승인 가능하거나 또는 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인식되는 약전에 열거되어 있는 물질을 지칭한다.
용어 "약제학적으로 허용되는 담체" 또는 "약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 애쥬번트(adjuvant)"는 본 발명의 적어도 하나의 작용제와 함께 대상체에게 투여될 수 있고, 치료적 효과를 달성하기에 충분한 용량으로 투여될 때 이의 약리학적 활성을 파괴하지 않고 비독성인 부형제, 담체 또는 애쥬번트를 지칭한다. 일반적으로, 당업자 및 미국 FDA는 임의의 제형의 비활성 성분인 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 애쥬번트를 고려한다.
용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량" 또는 "치료적 효과"는 대상체, 예컨대 포유동물에서 질병 또는 장애를 "치료하기에" 효과적인 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 분자(예를 들어, 융합 단백질, 가용성 리간드, 항체, 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드)의 양을 지칭한다. 암 또는 종양의 경우에, 폴리펩티드 또는 분자(예를 들어, 폴리펩티드, 가용성 TL1A 단백질, 또는 TL1A 융합체)의 치료적 유효량은 치료적 효과를 가지며, 그 자체로 면역 반응을 증진시키고, 항종양 반응을 증진시키고, 면역 세포의 세포용해 활성을 증가시키고, 면역 세포에 의한 종양 세포의 살해를 증가시키고, 종양 세포의 수를 감소시킬 수 있거나; 종양원성, 종양원성 빈도 또는 종양원성 능력을 감소시킬 수 있거나; 암 줄기 세포의 수 또는 빈도를 감소시킬 수 있거나; 종양 크기를 감소시킬 수 있거나; 암 세포 집단을 감소시킬 수 있거나; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 - 예를 들어, 연조직 및 뼈 내로의 암의 확산을 포함함 - 을 억제 또는 정지시킬 수 있거나; 종양 또는 암 세포 전이를 억제 및 정지시킬 수 있거나; 종양 또는 암 세포 성장을 억제 및 정지시킬 수 있거나; 암과 관련된 증상들 중 하나 이상을 어느 정도까지 완화시킬 수 있거나; 이환율 및 사망률을 감소시킬 수 있거나; 삶의 질을 개선할 수 있거나; 고형 종양/종양에서 종양 침윤 림프구(TIL, 이는 CD8+/세포독성 T-세포를 포함함)의 수를 증가시킬 수 있거나; 고형 종양에서 3차 림프 구조(tertiary lymphoid structure)를 형성할 수 있거나 그러한 효과들의 조합일 수 있다.
용어 "신생물성 질병"은 세포의 제어되지 않은 비정상적인 성장을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. 신생물성 질병은 암을 포함한다. 암의 예에는 암종, 림프종, 아세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 그러한 암의 더 특정한 예에는 유방암, 전립선암, 결장암, 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 난소암, 자궁경부암, 위장암, 췌장암, 교아세포종, 간암, 방광암, 간종, 결직장암, 자궁 경부암, 자궁내막 암종, 타액선 암종, 신장암, 외음부암, 갑상선암, 간암종, 피부암, 흑색종, 뇌암, 난소암, 신경아세포종, 골수종, 다양한 유형의 두경부암, 급성 림프아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉 육종 및 말초 신경상피종이 포함된다. 본 명세서에 열거된 모든 가능한 암은 개별 종으로서 본 발명에 포함되거나 그로부터 배제될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 본 명세서에 기재된 임의의 폴리펩티드 또는 핵산과 관련하여 사용될 때 "조작된" 또는 "변이체"는 모(parent) 서열과 비교하여 아미노산 위치 또는 핵산 위치에서 적어도 하나의 변이 또는 변경을 갖는 서열을 지칭한다. 모 서열은, 예를 들어, 비변형된 야생형 서열, 이의 상동체, 또는 변형된 변이체, 예를 들어 야생형 서열 또는 이의 상동체의 변형된 변이체일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "분자 모델링 알고리즘"은 거대분자의 구조 예측을 위한 계산론적 접근법을 지칭한다. 예를 들어, 이들은 상동성 모델링 방법 또는 단백질 스레딩(threading) 모델링 방법을 포함한 비교 단백질 모델링 방법을 포함할 수 있으며, 아브 이니티오(ab initio) 또는 드 노보(de novo) 단백질 모델링 방법, 또는 임의의 그러한 접근법의 조합을 추가로 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "TL1A 리간드"는 TL1A 리간드의 변이체, 아이소형(isoform), 및 종 상동체를 포함한다. TL1A 리간드는 TL1A의 임의의 기능성 단편, 예를 들어 TL1A에 대한 수용체, 예를 들어 DR3에 결합할 수 있는 단편을 지칭할 수 있다. 예시적인 인간 TL1A의 완전한 아미노산 서열은 Swiss-Prot 수탁 번호 095150(hTL1A 1-251)(서열 번호 94)을 갖는다. TL1A는 TNFSF15; TNF-유사 단백질 1A; VEGI; TNFyP로도 알려져 있다. 인간 TL1A는 Entrez Gene에 의해 GenelD: 9966, 그리고 HGNC에 의해 15 HGNC: 11931로 지정되어 있다. TL1A는 유전자 지정된 TNFSF15/TL1A에 의해 인코딩될 수 있다.
용어 "단백질 안정화 영역"은, 단백질 또는 폴리펩티드에 부착되거나 융합될(예를 들어, 공유적으로 부착될) 수 있고, 단백질 또는 폴리펩티드에 대해 증가된 반감기 또는 안정성을 부여할 수 있는 외인성 영역을 지칭한다. 단백질 치료제의 활성, 안정성, 및 생체이용률을 증가시키기 위한 단백질-약물 발굴에서 융합 기술이 널리 사용되고 있으며, 많은 단백질 안정화 모이어티가 당업계에 알려져 있다. 단백질 안정화 영역은 당업계에 알려진 임의의 모이어티, 예를 들어 펩티드/폴리펩티드, 핵산, 탄수화물, 지방산, 유기 분자 또는 이들의 조합일 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 명세서에 기재된 단백질 안정화 영역은 HSA, 또는 면역글로불린 G의 Fc 영역일 수 있다. 예를 들어, HSA는 반감기가 19 내지 22일인 고도로 풍부하고 충분히 연구된 혈청 단백질이다(문헌[Peters, T. The Albumin Molecule in All About Albumin 9-75 (Elsevier, 1995)]).
도 1a 내지 도 1e는 작제물의 설계를 도시한다. (도 1a) 잔기 35 내지 56의 막관통 영역(TM) 및 잔기 80 내지 250의 종양 괴사 인자 상동성 도메인(TNFHD)을 포함하는 TL1A의 개략도. 잔기 N133 및 N229는 글리코실화 부위이고, 잔기 C162 및 C202는 이황화물 결합을 형성한다. (도 1b) TL1A 단량체의 리본 다이어그램 묘사. (도 1c) C-말단 His-태그를 갖는 TL1A 리간드를 비공유적 삼량체(TL1A)로서 또는 단일쇄 삼량체(scTL1A)로서 발현시켰다(각각 좌측 패널 및 우측 패널). (도 1d) TL1A를 인간 IgG1 Fc의 C-말단에 대한 융합체(Fc-TL1A)로서, Fc-scTL1A로서, 또는 Fc-TL1A를 His-TL1A와 공발현시킴으로써(Fc-His-TL1A) 발현시켰다(각각 좌측 패널, 가운데 패널, 및 우측 패널). (도 1e) TL1A를 HSA 단량체(HSA-TL1A) 또는 HSA-scTL1A로 발현시켰다(각각 좌측 패널 및 우측 패널).
도 2a 내지 도 2f는 TL1A 작제물의 올리고머 상태 및 기능의 분석을 나타낸다. (도 2a) 지시된 TL1A 작제물의 분취용 겔-투과 분석. 삼량체 및 올리고머의 집단을 보여주기 위해 대조군으로서 재조합 TNF α(His-scTNFα)를 사용하였다. (도 2b) 분취용 겔-투과 정제를 수행하여 원하는 올리고머 종을 단리한 후의 지시된 TL1A 작제물의 분석용 SEC 분석. 정제된 종을 기능 검정에 사용하였다. (도 2c) 및 (도 2d) 고정화된 DR3(도 2c) 또는 DcR3(도 2d)에 결합할 수 있는 TL1A 작제물의 능력의 ELISA의 분석. 각 작제물에 대한 TL1A의 몰농도를 각 분자 중의 TL1A 삼량체의 농도에 대해 정규화하였다. (도 2e) 및 (도 2f) 건강한 공여자로부터의 Pan T 세포를 플레이트-결합된 항-CD3 항체(0.01 ㎍/mL)와 함께 인큐베이션하였다. 지시된 TL1A 리간드를 0, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30 또는 100 nM(삼량체 몰농도)로 α-CD3-활성화 T 세포에 첨가하였다(막대는 좌측에서 우측으로). 활성화 T 세포에 의해 생성된 IFNγ(도 2e) 및 TNFα(도 2f)의 수준이 나타나 있다.
도 3은 Fc-TL1A 리간드가 생체내에서 T 세포를 활성화시킨다는 것을 나타낸다. 마우스를 항-CD3 항체 및 Fc-TL1A 또는 Fc-scTL1A로 처리하고, IFNγ의 혈청 농도를 측정하였다. IFNγ 수준이 pg/mL로 나타나 있으며, 작제물이 그래프 상에 지시되어 있다.
도 4a 내지 도 4g는 TL1A 단분산의 최적화를 나타낸다. (도 4a) TL1A의 3개의 하위단위를 나타내는 PDB(Protein Data Bank) ID 2RE9로부터 변형된, TL1A 삼량체의 결정 구조의 구조 묘사. 1개의 하위단위는 리본 형태로 나타나 있는 반면, 나머지 다른 2개의 하위단위는 회색 표면으로서 나타나 있다. DR3 결합의 유지에 중요한 C162-C202 이황화물 결합의 위치는 화살표로 표시되어 있다. (도 4b) 단백질 A 포획(회색선) 후의 Fc-scTL1A(TL1W14; 서열 번호 87)의 분석용 SEC 분석으로서, 목표 이량체 종(중간 밝기의 회색으로 채워진 부분), 원치 않는 사량체 종(담회색으로 채워진 부분), 및 원치 않은 이종성 올리고머 종(암회색으로 채워진 부분)이 나타나 있음. 환원성 조건 하에서의 Fc-scTL1A의 용리 프로파일은 흑색 트레이스로서 나타나 있다. (도 4c) DR3에 결합할 수 있는 C162/C202 돌연변이체의 능력의 ELISA 분석. TL1A 변이체는 His-TL1A(비공유적 삼량체)로서 지정되어 있으며, 정체가 그래프에 나타나 있다. (도 4d) TL1A-C162S, C202S는 DcR3에는 결합할 수 있지만 DR3에는 결합할 수 없다. His-TL1A 포맷의 선택된 TL1A 변이체를 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 DR3(좌측) 및 DcR3(우측)에 결합할 수 있는 그들의 능력에 대해 분석하였다. Fc-DR3/DcR3을 염소 항-인간 Fc를 사용하여 고정화하고, 지시된 TL1A 변이체를 고정화된 수용체 위로 유동시켰다. (도 4e) 비환원성 완충액 중에서의 단백질 A 정제 후(흑색 트레이스), 1 X PBS 중에서의 산화환원 후(좌측에 피크를 갖는 중간 밝기의 회색 트레이스), 및 저염 완충액 중에서의 산화환원 후(담회색 트레이스)의 Fc-scTL1A(TL1W14; 서열 번호 87)의 분석용 SEC 분석. (도 4f) 이량체 목표 종을 회수하기 위한 산화환원 후의 또는 겔 여과에 의해 정제된 Fc-scTL1A(TL1W14; 서열 번호 87)의 결합의 ELISA 비교. 막대는 좌측에서 우측으로 0 nM부터 300 nM까지의 TL1A 리간드의 증가를 나타낸다. (도 4g) scTL1A 모이어티가 Fc로부터 멀어지는 쪽으로 배향되어 있음을 보여주는, Fc-scTL1A(TL1W14; 서열 번호 87) 분자의 용액 X-선 산란 분석.
도 5a 내지 도 5f는 DcR3 결합을 특이적으로 감소시키는 작제물의 설계를 도시한다. (도 5a) PDB ID 3K51에 기초한, TL1A에 결합된 DcR3의 복합체의 간략도. DcR3 분자는 리본으로 나타나 있고, TL1A 하위단위는 표면으로 나타나 있다. 인접 단량체들 사이의 계면에서의, DcR3에 대한 TL1A 상의 결합 표면은 박스로 표시되어 있다. 박스로 표시된 영역은 도 5b에 나타나 있다. (도 5b) PDB ID 3K51에 기초한 DcR3(좌측)과, 또는 TL1A:DR3 복합체의 구조 모델에 기초한 DR3(우측)과 상호작용하는 TL1A 상의 잔기의 예시. 이 연구에서 돌연변이된 잔기는 암회색 원으로 표시되어 있다. (도 5c 내지 도 5f) DR3(도 5c, 도 5e) 또는 DcR3(도 5d, 도 5f)에 결합할 수 있는 TL1A(도 5c 및 도 5d) 또는 조합 돌연변이체(도 5e 및 도 5f)의 지시된 단일 점 돌연변이체의 능력의 ELISA 분석. 돌연변이가 이들 도면에 표시되어 있다.
도 6a 및 도 6b는 Fc-TL1A-AKALFF가 DcR3-기반 억제에 대해 면역이 있음을 도시한다. (도 6a) TL1A 변이체 Fc-scTL1A-AKALFF의 T 세포의 공동자극 및 DcR3-매개 경쟁에 대한 저항성의 개략도. (b) T 세포를 0.1 ㎍의 고정화된 항-CD3 항체 단독으로 처리하거나 10 ㎍/mL의 외인성 DcR3의 존재 하에서 상기 항체로 처리하였다. Fc-scTL1A(서열 번호 87)(암회색, 가운데 패널) 또는 Fc-scTL1A AKALFF(서열 번호 91)(담회색, 좌측 패널) 중 어느 하나를 사용하여 T 세포를 공동자극하였다. 항-CD28 Ab를 공동자극성 양성 대조군으로서 사용하였다. 공동자극성 신호를 갖지 않는 항-CD3-활성화 T 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다. IFNγ 수준을 MSD 검정(Meso Scale Discovery 전기화학발광 검정)에 의해 측정하였다.
도 7a 내지 도 7d는 용액 X-선 산란 분석을 도시한다. (도 7a) Primus에서 디스플레이되고 점 10 내지 100개에 기초하여 서로에 대한 스케일로 나타낸 AAP에 의해 생성된 완충액 차감된 산란 곡선. 점 1 내지 170이 나타나 있다. 삽도는 낮은 q 범위에서의 그의 확대를 나타낸다. 곡선은 11.85 mg/mL에서 샘플의 응집을 거의 나타내지 않는다. (도 7b) 산란 데이터의 거리 분포(P(r)) 및 크래트키(Kratky) 도표. ( 도 7c) 산란 데이터의 기니어(Guinier) 분석. ( 도 7d) 11.85 mg/mL 농도에 대해 비드 모델 내로의 TL1W14(서열 번호 87)의 TL1A 및 Fc 성분의 수동 도킹(manual docking). PDB ID 1L6X로부터 생성된 Fc 이량체. PDB ID 2RE9로부터의 TL1A 삼량체.
도 8a 내지 도 8c는 DR3 결합에 대한 TL1A 변이체의 ELISA-기반 분석을 도시한다. (도 8a) DR3에 대한 TL1A의 지시된 단일 점 변이체의 결합의 ELISA 분석. (도 8b) DcR3에 대한 TL1A의 지시된 단일 점 변이체의 결합의 ELISA 분석. (도 8c) 결합에 대한 글리코실화의 효과를 평가하도록 설계된 지시된 TL1A 돌연변이체의 DR3 결합의 ELISA 분석.
TNF-유사 단백질 1A(TNFSF15)로도 알려진 종양 괴사 인자 패밀리 구성원 TNF-유사 인자 1A(TL1A)는 호모-삼량체 TNF 슈퍼패밀리 리간드이다. TL1A는 II형 단회-통과 막관통 단백질로서 다양한 세포 유형 상에서 발현된다. 이것은 세포 표면으로부터 절단되어 가용성 리간드로서 순환에 들어갈 수 있으며, 이것은 T 세포 공동자극성 사멸 수용체 3(DR3)에 결합한다. TL1A는 또한 가용성 유인 수용체 DcR3(TNFRSF6B)에 의해 결합될 수 있는데, 이 수용체는 DR3과 구조적으로 상동이지만, DR3과 단지 대략 20% 서열 동일성을 공유한다.
본 발명은, 적어도 부분적으로, DR3에 대해서는 특이적 TL1A 리간드 결합을 촉진시키지만 DcR3에 대해서는 그렇지 않은 치료 전략의 인식에 기초한다. 고형 종양에서의 T 세포 탈진을 극복하기 위한 공동자극성 수용체로서의 이의 잠재성은 DR3을 매력적인 면역 관문 표적이 되게 한다.
TL1A 리간드
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용하기 위한 조작된 TL1A 리간드는 TNFRSF 구성원 사멸 수용체 3(DR3)에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DR3 수용체와의 3:3 화학량론의 상호작용으로 DR3에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DR3에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A와 유사한 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 높은 친화도로, 예를 들어 적어도 약 10% 더 높은 친화도, 적어도 약 20% 더 높은 친화도, 적어도 약 30% 더 높은 친화도, 적어도 약 40% 더 높은 친화도, 적어도 약 50% 더 높은 친화도, 적어도 약 60% 더 높은 친화도, 적어도 약 70% 더 높은 친화도, 적어도 약 80% 더 높은 친화도, 적어도 약 90% 더 높은 친화도, 적어도 100% 더 높은 친화도, 적어도 200% 더 높은 친화도, 적어도 400% 더 높은 친화도 또는 그 이상의 높은 친화도로 DR3에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 10% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 20% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 30% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 40% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 50% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 60% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 70% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 80% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 90% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 100% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 200% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 400% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 10% 내지 약 100% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 10% 내지 약 50% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 10% 내지 약 20% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 20% 내지 약 400% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 50% 내지 약 400% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 100% 내지 약 400% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 20% 내지 약 50% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 50% 내지 약 100% 더 높은 친화도로 DR3에 결합한다. 이들 백분율의 다른 중간 범위가 또한 고려된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A는 야생형 TL1A보다 더 낮은 친화도로, 예를 들어 적어도 약 10% 더 낮은 친화도, 적어도 약 20% 더 낮은 친화도, 적어도 약 30% 더 낮은 친화도, 적어도 약 40% 더 낮은 친화도, 적어도 약 50% 더 낮은 친화도, 적어도 약 60% 더 낮은 친화도, 적어도 약 70% 더 낮은 친화도, 적어도 약 80% 더 낮은 친화도, 적어도 약 90% 더 낮은 친화도, 적어도 100% 더 낮은 친화도, 적어도 200% 더 낮은 친화도 또는 그 이상의 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 10% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 20% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 30% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 40% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 50% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 60% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 70% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 80% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 약 90% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 100% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 200% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 적어도 400% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 10% 내지 약 100% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 10% 내지 약 50% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 10% 내지 약 20% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 20% 내지 약 400% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 50% 내지 약 400% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 100% 내지 약 400% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 20% 내지 약 50% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 약 50% 내지 약 100% 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 이들 백분율의 다른 중간 범위가 또한 고려된다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DcR3에 결합하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 DcR3에 대한 측정가능한 결합을 나타내지 않는다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 삼량체 리간드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 삼량체 계면을 통해 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 리간드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드들은 천연 비공유적 상호작용을 통해 삼량체화된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드들은, 예를 들어 링커를 사용하여, 단일쇄(sc)로서 삼량체화된다. 링커는 당업계에 알려진 임의의 링커일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 조작된 TL1A 리간드의 발현, 분비, 또는 생물활성에 불리한 영향을 주지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 조작된 TL1A 리간드의 발현에 불리한 영향을 주지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 조작된 TL1A 리간드의 분비에 불리한 영향을 주지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 조작된 TL1A 리간드의 생물활성에 불리한 영향을 주지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 항원성이 아니며 면역 반응을 이끌어내지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 항원성이 아니다. 일부 실시 형태에서, 링커는 면역 반응을 이끌어내지 않는다. 일부 실시 형태에서, 링커는 내인성 아미노산 서열, 외인성 아미노산 서열(예를 들어, GS-풍부 서열), 또는 비-펩티드 화학적 링커이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 내인성 아미노산 서열이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 외인성 아미노산 서열이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 GS-풍부 서열이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 비-펩티드 화학적 링커이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 젤리롤 접힘(jellyroll fold)을 형성하는 TNF 상동성 도메인을 포함하는, TL1A의 C-말단 세포외 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 야생형 인간 TL1A 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DR3에 특이적으로 결합할 수 있는 TL1A의 기능성 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DR3에 특이적으로 결합할 수 있는 서열 번호 94의 기능성 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DR3에 대한 가용성 리간드를 형성할 수 있는 TL1A의 기능성 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 TL1A의 야생형 아미노산 서열과 대비하여 하나 이상의 아미노산 변경(예를 들어, 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경)을 포함한다.
TL1A 리간드의 생물학적 활성
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 CD4+ T 세포 상의 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 CD8+ T 세포 상의 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, T 세포는 이펙터 T 세포이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3(예를 들어, CD4+ 또는 CD8+ 이펙터 T 세포 상의 DR3)에 대한 결합. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3(예를 들어, CD4+ 또는 CD8+ 이펙터 T 세포 상의 DR3)에 대한 결합은 DR3-의존성 신호전달 경로를 유도할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 전염증성, 생존-촉진 신호전달 캐스케이드의 DR3-매개 활성화를 촉진할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 수용체의 막-원위 CRD 도메인(프리-리간드 어셈블리 도메인(pre-ligand assembly domain, PLAD)으로 불림)의 재편성을 촉발한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 PLAD 상호작용을 파괴한다. 일부 실시 형태에서, 중심 CRD은 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드와 상호작용한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 하나 이상의 어댑터 단백질의 동원(예를 들어, TNFR-관련 사멸 도메인(TNFR-associated death domain, TRADD)의 DD를 통한 DR3의 세포질 DD로의 그의 동원)을 촉발한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 DR3의 입체형태 재배열을 촉발할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 DR3 내재화를 향상시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 입체형태 변화는 각 수용체 하위단위의 막 나선을 통해 전달되어 세포질 TRADD 도메인의 시스-상호작용을 가능하게 한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합으로부터 발생되는 입체형태 변화는 NF-kB 신호전달 및 T 세포 활성화로 이어질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 T 세포(예를 들어, CD4+ 또는 CD8+ 이펙터 T 세포) 상의 DR3에 대한 결합은 하류 신호전달 경로(예를 들어, NF-κB 신호전달)를 유도한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 CD4+ 또는 CD8+ 이펙터 T 세포 상의 DR3에 대한 결합은 T 세포 증식으로 이어진다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 T 세포 상의 DR3에 대한 결합은 하나 이상의 사이토카인(예를 들어, IL-2, IFNγ 및 TNFα)의 생성 및/또는 분비의 증가로 이어진다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 T 세포 상의 공동자극제로서 작용한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 DR3 활성화로 이어진다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 DR3-TL1A 축의 활성화로 이어진다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 면역 이펙터 세포의 공동자극을 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 향상된 항-종양 면역으로 이어진다.
본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드에 의한 DR3 활성화의 효과는 T-세포 하위세트들 사이에서 달라질 것임이 이해될 것이다. 일부 실시 형태에서, 결합은 인터류킨-2(IL-2) 신호전달의 증가로 이어진다. 일부 실시 형태에서, IL-2 신호전달의 증가는 활성화 T 세포에서의 증가된 IL-2 생성이다. 일부 실시 형태에서, IL-2 신호전달의 증가는 활성화 T 세포에서의 증가된 IL-2 수용체 발현이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 DR3에 대한 결합은 IFNγ를 상향조절할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 결합은 Th1 면역 반응으로 제한되지 않고, IL-4뿐만 아니라 다른 Th2-유형 사이토카인을 촉진할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 면역 반응을 조절할 수 있다. 비제한적인 예로서, 면역 반응을 조절하는 것은 T-세포 활성화(예를 들어, CD8+ T-세포 활성화)를 증가시키고/시키거나, T-세포 증식을 증가시키고/시키거나, 사이토카인 생성을 증가시키는 면역을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 면역 반응의 조절은 T-세포 활성화를 증가시키는 것을 포함한다. 일 실시 형태에서, T-세포 활성화는 CD8+ T-세포 활성화이다. 일부 실시 형태에서, 면역 반응의 조절은 T-세포 증식을 증가시키는 것을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 면역 반응의 조절은 사이토카인 생성을 증가시키는 것을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 안정한 목표 올리고머를 형성한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 올리고머는 단량체이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 올리고머는 이량체이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 올리고머는 삼량체이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 올리고머는 육량체이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 안정한 목표 올리고머를 형성하며, 여기서 목표 올리고머는 단량체(예를 들어, HSA-scTL1A, 예컨대 서열 번호 84 또는 HIS-scTL1A, 예컨대 서열 번호 86)이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 단량체는 HSA-scTL1A이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 단량체는 실시 형태 84를 포함하는 HSA-scTL1A이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 단량체는 HIS-scTL1A이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 단량체는 실시 형태 86을 포함하는 HIA-scTL1A이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 안정한 목표 올리고머를 형성하며, 여기서 목표 올리고머는 이량체(예를 들어, Fc-His-TL1A, 예컨대 서열 번호 92 또는 Fc-scTL1A, 예컨대 서열 번호 87)이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 이량체는 Fc-His-TL1A를 포함한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 이량체는 서열 번호 92를 포함하는 Fc-His-TL1A를 포함한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 이량체는 Fc-scTL1A를 포함한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 이량체는 서열 번호 87을 포함하는 Fc-scTL1A를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 안정한 목표 올리고머를 형성하며, 여기서 목표 올리고머는 삼량체(예를 들어, His-TL1A, 예컨대 서열 번호 20 또는 HSA-TL1A, 예컨대 서열 번호 85)이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 삼량체는 His-TL1A이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 삼량체는 서열 번호 20을 포함하는 His-TL1A를 포함한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 삼량체는 HSA-TL1A를 포함한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 삼량체는 서열 번호 85를 포함하는 HSA-TL1A를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 안정한 목표 올리고머를 형성하며, 여기서 목표 올리고머는 육량체(예를 들어, Fc-TL1A, 예컨대 서열 번호 93)이다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 육량체는 Fc-TL1A를 포함한다. 일 실시 형태에서, 안정한 목표 육량체는 서열 번호 93을 포함하는 Fc-TL1A를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 높은 단분산도 및 안정성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A 리간드보다 높은 단분산도 및 안정성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 높은 단분산도를 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 높은 안정성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 예를 들어 분취용 겔-투과 분석에 따라 정제된, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 40% 초과, 약 50% 초과, 약 60% 초과, 약 70% 초과, 약 80% 초과, 약 90% 초과 또는 그 이상이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 40% 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 50% 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 60% 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 70% 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 80% 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 종의 집단은 약 90% 초과이다. 소정 실시 형태에서, 백분율은 정제 후의 값이다. 일부 실시 형태에서, 백분율은 분취용 겔-투과 분석 후의 값이다.
일부 실시 형태에서, 예를 들어 분취용 겔-투과 분석에 따라 정제된, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 이탈(off-target) 종의 집단(즉, % 고분자량 종 및/또는 저분자량 종)은 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 10% 미만 또는 그 이하이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 이탈 종의 집단은 약 50% 미만이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 이탈 종의 집단은 약 40% 미만이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 이탈 종의 집단은 약 30% 미만이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 이탈 종의 집단은 약 20% 미만이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 목표 이탈 종의 집단은 약 10% 미만이다. 소정 실시 형태에서, 백분율은 정제 후의 값이다. 일부 실시 형태에서, 백분율은 분취용 겔-투과 분석 후의 값이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 단분산도는 본 명세서에 개시된 또는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 (예를 들어, HMW 및/또는 LMW 종의 감소에 의해) 개선될 수 있다. 비제한적인 예로서, 단분산도는 폴리펩티드 서열을 변경시켜 이황화물 결합을 변경시킴으로써 개선될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 단분산도는 조작된 TL1A 리간드의 정제 동안 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용함으로써(예를 들어, 완충액 조건을 변화시킴으로써), (예를 들어, HMW 및/또는 LMW 종의 감소에 의해) 개선될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 단분산도는 정제 동안 산화환원 접근법을 사용함으로써 개선될 수 있다(예를 들어, HMW 종의 형성이 방지될 수 있다). 비제한적인 예로서, 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 (첨가된 NaCl 없이) 단지 20 mM 인산나트륨(pH 6.8)만으로 이루어진 완충액 중에서의 산화환원을 포함하는 방법을 사용하여 정제될 수 있다.
본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 생물학적 활성은 본 명세서에 기재되고 당업계에 알려진 다양한 검정을 사용하여 입증될 수 있다. 조작된 TL1A 리간드의 DR3 또는 DcR3에 대한 결합을 시험하는 검정의 비제한적인 예가 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재되어 있다(예를 들어, 면역조직화학, 면역검정, 면역침전, ELISA, 유세포측정, CyTOF 등). 조작된 TL1A 리간드가 DR3-매개 반응을 조절하는지의 여부를 결정하기 위한 생체내 및 시험관내 검정이 당업계에 알려져 있거나 개발 중이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 1 μM 이하, 약 100 nM 이하, 약 40 nM 이하, 약 20 nM 이하, 약 10 nM 이하, 약 1 nM 이하, 또는 약 0.1 nM 이하의 반수 최대 유효 농도(EC50)로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 1 μM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 100 nM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 40 nM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 20 nM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 10 nM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 1 nM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 약 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 DR3에 결합한다.
이론에 의해 구애되지 않고서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 또한 T-세포의 강력한 공동자극제일 수 있으며, 용량-의존적 방식으로 세포 증식을 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 또한 CD4+ T 세포 하위세트보다 CD8+ T 세포 하위세트에 대해 더 큰 공동자극 효과를 가질 수 있다. 또한, 이들 화합물은 골수계 세포 반응에 대해 항염증 특성을 가질 수 있으면서도 여전히, T 세포를 효율적으로 공동자극하여 더 많은 양의 IL-2, IFN-γ를 생성할 수 있고, T 세포 증식 및 CD8+ T 세포 세포독성 활성을 향상시킬 수 있다. 당업계에 알려진 T 세포 공동자극, T 세포 활성화, 또는 T 세포 증식을 검정하는 임의의 방법이 T 세포에 대한 조작된 TL1A 리간드의 효과를 평가하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 하나 이상의 사이토카인의 생성 및/또는 분비를 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 하나 이상의 사이토카인의 생성을 증가시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 하나 이상의 사이토카인의 분비를 증가시킨다. 비제한적인 예로서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 IL2, TNFα, 및/또는 IFNγ의 생성 및/또는 분비를 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 CD3-활성화 T 세포에서 하나 이상의 사이토카인(예를 들어, IL-2, IFN-γ, TNFα)의 생성 및/또는 분비를 증가시킬 수 있다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IL-2이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 TNFα이다. 일 실시 형태에서, 사이토카인은 CD3-활성화 사이토카인이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 용량-의존적 방식으로 항원-특이적 T 세포 활성화(예를 들어, CD4+ 또는 CD8+ T 세포 활성화)를 향상시킨다. 일 실시 형태에서, T 세포는 CD4+ T 세포이다. 일 실시 형태에서, T 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 (예를 들어, CD3의 존재 하에서) 거대세포바이러스 항원 회상 검정을 사용하여 측정될 때 항원-특이적 T 세포 활성화를 향상시킨다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DcR3에 대한 감소된 결합을 나타내면서, DR3에 대한 특이적 결합을 보유한다. 일 실시 형태에서, DcR3은 순환 DcR3이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DR3에 비해 DcR3과의 접촉을 어렵게 하는 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 조작된 TL1A 리간드의 DcR3과의 상호작용을 파괴하는 아미노산 잔기(예를 들어, 야생형 TL1A 아미노산 서열과 대비하여 변경된 잔기)를 포함한다.
비제한적인 예로서, 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DcR3과의 상호작용을 파괴하는, 인간 TL1A(예를 들어, 서열 번호 94)의 잔기 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241에서의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N112에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F114에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E120에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 G124에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R156에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R170에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K173에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S176에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T185에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 D186에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y188에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 P189에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T192에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S206에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F209에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K240에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E241에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 DcR3과의 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DcR3과의 상호작용을 파괴하는, 잔기 K111, L123, M158, Q167, S187, E190, 및 N207에서의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 DcR3과의 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 DcR3과의 상호작용을 파괴하는, K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158Y에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187L에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 DcR3과의 상호작용을 파괴한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 2개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 3개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 4개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 5개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 6개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 7개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 2개 초과의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 3개 초과의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 4개 초과의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 5개 초과의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 6개 초과의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 7개 초과의 변경을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 야생형 인간 TL1A(예를 들어, 서열 번호 94)의 잔기 K111, L123, M158, Q167, S187, E190, 및 N207의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 2개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 3개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 4개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 5개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 6개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 7개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 2개 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 3개 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 4개 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 5개 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 6개 이상을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 7개 이상을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 DcR3과의 상호작용을 파괴한다.
TL1A 리간드 능력을 갖는 폴리펩티드
TNF 리간드는, 삼량체화되어 기능성 신호전달 유닛을 형성하는 젤리롤-유형 도메인들로 구성된다. TNF 리간드들은 일반적으로, 3개 또는 4개의 시스테인-풍부 도메인(CRD)으로 구성되는 그들의 TNF-패밀리 수용체에 3:3 화학량론으로 결합한다. 일부 TNF 리간드, 예컨대 TRAIL 및 TL1A는, 세포 표면 수용체의 구조를 모방하지만 막관통 또는 세포질 영역이 결여되어 있는 CRD 도메인 함유-단백질인 가용성 유인 수용체에 의해 결합될 수 있다. 이들 유인 수용체는 TNF 리간드가 T 세포를 활성화시키는 것을 방해하도록 싱크로서의 역할을 할 수 있으며, 실제로 가용성 유인 수용체가 종양에 의해 상향조절될 수 있다. DcR3은 Fas 리간드(FasL), LIGHT(림프독소와 상동성이고, 유도성 발현을 나타내고, T 림프구 상에서 발현되는 수용체인 헤르페스바이러스 침입 매개체(HVEM)를 위해 HSV 당단백질 D와 경쟁함), 또는 TL1A에 결합할 수 있으며, 몇몇 종양 환경에서 상향조절된다. 이론에 의해 구애되지 않고서, 일부 실시 형태에서, DcR3은 다수의 고형 종양 유형(예를 들어, 결장암, 췌장암, 또는 위암)에서 상향조절되는데, 이는 이들 종양에서의 DcR3이 T 세포 억제의 기전일 수 있고, 이들 종양 내의 T 세포가 DcR3-매개 싱크를 극복할 수 있는 TL1A 리간드에 의해 자극될 수 있음을 시사한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, TNF 상동성 도메인을 포함하는, TL1A의 C-말단 세포외 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 조작된 TL1A 리간드는 삼량체 복합체를 포함하며, 상기 삼량체 복합체는 3개의 TL1A 단량체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 3개의 TL1A 단량체는 비공유적 TL1A 삼량체를 형성한다. 일부 실시 형태에서, 3개의 TL1A 단량체는 공유적으로 연결되어 단일쇄 TL1A(scTL1A) 삼량체를 형성한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 단일쇄 리간드이다(예를 들어, 링커를 통해 연결된 TL1A의 C-말단 세포외 도메인의 3개의 카피를 포함한다). 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 단일쇄 리간드이다(예를 들어, 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251의 3개의 카피를 포함하는 아미노산 서열을 포함한다).
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 인간 TL1A(예를 들어, 서열 번호 94)의 잔기 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241에서의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N112에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F114에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E120에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 G124에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R156에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R170에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K173에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S176에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T185에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 D186에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y188에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 P189에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T192에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S206에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F209에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K240에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E241에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111, L123, M158, Q167, S187, E190, 및 N207에서의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158Y에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187L에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 2개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 3개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 4개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 5개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 6개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 7개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 3개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 4개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 5개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 6개의 변경을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 7개의 변경을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 야생형 인간 TL1A(예를 들어, 서열 번호 94)의 잔기 K111, L123, M158, Q167, S187, E190, 및 N207의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207에서의 아미노산 변경을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 TL1A 아미노산 서열의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 포함하며, 여기서 하나 이상의 변경은 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택된다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103H에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103Q에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R103E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K111E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N112E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F114A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E120A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E120K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E120H에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123G에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 L123K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 G124S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 G124K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 G124D에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R156A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R156Y에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R156K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R156E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158Y에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 M158E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Q167A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 R170E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K173S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K173R에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S176A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S176L에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S176에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S176K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T185A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T185L에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T185N에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T185D에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 D186Y에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187L에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S187D에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y188A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y188S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 P189A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 P189K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 P189F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 P189S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190G에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E190F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T192A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T192F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T192K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T192E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S206A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S206F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S206K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 S206E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 N207E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F209A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 F209W에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238R에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 Y238E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239E에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239K에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 T239W에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K240A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K240F에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K240S에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 K240D에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E241A에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E241L에서의 아미노산 변경을 포함한다. 일 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 잔기 E241Q에서의 아미노산 변경을 포함한다. 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 2개 이상의 조합이 또한 고려된다. 소정 실시 형태에서, 아미노산 변경은 인간 TL1A의 아미노산 변경이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 야생형 TL1A이다. 소정 실시 형태에서, 인간 TL1A는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 아미노산 변경 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F를 포함하는, 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 임의의 2개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 임의의 3개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 임의의 4개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 임의의 5개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 임의의 6개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 임의의 7개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 적어도 2개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 적어도 3개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 적어도 4개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 적어도 5개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 적어도 6개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 적어도 7개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 1 내지 10개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 1 내지 7개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 1 내지 5개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 2 내지 10개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 2 내지 5개를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 조작된 TL1A 리간드는 상기에 언급된 아미노산 변경들 중 5 내지 7개를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 가용성 TL1A 리간드를 형성할 수 있는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 DR3에 결합할 수 있는 이의 단편을 포함한다.
일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 22의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함한다. 일 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 상기 확인된 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 상기 확인된 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 상기 확인된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 상기 확인된 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 상기 확인된 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79, 서열 번호 72, 서열 번호 8, 서열 번호 65, 서열 번호 52, 서열 번호 14, 서열 번호 36, 서열 번호 90, 서열 번호 88, 서열 번호 91, 또는 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 80% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 98% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는, 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열의 최소한의 단편을 포함하는 아미노산과 적어도 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 최소한의 단편은 DR3에 특이적으로 결합하는 삼량체 복합체를 형성할 수 있다.
Fc 및 HSA 융합 단백질
이종성 단백질 또는 폴리펩티드(또는 이의 단편)에, 예를 들어 폴리펩티드(예를 들어, about 10개 이상, 약 20개 이상, 약 30개 이상, 약 40개 이상, 약 50개 이상, 약 60개 이상, 약 70개 이상, 약 80개 이상, 약 90개 이상, 또는 약 100개 이상의 아미노산의 폴리펩티드)에 재조합적으로 연결되거나 접합되어(직접 또는 간접적으로의 공유적 또는 비공유적 접합) 융합 단백질을 생성하는 조작된 TL1A 리간드뿐만 아니라, 이의 용도가 본 명세서에 또한 기재된다. 구체적으로는, 조작된 TL1A 리간드 및 이종성 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드를 포함하는 융합 단백질이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, 이종성 폴리펩티드 또는 단백질은 단백질 안정화 영역을 포함한다. 본 명세서에 기재되거나 당업계에 알려진 임의의 단백질 안정화 영역이 사용될 수 있다.
이론에 의해 구애되지 않고서, 소정 폴리펩티드, 예를 들어 Fc 또는 HSA 영역 - 이들 둘 모두는 FcRn-매개 재순환을 거치는 그들의 능력으로 인해 긴 혈청 반감기를 나타냄 - 에 대한 단백질의 융합체는 단백질 치료제의 반감기를 연장시키는 성공적인 방법이었다. 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 기재된 임의의 단백질 융합 기술이 본 명세서에 개시된 조성물 또는 방법에 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, Fc 융합 단백질, 인간 혈청 알부민에 대한 융합, 카르복시-말단 펩티드에 대한 융합, 및 다른 폴리펩티드 융합 접근법이 사용될 수 있다. 또한, 당업계에 알려진 반감기 연장에 대한 다른 접근법이 사용될 수 있는데, 예를 들어 PEG화(pegylation) 또는 글리코실화가 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 Fc 영역의 N-말단 또는 C-말단에 융합될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 HSA 영역의 N-말단 또는 C-말단에 융합될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 하나 이상의 이종성 단백질 또는 폴리펩티드 - 여기서, 하나 이상의 이종성 단백질 또는 폴리펩티드는 단백질 안정화 영역임 - 에 대한 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 융합은 조작된 TL1A 리간드의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 이상의 단백질 안정화 영역에 대한 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 융합은 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 혈청 반감기를 about 2배 이상, 약 3배 이상, 약 4배 이상, 약 5배 이상, 약 10배 이상, 약 20배 이상, 약 40배 이상, 약 60배 이상, 약 80배 이상, 약 100배 이상, 약 200배 이상, 또는 약 500배 이상만큼 증가시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드가 융합되는 이종성 단백질, 폴리펩티드, 또는 펩티드는 조작된 TL1A 리간드를 특정 세포(예를 들어, 종양 세포)에 표적화하기에 유용하다.
더욱이, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 정제를 용이하게 하기 위해 마커 또는 "태그"서열, 예컨대 펩티드에 (직접 또는 간접적으로) 연결될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 마커 또는 태그 아미노산 서열은 헥사-히스티딘 펩티드, 예컨대 벡터 내에 제공된 상기 태그(예를 들어, QIAGEN, inc. 참조)이며, 이들 중 다수는 구매가능하다. 예를 들어, 문헌[Gentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-24]에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 편리한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩티드 태그는 헤마글루티닌("HA") 태그 - 이는 인플루엔자 헤마글루티닌 단백질로부터 유래된 에피토프에 상응함 - (문헌[Wilson et al., 1984, Cell 37:767-78]) 및 "FLAG" 태그를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
모이어티(폴리펩티드를 포함함)를 항체에 (직접 또는 간접적으로) 연결하거나 접합시키기 위한 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 이들 중 어느 하나가 본 명세서에 기재된 융합 단백질을 제조하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 융합 단백질이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "융합 단백질"은 조작된 TL1A 리간드의 아미노산 서열 및 이종성 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 통상적으로 TL1A의 일부가 아닌 폴리펩티드 또는 단백질)의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다. 소정 실시 형태에서, 융합 단백질은 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 생물학적 활성을 보유한다.
본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 기능성 단편을 포함하며, 기능성 단편은 어떠한 이종성 폴리펩티드 또는 단백질(예를 들어, 링커, 태그, Fc 영역, 또는 HAS 영역)도 포함하지 않으며, 기능성 단편은 TL1A 삼량체를 형성하고 DR3에 결합할 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.
융합 단백질은, 예를 들어 유전자-셔플링, 모티프-셔플링, 엑손-셔플링, 및/또는 코돈-셔플링(총칭하여 "DNA 셔플링"으로 지칭됨)의 기법을 통해 생성될 수 있다. DNA 셔플링은, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 조작된 TL1A 리간드의 활성을 변경시키는 데 사용될 수 있으며, 이에는, 예를 들어 수용체에 대한 더 높은 친화도 및/또는 더 낮은 해리 속도를 갖는 TL1A 리간드가 포함된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 재조합 전에 오류-유발(error-prone) PCR, 무작위 뉴클레오티드 삽입, 또는 다른 방법에 의한 무작위 돌연변이생성을 적용함으로써 변경될 수 있다. 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 이종성 분자의 하나 이상의 성분, 모티프, 섹션, 부분, 도메인, 단편 등과 재조합될 수 있다.
본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 또한 고체 지지체에 부착될 수 있으며, 이때 고체 지지체는 표적 항원의 면역검정 또는 정제에 유용하다. 그러한 고체 지지체는 유리, 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리비닐 클로라이드, 또는 폴리프로필렌을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 또한 제2 항체에 (직접 또는 간접적으로) 연결되거나 접합되어 항체 이종접합체를 형성할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 다량체성의 조작된 TL1A 리간드이며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역, 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역, scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역, 또는 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역, 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역, 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역, 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역, 또는 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역을 포함하는 다량체성의 조작된 TL1A 리간드이다.
일부 실시 형태에서, Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역이다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 면역글로불린의 Fc 영역을 포함할 수 있다. 당업자는 본 명세서에 기재된 분자, 폴리펩티드 또는 작용제 중 일부가, Fc 영역의 적어도 일부분이, 천연 또는 비변경된 Fc 영역을 포함하는 대략적으로 동일한 면역원성의 융합 단백질과 비교될 때 증가된 암 세포 국재화, 증가된 종양 침투, 감소된 혈청 반감기, 또는 증가된 혈청 반감기와 같은 원하는 생화학적 특성을 제공하도록 결실되었거나 달리 변경된 융합 단백질 또는 다른 폴리펩티드를 포함할 것임을 이해할 것이다. Fc 영역에 대한 변형은 하나 이상의 도메인에서의 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실, 또는 치환을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 변형된 융합 단백질 또는 다른 폴리펩티드는 2개의 중쇄 불변 도메인(CH2 또는 CH3) 중 하나 이상 또는 힌지 영역에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 전체 CH2 도메인은 제거될 수 있다(ΔCH2 작제물). 일부 실시 형태에서, 생략된 불변 영역 도메인은 부재하는 불변 영역 도메인에 의해 전형적으로 부여되는 약간의 분자 가요성을 제공하는 짧은 아미노산 스페이서(예를 들어, 10개의 aa 잔기)로 대체된다.
일부 실시 형태에서, 변형된 융합 단백질 또는 다른 폴리펩티드는 단지 불변 도메인의 부분적인 결실 또는 수개 또는 심지어는 단일 아미노산의 치환만을 가질 수 있다. 예를 들어, CH2 도메인의 선택된 영역에서의 단일 아미노산의 돌연변이는, Fc 결합을 실질적으로 감소시켜 암 세포 국재화 및/또는 종양 침투를 증가시키기에 충분할 수 있다. 유사하게, 일부 실시 형태에서, 특정 이펙터를 제어하는 하나 이상의 불변 영역 도메인의 일부를 간단히 결실하는 것이 바람직할 수 있다. 불변 영역의 그러한 부분 결실은 대상 불변 영역 도메인과 관련된 다른 바람직한 기능은 온전하게 유지하면서 폴리펩티드 또는 분자의 선택된 특성(예를 들어, 혈청 반감기)은 개선할 수 있다.
인코딩 폴리뉴클레오티드
본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드(들)가 본 명세서에 추가로 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 대체 또는 변이 단백질을 생성하도록 재조합 DNA 기술을 사용하여 다수의 상이한 방식으로 변형될 수 있다. 단백질의 부위-지정(site-directed) 또는 고밀도 돌연변이생성이 재조합 단백질의 특이성, 친화성, 안정성 등을 최적화하는 데 사용될 수 있다.
소정 태양에서, DR3에 특이적으로 결합하는 조작된 TL1A 리간드 또는 이의 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 숙주 세포(예를 들어, E. 콜라이(E. coli) 및 포유류 세포)에서 재조합 발현을 위한 벡터, 예를 들어 그러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 제공된 임의의 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드뿐만 아니라, 그러한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터, 예를 들어 숙주 세포, 예를 들어 포유류 세포에서의 그들의 효율적인 발현을 위한 발현 벡터가 본 명세서에 제공된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "단리된" 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원에(예를 들어, 마우스 또는 인간에) 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 더욱이, "단리된" 핵산 분자, 예컨대 cDNA 분자에는, 재조합 기법에 의해 생성될 때에는 다른 세포 물질, 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나, 화학적으로 합성될 때에는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 예를 들어, "실질적으로 없는"이라는 표현은 약 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5%, 또는 0.1%(특히 약 10% 미만)의 다른 물질, 예를 들어 세포 물질, 배양 배지, 다른 핵산 분자, 화학적 전구체 및/또는 다른 화학물질을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산 분자의 제제를 포함한다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 핵산 분자(들)는 단리되거나 정제된다.
특정 태양에서, DR3 단백질(예를 들어, 인간 DR3)에 특이적으로 결합하고 본 명세서에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 조작된 TL1A 리간드 또는 이의 DR3-결합 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공된다.
소정 태양에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251을 인코딩하는 뉴클레오티드를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 94의 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 적어도 하나의 아미노산 변경을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 갖는 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경이 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택되는 변경인, 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함하는 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함하는 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 이의 임의의 단편을 포함하는 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 하기를 포함하는 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다: 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
이종성 폴리펩티드에 융합된 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 또한 개시된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 폴리뉴클레오티드는 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 이중특이성 항체를 인코딩한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 폴리뉴클레오티드는 DR3 폴리펩티드, 예를 들어 인간 DR3 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드(또는 이의 단편)를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드 항체는 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역이다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 95 내지 서열 번호 187의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리뉴클레오티드 하기를 포함한다: 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 173의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 166의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 102의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 159의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 146의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 108의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 130의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 184의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 182의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 185의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열; 또는 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 183의 핵산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 핵산 서열.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 명세서에 제공되며, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 95 내지 서열 번호 187의 뉴클레오티드 서열의 단편을 포함하며, 상기 단편은 DR3에 결합할 수 있는 조작된 TL1A 리간드를 인코딩한다.
당업자는 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드들 일부가 태그, 융합 단백질 또는 다른 폴리펩티드(예를 들어, 태그, 예컨대 폴리-히스티딘, TEV 프로테아제에 의해 인식되는 서열(예를 들어, Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-(Gly/Ser)))를 인코딩하는 서열을 포함할 것이며, 이들 서열은 절단되거나 절단되지 않을 수 있음을 이해할 것이다. 일부 실시 형태에서, 융합 단백질 또는 다른 폴리펩티드(예를 들어, 태그, 예컨대 폴리-히스티딘)는 당업계에 알려진 다른 태그에 의해 대체될 수 있다.
폴리펩티드의 제조 방법
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 폴리펩티드이다. 폴리펩티드는 DR3에 결합하는 재조합 폴리펩티드, 천연 폴리펩티드, 또는 합성 폴리펩티드를 포함한다.
본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 서열 번호 94의 아미노산 서열의 적어도 하나의 아미노산 변경을 도입하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 아미노산 변경은 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 K111A이다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 L123K이다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 M158Y이다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 Q167A이다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 S187L이다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 E190F이다. 일부 실시 형태에서, 아미노산 변경은 N207F이다. 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법이 본 명세서에 추가로 제공되며, 상기 방법은 조작된 TL1A 리간드의 집단을 생성하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 아미노산 서열은 단백질의 구조 또는 기능에 유의한 효과를 주지 않고서 달라질 수 있음이 당업계에서 인식될 것이다. 따라서, 일부 실시 형태에서, DR3에 대한 실질적인 결합 활성을 나타내는 폴리펩티드의 변형이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 폴리펩티드의 아미노산 서열 변형은 결실, 삽입, 역위, 반복, 및/또는 다른 유형의 치환을 포함한다.
폴리펩티드, 이의 유사체 및 변이체는, 통상적으로 폴리펩티드의 일부가 아닌 추가의 화학적 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 유도체화된 모이어티는 폴리펩티드의 용해도, 생물학적 반감기, 및/또는 흡수를 개선할 수 있다. 이들 모이어티는 또한 폴리펩티드 및 변이체의 바람직하지 않은 부작용을 감소시키거나 제거할 수 있다. 화학적 모이어티에 대한 개요는 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London]에서 찾아볼 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 혈청 반감기를 증가시키도록 변형될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 리간드의 구조 안정성을 증가시키도록 변형될 수 있다.
본 명세서에 기재된 폴리펩티드는 당업계에 알려진 임의의 적합한 방법에 의해 생성될 수 있다. 그러한 방법은 직접 단백질 합성 방법으로부터 폴리펩티드 서열을 인코딩하는 DNA 서열을 작제하고 적합한 숙주에서 그러한 서열을 발현하는 것까지의 범위에 이른다. 일부 실시 형태에서, 관심 야생형 단백질을 인코딩하는 DNA 서열을 단리하거나 합성함으로써 재조합 기술을 사용하여 DNA 서열이 작제된다. 선택적으로, 이러한 서열은 부위-특이적 돌연변이생성에 의해 돌연변이 유발되어 이의 기능성 유사체를 제공할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 올리고뉴클레오티드 합성기를 사용하여 화학적 합성에 의해, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 DNA 서열이 작제될 수 있다. 원하는 폴리펩티드의 아미노산 서열 및 관심 재조합 폴리펩티드가 생성될 숙주 세포에서 유리한 코돈의 선택에 기초하여 올리고뉴클레오티드가 설계될 수 있다. 관심 대상인 단리된 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 합성하는 데 표준 방법이 적용될 수 있다. 예를 들어, 역번역된 유전자를 작제하는 데 완전한 아미노산 서열이 사용될 수 있다. 또한, 특정 단리된 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 DNA 올리고머가 합성될 수 있다. 예를 들어, 원하는 폴리펩티드의 일부분들을 코딩하는 몇몇 작은 올리고뉴클레오티드가 합성되고, 이어서 라이게이션될 수 있다. 개별 올리고뉴클레오티드들은 전형적으로 상보적 조립을 위해 5' 또는 3' 돌출부(overhang)를 함유한다.
본 명세서에 제공된 방법은 조작된 TL1A 리간드를 이종성 폴리펩티드에 융합시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는, 통상적으로 폴리펩티드의 일부가 아닌 추가의 이종성 폴리펩티드 또는 모이어티를 함유하도록 추가로 변형될 수 있다. 유도체화된 이종성 폴리펩티드 또는 모이어티는 리간드의 용해도, 생물학적 반감기(예를 들어, 혈청 반감기), 안정성, 발현 수준, 단분산도, 결합 활성, 흡수 및/또는 T 세포를 활성화시키는 능력을 개선할 수 있다. 이종성 폴리펩티드 또는 모이어티는 또한 폴리펩티드 및 변이체의 바람직하지 않은 부작용을 감소시키거나 제거할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이종성 모이어티는 화학적 모이어티이다. 화학적 모이어티에 대한 개요는 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Pharmaceutical Press, London]에서 찾아볼 수 있다.
본 명세서에 기재된 폴리펩티드는 당업계에 알려진 임의의 적합한 방법에 의해 생성될 수 있다. 그러한 방법은 직접 단백질 합성 방법으로부터 폴리펩티드 서열을 인코딩하는 DNA 서열을 작제하고 적합한 숙주에서 그러한 서열을 발현하는 것까지의 범위에 이른다. 일부 실시 형태에서, 관심 야생형 단백질을 인코딩하는 DNA 서열을 단리하거나 합성함으로써 재조합 기술을 사용하여 DNA 서열이 작제된다. 선택적으로, 이러한 서열은 부위-특이적 돌연변이생성에 의해 돌연변이 유발되어 이의 기능성 유사체를 제공할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 개시된 분자 모델링 알고리즘을 사용하는 방법이 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 단백질 구조를 모델링하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 개시된 분자 모델링 알고리즘을 사용하는 방법이, 수용체(예를 들어, DR3 및/또는 DcR3)에 결합된, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 단백질 구조를 모델링하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 개시된 분자 모델링 알고리즘을 사용하는 방법이 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드에 추가의 변형을 추가로 도입하여 그의 특성들(예를 들어, 안정성, 단분산도, DR3에 대한 결합, DcR3에 대한 결합, 혈청 반감기) 중 하나 이상을 변경시키는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 당업계에 알려져 있거나 본 명세서에 개시된 분자 모델링 알고리즘을 사용하는 방법이 추가의 서열 및/또는 구조 정보와 함께, 수용체(예를 들어, DR3 및/또는 DcR3)에 결합된, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 단백질 구조를 모델링하는 데 사용될 수 있다.
세포에 대한 표적화
일부 실시 형태에서, 세포에서 DR3 신호전달을 활성화하거나 향상시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 상기 세포를 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드(예를 들어, DR3에 결합하는 단일쇄 또는 비공유적 TL1A 삼량체)의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 세포에서 DR3 신호전달을 활성화하거나 향상시키는 방법은 세포를 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 세포의 표면 상의 항원(예를 들어, 종양-관련 항원)에 결합하는 표적화 모이어티(targeting moiety)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 세포를 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드와 접촉시키는 단계는 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 생체내 방법이다. 일부 실시 형태에서, 상기 방법은 시험관내 또는 생체외(ex vivo) 방법이다. 일부 실시 형태에서, 세포는 종양 세포이다.
종양 또는 암이 핵산 또는 단백질(예를 들어, 종양-관련 항원)의 상승된 발현 수준을 갖는지의 여부를 결정하기 위한 것으로 당업계에 알려진 임의의 방법이 사용될 수 있으며, 다양한 샘플을 사용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 종양 또는 암을 갖는 대상체로부터 채취된다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 신선한 종양/암 샘플이다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 동결된 종양/암 샘플이다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 포르말린-고정되고 파라핀-포매된 샘플이다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 혈액 샘플이다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 혈장 샘플이다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 세포 용해물에 이르도록 처리된다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 DNA 또는 RNA에 이르도록 처리된다.
추가의 태양에서, 표적, 즉, 종양-관련 항원(TAA)의 발현 수준을 결정하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, TAA의 발현 수준이 결정된다. 세포, 종양, 또는 암에서 핵산 발현의 수준을 결정하기 위한 방법이 당업자에 의해 알려져 있다. 이들 방법은 PCR-기반 검정, 마이크로어레이 분석, 및 뉴클레오티드 서열분석(예를 들어, NextGen 서열분석)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 세포, 종양, 또는 암에서 단백질 발현 수준을 결정하기 위한 방법은 웨스턴 블롯 분석, 단백질 어레이, ELISA, 면역조직화학(IHC), 및 FACS를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
6.8 치료 방법
사이토카인, 예컨대 IFN-γ의 증가된 생성을 매개하기 위한 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 용도가 본 명세서에 제공된다. 따라서, 사이토카인으로 치료될 수 있는 질병 및 질환, 예컨대 암의 치료에 있어서의 그러한 조작된 TL1A 리간드의 용도가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 증가된 T-세포(예를 들어, CD4+ 또는 CD8+ T 세포) 활성 또는 증식을 매개하는 데 있어서의 조작된 TL1A 리간드의 용도가 본 명세서에 제공된다. 따라서, T 세포 활성 또는 증식을 증가시킴으로써 치료가능한 질병 및 질환, 예컨대 암의 치료에 있어서의 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 용도가 일부 실시 형태에서 제공된다. 일부 실시 형태에서, 증가된 T 세포 활성 및 증가된 T 세포 증식 둘 모두를 매개하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 조작된 TL1A 리간드의 용도가 본 명세서에 제공된다.
당업자는 본 명세서에 개시된 임의의 TL1A 리간드가 T 세포를 활성화하기 위해 본 명세서에 개시된 방법에 따라 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 비제한적인 예로서, 일부 실시 형태에서, Fc-scTL1A-AKALFF TL1A 변이체(서열 번호 91)가 시험관내 및/또는 생체내에서 T 세포를 활성화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 TL1A 리간드(예를 들어, Fc-scTL1A-AKALFF 변이체)는 야생형 TL1A와 유사한 수준으로 항-CD3-활성화 T 세포를 공동자극할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 TL1A 리간드(예를 들어, Fc-scTL1A-AKALFF 변이체)는 DcR3의 존재 하에서 항-CD3-활성화 T 세포를 공동자극할 수 있다.
면역 시스템의 상향조절이 암의 치료에서 특히 바람직하다. 추가적으로, DcR3 유인 수용체는 TNF 리간드, 예컨대 TL1A 리간드가 T 세포를 활성화시키는 것을 방해하도록 싱크로서의 역할을 할 수 있으며, 가용성 유인 수용체가 종양에 의해 상향조절될 수 있다. 예를 들어, DcR3은 세포 표면 수용체, DR3보다 더 높은 친화도로 TL1A에 결합하고 TL1A-기반 T 세포 공동자극을 방해할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드는 T 세포를 공동자극함으로써 고형 종양에서 T 세포 탈진을 극복할 수 있다. 따라서, 암 치료 방법이 본 명세서에 제공된다. 암은 세포의 비정상적인 제어되지 않은 성장으로 발생되는 신생물 또는 종양을 지칭한다. 암은 원발성 암 또는 전이성 암일 수 있다.
또한, 일부 실시 형태에서, 대상체에서 종양의 성장을 억제하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 종양은 암 줄기 세포를 포함한다. 또한, 일부 실시 형태에서, 대상체에서 종양의 종양원성을 감소시키는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 종양은 고형 종양이다. 비제한적인 예로서, 일부 실시 형태에서, 종양은 결직장 종양, 신장 종양, 전립선 종양, 신경내분비 종양, 췌장 종양, 폐 종양, 난소 종양, 간 종양, 유방 종양, 위장 종양, 흑색종, 자궁경부 종양, 방광 종양, 교아세포종, 및 두경부 종양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 종양이다. 일부 실시 형태에서, 종양은 결직장 종양이다. 일부 실시 형태에서, 종양은 난소 종양이다. 일부 실시 형태에서, 종양은 폐 종양이다. 일부 실시 형태에서, 종양은 췌장 종양이다. 일부 실시 형태에서, 종양은 흑색종 종양이다. 일부 실시 형태에서, 종양은 방광 종양이다.
일부 태양에서, 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 고형 종양은 미세부수체(microsatellite) 불안정성을 갖지 않거나 또는 불일치 수복 단백질 발현의 손실을 갖지 않는다.
일부 태양에서, 본 명세서에 개시된 방법은 종양-침윤 림프구를 신생물, 암, 또는 고형 종양으로 동원하는 데; 그리고/또는 종양 또는 종양 미세환경 내에 림프 구조의 형성을 촉진 및/또는 향상시키는 데; 그리고/또는 종양 또는 종양 미세환경 내에 세포독성 T 세포 활성을 증가시키는 데; 그리고/또는 신생물, 암, 또는 고형 종양의 크기를 감소시키는 데; 그리고/또는 종양 또는 신생물의 성장을 억제하는 데; 그리고/또는 제2 치료제에 의한 치료에 대한 종양의 반응성을 증가시키는 데 효과적이다. 이론에 의해 구애되지 않고서, 종양은 공동-신호전달 캐스케이드를 이용하여, 공동억제성 신호, 예컨대 CTLA-4를 촉진함으로써 또는 공동자극성 신호전달을 파괴함으로써 면역 감시를 빠져나간다. 소정 태양에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 투여가 종양에서 T 세포를 공동자극하여 종양 세포에 대한 활성화를 가능하게 할 수 있는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드는 종양 면역 억제를 감소시킨다.
일부 태양에서, 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 질병 또는 장애는 자가면역 질병 또는 염증성 장애이다. 비제한적인 예로서, 질병 또는 장애는 궤양성 결장염, 루푸스, 염증성 장 질병(IBD), 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 또는 죽상경화증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
요법에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 조작된 TL1A 리간드가 본 명세서에 제공된다. 자가면역 장애 또는 암의 치료에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 바와 같은 조작된 TL1A 리간드가 본 명세서에 또한 제공된다. 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, IBD, COPD, 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 선택적으로 육종은 횡문근육종이다.
투여
본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 본 명세서에 추가로 제공된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드 및 약제학적으로 허용되는 담체 또는 비히클을 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 면역요법에 사용된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 면역-항암(immuno-oncology)에 사용된다. 일부 실시 형태에서, 조성물은 종양 성장을 억제하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 대상체(예를 들어, 인간 환자)에서 종양 성장을 억제하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 조성물은 암을 치료하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 대상체(예를 들어, 인간 환자)에서 암을 치료하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 대상체(예를 들어, 인간 대상체)에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물로 제형화된다.
특정 대상체를 위한 조작된 TL1A 리간드의 특정 투여 계획은 사용되는 조작된 TL1A 리간드, 투여되는 조작된 TL1A 리간드의 양, 투여 경로, 및 임의의 부작용의 원인 및 정도에 부분적으로 좌우될 것이다. 대상체(예를 들어, 포유동물, 예컨대 인간)에게 투여되는 조작된 TL1A 리간드의 양은 합리적인 시간 프레임에 걸쳐 원하는 반응을 달성하기에 충분해야 한다. 따라서, 일부 실시 형태에서, 대상체에게 투여되는 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드 또는 약제학적 조성물의 양은 유효량이다. 일부 실시 형태에서, 대상체에게 투여되는 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드 또는 약제학적 조성물의 양은 치료적 유효량이다. 일부 태양에서, 상기 방법은, 예를 들어 about 0.1 ㎍/㎏ 내지 최대 약 100 mg/㎏ 또는 그 이상을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 투여량은 약 1 ㎍/㎏ 내지 최대 약 100 mg/㎏; 또는 약 5 ㎍/㎏ 내지 최대 약 100 mg/㎏; 또는 약 10 ㎍/㎏ 내지 최대 약 100 mg/㎏; 또는 약 1 mg/㎏ 내지 최대 약 50 mg/㎏; 또는 약 2 mg/㎏ 내지 최대 약 30 mg/㎏; 또는 약 3 mg/㎏ 내지 최대 약 25 mg/㎏; 또는 약 3 mg/㎏ 내지 최대 약 25 mg/㎏; 또는 약 5 mg/㎏ 내지 최대 약 10 mg/㎏; 또는 약 10 mg/㎏ 내지 최대 약 20 mg/㎏; 또는 약 10 mg/㎏ 내지 최대 약 30 mg/㎏의 범위이다. 일부 질환 또는 질병 상태는 다회 투여(예를 들어, 3일, 7일, 2주, 3주, 1개월, 3개월, 6개월, 9개월, 12개월, 15개월, 18개월, 21개월, 2년, 또는 그 이상의 치료 기간 동안 매일, 주 3회, 주 1회, 2주마다 1회, 또는 1개월마다 1회)를 필요로 할 수 있다.
약제학적 조성물의 적합한 투여 경로는 당업계에 잘 알려져 있다. 비제한적인 예로서, 투여는 정맥내, 피하, 복막내, 뇌내(실질내), 뇌실내, 근육내, 안구내, 동맥내, 문맥내, 병변내, 수내, 수강내, 뇌실내, 경피, 피하, 복막내, 비강내, 장내, 국소, 설하, 요도, 질내, 또는 직장 수단에 의한 주사를 통해, 지속 방출 시스템에 의해, 또는 이식 장치에 의해 이루어질 수 있다. 조작된 TL1A 리간드를 투여하는 데 하나 초과의 경로가 사용될 수 있기는 하지만, 특정 경로가 다른 경로보다 더 즉각적이고 더 효과적인 반응을 제공할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드 및 담체(예를 들어, 약제학적으로 허용되는 담체)를 포함하는 조성물, 예컨대 약제학적 조성물을 제공한다. 사용되는 특정 담체는, 용해도 및 조작된 TL1A 리간드 또는 공동요법과의 반응성의 결여와 같은 화학적-물리적 고려사항에, 그리고 투여 경로에 의해 좌우될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드 및 당업계에 알려진 임의의 약제학적으로 허용되는 담체가 본 명세서에 제공된다.
병용 요법
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드를 대상체에게 투여하는 단계에 추가하여, 상기 방법 또는 치료는 적어도 하나의 추가의 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 추가의 치료제가 조작된 TL1A 리간드의 투여 전에, 그와 병행적으로, 그리고/또는 그에 후속하여 투여될 수 있다. 조작된 TL1A 리간드 및 추가의 치료제(들)를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 적어도 하나의 추가의 치료제는 1개, 2개, 3개, 또는 그 이상의 추가의 치료제를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 2개 이상의 치료제를 갖는 병용 요법은 상이한 작용 기전에 의해 작용하는 작용제들을 사용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 상이한 작용 기전을 갖는 작용제들을 사용하는 병용 요법은 상가적(additive) 또는 상승적(synergetic) 효과를 가져올 수 있다. 소정 실시 형태에서, 병용 요법은 단제요법에 사용되는 각 작용제의 더 낮은 용량을 가능하게 함으로써 독성 부작용을 감소시키고/시키거나 조작된 TL1A 리간드 및/또는 하나 이상의 추가의 치료제의 치료 지수를 증가시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 병용 요법은 저항성 암 세포가 발생될 가능성을 감소시킬 수 있다. 일부 실시 형태에서, 병용 요법은 면역 반응에 영향을 주는(예를 들어, 반응을 향상시키거나 활성화하는) 치료제 및 종양/암 세포에 영향을 주는(예를 들어, 억제하거나 살해하는) 치료제를 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드와 적어도 하나의 추가의 치료제의 병용물은 상가적 또는 상승적 결과를 가져온다. 일부 실시 형태에서, 병용 요법은 조작된 TL1A 리간드의 치료 지수의 증가 및/또는 추가의 치료제(들)의 치료 지수의 증가를 가져온다.
임의의 알려진 유용한 부류의 추가의 치료제가 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드는 면역 관문 억제제(예를 들어, PD-1, PD-L1, 및 CTLA-4를 표적화하는 면역-관문 차단 요법), TLR 효능제(agonist)(예를 들어, TLR7 효능제, TLR8 효능제, TLR9 효능제 등), DNA 미소 홈 결합제(DNA minor groove binder), DNA 복제 억제제, 안트라사이클린, 항생제, 항엽산제(anti-folate), 항대사제, 화학요법 감작제, 듀오카르마이신, 에토포시드, 플루오르화 피리미딘, 이오노포어(ionophore), 렉시트롭신, 니트로소우레아, 플라티놀, 퓨린 항대사제, 퓨로마이신, 방사선 감작제, 스테로이드, 탁산, 토포이소머라제 억제제, 빈카 알칼로이드 등과 병용하여 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 치료제는 알킬화제, 항대사제, 항유사분열제, 토포아이소머라제 억제제, 또는 혈관생성 억제제일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리펩티드 또는 작용제와 병용하여 투여될 수 있는 치료제는 화학요법제를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 상기 방법 또는 치료는 화학요법제와 병용되거나 화학요법제들의 칵테일과 병용된 본 발명의 조작된 TL1A 리간드의 투여를 포함한다. 조작된 TL1A 리간드에 의한 치료는 화학요법의 투여 전에, 그와 병행적으로, 또는 그에 후속하여 일어날 수 있다. 병용된 투여는 단일 약제학적 제형으로의 또는 별개의 제형을 사용한 공동투여, 또는 어떠한 순서로도 상관없지만 일반적으로 모든 활성제가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘할 수 있도록 하는 기간 이내에서 수행되는 연속적인 투여를 포함할 수 있다. 그러한 화학요법제에 대한 준비 및 투여 일정은 제조자의 설명서에 따라 또는 숙련된 실무자에 의해 경험적으로 결정된 바와 같이 사용될 수 있다. 그러한 화학요법에 대한 준비 및 투여 일정은 또한 문헌[The Chemotherapy Source Book, 4th Edition, 2008, M. C. Perry, Editor, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, PA]에 기재되어 있다.
본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 치료는 방사선 요법과 병용된 본 발명의 조작된 TL1A 리간드의 투여를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드에 의한 치료는 방사선 요법의 투여 전에, 그와 병행적으로, 또는 그에 후속하여 일어날 수 있다. 그러한 방사선 요법에 대한 투여 일정은 숙련된 의료 종사자에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 조작된 TL1A 리간드와 추가의 치료제(예를 들어, 폴리펩티드)의 병용 사용은 TL1A 이중특이성 화합물(예를 들어, 이중특이성 항체)일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 이중특이성 화합물은 조작된 TL1A 리간드 및 종양-표적화 모이어티를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 이중특이성 화합물은 암 세포 또는 종양을 표적화할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 이중특이성 화합물은 전신을 통한 사이토카인 방출 또는 탈종양(off-tumor) T 세포 활성화와 관련된 감소된 독성을 나타낼 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 이중특이성 화합물은 재활성화-유도 T 세포 사멸의 감소(예를 들어, 이중특이성 T 세포 인게이저(bsTCE)에 의한 과다활성화에 따른 종양-침윤 T 세포(TIL)의 아폽토시스의 감소)를 가져올 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 이중특이성 화합물은 공동자극성 수용체 및 종양 항원 둘 모두에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 이중특이성 화합물은 종양 미세환경에서 T 세포를 특이적으로 활성화하도록 종양-표적화 모이어티와 결합될 수 있는 분자로서 기능할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 이중특이성 화합물은 대상체에서 항종양 활성을 효과적으로 매개할 수 있다. 당업자는 본 명세서에 개시된 임의의 TL1A 리간드가 종양-표적화 모이어티와 결합되어 T 세포를 특이적으로 활성화할 수 있는 모듈로서 기능하도록 설계될 수 있음을 이해할 것이다. 일부 실시 형태에서, 유리한 단분산도, 안정성, 및/또는 활성을 갖는 TL1A 리간드가 이중특이성 화합물에서 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 일부 실시 형태에서, Fc-scTL1A-AKALFF TL1A 변이체(서열 번호 91)가 (예를 들어, 종양-표적화 모이어티와 결합된) 이중특이성 화합물에 사용될 수 있다.
사용 방법
일부 실시 형태에서, 대상체에서 면역 반응을 증가시키는 방법은 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 인간 DR3에 결합하고, 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합한다. 본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 종양에 대한 지속적 또는 장기간 면역 반응을 활성화하거나 향상시키는 방법은 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 인간 DR3에 결합하고, 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합하는 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 종양 재발 또는 종양 재성장을 억제하는 지속적 또는 장기간 면역을 유도하는 방법은 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 인간 DR3에 결합하고, 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합하는 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된 방법의 일부 실시 형태에서, 대상체에서 T-세포 활성을 증가시키는 방법은 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 인간 DR3에 결합하고, 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합하는 조작된 TL1A 리간드의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드를 사용하여 종양의 성장을 억제하기 위한 방법이 본 명세서에 추가로 제공된다. 일부 실시 형태에서, 종양의 성장을 억제하는 방법은 생체내에서 세포(예를 들어, CD4+ 또는 CD8+ T 세포)를 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드와 접촉시키는 단계를 포함한다.
대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함한다. 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하고, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 방법에 따라 사용되는 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A에 비해 높은 단분산도 및/또는 안정성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 방법들은 시험관내 및/또는 생체내(예를 들어, 대상체)에서 T 세포를 공동자극할 수 있는 조작된 TL1A 리간드를 제공한다.
대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 개시된 조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 질병 또는 장애는 자가면역 장애 또는 암이다.
본 발명은, 본 명세서에 기재된 조작된 TL1A 리간드(예를 들어, 폴리펩티드, 분자, 핵산)를 포함하고 본 명세서에 기재된 방법을 수행하는 데 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 키트는 하나 이상의 용기 내에 적어도 하나의 정제된 작용제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 키트는 본 명세서에 개시된 방법을 수행하는 데 필요한 그리고/또는 충분한 모든 성분들을 수용한다. 당업자는 본 발명의 개시된 조작된 TL1A 리간드가 당업계에 잘 알려진 확립된 키트 포맷들 중 하나의 포맷 내로 용이하게 도입될 수 있음을 용이하게 인식할 것이다.
조작된 TL1A 리간드뿐만 아니라 적어도 하나의 추가의 치료제를 포함하는 키트가 추가로 제공된다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 본 명세서에 개시되어 있거나 당업계에 알려져 있다(예를 들어, 화학요법제).
본 발명의 실시 형태는 하기 비제한적인 실시예를 참조하여 추가로 정의될 수 있으며, 이때 실시예는 본 발명의 소정 항체의 제조 및 본 발명의 항체를 사용하기 위한 방법을 상세히 기재한다. 본 발명의 범주로부터 벗어나지 않고서, 재료 및 방법 둘 모두에 대한 많은 수정이 실시될 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다.
실시 형태
본 발명은 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
일 세트의 실시 형태에서, 다음이 제공된다:
A1. 조작된 TL1A 리간드로서,
삼량체 복합체를 포함하며, 상기 삼량체 복합체는
a. 비공유적 TL1A 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체; 또는
b. 공유적으로 연결되어 단일쇄 TL1A(scTL1A) 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A2. 실시 형태 A1에 있어서, 단백질 안정화 영역을 추가로 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A3. 실시 형태 A2에 있어서, 상기 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 인간 혈청 알부민(HSA) 영역을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A4. 실시 형태 A3에 있어서, 하기를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드:
a. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역;
b. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역;
c. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는
d. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
A5. 실시 형태 A4에 있어서, 하기를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드:
a. 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역;
b. 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
c. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
d. 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는
e. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
A6. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A5 중 어느 하나에 있어서, 상기 3개의 TL1A 단량체는 링커에 의해 공유적으로 결합되는, 조작된 TL1A 리간드.
A7. 실시 형태 A6에 있어서, 상기 링커는 펩티드 링커인, 조작된 TL1A 리간드.
A8. 실시 형태 A7에 있어서, 상기 링커는 Gly-Ser의 아미노산 서열 또는 이의 다수의 반복부를 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
A9. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A8 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역인, 조작된 TL1A 리간드.
A10. 실시 형태 A9에 있어서, 상기 비공유적 TL1A 삼량체 또는 상기 scTL1A 삼량체는 상기 Fc 영역의 C-말단에 융합되는, 조작된 TL1A 리간드.
A11. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A10 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A12. 실시 형태 A11에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 적어도 하나의 아미노산 변경을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A13. 실시 형태 A12에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
A14. 실시 형태 A13에 있어서, 상기 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경은 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택되는 변경인, 조작된 TL1A 리간드.
A15. 실시 형태 A12 내지 실시 형태 A14 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A16. 실시 형태 A12 내지 실시 형태 A15 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A17. 실시 형태 A12 내지 실시 형태 A16 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A18. 실시 형태 A12 내지 실시 형태 A17 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드:
a. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
b. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
c. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
d. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
e. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
f. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
g. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
h. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
i. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
j. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
k. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
A19. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A18 중 어느 하나에 있어서, 이중특이성 항체를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
A20. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A19 중 어느 하나에 있어서, 이종성 폴리펩티드에 융합되는, 조작된 TL1A 리간드.
A21. 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A20 중 어느 하나에 있어서, 작용제에 접합되는, 조작된 TL1A 리간드.
A22. 실시 형태 A21에 있어서, 상기 작용제는 독소인, 조작된 TL1A 리간드.
제2 세트의 실시 형태에서, 하기가 제공된다:
B1. 조작된 TL1A 리간드로서,
야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
B2. 실시 형태 B1에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
B3. 실시 형태 B1 또는 실시 형태 B2에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A에 비해 높은 단분산도 및/또는 안정성을 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
B4. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B3 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 시험관내에서 T 세포를 공동자극할 수 있는, 조작된 TL1A 리간드.
B5. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B4 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 대상체에서 T 세포를 공동자극할 수 있는, 조작된 TL1A 리간드.
B6. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B5 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 이를 필요로 하는 대상체에서 하나 이상의 사이토카인의 생성을 증가시킬 수 있는, 조작된 TL1A 리간드.
B7. 실시 형태 B6에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IFNγ 및 TNFα를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
B8. 실시 형태 B5 또는 실시 형태 B6에 있어서, 상기 대상체는 자가면역 장애 또는 암을 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
B9. 실시 형태 B8에 있어서, 상기 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, 염증성 장 질병(IBD), 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종(횡문근육종을 포함함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조작된 TL1A 리간드.
B10. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B9 중 어느 하나의 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 핵산.
B11. 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B9 중 어느 하나의 조작된 TL1A 리간드 또는 실시 형태 B10의 핵산, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
제3 세트의 실시 형태에서, 하기가 제공된다:
C1. 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법으로서,
조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 삼량체 복합체이며, 상기 삼량체 복합체는
a. 비공유적 TL1A 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체; 또는
b. 공유적으로 연결되어 단일쇄 TL1A(scTL1A) 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체를 포함하는, 방법.
C2. 실시 형태 C1에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 단백질 안정화 영역을 추가로 포함하는, 방법.
C3. 실시 형태 C2에 있어서, 상기 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 HSA 영역을 포함하는, 방법.
C4. 실시 형태 C3에 있어서, 하기를 포함하는, 실시 형태 C3의 조작된 TL1A 리간드를 포함하는 다량체성의 조작된 TL1A 리간드를 포함하는, 방법:
a. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역;
b. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역;
c. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는
d. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
C5. 실시 형태 C4에 있어서, 상기 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
a. 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역;
b. 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
c. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
d. 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는
e. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
C6. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C5 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 상기 scTL1A 삼량체를 포함하며, 여기서 상기 3개의 TL1A 단량체는 링커에 의해 공유적으로 결합되는, 방법.
C7. 실시 형태 C6에 있어서, 상기 링커는 펩티드 링커인, 방법.
C8. 실시 형태 C7에 있어서, 상기 링커는 Gly-Ser의 아미노산 서열 또는 이의 다수의 반복부를 갖는, 방법.
C9. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C8 중 어느 하나에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역인, 방법.
C10. 실시 형태 C9에 있어서, 상기 비공유적 TL1A 삼량체 또는 상기 scTL1A 삼량체는 상기 Fc 영역의 C-말단에 융합되는, 방법.
C11. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C10 중 어느 하나에 있어서, 상기 TL1A 단량체는 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251을 포함하는, 방법.
C12. 실시 형태 C11에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 적어도 하나의 아미노산 변경을 포함하는, 방법.
C13. 실시 형태 C12에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 갖는, 방법.
C14. 실시 형태 C13에 있어서, 상기 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경은 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택되는 변경인, 방법.
C15. 실시 형태 C12 내지 실시 형태 C14 중 어느 하나에 있어서, 상기 아미노산 변경은 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함하는, 방법.
C16. 실시 형태 C12 내지 실시 형태 C15 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함하는, 방법.
C17. 실시 형태 C12 내지 실시 형태 C16 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
C18. 실시 형태 C12 내지 실시 형태 C17 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
a. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
b. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
c. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
d. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
e. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
f. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
g. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
h. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
i. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
j. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
k. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
C19. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C18 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 이중특이성 항체를 포함하는, 방법.
C20. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C19 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 이종성 폴리펩티드에 융합되는, 방법.
C21. 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C20 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 작용제에 접합되는, 방법.
C22. 실시 형태 C21에 있어서, 상기 작용제는 독소인, 방법.
제4 세트의 실시 형태에서, 하기가 제공된다:
D1. 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법으로서,
조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는, 방법.
D2. 실시 형태 D1에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는, 방법.
D3. 실시 형태 D1 또는 실시 형태 D2에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A에 비해 높은 단분산도 및/또는 안정성을 갖는, 방법.
D4. 실시 형태 D1 또는 실시 형태 D2에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 시험관내에서 T 세포를 공동자극할 수 있는, 방법.
D5. 실시 형태 D1 또는 실시 형태 D2에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 상기 대상체에서 T 세포를 공동자극할 수 있는, 방법.
D6. 실시 형태 D1 내지 실시 형태 D5 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 이를 필요로 하는 대상체에서 하나 이상의 사이토카인의 생성을 증가시킬 수 있는, 방법.
D7. 실시 형태 D6에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IFNγ 및 TNFα를 포함하는, 방법.
D8. 실시 형태 D1 내지 실시 형태 D4 중 어느 하나에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 자가면역 장애 또는 암인, 방법.
D9. 실시 형태 D8에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 궤양성 결장염, 루푸스, 염증성 장 질병(IBD), 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종(횡문근육종을 포함함)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
제5 세트의 실시 형태에서, 하기가 제공된다:
E1. 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법으로서,
(i) K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 아미노산 서열의 적어도 하나의 아미노산 변경을 도입시키는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 (ii) 조작된 TL1A 리간드의 집단을 생성하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 방법.
E2. 실시 형태 E1에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드를 이종성 폴리펩티드에 융합하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
E3. 실시 형태 E2에 있어서, 상기 이종성 폴리펩티드는 단백질 안정화 영역을 포함하는, 방법.
E4. 실시 형태 E3에 있어서, 상기 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 HSA 영역을 포함하는, 방법.
E5. 실시 형태 E4에 있어서, 다량체성의 조작된 TL1A 리간드를 생성하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
E6. 실시 형태 E5에 있어서, 상기 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
a. 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역;
b. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역;
c. scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는
d. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
E7. 실시 형태 E6에 있어서, 상기 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
a. 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역;
b. 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
c. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
d. 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는
e. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
E8. 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E7 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
E9. 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E8 중 어느 하나에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
a. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
b. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
c. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
d. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
e. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
f. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
g. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
h. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
i. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
j. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
k. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
E10. 요법에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A22, 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B11, 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C22, 실시 형태 D1 내지 실시 형태 D9, 및 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E9 중 어느 하나의 조작된 TL1A 리간드.
E11. 자가면역 장애 또는 암의 치료에 사용하기 위한, 실시 형태 A1 내지 실시 형태 A22, 실시 형태 B1 내지 실시 형태 B11, 실시 형태 C1 내지 실시 형태 C22, 실시 형태 D1 내지 실시 형태 D9, 및 실시 형태 E1 내지 실시 형태 E9 중 어느 하나의 조작된 TL1A 리간드.
E12. 실시 형태 E11에 있어서, 상기 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, IBD, COPD, 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 선택적으로 상기 육종은 횡문근육종인, 상기 사용을 위한, 조작된 TL1A 리간드.
실시예
실시예 1. 재조합 TL1A 리간드의 생성: His- scTL1A , Fc - scTL1A , 및 HSA -scTL1A
TNFSF 리간드는 일반적으로 하류 신호전달을 유도하는 데 그들의 동종 수용체와의 상호작용의 3:3 화학량론을 필요로 한다. 치료제로서의 TL1A 리간드를 개발하기 위하여, 젤리롤 접힘을 형성하는 TNF 상동성 도메인을 포함하는 C-말단 세포외 도메인(즉, 잔기 72 내지 251)에 초점을 두고서, 조작된 TL1A 리간드를 생성하였다(도 1a, 도 1b). 젤리롤 접힘은 비구조화된 루프에 의해 연결된 두 세트의 5개의 β-시트로 구성된다(도 1b). 천연 비공유적 상호작용을 통해 삼량체화되거나 또는 링커 펩티드(예를 들어, Gly-Ser 링커)를 사용하여 단일쇄(sc)로서 삼량체화되도록 TL1A 리간드를 설계하였다(도 1c, 도 1d, 도 1e). 각 포맷을 그의 발현 수준, 단분산도, 결합 활성, 및 T 세포를 활성화하는 능력에 대해 평가하였다. His-TL1A를 1:2의 DNA 몰비로 Fc-TL1A로 공동-형질감염시킴으로써 Fc + His-TL1A 분자(서열 번호 92)를 생성하였으며, 원하는 생성물을 단백질 A 및 Ni-NTA 탠덤 친화성 크로마토그래피로 정제하였다.
가용성 TL1A(도 1c)는 짧은 혈청 반감기를 가질 것으로 예상되기 때문에, 짧은 혈청 반감기를 증가시키기 위하여, 리간드를 또한 IgG1 Fc 또는 HSA(각각 도 1d 및 도 1e)에 융합하였다.
간략하게 말하면, TL1A 작제물 및 변이체를 인간 코돈 사용에 대해 최적화하고, 포유류 발현 벡터 내로 클로닝하였다. 작제물을 Expi293 세포(Thermo) 내로 형질감염시키고, 제조자의 프로토콜에 따라 발현시켰다. 단백질을 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피(His-TL1A 및 HSA-TL1A)에 의해 또는 mAbSelect SuRe(GE Healthcare Life Sciences)(Fc-TL1A)에 의해, 제조자의 프로토콜에 따라 정제하였다.
발현 및 초기 친화성 포획 후, 단백질을 분취용 겔 여과에 의해 정제하고, 각 분자의 목표 종들의 상대 집단을 정량화하였다. 분취용 겔-여과를 Sepax SRT-C SEC-300 컬럼(Sepax Technologies, Inc.)을 사용하여 수행하였다. 20 mM 인산나트륨(pH 6.8)으로 이루어진 완충액 중에서 겔-여과를 수행하였다.
분자 설계는 Fc/HSA:TL1A 삼량체의 화학량론에 영향을 주었는데, Fc 융합의 경우에는, Fc:TL1A 삼량체의 비가 3:2가 되도록 하였으며(도 1d, 좌측), Fc-scTL1A의 경우에는, 그 비가 1:2가 되도록 하였으며(도 1d, 가운데), Fc-TL1A + TL1A 단량체의 조합의 경우에는, 그 비가 1:1이 되도록 하였다(도 1d, 우측). HSA-TL1A의 경우에는, HSA 대 TL1A의 비가 3:1이었으며(도 1e, 좌측), HSA-scTL1A의 경우에는, 그 비가 1:1이었다(도 1e, 우측).
지시된 TL1A 작제물의 분취용 겔-투과 분석의 예시적인 결과가 도 2a에 나타나 있다. 삼량체 vs. 올리고머의 집단을 보여주기 위해 대조군으로서 재조합 TNF α(His-scTNFα)를 사용하였다. 결과가 표 1에 요약되어 있으며, 이는 % 고분자량 종(% HMW 종), % 목표 종(즉, 단량체, 이량체, 삼량체, 또는 육량체), 및 % 저분자량 종(% LMW 종)을 보여준다.
결과는, TL1A 하위단위가 링커 펩티드와 융합되지 않은 모든 작제물이 고수준의 목표 이탈 저분자량(LMW) 종을 나타내었지만, 하위단위 계면은 소수성 잔기로 주로 구성되고 (PDB ID 2RE9를 기준으로) > 4,000 Å2를 포함함을 나타낸다. 단일쇄 scTL1A 작제물, His-scTL1A, Fc-scTL1A, 및 HSA-scTL1A의 비교는, 각각이 70% 초과의 목표 올리고머의 목표 종임을 가졌으며, 이때 Fc- 및 HSA-scTL1A는 대략 80% 목표 올리고머를 나타내었음을 보여주었다(표 1).
[표 1]
Figure pct00001
기능성 시험을 위하여 95% 초과의 목표 올리고머까지 겔-여과에 의해 분자를 정제하였다. 분취용 겔-투과 정제를 수행하여 원하는 올리고머 종을 단리한 후의 지시된 TL1A 작제물의 분석용 SEC 분석의 예시적인 결과가 도 2b에 나타나 있다. 정제된 종을 기능 검정에 사용하였다.
실시예 2. 재조합 TL1A 리간드의 DR3 수용체 결합
ELISA 검정을 사용하여, 각 TL1A 리간드를 재조합 DR3 수용체에 결합하는 능력에 대해 시험하였다.
모든 ELISA-기반 측정치를 3회 반복하여 수집하였으며, 오차값은 측정치들 사이의 표준 오차를 보고한다. 이량체이고 MW가 약 92 kDa인 재조합 DR3-Fc(R&D Systems, cat. # 943-D3)를 플레이트(Nunc Maxisorp, cat. # 436110) 상에 비특이적으로 고정화시켰는데, 이는 96웰 White Maxisorp 플레이트(Nunc, cat. # 436110) 상에 10 ㎍/mL로 희석된 100 μL의 DR3-Fc로 수행하였다(하룻밤, 4℃). 플레이트를 250 μl/웰의 카제인 완충액을 사용하여 실온에서 1시간 동안 차단하고, 차단 완충액을 제거하였다. 50 μL의 TL1A 변이체를 96웰 White Maxisorp 플레이트(Nunc, cat. #: 436110) 상에서 웰당, 20160623에 대한 플레이트 맵 설명에 따라 각 웰에 걸쳐 3배로 희석시키면서, 25 ㎍/mL로 StartingBlock PBS(Thermo Fisher Scientific) 중에 희석시켰다(4℃에서 하룻밤).
TL1A 변이체 농도를 분자당 TL1A 삼량체의 몰수에 대해 정규화하였는데, 그 이유는, 삼량체 형태가 DR3 결합을 위한 기능성 단위이기 때문이다. 이는 각 포맷의 TL1A 삼량체에 대한 결합 활성의 비교를 가능하게 하였으며, 이에 따라 2개의 TL1A 삼량체(Fc-TL1A 또는 Fc-scTL1A)를 갖는 분자가 단일 TL1A 삼량체(His-TL1A, His-scTL1A, Fc-TL1A+His-TL1A, HSA-TL1A 및 HSA-scTL1A)를 갖는 분자에 비해 결합력(binding avidity)의 증가를 나타낼 것인지의 여부에 대한 평가를 가능하게 하였다(도 1c, 도 1d 및 도 1e). 예를 들어, 한 분자의 His-TL1A는 1개의 TL1A 삼량체를 함유하고, 이에 따라 25 ㎍/mL의 TL1W2(서열 번호 20)는 376 nM TL1A 삼량체를 함유한다. 역으로, TL1W14(서열 번호 87)는 분자당 2개의 TL1A 삼량체를 함유하고, 상이한 분자량을 갖는다. 따라서, 25 ㎍/mL의 TL1W14는 290 nM이다. 따라서, 376 nM은 32.4 ㎍/mL와 동등하다.
플레이트를 TBST로 3회 세척하였다. 100 μl/웰의 다중클론 토끼 항-인간 TL1A-비오틴 항체(Starting Block PBS 중에 1:1000으로 희석됨)를 첨가하고, 플레이트를 150 rpm으로 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. TL1A-비오틴 항체를 제거하고, 100 μl/웰의 스트렙타비딘-HRP 접합체(Starting Block PBS 중에 1:10,000으로 희석됨)를 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 150 rpm으로 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 TBST로 3회 세척하였다. 100 μl/웰의 POD 화학발광 기질(Roche, cat. #: 11582950001)을, 100 ms의 지연 설정으로 Molecular Devices M5 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트 발광을 판독하기 직전에 첨가하였다.
DR3에 결합할 수 있는 지시된 TL1A 리간드의 능력의 ELISA 분석의 예시적인 결과가 도 2c에 나타나 있으며, EC50 값이 표 2에 요약되어 있다. "N.B."는 '결합 없음(no binding)'을 나타낸다. 결과는 대부분의 TL1A 작제물이, 고정화된 DR3에 결합하기 위한 EC50이 대략 24 nM을 나타내었음을 보여준다. HSA-scTL1A 분자는 168 nM의 EC50으로 더 약하게 결합되었는데, 이는 이 분자의 구조가 TL1A에 대한 결합을 방해하였음을 시사한다.
TL1A 분자가 역전된 포맷으로 DR3에 결합할 수 있다는 것을 확인하기 위하여, TL1A 분자를 고정화하고, DR3을 전술된 바와 같이 적정하였다. 예시적인 결과가 도 2d 및 표 2에 나타나 있다. 이 포맷에서, 이들 분자는 결합에 대해 대략 3 내지 7배 더 긴밀한 EC50 값을 나타내었지만, HSA-scTL1A 및 His-scTL1A 분자를 포함한 몇몇 작제물은 유의하게 결합하는 데 실패하였다. 따라서, 고정화된 DR3을 추가의 ELISA 분석을 위해 사용하였다.
2개의 HSA-TL1A 단백질(서열 번호 84 및 85)은 양쪽 포맷에서 유의하게 더 약한 결합을 나타내었는데, 이는 HSA-융합 파트너가, 수용체에 결합할 수 있는 TL1A 모이어티의 능력을 억제하였을 수 있음을 시사한다(도 2d). 추가적으로, His-scTL1A 분자(서열 번호 86)는 다른 분자보다 대략 3배 더 약한 EC50을 가졌다. 음성 대조군으로서, scTNFα는 DR3에 대한 유의한 결합을 나타내지 않았다는 것을 보여주었다.
[표 2]
Figure pct00002
실시예 3. T 세포 공동자극 및 사이토카인 생성 및 생체내 T 세포 활성화
T 세포 활성화 검정을 사용하여, T 세포를 공동자극하고 사이토카인 생성으로 이어지게 할 수 있는 능력에 대해 TL1A 작제물을 평가하였다. 96웰 U-바닥 조직 배양 플레이트(Midwest Scientific, cat. # TP92097)를 4℃에서 하룻밤 PBS 중 10 ng/ml의 항-CD3(BioLegend, cat. # 317304, 클론 OKT3)으로 코팅하였다. 이어서, 플레이트를 완전 RPMI 배지(RPMI + 10% FBS)로 3회 세척하였다. Pan T 세포를 음성 선택(Miltenyi Biotec, cat. # 130-096-535)을 사용하여 말초 혈액 단핵 세포로부터 단리하였다. 30,000개의 Pan T 세포를 항-CD3 사전-코팅된 96웰 U-바닥 플레이트의 각 웰에서 플레이팅하였다. 조작된 TL1A 리간드 및/또는 0.1 ㎍/mL의 항-CD28(BioLegend, cat. # 302914)을 적절한 웰에 첨가하였다. T 세포 활성화에 대한 DcR3-매개 억제를 평가하기 위해, 재조합 DcR3 단백질(R&D cat. # 142-DC-100)을, TL1A 리간드와 함께 또는 이것 없이, 항-CD3 자극된 T 세포에 30 nM의 최종 농도로 첨가하였다.
MSD 전기화학발광 사이토카인 검정(Meso Scale Discovery)을 사용하여 사이토카인 생성을 측정하였다. 간략하게 말하면, U-PLEX TH1 TH2 사이토카인 플레이트(Meso Scale Discovery, cat. # K15010B-2)를 4℃에서 하룻밤 25 μl의 세포 배양 상층액으로 코팅하였다. 플레이트를 0.05% Tween 20을 함유하는 PBS(PBST)로 3회 세척하였다. 항-인간 Fc 검출 시약을 진탕하면서 실온에서 1시간 동안 2 ㎍/ml의 최종 농도로 적용하였다. 플레이트를 PBST로 3회 세척하고, 150 μl의 2X 판독 완충액을 플레이트에 첨가하고, MSD 기기 상에서 데이터를 수집하였다. 제조자의 프로토콜에 따라 표준 곡선을 작성하였다. 원시 데이터를 MSD Discovery Workbench에서 처리하고, GraphPad Prism 8 소프트웨어에서 불러오기하였다. 데이터를 분석하고, 3개의 별개의 실험 결과에 기초하여 플롯팅하였으며, GraphPad Prism 8 프로그램에서 통계량을 생성하였다.
CD3-활성화 T 세포의 IFNγ 및 TNFα 생성을 유도할 수 있는 지시된 TL1A 작제물의 능력에 대한 예시적인 결과가 각각 도 2e 및 도 2f에 나타나 있다. 막대는, 좌측으로 우측으로, 0, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100 및 300 nM의 TL1A 리간드 농도를 나타낸다. 항-CD3 항체(OKT3, Biolegend cat. # 317301)의 부재 하에서, 예상된 바와 같이 T 세포 수용체 자극의 결여로 인해, TL1A 분자는 T 세포를 자극할 수 없었다(도 2e 및 도 2f). 준최적(sub-optimal) 항-CD3 항체 농도(0.01 또는 0.1 ㎍/ml)의 존재 하에서, T 세포는 TL1A 분자에 의해 자극되어, 용량-의존적 방식으로 IFNγ 및 TNFα를 생성할 수 있었다.
결과는 DR3에 대해 단지 약한 결합만을 나타낸 HSA-TL1A 분자(도 2c 및 도 2d)가 마찬가지로 나머지 다른 TL1A 작제물에 비해 가장 약한 공동자극 활성을 나타내었음을 보여준다. His-TL1A 분자는 약간의 공동자극 활성을 나타내었지만, 3개의 Fc-태그된 TL1A 분자는 T 세포를 공동자극하여 사이코카인을 생성할 수 있는 최고의 능력을 나타내었다. 3개의 모든 Fc-TL1A 포맷은 T 세포를 공동자극할 수 있었지만(도 2e 및 도 2f), Fc-scTL1A가 가장 일관된 T 세포 공동자극 기능 및 유리한 단분산도를 나타내었다(표 1).
생체내 마우스 모델에서 T 세포를 공동자극하여 사이토카인을 생성할 수 있는 능력에 대해 TL1A 작제물을 평가하였다. 항-마우스 CD3 항체(2 ㎍/마우스)(BioXCell, cat. # BE0001-1FAB)의 준최적 용량을 C57BL/6 마우스 내로 정맥내 주사하였다. Fc-TL1A W3 또는 Fc-scTL1A W14(마우스당 30 ㎍)를 복막내 주사하였다. Fc-TL1A W3(마우스당 100 ㎍)을 또한 항-마우스 CD3 자극의 부재 하에서 마우스에 복막내 주사하였다(도 3). 마우스를 6시간 후에 채혈하였다. 혈청을 수집하고 동결시켰다. 동결된 혈청을 해동시키고, 마우스 IFNγ ELISA(Invitrogen, cat. # 88-8314-86)를 위하여 1:10으로 희석시켰다. 간략하게 말하면, Nunc MaxiSorp 96웰 플레이트를 4℃에서 하룻밤 포획 항체로 사전-코팅하였다. 플레이트를 세척하고, 이어서 실온에서 1시간 동안 ELISA 희석제로 차단하였다. 플레이트를 세척 완충액으로 세척하였다. 희석된 샘플을 플레이트 내로 로딩하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척 완충액으로 3 내지 5회 세척하였다. 희석된 검출 항체를 각 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하고, 세척하였다. 희석된 스트렙타비딘-HRP 검출 시약을 첨가하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하고, 세척하였다. TMB 기질 용액(테트라메틸 벤지딘)을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 정지 용액을 각 웰에 첨가하였다. 플레이트를 SpectraMax ELISA 플레이트 판독기(Molecular Devices)에서 판독하였다.
결과는, 항-CD3 항체 또는 Fc-TL1A 중 어느 하나의 단독으로의 처리는 T 세포 활성화에 대해 효과를 갖지 않은 반면, Fc-TL1A 또는 Fc-scTL1A 중 어느 하나와 병용된 항-CD3 항체에 의한 처리는, 상승된 수준의 혈청 IFNγ에 의해 결정되는 바와 같이, 유사한 수준의 T 세포 활성화를 가져왔다는 것을 나타낸다(도 3).
실시예 4. 단분산도의 최적화
Fc-scTL1A 분자는 치료제 개발에 대한 가장 유리한 특성을 나타내었기는 하지만, 이 재조합 단백질은 대략 20% 올리고머였으며; 이에 따라 분자의 단분산도를 최적화하였다. 일부 TNFSF 리간드는 2개의 시스테인 잔기를 함유하며, 이들 시스테인 잔기는 막-원위 CD와 EF 루프 사이에 하위단위내 이황화물 결합을 형성하지만, 용매 노출되고 용액 중에서 반응성일 수 있다.
도 4a는 TL1A의 3개의 하위단위를 나타내는 (PDB ID 2RE9로부터 변형된) TL1A 삼량체의 결정 구조를 도시한다. 1개의 하위단위는 전경에 굵은선으로 나타나 있는 반면, 나머지 다른 2개의 하위단위는 배경에 담회색 표면으로서 나타나 있다. DR3 결합의 유지에 중요한 C162-C202 이황화물 결합의 위치는 화살표로 표시되어 있다.
분석용 크기-배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여, 고분자량 종이 이들 시스테인 잔기에 의한 부적절한 분자간 이황화물 결합에 의해 매개되었는지의 여부를 결정하였다. Fc-scTL1A(서열 번호 87)에 대한 예시적인 결과가 도 4b에 나타나 있다. 20 mM DTT에 의한 환원 후에, Fc-scTL1A 분자에서의 고분자량 종의 집단이 22%에서 10% 미만까지 감소되었는데, 이는 부적절한 분자간 이황화물 결합이 고분자량 종에 대한 큰 원인이었음을 시사한다.
C162 및 C202 잔기를 변경시키고, ELISA 분석을 사용하여, DR3에 결합할 수 있는 C162/C202 돌연변이체의 능력을 결정하였다. 놀랍게도, C162, C202 또는 두 시스테인 모두의 세린, 류신, 또는 알라닌 중 어느 하나로의 돌연변이는 DR3에 대한 결합의 완전한 손실을 가져왔다(도 4c).
시스테인 돌연변이체를 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 DcR3 결합의 유지에 대해 시험하였다. 간략하게 말하면, 염소 항-인간-Fc를 수직 채널 L1 내지 L6 상에 아세트산염 완충액(pH 5.0) 중 30 ㎍/ml로 고정화하였다. DR3 및 DcR3을 5 또는 1 ㎍/mL로 고정화하였다. 간접 포획 포맷 또는 고정화 포맷의 경우, 원하는 절대 리간드 수준은 50 내지 200개의 공명 단위(RU)의 최종 분석물 결합 신호를 생성할 수 있는 범위였다. BSA를 비결합(non-binding) 분석물 대조군으로서 사용하였다. 전개 완충액으로서 PBST(1X DPBS, 0.005% Tween)를 사용하여, 25℃에서 실험을 수행하였다. 14개의 TL1A 변이체 각각에 대한 koff 스크리닝을 먼저 1 μM에서 수행하여, 필요한 최적의 포획 수준, 분석물 농도, 및 해리 시간을 평가하였다. 각 변이체를 DcR3 포획된 4개의 상이한 리간드 농도에 걸쳐 3배 연속 희석물로 0.1 μM에서 분석하였다. 원시 데이터를 처리하고, ProteOn Manager 소프트웨어(BioRad, 버전 3.1.0.6)에서 분석하였다. kon, koff 및 RUmax를 그룹화하고 굴절 지수(RI)를 0으로 일정하게 유지함으로써 속도론적 분석을 행하였다. 카이-제곱(Chi2) 값을 사용하여 적합화(fit)의 품질을 평가하였다. 임의적인 범위가 "우수한", "허용가능한", "최적에 미치지 못하는" 및 "불량한" 품질로 적합화에 대해 정의되었다. DR3에 대한 약한 결합 및 DcR3에 대한 2상 결합으로 인해, 데이터는 단지 정성적으로만 평가되었다.
결과는, TL1W32(Y188A)는 DcR3에 대한 가장 강한 결합을 가진 반면, TL1W34(C162S, C202S)가 또한 강한 결합을 보여주었으며, TL1W35(C202S) 및 TL1W37(L123E)은 더 약한 결합을 가졌음을 나타낸다(도 4d, 우측 패널). SPR-기반 결합 분석은 C162S, C202S TL1A 변이체가 단지 DcR3에만 결합할 수 있고 DR3에는 결합할 수 없었음을 확인시켜 주었다(도 4d, 각각 우측 패널 및 좌측 패널). 이들 데이터는 시스테인 잔기 그 자체가 DR3에 결합하는 데에는 관여하였지만 DcR3에는 그렇지 않았거나, 이황화물 결합은 단지 DR3에 결합하는 데에만 요구되는 구조적 입체형태에 필요하였음을 시사하였다.
이들 2개의 시스테인 잔기는 DR3에 결합하는 데 필요한 것으로 밝혀졌기 때문에, 다음으로, Fc-scTL1A의 정제 동안 산화환원 접근법을 사용함으로써 고분자량(HMW) 종이 방지될 수 있는지의 여부를 결정하였다. 비환원성 완충액 중에서의 단백질 A 정제 후(흑색 트레이스), 1 X PBS 중에서의 산화환원 후(암회색 트레이스), 및 저염 완충액 중에서의 산화환원 후(담회색 트레이스)의 Fc-scTL1A(TL1W14; 서열 번호 87)의 분석용 SEC 분석의 예시적인 결과가 도 4e에 나타나 있다.
Fc-scTL1A와 20 mM DTT의 인큐베이션 후 1 X PBS 내로의 투석은 대략 70% HMW 종을 생성하였는데, 이는 분자간 상호작용이 오로지 이황화물 결합에만 기인하지 않았음을 시사한다(도 4e, "1 X PBS 중에서의 산화환원"). 따라서, TL1A가 분자간 이황화물 결합의 형성에 유리한 일시적인 비공유적 상호작용을 형성할 수 있다면, 이들 상호작용은 완충액 조건을 변화시킴으로써 억제될 수 있다. (추가의 NaCl 없이) 단지 20 mM 인산나트륨(pH 6.8)만으로 이루어진 완충액 중에서의 산화환원은 SEC-정제된 물질과 동일한 결합 특성을 보유한 대략 90% 목표 이량체 종을 생성하였다(도 4e 및 도 4f, "저염 중에서의 산화환원").
실시예 5. 용액 X-선 산란
삼량체 계면은 TL1A 삼량체의 단량체 하위단위들에 대한 긴밀한 결합 부위를 나타낼 것으로 여겨졌지만, scTL1A 포맷에서의 개별 TL1A 하위단위들은 다른 TL1A 분자로부터의 하위단위들 또는 인접한 Fc 하위단위 상의 TL1A 분자로부터의 하위단위들과 트랜스로 쌍을 형성할 수 있었다. 후자를 해결하기 위하여, 용액 X-선 산란에 의해 Fc-scTL1A의 저분해능 구조 모델을 결정하였다.
간략하게 말하면, 산란 데이터 수집을 20-℃에서 X-선 공급원에서 수행하였다. Fc-scTL1A 샘플을 20-mM HEPES HCl(pH 6.5), 100-mM NaCl 중에서 분석하였다. 방사선 손상을 제한하기 위하여, 노출 동안 큐벳 내부에서 샘플을 연속적으로 진동시켰다. 상이한 농도(3, 6, 또는 12 mg/mL)의 각 샘플로부터 독립적인 측정치를 수집하여, 농도의 함수로서 각도 0에서의 산란 강도의 선형 의존성을 확인하여 응집의 결여를 보장하였다. 데이터 정규화, 용매 차감 및 기니어 분석을 BioXTAS RAW 소프트웨어를 사용하여 행하였다. ATSAS 소프트웨어 스위트를 사용하여 데이터 분석을 수행하였으며, 이에는 거리 분포 함수 P(r)를 계산하는 데 사용되는 프로그램 GNOM(문헌[Otwinowski and Minor, 1997]), 및 형상 결정을 위한 자동 비드 모델링에 사용되는 DAMMIF(문헌[Franke and Svergun, 2009])가 포함된다. Fc-scTL1A의 모델을 생성하기 위하여, 2배 대칭 제약을 부과하였으며, 이는 노이즈를 감소시킴으로써 더 신뢰성 있는 포락선(envelope)을 생성한다(문헌[Blanchet and Svergun, 2013]). 각 샘플에 대해, DAMMIF를 사용하여 계산된 5개의 독립적인 형상 모델을, DAMAVER를 사용하여 평균하여 최종 아브 이니티오 포락선을 생성하였다. Chimera를 사용하여 표면 렌딩(rending)을 행하였다(문헌[Pettersen et al., 2004]).
용액 X-선 산란에 의해 결정된 바와 같이, Fc-scTL1A의 저분해능 구조 모델의 예시적인 결과가 도 4g, 도 7a 내지 도 7d, 및 표 3에 나타나 있다. 재작성된 분자 포락선은 2개의 TL1A 모이어티가 이 구조에서 서로 멀어지는 쪽으로 벌어지고 하위단위들을 가로지르는 쌍형성은 가능성이 낮았음을 시사한다. 추가적으로, 3개의 농도(3, 6, 및 12 mg/mL)에 걸친 산란 곡선의 일관성은 이 분자가 농도-의존적 응집을 겪지 않았음을 시사하였다.
[표 3]
Figure pct00003
실시예 6. 조작된 TL1A 리간드의 설계 및 선택성에 대한 시험
T 세포의 TL1A-매개 공동자극은 순환 DcR3에 의해 생체내에서 감쇠될 수 있다. TL1A 리간드를 조작하여, DR3에 대한 결합은 보유하지만 DcR3에 의해서는 결합되지 않을 TL1A의 변이체를 생성하였다.
DcR3와의 상호작용을 조절하도록 TL1A에서 돌연변이가 이루어질 수 있다. 구체적으로는, E120A, E122A, L123A, G124D, Y188F, K240A, E241A, D242A, 및 K243A의 돌연변이가 DcR3과의 상호작용을 파괴하는 것으로 밝혀져 있지만, DR3 결합에 대한 이들 돌연변이의 효과는 시험되지 않았다(문헌[Zhan et al., 2009]). DR3과 DcR3의 시스테인-풍부 도메인이 구조적으로 유사하지만(도 5a 및 도 5b), 이들은 단지 26% 서열 동일성만을 공유하는데, 이는 TL1A 변이체에 의한 차등적인 결합에 대한 가능성을 제시한다.
MOE의 단백질 모델링 구성요소를 사용하여 DR3의 모델을 생성하였다(2016.08; Chemical Computing Group, Inc., 캐나다 퀘벡주 몬트리올 소재). DR3의 서열(Uniprot ID O95407) 및 DcR3(PDB ID 3K51)에 결합된 TL1A의 구조(문헌[Zhan et al., 2011])를 입력으로서 사용하여, 돌연변이생성을 유도할 DR3에 결합된 TL1A를 모델링하였다.
TL1A 내의 몇몇 잔기는 DR3에 비해 DcR3과 유의하게 상이한 접촉을 형성하는 것으로 나타났으며, 이들이 돌연변이생성을 위해 선택되었다(도 5b, 원으로 표시된 잔기). TL1A와 DR3 사이의 측쇄 상호작용을 최적화하도록 그리고 동시에 DcR3과의 상호작용을 파괴하도록 돌연변이의 정체를 선택하였다.
TL1A의 변이체를 생성하고, 기재된 바와 같이 ELISA에 의해 DR3 및 DcR3에 대한 결합에 대해 시험하였다. DR3 및 DcR3의 예시적인 결과가 각각 도 5c 및 도 5d에 나타나 있으며, 결과가 표 4에 요약되어 있다.
His-TL1A 포맷으로 시험된 83개의 변이체 중에서, 몇몇은 DR3에 대한 결합은 보유하거나 향상시키고 DcR3에 대한 결합은 파괴하였다(표 4, 각각 도 5c 및 도 5d, 및 각각 도 8a 및 도 10b). 구체적으로는, L123, Y188, 또는 E241의 돌연변이는 양쪽 실험에서 DcR3에 대한 결합을 유의하게 파괴한 것으로 밝혀졌다. 비-항체 생물학적 제제는 종종 글리코실화의 불균질성(heterogeneity)을 나타내는데, 이는 임상 배치(clinical batch)의 특성화에 대한 어려움을 제시한다. 또한, 글리코실화가 DR3에 대한 TL1A 결합에 관여하는지의 여부를 평가하도록 돌연변이체를 설계하였다. TL1A에서의 N133Q의 돌연변이는 용해도 또는 발현에 있어서의 뚜렷한 변화 없이 DR3에 대한 결합 친화도를 유지할 수 있었지만 N229Q는 그렇지 않았다(도 8c).
[표 4]
Figure pct00004
Figure pct00005
Fc-scTL1A 포맷의 조합 돌연변이체를 생성하기 위해 7개의 TL1A 단일 점 돌연변이를 선택하고, ELISA에 의해 DR3 또는 DcR3에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다(도 5c 및 도 5d). 이들 조합 돌연변이체를 DR3 및 DcR3에 대한 결합에 대해 시험하였다(각각 도 5e 및 도 5f). 예시적인 결과가 표 5에 요약되어 있다. 유리한 조합 돌연변이체를, 야생형 TL1A와 대비하여 비견되거나 향상된 DR3에 대한 결합(상대 EC50 < 1)을 갖고 DcR3에 대한 더 약한 결합(상대 EC50 > 1)을 갖는 것으로서 특성화하였다. 시험된 조합 돌연변이체는 (야생형 TL1A와 대비하여) DR3에 대한 유사한 결합을 유지하면서 DcR3에 대한 유의한 결합을 나타내지 않았으며, 단, K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F 변이체(서열 번호 88)는 예외였는데, 이들은 약간 감소된 DR3 결합을 나타내었다(도 5e). K111A, L123K, Q167A, S187L, E190F, N207F 돌연변이를 포함하는 Fc-scTL1A-AKALFF 변이체(서열 번호 91)는, DR3에 대한 결합에 대해서는 EC50 값이 9.0 ± 2.7 nM이었고, DcR3에 대해서는 검출가능한 결합이 없었다(표 5).
이들 결과는 TL1A의 안정성, 단분산도, 및 특이성을 향상시키는 개별 변형들이 조합되어 치료적으로 실행가능한 분자를 생성할 수 있음을 시사하였다. 실제로, Fc-scTL1A-AKALFF 변이체(서열 번호 91)는 (야생형 TL1A와 대비하여) DR3에 대한 동일한 결합을 나타내었지만, DcR3에 대해서는 유의한 결합을 나타내지 않았다.
[표 5]
Figure pct00006
실시예 7. TL1A 변이체에 의해 매개된 T 세포 공동자극
TL1A 변이체 Fc-scTL1A-AKALFF, Fc-scTL1A K111A, L123K, Q167A, S187L, E190F, N207F(서열 번호 91)를, T 세포를 공동자극하고 DcR3-매개 경쟁에 저항할 수 있는 능력에 대해 평가하였다(도 6a). 실시예 3에 기재된 바와 같이 MSD 전기화학발광 사이토카인 검정을 사용하여 사이토카인 생성을 측정하였다. 외인성 가용성 DcR3의 존재 하에서 또는 부재 하에서 CD-3 활성화 T 세포를 공동자극할 수 있는 이러한 조작된 TL1A 변이체 Fc-scTL1A-AKALFF의 능력의 시험관내 분석의 예시적인 결과가 도 6b에 나타나 있다. 결과는 결합 특이성이 T 세포 활성화 검정에서 재현되었음을 나타내는데, 여기서는 외인성 DcR3의 첨가가 단지 Fc-scTL1A(도 3, 서열 번호 87)에 의해서만 T 세포 활성화를 억제할 수 있었으며, Fc-scTL1A-AKALFF(서열 번호 91)에 의해서는 그렇지 않았다(도 6b). 이는, AKALFF 돌연변이가 DR3에 대한 결합에 영향을 주지 않고서 DcR3에 대한 결합을 소실시켰음을 보여주는 결합 데이터와 일치하였다(표 5).
이들 조사결과는, 조작된 TL1A 리간드는 항원-미감작(
Figure pct00007
) T 세포 및 항원-경험된(antigen-experienced) T 세포 둘 모두에 대해, 그리고 심지어는 탈진된 T 세포에 대해서도 공동자극 기능을 가졌음을 시사한다. 더욱이, 조작된 TL1A 리간드는 항-PD1 관문 억제제와 병용될 때 효과적인 공동자극제였는데, 이는 그들의 치료적 잠재력을 입증한다.
서열
예시적인 서열이 하기에 제공된다.
TL1W81 (His-TEV-TL1A K111S) 아미노산 서열 (서열 번호 1)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFSNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W83 (His-TEV-TL1A E120K) 아미노산 서열 (서열 번호 2)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWKHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W84 (His-TEV-TL1A E120H) 아미노산 서열 (서열 번호 3)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWHHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W40 (His-TEV-TL1A L123S) 아미노산 서열 (서열 번호 4)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHESGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W85 (His-TEV-TL1A G124S) 아미노산 서열 (서열 번호 5)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELSLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W86 (His-TEV-TL1A G124K) 아미노산 서열 (서열 번호 6)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELKLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W89 (His-TEV-TL1A R156Y) 아미노산 서열 (서열 번호 7)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFYGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W92 (His-TEV-TL1A M158Y) 아미노산 서열 (서열 번호 8)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W97 (His-TEV-TL1A K173S) 아미노산 서열 (서열 번호 9)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNSPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W98 (His-TEV-TL1A K173R) 아미노산 서열 (서열 번호 10)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNRPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W107 (His-TEV-TL1A D186Y) 아미노산 서열 (서열 번호 11)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTYSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W113 (His-TEV-TL1A P189S) 아미노산 서열 (서열 번호 12)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYSEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W28 (His-TEV-hTL1A 72-251 E190G) 아미노산 서열 (서열 번호 13)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPGPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W45 (His-TEV-TL1A E190F) 아미노산 서열 (서열 번호 14)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W123 (His-TEV-TL1A N207S) 아미노산 서열 (서열 번호 15)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSSWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W126 (His-TEV-TL1A F209W) 아미노산 서열 (서열 번호 16)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWWQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W46 (His-TEV-TL1A T239W) 아미노산 서열 (서열 번호 17)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYWKEDKTFFGAFLL
TL1W137 (His-TEV-TL1A K240S) 아미노산 서열 (서열 번호 18)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTSEDKTFFGAFLL
TL1W139 (His-TEV-TL1A E241Q) 아미노산 서열 (서열 번호 19)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKQDKTFFGAFLL
TL1W2 (His-TEV-hTL1A 72-251) 아미노산 서열 (서열 번호 20)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W47 (His-TEV-TL1A E241A) 아미노산 서열 (서열 번호 21)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKADKTFFGAFLL
TL1W136 (His-TEV-TL1A K240F) 아미노산 서열 (서열 번호 22)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTFEDKTFFGAFLL
TL1W138 (His-TEV-TL1A K240D) 아미노산 서열 (서열 번호 23)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTDEDKTFFGAFLL
TL1W135 (His-TEV-TL1A K240A) 아미노산 서열 (서열 번호 24)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTAEDKTFFGAFLL
TL1W134 (His-TEV-TL1A T239K) 아미노산 서열 (서열 번호 25)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYKKEDKTFFGAFLL
TL1W133 (His-TEV-TL1A T239F) 아미노산 서열 (서열 번호 26)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYFKEDKTFFGAFLL
TL1W27 (His-TEV-hTL1A 72-251 T239E) 아미노산 서열 (서열 번호 27)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYEKEDKTFFGAFLL
TL1W132 (His-TEV-TL1A T239A) 아미노산 서열 (서열 번호 28)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYAKEDKTFFGAFLL
TL1W128 (His-TEV-TL1A Y238S) 아미노산 서열 (서열 번호 29)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDSTKEDKTFFGAFLL
TL1W130 (His-TEV-TL1A Y238R) 아미노산 서열 (서열 번호 30)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDRTKEDKTFFGAFLL
TL1W129 (His-TEV-TL1A Y238K) 아미노산 서열 (서열 번호 31)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDKTKEDKTFFGAFLL
TL1W131 (His-TEV-TL1A Y238E) 아미노산 서열 (서열 번호 32)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDETKEDKTFFGAFLL
TL1W127 (His-TEV-TL1A Y238A) 아미노산 서열 (서열 번호 33)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDATKEDKTFFGAFLL
TL1W24 (His-TEV-hTL1A 72-251 F209A) 아미노산 서열 (서열 번호 34)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWAQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W124 (His-TEV-TL1A N207K) 아미노산 서열 (서열 번호 35)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSKWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W122 (His-TEV-TL1A N207F) 아미노산 서열 (서열 번호 36)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W125 (His-TEV-TL1A N207E) 아미노산 서열 (서열 번호 37)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSEWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W25 (His-TEV-hTL1A 72-251 N207A) 아미노산 서열 (서열 번호 38)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSAWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W120 (His-TEV-TL1A S206K) 아미노산 서열 (서열 번호 39)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGKNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W119 (His-TEV-TL1A S206F) 아미노산 서열 (서열 번호 40)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGFNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W121 (His-TEV-TL1A S206E) 아미노산 서열 (서열 번호 41)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGENWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W118 (His-TEV-TL1A S206A) 아미노산 서열 (서열 번호 42)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGANWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W116 (His-TEV-TL1A T192K) 아미노산 서열 (서열 번호 43)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPKQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W115 (His-TEV-TL1A T192F) 아미노산 서열 (서열 번호 44)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPFQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W117 (His-TEV-TL1A T192E) 아미노산 서열 (서열 번호 45)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPEQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W114 (His-TEV-TL1A T192A) 아미노산 서열 (서열 번호 46)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPAQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W44 (His-TEV-TL1A P189K) 아미노산 서열 (서열 번호 47)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYKEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W112 (His-TEV-TL1A P189F) 아미노산 서열 (서열 번호 48)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYFEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W29 (His-TEV-hTL1A 72-251 P189A) 아미노산 서열 (서열 번호 49)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYAEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W43 (His-TEV-TL1A Y188S) 아미노산 서열 (서열 번호 50)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSSPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W32 (His-TEV-hTL1A 72-251 Y188A) 아미노산 서열 (서열 번호 51)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSAPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W109 (His-TEV-TL1A S187L) 아미노산 서열 (서열 번호 52)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W110 (His-TEV-TL1A S187K) 아미노산 서열 (서열 번호 53)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDKYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W111 (His-TEV-TL1A S187D) 아미노산 서열 (서열 번호 54)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDDYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W108 (His-TEV-TL1A S187A) 아미노산 서열 (서열 번호 55)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDAYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W105 (His-TEV-TL1A T185N) 아미노산 서열 (서열 번호 56)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVNDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W104 (His-TEV-TL1A T185L) 아미노산 서열 (서열 번호 57)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVLDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W106 (His-TEV-TL1A T185D) 아미노산 서열 (서열 번호 58)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVDDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W103 (His-TEV-TL1A T185A) 아미노산 서열 (서열 번호 59)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVADSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W101 (His-TEV-TL1A S176N) 아미노산 서열 (서열 번호 60)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDNITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W100 (His-TEV-TL1A S176L) 아미노산 서열 (서열 번호 61)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDLITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W102 (His-TEV-TL1A S176K) 아미노산 서열 (서열 번호 62)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDKITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W99 (His-TEV-TL1A S176A) 아미노산 서열 (서열 번호 63)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDAITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W96 (His-TEV-TL1A R170E) 아미노산 서열 (서열 번호 64)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGEPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W95 (His-TEV-TL1A Q167A) 아미노산 서열 (서열 번호 65)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W93 (His-TEV-TL1A M158K) 아미노산 서열 (서열 번호 66)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGKTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W94 (His-TEV-TL1A M158E) 아미노산 서열 (서열 번호 67)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGETSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W90 (His-TEV-TL1A R156K) 아미노산 서열 (서열 번호 68)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFKGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W91 (His-TEV-TL1A R156E) 아미노산 서열 (서열 번호 69)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFEGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W88 (His-TEV-TL1A R156A) 아미노산 서열 (서열 번호 70)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFAGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W87 (His-TEV-TL1A G124D) 아미노산 서열 (서열 번호 71)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELDLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W38 (His-TEV-TL1A L123K) 아미노산 서열 (서열 번호 72)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W39 (His-TEV-TL1A L123G) 아미노산 서열 (서열 번호 73)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHEGGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W37 (His-TEV-TL1A L123E) 아미노산 서열 (서열 번호 74)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHEEGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W41 (His-TEV-TL1A E120A) 아미노산 서열 (서열 번호 75)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWAHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W42 (His-TEV-TL1A F114A) 아미노산 서열 (서열 번호 76)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQAPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W30 (His-TEV-hTL1A 72-251 N112E) 아미노산 서열 (서열 번호 77)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKEQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W82 (His-TEV-TL1A K111E) 아미노산 서열 (서열 번호 78)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFENQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W80 (His-TEV-TL1A K111A) 아미노산 서열 (서열 번호 79)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W31 (GD: Single chain MMB in CBIS; His-TEV-hTL1A 72-251 R103Q) 아미노산 서열 (서열 번호 80)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVQQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W78 (His-TEV-TL1A R103H) 아미노산 서열 (서열 번호 81)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVHQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W79 (His-TEV-TL1A R103E) 아미노산 서열 (서열 번호 82)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVEQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W33 (His-TEV-hTL1A 72-251 R103A) 아미노산 서열 (서열 번호 83)
HHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVAQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W15 (GD: CBIS에서의 단일쇄 단백질 -> HSA C-말단 융합체; His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A) 아미노산 서열 (서열 번호 84)
HHHHHHENLYFQGDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W9 (GD: CBIS에서의 단일쇄 단백질 -> HSA C-말단 융합체; His-TEV-G-HSA (C34S)-2(G4S)-TL1A) 아미노산 서열 (서열 번호 85)
HHHHHHENLYFQGDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGGSGGGGSLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W19 (His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A) 아미노산 서열 (서열 번호 86)
HHHHHHENLYFQGAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W14 (CD4 HC sp prim_transcript를 갖는 Fc-scTL1A) 아미노산 서열 (서열 번호 87)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W329 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F) 아미노산 서열 (서열 번호 88)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W327 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F) 아미노산 서열 (서열 번호 89)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W328 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F) 아미노산 서열 (서열 번호 90)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGYTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPEPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W331 (Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F) 아미노산 서열 (서열 번호 91)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLGGGSGGGSGGGSVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFANQFPALHWEHEKGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRAAGRPNKPDSITVVITKVTDLYPFPTQLLMGTKSVCEVGSFWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W61 (Fc-TL1A+His-TL1A) 아미노산 서열 (서열 번호 92)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLLHHHHHHENLYFQGLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W3 (GD: CBIS에서의 Fc 융합체 -> 동종이량체 Fc 융합체; GS-huIgG1 Fc - 2(G4S)-hTL1A 72-251) 아미노산 서열 (서열 번호 93)
GSCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGGGGGSLKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
hTL1A (1-251) 아미노산 서열 (서열 번호 94)
MAEDLGLSFGETASVEMLPEHGSCRPKARSSSARWALTCCLVLLPFLAGLTTYLLVSQLRAQGEACVQFQALKGQEFAPSHQQVYAPLRADGDKPRAHLTVVRQTPTQHFKNQFPALHWEHELGLAFTKNRMNYTNKFLLIPESGDYFIYSQVTFRGMTSECSEIRQAGRPNKPDSITVVITKVTDSYPEPTQLLMGTKSVCEVGSNWFQPIYLGAMFSLQEGDKLMVNVSDISLVDYTKEDKTFFGAFLL
TL1W81 (His-TEV-TL1A K111S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 95)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAGCAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W83 (His-TEV-TL1A E120K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 96)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGAAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W84 (His-TEV-TL1A E120H) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 97)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGCACCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W40 (His-TEV-TL1A L123S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 98)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGTCGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W85 (His-TEV-TL1A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 99)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGAGCCTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W86 (His-TEV-TL1A G124K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 100)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGAAGCTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W89 (His-TEV-TL1A R156Y) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 101)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCTACGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W92 (His-TEV-TL1A M158Y) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 102)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCTACACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W97 (His-TEV-TL1A K173S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 103)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAGCCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W98 (His-TEV-TL1A K173R) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 104)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATCGGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W107 (His-TEV-TL1A D186Y) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 105)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCTACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W113 (His-TEV-TL1A P189S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 106)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACAGCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W28 (His-TEV-hTL1A 72-251 E190G) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 107)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGGCCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W45 (His-TEV-TL1A E190F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 108)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCTTTCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W123 (His-TEV-TL1A N207S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 109)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAGCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W126 (His-TEV-TL1A F209W) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 110)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTGGCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W46 (His-TEV-TL1A T239W) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 111)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACTGGAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W137 (His-TEV-TL1A K240S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 112)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAGCGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W139 (His-TEV-TL1A E241Q) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 113)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGCAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W2 (His-TEV-hTL1A 72-251) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 114)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W47 (His-TEV-TL1A E241A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 115)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGCGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W136 (His-TEV-TL1A K240F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 116)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCTTCGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W138 (His-TEV-TL1A K240D) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 117)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCGACGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W135 (His-TEV-TL1A K240A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 118)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCGCCGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W134 (His-TEV-TL1A T239K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 119)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACAAGAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W133 (His-TEV-TL1A T239F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 120)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACTTCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W27 (His-TEV-hTL1A 72-251 T239E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 121)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACGAAAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W132 (His-TEV-TL1A T239A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 122)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACGCCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W128 (His-TEV-TL1A Y238S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 123)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATAGCACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W130 (His-TEV-TL1A Y238R) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 124)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATCGGACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W129 (His-TEV-TL1A Y238K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 125)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATAAGACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W131 (His-TEV-TL1A Y238E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 126)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATGAGACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W127 (His-TEV-TL1A Y238A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 127)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATGCCACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W24 (His-TEV-hTL1A 72-251 F209A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 128)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGGCCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W124 (His-TEV-TL1A N207K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 129)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAAGTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W122 (His-TEV-TL1A N207F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 130)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCTTCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W125 (His-TEV-TL1A N207E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 131)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCGAGTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W25 (His-TEV-hTL1A 72-251 N207A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 132)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCGCCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W120 (His-TEV-TL1A S206K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 133)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAAGAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W119 (His-TEV-TL1A S206F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 134)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCTTCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W121 (His-TEV-TL1A S206E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 135)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCGAGAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W118 (His-TEV-TL1A S206A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 136)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCGCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W116 (His-TEV-TL1A T192K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 137)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCAAGCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W115 (His-TEV-TL1A T192F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 138)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCTTCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W117 (His-TEV-TL1A T192E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 139)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCGAGCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W114 (His-TEV-TL1A T192A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 140)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCGCCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W44 (His-TEV-TL1A P189K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 141)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACAAAGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W112 (His-TEV-TL1A P189F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 142)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACTTCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W29 (His-TEV-hTL1A 72-251 P189A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 143)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACGCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W43 (His-TEV-TL1A Y188S) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 144)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTCCCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W32 (His-TEV-hTL1A 72-251 Y188A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 145)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCGCCCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W109 (His-TEV-TL1A S187L) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 146)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACCTCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W110 (His-TEV-TL1A S187K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 147)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAAGTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W111 (His-TEV-TL1A S187D) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 148)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACGACTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W108 (His-TEV-TL1A S187A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 149)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACGCCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W105 (His-TEV-TL1A T185N) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 150)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGAACGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W104 (His-TEV-TL1A T185L) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 151)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGCTCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W106 (His-TEV-TL1A T185D) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 152)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGGACGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W103 (His-TEV-TL1A T185A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 153)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGGCCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W101 (His-TEV-TL1A S176N) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 154)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACAACATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W100 (His-TEV-TL1A S176L) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 155)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACCTCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W102 (His-TEV-TL1A S176K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 156)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACAAGATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W99 (His-TEV-TL1A S176A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 157)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACGCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W96 (His-TEV-TL1A R170E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 158)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAGAGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W95 (His-TEV-TL1A Q167A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 159)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W93 (His-TEV-TL1A M158K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 160)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCAAGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W94 (His-TEV-TL1A M158E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 161)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCGAGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W90 (His-TEV-TL1A R156K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 162)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAAGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W91 (His-TEV-TL1A R156E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 163)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCGAGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W88 (His-TEV-TL1A R156A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 164)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCGCCGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W87 (His-TEV-TL1A G124D) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 165)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGACCTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W38 (His-TEV-TL1A L123K) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 166)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGAAGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W39 (His-TEV-TL1A L123G) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 167)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGGGGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W37 (His-TEV-TL1A L123E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 168)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGGAGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W41 (His-TEV-TL1A E120A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 169)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGCGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W42 (His-TEV-TL1A F114A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 170)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGGCTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W30 (His-TEV-hTL1A 72-251 N112E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 171)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGGAACAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W82 (His-TEV-TL1A K111E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 172)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCGAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W80 (His-TEV-TL1A K111A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 173)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W31 (GD: CBIS에서의 단일쇄 MMB; His-TEV-hTL1A 72-251 R103Q) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 174)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGCAACAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W78 (His-TEV-TL1A R103H) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 175)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGCACCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W79 (His-TEV-TL1A R103E) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 176)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGGAGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W33 (His-TEV-hTL1A 72-251 R103A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 177)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGGCCCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W15 (GD: CBIS에서의 단일쇄 단백질 -> HSA C-말단 융합체; His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 178)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTGATGCTCACAAGTCCGAGGTGGCTCACAGGTTTAAAGACCTCGGCGAGGAGAACTTCAAGGCCCTCGTCCTGATTGCTTTCGCTCAGTACCTGCAGCAGTCCCCCTTCGAGGACCATGTCAAGCTGGTGAATGAGGTGACAGAATTCGCCAAGACCTGTGTGGCTGACGAATCCGCTGAGAACTGCGACAAGTCCCTGCACACCCTGTTCGGCGATAAACTGTGCACAGTGGCTACCCTCAGAGAAACCTATGGCGAAATGGCCGACTGTTGCGCCAAGCAAGAGCCCGAGAGGAACGAATGCTTCCTCCAGCACAAGGATGACAATCCTAACCTGCCCAGACTGGTGAGACCCGAGGTGGATGTCATGTGCACAGCCTTCCACGATAACGAGGAGACATTCCTGAAGAAATATCTCTATGAAATCGCCAGGAGGCATCCCTACTTCTATGCCCCCGAGCTGCTCTTCTTCGCCAAGAGGTATAAAGCCGCTTTCACCGAGTGCTGCCAGGCTGCCGACAAGGCCGCTTGTCTGCTGCCCAAGCTGGACGAGCTGAGGGACGAGGGAAAGGCTAGCTCCGCTAAGCAGAGACTGAAGTGCGCCAGCCTGCAGAAATTCGGAGAAAGGGCCTTCAAGGCCTGGGCCGTGGCTAGGCTGAGCCAGAGATTTCCTAAGGCCGAGTTTGCCGAAGTGAGCAAGCTGGTGACCGACCTAACAAAGGTCCACACAGAATGTTGCCACGGCGACCTGCTGGAGTGCGCCGATGATAGGGCCGATCTGGCCAAATACATCTGTGAGAACCAAGACTCCATCTCCTCCAAGCTGAAGGAGTGTTGCGAGAAGCCTCTGCTCGAGAAGAGCCACTGCATCGCTGAAGTCGAGAACGACGAGATGCCTGCCGATCTCCCCTCCCTGGCCGCCGATTTCGTGGAATCCAAGGACGTCTGTAAGAACTACGCCGAGGCCAAGGATGTGTTCCTGGGAATGTTCCTGTACGAGTACGCTAGGAGGCACCCTGACTATAGCGTGGTGCTCCTCCTGAGGCTGGCCAAGACATATGAGACCACCCTGGAAAAGTGCTGCGCCGCTGCCGATCCCCATGAGTGCTATGCCAAGGTCTTCGACGAGTTTAAGCCCCTGGTGGAAGAGCCCCAGAACCTGATCAAACAGAACTGTGAGCTGTTCGAGCAGCTCGGAGAGTACAAGTTCCAGAATGCCCTCCTCGTGAGGTACACAAAGAAGGTCCCCCAGGTCTCCACACCTACCCTGGTGGAGGTCTCCAGAAACCTGGGCAAGGTGGGATCCAAGTGCTGCAAGCATCCTGAGGCCAAAAGAATGCCCTGTGCTGAGGATTACCTGAGCGTGGTCCTGAATCAGCTGTGCGTGCTGCATGAAAAAACCCCCGTCTCCGATAGGGTCACAAAGTGCTGCACCGAGAGCCTGGTGAATAGAAGGCCCTGTTTCTCCGCCCTGGAGGTGGACGAAACCTATGTCCCCAAAGAGTTCAACGCTGAAACATTTACCTTCCACGCTGACATTTGCACCCTGAGCGAGAAGGAGAGGCAGATCAAGAAGCAGACAGCTCTCGTGGAGCTCGTGAAGCACAAACCTAAAGCCACAAAGGAGCAACTGAAGGCCGTCATGGACGACTTTGCCGCTTTCGTCGAGAAGTGCTGTAAGGCCGACGACAAGGAGACATGTTTCGCCGAGGAGGGAAAGAAGCTGGTCGCTGCTAGCCAAGCTGCCCTGGGCCTGGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCAAGAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAACTGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCATGACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGACAAGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATAGCTATCCTGAACCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCAACTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTAAGAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGCTGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCATGACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGACAGGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACTCCTACCCCGAACCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCAAAAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGCTGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGAATGACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGACAGGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W9 (GD: CBIS에서의 단일쇄 단백질 -> HSA C-말단 융합체; His-TEV-G-HSA (C34S)-2(G4S)-TL1A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 179)
CATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTGATGCTCACAAGTCCGAGGTGGCTCACAGGTTTAAAGACCTCGGCGAGGAGAACTTCAAGGCCCTCGTCCTGATTGCTTTCGCTCAGTACCTGCAGCAGTCCCCCTTCGAGGACCATGTCAAGCTGGTGAATGAGGTGACAGAATTCGCCAAGACCTGTGTGGCTGACGAATCCGCTGAGAACTGCGACAAGTCCCTGCACACCCTGTTCGGCGATAAACTGTGCACAGTGGCTACCCTCAGAGAAACCTATGGCGAAATGGCCGACTGTTGCGCCAAGCAAGAGCCCGAGAGGAACGAATGCTTCCTCCAGCACAAGGATGACAATCCTAACCTGCCCAGACTGGTGAGACCCGAGGTGGATGTCATGTGCACAGCCTTCCACGATAACGAGGAGACATTCCTGAAGAAATATCTCTATGAAATCGCCAGGAGGCATCCCTACTTCTATGCCCCCGAGCTGCTCTTCTTCGCCAAGAGGTATAAAGCCGCTTTCACCGAGTGCTGCCAGGCTGCCGACAAGGCCGCTTGTCTGCTGCCCAAGCTGGACGAGCTGAGGGACGAGGGAAAGGCTAGCTCCGCTAAGCAGAGACTGAAGTGCGCCAGCCTGCAGAAATTCGGAGAAAGGGCCTTCAAGGCCTGGGCCGTGGCTAGGCTGAGCCAGAGATTTCCTAAGGCCGAGTTTGCCGAAGTGAGCAAGCTGGTGACCGACCTGACAAAGGTCCACACAGAATGTTGCCACGGCGACCTGCTGGAGTGCGCCGATGATAGGGCCGATCTGGCCAAATACATCTGTGAGAACCAAGACTCCATCTCCTCCAAGCTGAAGGAGTGTTGCGAGAAGCCTCTGCTCGAGAAGAGCCACTGCATCGCTGAAGTCGAGAACGACGAGATGCCTGCCGATCTCCCCTCCCTGGCCGCCGATTTCGTGGAATCCAAGGACGTCTGTAAGAACTACGCCGAGGCCAAGGATGTGTTCCTGGGAATGTTCCTGTACGAGTACGCTAGGAGGCACCCTGACTATAGCGTGGTGCTCCTCCTGAGGCTGGCCAAGACATATGAGACCACCCTGGAAAAGTGCTGCGCCGCTGCCGATCCCCATGAGTGCTATGCCAAGGTCTTCGACGAGTTTAAGCCCCTGGTGGAAGAGCCCCAGAACCTGATCAAACAGAACTGTGAGCTGTTCGAGCAGCTCGGAGAGTACAAGTTCCAGAATGCCCTCCTCGTGAGGTACACAAAGAAGGTCCCCCAGGTCTCCACACCTACCCTGGTGGAGGTCTCCAGAAACCTGGGCAAGGTGGGATCCAAGTGCTGCAAGCATCCTGAGGCCAAAAGAATGCCCTGTGCTGAGGATTACCTGAGCGTGGTCCTGAATCAGCTGTGCGTGCTGCATGAAAAGACCCCCGTCTCCGATAGGGTCACAAAGTGCTGCACCGAGAGCCTGGTGAATAGAAGGCCCTGTTTCTCCGCCCTGGAGGTGGACGAAACCTATGTCCCCAAAGAGTTCAACGCTGAAACATTTACCTTCCACGCTGACATTTGCACCCTGAGCGAGAAGGAGAGGCAGATCAAGAAGCAGACAGCTCTCGTGGAGCTCGTGAAGCACAAACCTAAAGCCACAAAGGAGCAACTGAAGGCCGTCATGGACGACTTTGCCGCTTTCGTCGAGAAGTGCTGTAAGGCCGACGACAAGGAGACATGTTTCGCCGAGGAGGGAAAGAAGCTGGTCGCTGCTAGCCAAGCTGCCCTGGGCCTGGGAGGAGGAGGAAGCGGCGGAGGAGGATCCCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W19 (His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 180)
CATCATCATCACCACCACGAGAATCTCTATTTTCAGGGCGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCTAGAGCCCACCTGACAGTGGTGAGACAAACCCCTACACAGCACTTCAAAAATCAGTTCCCTGCCCTGCACTGGGAACATGAGCTGGGCCTGGCCTTCACCAAGAACAGGATGAATTACACAAATAAGTTCCTGCTCATCCCTGAGTCCGGCGACTACTTCATCTATAGCCAAGTGACCTTCAGAGGCATGACCAGCGAGTGCTCCGAGATCAGGCAGGCTGGAAGACCTAACAAGCCCGATAGCATCACCGTGGTGATTACAAAGGTGACAGACAGCTATCCCGAGCCCACACAGCTGCTCATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTCGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTTAGCCTGCAGGAAGGAGATAAGCTGATGGTCAATGTCTCCGATATCTCCCTGGTGGATTACACCAAGGAGGACAAAACCTTCTTCGGCGCTTTTCTGCTGGCCCCTCTCAGGGCCGATGGAGATAAACCCAGGGCTCACCTGACAGTCGTCAGGCAGACCCCTACACAACACTTCAAGAATCAATTCCCCGCCCTGCATTGGGAGCACGAACTGGGCCTGGCCTTCACAAAAAATAGGATGAACTATACCAACAAATTCCTGCTGATCCCTGAATCCGGCGATTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGAGGCATGACCAGCGAATGCAGCGAAATCAGACAAGCTGGCAGACCCAACAAACCCGACAGCATTACCGTGGTCATCACCAAGGTCACAGATAGCTACCCCGAACCCACACAGCTCCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTCGGCAGCAATTGGTTCCAGCCTATCTATCTGGGCGCCATGTTTAGCCTGCAAGAGGGAGACAAACTGATGGTGAATGTGTCCGACATCTCCCTGGTGGATTACACCAAAGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTGGCTCCTCTGAGGGCTGACGGCGACAAGCCCAGAGCTCACCTGACCGTCGTGAGGCAAACCCCTACCCAGCACTTTAAGAACCAGTTTCCCGCCCTGCACTGGGAGCATGAGCTGGGCCTGGCCTTTACCAAAAACAGAATGAACTACACCAACAAGTTTCTGCTGATCCCCGAAAGCGGCGACTATTTTATCTATAGCCAGGTGACCTTTAGAGGCATGACCAGCGAGTGTAGCGAGATTAGACAGGCTGGCAGGCCTAACAAGCCTGACAGCATCACCGTGGTGATCACCAAAGTGACCGACTCCTACCCCGAGCCCACCCAACTGCTCATGGGCACAAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTTCAACCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAAGAAGGAGACAAGCTCATGGTCAATGTGAGCGACATCAGCCTGGTGGACTATACCAAAGAAGACAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTG
TL1W14 (CD4 HC sp prim_transcript를 갖는 Fc-scTL1A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 181)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCAAGAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAACTGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCATGACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGACAAGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATAGCTATCCTGAACCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCAACTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTAAGAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGCTGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCATGACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGACAGGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACTCCTACCCCGAACCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCAAAAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGCTGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGAATGACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGACAGGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W329 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 182)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCTACACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATAGCTATCCTTTCCCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCTTCTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCTACACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACTCCTACCCCTTCCCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGATACACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACAGCTACCCCTTCCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W327 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 183)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCTACACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATCTGTATCCTTTCCCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCAACTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCTACACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACCTGTACCCCTTCCCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGATACACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACCTGTACCCCTTCCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCAATTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W328 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 184)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCTACACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATCTGTATCCTGAACCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCTTCTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCTACACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACCTGTACCCCGAACCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGATACACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACCTGTACCCCGAGCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W331 (Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 185)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCGTGTATGCCCCCCTGAGAGCTGACGGAGATAAGCCTAGGGCCCACCTGACCGTCGTCAGACAGACCCCTACCCAACACTTCGCCAACCAGTTCCCCGCTCTGCACTGGGAGCACGAAAAGGGCCTGGCCTTCACAAAAAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTCCTCCTGATTCCCGAAAGCGGCGATTATTTTATCTACAGCCAGGTGACCTTTAGGGGCATGACATCCGAGTGCTCCGAGATCAGAGCCGCCGGAAGACCCAACAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTCATCACAAAGGTGACAGATCTGTATCCTTTCCCTACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGTCCGTCTGTGAGGTGGGAAGCTTCTGGTTTCAACCCATCTACCTGGGCGCTATGTTCTCCCTGCAAGAGGGCGATAAGCTGATGGTGAATGTGTCCGACATTTCCCTGGTGGATTATACCAAAGAGGACAAGACCTTCTTTGGCGCCTTTCTCCTGGGAGGAGGATCCGGCGGAGGATCCGGAGGCGGCTCCGTCTATGCCCCTCTGAGGGCTGACGGAGACAAGCCCAGGGCCCATCTGACCGTGGTGAGACAAACCCCCACCCAACACTTTGCCAACCAGTTTCCTGCTCTGCATTGGGAGCATGAGAAGGGCCTGGCCTTTACCAAAAATAGGATGAACTATACCAATAAGTTCCTGCTGATCCCCGAGTCCGGAGACTACTTTATCTATTCCCAGGTCACCTTCAGGGGCATGACCTCCGAGTGCAGCGAGATTAGAGCCGCCGGCAGACCCAATAAACCCGACAGCATCACCGTCGTGATCACCAAAGTGACAGACCTGTACCCCTTCCCTACACAACTCCTGATGGGCACCAAAAGCGTGTGCGAAGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCTATGTTTAGCCTGCAAGAAGGCGATAAACTGATGGTCAACGTGTCCGACATCAGCCTGGTCGACTACACAAAAGAGGATAAGACCTTCTTCGGAGCCTTTCTGCTCGGAGGAGGATCCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGCAGCGTCTACGCCCCCCTGAGAGCTGATGGCGATAAACCTAGAGCCCATCTGACAGTGGTGAGACAGACCCCCACCCAGCATTTCGCCAACCAGTTTCCCGCCCTGCATTGGGAACACGAGAAGGGACTGGCCTTCACCAAAAACAGGATGAATTATACCAACAAATTTCTGCTGATCCCCGAATCCGGCGATTACTTCATCTACAGCCAAGTGACCTTCAGGGGAATGACCTCCGAATGTTCCGAAATCAGAGCCGCTGGCAGGCCCAACAAACCCGATTCCATCACCGTGGTGATCACCAAGGTGACCGACCTGTACCCCTTCCCTACCCAACTGCTGATGGGAACCAAGAGCGTGTGTGAGGTGGGCTCCTTCTGGTTCCAGCCCATCTATCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGAGACAAACTGATGGTGAACGTGTCCGATATCTCCCTCGTCGACTACACCAAGGAGGATAAAACCTTTTTCGGCGCCTTCCTGCTC
TL1W61 (Fc-TL1A+His-TL1A) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 186)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTGCATCATCACCACCATCACGAGAACCTGTACTTCCAAGGTCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
TL1W3 (GD: CBIS에서의 Fc 융합체 -> 동종이량체 Fc 융합체; GS-huIgG1 Fc - 2(G4S)-hTL1A 72-251) 뉴클레오티드 서열 (서열 번호 187)
GGATCCTGTCCTCCCTGCCCTGCTCCTGAACTCCTGGGCGGACCCAGCGTGTTTCTGTTCCCCCCCAAACCTAAAGACACACTGATGATTAGCAGAACCCCCGAGGTCACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCACGAGGATCCCGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCACAACGCCAAAACCAAGCCCAGGGAAGAGCAGTACAACTCCACCTACAGGGTCGTGAGCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGAAAGGAGTACAAGTGTAAGGTCAGCAACAAGGCTCTGCCTGCCCCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCTAGGGAACCCCAGGTGTACACACTGCCCCCTTCCAGGGAGGAGATGACCAAAAACCAGGTCAGCCTGACATGCCTGGTGAAAGGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAATGGGAGTCCAACGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCCCCCGTGCTGGACTCCGACGGTTCTTTTTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTCGACAAGAGCAGGTGGCAACAGGGCAACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAAGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCCCCTGGCGGAGGAGGAGGAAGCCTCAAGGGCCAGGAGTTCGCTCCCTCCCATCAGCAGGTGTACGCTCCCCTGAGAGCCGATGGCGATAAGCCCAGAGCCCACCTGACCGTCGTGAGGCAGACCCCCACCCAGCACTTCAAGAACCAGTTTCCCGCCCTCCACTGGGAGCACGAGCTGGGACTGGCCTTTACCAAGAACAGAATGAATTACACCAACAAGTTTCTGCTCATCCCCGAGAGCGGAGACTACTTCATCTACTCCCAGGTGACCTTCAGGGGCATGACAAGCGAGTGCAGCGAGATCAGACAGGCCGGAAGGCCTAATAAGCCCGACTCCATCACAGTGGTGATCACAAAGGTGACCGACAGCTACCCCGAGCCCACCCAGCTGCTGATGGGCACCAAGAGCGTGTGCGAAGTGGGCAGCAACTGGTTCCAGCCCATCTACCTGGGCGCCATGTTCAGCCTGCAGGAGGGCGACAAGCTGATGGTGAACGTGAGCGACATTTCCCTGGTCGATTACACCAAGGAGGATAAGACCTTCTTCGGCGCCTTCCTGCTG
* * * * *
당업자는 광범위한 본 발명의 개념으로부터 벗어나지 않고서 전술된 실시 형태에 변경이 이루어질 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 본 발명은 개시된 특정 실시 형태로 제한되는 것이 아니라, 본 명세서에 의해 한정되는 바와 같은 본 발명의 사상 및 범주 내의 변형들을 포함하도록 의도됨이 이해된다.
다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술에 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있거나 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 발명에 대한 상황을 제공하는 것을 목적으로 한다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.
SEQUENCE LISTING <110> JANSSEN BIOTECH, INC. <120> MATERIALS AND METHODS OF USING ENGINEERED LIGANDS <130> 14620-570-228 / JBI6385WOPCT1 <140> <141> <150> US 63/149,177 <151> 2021-02-12 <150> US 63/149,175 <151> 2021-02-12 <150> US 63/149,174 <151> 2021-02-12 <150> US 63/149,173 <151> 2021-02-12 <150> US 63/149,171 <151> 2021-02-12 <150> US 63/067,833 <151> 2020-08-19 <150> US 63/067,820 <151> 2020-08-19 <150> US 63/067,813 <151> 2020-08-19 <150> US 63/067,808 <151> 2020-08-19 <150> US 63/067,803 <151> 2020-08-19 <160> 188 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W81 (His-TEV-TL1A K111S) amino acid sequence <400> 1 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Ser Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 2 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W83 (His-TEV-TL1A E120K) amino acid sequence <400> 2 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Lys His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 3 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W84 (His-TEV-TL1A E120H) amino acid sequence <400> 3 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp His His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 4 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W40 (His-TEV-TL1A L123S) amino acid sequence <400> 4 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Ser Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 5 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W85 (His-TEV-TL1A G124S) amino acid sequence <400> 5 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Ser Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 6 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W86 (His-TEV-TL1A G124K) amino acid sequence <400> 6 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Lys Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 7 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W89 (His-TEV-TL1A R156Y) amino acid sequence <400> 7 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Tyr Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 8 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W92 (His-TEV-TL1A M158Y) amino acid sequence <400> 8 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 9 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W97 (His-TEV-TL1A K173S) amino acid sequence <400> 9 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Ser Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 10 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W98 (His-TEV-TL1A K173R) amino acid sequence <400> 10 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Arg Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 11 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W107 (His-TEV-TL1A D186Y) amino acid sequence <400> 11 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Tyr 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 12 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W113 (His-TEV-TL1A P189S) amino acid sequence <400> 12 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Ser Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 13 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W28 (His-TEV-hTL1A 72-251 E190G) amino acid sequence <400> 13 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Gly Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 14 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W45 (His-TEV-TL1A E190F) amino acid sequence <400> 14 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 15 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W123 (His-TEV-TL1A N207S) amino acid sequence <400> 15 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Ser Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 16 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W126 (His-TEV-TL1A F209W) amino acid sequence <400> 16 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Trp Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 17 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W46 (His-TEV-TL1A T239W) amino acid sequence <400> 17 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Trp Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 18 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W137 (His-TEV-TL1A K240S) amino acid sequence <400> 18 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Ser Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 19 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W139 (His-TEV-TL1A E241Q) amino acid sequence <400> 19 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Gln Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 20 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W2 (His-TEV-hTL1A 72-251) amino acid sequence <400> 20 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 21 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W47 (His-TEV-TL1A E241A) amino acid sequence <400> 21 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Ala Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 22 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W136 (His-TEV-TL1A K240F) amino acid sequence <400> 22 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Phe Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 23 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W138 (His-TEV-TL1A K240D) amino acid sequence <400> 23 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Asp Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 24 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W135 (His-TEV-TL1A K240A) amino acid sequence <400> 24 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Ala Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 25 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W134 (His-TEV-TL1A T239K) amino acid sequence <400> 25 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Lys Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 26 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W133 (His-TEV-TL1A T239F) amino acid sequence <400> 26 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Phe Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 27 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W27 (His-TEV-hTL1A 72-251 T239E) amino acid sequence <400> 27 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Glu Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 28 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W132 (His-TEV-TL1A T239A) amino acid sequence <400> 28 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Ala Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 29 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W128 (His-TEV-TL1A Y238S) amino acid sequence <400> 29 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Ser Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 30 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W130 (His-TEV-TL1A Y238R) amino acid sequence <400> 30 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Arg Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 31 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W129 (His-TEV-TL1A Y238K) amino acid sequence <400> 31 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Lys Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 32 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W131 (His-TEV-TL1A Y238E) amino acid sequence <400> 32 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Glu Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 33 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W127 (His-TEV-TL1A Y238A) amino acid sequence <400> 33 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Ala Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 34 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W24 (His-TEV-hTL1A 72-251 F209A) amino acid sequence <400> 34 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Ala Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 35 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W124 (His-TEV-TL1A N207K) amino acid sequence <400> 35 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Lys Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 36 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W122 (His-TEV-TL1A N207F) amino acid sequence <400> 36 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 37 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W125 (His-TEV-TL1A N207E) amino acid sequence <400> 37 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Glu Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 38 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W25 (His-TEV-hTL1A 72-251 N207A) amino acid sequence <400> 38 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Ala Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 39 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W120 (His-TEV-TL1A S206K) amino acid sequence <400> 39 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Lys Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 40 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W119 (His-TEV-TL1A S206F) amino acid sequence <400> 40 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Phe Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 41 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W121 (His-TEV-TL1A S206E) amino acid sequence <400> 41 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Glu Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 42 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W118 (His-TEV-TL1A S206A) amino acid sequence <400> 42 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ala Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 43 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W116 (His-TEV-TL1A T192K) amino acid sequence <400> 43 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Lys Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 44 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W115 (His-TEV-TL1A T192F) amino acid sequence <400> 44 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Phe Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 45 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W117 (His-TEV-TL1A T192E) amino acid sequence <400> 45 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Glu Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 46 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W114 (His-TEV-TL1A T192A) amino acid sequence <400> 46 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Ala Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 47 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W44 (His-TEV-TL1A P189K) amino acid sequence <400> 47 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Lys Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 48 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W112 (His-TEV-TL1A P189F) amino acid sequence <400> 48 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Phe Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 49 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W29 (His-TEV-hTL1A 72-251 P189A) amino acid sequence <400> 49 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Ala Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 50 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W43 (His-TEV-TL1A Y188S) amino acid sequence <400> 50 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Ser Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 51 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W32 (His-TEV-hTL1A 72-251 Y188A) amino acid sequence <400> 51 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Ala Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 52 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W109 (His-TEV-TL1A S187L) amino acid sequence <400> 52 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 53 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W110 (His-TEV-TL1A S187K) amino acid sequence <400> 53 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Lys Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 54 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W111 (His-TEV-TL1A S187D) amino acid sequence <400> 54 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Asp Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 55 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W108 (His-TEV-TL1A S187A) amino acid sequence <400> 55 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ala Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 56 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W105 (His-TEV-TL1A T185N) amino acid sequence <400> 56 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Asn Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 57 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W104 (His-TEV-TL1A T185L) amino acid sequence <400> 57 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Leu Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 58 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W106 (His-TEV-TL1A T185D) amino acid sequence <400> 58 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Asp Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 59 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W103 (His-TEV-TL1A T185A) amino acid sequence <400> 59 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Ala Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 60 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W101 (His-TEV-TL1A S176N) amino acid sequence <400> 60 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Asn Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 61 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W100 (His-TEV-TL1A S176L) amino acid sequence <400> 61 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Leu Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 62 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W102 (His-TEV-TL1A S176K) amino acid sequence <400> 62 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Lys Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 63 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W99 (His-TEV-TL1A S176A) amino acid sequence <400> 63 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ala Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 64 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W96 (His-TEV-TL1A R170E) amino acid sequence <400> 64 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Glu 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 65 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W95 (His-TEV-TL1A Q167A) amino acid sequence <400> 65 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 66 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W93 (His-TEV-TL1A M158K) amino acid sequence <400> 66 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Lys Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 67 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W94 (His-TEV-TL1A M158E) amino acid sequence <400> 67 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Glu Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 68 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W90 (His-TEV-TL1A R156K) amino acid sequence <400> 68 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Lys Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 69 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W91 (His-TEV-TL1A R156E) amino acid sequence <400> 69 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Glu Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 70 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W88 (His-TEV-TL1A R156A) amino acid sequence <400> 70 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Ala Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 71 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W87 (His-TEV-TL1A G124D) amino acid sequence <400> 71 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Asp Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 72 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W38 (His-TEV-TL1A L123K) amino acid sequence <400> 72 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 73 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W39 (His-TEV-TL1A L123G) amino acid sequence <400> 73 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Gly Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 74 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W37 (His-TEV-TL1A L123E) amino acid sequence <400> 74 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Glu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 75 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W41 (His-TEV-TL1A E120A) amino acid sequence <400> 75 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Ala His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 76 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W42 (His-TEV-TL1A F114A) amino acid sequence <400> 76 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Ala Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 77 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W30 (His-TEV-hTL1A 72-251 N112E) amino acid sequence <400> 77 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Glu Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 78 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W82 (His-TEV-TL1A K111E) amino acid sequence <400> 78 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Glu Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 79 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W80 (His-TEV-TL1A K111A) amino acid sequence <400> 79 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 80 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W31 (GD: Single chain MMB in CBIS; His-TEV-hTL1A 72-251 R103Q) amino acid sequence <400> 80 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Gln Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 81 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W78 (His-TEV-TL1A R103H) amino acid sequence <400> 81 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val His Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 82 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W79 (His-TEV-TL1A R103E) amino acid sequence <400> 82 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Glu Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 83 <211> 193 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W33 (His-TEV-hTL1A 72-251 R103A) amino acid sequence <400> 83 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly 1 5 10 15 Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala 20 25 30 Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Ala Gln Thr Pro 35 40 45 Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu 50 55 60 Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe 65 70 75 80 Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr 85 90 95 Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg 100 105 110 Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp 115 120 125 Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys 130 135 140 Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 145 150 155 160 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser 165 170 175 Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu 180 185 190 Leu <210> 84 <211> 1131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W15 (GD: Single chain protein in CBIS -> HSA C-terminal Fusion; His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A) amino acid sequence <400> 84 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Asp Ala His 1 5 10 15 Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe 20 25 30 Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro 35 40 45 Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys 50 55 60 Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His 65 70 75 80 Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr 85 90 95 Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn 100 105 110 Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu 115 120 125 Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu 130 135 140 Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro 145 150 155 160 Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala 165 170 175 Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu 180 185 190 Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys 195 200 205 Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe 210 215 220 Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu 225 230 235 240 Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr 245 250 255 Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp 260 265 270 Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu 275 280 285 Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala 290 295 300 Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala 305 310 315 320 Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys 325 330 335 Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro 340 345 350 Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr 355 360 365 Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala 370 375 380 Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu 385 390 395 400 Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe 405 410 415 Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser 420 425 430 Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser 435 440 445 Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp 450 455 460 Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr 465 470 475 480 Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn 485 490 495 Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro 500 505 510 Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr 515 520 525 Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu 530 535 540 Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val 545 550 555 560 Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp 565 570 575 Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser 580 585 590 Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu 595 600 605 Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln 610 615 620 Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu 625 630 635 640 His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn 645 650 655 Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln 660 665 670 Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala 675 680 685 Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val 690 695 700 Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser 705 710 715 720 Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala 725 730 735 Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp 740 745 750 Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala 755 760 765 Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val 770 775 780 Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr 785 790 795 800 Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala 805 810 815 Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met 820 825 830 Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe 835 840 845 Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu 850 855 860 Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val 865 870 875 880 Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met 885 890 895 Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile 900 905 910 Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val 915 920 925 Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr 930 935 940 Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly 945 950 955 960 Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg 965 970 975 Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn 980 985 990 Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr 995 1000 1005 Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu 1010 1015 1020 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met 1025 1030 1035 Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys 1040 1045 1050 Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr 1055 1060 1065 Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu 1070 1075 1080 Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe 1085 1090 1095 Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile 1100 1105 1110 Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala 1115 1120 1125 Phe Leu Leu 1130 <210> 85 <211> 788 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W9 (GD: Single chain protein in CBIS -> HSA C-terminal Fusion; His-TEV-G-HSA (C34S)-2(G4S)-TL1A) amino acid sequence <400> 85 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Asp Ala His 1 5 10 15 Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe 20 25 30 Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Ser Pro 35 40 45 Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys 50 55 60 Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His 65 70 75 80 Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr 85 90 95 Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn 100 105 110 Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu 115 120 125 Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu 130 135 140 Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro 145 150 155 160 Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala 165 170 175 Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu 180 185 190 Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys 195 200 205 Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe 210 215 220 Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu 225 230 235 240 Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr 245 250 255 Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp 260 265 270 Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu 275 280 285 Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala 290 295 300 Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala 305 310 315 320 Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys 325 330 335 Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro 340 345 350 Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr 355 360 365 Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala 370 375 380 Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu 385 390 395 400 Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe 405 410 415 Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser 420 425 430 Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser 435 440 445 Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp 450 455 460 Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr 465 470 475 480 Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn 485 490 495 Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro 500 505 510 Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr 515 520 525 Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu 530 535 540 Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val 545 550 555 560 Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp 565 570 575 Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser 580 585 590 Gln Ala Ala Leu Gly Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 595 600 605 Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro 610 615 620 Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg 625 630 635 640 Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp 645 650 655 Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr 660 665 670 Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser 675 680 685 Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln 690 695 700 Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys 705 710 715 720 Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys 725 730 735 Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly 740 745 750 Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser 755 760 765 Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly 770 775 780 Ala Phe Leu Leu 785 <210> 86 <211> 511 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W19 (His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A) amino acid sequence <400> 86 His His His His His His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly Ala Pro Leu 1 5 10 15 Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln 20 25 30 Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu 35 40 45 His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn 50 55 60 Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln 65 70 75 80 Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala 85 90 95 Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val 100 105 110 Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser 115 120 125 Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala 130 135 140 Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp 145 150 155 160 Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala 165 170 175 Phe Leu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His 180 185 190 Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe 195 200 205 Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn 210 215 220 Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp 225 230 235 240 Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys 245 250 255 Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr 260 265 270 Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu 275 280 285 Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln 290 295 300 Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu 305 310 315 320 Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp 325 330 335 Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly 340 345 350 Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln 355 360 365 His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly 370 375 380 Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu 385 390 395 400 Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg 405 410 415 Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn 420 425 430 Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr 435 440 445 Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val 450 455 460 Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu 465 470 475 480 Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val 485 490 495 Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 500 505 510 <210> 87 <211> 756 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W14 (Fc-scTL1A with CD4 HC sp prim_transcript) amino acid sequence <400> 87 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro 225 230 235 240 Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys 245 250 255 Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe 260 265 270 Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu 275 280 285 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr 290 295 300 Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp 305 310 315 320 Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro 325 330 335 Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn 340 345 350 Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly 355 360 365 Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 370 375 380 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser 385 390 395 400 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp 405 410 415 Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr 420 425 430 Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu 435 440 445 Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu 450 455 460 Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe 465 470 475 480 Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro 485 490 495 Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser 500 505 510 Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu 515 520 525 Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser 530 535 540 Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu 545 550 555 560 Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 565 570 575 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro 580 585 590 Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg 595 600 605 Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp 610 615 620 Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr 625 630 635 640 Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser 645 650 655 Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln 660 665 670 Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys 675 680 685 Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys 690 695 700 Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly 705 710 715 720 Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser 725 730 735 Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly 740 745 750 Ala Phe Leu Leu 755 <210> 88 <211> 756 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W329 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F) amino acid sequence <400> 88 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro 225 230 235 240 Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala 245 250 255 Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe 260 265 270 Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu 275 280 285 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr 290 295 300 Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp 305 310 315 320 Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Phe Pro 325 330 335 Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe 340 345 350 Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly 355 360 365 Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 370 375 380 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser 385 390 395 400 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp 405 410 415 Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr 420 425 430 Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys 435 440 445 Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu 450 455 460 Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe 465 470 475 480 Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro 485 490 495 Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser 500 505 510 Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu 515 520 525 Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser 530 535 540 Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu 545 550 555 560 Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 565 570 575 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro 580 585 590 Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg 595 600 605 Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp 610 615 620 Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr 625 630 635 640 Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser 645 650 655 Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala 660 665 670 Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys 675 680 685 Val Thr Asp Ser Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys 690 695 700 Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly 705 710 715 720 Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser 725 730 735 Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly 740 745 750 Ala Phe Leu Leu 755 <210> 89 <211> 756 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W327 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F) amino acid sequence <400> 89 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro 225 230 235 240 Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala 245 250 255 Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe 260 265 270 Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu 275 280 285 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr 290 295 300 Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp 305 310 315 320 Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro 325 330 335 Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn 340 345 350 Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly 355 360 365 Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 370 375 380 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser 385 390 395 400 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp 405 410 415 Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr 420 425 430 Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys 435 440 445 Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu 450 455 460 Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe 465 470 475 480 Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro 485 490 495 Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu 500 505 510 Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu 515 520 525 Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser 530 535 540 Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu 545 550 555 560 Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 565 570 575 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro 580 585 590 Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg 595 600 605 Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp 610 615 620 Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr 625 630 635 640 Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser 645 650 655 Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala 660 665 670 Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys 675 680 685 Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys 690 695 700 Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly 705 710 715 720 Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser 725 730 735 Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly 740 745 750 Ala Phe Leu Leu 755 <210> 90 <211> 756 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W328 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F) amino acid sequence <400> 90 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro 225 230 235 240 Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala 245 250 255 Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe 260 265 270 Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu 275 280 285 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr 290 295 300 Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp 305 310 315 320 Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu Tyr Pro Glu Pro 325 330 335 Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe 340 345 350 Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly 355 360 365 Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 370 375 380 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser 385 390 395 400 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp 405 410 415 Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr 420 425 430 Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys 435 440 445 Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu 450 455 460 Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe 465 470 475 480 Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro 485 490 495 Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu 500 505 510 Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu 515 520 525 Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser 530 535 540 Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu 545 550 555 560 Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 565 570 575 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro 580 585 590 Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg 595 600 605 Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp 610 615 620 Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr 625 630 635 640 Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser 645 650 655 Gln Val Thr Phe Arg Gly Tyr Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala 660 665 670 Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys 675 680 685 Val Thr Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys 690 695 700 Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly 705 710 715 720 Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser 725 730 735 Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly 740 745 750 Ala Phe Leu Leu 755 <210> 91 <211> 756 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W331 (Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F) amino acid sequence <400> 91 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro 225 230 235 240 Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala 245 250 255 Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe 260 265 270 Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu 275 280 285 Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr 290 295 300 Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp 305 310 315 320 Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro 325 330 335 Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe 340 345 350 Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly 355 360 365 Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr 370 375 380 Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu Gly Gly Gly Ser 385 390 395 400 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp 405 410 415 Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr 420 425 430 Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Lys 435 440 445 Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu 450 455 460 Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe 465 470 475 480 Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala Ala Gly Arg Pro 485 490 495 Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Leu 500 505 510 Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu 515 520 525 Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser 530 535 540 Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu 545 550 555 560 Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 565 570 575 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Val Tyr Ala Pro 580 585 590 Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg 595 600 605 Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Ala Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp 610 615 620 Glu His Glu Lys Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr 625 630 635 640 Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser 645 650 655 Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Ala 660 665 670 Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys 675 680 685 Val Thr Asp Leu Tyr Pro Phe Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys 690 695 700 Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Phe Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly 705 710 715 720 Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser 725 730 735 Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly 740 745 750 Ala Phe Leu Leu 755 <210> 92 <211> 601 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W61 (Fc-TL1A+His-TL1A) amino acid sequence <400> 92 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln 225 230 235 240 Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu 245 250 255 Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro 260 265 270 Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg 275 280 285 Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr 290 295 300 Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser 305 310 315 320 Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val 325 330 335 Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu 340 345 350 Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro 355 360 365 Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met 370 375 380 Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys 385 390 395 400 Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu His His His His His His Glu Asn 405 410 415 Leu Tyr Phe Gln Gly Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln 420 425 430 Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His 435 440 445 Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe 450 455 460 Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn 465 470 475 480 Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp 485 490 495 Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys 500 505 510 Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr 515 520 525 Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu 530 535 540 Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln 545 550 555 560 Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu 565 570 575 Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp 580 585 590 Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 595 600 <210> 93 <211> 408 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W3 (GD: Fc Fusion in CBIS -> homodimer Fc Fusion; GS-huIgG1 Fc - 2(G4S)-hTL1A 72-251) amino acid sequence <400> 93 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly 210 215 220 Gly Gly Gly Ser Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln 225 230 235 240 Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu 245 250 255 Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro 260 265 270 Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg 275 280 285 Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr 290 295 300 Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser 305 310 315 320 Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val 325 330 335 Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu 340 345 350 Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro 355 360 365 Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met 370 375 380 Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys 385 390 395 400 Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 405 <210> 94 <211> 251 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hTL1A (1-251) amino acid sequence <400> 94 Met Ala Glu Asp Leu Gly Leu Ser Phe Gly Glu Thr Ala Ser Val Glu 1 5 10 15 Met Leu Pro Glu His Gly Ser Cys Arg Pro Lys Ala Arg Ser Ser Ser 20 25 30 Ala Arg Trp Ala Leu Thr Cys Cys Leu Val Leu Leu Pro Phe Leu Ala 35 40 45 Gly Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Val Ser Gln Leu Arg Ala Gln Gly Glu 50 55 60 Ala Cys Val Gln Phe Gln Ala Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser 65 70 75 80 His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg 85 90 95 Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn 100 105 110 Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr 115 120 125 Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser 130 135 140 Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser 145 150 155 160 Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser 165 170 175 Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr 180 185 190 Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp 195 200 205 Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp 210 215 220 Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys 225 230 235 240 Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe Leu Leu 245 250 <210> 95 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W81 (His-TEV-TL1A K111S) nucleotide sequence <400> 95 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcagca accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 96 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W83 (His-TEV-TL1A E120K) nucleotide sequence <400> 96 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tggaagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 97 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W84 (His-TEV-TL1A E120H) nucleotide sequence <400> 97 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tggcaccacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 98 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W40 (His-TEV-TL1A L123S) nucleotide sequence <400> 98 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agtcgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 99 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W85 (His-TEV-TL1A) nucleotide sequence <400> 99 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgagcct ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 100 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W86 (His-TEV-TL1A G124K) nucleotide sequence <400> 100 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgaagct ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 101 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W89 (His-TEV-TL1A R156Y) nucleotide sequence <400> 101 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt ctacggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 102 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W92 (His-TEV-TL1A M158Y) nucleotide sequence <400> 102 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggctac 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 103 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W97 (His-TEV-TL1A K173S) nucleotide sequence <400> 103 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta atagccccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 104 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W98 (His-TEV-TL1A K173R) nucleotide sequence <400> 104 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta atcggcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 105 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W107 (His-TEV-TL1A D186Y) nucleotide sequence <400> 105 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac ctacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 106 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W113 (His-TEV-TL1A P189S) nucleotide sequence <400> 106 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac agcgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 107 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W28 (His-TEV-hTL1A 72-251 E190G) nucleotide sequence <400> 107 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccggcccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 108 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W45 (His-TEV-TL1A E190F) nucleotide sequence <400> 108 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac ccctttccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 109 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W123 (His-TEV-TL1A N207S) nucleotide sequence <400> 109 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcagctgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 110 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W126 (His-TEV-TL1A F209W) nucleotide sequence <400> 110 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg tggcagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 111 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W46 (His-TEV-TL1A T239W) nucleotide sequence <400> 111 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 tggaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 112 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W137 (His-TEV-TL1A K240S) nucleotide sequence <400> 112 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accagcgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 113 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W139 (His-TEV-TL1A E241Q) nucleotide sequence <400> 113 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaagcagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 114 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W2 (His-TEV-hTL1A 72-251) nucleotide sequence <400> 114 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 115 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W47 (His-TEV-TL1A E241A) nucleotide sequence <400> 115 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggcgg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 116 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W136 (His-TEV-TL1A K240F) nucleotide sequence <400> 116 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accttcgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 117 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W138 (His-TEV-TL1A K240D) nucleotide sequence <400> 117 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accgacgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 118 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W135 (His-TEV-TL1A K240A) nucleotide sequence <400> 118 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accgccgagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 119 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W134 (His-TEV-TL1A T239K) nucleotide sequence <400> 119 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 aagaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 120 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W133 (His-TEV-TL1A T239F) nucleotide sequence <400> 120 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 ttcaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 121 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W27 (His-TEV-hTL1A 72-251 T239E) nucleotide sequence <400> 121 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 gaaaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 122 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W132 (His-TEV-TL1A T239A) nucleotide sequence <400> 122 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 gccaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 123 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W128 (His-TEV-TL1A Y238S) nucleotide sequence <400> 123 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatagc 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 124 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W130 (His-TEV-TL1A Y238R) nucleotide sequence <400> 124 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatcgg 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 125 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W129 (His-TEV-TL1A Y238K) nucleotide sequence <400> 125 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgataag 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 126 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W131 (His-TEV-TL1A Y238E) nucleotide sequence <400> 126 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatgag 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 127 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W127 (His-TEV-TL1A Y238A) nucleotide sequence <400> 127 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgatgcc 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 128 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W24 (His-TEV-hTL1A 72-251 F209A) nucleotide sequence <400> 128 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg gcccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 129 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W124 (His-TEV-TL1A N207K) nucleotide sequence <400> 129 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaagtgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 130 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W122 (His-TEV-TL1A N207F) nucleotide sequence <400> 130 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcttctgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 131 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W125 (His-TEV-TL1A N207E) nucleotide sequence <400> 131 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcgagtgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 132 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W25 (His-TEV-hTL1A 72-251 N207A) nucleotide sequence <400> 132 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcgcctgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 133 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W120 (His-TEV-TL1A S206K) nucleotide sequence <400> 133 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg caagaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 134 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W119 (His-TEV-TL1A S206F) nucleotide sequence <400> 134 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cttcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 135 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W121 (His-TEV-TL1A S206E) nucleotide sequence <400> 135 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cgagaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 136 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W118 (His-TEV-TL1A S206A) nucleotide sequence <400> 136 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cgccaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 137 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W116 (His-TEV-TL1A T192K) nucleotide sequence <400> 137 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca agcagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 138 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W115 (His-TEV-TL1A T192F) nucleotide sequence <400> 138 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccct tccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 139 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W117 (His-TEV-TL1A T192E) nucleotide sequence <400> 139 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagcccg agcagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 140 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W114 (His-TEV-TL1A T192A) nucleotide sequence <400> 140 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagcccg cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 141 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W44 (His-TEV-TL1A P189K) nucleotide sequence <400> 141 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac aaagagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 142 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W112 (His-TEV-TL1A P189F) nucleotide sequence <400> 142 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac ttcgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 143 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W29 (His-TEV-hTL1A 72-251 P189A) nucleotide sequence <400> 143 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac gccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 144 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W43 (His-TEV-TL1A Y188S) nucleotide sequence <400> 144 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctcc cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 145 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W32 (His-TEV-hTL1A 72-251 Y188A) nucleotide sequence <400> 145 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagcgcc cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 146 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W109 (His-TEV-TL1A S187L) nucleotide sequence <400> 146 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacctctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 147 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W110 (His-TEV-TL1A S187K) nucleotide sequence <400> 147 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacaagtac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 148 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W111 (His-TEV-TL1A S187D) nucleotide sequence <400> 148 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacgactac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 149 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W108 (His-TEV-TL1A S187A) nucleotide sequence <400> 149 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacgcctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 150 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W105 (His-TEV-TL1A T185N) nucleotide sequence <400> 150 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgaa cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 151 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W104 (His-TEV-TL1A T185L) nucleotide sequence <400> 151 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgct cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 152 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W106 (His-TEV-TL1A T185D) nucleotide sequence <400> 152 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgga cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 153 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W103 (His-TEV-TL1A T185A) nucleotide sequence <400> 153 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtggc cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 154 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W101 (His-TEV-TL1A S176N) nucleotide sequence <400> 154 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga caacatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 155 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W100 (His-TEV-TL1A S176L) nucleotide sequence <400> 155 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga cctcatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 156 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W102 (His-TEV-TL1A S176K) nucleotide sequence <400> 156 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga caagatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 157 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W99 (His-TEV-TL1A S176A) nucleotide sequence <400> 157 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga cgccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 158 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W96 (His-TEV-TL1A R170E) nucleotide sequence <400> 158 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggagagccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 159 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W95 (His-TEV-TL1A Q167A) nucleotide sequence <400> 159 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagagccgcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 160 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W93 (His-TEV-TL1A M158K) nucleotide sequence <400> 160 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcaag 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 161 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W94 (His-TEV-TL1A M158E) nucleotide sequence <400> 161 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcgag 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 162 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W90 (His-TEV-TL1A R156K) nucleotide sequence <400> 162 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caagggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 163 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W91 (His-TEV-TL1A R156E) nucleotide sequence <400> 163 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt cgagggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 164 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W88 (His-TEV-TL1A R156A) nucleotide sequence <400> 164 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt cgccggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 165 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W87 (His-TEV-TL1A G124D) nucleotide sequence <400> 165 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctggacct ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 166 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W38 (His-TEV-TL1A L123K) nucleotide sequence <400> 166 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agaagggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 167 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W39 (His-TEV-TL1A L123G) nucleotide sequence <400> 167 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg aggggggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 168 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W37 (His-TEV-TL1A L123E) nucleotide sequence <400> 168 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg aggagggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 169 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W41 (His-TEV-TL1A E120A) nucleotide sequence <400> 169 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggcgcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 170 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W42 (His-TEV-TL1A F114A) nucleotide sequence <400> 170 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaaga accaggctcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 171 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W30 (His-TEV-hTL1A 72-251 N112E) nucleotide sequence <400> 171 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcaagg aacagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 172 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W82 (His-TEV-TL1A K111E) nucleotide sequence <400> 172 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcgaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 173 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W80 (His-TEV-TL1A K111A) nucleotide sequence <400> 173 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgaggcagac ccccacccag cacttcgcca accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 174 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W31 (GD: Single chain MMB in CBIS; His-TEV-hTL1A 72-251 R103Q) nucleotide sequence <400> 174 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgcaacagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 175 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W78 (His-TEV-TL1A R103H) nucleotide sequence <400> 175 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tgcaccagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 176 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W79 (His-TEV-TL1A R103E) nucleotide sequence <400> 176 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tggagcagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 177 <211> 579 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W33 (His-TEV-hTL1A 72-251 R103A) nucleotide sequence <400> 177 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtc tcaagggcca ggagttcgct 60 ccctcccatc agcaggtgta cgctcccctg agagccgatg gcgataagcc cagagcccac 120 ctgaccgtcg tggcccagac ccccacccag cacttcaaga accagtttcc cgccctccac 180 tgggagcacg agctgggact ggcctttacc aagaacagaa tgaattacac caacaagttt 240 ctgctcatcc ccgagagcgg agactacttc atctactccc aggtgacctt caggggcatg 300 acaagcgagt gcagcgagat cagacaggcc ggaaggccta ataagcccga ctccatcaca 360 gtggtgatca caaaggtgac cgacagctac cccgagccca cccagctgct gatgggcacc 420 aagagcgtgt gcgaagtggg cagcaactgg ttccagccca tctacctggg cgccatgttc 480 agcctgcagg agggcgacaa gctgatggtg aacgtgagcg acatttccct ggtcgattac 540 accaaggagg ataagacctt cttcggcgcc ttcctgctg 579 <210> 178 <211> 3393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W15 (GD: Single chain protein in CBIS -> HSA C-terminal Fusion; His-TEV-HSA(C34S)-G4S-TL1A-3(G3S)-TL1A-3(G3S)-TL1A) nucleotide sequence <400> 178 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtg atgctcacaa gtccgaggtg 60 gctcacaggt ttaaagacct cggcgaggag aacttcaagg ccctcgtcct gattgctttc 120 gctcagtacc tgcagcagtc ccccttcgag gaccatgtca agctggtgaa tgaggtgaca 180 gaattcgcca agacctgtgt ggctgacgaa tccgctgaga actgcgacaa gtccctgcac 240 accctgttcg gcgataaact gtgcacagtg gctaccctca gagaaaccta tggcgaaatg 300 gccgactgtt gcgccaagca agagcccgag aggaacgaat gcttcctcca gcacaaggat 360 gacaatccta acctgcccag actggtgaga cccgaggtgg atgtcatgtg cacagccttc 420 cacgataacg aggagacatt cctgaagaaa tatctctatg aaatcgccag gaggcatccc 480 tacttctatg cccccgagct gctcttcttc gccaagaggt ataaagccgc tttcaccgag 540 tgctgccagg ctgccgacaa ggccgcttgt ctgctgccca agctggacga gctgagggac 600 gagggaaagg ctagctccgc taagcagaga ctgaagtgcg ccagcctgca gaaattcgga 660 gaaagggcct tcaaggcctg ggccgtggct aggctgagcc agagatttcc taaggccgag 720 tttgccgaag tgagcaagct ggtgaccgac ctaacaaagg tccacacaga atgttgccac 780 ggcgacctgc tggagtgcgc cgatgatagg gccgatctgg ccaaatacat ctgtgagaac 840 caagactcca tctcctccaa gctgaaggag tgttgcgaga agcctctgct cgagaagagc 900 cactgcatcg ctgaagtcga gaacgacgag atgcctgccg atctcccctc cctggccgcc 960 gatttcgtgg aatccaagga cgtctgtaag aactacgccg aggccaagga tgtgttcctg 1020 ggaatgttcc tgtacgagta cgctaggagg caccctgact atagcgtggt gctcctcctg 1080 aggctggcca agacatatga gaccaccctg gaaaagtgct gcgccgctgc cgatccccat 1140 gagtgctatg ccaaggtctt cgacgagttt aagcccctgg tggaagagcc ccagaacctg 1200 atcaaacaga actgtgagct gttcgagcag ctcggagagt acaagttcca gaatgccctc 1260 ctcgtgaggt acacaaagaa ggtcccccag gtctccacac ctaccctggt ggaggtctcc 1320 agaaacctgg gcaaggtggg atccaagtgc tgcaagcatc ctgaggccaa aagaatgccc 1380 tgtgctgagg attacctgag cgtggtcctg aatcagctgt gcgtgctgca tgaaaaaacc 1440 cccgtctccg atagggtcac aaagtgctgc accgagagcc tggtgaatag aaggccctgt 1500 ttctccgccc tggaggtgga cgaaacctat gtccccaaag agttcaacgc tgaaacattt 1560 accttccacg ctgacatttg caccctgagc gagaaggaga ggcagatcaa gaagcagaca 1620 gctctcgtgg agctcgtgaa gcacaaacct aaagccacaa aggagcaact gaaggccgtc 1680 atggacgact ttgccgcttt cgtcgagaag tgctgtaagg ccgacgacaa ggagacatgt 1740 ttcgccgagg agggaaagaa gctggtcgct gctagccaag ctgccctggg cctgggagga 1800 ggaggaagcg tgtatgcccc cctgagagct gacggagata agcctagggc ccacctgacc 1860 gtcgtcagac agacccctac ccaacacttc aagaaccagt tccccgctct gcactgggag 1920 cacgaactgg gcctggcctt cacaaaaaac agaatgaatt acaccaacaa gttcctcctg 1980 attcccgaaa gcggcgatta ttttatctac agccaggtga cctttagggg catgacatcc 2040 gagtgctccg agatcagaca agccggaaga cccaacaagc ccgactccat cacagtggtc 2100 atcacaaagg tgacagatag ctatcctgaa cctacccagc tgctgatggg caccaagtcc 2160 gtctgtgagg tgggaagcaa ctggtttcaa cccatctacc tgggcgctat gttctccctg 2220 caagagggcg ataagctgat ggtgaatgtg tccgacattt ccctggtgga ttataccaaa 2280 gaggacaaga ccttctttgg cgcctttctc ctgggaggag gatccggcgg aggatccgga 2340 ggcggctccg tctatgcccc tctgagggct gacggagaca agcccagggc ccatctgacc 2400 gtggtgagac aaacccccac ccaacacttt aagaaccagt ttcctgctct gcattgggag 2460 catgagctgg gcctggcctt taccaaaaat aggatgaact ataccaataa gttcctgctg 2520 atccccgagt ccggagacta ctttatctat tcccaggtca ccttcagggg catgacctcc 2580 gagtgcagcg agattagaca ggccggcaga cccaataaac ccgacagcat caccgtcgtg 2640 atcaccaaag tgacagactc ctaccccgaa cctacacaac tcctgatggg caccaaaagc 2700 gtgtgcgaag tgggctccaa ctggttccag cccatctacc tgggcgctat gtttagcctg 2760 caagaaggcg ataaactgat ggtcaacgtg tccgacatca gcctggtcga ctacacaaaa 2820 gaggataaga ccttcttcgg agcctttctg ctcggaggag gatccggcgg cggcagcggc 2880 ggaggcagcg tctacgcccc cctgagagct gatggcgata aacctagagc ccatctgaca 2940 gtggtgagac agacccccac ccagcatttc aaaaaccagt ttcccgccct gcattgggaa 3000 cacgagctgg gactggcctt caccaaaaac aggatgaatt ataccaacaa atttctgctg 3060 atccccgaat ccggcgatta cttcatctac agccaagtga ccttcagggg aatgacctcc 3120 gaatgttccg aaatcagaca ggctggcagg cccaacaaac ccgattccat caccgtggtg 3180 atcaccaagg tgaccgacag ctaccccgag cctacccaac tgctgatggg aaccaagagc 3240 gtgtgtgagg tgggctccaa ttggttccag cccatctatc tgggcgccat gttcagcctg 3300 caggagggag acaaactgat ggtgaacgtg tccgatatct ccctcgtcga ctacaccaag 3360 gaggataaaa cctttttcgg cgccttcctg ctc 3393 <210> 179 <211> 2364 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W9 (GD: Single chain protein in CBIS -> HSA C-terminal Fusion; His-TEV-G-HSA (C34S)-2(G4S)-TL1A) nucleotide sequence <400> 179 catcatcacc accatcacga gaacctgtac ttccaaggtg atgctcacaa gtccgaggtg 60 gctcacaggt ttaaagacct cggcgaggag aacttcaagg ccctcgtcct gattgctttc 120 gctcagtacc tgcagcagtc ccccttcgag gaccatgtca agctggtgaa tgaggtgaca 180 gaattcgcca agacctgtgt ggctgacgaa tccgctgaga actgcgacaa gtccctgcac 240 accctgttcg gcgataaact gtgcacagtg gctaccctca gagaaaccta tggcgaaatg 300 gccgactgtt gcgccaagca agagcccgag aggaacgaat gcttcctcca gcacaaggat 360 gacaatccta acctgcccag actggtgaga cccgaggtgg atgtcatgtg cacagccttc 420 cacgataacg aggagacatt cctgaagaaa tatctctatg aaatcgccag gaggcatccc 480 tacttctatg cccccgagct gctcttcttc gccaagaggt ataaagccgc tttcaccgag 540 tgctgccagg ctgccgacaa ggccgcttgt ctgctgccca agctggacga gctgagggac 600 gagggaaagg ctagctccgc taagcagaga ctgaagtgcg ccagcctgca gaaattcgga 660 gaaagggcct tcaaggcctg ggccgtggct aggctgagcc agagatttcc taaggccgag 720 tttgccgaag tgagcaagct ggtgaccgac ctgacaaagg tccacacaga atgttgccac 780 ggcgacctgc tggagtgcgc cgatgatagg gccgatctgg ccaaatacat ctgtgagaac 840 caagactcca tctcctccaa gctgaaggag tgttgcgaga agcctctgct cgagaagagc 900 cactgcatcg ctgaagtcga gaacgacgag atgcctgccg atctcccctc cctggccgcc 960 gatttcgtgg aatccaagga cgtctgtaag aactacgccg aggccaagga tgtgttcctg 1020 ggaatgttcc tgtacgagta cgctaggagg caccctgact atagcgtggt gctcctcctg 1080 aggctggcca agacatatga gaccaccctg gaaaagtgct gcgccgctgc cgatccccat 1140 gagtgctatg ccaaggtctt cgacgagttt aagcccctgg tggaagagcc ccagaacctg 1200 atcaaacaga actgtgagct gttcgagcag ctcggagagt acaagttcca gaatgccctc 1260 ctcgtgaggt acacaaagaa ggtcccccag gtctccacac ctaccctggt ggaggtctcc 1320 agaaacctgg gcaaggtggg atccaagtgc tgcaagcatc ctgaggccaa aagaatgccc 1380 tgtgctgagg attacctgag cgtggtcctg aatcagctgt gcgtgctgca tgaaaagacc 1440 cccgtctccg atagggtcac aaagtgctgc accgagagcc tggtgaatag aaggccctgt 1500 ttctccgccc tggaggtgga cgaaacctat gtccccaaag agttcaacgc tgaaacattt 1560 accttccacg ctgacatttg caccctgagc gagaaggaga ggcagatcaa gaagcagaca 1620 gctctcgtgg agctcgtgaa gcacaaacct aaagccacaa aggagcaact gaaggccgtc 1680 atggacgact ttgccgcttt cgtcgagaag tgctgtaagg ccgacgacaa ggagacatgt 1740 ttcgccgagg agggaaagaa gctggtcgct gctagccaag ctgccctggg cctgggagga 1800 ggaggaagcg gcggaggagg atccctcaag ggccaggagt tcgctccctc ccatcagcag 1860 gtgtacgctc ccctgagagc cgatggcgat aagcccagag cccacctgac cgtcgtgagg 1920 cagaccccca cccagcactt caagaaccag tttcccgccc tccactggga gcacgagctg 1980 ggactggcct ttaccaagaa cagaatgaat tacaccaaca agtttctgct catccccgag 2040 agcggagact acttcatcta ctcccaggtg accttcaggg gcatgacaag cgagtgcagc 2100 gagatcagac aggccggaag gcctaataag cccgactcca tcacagtggt gatcacaaag 2160 gtgaccgaca gctaccccga gcccacccag ctgctgatgg gcaccaagag cgtgtgcgaa 2220 gtgggcagca actggttcca gcccatctac ctgggcgcca tgttcagcct gcaggagggc 2280 gacaagctga tggtgaacgt gagcgacatt tccctggtcg attacaccaa ggaggataag 2340 accttcttcg gcgccttcct gctg 2364 <210> 180 <211> 1533 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W19 (His-TEV-TL1A-TL1A-TL1A) nucleotide sequence <400> 180 catcatcatc accaccacga gaatctctat tttcagggcg ctcccctgag agccgatggc 60 gataagccta gagcccacct gacagtggtg agacaaaccc ctacacagca cttcaaaaat 120 cagttccctg ccctgcactg ggaacatgag ctgggcctgg ccttcaccaa gaacaggatg 180 aattacacaa ataagttcct gctcatccct gagtccggcg actacttcat ctatagccaa 240 gtgaccttca gaggcatgac cagcgagtgc tccgagatca ggcaggctgg aagacctaac 300 aagcccgata gcatcaccgt ggtgattaca aaggtgacag acagctatcc cgagcccaca 360 cagctgctca tgggcaccaa aagcgtgtgc gaagtcggca gcaactggtt ccagcccatc 420 tacctgggcg ccatgtttag cctgcaggaa ggagataagc tgatggtcaa tgtctccgat 480 atctccctgg tggattacac caaggaggac aaaaccttct tcggcgcttt tctgctggcc 540 cctctcaggg ccgatggaga taaacccagg gctcacctga cagtcgtcag gcagacccct 600 acacaacact tcaagaatca attccccgcc ctgcattggg agcacgaact gggcctggcc 660 ttcacaaaaa ataggatgaa ctataccaac aaattcctgc tgatccctga atccggcgat 720 tacttcatct actcccaggt gaccttcaga ggcatgacca gcgaatgcag cgaaatcaga 780 caagctggca gacccaacaa acccgacagc attaccgtgg tcatcaccaa ggtcacagat 840 agctaccccg aacccacaca gctcctgatg ggcaccaagt ccgtctgtga ggtcggcagc 900 aattggttcc agcctatcta tctgggcgcc atgtttagcc tgcaagaggg agacaaactg 960 atggtgaatg tgtccgacat ctccctggtg gattacacca aagaggataa aacctttttc 1020 ggcgccttcc tgctggctcc tctgagggct gacggcgaca agcccagagc tcacctgacc 1080 gtcgtgaggc aaacccctac ccagcacttt aagaaccagt ttcccgccct gcactgggag 1140 catgagctgg gcctggcctt taccaaaaac agaatgaact acaccaacaa gtttctgctg 1200 atccccgaaa gcggcgacta ttttatctat agccaggtga cctttagagg catgaccagc 1260 gagtgtagcg agattagaca ggctggcagg cctaacaagc ctgacagcat caccgtggtg 1320 atcaccaaag tgaccgactc ctaccccgag cccacccaac tgctcatggg cacaaagagc 1380 gtgtgtgagg tgggctccaa ttggtttcaa cccatctatc tgggcgccat gttcagcctg 1440 caagaaggag acaagctcat ggtcaatgtg agcgacatca gcctggtgga ctataccaaa 1500 gaagacaaga ccttcttcgg agcctttctg ctg 1533 <210> 181 <211> 2268 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W14 (Fc-scTL1A with CD4 HC sp prim_transcript) nucleotide sequence <400> 181 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720 agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcaagaa ccagttcccc 780 gctctgcact gggagcacga actgggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840 aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900 aggggcatga catccgagtg ctccgagatc agacaagccg gaagacccaa caagcccgac 960 tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatagctatc ctgaacctac ccagctgctg 1020 atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcaactggt ttcaacccat ctacctgggc 1080 gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140 gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200 ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260 agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttaagaa ccagtttcct 1320 gctctgcatt gggagcatga gctgggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380 aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440 aggggcatga cctccgagtg cagcgagatt agacaggccg gcagacccaa taaacccgac 1500 agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gactcctacc ccgaacctac acaactcctg 1560 atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccaactggt tccagcccat ctacctgggc 1620 gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680 gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740 ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800 agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcaaaaa ccagtttccc 1860 gccctgcatt gggaacacga gctgggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920 aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980 aggggaatga cctccgaatg ttccgaaatc agacaggctg gcaggcccaa caaacccgat 2040 tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacagctacc ccgagcctac ccaactgctg 2100 atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccaattggt tccagcccat ctatctgggc 2160 gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220 gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268 <210> 182 <211> 2268 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W329 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A E190F N207F) nucleotide sequence <400> 182 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720 agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780 gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840 aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900 aggggctaca catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960 tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatagctatc ctttccctac ccagctgctg 1020 atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcttctggt ttcaacccat ctacctgggc 1080 gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140 gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200 ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260 agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320 gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380 aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440 aggggctaca cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500 agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gactcctacc ccttccctac acaactcctg 1560 atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccttctggt tccagcccat ctacctgggc 1620 gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680 gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740 ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800 agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860 gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920 aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980 aggggataca cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040 tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacagctacc ccttccctac ccaactgctg 2100 atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccttctggt tccagcccat ctatctgggc 2160 gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220 gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268 <210> 183 <211> 2268 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W327 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L E190F) nucleotide sequence <400> 183 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720 agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780 gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840 aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900 aggggctaca catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960 tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatctgtatc ctttccctac ccagctgctg 1020 atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcaactggt ttcaacccat ctacctgggc 1080 gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140 gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200 ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260 agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320 gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380 aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440 aggggctaca cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500 agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gacctgtacc ccttccctac acaactcctg 1560 atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccaactggt tccagcccat ctacctgggc 1620 gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680 gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740 ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800 agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860 gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920 aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980 aggggataca cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040 tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacctgtacc ccttccctac ccaactgctg 2100 atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccaattggt tccagcccat ctatctgggc 2160 gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220 gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268 <210> 184 <211> 2268 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W328 (Fc-scTL1A K111A L123K M158Y Q167A S187L N207F) nucleotide sequence <400> 184 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720 agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780 gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840 aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900 aggggctaca catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960 tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatctgtatc ctgaacctac ccagctgctg 1020 atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcttctggt ttcaacccat ctacctgggc 1080 gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140 gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200 ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260 agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320 gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380 aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440 aggggctaca cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500 agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gacctgtacc ccgaacctac acaactcctg 1560 atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccttctggt tccagcccat ctacctgggc 1620 gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680 gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740 ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800 agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860 gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920 aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980 aggggataca cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040 tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacctgtacc ccgagcctac ccaactgctg 2100 atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccttctggt tccagcccat ctatctgggc 2160 gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220 gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268 <210> 185 <211> 2268 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W331 (Fc-scTL1A K111A L123K Q167A S187L E190F N207F) nucleotide sequence <400> 185 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcgtgtat gcccccctga gagctgacgg agataagcct 720 agggcccacc tgaccgtcgt cagacagacc cctacccaac acttcgccaa ccagttcccc 780 gctctgcact gggagcacga aaagggcctg gccttcacaa aaaacagaat gaattacacc 840 aacaagttcc tcctgattcc cgaaagcggc gattatttta tctacagcca ggtgaccttt 900 aggggcatga catccgagtg ctccgagatc agagccgccg gaagacccaa caagcccgac 960 tccatcacag tggtcatcac aaaggtgaca gatctgtatc ctttccctac ccagctgctg 1020 atgggcacca agtccgtctg tgaggtggga agcttctggt ttcaacccat ctacctgggc 1080 gctatgttct ccctgcaaga gggcgataag ctgatggtga atgtgtccga catttccctg 1140 gtggattata ccaaagagga caagaccttc tttggcgcct ttctcctggg aggaggatcc 1200 ggcggaggat ccggaggcgg ctccgtctat gcccctctga gggctgacgg agacaagccc 1260 agggcccatc tgaccgtggt gagacaaacc cccacccaac actttgccaa ccagtttcct 1320 gctctgcatt gggagcatga gaagggcctg gcctttacca aaaataggat gaactatacc 1380 aataagttcc tgctgatccc cgagtccgga gactacttta tctattccca ggtcaccttc 1440 aggggcatga cctccgagtg cagcgagatt agagccgccg gcagacccaa taaacccgac 1500 agcatcaccg tcgtgatcac caaagtgaca gacctgtacc ccttccctac acaactcctg 1560 atgggcacca aaagcgtgtg cgaagtgggc tccttctggt tccagcccat ctacctgggc 1620 gctatgttta gcctgcaaga aggcgataaa ctgatggtca acgtgtccga catcagcctg 1680 gtcgactaca caaaagagga taagaccttc ttcggagcct ttctgctcgg aggaggatcc 1740 ggcggcggca gcggcggagg cagcgtctac gcccccctga gagctgatgg cgataaacct 1800 agagcccatc tgacagtggt gagacagacc cccacccagc atttcgccaa ccagtttccc 1860 gccctgcatt gggaacacga gaagggactg gccttcacca aaaacaggat gaattatacc 1920 aacaaatttc tgctgatccc cgaatccggc gattacttca tctacagcca agtgaccttc 1980 aggggaatga cctccgaatg ttccgaaatc agagccgctg gcaggcccaa caaacccgat 2040 tccatcaccg tggtgatcac caaggtgacc gacctgtacc ccttccctac ccaactgctg 2100 atgggaacca agagcgtgtg tgaggtgggc tccttctggt tccagcccat ctatctgggc 2160 gccatgttca gcctgcagga gggagacaaa ctgatggtga acgtgtccga tatctccctc 2220 gtcgactaca ccaaggagga taaaaccttt ttcggcgcct tcctgctc 2268 <210> 186 <211> 1803 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W61 (Fc-TL1A+His-TL1A) nucleotide sequence <400> 186 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcctcaag ggccaggagt tcgctccctc ccatcagcag 720 gtgtacgctc ccctgagagc cgatggcgat aagcccagag cccacctgac cgtcgtgagg 780 cagaccccca cccagcactt caagaaccag tttcccgccc tccactggga gcacgagctg 840 ggactggcct ttaccaagaa cagaatgaat tacaccaaca agtttctgct catccccgag 900 agcggagact acttcatcta ctcccaggtg accttcaggg gcatgacaag cgagtgcagc 960 gagatcagac aggccggaag gcctaataag cccgactcca tcacagtggt gatcacaaag 1020 gtgaccgaca gctaccccga gcccacccag ctgctgatgg gcaccaagag cgtgtgcgaa 1080 gtgggcagca actggttcca gcccatctac ctgggcgcca tgttcagcct gcaggagggc 1140 gacaagctga tggtgaacgt gagcgacatt tccctggtcg attacaccaa ggaggataag 1200 accttcttcg gcgccttcct gctgcatcat caccaccatc acgagaacct gtacttccaa 1260 ggtctcaagg gccaggagtt cgctccctcc catcagcagg tgtacgctcc cctgagagcc 1320 gatggcgata agcccagagc ccacctgacc gtcgtgaggc agacccccac ccagcacttc 1380 aagaaccagt ttcccgccct ccactgggag cacgagctgg gactggcctt taccaagaac 1440 agaatgaatt acaccaacaa gtttctgctc atccccgaga gcggagacta cttcatctac 1500 tcccaggtga ccttcagggg catgacaagc gagtgcagcg agatcagaca ggccggaagg 1560 cctaataagc ccgactccat cacagtggtg atcacaaagg tgaccgacag ctaccccgag 1620 cccacccagc tgctgatggg caccaagagc gtgtgcgaag tgggcagcaa ctggttccag 1680 cccatctacc tgggcgccat gttcagcctg caggagggcg acaagctgat ggtgaacgtg 1740 agcgacattt ccctggtcga ttacaccaag gaggataaga ccttcttcgg cgccttcctg 1800 ctg 1803 <210> 187 <211> 1224 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TL1W3 (GD: Fc Fusion in CBIS -> homodimer Fc Fusion; GS-huIgG1 Fc - 2(G4S)-hTL1A 72-251) nucleotide sequence <400> 187 ggatcctgtc ctccctgccc tgctcctgaa ctcctgggcg gacccagcgt gtttctgttc 60 ccccccaaac ctaaagacac actgatgatt agcagaaccc ccgaggtcac ctgcgtggtg 120 gtggatgtgt cccacgagga tcccgaggtc aagttcaact ggtacgtgga tggcgtggag 180 gtgcacaacg ccaaaaccaa gcccagggaa gagcagtaca actccaccta cagggtcgtg 240 agcgtgctga cagtgctgca ccaggactgg ctgaacggaa aggagtacaa gtgtaaggtc 300 agcaacaagg ctctgcctgc ccccatcgag aaaaccatca gcaaggccaa gggccagcct 360 agggaacccc aggtgtacac actgccccct tccagggagg agatgaccaa aaaccaggtc 420 agcctgacat gcctggtgaa aggcttctac cccagcgata tcgccgtgga atgggagtcc 480 aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc acaccccccg tgctggactc cgacggttct 540 tttttcctgt actccaagct gaccgtcgac aagagcaggt ggcaacaggg caacgtcttc 600 agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg 660 tcccctggcg gaggaggagg aagcctcaag ggccaggagt tcgctccctc ccatcagcag 720 gtgtacgctc ccctgagagc cgatggcgat aagcccagag cccacctgac cgtcgtgagg 780 cagaccccca cccagcactt caagaaccag tttcccgccc tccactggga gcacgagctg 840 ggactggcct ttaccaagaa cagaatgaat tacaccaaca agtttctgct catccccgag 900 agcggagact acttcatcta ctcccaggtg accttcaggg gcatgacaag cgagtgcagc 960 gagatcagac aggccggaag gcctaataag cccgactcca tcacagtggt gatcacaaag 1020 gtgaccgaca gctaccccga gcccacccag ctgctgatgg gcaccaagag cgtgtgcgaa 1080 gtgggcagca actggttcca gcccatctac ctgggcgcca tgttcagcct gcaggagggc 1140 gacaagctga tggtgaacgt gagcgacatt tccctggtcg attacaccaa ggaggataag 1200 accttcttcg gcgccttcct gctg 1224 <210> 188 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Exemplary Fc region sequence <400> 188 Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 1 5 10 15 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 20 25 30 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 35 40 45 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 50 55 60 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 65 70 75 80 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 85 90 95 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 100 105 110 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 115 120 125 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 130 135 140 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 145 150 155 160 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 165 170 175 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 180 185 190 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 195 200 205 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 210 215 220

Claims (50)

  1. 조작된 TL1A 리간드로서,
    삼량체 복합체를 포함하며, 상기 삼량체 복합체는
    a. 비공유적(non-covalent) TL1A 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체; 또는
    b. 공유적으로 연결되어 단일쇄 TL1A(scTL1A) 삼량체를 형성하는 3개의 TL1A 단량체를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  2. 제1항에 있어서, 단백질 안정화 영역을 추가로 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  3. 제2항에 있어서, 상기 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 인간 혈청 알부민(HSA) 영역을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  4. 제3항에 있어서, 하기를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드:
    a. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역;
    b. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역;
    c. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는
    d. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
  5. 제4항에 있어서, 하기를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드:
    a. 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역;
    b. 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
    c. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
    d. 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는
    e. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3개의 TL1A 단량체는 링커(linker)에 의해 공유적으로 결합되는, 조작된 TL1A 리간드.
  7. 제6항에 있어서, 상기 링커는 펩티드 링커인, 조작된 TL1A 리간드.
  8. 제7항에 있어서, 상기 링커는 Gly-Ser의 아미노산 서열 또는 이의 다수의 반복부(repeat)를 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2 또는 IgG4 Fc 영역인, 조작된 TL1A 리간드.
  10. 제9항에 있어서, 상기 비공유적 TL1A 삼량체 또는 상기 scTL1A 삼량체는 상기 Fc 영역의 C-말단에 융합되는, 조작된 TL1A 리간드.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 잔기 72 내지 251을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  12. 제11항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 아미노산 서열의 잔기 72 내지 251의 적어도 하나의 아미노산 변경을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  13. 제12항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 R103, K111, N112, F114, E120, L123, G124, R156, M158, Q167, R170, K173, S176, T185, D186, S187, Y188, P189, E190, T192, S206, N207, F209, Y238, T239, K240, 및 E241로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경을 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
  14. 제13항에 있어서, 상기 서열 번호 94의 하나 이상의 잔기 위치에서의 하나 이상의 변경은 R103A, R103H, R103Q, R103E, R103E, K111A, K111S, K111E, N112E, F114A, E120A, E120K, E120H, L123G, L123S, L123E, L123K, G124S, G124K, G124D, R156A, R156Y, R156K, R156E, M158Y, M158K, M158E, Q167A, R170E, K173S, K173R, S176A, S176L, S176, S176K, T185A, T185L, T185N, T185D, D186Y, S187A, S187L, S187K, S187D, Y188A, Y188S, P189A, P189K, P189F, P189S, E190G, E190F, T192A, T192F, T192K, T192E, S206A, S206F, S206K, S206E, N207A, N207F, N207S, N207K, N207E, F209A, F209W, Y238A, Y238S, Y238K, Y238R, Y238E, T239A, T239E, T239F, T239K, T239W, K240A, K240F, K240S, K240D, E241A, E241L, 및 E241Q로부터 선택되는 변경인, 조작된 TL1A 리간드.
  15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 94의 잔기 72 내지 251의 아미노산 서열의 적어도 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 또는 그 이상의 변경을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 하나 이상의 아미노산 변경을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드:
    a. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    b. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    c. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    d. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    e. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    f. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    g. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    h. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    i. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    j. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열; 또는
    k. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이성 항체를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 이종성 폴리펩티드에 융합되는, 조작된 TL1A 리간드.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 작용제(agent)에 접합되는, 조작된 TL1A 리간드.
  22. 제21항에 있어서, 상기 작용제는 독소인, 조작된 TL1A 리간드.
  23. 조작된 TL1A 리간드로서,
    야생형 TL1A의 친화도와 비견되거나 그보다 더 높은 친화도로 DR3에 결합할 수 있는 제1 수단, 및 야생형 TL1A의 친화도보다 더 낮은 친화도로 DcR3에 결합할 수 있는 제2 수단을 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  24. 제23항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A보다 더 긴 혈청 반감기를 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
  25. 제23항 또는 제24항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 야생형 TL1A에 비해 높은 단분산도 및/또는 안정성을 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
  26. 제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 시험관내(in vitro)에서 T 세포를 공동자극하는, 조작된 TL1A 리간드.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 대상체에서 T 세포를 공동자극하는, 조작된 TL1A 리간드.
  28. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 대상체에서 하나 이상의 사이토카인의 생성을 증가시키는, 조작된 TL1A 리간드.
  29. 제28항에 있어서, 상기 하나 이상의 사이토카인은 IFNγ 및 TNFα를 포함하는, 조작된 TL1A 리간드.
  30. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 자가면역 장애 또는 암을 갖는, 조작된 TL1A 리간드.
  31. 제30항에 있어서, 상기 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, 염증성 장 질병(IBD), 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 선택적으로 상기 육종은 횡문근육종인, 조작된 TL1A 리간드.
  32. 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 이를 필요로 하는 대상체인, 조작된 TL1A 리간드.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 조작된 TL1A 리간드를 인코딩하는 핵산.
  34. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 조작된 TL1A 리간드 또는 제33항의 핵산, 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  35. 대상체에서 질병 또는 장애를 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 조작된 TL1A 리간드의 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 자가면역 장애 또는 암인, 방법.
  37. 제35항에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 궤양성 결장염, 루푸스, IBD, COPD, 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 선택적으로 상기 육종은 횡문근육종인, 방법.
  38. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 이를 필요로 하는 대상체인, 방법.
  39. 조작된 TL1A 리간드의 제조 방법으로서,
    (i) K111A, L123K, M158Y, Q167A, S187L, E190F, 및 N207F로 이루어진 군으로부터 선택되는, 서열 번호 94의 아미노산 서열의 적어도 하나의 아미노산 변경을 도입시키는 기능을 수행하기 위한 단계; 및 (ii) 조작된 TL1A 리간드의 집단을 생성하는 기능을 수행하기 위한 단계를 포함하는, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드를 이종성 폴리펩티드에 융합하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 이종성 폴리펩티드는 단백질 안정화 영역을 포함하는, 방법.
  42. 제41항에 있어서, 상기 단백질 안정화 영역은 Fc 영역 또는 HSA 영역을 포함하는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 다량체성의 조작된 TL1A 리간드를 생성하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
    a. 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역;
    b. 상기 비공유적 TL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역;
    c. scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 Fc 영역; 또는
    d. 상기 scTL1A 삼량체 및 하나 이상의 HSA 영역.
  45. 제44항에 있어서, 상기 다량체성의 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
    a. 2개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 Fc 영역;
    b. 2개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
    c. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 Fc 영역;
    d. 1개의 비공유적 TL1A 삼량체 및 3개의 HSA 영역; 또는
    e. 1개의 scTL1A 삼량체 및 1개의 HSA 영역.
  46. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 서열 번호 1 내지 93 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는, 방법.
  47. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조작된 TL1A 리간드는 하기를 포함하는, 방법:
    a. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 79의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    b. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 72의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    c. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    d. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 65의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    e. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    f. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    g. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 36의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    h. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 90의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    i. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 88의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    j. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 91의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열;
    k. 전체 길이에 걸쳐 서열 번호 89의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열.
  48. 요법에 사용하기 위한, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 조작된 TL1A 리간드.
  49. 자가면역 장애 또는 암의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 조작된 TL1A 리간드.
  50. 제49항에 있어서, 상기 자가면역 장애 또는 암은 궤양성 결장염, 루푸스, IBD, COPD, 관절염, 다발성 경화증, 당뇨병, 이식 거부반응, 중추 신경계 손상, 크론병, 건선, 백혈병 또는 림프종, 죽상경화증, 결장암, 유방암, 췌장암, 백혈병, 폐암, 예컨대 비소세포 폐암, 교아세포종, 흑색종, 전립선암, 위암, 뇌하수체 선종, 난소암, 신장암, 방광암, 및 육종으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 선택적으로 상기 육종은 횡문근육종인, 상기 사용을 위한, 조작된 TL1A 리간드.
KR1020237009317A 2020-08-19 2021-08-18 조작된 리간드를 사용하는 물질 및 방법 KR20230051581A (ko)

Applications Claiming Priority (21)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063067820P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067803P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067808P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067833P 2020-08-19 2020-08-19
US202063067813P 2020-08-19 2020-08-19
US63/067,813 2020-08-19
US63/067,820 2020-08-19
US63/067,833 2020-08-19
US63/067,808 2020-08-19
US63/067,803 2020-08-19
US202163149174P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149173P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149175P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149171P 2021-02-12 2021-02-12
US202163149177P 2021-02-12 2021-02-12
US63/149,174 2021-02-12
US63/149,175 2021-02-12
US63/149,171 2021-02-12
US63/149,173 2021-02-12
US63/149,177 2021-02-12
PCT/US2021/046488 WO2022040302A1 (en) 2020-08-19 2021-08-18 Materials and methods of using engineered ligands

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230051581A true KR20230051581A (ko) 2023-04-18

Family

ID=80269366

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237009317A KR20230051581A (ko) 2020-08-19 2021-08-18 조작된 리간드를 사용하는 물질 및 방법

Country Status (8)

Country Link
US (1) US11952411B2 (ko)
EP (1) EP4199953A1 (ko)
JP (1) JP2023538902A (ko)
KR (1) KR20230051581A (ko)
CN (1) CN116348481A (ko)
CA (1) CA3190012A1 (ko)
TW (1) TW202227475A (ko)
WO (1) WO2022040302A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116348481A (zh) 2020-08-19 2023-06-27 詹森生物科技公司 使用工程化配体的材料和方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2876099A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for producing monomeric and multimeric molecules and uses thereof
WO2014110258A1 (en) * 2013-01-09 2014-07-17 Podack Eckhard R Compositions and methods for the regulation of t regulatory cells using tl1a-ig fusion protein
CA3003511A1 (en) * 2015-10-28 2017-05-04 Apogenix Ag Single-chain tl1a receptor agonist proteins
CN116348481A (zh) 2020-08-19 2023-06-27 詹森生物科技公司 使用工程化配体的材料和方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN116348481A (zh) 2023-06-27
CA3190012A1 (en) 2022-02-24
WO2022040302A1 (en) 2022-02-24
EP4199953A1 (en) 2023-06-28
TW202227475A (zh) 2022-07-16
US20220056104A1 (en) 2022-02-24
US11952411B2 (en) 2024-04-09
JP2023538902A (ja) 2023-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10865250B2 (en) Anti-cancer fusion polypeptide
JP2023182757A (ja) 調整可能な親和性を有する免疫調節タンパク質
CA2884704C (en) Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
JP2021500855A (ja) 抗原提示ポリペプチドおよびその使用方法
JP2023058027A (ja) Ｃｄ８０バリアント免疫調節タンパク質及びその使用
RU2704992C2 (ru) CD40L-СПЕЦИФИЧНЫЕ КАРКАСНЫЕ СТРУКТУРЫ, ПРОИСХОДЯЩИЕ ИЗ Tn3, И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
JP2023057022A (ja) Ｐｄ－ｌ１バリアント免疫調節タンパク質及びその使用
JP2017519494A (ja) Ｏｘ４０ｌ融合タンパク質およびその使用
KR20130062280A (ko) Ｔｒａｉｌ ｒ2 특이적 다량체 스캐폴드
JP2023055821A (ja) バリアントｉｃｏｓリガンド免疫調節タンパク質ならびに関連する組成物および方法
EP3630832A1 (en) MODIFIED IgG1 Fc DOMAINS AND ANTI-CD40 DOMAIN ANTIBODY FUSIONS THEREWITH
EP3853247A2 (en) Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
JP2022528030A (ja) 多機能性融合タンパク質及びその使用
KR20230029621A (ko) T 세포 억제 단백질을 포함하거나 포함하지 않는 april 및 baff 억제 면역조절 단백질 및 이의 사용 방법
EP4219540A2 (en) Ctla-4 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20230005978A (ko) Ilt-결합제 및 이의 사용 방법
CN115103852A (zh) Prame tcr受体和其用途
JP2023123649A (ja) バイアス型ｉｌ２ムテイン、方法、および組成物
KR20230051581A (ko) 조작된 리간드를 사용하는 물질 및 방법
KR20240024858A (ko) sPD-1과 IL-15를 갖는 이중특이적 Fc 융합 단백질
JP2024512470A (ja) Ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法
TW202208396A (zh) Ｔ細胞調控性多聚體多肽和使用彼之方法