JP2024512470A - Ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
本開示は、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。当該ＴＭＰは、ＭＯＤ、クラスＩ ＨＬＡポリペプチド（クラスＩ ＨＬＡ重鎖ポリペプチド及びβ２－ミクログロブリンポリペプチド）、ならびにＴ細胞受容体にエピトープを提示するＫＲＡＳペプチド（例えば、がん関連変異を含むＫＲＡＳペプチド）を含む。ＴＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用であり、かつ個体における免疫応答を調節するのに有用である。【選択図】図１Ａ
Description
相互参照
本出願は、２０２１年３月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／１６３，２７０号の利益を主張するものである。この仮特許出願は、参照によりその内容がすべて本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年３月１９日に出願された米国仮特許出願第６３／１６３，２７０号の利益を主張するものである。この仮特許出願は、参照によりその内容がすべて本明細書に組み込まれる。
テキストファイルとして提供された配列表の参照による組み込み
配列表が、２０２２年３月１５日に作成された４６２ＫＢのサイズのテキストファイル「ＣＵＥＢ－１４０ＷＯ ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ ＳＴ２５．ｔｘｔ」として本明細書に添付されている。このテキストファイルの内容すべてが参照により本明細書に組み込まれる。
配列表が、２０２２年３月１５日に作成された４６２ＫＢのサイズのテキストファイル「ＣＵＥＢ－１４０ＷＯ ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ ＳＴ２５．ｔｘｔ」として本明細書に添付されている。このテキストファイルの内容すべてが参照により本明細書に組み込まれる。
序論
適応免疫応答は、Ｔ細胞の表面に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と小さなペプチド抗原との結合を必要とする。この小さなペプチド抗原は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ（ヒトではヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体とも呼ばれる））によって抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に非共有結合的に提示される。この結合は、免疫系の標的化機構を代表するものであり、Ｔ細胞の調節（活性化または抑制）とエフェクター機能に必要な分子相互作用である。エピトープ特異的細胞標的化の後、標的化Ｔ細胞は、ＡＰＣ上に存在する共刺激タンパク質とＴ細胞上の対応する共刺激タンパク質との結合により活性化される。両方のシグナル（すなわちエピトープ／ＴＣＲ結合と、ＡＰＣ共刺激タンパク質とＴ細胞共刺激タンパク質との結合）が、Ｔ細胞の特異性と活性化または抑制をもたらすのに必要である。ＡＰＣ上の共刺激タンパク質は、Ｔ細胞上の共刺激タンパク質と結合するとＴ細胞の活性を調節するので、「免疫調節」タンパク質とも呼ばれている。この特異的な調節は、ＡＰＣ上のどの免疫調節タンパク質がＴ細胞上のどの免疫調節タンパク質に結合するかに依存している。ＴＣＲは特定のエピトープに特異的である。一方、Ｔ細胞の共刺激タンパク質は、エピトープ特異的ではなく、むしろ、通常、すべてのＴ細胞上または大きなＴ細胞サブセット上に発現している。
適応免疫応答は、Ｔ細胞の表面に存在するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と小さなペプチド抗原との結合を必要とする。この小さなペプチド抗原は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ（ヒトではヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体とも呼ばれる））によって抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に非共有結合的に提示される。この結合は、免疫系の標的化機構を代表するものであり、Ｔ細胞の調節（活性化または抑制）とエフェクター機能に必要な分子相互作用である。エピトープ特異的細胞標的化の後、標的化Ｔ細胞は、ＡＰＣ上に存在する共刺激タンパク質とＴ細胞上の対応する共刺激タンパク質との結合により活性化される。両方のシグナル（すなわちエピトープ／ＴＣＲ結合と、ＡＰＣ共刺激タンパク質とＴ細胞共刺激タンパク質との結合）が、Ｔ細胞の特異性と活性化または抑制をもたらすのに必要である。ＡＰＣ上の共刺激タンパク質は、Ｔ細胞上の共刺激タンパク質と結合するとＴ細胞の活性を調節するので、「免疫調節」タンパク質とも呼ばれている。この特異的な調節は、ＡＰＣ上のどの免疫調節タンパク質がＴ細胞上のどの免疫調節タンパク質に結合するかに依存している。ＴＣＲは特定のエピトープに特異的である。一方、Ｔ細胞の共刺激タンパク質は、エピトープ特異的ではなく、むしろ、通常、すべてのＴ細胞上または大きなＴ細胞サブセット上に発現している。
概要
本開示は、一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）及びその二量体を提供する。一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）及びその二量体は、免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と、クラスＩ ＨＬＡポリペプチド（クラスＩ ＨＬＡ重鎖ポリペプチド及びβ２ミクログロブリンポリペプチド）と、Ｔ細胞受容体にエピトープを提示するＫＲＡＳペプチド（例えば、がん関連変異を有するＫＲＡＳペプチド）とを含む。ＴＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用であり、かつ個体における免疫応答を調節するのに有用である。
本開示は、一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）及びその二量体を提供する。一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）及びその二量体は、免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と、クラスＩ ＨＬＡポリペプチド（クラスＩ ＨＬＡ重鎖ポリペプチド及びβ２ミクログロブリンポリペプチド）と、Ｔ細胞受容体にエピトープを提示するＫＲＡＳペプチド（例えば、がん関連変異を有するＫＲＡＳペプチド）とを含む。ＴＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用であり、かつ個体における免疫応答を調節するのに有用である。
定義
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書において同義的に用いられ、ヌクレオチド（リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれか）の任意の長さの重合体を指す。従って、この用語が包含するものには、一本鎖、二本鎖、または複数本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリン塩基及びピリミジン塩基によって構成されるポリマー、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然の、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基によって構成されるポリマーがあるが、これらに限定されるものではない。
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書において同義的に用いられ、ヌクレオチド（リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれか）の任意の長さの重合体を指す。従って、この用語が包含するものには、一本鎖、二本鎖、または複数本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリン塩基及びピリミジン塩基によって構成されるポリマー、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に修飾された、非天然の、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基によって構成されるポリマーがあるが、これらに限定されるものではない。
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書において同義的に用いられ、任意の長さのアミノ酸の重合体を指す。この重合体は、コードされたアミノ酸及びコードされていないアミノ酸、化学的もしくは生化学的に修飾または誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾されたペプチド骨格を有するポリペプチドを含み得る。さらに、本明細書で用いられる「ポリペプチド」という用語は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、当該タンパク質の本来の配列に対して修飾（例えば、欠失、付加、及び置換（当業者に知られるとおり、通常、性質を変えないようなもの））が導入されたものも指す。これらの修飾は、部位特異的変異導入によるような意図的なものであってもよいし、タンパク質を産生する宿主の変異、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅もしくは他の組換えＤＮＡ法によるエラーのような偶発的なものであってもよい。本明細書において、既知のポリペプチドにおける特定の残基または残基番号について言及する場合、それは野生型ポリペプチドにおけるその位置のアミノ酸を指すものと理解される。野生型ポリペプチドの配列が、１つ以上のアミノ酸の付加または欠失のいずれかによって改変された場合、当業者に明らかなとおり、その特定の残基または残基番号についての言及は、それに応じて変更されることとなり、改変されたポリペプチド中のその同じ特定のアミノ酸を指すことになる（つまり、それは変更された位置番号に存在することになる）。例えば、ＭＨＣクラスＩポリペプチドが、Ｎ末端に１個のアミノ酸を付加することによって改変された場合、位置８４または位置８４の特定の残基についての言及は、改変されたポリペプチド上の位置８５にあるアミノ酸を指していることになる。同様に、本明細書において、特定の位置にある特定のアミノ酸（例えばＹ８４）の置換について言及する場合、それは、野生型ポリペプチドにおける位置８４のアミノ酸の置換を指していることになる。従って、Ｙ８４Ｃ置換は、野生型配列に存在するＴｙｒ残基をＣｙｓ残基で置換することを意味する。例えば、野生型ポリペプチドを改変して、位置８４のアミノ酸を野生型アミノ酸から代替アミノ酸に変更した場合、その後の位置８４のアミノ酸置換は、代替アミノ酸の置換を意味する。このような場合、ポリペプチドが１つ以上のアミノ酸の付加または欠失によっても改変されるのであれば、その後の置換についての言及は、変更された位置番号における代替アミノ酸の置換を指すことになる。ポリペプチド（例えばＭＨＣクラスＩポリペプチド）における「非天然の（天然に存在しない）Ｃｙｓ残基」について言及する場合、それは、対応する野生型ポリペプチドにはＣｙｓが存在しない位置に当該ポリペプチドはＣｙｓ残基を有していることを意味する。これは、野生型の配列に存在するアミノ酸の代わりにシステインを置換する通常のタンパク質工学によって達成することができる。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、他のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対してある割合の「配列同一性」を有する。これは、２つの配列を並べて比較したとき、その割合の塩基またはアミノ酸が同じであり、同じ相対的位置にあることを意味する。配列同一性は多くの異なる方法で決定することができる。配列同一性を決定するために、種々の便利な方法及びコンピュータプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ－ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴなど）を用いて配列を照合することができる。コンピュータプログラムは、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／などのサイトにおいてワールドワイドウェブ上で入手可能である。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２１５：４０３－１０を参照のこと。特に断りがない限り、本明細書で言及される「配列同一性」は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３）に記載されるようなＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ）によってデフォルトパラメータを用いて決定される。
「保存的アミノ酸置換」という用語は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基同士がタンパク質において互換性があることを指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンからなる。脂肪族－ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸群は、セリン及びスレオニンからなる。アミド含有側鎖を有するアミノ酸群は、アスパラギン及びグルタミンからなる。芳香族側鎖を有するアミノ酸群は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなる。塩基性側鎖を有するアミノ酸群は、リジン、アルギニン、及びヒスチジンからなる。酸性側鎖を有するアミノ酸群は、グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる。硫黄含有側鎖を有するアミノ酸群は、システイン及びメチオニンからなる。保存的アミノ酸置換群の具体例には、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン－グリシン、及びアスパラギン－グルタミンがある。
本明細書で用いられる「免疫学的シナプス」または「免疫シナプス」という用語は、通常、適応免疫応答に関する２つの相互作用する免疫細胞間の自然な接触領域（インターフェイス）を指す。この接触領域には、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または標的細胞と、エフェクター細胞（例えば、リンパ球、エフェクターＴ細胞、ナチュラルキラー細胞など）との間の接触領域がある。ＡＰＣとＴ細胞との間の免疫学的シナプスは、通常、Ｔ細胞抗原受容体と主要組織適合性複合体分子との相互作用によって誘導される（例えば、Ｂｒｏｍｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１９：３７５－９６に記載（この開示は、参照によりその内容がすべて本明細書に組み込まれる））。
「Ｔ細胞」という用語は、ＣＤ３を発現するすべての種類の免疫細胞を包含する。「Ｔ細胞」には、Ｔヘルパー細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、Ｔ調節細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＮＫ－Ｔ細胞が含まれる。
本明細書で用いられる「免疫調節ポリペプチド」（本明細書では「ＭＯＤ」とも呼ぶ）という用語は、Ｔ細胞上の同族共刺激ポリペプチドと特異的に結合してシグナルを生成するポリペプチドを意味する。このシグナルは、例えば、ペプチドを搭載した主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドとＴＣＲ／ＣＤ３複合体との結合によってもたらされる一次シグナルとともに、Ｔ細胞応答を媒介する。Ｔ細胞応答には、増殖、活性化、分化などがあるが、これらに限定されるものではない。本明細書に記載されるように、ＭＯＤには、以下のものがあるが、これらに限定されるものではない。野生型ポリペプチドまたは野生型ポリペプチドの変異体、例えば、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２）、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、ＨＶＥＭ、Ｔｏｌｌリガンド受容体と結合するアゴニストまたは抗体、及びＢ７－Ｈ３と特異的に結合するリガンド。ＴＭＰのＭＯＤは、標的Ｔ細胞上に存在する同族共刺激ポリペプチド（すなわちｃｏ－ＭＯＤ）と結合することができる。
本明細書で用いられる「インビボ」という用語は、生体内で生じる任意の作用や過程を指す。
本明細書で用いられる「インビトロ」という用語は、生体外で生じる任意の作用や過程を指す。
本明細書で用いられる「異種」という用語は、本来の核酸またはタンパク質に存在しないヌクレオチドまたはポリペプチドをそれぞれ意味する。
本明細書で用いられる「組換え」という用語は、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、クローニング工程、制限酵素による工程、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）工程及び／またはライゲーション工程の様々な組み合わせの産物であり、その結果、天然系に存在する内在性核酸と区別できる構造コード配列または非コード配列を有する構築物になっていることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ｃＤＮＡ断片または一連の合成オリゴヌクレオチドから組み立てることができ、それにより細胞内または無細胞の転写及び翻訳系に含まれる組換え転写ユニットから発現可能な合成核酸をもたらすことができる。
「組換え発現ベクター」及び「ＤＮＡ構築物」という用語は、本明細書において同義的に用いられ、ベクター及び少なくとも１つの挿入物を含むＤＮＡ分子を指す。組換え発現ベクターは、通常、挿入物（複数可）を発現及び／または増殖させる目的で、あるいは他の組換えヌクレオチド配列を構築する目的で作製される。挿入物（複数可）は、プロモーター配列に作動可能に結合されていてもいなくてもよく、ＤＮＡ調節配列に作動可能に結合されていてもいなくてもよい。
本明細書で用いられる「親和性」（アフィニティ）という用語は、２つの作用物（例えば、抗体と抗原）の可逆的結合の平衡定数を指し、解離定数（ＫＤ）として表される。本明細書で用いられる「結合活性」（アビディティ）という用語は、希釈後の２つ以上の作用物の複合体の解離に対する抵抗性を指す。本明細書において「免疫反応性」及び「優先的に結合する」という用語は、抗体及び／または抗原結合性フラグメントに関し、同義的に使用される。
本明細書で用いられる「結合」という用語は（例えば、Ｔ細胞上のポリペプチド（例えば、Ｔ細胞受容体）へのＴＭＰの結合に関して）、２つの分子間の非共有結合的相互作用を指す。非共有結合とは、２分子間の直接的な会合を指し、例えば、静電相互作用、疎水性相互作用、イオン性相互作用、及び／または水素結合相互作用によるものである（塩橋や水橋などの相互作用を含む）。「親和性」は、非共有結合の強さを意味し、より高い結合親和性とより低いＫＤとは相関する。「特異的結合」とは、一般に、リガンドがその特定の結合部位または受容体に結合することを指す。「非特異的結合」は、一般に、リガンドがその特定の結合部位または受容体以外の部位に結合することを指す。本明細書で用いられる「共有結合性」または「共有結合」という用語は、２つの異なる分子間で１つ以上の共有化学結合が形成されることを指す。
本明細書で用いられる「治療」「治療する」等の用語は、一般に、所望の薬理学的効果及び／または生理学的効果を得ることを意味する。その効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという意味において、予防的であってもよく、及び／または、疾患及び／または疾患に起因する有害な作用について部分的または完全な治癒をもたらすという意味において、治療的であってもよい。本明細書で用いられる「治療」という用語は、哺乳動物における疾患または症状のあらゆる治療を包含する。「治療」には以下のことが含まれる。（ａ）疾患または症状になりやすい可能性がある一方、まだ疾患または症状を有すると診断されていない対象において、疾患または症状が生じるのを予防すること、（ｂ）疾患またはそれに伴う１つ以上の症状を抑制すること、例えば、その発症を阻止すること、及び／または（ｃ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の退行を引き起こすこと。治療薬は、疾患または傷害の発症前、発症中、及び／または発症後に投与することができる。治療が患者の望ましくない臨床的症状を安定化または軽減させる場合、進行中の疾患の治療は、特に注目される。そのような治療は、患部組織の機能が完全に失われる前に行われることが望ましい。対象への療法は、有症期の間、及び場合によっては有症期の後に行われることが望ましい。
「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書において同義的に用いられ、診断、治療、または療法が必要な任意の哺乳動物の対象を指す。哺乳動物として、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ目の動物（例えば、ウサギ）、有蹄類（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギなど）などが挙げられる。特に断りがない限り、「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、ヒトを指す。
特に断りがない限り、「実質的に」という用語は、「完全に」及び「ほとんどであるが完全ではない」の両方の意味を包含することを意図している。例えば、「細胞溶解を実質的に誘導しない」ＩｇＦｃは、細胞溶解を全く誘導しないかまたは細胞溶解をほとんど誘導しないＩｇＦｃを意味する。
量について本明細書で用いられる「約」という用語は、その量が、記述された量の１０％変動し得ることを示す。例えば、「約１００」は、９０～１１０の量を意味する。「約」が範囲を示す文脈で用いられる場合、範囲の下限値に用いられる「約」は、下限値よりも１０％低い値が下限値に含まれることを意味し、範囲の上限値に用いられる「約」は、上限値よりも１０％高い値が上限値に含まれることを意味する。例えば、約１００～約１０００は、範囲が９０～１１００まで広がることを意味する。
本明細書で用いられる「ＭＨＣ重鎖ポリペプチド」という用語は、ＴＭＰに存在するＭＨＣ重鎖ポリペプチドのドメインを総称して指す。例えば、図１７及び１８に示すように、ＭＨＣ重鎖ポリペプチドは、α１ドメイン、α２ドメイン及びα３ドメインを含み得る。
本開示をさらに説明する前に明らかにしておくべきことは、本開示は、記載された特定の実施形態に限定されるものではなく、それ自体、当然のことながら様々なものとなり得るということである。さらに明らかにしておくべきことは、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものであるから、本明細書で用いられる用語は、特定の実施形態を記載するためだけのものであり、限定を意図するものではないということである。
数値の範囲が示されている場合、文脈上明らかにそうでないことが示されていない限り、その範囲の上限と下限の間にある各数値、及びその他の記載されたまたは示された範囲内にある数値は、最小単位の１０分の１まで、本開示に包含されるものと解釈される。そのようなより小さな範囲の上限値及び下限値は、それぞれ独立してそのより小さな範囲に含まれ得、それらも本開示に包含される（ただし、記載された範囲内に特に除外された限界値があれば、それに従う）。記載された範囲が上限及び下限の一方または両方を含む場合、それらの上限及び下限の一方または両方を除いた範囲もまた、本開示の範囲内である。
別段の定義がない限り、本明細書で用いられるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法及び材料もまた、本開示の実施または試験において使用され得るが、好ましい方法及び材料がここに記載されている。本明細書で言及されるすべての刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。従って、刊行物が引用されることにより当該方法及び／または材料が開示及び記載されることになる。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられる単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかにそうでないことが示されない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「Ｔ細胞調節ポリペプチド（単数）」を言及する場合、それは、複数のそのようなポリペプチドを包含し、「前記免疫調節ポリペプチド（単数）」を言及する場合、それは、１つ以上の免疫調節ポリペプチド及び当業者に知られたその等価物などを言及していることを意味する。さらに留意すべきことは、特許請求の範囲は任意の必須でない要素を除外して作成し得るということである。このことは、特許請求の範囲において構成要件を記載するにあたり「のみ」「だけ」などの限定的な用語を用いたり「否定的」限定を行ったりすることの前提となるものである。
明らかなとおり、明確にするために別々の実施形態の文脈で記載されている本開示の特徴は、組み合わせて単一の実施形態とすることもできる。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で記載されている本開示の様々な特徴は、それぞれ別個にしてもよく、また任意の好適なサブコンビネーションにしてもよい。本開示に係る実施形態のすべての組み合わせは、本開示に具体的に包含されるものであり、各組み合わせ及びすべての組み合わせはそれぞれ明確に本明細書に開示されているとみなすことができる。加えて、様々な実施形態及びその要素のすべてのサブコンビネーションもまた、本開示に具体的に包含されるものであり、各サブコンビネーション及びすべてのサブコンビネーションはそれぞれ明確に本明細書に開示されているとみなすことができる。
本明細書に示される刊行物は、本出願の出願日前の開示のみについて提供されている。本明細書のいかなる内容も、かかる刊行物に先行する権利が本開示にないことを認めるものとして解釈すべきではない。さらに、提供された刊行物の公開日は、実際の公開日と異なる可能性があり、それぞれ確認する必要がある可能性がある。
詳細な説明
本開示は、ＭＯＤとエピトープ提示ペプチドとを含むＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。ＴＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用であり、かつ個体における免疫応答を調節するのに有用である。
本開示は、ＭＯＤとエピトープ提示ペプチドとを含むＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。ＴＭＰは、Ｔ細胞の活性を調節するのに有用であり、かつ個体における免疫応答を調節するのに有用である。
Ｔ細胞調節ポリペプチド
本開示は、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。ここで、ＴＭＰは、一本鎖ポリペプチドであり、当該一本鎖ポリペプチドは、ｉ）主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドに結合するとＴ細胞受容体（ＴＣＲ）にエピトープを提示するＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｉｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｖ）１つ以上のＭＯＤを含み、任意で、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場（スキャフォールド）を含む。後述するように、一本鎖ＴＭＰは、例えばＴＭＰがＩｇＦｃ（例えばＩｇＧ１Ｆｃ）を含む場合、二量体に自己集合することができる。２つの一本鎖ＴＭＰにおけるＩｇＦｃポリペプチド間にジスルフィド結合が自発的に形成され、２つの一本鎖ＴＭＰを結合してホモ二量体を形成する。
本開示は、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。ここで、ＴＭＰは、一本鎖ポリペプチドであり、当該一本鎖ポリペプチドは、ｉ）主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドに結合するとＴ細胞受容体（ＴＣＲ）にエピトープを提示するＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｉｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｉｖ）１つ以上のＭＯＤを含み、任意で、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドまたは非Ｉｇ足場（スキャフォールド）を含む。後述するように、一本鎖ＴＭＰは、例えばＴＭＰがＩｇＦｃ（例えばＩｇＧ１Ｆｃ）を含む場合、二量体に自己集合することができる。２つの一本鎖ＴＭＰにおけるＩｇＦｃポリペプチド間にジスルフィド結合が自発的に形成され、２つの一本鎖ＴＭＰを結合してホモ二量体を形成する。
本開示のＴＭＰは、ＴＭＰ内の異なるポリペプチドドメイン間の好ましくない相互作用の可能性を減らすために、ＴＭＰの構成要素間に、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカー（後述する）を含む。例えば、ある場合、一本鎖ＴＭＰは、ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間に剛性ペプチドリンカーを含む。剛性ペプチドリンカーはまた、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間に配置されてもよい。後述するように、剛性ペプチドリンカーを含むＴＭＰは、剛性ペプチドリンカーを含まない対照ＴＭＰに比べて、より高い熱安定性を有し得る。
あるいは、または追加的に、本開示のＴＭＰは、ＴＭＰ内の異なるポリペプチドドメイン間の好ましくない相互作用の可能性を減らすために、ＴＭＰの構成要素間に、少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカー（後述する）を含む。例えば、ある場合、一本鎖ＴＭＰは、ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含む。短い可動性ペプチドリンカーはまた、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間に配置されていてもよい。後述するように、短い可動性ペプチドリンカーを含むＴＭＰは、剛性ペプチドリンカーを含まない対照ＴＭＰと比較して、より高い熱安定性を有し得る。
ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｉｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤ、及びｖ）ＩｇＦｃポリペプチドを含む。ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）クラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチド、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤ、及びｖ）ＩｇＦｃポリペプチドを含む。後述するように、ペプチドリンカーが、これらの構成要素の２つ以上の間に配置されていてもよい。構成要素のこのような配置は、図１２においてＭＯＤ配置２と呼ばれる。
ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｉｉｉ）第２のＭＨＣポリペプチド、ｉｖ）ＩｇＦｃポリペプチド、及びｖ）１つ以上のＭＯＤを含む。ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｉｉ）クラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチド、ｉｖ）ＩｇＦｃポリペプチド、及びｖ）１つ以上のＭＯＤを含む。後述するように、ペプチドリンカーが、これらの構成要素の２つ以上の間に配置されていてもよい。構成要素のこのような配置は、図１２においてＭＯＤ配置３と呼ばれる。
ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチド、ｉｖ）第２のＭＨＣポリペプチド、及びｖ）ＩｇＦｃポリペプチドを含む。ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉｉ）第１のクラスＩ ＭＨＣポリペプチド、ｉｖ）第２のクラスＩ ＭＨＣポリペプチド、及びｖ）ＩｇＦｃポリペプチドを含む。ある場合、ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端への順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉｉ）β２Ｍポリペプチド、ｉｖ）クラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチド、及びｖ）ＩｇＦｃポリペプチドを含む。後述するように、ペプチドリンカーが、これらの構成要素の２つ以上の間に配置されていてもよい。構成要素のこのような配置は、図１２においてＭＯＤ配置４と呼ばれる。
ＭＯＤは、野生型（ｗｔ）免疫調節ポリペプチドまたはｗｔ免疫調節ポリペプチドの変異体のいずれかを含んでもよい。ＭＯＤが変異体を含む場合、当該ＭＯＤは、そのｃｏ－ＭＯＤに対する結合性が低下していてもよい（例えば、ｃｏ－ＭＯＤの１つ以上の鎖またはドメインに対する結合性が低下していてもよい）。このような場合、ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する低下した親和性とＫＲＡＳペプチドのＴＣＲに対する親和性とが合わさって、ＴＭＰの選択性が向上する可能性がある。
ＭＯＤとそのｃｏ－ＭＯＤとの結合親和性は、精製ＭＯＤと精製ｃｏ－ＭＯＤを用いたバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）により測定することができる。ＴＭＰに存在するＭＯＤとそのｃｏ－ＭＯＤとの結合親和性は、精製ＴＭＰ及びｃｏ－ＭＯＤを用いたＢＬＩにより測定することができる。ＢＬＩ法は当業者によく知られている。例えば、Ｌａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．２０（４）：４９８－５０７、及びＳｈａｈ ａｎｄ Ｄｕｎｃａｎ（２０１４）Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．１８：ｅ５１３８３を参照のこと。
本明細書において特に断りがない限り、ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性、またはＴＭＰ上のＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性は、２０２０年６月２５日に公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０／１３２１３８に記載されるようなＢＬＩを用いて測定される。例えば、その段落［００５６］～［００５７］を参照のこと。
ＫＲＡＳペプチド
本開示のＴＭＰは、ＫＲＡＳペプチドを含む。当該ＫＲＡＳペプチドは、それがＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＨＬＡ／ペプチド複合体）に存在する場合、ＫＲＡＳエピトープをＴ細胞（すなわち、Ｔ細胞の表面上に存在するＴＣＲ）に提示する。本明細書で用いられる「ＫＲＡＳペプチド」という用語は、それがＭＨＣ複合体に結合する際、ＴＣＲにＫＲＡＳエピトープを提示するペプチドを意味する。本明細書で使用される「ＫＲＡＳエピトープ」という用語は、ＫＲＡＳタンパク質上に存在するエピトープを意味する。本明細書で用いられる「ＫＲＡＳ」及び「ＫＲＡＳタンパク質」という用語は、同義であり、以下（ｉ）～（ｉｉｉ）のいずれか１つに存在するアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。（ｉ）ＫＲＡＳ４Ａポリペプチド、（ｉｉ）ＫＲＡＳ４Ｂ、及び（ｉｉｉ）ヒトのがんで生じる（ｉ）及び（ｉｉ）の変異体（例えば、突然変異型を含む）。本明細書で用いられる「ＫＲＡＳポリペプチド」という用語は、ＫＲＡＳタンパク質の全体または一部に存在するアミノ酸の配列を有するポリペプチドを意味するか、または、特定される場合、ＫＲＡＳタンパク質の全部もしくは一部またはヒトのがんで生じるその変異体（例えば、突然変異型を含む）の全部もしくは一部に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを意味する。
本開示のＴＭＰは、ＫＲＡＳペプチドを含む。当該ＫＲＡＳペプチドは、それがＭＨＣ／ペプチド複合体（例えば、ＨＬＡ／ペプチド複合体）に存在する場合、ＫＲＡＳエピトープをＴ細胞（すなわち、Ｔ細胞の表面上に存在するＴＣＲ）に提示する。本明細書で用いられる「ＫＲＡＳペプチド」という用語は、それがＭＨＣ複合体に結合する際、ＴＣＲにＫＲＡＳエピトープを提示するペプチドを意味する。本明細書で使用される「ＫＲＡＳエピトープ」という用語は、ＫＲＡＳタンパク質上に存在するエピトープを意味する。本明細書で用いられる「ＫＲＡＳ」及び「ＫＲＡＳタンパク質」という用語は、同義であり、以下（ｉ）～（ｉｉｉ）のいずれか１つに存在するアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。（ｉ）ＫＲＡＳ４Ａポリペプチド、（ｉｉ）ＫＲＡＳ４Ｂ、及び（ｉｉｉ）ヒトのがんで生じる（ｉ）及び（ｉｉ）の変異体（例えば、突然変異型を含む）。本明細書で用いられる「ＫＲＡＳポリペプチド」という用語は、ＫＲＡＳタンパク質の全体または一部に存在するアミノ酸の配列を有するポリペプチドを意味するか、または、特定される場合、ＫＲＡＳタンパク質の全部もしくは一部またはヒトのがんで生じるその変異体（例えば、突然変異型を含む）の全部もしくは一部に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを意味する。
ＫＲＡＳ（「ＫＲＡＳがん原遺伝子ＧＴＰアーゼ」、「キルステンラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ」、及び「Ｋ－Ｒａｓ Ｐ２１タンパク質」としても知られている）は、細胞増殖を制御するＧＴＰアーゼである。ＫＲＡＳは、変異すると、細胞増殖を制御できなくなり、がんを生じさせる。
野生型（正常、非がん関連）ＫＲＡＳポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有し得る。
野生型（正常、非がん関連）ＫＲＡＳポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有し得る。
ＫＲＡＳの変異型は、ある種のがんと関連しており、ＫＲＡＳの変異型の少なくとも一部は、ある種のがん細胞の表面に存在する。例えば、Ｐｒｉｏｒ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７２：２４５７、及びＷａｒｒｅｎ ａｎｄ Ｈｏｌｔ（２０１０）Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７１：２４５を参照のこと。配列番号１及び配列番号２において、アミノ酸Ｇ１２、Ｇ１３、Ｔ３５、Ｉ３６、Ｅ４９、Ｑ６１、Ｋ１２７、及びＡ１５６は、太字に下線で示されている。これらの残基の１つ以上の置換が、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連型に存在し得る。がん関連ＫＲＡＳポリペプチドは、以下ｉ）～ｖｉｉｉ）の１つ以上を含み得る。ｉ）Ｇ１２の置換（例えば、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２５、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｆ、またはＧ１２Ｄ）、ｉｉ）Ｇ１３の置換（例えば、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｖ、Ｇ１３Ｓ、またはＧ１３Ａ）、ｉｉｉ）Ｔ３５の置換（例えば、Ｔ３５Ｉ）、ｉｖ）Ｉ３６の置換（例えば、Ｉ３６ＬまたはＩ３６Ｍ）、ｖ）Ｅ４９の置換（例えば、Ｅ４９Ｋ）、ｖｉ）Ｑ６１の置換（例えば、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｐ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｋ、Ｑ６１Ｌ、またはＱ６１Ｋ）、ｖｉｉ）Ｋ１１７の置換（例えば、Ｋ１１７Ｎ）、及びｖｉｉｉ）Ａ１４６の置換（例えば、Ａ１４６ＴまたはＡ１４６Ｖ）。ここで、アミノ酸番号は、配列番号１及び配列番号２に示すとおりである。例えば、Ｕ．Ｓ．２０１９／０１９４１９２を参照のこと。
例えば、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列に対して、１つまたは複数のアミノ酸置換を有し得る。ある場合、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列に対して、単一のアミノ酸置換のみを有する。ある場合、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列に対して、２つのアミノ酸置換のみを有する。ある場合、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列に対して、３つのアミノ酸置換のみを有する。ある場合、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列に対して、４つのアミノ酸置換のみを有する。ある場合、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列に対して、５つのアミノ酸置換のみを有する。
例えば、ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｄ）（配列番号１に示すアミノ酸番号に基づき、アミノ酸位置１２においてＧからＤへの置換を有するＫＲＡＳポリペプチド）は、膵管腺がん（ＰＤＡＣ）に関連する。ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｖ）（配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸番号に基づき、アミノ酸位置１２においてＧからＶへの置換を有するＫＲＡＳポリペプチド）もまた、膵臓がんに関連する。ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｒ）（配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸番号に基づき、アミノ酸位置１２においてＧからＲへの置換を有するＫＲＡＳポリペプチド）もまた、膵臓がんに関連する。例えば、Ｗａｔｅｒｓ ａｎｄ Ｄｅｒ（２０１８）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｍｅｄ．８：（９）．ｐｉｉ：ａ０３１４３５．ｄｏｉ：１０．１１０１／ｃｓｈｐｅｒｓｐｅｃｔ．ａ０３１４３５を参照のこと。別の具体例として、ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）（配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸番号に基づき、アミノ酸位置１２においてＧからＣへの置換を有するＫＲＡＳポリペプチド）は、肺がん、例えば非小細胞肺がんに関連する。例えば、Ｒｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ １７：３３を参照のこと。ＫＲＡＳの他の変異型（例えば、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｃ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１３Ｖ）は、様々ながんに関連しており、そのようながんには、例えば、胆管がん、胆嚢がん、腺がん、直腸腺がん、子宮内膜がん、造血器腫瘍、及び肺がんが含まれる。例えば、Ｐｒｉｏｒ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７２：２４５７を参照のこと。
別の具体例として、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、ＫＲＡＳポリペプチド（例えば、配列番号１または配列番号２に示すアミノ酸配列を有するＫＲＡＳポリペプチド）のアミノ酸６１においてアミノ酸置換を有し得る。例えば、ＫＲＡＳポリペプチドのがん関連変異型は、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｒ、またはＱ６１Ｋのようなアミノ酸置換を有し得る。
一般に、本開示のＴＭＰに存在するＫＲＡＳペプチド／ＭＨＣ複合体は、少なくとも１００μＭ（例えば、少なくとも１０μＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、または少なくとも１ｎＭ）の親和性で、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に結合する。さらに、一般的に言えば、ＴＭＰは、そのＫＲＡＳペプチド／ＭＨＣ複合体に結合するＴＣＲとｃｏ－ＭＯＤとを有するＴ細胞に結合するが、この結合における親和性は、同じｃｏ－ＭＯＤとＫＲＡＳペプチド／ＭＨＣ複合体に実質的に結合しないＴＣＲとを有する別のＴ細胞に当該ＴＭＰが結合するときの親和性よりも大きい（例えば、２５％大きい）。例えば、ＫＲＡＳペプチド／ＭＨＣ複合体はＴＣＲに１０－７Ｍ未満の親和性で結合する。
ＴＭＰに存在するＫＲＡＳエピトープは、Ｔ細胞によって特異的に結合されるペプチドである。すなわち、このエピトープは、エピトープ特異的Ｔ細胞、すなわち、ＫＲＡＳエピトープに特異的なＴＣＲを有するＴ細胞によって特異的に結合される。エピトープ特異的Ｔ細胞は、ある基準アミノ酸配列を有するエピトープには結合するが、この基準アミノ酸配列と異なるエピトープには実質的に結合しない。例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞は、ある基準アミノ酸配列を有するエピトープと結合し、この基準アミノ酸配列と異なるエピトープとは、結合するとしても、１０－６Ｍ未満、１０－５Ｍ未満、または１０－４Ｍ未満の親和性で結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、少なくとも１０－７Ｍ、少なくとも１０－８Ｍ、少なくとも１０－９Ｍ、または少なくとも１０－１０Ｍの親和性で、特異的であるエピトープと結合することができる。
ある場合、好適なＫＲＡＳペプチドは、以下のＫＲＡＳアミノ酸配列（Ａ）～（Ｃ）の１つに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＫＲＡＳペプチドの少なくとも４アミノ酸長のペプチド、例えば、４アミノ酸長～約２０アミノ酸長（例えば．４アミノ酸（ａａ）長、５アミノ酸長、６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、及び２０アミノ酸長（９～１１アミノ酸長、６～１５アミノ酸長、８～１２アミノ酸長、５～１０アミノ酸長、１０～１５アミノ酸長、及び１５～２０アミノ酸長の範囲を含む））のペプチドである。
（Ａ）ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧ ＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴ ＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤ ＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹ ＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴ ＣＬＷＤＩＬＤＴＡＧ ＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱ ＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣ ＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦ ＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩ ＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰ ＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬ ＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡ ＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰ ＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱ ＧＶＤＤＡＦＹＴＬＶ ＲＥＩＲＫＨＫＥＫＭ ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫ ＳＫＴＫＣＶＩＭ（配列番号１）（ここで、ＫＲＡＳポリペプチドは、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して１つ以上（例えば、１、２、３、４、または５つ）のアミノ酸置換を含み、かつこの１つ以上のアミノ酸置換は、がんに関連する置換（例えば、がん細胞中のＫＲＡＳポリペプチドに存在する置換）を含み得る）、
（Ｂ）ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧ ＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴ ＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤ ＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹ ＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴ ＣＬＬＤＩＬＤＴＡＧ ＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱ ＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣ ＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦ ＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩ ＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰ ＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬ ＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡ ＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰ ＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱ ＲＶＥＤＡＦＹＴＬＶ ＲＥＩＲＱＹＲＬＫＫ ＩＳＫＥＥＫＴＰＧＣ ＶＫＩＫＫＣＩＩＭ（配列番号２）（ここで、ＫＲＡＳポリペプチドは、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して１つ以上（例えば、１、２、３、４、または５つ）のアミノ酸置換を含み、かつこの１つ以上のアミノ酸置換は、がんに関連する置換（例えば、がん細胞中のＫＲＡＳポリペプチドに存在する置換）を含み得る）、及び
（Ｃ）ＭＴＥＹ（Ｘ１）Ｌ（Ｘ２）（Ｘ３）（Ｘ４）ＧＡ（Ｘ５）（Ｘ６）ＶＧＫＳＡＬＴ ＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤ ＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹ ＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴ ＣＬＷＤＩＬＤＴＡＧ ＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱ ＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣ ＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦ ＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩ ＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰ ＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬ ＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡ ＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰ ＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱ ＧＶＤＤＡＦＹＴＬＶ ＲＥＩＲＫＨＫＥＫＭ ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫ ＳＫＴＫＣＶＩＭ（配列番号１０７）（ここで、Ｘ１は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり、Ｘ２は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、Ｘ３は、ＶａｌまたはＴｈｒであり、Ｘ４は、ＶａｌまたはＴｈｒであり、Ｘ５は、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌ、またはＳｅｒであり、かつＸ６は、Ｇｌｙ、Ｃｙｓ、またはＡｓｐであり、ここで、Ｘ５及びＸ６の一方または両方は、Ｃｙｓではない）。
（Ａ）ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧ ＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴ ＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤ ＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹ ＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴ ＣＬＷＤＩＬＤＴＡＧ ＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱ ＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣ ＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦ ＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩ ＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰ ＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬ ＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡ ＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰ ＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱ ＧＶＤＤＡＦＹＴＬＶ ＲＥＩＲＫＨＫＥＫＭ ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫ ＳＫＴＫＣＶＩＭ（配列番号１）（ここで、ＫＲＡＳポリペプチドは、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して１つ以上（例えば、１、２、３、４、または５つ）のアミノ酸置換を含み、かつこの１つ以上のアミノ酸置換は、がんに関連する置換（例えば、がん細胞中のＫＲＡＳポリペプチドに存在する置換）を含み得る）、
（Ｂ）ＭＴＥＹＫＬＶＶＶＧ ＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴ ＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤ ＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹ ＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴ ＣＬＬＤＩＬＤＴＡＧ ＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱ ＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣ ＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦ ＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩ ＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰ ＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬ ＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡ ＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰ ＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱ ＲＶＥＤＡＦＹＴＬＶ ＲＥＩＲＱＹＲＬＫＫ ＩＳＫＥＥＫＴＰＧＣ ＶＫＩＫＫＣＩＩＭ（配列番号２）（ここで、ＫＲＡＳポリペプチドは、配列番号１に示すアミノ酸配列に対して１つ以上（例えば、１、２、３、４、または５つ）のアミノ酸置換を含み、かつこの１つ以上のアミノ酸置換は、がんに関連する置換（例えば、がん細胞中のＫＲＡＳポリペプチドに存在する置換）を含み得る）、及び
（Ｃ）ＭＴＥＹ（Ｘ１）Ｌ（Ｘ２）（Ｘ３）（Ｘ４）ＧＡ（Ｘ５）（Ｘ６）ＶＧＫＳＡＬＴ ＩＱＬＩＱＮＨＦＶＤ ＥＹＤＰＴＩＥＤＳＹ ＲＫＱＶＶＩＤＧＥＴ ＣＬＷＤＩＬＤＴＡＧ ＱＥＥＹＳＡＭＲＤＱ ＹＭＲＴＧＥＧＦＬＣ ＶＦＡＩＮＮＴＫＳＦ ＥＤＩＨＨＹＲＥＱＩ ＫＲＶＫＤＳＥＤＶＰ ＭＶＬＶＧＮＫＣＤＬ ＰＳＲＴＶＤＴＫＱＡ ＱＤＬＡＲＳＹＧＩＰ ＦＩＥＴＳＡＫＴＲＱ ＧＶＤＤＡＦＹＴＬＶ ＲＥＩＲＫＨＫＥＫＭ ＳＫＤＧＫＫＫＫＫＫ ＳＫＴＫＣＶＩＭ（配列番号１０７）（ここで、Ｘ１は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、またはＬｅｕであり、Ｘ２は、ＶａｌまたはＬｅｕであり、Ｘ３は、ＶａｌまたはＴｈｒであり、Ｘ４は、ＶａｌまたはＴｈｒであり、Ｘ５は、Ｇｌｙ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌ、またはＳｅｒであり、かつＸ６は、Ｇｌｙ、Ｃｙｓ、またはＡｓｐであり、ここで、Ｘ５及びＸ６の一方または両方は、Ｃｙｓではない）。
好適なＫＲＡＳペプチドの非限定的な具体例として、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、及びＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。
好適なＫＲＡＳペプチドのさらなる非限定的な具体例として、ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。
好適なＫＲＡＳペプチドの非限定的な具体例として、ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３５）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。
好適なＫＲＡＳペプチドのさらなる非限定的な具体例として、ＫＬＶＶＶＧＡＧＤＶ（配列番号１３６）及びＫＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１３７）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。
好適なＫＲＡＳペプチドのさらなる非限定的な具体例として、ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。
好適なＫＲＡＳペプチドのさらなる非限定的な具体例として、ＶＶＶＧＡＧＧＶＧＫ（配列番号２２９）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、及びＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。このようなペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊０３：０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る。このようなペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＨＬＡ Ａ＊１１：０１重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る。ある場合、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、ＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）のような９または１０アミノ酸長のペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊３０：０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。ある場合、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）のような９または１０アミノ酸長のペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊６８：０１ＨＬＡ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。
好適なＫＲＡＳペプチドのさらなる非限定的な具体例として、アミノ酸配列ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）またはＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）を含むペプチドが挙げられ、ここで当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。このようなペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７：０２ＨＬＡ－Ｂ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る。
好適なＫＲＡＳペプチドのさらなる非限定的な具体例として、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＧＡＣＧＶＧＫＳＡ（配列番号２３０）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、及びＧＡＤＧＶＧＫＳＡ（配列番号２３１）からなる群から選択される配列を含むペプチドが挙げられ、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。ある場合、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）のような９アミノ酸長のペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＣ＊０１：０２ＨＬＡ－Ｃ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。ある場合、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）のような１０アミノ酸長のペプチド、またはＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）のような９アミノ酸長のペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＣ＊０３：０３ＨＬＡ－Ｃ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。ある場合、ＧＡＣＧＶＧＫＳＡ（配列番号２３０）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、またはＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）のような９アミノ酸長または１０アミノ酸長のペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＣ＊０３：０４ＨＬＡ－Ｃ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。ある場合、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）のような１０アミノ酸長のペプチド、またはＧＡＤＧＶＧＫＳＡ（配列番号２３１）のような９アミノ酸長のペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＣ＊０８：０２ＨＬＡ－Ｃ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。
ある場合、ＴＭＰは、上記のとおり、ＫＲＡＳポリペプチドのＧ１２Ｖ型に特異的なＴＣＲを有するＴ細胞の活性を調節する。このような場合、ＴＭＰに存在するＫＲＡＳペプチドは、例えば、以下のアミノ酸配列の１つを含むことができる。ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳ（配列番号１５２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５３）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬＴ（配列番号１５４）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶＧ（配列番号１５６）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、及びＫＬＶＶＶＧＡＶＧ（配列番号１５７）。ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である。
ある場合、ＴＭＰに存在するＫＲＡＳペプチドは、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、またはＨＬＡ－Ｇのアレルに特異的なエピトープを提示する。ある実施形態において、ＴＭＰに存在するＫＲＡＳペプチドは、ＨＬＡ－Ａ＊０１０１、Ａ＊０２０１、Ａ＊０２０３、Ａ＊０３０１、Ａ＊１１０１、Ａ＊２３０１、Ａ＊２４０２、Ａ＊２４０７、Ａ＊３１０１、Ａ＊３３０３、Ａ＊３４０１、及び／またはＡ＊６８０１に限定されるエピトープを提示する。ある実施形態において、ＴＭＰに存在するＫＲＡＳエピトープペプチドは、ＨＬＡ－Ｂ＊０７０２、Ｂ＊０８０１、Ｂ＊１５０２、Ｂ＊２７０５、Ｂ＊３８０２、Ｂ＊３８０２、Ｂ＊３９０１、Ｂ＊３９０２、Ｂ＊４００１、Ｂ＊４６０１、Ｂ＊５１０１、及び／またはＢ＊５３０１に限定されるエピトープを提示する。ある実施形態において、ＴＭＰに存在するＫＲＡＳエピトープペプチドは、Ｃ＊０１０２、Ｃ＊０３０３、Ｃ＊０３０４、Ｃ＊０４０１、Ｃ＊０６０２、Ｃ＊０７０１、Ｃ＊７０２、Ｃ＊０８０１、及び／またはＣ＊１５０２に限定されるエピトープを提示する。
非限定的な具体例として、ＫＲＡＳペプチドは、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、ＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）、ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）からなる群から選択されるペプチドを含み、ここで、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長であり、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊１１０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。このようなペプチドはまた、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊６８０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体と複合して、提示され得る。
非限定的な具体例として、ＫＲＡＳペプチドは、ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）からなる群から選択されるペプチドを含み、当該ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長であり、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊０２０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示する。
さらなる具体例として、以下に示すＫＲＡＳペプチドは、β２Ｍポリペプチド及びＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る。ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊３８０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ０７０２、Ｂ＊３８０１、またはＢ＊３９０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊５１０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７０２またはＢ＊３８０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７０２ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊０２０３またはＢ＊３９０２ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７０２、Ｂ＊２７０５、またはＢ＊３９０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７０２ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊３１０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７０２ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＡ＊０２０３ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊３８０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊０７０２ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）（これは、β２Ｍポリペプチド及びＢ＊３８０１ＨＬＡ－Ａ重鎖を含むＨＬＡ複合体に結合すると、エピトープを提示し得る）。
あるペプチド（例えば、ＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチド）が、クラスＩ ＨＬＡ（ＨＬＡ重鎖及びβ２Ｍポリペプチドを含む）に結合するかどうか、そして、ＨＬＡ複合体に結合したとき、エピトープをＴＣＲに効果的に提示できるかどうかは、多くの周知の方法のいずれかを用いて判定することができる。アッセイには、結合アッセイ及びＴ細胞活性化アッセイが含まれ、それらには、細胞ベースの結合アッセイ、生化学的結合アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、細胞毒性アッセイ、及びペプチド－ＨＬＡ四量体を用いた抗原特異的Ｔ細胞の検出が含まれる。このようなアッセイは、公開された科学文献ならびに公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１に記載されている。この公報の特異的結合アッセイに関する開示は、特に段落［００２１７］～［００２２５］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
別の具体例として、ペプチド－ＨＬＡ複合体の多量体（例えば、四量体）が、蛍光タグまたは重金属タグを伴って生成される。この多量体を用いて、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）またはマスサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）により、特異的Ｔ細胞を同定及び定量することができる。エピトープ特異的Ｔ細胞を検出すれば、ペプチド結合ＨＬＡ分子が抗原特異的Ｔ細胞のサブセット上にある特異的ＴＣＲに結合できることを示す直接的な証拠が得られる。例えば、Ｋｌｅｎｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６３を参照のこと。
ＭＨＣポリペプチド
上述のように、ＴＭＰはＭＨＣポリペプチドを含む。本開示のために、「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」という用語は、様々な種のＭＨＣポリペプチドを包含する意味を有する。様々な種のＭＨＣポリペプチドには、ヒトＭＨＣ（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも呼ばれる）ポリペプチド、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）ＭＨＣポリペプチド、及び他の哺乳動物種（例えば、ウサギ目、非ヒト霊長類、イヌ目、ネコ目、有蹄目（例えば、ウマ目、ウシ目、羊目、ヤギ目など））のＭＨＣポリペプチドなどがある。「ＭＨＣポリペプチド」という用語は、クラスＩ ＭＨＣポリペプチド（例えば、β－２ミクログロブリン及びＭＨＣクラスＩ重鎖）を包含する意味を有する。
上述のように、ＴＭＰはＭＨＣポリペプチドを含む。本開示のために、「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチド」という用語は、様々な種のＭＨＣポリペプチドを包含する意味を有する。様々な種のＭＨＣポリペプチドには、ヒトＭＨＣ（ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）とも呼ばれる）ポリペプチド、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）ＭＨＣポリペプチド、及び他の哺乳動物種（例えば、ウサギ目、非ヒト霊長類、イヌ目、ネコ目、有蹄目（例えば、ウマ目、ウシ目、羊目、ヤギ目など））のＭＨＣポリペプチドなどがある。「ＭＨＣポリペプチド」という用語は、クラスＩ ＭＨＣポリペプチド（例えば、β－２ミクログロブリン及びＭＨＣクラスＩ重鎖）を包含する意味を有する。
ある場合、第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩベータ－２ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖（Ｈ鎖）（ＭＨＣ－Ｈ）である。他の場合、第１のＭＨＣポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣポリペプチドは、β２Ｍポリペプチドである。ある場合、β２ＭとＭＨＣ－Ｈ鎖の両方がヒト由来である。すなわち、ＭＨＣ－Ｈ鎖は、ＨＬＡ重鎖またはその変異体である。特に明示されない限り、ＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩ重鎖の膜アンカードメイン（膜貫通領域）、または、得られるＴＭＰをそれが発現される細胞（例えば、哺乳動物細胞などの真核細胞）に固定するのに十分なＭＨＣクラスＩ重鎖の一部を含まない。ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖は、本来のＭＨＣクラスＩ重鎖に関連するシグナルペプチド、膜貫通ドメイン、または細胞内ドメイン（細胞質側末端）を含まない。したがって、例えば、ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖は、ＭＨＣクラスＩ重鎖のα１、α２、及びα３ドメインのみを含む。ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖は、約２７０アミノ酸長～約２９０アミノ酸長である。ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖は、２７０アミノ酸長、２７１アミノ酸長、２７２アミノ酸長、２７３アミノ酸長、２７４アミノ酸長、２７５アミノ酸長、２７６アミノ酸長、２７７アミノ酸長、２７８アミノ酸長、２７９アミノ酸長、２８０アミノ酸長、２８１アミノ酸長、２８２アミノ酸長、２８３アミノ酸長、２８４アミノ酸長、２８５アミノ酸長、２８６アミノ酸長、２８７アミノ酸長、２８８アミノ酸長、２８９アミノ酸長、または２９０アミノ酸長である。
ＭＨＣクラスＩ重鎖
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３～１１に示すヒトＨＬＡ重鎖ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列の全体または一部（例えば、５０、７５、１００、１５０、２００、または２５０個の連続するアミノ酸）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、ＭＨＣクラスＩ重鎖は、２７０アミノ酸長、２７１アミノ酸長、２７２アミノ酸長、２７３アミノ酸長、２７４アミノ酸長、２７５アミノ酸長、２７６アミノ酸長、２７７アミノ酸長、２７８アミノ酸長、２７９アミノ酸長、２８０アミノ酸長、２８１アミノ酸長、２８２アミノ酸長、２８３アミノ酸長、２８４アミノ酸長、２８５アミノ酸長、２８６アミノ酸長、２８７アミノ酸長、２８８アミノ酸長、２８９アミノ酸長、または２９０アミノ酸長である。ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３～１１に示すアミノ酸配列のいずれか１つについて１～３０、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、または２５～３０個のアミノ酸が挿入、欠失、及び／または置換（重鎖コンセンサス配列において可変であると示されている位置に加えて）されたものである。上述のように、ＭＨＣクラスＩ重鎖は、典型的には、膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインを含まない。一具体例として、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ヒトＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドのアミノ酸２５～３００（リーダー、膜貫通及び細胞質配列のすべて、または実質的にすべてを欠く）またはアミノ酸２５～３６５（リーダーを欠く）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３～１１に示すヒトＨＬＡ重鎖ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列の全体または一部（例えば、５０、７５、１００、１５０、２００、または２５０個の連続するアミノ酸）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、ＭＨＣクラスＩ重鎖は、２７０アミノ酸長、２７１アミノ酸長、２７２アミノ酸長、２７３アミノ酸長、２７４アミノ酸長、２７５アミノ酸長、２７６アミノ酸長、２７７アミノ酸長、２７８アミノ酸長、２７９アミノ酸長、２８０アミノ酸長、２８１アミノ酸長、２８２アミノ酸長、２８３アミノ酸長、２８４アミノ酸長、２８５アミノ酸長、２８６アミノ酸長、２８７アミノ酸長、２８８アミノ酸長、２８９アミノ酸長、または２９０アミノ酸長である。ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３～１１に示すアミノ酸配列のいずれか１つについて１～３０、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、または２５～３０個のアミノ酸が挿入、欠失、及び／または置換（重鎖コンセンサス配列において可変であると示されている位置に加えて）されたものである。上述のように、ＭＨＣクラスＩ重鎖は、典型的には、膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインを含まない。一具体例として、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、ヒトＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドのアミノ酸２５～３００（リーダー、膜貫通及び細胞質配列のすべて、または実質的にすべてを欠く）またはアミノ酸２５～３６５（リーダーを欠く）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣポリペプチドは、ヒトＭＨＣポリペプチドである（ヒトＭＨＣポリペプチドは「ヒト白血球抗原」（ＨＬＡ）ポリペプチドとも呼ばれる）。ある場合、ＴＭＰのＭＨＣポリペプチドは、クラスＩ ＨＬＡポリペプチド、例えばβ２－ミクログロブリンポリペプチド、またはクラスＩ ＨＬＡ重鎖ポリペプチドである。クラスＩ ＨＬＡ重鎖ポリペプチドとして、ＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｂ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｃ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅ重鎖ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｆ重鎖ポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇ重鎖ポリペプチドが挙げられる。
ある場合、ＴＭＰはＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドを含む。ＴＭＰに組み込まれ得るＨＬＡ－Ａ重鎖ペプチド配列またはその部分として、以下のアレルがあるが、これらに限定されるものではない。Ａ＊０１０１、Ａ＊０２０１、Ａ＊０３０１、Ａ＊１１０１、Ａ＊２３０１、Ａ＊２４０２、Ａ＊２４０７、Ａ＊３３０３、及びＡ＊３４０１。これらのアレルのいずれもが、位置８４、１３９、及び２３６の１つ以上において変異を有してもよい（図３～６に示すように、位置８４におけるチロシンからアラニンへの置換（Ｙ８４Ａ）、位置８４におけるチロシンからシステインへの置換（Ｙ８４Ｃ）、位置１３９におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ１３９Ｃ）、及び位置２３６におけるアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）から選択される変異を有してもよい）。さらに、これらのＨＬＡ－Ａアレルの配列の全体または一部（例えば、５０、７５、１００、１５０、２００、または２５０個の連続するアミノ酸）に対して少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）または１００％のアミノ酸配列同一性を有するＨＬＡ－Ａ配列を用いてもよい（例えば、それは、１～２５、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、または２５～３０個のアミノ酸が挿入、欠失、及び／または置換されたものであってもよい）。ある具体例が以下に示される。
ＨＬＡ－Ａ０２
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図３Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊０２０１」または単に「ＨＬＡ－Ａ０２」とも呼ばれる。ＷＯ２０１８／１１９１１４及びＷＯ２０２０／１３２１３８に記載されているように、ＴＭＰは、野生型ＨＬＡ－Ａ０２からの１つ以上の変異を含み得る。そのような変異は、ジスルフィド結合を形成し得るＣｙｓ残基を設けることを含む。ジスルフィド結合は、例えば、（ｉ）β２ＭとＭＨＣクラスＩ重鎖との間のもの、及び／または（ｉｉ）ＭＨＣ重鎖と、ペプチドエピトープをβ２Ｍポリペプチドに結合させるリンカーとの間のもの、及び／または（ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド内の鎖内ジスルフィド結合である。
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図３Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊０２０１」または単に「ＨＬＡ－Ａ０２」とも呼ばれる。ＷＯ２０１８／１１９１１４及びＷＯ２０２０／１３２１３８に記載されているように、ＴＭＰは、野生型ＨＬＡ－Ａ０２からの１つ以上の変異を含み得る。そのような変異は、ジスルフィド結合を形成し得るＣｙｓ残基を設けることを含む。ジスルフィド結合は、例えば、（ｉ）β２ＭとＭＨＣクラスＩ重鎖との間のもの、及び／または（ｉｉ）ＭＨＣ重鎖と、ペプチドエピトープをβ２Ｍポリペプチドに結合させるリンカーとの間のもの、及び／または（ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド内の鎖内ジスルフィド結合である。
このようなジスルフィド結合の形成を促進するために、重鎖ポリペプチドに１つ以上の非天然のＣｙｓ残基を設けることができる。例えば、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、以下のＡ）、Ｂ）またはＣ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
Ａ）図３Ｃに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４は、Ｃｙｓ－２３６と鎖内ジスルフィド結合を形成する）、または、
Ｂ）図３Ｄに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、または、
Ｃ）図３Ｅに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
Ａ）図３Ｃに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４は、Ｃｙｓ－２３６と鎖内ジスルフィド結合を形成する）、または、
Ｂ）図３Ｄに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、または、
Ｃ）図３Ｅに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
上述したように、ある場合、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図３Ｂに示すＨＬＡ－Ａ０２（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）アミノ酸配列（ここでアミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ＨＬＡ－Ａ１１（ＨＬＡ－Ａ＊１１０１）
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図４Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図４Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊１１０１」または単に「ＨＬＡ－Ａ１１」とも呼ばれる。変異体として、例えば、以下のＡ）～Ｄ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを挙げることができる。
Ａ）図４Ｂに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）、
Ｂ）図４Ｃに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
Ｃ）図４Ｄに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、及び
Ｄ）図４Ｅに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図４Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図４Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊１１０１」または単に「ＨＬＡ－Ａ１１」とも呼ばれる。変異体として、例えば、以下のＡ）～Ｄ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを挙げることができる。
Ａ）図４Ｂに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）、
Ｂ）図４Ｃに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
Ｃ）図４Ｄに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、及び
Ｄ）図４Ｅに示すＨＬＡ－Ａ１１（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
ＨＬＡ－Ａ２４（ＨＬＡ－Ａ＊２４０２）
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図５Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊２４０２」または単に「ＨＬＡ－Ａ２４」とも呼ばれる。変異体として、例えば、以下のＡ）～Ｄ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを挙げることができる。
Ａ）図５Ｂに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）のアミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）、
Ｂ）図５Ｃに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
Ｃ）図５Ｄに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６が、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、及び
Ｄ）図５Ｅに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図５Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図５Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊２４０２」または単に「ＨＬＡ－Ａ２４」とも呼ばれる。変異体として、例えば、以下のＡ）～Ｄ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを挙げることができる。
Ａ）図５Ｂに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）のアミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）、
Ｂ）図５Ｃに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
Ｃ）図５Ｄに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６が、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、及び
Ｄ）図５Ｅに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
ＨＬＡ－Ａ３３（ＨＬＡ－Ａ＊３３０３）
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図６Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図６Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊３３０３」または単に「ＨＬＡ－Ａ３３」とも呼ばれる。変異体として、例えば、以下のＡ）～Ｄ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを挙げることができる。
Ａ）図６Ｂに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）のアミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）、
Ｂ）図６Ｃに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
Ｃ）図６Ｄに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、及び
Ｄ）図６Ｅに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
ある場合、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、図６Ａに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むことができる。ある場合、ＴＭＰに含めるのに適したＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図６Ａに示すアミノ酸配列を含む。このＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、「ＨＬＡ－Ａ＊３３０３」または単に「ＨＬＡ－Ａ３３」とも呼ばれる。変異体として、例えば、以下のＡ）～Ｄ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを挙げることができる。
Ａ）図６Ｂに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６野生型）のアミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＴｙｒであり、アミノ酸２３６がＡｌａである）、
Ｂ）図６Ｃに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
Ｃ）図６Ｄに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４はＡｌａであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－２３６は、Ｒ１２Ｃ置換を含む変異型β２ＭポリペプチドのＣｙｓ－１２と鎖間ジスルフィド結合を形成する）、及び
Ｄ）図６Ｅに示すＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸１３９がＣｙｓである）（ある場合、Ｃｙｓ－８４がＣｙｓ－１３９と鎖内ジスルフィド結合を形成する）。
図７～９は、成熟ＨＬＡクラスＩ重鎖アミノ酸配列（リーダー配列または膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインを含まない）の配列比較を示す。図７Ａで並べられたアミノ酸配列は、以下のアレルのＨＬＡ－ＡクラスＩ重鎖である。Ａ＊０１０１、Ａ＊０２０１、Ａ＊０３０１、Ａ＊１１０１、Ａ＊２３０１、Ａ＊２４０２、Ａ＊２４０７、Ａ＊３３０３、及びＡ＊３４０１。図８Ａで並べられたアミノ酸配列は、以下のアレルのＨＬＡ－ＢクラスＩ重鎖である。Ｂ＊０７０２、Ｂ＊０８０１、Ｂ＊１５０２、Ｂ＊３８０２、Ｂ＊４００１、Ｂ＊４６０１、及びＢ＊５３０１。図９Ａで並べられたアミノ酸配列は、以下のアレルのＨＬＡ－ＣクラスＩ重鎖である。Ｃ＊０１０２、Ｃ＊０３０３、Ｃ＊０３０４、Ｃ＊０４０１、Ｃ＊０６０２、Ｃ＊０７０１、Ｃ＊０８０１、及びＣ＊１５０２。配列比較には位置（成熟タンパク質の位置８４と１３９）が示されており、これらの位置において、ＨＬＡ Ｈ鎖－β２Ｍ複合体を安定化させるジスルフィド結合を形成するためシステイン残基が導入（例えば置換により）されてもよい。また、配列比較には、位置２３６（成熟ポリペプチドの）が示され、この位置は、β２Ｍ（例えば、アミノ酸１２において）と鎖間ジスルフィド結合を形成し得るシステイン残基で置換されてもよい。残基８４、１３９及び２３６に隣接するボックスは、５アミノ酸群を示しており、それらは、ａａｃ１（アミノ酸クラスター１）、ａａｃ２（アミノ酸クラスター２）、ａａｃ３（アミノ酸クラスター３）、ａａｃ４（アミノ酸クラスター４）、ａａｃ５（アミノ酸クラスター５）、及びａａｃ６（アミノ酸クラスター６）で示される６組の５残基のいずれかの側にある。５残基は、（ｉ）任意の天然に存在するアミノ酸、または（ｉｉ）プロリンもしくはグリシンを除く任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択される１～５個のアミノ酸で置換されていてもよい。
図７Ａ、８Ａ及び９Ａは、それぞれ成熟ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－ＣクラスＩ重鎖のアミノ酸配列の配列比較を示す。これらの配列は、成熟タンパク質の細胞外部分（リーダー配列、膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインを含まない）について示されている。アミノ酸残基８４、１３９、及び２３６、ならびにそれらの隣接残基（ａａｃ１～ａａｃ６）の位置も示している。隣接残基は、（ｉ）任意の天然に存在するアミノ酸、または（ｉｉ）プロリンもしくはグリシンを除く任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択される１～５個のアミノ酸で置換されていてもよい。図７Ｂ、８Ｂ、及び９Ｂは、図７Ａ、８Ａ、及び９Ａにそれぞれ示したＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃ配列についてコンセンサスアミノ酸配列を示している。コンセンサス配列は、可変アミノ酸の位置を「Ｘ」残基として連番で示し、アミノ酸８４、１３９及び２３６の位置に二重下線を引いている。
図７Ａについて、ある場合、ｉ）ａａｃ１（アミノ酸クラスター１）は、アミノ酸配列ＧＴＬＲＧ（配列番号１５８）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、Ｌが、Ｉ、Ｖ、ＡまたはＦで置換）された配列であってもよく、ｉｉ）ａａｃ２（アミノ酸クラスター２）は、アミノ酸配列ＹＮＱＳＥ（配列番号１５９）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、NがＱで置換、ＱがＮで置換、及び／またはＥがＤで置換）された配列であってもよく、ｉｉｉ）ａａｃ３（アミノ酸クラスター３）は、アミノ酸配列ＴＡＡＤＭ（配列番号１６０）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えばＴがＳで置換、ＡがＧで置換、ＤがＥで置換、及び／またはＭがＬ、Ｖ、またはＩで置換）された配列であってもよく、ｉｖ）ａａｃ４（アミノ酸クラスター４）は、アミノ酸配列ＡＱＴＴＫ（配列番号１６１）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＡがＧで置換、ＱがＮで置換、またはＴがＳで置換、及び／またはＫがＲまたはＱで置換）された配列であってもよく、ｖ）ａａｃ５（アミノ酸クラスター５）は、アミノ酸配列ＶＥＴＲＰ（配列番号１６２）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＶがＩまたはＬで置換、ＥがＤで置換、ＴがＳで置換、及び／またはＲがＫで置換）された配列であってもよく、及び／または、ｖｉ）ａａｃ６（アミノ酸クラスター６）は、アミノ酸配列ＧＤＧＴＦ（配列番号１６３）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＤがＥで置換、ＴがＳで置換、またはＦがＬ、Ｗ、またはＹで置換）された配列であってもよい。
図８Ａについて、ある場合、ｉ）ａａｃ１（アミノ酸クラスター１）は、アミノ酸配列ＲＮＬＲＧ（配列番号１６４）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＮがＴまたはＩで置換、及び／またはＬがＡで置換、及び／または第２のＲがＬで置換、及び／またはＧがＲで置換）された配列であってもよく、ｉｉ）ａａｃ２（アミノ酸クラスター２）は、アミノ酸配列ＹＮＱＳＥ（配列番号１５９）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＮがＱで置換、ＱがＮで置換、及び／またはＥがＤで置換）された配列であってもよく、ｉｉｉ）ａａｃ３（アミノ酸クラスター３）は、アミノ酸配列ＴＡＡＤＴ（配列番号１６５）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、第１のＴがＳで置換、及び／またはＡがＧで置換、及び／またはＤがＥで置換、及び／または第２のＴがＳで置換）された配列であってもよく、ｉｖ）ａａｃ４（アミノ酸クラスター４）は、アミノ酸配列ＡＱＩＴＱ（配列番号１６６）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＡがＧで置換、及び／または第１のＱがＮで置換、及び／またはＩがＬまたはＶで置換、及び／またはＴがＳで置換、及び／または第２のＱがＮで置換）された配列であってもよく、ｖ）ａａｃ５（アミノ酸クラスター５）は、アミノ酸配列ＶＥＴＲＰ（配列番号１６２）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＶがＩまたはＬで置換、ＥがＤで置換、ＴがＳで置換、及び／またはＲがＫで置換）された配列であってもよく、及び／またはｖｉ）ａａｃ６（アミノ酸クラスター６）は、アミノ酸配列ＧＤＲＴＦ（配列番号１６７）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＤがＥで置換、及び／またはＴがＳで置換、及び／またはＲがＫまたはＨで置換、及び／またはＦがＬ、Ｗ、またはＹで置換）された配列であってもよい。
図９Ａについて、ある場合、ｉ）ａａｃ１（アミノ酸クラスター１）は、アミノ酸配列ＲＮＬＲＧ（配列番号１６４）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＮがＫで置換、及び／またはＬがＡまたはＩで置換、及び／または第２のＲがＨで置換、及び／またはＧがＴまたはＳで置換）された配列であってもよく、ｉｉ）ａａｃ２（アミノ酸クラスター２）は、アミノ酸配列ＹＮＱＳＥ（配列番号１５９）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＮがＱで置換、ＱがＮで置換、及び／またはＥがＤで置換）された配列であってもよく、ｉｉｉ）ａａｃ３（アミノ酸クラスター３）は、アミノ酸配列ＴＡＡＤＴ（配列番号１６５）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、第１のＴがＳで置換、及び／またはＡがＧで置換、及び／またはＤがＥで置換、及び／または第２のＴがＳで置換）された配列であってもよく、ｉｖ）ａａｃ４（アミノ酸クラスター４）は、アミノ酸配列ＡＱＩＴＱ（配列番号１６６）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＡがＧで置換、及び／または第１のＱがＮで置換、及び／またはＩがＬで置換、及び／または第２のＱがＮまたはＫで置換）された配列であってもよく、ｖ）ａａｃ５（アミノ酸クラスター５）は、アミノ酸配列ＶＥＴＲＰ（配列番号１６２）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＶがＩまたはＬで置換、ＥがＤで置換、ＴがＳで置換、及び／またはＲがＫまたはＨで置換）された配列であってもよく、及び／またはｖｉ）ａａｃ６（アミノ酸クラスター６）は、アミノ酸配列ＧＤＧＴＦ（配列番号１６３）であってもよいし、またはその配列において１もしくは２個のアミノ酸が欠失または他の天然に存在するアミノ酸で置換（例えば、ＤがＥで置換、及び／またはＴがＳで置換、及び／またはＦがＬ、Ｗ、またはＹで置換）された配列であってもよい。
非古典的ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇ ＭＨＣクラスＩ重鎖
ある場合、ＴＭＰは、非古典的ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを含む。ＴＭＰに組み込むことができる非古典的ＨＬＡ重鎖ポリペプチドまたはその部分には、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのアレルのものがあるが、それらに限定されるものではない。ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ重鎖ポリペプチド（ならびにＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのアレル）についてのアミノ酸配列は、以下のワールドワイドウェブ上で見ることができる。ｈｌａ．ａｌｌｅｌｅｓ．ｏｒｇ／ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ、ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｅｂｉ（ｄｏｔ）ａｃ（ｄｏｔ）ｕｋ）（これはｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＥＭＢＬ）の一部門である）、及びｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎｃｂｉ（ｄｏｔ）ｎｌｍ（ｄｏｔ）ｎｉｈ（ｄｏｔ）ｇｏｖ）。
ある場合、ＴＭＰは、非古典的ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを含む。ＴＭＰに組み込むことができる非古典的ＨＬＡ重鎖ポリペプチドまたはその部分には、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのアレルのものがあるが、それらに限定されるものではない。ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ重鎖ポリペプチド（ならびにＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、及びＨＬＡ－Ｃのアレル）についてのアミノ酸配列は、以下のワールドワイドウェブ上で見ることができる。ｈｌａ．ａｌｌｅｌｅｓ．ｏｒｇ／ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ、ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｅｂｉ（ｄｏｔ）ａｃ（ｄｏｔ）ｕｋ）（これはｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＥＭＢＬ）の一部門である）、及びｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎｃｂｉ（ｄｏｔ）ｎｌｍ（ｄｏｔ）ｎｉｈ（ｄｏｔ）ｇｏｖ）。
好適なＨＬＡ－Ｅアレルの非限定的な具体例として、ＨＬＡ－Ｅ＊０１０１（ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０３（ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０３：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０４、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０５、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０６、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０７、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０９、及びＨＬＡ－Ｅ＊０１：１０が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらのうち、アイソフォームＨＬＡ－Ｅ＊０１０１及びＨＬＡ－Ｅ＊０１．０３は、高頻度で見られるアレルであり、わずか１アミノ酸（位置１０７のＡｒｇまたはＧｌｙ）が異なるので、特に注目される。例えば、好適なＨＬＡ－Ｅ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列を図１８Ａ～１８Ｄに示す。図１８Ａは、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１（野生型）のアミノ酸配列を示し、図１８Ｂは、Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３４６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１のアミノ酸配列を示し、図１８Ｃは、ＨＬＡ－Ｅ＊０１：０３（野生型）のアミノ酸配列を示し、図１８Ｄは、Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３４６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ｅ＊０１：０３のアミノ酸配列を示す。
好適なＨＬＡ－Ｆアレルの非限定的な具体例として、ＨＬＡ－Ｆ＊０１０１（ＨＬＡ－Ｆ＊０１：０１：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｆ＊０１：０２、ＨＬＡ－Ｆ＊０１：０３（ＨＬＡ－Ｆ＊０１：０３：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｆ＊０１：０４、ＨＬＡ－Ｆ＊０１：０５、及びＨＬＡ－Ｆ＊０１：０６が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好適なＨＬＡ－Ｇアレルの非限定的な具体例として、ＨＬＡ－Ｇ＊０１０１（ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０１：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０２、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０３（ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０３：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４（ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４：０１：０１）、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０６、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０７、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０８、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０９、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１０、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１０、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１１、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１２、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１４、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１５、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１６、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１７、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１８、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：１９、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：２０、及びＨＬＡ－Ｇ＊０１：２２が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらのうち、アイソフォームＨＬＡ－Ｇ＊０１０１（ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０１：０１：０１）及びＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４（ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４：０１：０１）は、高頻度に見られるアレルであるため、特に注目される。例えば、好適なＨＬＡ－Ｇ重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列は、図１９Ａ～１９Ｄ示される。図１９Ａは、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０１（野生型）のアミノ酸配列を示し、図１９Ｂは、Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３４６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ｇ＊０１：０１のアミノ酸配列を示し、図１９Ｃは、ＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４（野生型）のアミノ酸配列を示し、図１９Ｄは、Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３４６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４のアミノ酸配列を示す。
リーダー配列、膜貫通配列、及び細胞質配列のすべてまたは実質的にすべてを有しないそれらのＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ及びＨＬＡ－Ｇアレルのコンセンサス配列が、図１０に示され、そして図１１において、上記のＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃアレルのコンセンサス配列と比較されている。
図１０は、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇの各々についてのコンセンサス配列を示し、可変アミノ酸位置は「Ｘ」残基として連番で示され、アミノ酸８４、１３９及び２３６の位置には二重下線が引かれている。
図１１は、図７～１１に示すＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及びＨＬＡ－Ｇのコンセンサスアミノ酸配列を比較して示している。各配列中の可変残基は、連番を削除して「Ｘ」として記載されている。アミノ酸８４、１３９及び２３６の位置は、隣接する５アミノ酸クラスターとともに示されている。５アミノ酸クラスターは、（ｉ）任意の天然に存在するアミノ酸、または（ｉｉ）プロリンもしくはグリシンを除く任意の天然に存在するアミノ酸から独立して選択される１～５個のアミノ酸で置換されていてもよい。
上記のＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、及び／またはＨＬＡ－Ｇアレルはいずれも、コンセンサス配列について、図１１に示すような位置８４、１３９、及び／または２３６のうちの１つ以上で置換を有していてもよい。ある場合、置換は、位置８４のチロシンからアラニンへの置換（Ｙ８４Ａ）またはシステインへの置換（Ｙ８４Ｃ）、あるいはＨＬＡ－Ｆの場合、Ｒ８４Ａ置換またはＲ８４Ｃ置換、位置１３９のアラニンからシステインへの置換（Ａ１３９Ｃ）、あるいはＨＬＡ－Ｆの場合、Ｖ１３９Ｃ、ならびに位置２３６のアラニンからシステインへの置換（Ａ２３６Ｃ）から選択することができる。さらに、ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ及び／またはＨＬＡ－Ｇ配列であって、図１１に示すそれらのコンセンサス配列の全体または一部（例えば、５０、７５、１００、１５０、２００、または２５０個の連続するアミノ酸）に対して少なくとも７５％（例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）または１００％のアミノ酸配列同一性を有するＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ及び／またはＨＬＡ－Ｇ配列を用いてもよい（例えば、その配列は、そこに記載される可変残基における変化の他に、１～２５、１～５、５～１０、１０～１５、１５～２０、２０～２５、または２５～３０個のアミノ酸の挿入、欠失、及び／または置換を有してもよい）。
β２－ミクログロブリン
ＴＭＰのβ２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドは、ヒトβ２Ｍポリペプチド、非ヒト霊長類β２Ｍポリペプチド、ネズミβ２Ｍポリペプチドなどであり得る。ある具体例において、β２Ｍポリペプチドは、図１Ａに示すアミノ酸配列（野生型ヒトβ２Ｍ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、ＴＭＰに存在するβ２Ｍポリペプチドは、図１Ａ（野生型ヒトβ２Ｍ）に示すアミノ酸配列を含む。
ＴＭＰのβ２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドは、ヒトβ２Ｍポリペプチド、非ヒト霊長類β２Ｍポリペプチド、ネズミβ２Ｍポリペプチドなどであり得る。ある具体例において、β２Ｍポリペプチドは、図１Ａに示すアミノ酸配列（野生型ヒトβ２Ｍ）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、ＴＭＰに存在するβ２Ｍポリペプチドは、図１Ａ（野生型ヒトβ２Ｍ）に示すアミノ酸配列を含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＨＣポリペプチドは、参照ＭＨＣポリペプチド（ここで、参照ＭＨＣポリペプチドは野生型ＭＨＣポリペプチドであり得る）に対して単一のアミノ酸置換を有しており、ここで、単一のアミノ酸置換は、システイン（Ｃｙｓ）残基によるアミノ酸置換である。このようなシステイン残基は、ＴＭＰのＭＨＣ重鎖に存在する天然または非天然のシステイン残基とジスルフィド結合を形成することができる。本明細書において、ＭＨＣクラスＩポリペプチドにおける「非天然のＣｙｓ残基」という表現は、そのポリペプチドが、対応する野生型ポリペプチドにはＣｙｓが存在しない位置にＣｙｓ残基を有することを意味する。これは、野生型の配列に存在するアミノ酸の代わりにシステインを置換する一般的なタンパク質工学によって達成することができる。
ある場合、ＴＭＰに存在するβ２Ｍポリペプチドは、図１Ｂに示すアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここでアミノ酸１２がＣｙｓである。すなわち、β２Ｍは、Ｒ１２Ｃ置換の結果として、位置１２に非天然のＣｙｓを有する。ある場合、ＴＭＰに存在するβ２Ｍポリペプチドは、図１Ｂに示すアミノ酸配列を含む。
鎖内ジスルフィド結合及び鎖間ジスルフィド結合
ある場合、ＴＭＰは、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有する。図１３は、そのようなジスルフィド結合されたＴＭＰの模式図を示す。さらに、ＴＭＰがＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、１つ以上の鎖間ジスルフィド結合により２つのＴＭＰ中にあるＩｇＦｃポリペプチドを結合してホモ二量体を形成するように、ＴＭＰを二量体化することができる。ある場合、二量体化ＴＭＰは、ｉ）鎖間ジスルフィド結合（例えば、２つのＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチド間の１つまたは２つのジスルフィド結合）、及びｉｉ）１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有する。
ある場合、ＴＭＰは、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有する。図１３は、そのようなジスルフィド結合されたＴＭＰの模式図を示す。さらに、ＴＭＰがＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、１つ以上の鎖間ジスルフィド結合により２つのＴＭＰ中にあるＩｇＦｃポリペプチドを結合してホモ二量体を形成するように、ＴＭＰを二量体化することができる。ある場合、二量体化ＴＭＰは、ｉ）鎖間ジスルフィド結合（例えば、２つのＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチド間の１つまたは２つのジスルフィド結合）、及びｉｉ）１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有する。
ＴＭＰのＫＲＡＳペプチドがＣｙｓを有するリンカーによってβ２Ｍポリペプチドに結合されている場合、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合の少なくとも１つは、リンカー中のＣｙｓを、ＴＭＰ中のＭＨＣクラスＩ重鎖におけるＣｙｓに結合する。ある場合、ＴＭＰは、β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ及びＭＨＣクラスＩ重鎖中のＣｙｓを有し、そしてＴＭＰは、β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓをＭＨＣクラスＩ重鎖中のＣｙｓに結合する鎖内ジスルフィド結合を有する。ある場合、ＴＭＰは、ａ）第１の鎖内ジスルフィド結合であって、ｉ）ＴＭＰ中のＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のリンカーに存在するＣｙｓとｉｉ）ＴＭＰ中のＭＨＣクラスＩ重鎖に存在する第１のＣｙｓとを結合する当該第１の鎖内ジスルフィド結合、及びｂ）第２の鎖内ジスルフィド結合であって、ｉ）ＴＭＰ中のβ２Ｍポリペプチドに存在するＣｙｓとｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖に存在する第２のＣｙｓとを結合する当該第２の鎖内ジスルフィド結合を有する。Ｃｙｓを含むリンカーについては、以下でさらに詳しく説明する。
一般に、ＴＭＰにおいてジスルフィド結合の可能性がある位置は、ＴＭＰの残基が５オングストローム以下の距離で離れている場所である。このような位置は、Ｃｙｓ残基が（もし天然に存在しない場合）ポリペプチドに存在する残基と置換できる可能性のある位置を意味する。例えば、ＴＭＰ中のＣｙｓ残基は、一般にＴＭＰ中で互いに約５オングストローム以下の距離にある２つのＣｙｓ残基間のジスルフィド結合を介して結合される可能性がある。ある場合、そのようなＣｙｓ残基の一方または両方が天然に存在するものではない。ＴＭＰのβ２Ｍポリペプチド及びＭＨＣクラスＩ重鎖のアミノ酸のうち、互いに５オングストローム以上離れていないアミノ酸は、Ｃｙｓで置換されるとＴＭＰ中でジスルフィド結合を形成し得るアミノ酸の代表例である。同様に、ジスルフィド結合は、リンカー中のＣｙｓ残基と、ＭＨＣ重鎖中の天然または非天然のＣｙｓ残基との間に形成することができ、この場合、２つのＣｙｓ残基は互いに約５オングストローム以上離れていない。ただし、約５オングストローム以下離れている残基対がすべて、ジスルフィド結合の形成に適しているわけではなく、あるいは、生じるＴＭＰを安定化させるジスルフィド結合をもたらすわけではなく、あるいは、発現の増強をもたらすわけではない。
ＴＭＰは、例えば、
ｉ）ＫＲＡＳペプチド（例えば、４アミノ酸長～約２５アミノ酸長のＫＲＡＳペプチドであって、ＭＨＣポリペプチドと複合体化されるときに、ＴＣＲによって結合されるＫＲＡＳペプチド）と、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドと、
ｉｉｉ）前記ＫＲＡＳペプチドと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のペプチドリンカー（ここで、前記ペプチドリンカーはＣｙｓ残基を有し、かつ前記第１のＭＨＣポリペプチドはＣｙｓ残基を導入するアミノ酸置換を有するβ２Ｍポリペプチドである）と、
ｉｖ）第２のＭＨＣポリペプチド（ここで、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３６Ｃ置換を有するクラスＩ重鎖であり（ＨＬＡ－Ａ＊０２０１（図３Ａに示す）のアミノ酸番号または他のクラスＩ重鎖アレル中の対応する位置におけるアミノ酸番号に基づく）、前記ＴＭＰは、前記ペプチドリンカー（前記ＫＲＡＳペプチドと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のペプチドリンカー）中のＣｙｓ残基と、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸位置８４におけるＣｙｓ残基との間の第１の鎖内ジスルフィド結合を有し、かつ、前記ＴＭＰは、前記β２Ｍポリペプチド中の導入されたＣｙｓ残基と、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸位置２３６におけるＣｙｓ残基との間の第２の鎖内ジスルフィド結合を有する）と、
ｖ）少なくとも１つのＭＯＤとを含み、任意で、
ｖｉ）ＩｇＦｃポリペプチドを含んでもよい。このような鎖内ジスルフィド結合は、図１３に模式的に示されている。
ｉ）ＫＲＡＳペプチド（例えば、４アミノ酸長～約２５アミノ酸長のＫＲＡＳペプチドであって、ＭＨＣポリペプチドと複合体化されるときに、ＴＣＲによって結合されるＫＲＡＳペプチド）と、
ｉｉ）第１のＭＨＣポリペプチドと、
ｉｉｉ）前記ＫＲＡＳペプチドと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のペプチドリンカー（ここで、前記ペプチドリンカーはＣｙｓ残基を有し、かつ前記第１のＭＨＣポリペプチドはＣｙｓ残基を導入するアミノ酸置換を有するβ２Ｍポリペプチドである）と、
ｉｖ）第２のＭＨＣポリペプチド（ここで、前記第２のＭＨＣポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３６Ｃ置換を有するクラスＩ重鎖であり（ＨＬＡ－Ａ＊０２０１（図３Ａに示す）のアミノ酸番号または他のクラスＩ重鎖アレル中の対応する位置におけるアミノ酸番号に基づく）、前記ＴＭＰは、前記ペプチドリンカー（前記ＫＲＡＳペプチドと前記第１のＭＨＣポリペプチドとの間のペプチドリンカー）中のＣｙｓ残基と、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸位置８４におけるＣｙｓ残基との間の第１の鎖内ジスルフィド結合を有し、かつ、前記ＴＭＰは、前記β２Ｍポリペプチド中の導入されたＣｙｓ残基と、前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドのアミノ酸位置２３６におけるＣｙｓ残基との間の第２の鎖内ジスルフィド結合を有する）と、
ｖ）少なくとも１つのＭＯＤとを含み、任意で、
ｖｉ）ＩｇＦｃポリペプチドを含んでもよい。このような鎖内ジスルフィド結合は、図１３に模式的に示されている。
Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３６Ｃ置換（ＨＬＡ－Ａ＊０２０１（図３Ａに示す）のアミノ酸番号または他のクラスＩ重鎖アレル中の対応する位置におけるアミノ酸番号に基づく）を有するＭＨＣクラスＩ重鎖の非限定的な具体例は、図４Ｃ、図５Ｃ、及び図６Ｃに示されている。
ある場合、ＴＭＰは、ＨＬＡ－ＡクラスＩ重鎖ポリペプチドを含む。ある場合、ＴＭＰ（例えば、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有するＴＭＰ）に存在するＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、図７Ａに示すＨＬＡ－Ａ＊０１０１、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１、ＨＬＡ－Ａ＊０３０１、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１、ＨＬＡ－Ａ＊２３０１、ＨＬＡ－Ａ＊２４０２、ＨＬＡ－Ａ＊２４０７、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３、またはＨＬＡ－Ａ＊３４０１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、当該ＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、ｉ）Ｙ８４Ｃ置換（ここで、アミノ酸２３６はＡｌａ）（例えば、図３Ｂ、図４Ｂ、図５Ｂ、及び図６Ｂに示す）、ｉｉ）Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３６Ｃ置換（例えば、図３Ｃ、図４Ｃ、図５Ｃ、及び図６Ｃに示す）、またはｉｉｉ）Ｙ８４Ａ置換及びＡ２３６Ｃ置換（例えば、図３Ｄ、図４Ｄ、図５Ｄ、及び図６Ｄに示す）を有する。
ある場合、ＴＭＰに存在するＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、以下の配列（ｉ）～（ｉｖ）の１つに対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
（ｉ）図３Ｃ（配列番号２０）に示すＨＬＡ－Ａ＊０２０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図４Ｃ（配列番号２５）に示すＨＬＡ－Ａ＊１１０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉｉ）図５Ｃ（配列番号３０）に示すＨＬＡ－Ａ＊２４０２（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｖ）図６Ｃ（配列番号３５）に示すＨＬＡ－Ａ＊３３０３（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
（ｉ）図３Ｃ（配列番号２０）に示すＨＬＡ－Ａ＊０２０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図４Ｃ（配列番号２５）に示すＨＬＡ－Ａ＊１１０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉｉ）図５Ｃ（配列番号３０）に示すＨＬＡ－Ａ＊２４０２（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｖ）図６Ｃ（配列番号３５）に示すＨＬＡ－Ａ＊３３０３（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
ある場合、ＴＭＰに存在するＨＬＡ－Ａ重鎖ポリペプチドは、以下の配列（ｉ）～（ｖ）のいずれか１つに対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
（ｉ）図７Ａ（配列番号３８）に示すＨＬＡ－Ａ＊０１０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図７Ａ（配列番号４０）に示すＨＬＡ－Ａ＊０３０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉｉ）図７Ａ（配列番号４２）に示すＨＬＡ－Ａ＊２３０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｖ）図７Ａ（配列番号４４）に示すＨＬＡ－Ａ＊２４０７アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｖ）図７Ａ（配列番号４６）に示すＨＬＡ－Ａ＊３４０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
（ｉ）図７Ａ（配列番号３８）に示すＨＬＡ－Ａ＊０１０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図７Ａ（配列番号４０）に示すＨＬＡ－Ａ＊０３０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉｉ）図７Ａ（配列番号４２）に示すＨＬＡ－Ａ＊２３０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｖ）図７Ａ（配列番号４４）に示すＨＬＡ－Ａ＊２４０７アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｖ）図７Ａ（配列番号４６）に示すＨＬＡ－Ａ＊３４０１アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
ある場合、ＴＭＰはＨＬＡ－ＥクラスＩ重鎖ポリペプチドを含む。ある場合、ＴＭＰ（例えば、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有するＴＭＰ）に存在するＨＬＡ－Ｅ重鎖ポリペプチドは、図１８Ａ～１８Ｄに示すアミノ酸配列のいずれか１つに対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＨＬＡ－Ｅ重鎖ポリペプチドは、以下の配列（ｉ）及び（ｉｉ）の１つに対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
（ｉ）図１８Ｂ（配列番号１００）に示すＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図１８Ｄ（配列番号１０２）に示すＨＬＡ－Ｅ＊０１：０３（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
（ｉ）図１８Ｂ（配列番号１００）に示すＨＬＡ－Ｅ＊０１：０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図１８Ｄ（配列番号１０２）に示すＨＬＡ－Ｅ＊０１：０３（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
ある場合、ＴＭＰはＨＬＡ－ＧクラスＩ重鎖ポリペプチドを含む。ある場合、ＴＭＰ（例えば、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を有するＴＭＰ）に存在するＨＬＡ－Ｇ重鎖ポリペプチドは、図１９Ａ～１９Ｄに示すアミノ酸配列のいずれか１つに対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＨＬＡ－Ｇ重鎖ポリペプチドは、以下の配列（ｉ）及び（ｉｉ）の１つに対して少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
（ｉ）図１９Ｂ（配列番号１０４）に示すＨＬＡ－Ｇ＊０１：０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図１９Ｄ（配列番号１０６）に示すＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
（ｉ）図１９Ｂ（配列番号１０４）に示すＨＬＡ－Ｇ＊０１：０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）、
（ｉｉ）図１９Ｄ（配列番号１０６）に示すＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）アミノ酸配列（ここで、アミノ酸８４がＣｙｓであり、アミノ酸２３６がＣｙｓである）。
ＨＬＡ／ペプチド結合アッセイ
あるペプチド（例えば、ＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチド）が、クラスＩ ＨＬＡ（ＨＬＡ重鎖及びβ２Ｍポリペプチドを含む）に結合するかどうか、そして、ＨＬＡ複合体に結合したとき、エピトープをＴＣＲに効果的に提示できるかどうかは、多くの周知の方法のいずれかを用いて判定することができる。アッセイには、結合アッセイ及びＴ細胞活性化アッセイが含まれ、それらには、細胞ベースの結合アッセイ、生化学的結合アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、細胞毒性アッセイ、及びペプチド－ＨＬＡ四量体を用いた抗原特異的Ｔ細胞の検出が含まれる。このようなアッセイは、公開された科学文献ならびに公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１に記載されている。この公報の特異的結合アッセイに関する開示は、特に段落［００２１７］～［００２２５］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
あるペプチド（例えば、ＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチド）が、クラスＩ ＨＬＡ（ＨＬＡ重鎖及びβ２Ｍポリペプチドを含む）に結合するかどうか、そして、ＨＬＡ複合体に結合したとき、エピトープをＴＣＲに効果的に提示できるかどうかは、多くの周知の方法のいずれかを用いて判定することができる。アッセイには、結合アッセイ及びＴ細胞活性化アッセイが含まれ、それらには、細胞ベースの結合アッセイ、生化学的結合アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、細胞毒性アッセイ、及びペプチド－ＨＬＡ四量体を用いた抗原特異的Ｔ細胞の検出が含まれる。このようなアッセイは、公開された科学文献ならびに公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１に記載されている。この公報の特異的結合アッセイに関する開示は、特に段落［００２１７］～［００２２５］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
別の具体例として、ペプチド－ＨＬＡ複合体の多量体（例えば、四量体）が、蛍光タグまたは重金属タグを伴って生成される。この多量体を用いて、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）またはマスサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）により、特異的Ｔ細胞を同定及び定量することができる。エピトープ特異的Ｔ細胞を検出すれば、ペプチド結合ＨＬＡ分子が抗原特異的Ｔ細胞のサブセット上にある特異的ＴＣＲに結合できることを示す直接的な証拠が得られる。例えば、Ｋｌｅｎｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６３を参照のこと。
免疫調節ポリペプチド
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤは野生型（ｗｔ）ＭＯＤである。上述したように、他の場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤは、ｗｔＭＯＤの変異体であり、これは、対応する野生型ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性に比べて、ｃｏ－ＭＯＤに対する親和性が低い。ｃｏ－ＭＯＤに対して低下した親和性を示す適当なＭＯＤは、野生型ＭＯＤと、１アミノ酸～２０アミノ酸異なり得る。例えば、ある場合、ＴＭＰに存在する変異型ＭＯＤは、対応する野生型ＭＯＤと、アミノ酸配列が１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、または１０アミノ酸異なる。別の具体例として、ある場合、ＴＭＰに存在する変異型ＭＯＤは、対応する野生型ＭＯＤと、アミノ酸配列が１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸異なる。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤは野生型（ｗｔ）ＭＯＤである。上述したように、他の場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤは、ｗｔＭＯＤの変異体であり、これは、対応する野生型ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性に比べて、ｃｏ－ＭＯＤに対する親和性が低い。ｃｏ－ＭＯＤに対して低下した親和性を示す適当なＭＯＤは、野生型ＭＯＤと、１アミノ酸～２０アミノ酸異なり得る。例えば、ある場合、ＴＭＰに存在する変異型ＭＯＤは、対応する野生型ＭＯＤと、アミノ酸配列が１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、または１０アミノ酸異なる。別の具体例として、ある場合、ＴＭＰに存在する変異型ＭＯＤは、対応する野生型ＭＯＤと、アミノ酸配列が１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸異なる。
上で議論したように、ＭＯＤは、野生型免疫調節ポリペプチドの変異体を含んでもよく、この変異体は、そのｃｏ－ＭＯＤへの結合性が低下している（例えば、ｃｏ－ＭＯＤの１つ以上の鎖またはドメインへの結合性が低下している）。例えば、ＴＭＰに存在する変異型ＭＯＤがそのｃｏ－ＭＯＤに結合するときの親和性は、対応する野生型ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性よりも、少なくとも１０％低く、少なくとも１５％低く、少なくとも２０％低く、少なくとも２５％低く、少なくとも３０％低く、少なくとも３５％低く、少なくとも４０％低く、少なくとも４５％低く、少なくとも５０％低く、少なくとも５５％低く、少なくとも６０％低く、少なくとも６５％低く、少なくとも７０％低く、少なくとも７５％低く、少なくとも８０％低く、少なくとも８５％低く、少なくとも９０％低く、少なくとも９５％低く、あるいは９５％超低くなり得る。
ＭＯＤとそのｃｏ－ＭＯＤの具体的なペアには、以下の表１に示すものが含まれるが、これらに限定されるものではない。
図１２に模式的に示すように、１つまたは複数のＭＯＤが、ＴＭＰ中の様々な位置のいずれかに存在することができる。図１２は、変異型ＩＬ－２ポリペプチドの２つのコピーの位置を示しているが、ＭＯＤは、本明細書に記載されるように、任意の数及び種々のＭＯＤの任意のものとすることができる。図１２に示すように、ＭＯＤは、１）ＭＨＣクラスＩ重鎖に対してＣ末端側で、かつＩｇＦｃポリペプチドに対してＮ末端側とすることができ（すなわち、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間とすることができ、これは図１２において「配置２」とされている）、２）ＩｇＦｃポリペプチドに対してＣ末端側とすることができ（これは図１２において「配置３」とされている）、または３）ペプチドエピトープに対してＮ末端側とすることができる（これは図１２において「配置４」とされている）。
ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ及びＩＬ－２などの、親和性が低下した変異体を含む、免疫調節ポリペプチド及び変異体は、公開文献に記載されている（例えば、公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１）。ＭＯＤ及びＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－２の特定の変異型ＭＯＤに関連するこれら公報の開示（特にＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００２６０］～［００４５５］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００１５７］～［００３５２］を含む）は、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
特に興味深いのは、サイトカインＩＬ－２の変異体であるＭＯＤである。野生型ＩＬ－２は、Ｔ細胞表面のＩＬ－２レセプター（ＩＬ－２Ｒ）に結合する。野生型ＩＬ－２は、ＩＬ－２Ｒに対して強い親和性を有し、ほとんどまたは実質的にすべてのＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化するために結合する。このため、医薬アルデスロイキン（商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））などの合成された野生型ＩＬ－２は、がん治療のためにヒトに投与されると重篤な副作用を有することが知られている。これは、ＩＬ－２が標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞の両方を無差別に活性化するためである。
ＩＬ－２レセプターは、ある場合、ヘテロ三量体ポリペプチドであり、これは、α鎖（ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５とも呼ばれる））、β鎖（ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２とも呼ばれる））及びγ鎖（ＩＬ－２Ｒγ（ＣＤ１３２とも呼ばれる））を有する。ヒトＩＬ－２、ヒトＩＬ－２Ｒα、ＩＬ２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγのアミノ酸配列は知られている。例えば、上述した公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１を参照のこと。例えば、野生型ＩＬ－２ポリペプチドは、図１７Ａに示すアミノ酸配列を有し得る。ヒトＩＬ－２Ｒα、ヒトＩＬ－２Ｒβ、及びヒトＩＬ－２Ｒγのアミノ酸配列は、それぞれ図１７Ｂ、１７Ｃ、及び１７Ｄに示される。
ある場合、本開示のＩＬ－２変異型ＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒαへの結合性が低下しており、それによりＩＬ－２変異体による制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性化は最小化または実質的に減少される。あるいは、または追加的に、ある場合、本開示のＩＬ－２変異型ＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒβ及び／またはＩＬ－２Ｒγへの結合性が低下しており、当該ＩＬ－２変異型ＭＯＤはＩＬ－２Ｒに対して全体的に低下した親和性を示すようになる。ある場合、本開示のＩＬ－２変異型ＭＯＤは、両方の特性を示し、すなわち、ＩＬ－２Ｒαに対する結合性の低下または実質的な非結合性を示し、ＩＬ－２Ｒβ及び／またはＩＬ－２Ｒγに対する結合性の低下も示し、当該ＩＬ－２変異型ポリペプチドは、ＩＬ－２Ｒに対して全体的に低下した親和性を示すようになる。例えば、Ｈ１６及びＦ４２に置換を有するＩＬ－２変異体は、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合性の低下を示している。Ｑｕａｙｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；２６（８）Ａｐｒｉｌ １５，２０２０を参照のこと。この文献は、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有するＩＬ－２ポリペプチドの、ヒトＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が、野生型ＩＬ２の結合性と比較して、それぞれ１１０倍及び３倍低下したことを示しており、これは、主に、これらの相互作用のそれぞれについてより速い解離速度に起因する。そのような変異体を含むＴＭＰ（ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβへの結合性の低下を示す変異体を含む）は、ＴＭＰ上のペプチドエピトープに特異的な標的ＴＣＲを含むＴ細胞上のＩＬ－２レセプターに優先的に結合して活性化する能力を示した。したがって、そのような変異体を含むＴＭＰ（ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβへの結合性の低下を示す変異体を含む）は、非標的Ｔ細胞（すなわち、ＴＭＰ上のペプチドエピトープに特異的に結合するＴＣＲを含まないＴ細胞）にＩＬ－２を送達する可能性が低い。すなわち、Ｔ細胞上のその共刺激ポリペプチドに対するＩＬ－２変異型ＭＯＤの結合は、ＩＬ－２の結合よりもむしろＭＨＣ－エピトープ部分の結合によって実質的に駆動される。
従って、好適なＩＬ－２変異型ＭＯＤには、図１７Ａに示す野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ図１７Ａに示す野生型ＩＬ－２アミノ酸配列と１つ以上のアミノ酸が異なるポリペプチドがある。ある場合、本開示のこのような変異型ＩＬ－２ポリペプチドのＩＬ－２Ｒに対する結合親和性は、図１７Ａに示す野生型ＩＬ－２アミノ酸配列を有するＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性に比べて低い。例えば、ある場合、変異型ＩＬ－２ポリペプチドのＩＬ－２Ｒ（例えば、図１７Ｂ～１７Ｄに示すアミノ酸配列を有するポリペプチドを含むＩＬ－２Ｒ）に対する結合親和性は、図１７Ａに示す野生型ＩＬ－２アミノ酸配列を有するＩＬ－２ポリペプチドのＩＬ－２Ｒに対する結合親和性よりも、同じ条件下で測定した場合、少なくとも１０％低く、少なくとも１５％低く、少なくとも２０％低く、少なくとも２５％低く、少なくとも３０％低く、少なくとも３５％低く、少なくとも４０％低く、少なくとも４５％低く、少なくとも５０％低く、少なくとも５５％低く、少なくとも６０％低く、少なくとも６５％低く、少なくとも７０％低く、少なくとも７５％低く、少なくとも８０％低く、少なくとも８５％低く、少なくとも９０％低く、少なくとも９５％低く、あるいは９５％超低い。
ある場合、好適な変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
すなわち、変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２のアミノ酸配列を有するが、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する（太字で示す）。あるいは、前述の配列であるが、Ｈ１６及び／またはＦ４２でのＡｌａ以外の置換を有する配列を採用することができ、例えば、Ｈ１６Ａの代わりにＨ１６Ｔを採用することができる。ある場合、ＴＭＰに存在する変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する。
ある場合、ＴＭＰに存在する変異型ＩＬ－２ポリペプチドは、以下のアミノ酸配列を有する。
ある場合、ＴＭＰは、そのような変異型ＩＬ－２ポリペプチドの２つのコピーを含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤはＰＤ－Ｌ１ポリペプチドである。ある場合、ＴＭＰのＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、以下のＰＤ－Ｌ１細胞外ドメインアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＦＴ ＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶ ＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣ ＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬ ＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥ ＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧ ＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳ ＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤ ＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱ ＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧ ＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧ ＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶ ＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲ ＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥ ＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹ ＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳ ＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴ ＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬ ＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮ ＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴ ＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨ ＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩ ＬＮＶＳＩＫＩ（配列番号１７０）。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤは４－１ＢＢＬポリペプチドである。ある場合、ＴＭＰの４－１ＢＢＬポリペプチドは、以下の４－１ＢＢＬアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ ＴＰＥＩＰＡ（配列番号１７１）。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤはＩＣＯＳ－Ｌポリペプチドである。ある場合、ＴＭＰのＩＣＯＳ－Ｌポリペプチドは、以下のＩＣＯＳ－Ｌアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＱＥＫＥＶＲＡＭＶＧ ＳＤＶＥＬＳＣＡＣＰ ＥＧＳＲＦＤＬＮＤＶ ＹＶＹＷＱＴＳＥＳＫ ＴＶＶＴＹＨＩＰＱＮ ＳＳＬＥＮＶＤＳＲＹ ＲＮＲＡＬＭＳＰＡＧ ＭＬＲＧＤＦＳＬＲＬ ＦＮＶＴＰＱＤＥＱＫ ＦＨＣＬＶＬＳＱＳＬ ＧＦＱＥＶＬＳＶＥＶ ＴＬＨＶＡＡＮＦＳＶ ＰＶＶＳＡＰＨＳＰＳ ＱＤＥＬＴＦＴＣＴＳ ＩＮＧＹＰＲＰＮＶＹ ＷＩＮＫＴＤＮＳＬＬ ＤＱＡＬＱＮＤＴＶＦ ＬＮＭＲＧＬＹＤＶＶ ＳＶＬＲＩＡＲＴＰＳ ＶＮＩＧＣＣＩＥＮＶ ＬＬＱＱＮＬＴＶＧＳ ＱＴＧＮＤＩＧＥＲＤ ＫＩＴＥＮＰＶＳＴＧ ＥＫＮＡＡＴＷＳＩＬ（配列番号１７２）。
ある場合、多量体ポリペプチドのＴ細胞調節ポリペプチドはＯＸ４０Ｌポリペプチドである。ある場合、ＴＭＰのＯＸ４０Ｌポリペプチドは、以下のＯＸ４０Ｌアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。Ｌ ＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱ ＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫ ＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱ ＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮ ＮＳＶＩＩＮＣＤＧＦ ＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳ ＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱ ＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫ ＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶ ＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹ ＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬ ＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬ ＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦ ＣＶＬ（配列番号１７３）。
ある場合、多量体ポリペプチドのＴ細胞調節ポリペプチドはＰＤ－Ｌ２ポリペプチドである。ある場合、多量体ポリペプチドのＰＤ－Ｌ２ポリペプチドは、以下のＰＤ－Ｌ２アミノ酸配列のアミノ酸２０～２７３に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。Ｌ ＦＴＶＴＶＰＫＥＬＹ ＩＩＥＨＧＳＮＶＴＬ ＥＣＮＦＤＴＧＳＨＶ ＮＬＧＡＩＴＡＳＬＱ ＫＶＥＮＤＴＳＰＨＲ ＥＲＡＴＬＬＥＥＱＬ ＰＬＧＫＡＳＦＨＩＰ ＱＶＱＶＲＤＥＧＱＹ ＱＣＩＩＩＹＧＶＡＷ ＤＹＫＹＬＴＬＫＶＫ ＡＳＹＲＫＩＮＴＨＩ ＬＫＶＰＥＴＤＥＶＥ ＬＴＣＱＡＴＧＹＰＬ ＡＥＶＳＷＰＮＶＳＶ ＰＡＮＴＳＨＳＲＴＰ ＥＧＬＹＱＶＴＳＶＬ ＲＬＫＰＰＰＧＲＮＦ ＳＣＶＦＷＮＴＨＶＲ ＥＬＴＬＡＳＩＤＬＱ ＳＱＭＥＰＲＴＨＰＴ（配列番号１７４）。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤはＣＤ８０ポリペプチドである。ある場合、ＴＭＰのＣＤ８０ポリペプチドは、以下のＣＤ８０アミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＶＩＨＶＴＫ ＥＶＫＥＶＡＴＬＳＣ ＧＨＮＶＳＶＥＥＬＡ ＱＴＲＩＹＷＱＫＥＫ ＫＭＶＬＴＭＭＳＧＤ ＭＮＩＷＰＥＹＫＮＲ ＴＩＦＤＩＴＮＮＬＳ ＩＶＩＬＡＬＲＰＳＤ ＥＧＴＹＥＣＶＶＬＫ ＹＥＫＤＡＦＫＲＥＨ ＬＡＥＶＴＬＳＶＫＡ ＤＦＰＴＰＳＩＳＤＦ ＥＩＰＴＳＮＩＲＲＩ ＩＣＳＴＳＧＧＦＰＥ ＰＨＬＳＷＬＥＮＧＥ ＥＬＮＡＩＮＴＴＶＳ ＱＤＰＥＴＥＬＹＡＶ ＳＳＫＬＤＦＮＭＴＴ ＮＨＳＦＭＣＬＩＫＹ ＧＨＬＲＶＮＱＴＦＮ ＷＮＴＴＫＱＥＨＦＰ ＤＮ（配列番号１７５）。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤはＣＤ８６ポリペプチドである。ある場合、ＴＭＰのＣＤ８６ポリペプチドは、以下のＣＤ８６アミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＡＰＬＫＩＱＡＹＦＮＥＴＡＤＬＰＣＱＦＡＮＳＱＮＱＳＬＳＥＬＶＶＦＷＱＤＱＥＮＬＶＬＮＥＶＹＬＧＫＥＫＦＤＳＶＨＳＫＹＭＮＲＴＳＦＤＳＤＳＷＴＬＲＬＨＮＬＱＩＫＤＫＧＬＹＱＣＩＩＨＨＫＫＰＴＧＭＩＲＩＨＱＭＮＳＥＬＳＶＬＡＮＦＳＱＰＥＩＶＰＩＳＮＩＴＥＮＶＹＩＮＬＴＣＳＳＩＨＧＹＰＥＰＫＫＭＳＶＬＬＲＴＫＮＳＴＩＥＹＤＧＩＭＱＫＳＱＤＮＶＴＥＬＹＤＶＳＩＳＬＳＶＳＦＰＤＶＴＳＮＭＴＩＦＣＩＬＥＴＤＫＴＲＬＬＳＳＰＦＳＩＥＬＥＤＰＱＰＰＰＤＨＩＰ（配列番号１７６）。
ある場合、ＴＭＰに存在するＭＯＤはＦａｓＬポリペプチド、例えばＦａｓＬポリペプチドの細胞外ドメインである。ある場合、ＴＭＰのＦａｓＬポリペプチドは、以下のＦａｓＬ細胞外ドメインアミノ酸配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ＱＬＦＨＬＱＫＥ ＬＡＥＬＲＥＳＴＳＱ ＭＨＴＡＳＳＬＥＫＱ ＩＧＨＰＳＰＰＰＥＫ ＫＥＬＲＫＶＡＨＬＴ ＧＫＳＮＳＲＳＭＰＬ ＥＷＥＤＴＹＧＩＶＬ ＬＳＧＶＫＹＫＫＧＧ ＬＶＩＮＥＴＧＬＹＦ ＶＹＳＫＶＹＦＲＧＱ ＳＣＮＮＬＰＬＳＨＫ ＶＹＭＲＮＳＫＹＰＱ ＤＬＶＭＭＥＧＫＭＭ ＳＹＣＴＴＧＱＭＷＡ ＲＳＳＹＬＧＡＶＦＮ ＬＴＳＡＤＨＬＹＶＮ ＶＳＥＬＳＬＶＮＦＥ ＥＳＱＴＦＦＧＬＹＫ Ｌ（配列番号１７７）。
足場ポリペプチド
ＴＭＰは、Ｆｃポリペプチドを含み得るか、または別の好適な足場ポリペプチドを含み得る。
ＴＭＰは、Ｆｃポリペプチドを含み得るか、または別の好適な足場ポリペプチドを含み得る。
好適な足場ポリペプチドには、抗体ベースの足場ポリペプチド及び非抗体ベースの足場がある。非抗体ベースの足場には、例えば、以下のものがある。アルブミン、ＸＴＥＮ（延長組換え）ポリペプチド、トランスフェリン、Ｆｃレセプターポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（例えば、Ｈａｓｓｏｕｎｅｈ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：２１５を参照のこと。例えば、Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｘ－Ｇｌｙ（配列番号１９３）のペンタペプチド反復単位を有するポリペプチド（ここで、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である））、アルブミン結合ポリペプチド、シルク様ポリペプチド（例えば、Ｖａｌｌｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｈｉｌｏｓ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．３５７：１６５を参照のこと）、シルク－エラスチン様ポリペプチド（ＳＥＬＰ、例えば、Ｍｅｇｅｅｄ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．５４：１０７５を参照のこと）など。好適なＸＴＥＮポリペプチドとして、例えば、ＷＯ２００９／０２３２７０、ＷＯ２０１０／０９１１２２、ＷＯ２００７／１０３５１５、ＵＳ２０１０／０１８９６８２、及びＵＳ２００９／００９２５８２に開示されているものが挙げられる。また、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６を参照のこと。好適なアルブミンポリペプチドとして、例えば、ヒト血清アルブミンが挙げられる。
好適な足場ポリペプチドは、ある場合、半減期延長ポリペプチドである。従って、ある場合、好適な足場ポリペプチドは、足場ポリペプチドがない対照ＴＭＰに比べて、ＴＭＰのインビボ半減期（例えば、血中半減期）を増加させる。例えば、ある場合、足場ポリペプチドは、ＴＭＰのインビボ半減期（例えば、血中半減期）を、足場ポリペプチドがない対照ＴＭＰと比べて、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超、増加させる。一具体例として、ある場合、Ｆｃポリペプチドは、ＴＭＰのインビボ半減期（例えば、血中半減期）を、Ｆｃポリペプチドがない対照ＴＭＰに比べて、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超、増加させる。
Ｆｃポリペプチド
ある場合、ＴＭＰはＩｇＦｃポリペプチドを含む。ＩｇＦｃポリペプチドは、本明細書において「Ｆｃポリペプチド」とも呼ばれる。ＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４Ｆｃなど、または野生型ＩｇＦｃポリペプチドの変異体であり得る。変異体には、天然に存在する変異体、天然に存在しない変異体、及びそれらの組み合わせが含まれる。
ある場合、ＴＭＰはＩｇＦｃポリペプチドを含む。ＩｇＦｃポリペプチドは、本明細書において「Ｆｃポリペプチド」とも呼ばれる。ＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４Ｆｃなど、または野生型ＩｇＦｃポリペプチドの変異体であり得る。変異体には、天然に存在する変異体、天然に存在しない変異体、及びそれらの組み合わせが含まれる。
ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ａ～２Ｍのいずれか１つに示すＦｃアミノ酸配列に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの変異体である。例えば、ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ａに示すヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の具体例として、ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｂに示すＦｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置１４のＡｌａ及び位置１５のＡｌａを有する。上記実施形態のいずれかにおいて、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｎ７７置換を有し得る。すなわち、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置７７にＡｓｎ以外のアミノ酸を有し得る。ここで、ある場合、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置７７にＡｌａを有する。ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ａに示すアミノ酸配列を含む。ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｂに示すアミノ酸配列を含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの変異体である。変異体には、天然に存在する変異体、天然に存在しない変異体、及びそれらの組み合わせが含まれる。例えば、ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｃに示すヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置１３６のＧｌｕ及び位置１３８のＭｅｔを有する。別の具体例として、ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｄに示すヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここで、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置１４及び１５にＡｌａを有し、Ｆｃポリペプチドは、位置１３６にＧｌｕ及び位置１３８にＭｅｔを有する。上記実施形態のいずれかにおいて、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｎ７７置換を有し得る。すなわち、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置７７にＡｓｎ以外のアミノ酸を有し得る。ある場合、ＩｇＦｃポリペプチドは、位置７７にＡｌａを有する。ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｃに示すアミノ酸配列を含む。ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｄに示すアミノ酸配列を含む。
ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｅに示すアミノ酸配列を含む（Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃであって、ここで、Ｌ２３４は、図３Ｉに示すアミノ酸配列のアミノ酸１４に対応し、Ｌ２３５は、図２Ｅに示すアミノ酸配列のアミノ酸１５に対応し、Ｐ３３１は、図２Ｅに示すアミノ酸配列のアミノ酸１１１に対応する）。ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ｆに示すアミノ酸配列を含み、これは、Ｎ２７９Ａ置換（図２Ｆに示すアミノ酸配列のＮ７７Ａ）を有する。
ある場合、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｇに示すヒトＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｇに示すヒトＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドのアミノ酸９９～３２５に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、ＩｇＦｃポリペプチドが、約２２７アミノ酸長である場合）。ある場合、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｈに示すヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｈに示すヒトＩｇＧ３Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１９～２４６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、ＩｇＦｃポリペプチドが約２２８アミノ酸長である場合）。ある場合、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｊに示すヒトＩｇＭ Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば．Ｆｃポリペプチドは、図２Ｊに示すヒトＩｇＭ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１～２７６に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｋに示すヒトＩｇＡ Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｋに示すヒトＩｇＡ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１～２３４に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある場合、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｍに示すヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、Ｆｃポリペプチドは、図２Ｍに示すヒトＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１００～３２７に対して少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む（例えば、ＩｇＦｃポリペプチドが約２２８アミノ酸長である場合）。
ある場合、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む。ＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１７８）。
ある場合、ＴＭＰに採用されるＩｇＦｃは、細胞溶解を実質的に誘導しないＩｇＦｃのように、野生型配列において１つ以上のアミノ酸が置換されたものである。例えば、ある場合、ＴＭＰに存在するＦｃポリペプチドは、図２Ａ（ヒトＩｇＧ１Ｆｃ）に示すアミノ酸配列を含むが、ただし、Ｌ２３４（図２Ａに示すアミノ酸配列のＬ１４）がロイシン以外のアミノ酸に置換されており、あるいはＬ２３５（図２Ａに示すアミノ酸配列のＬ１５）がロイシン以外のアミノ酸に置換されている。具体例として、Ｌ２３４Ａ（Ｌ１４Ａ）置換、及びＬ２３５Ａ（Ｌ１５Ａ）置換が挙げられる。
リンカー
ＴＭＰは、１つ以上のペプチドリンカーを含み得る。すなわち、ＴＭＰは、２個以上のアミノ酸が連続して延びるリンカーを含むことができ、ここで、１つ以上のリンカーは、ｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間（ここでそのようなリンカーを本明細書において「Ｌ１」と呼ぶ）、ｉｉ）ＭＯＤとＭＨＣクラスＩポリペプチドとの間（ここでそのようなリンカーを本明細書において「Ｌ２」と呼ぶ）、ｉｉｉ）第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間（ここでそのようなリンカーを本明細書において「Ｌ３」と呼ぶ）、ｉｖ）ペプチドとＭＨＣクラスＩポリペプチドとの間、及びｖ）ペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のいずれか１以上の間に存在する。
ＴＭＰは、１つ以上のペプチドリンカーを含み得る。すなわち、ＴＭＰは、２個以上のアミノ酸が連続して延びるリンカーを含むことができ、ここで、１つ以上のリンカーは、ｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間（ここでそのようなリンカーを本明細書において「Ｌ１」と呼ぶ）、ｉｉ）ＭＯＤとＭＨＣクラスＩポリペプチドとの間（ここでそのようなリンカーを本明細書において「Ｌ２」と呼ぶ）、ｉｉｉ）第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間（ここでそのようなリンカーを本明細書において「Ｌ３」と呼ぶ）、ｉｖ）ペプチドとＭＨＣクラスＩポリペプチドとの間、及びｖ）ペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のいずれか１以上の間に存在する。
本明細書で用いられる「ＴＭＰの構成要素の任意の２つの間に存在する任意であるペプチドリンカー」という表現は、ＴＭＰ内の任意の２つの隣接するポリペプチド間のペプチドリンカーを指す。例えば、本明細書で用いられる「ＴＭＰの構成要素の任意の２つの間に存在する任意であるペプチドリンカー」という表現は、ｉ）ペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間、ｉｉ）β２ＭポリペプチドとＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとの間、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間、ｉｖ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、ｖ）ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、及びｖｉ）第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１以上の間に存在するペプチドリンカーを指す。後述するように、リンカーは、可動性ペプチドリンカー（短い可動性ペプチドリンカーを含む）であってもよいし、剛性ペプチドリンカーであってもよい。
好適なリンカー（「スペーサー」とも呼ばれる）は、容易に選択することができ、多くの適当な長さのもののいずれか、例えば、１アミノ酸～２５アミノ酸、３アミノ酸～２０アミノ酸、２アミノ酸～１５アミノ酸、３アミノ酸～１２アミノ酸、４アミノ酸～１０アミノ酸、５アミノ酸～９アミノ酸、６アミノ酸～８アミノ酸、または７アミノ酸～８アミノ酸のものとすることができる。好適なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長であり得る。ある場合、リンカーは、２５アミノ酸長～５０アミノ酸長、例えば２５～３０、３０～３５、３５～４０、４０～４５、または４５～５０アミノ酸長である。
可動性ペプチドリンカー
具体的な可動性ペプチドリンカーとして、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）（ここで、ｎは、少なくとも１の整数であり、１～１０の整数であり得る）を含む）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野で知られる他の可動性ペプチドリンカーが挙げられる。グリシンポリマー及びグリシン－セリンポリマーを使用することができる。Ｇｌｙ及びＳｅｒは両方とも、比較的不定形であり、従って構成要素間の中立的なつなぎとして機能し得る。グリシンポリマーを使用することができる。グリシンは、アラニンよりもさらに有意に多くファイ－プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を持つ残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照のこと）。具体的なリンカーは、ＧＧＳＧ（配列番号１８２）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１８３）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１８４）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１８５）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１８６）、ＧＳＳＳＧ（配列番号１８７）などのアミノ酸配列を有することができるが、これらに限定されるものではない。
具体的な可動性ペプチドリンカーとして、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）（ここで、ｎは、少なくとも１の整数であり、１～１０の整数であり得る）を含む）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野で知られる他の可動性ペプチドリンカーが挙げられる。グリシンポリマー及びグリシン－セリンポリマーを使用することができる。Ｇｌｙ及びＳｅｒは両方とも、比較的不定形であり、従って構成要素間の中立的なつなぎとして機能し得る。グリシンポリマーを使用することができる。グリシンは、アラニンよりもさらに有意に多くファイ－プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を持つ残基よりもはるかに制限が少ない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）を参照のこと）。具体的なリンカーは、ＧＧＳＧ（配列番号１８２）、ＧＧＳＧＧ（配列番号１８３）、ＧＳＧＳＧ（配列番号１８４）、ＧＳＧＧＧ（配列番号１８５）、ＧＧＧＳＧ（配列番号１８６）、ＧＳＳＳＧ（配列番号１８７）などのアミノ酸配列を有することができるが、これらに限定されるものではない。
具体的な可動性ペプチドリンカーとして、例えば、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）（「Ｇ４Ｓ」リンカーとも呼ばれる）が挙げられ、ここで、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある場合、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）を有し、ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。ある場合、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８８）を有し、ここでｎは２である。ある場合、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８９）を有し、ここでｎは３である。ある場合、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１９０）を有し、ここでｎは４である。ある場合、リンカーはアミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１９１）を有し、ここでｎは７である。ある場合、リンカーはアミノ酸配列ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）を有する。アミノ酸配列ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）を有するリンカーも好適である。本開示のＴＭＰにおいて、β２Ｍポリペプチドは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）リンカーによってＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合することができ、ここでｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、例えば、ｎ＝３、ｎ＝４、またはｎ＝７である。
本開示で用いられる「短い可動性ペプチドリンカー」という用語は、１５個未満のアミノ酸、すなわち２～１４個のアミノ酸から構成される可動性ペプチドリンカーを意味する。例えば、短い可動性ペプチドリンカーは、２～４個、２～５個、または３～６個のアミノ酸（例えば、実施例１で検討されているＧＧＳリンカー）、あるいは４～８個、５～１０個、または１０～１４個のアミノ酸から構成され得る。この範囲内には、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個のアミノ酸から構成される可動性ペプチドリンカーが含まれる。
剛性ペプチドリンカー
ある場合、ペプチドリンカーは剛性ペプチドリンカーである。本明細書で用いられる「剛性ペプチドリンカー」という用語は、タンパク質ドメイン間の実質的に一定の距離／空間的分離を維持することによって該ドメインを効果的に分離し、それにより該ドメイン間の好ましくない相互作用を低減または実質的に排除する、２個以上のアミノ酸が連続して延びるリンカーを指す。剛性ペプチドリンカーは、当該技術分野において知られており、一般に、溶液中では比較的明確なコンフォメーションをとる。剛性ペプチドリンカーは、溶液中で特定の二次構造及び／または三次構造を有するものがあり、そして典型的には、二次構造または三次構造を形成するのに十分な長さを有する。剛性ペプチドリンカーには、プロリンを豊富に含むペプチドリンカー、及びアルファ螺旋構造のような柔軟性のない螺旋構造を有するペプチドリンカーが含まれる。剛性ペプチドリンカーは、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．６５：１３５７及びＫｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２７：３２５に記載されている。
ある場合、ペプチドリンカーは剛性ペプチドリンカーである。本明細書で用いられる「剛性ペプチドリンカー」という用語は、タンパク質ドメイン間の実質的に一定の距離／空間的分離を維持することによって該ドメインを効果的に分離し、それにより該ドメイン間の好ましくない相互作用を低減または実質的に排除する、２個以上のアミノ酸が連続して延びるリンカーを指す。剛性ペプチドリンカーは、当該技術分野において知られており、一般に、溶液中では比較的明確なコンフォメーションをとる。剛性ペプチドリンカーは、溶液中で特定の二次構造及び／または三次構造を有するものがあり、そして典型的には、二次構造または三次構造を形成するのに十分な長さを有する。剛性ペプチドリンカーには、プロリンを豊富に含むペプチドリンカー、及びアルファ螺旋構造のような柔軟性のない螺旋構造を有するペプチドリンカーが含まれる。剛性ペプチドリンカーは、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．６５：１３５７及びＫｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２７：３２５に記載されている。
剛性ペプチドリンカーの具体例として、例えば、以下が挙げられる。（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２３６）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２３８）、（Ｌｙｓ－Ｐｒｏ）ｎ（配列番号２４２）、（Ｇｌｕ－Ｐｒｏ）ｎ（配列番号２３９）、（Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ）ｎ（配列番号２４０）、及び（Ａｌａ－Ｐｒｏ）ｎ（配列番号２４１）。ここで、ｎは、１～２０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である）。ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を有する好適な剛性ペプチドリンカーの非限定的な具体例として、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、（ＥＡＡＡＫ）２（配列番号１９７）、（ＥＡＡＡＫ）３（配列番号１９８）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）４ＡＬＥＡ（ＥＡＡＡＫ）４Ａ（配列番号１９９）、及びＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号２００）が挙げられる。（ＡＰ）ｎを有する好適な剛性ペプチドリンカーの非限定的な具体例として、ＰＡＰＡＰ（配列番号２０１）（本明細書において「（ＡＰ）２」とも呼ばれる）、ＡＰＡＰＡＰＡＰ（配列番号２０２）（本明細書において「（ＡＰ）４」とも呼ばれる）、ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ（配列番号２０３）（本明細書において「（ＡＰ）６」とも呼ばれる）、ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ（配列番号２０４）（本明細書において「（ＡＰ）８」とも呼ばれる）、及びＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ（配列番号２０５）（本明細書において「（ＡＰ）１０」とも呼ばれる）が挙げられる。（ＫＰ）ｎを有する好適な剛性ペプチドリンカーの非限定的な具体例として、ＫＰＫＰ（配列番号２０６）（本明細書において「（ＫＰ）２」とも呼ばれる）、ＫＰＫＰＫＰＫＰ（配列番号２０７）（本明細書において「（ＫＰ）４」とも呼ばれる）、ＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰ（配列番号２０８）（本明細書において「（ＫＰ）６」とも呼ばれる）、ＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰ（配列番号２０９）（本明細書において「（ＫＰ）８」とも呼ばれる）、及びＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰ（配列番号２１０）（本明細書において「（ＫＰ）１０」とも呼ばれる）が挙げられる。（ＥＰ）ｎを有する好適な剛性ペプチドリンカーの非限定的な具体例として、ＥＰＥＰ（配列番号２１１）（本明細書において「（ＥＰ）２」とも呼ばれる）、ＥＰＥＰＥＰＥＰ（配列番号２１２）（本明細書において「（ＥＰ）４」とも呼ばれる）、ＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰ（配列番号２１３）（本明細書において「（ＥＰ）６」とも呼ばれる）、ＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰ（配列番号２１４）（本明細書において「（ＥＰ）８」とも呼ばれる）、及びＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰ（配列番号２１５）（本明細書において「（ＥＰ）１０」とも呼ばれる）が挙げられる。
一般的に、ＴＭＰは、ＴＭＰの構成要素の任意の２つの間に剛性ペプチドリンカー及び／または短い可動性ペプチドリンカーを含み得るが、典型的には、以下のように、１つ以上の剛性ペプチドリンカー及び／または短い可動性ペプチドリンカーが使用される。
（ｉ）１つまたは複数の配置２のＭＯＤを含むＴＭＰにおいて、ｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、ｉｉ）ＭＯＤとＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｉｉｉ）複数のＭＯＤがタンデムに存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に使用される。
（ｉｉ）１つまたは複数の配置３のＭＯＤを含むＴＭＰにおいて、ｉ）ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、及びｉｉ）複数のＭＯＤがタンデムに存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に使用される。
（ｉｉｉ）１つまたは複数の配置４のＭＯＤを含むＴＭＰにおいて、ｉ）ＫＲＡＳエピトープとＭＯＤとの間、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｉｉｉ）複数のＭＯＤがタンデムに存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に使用される。
（ｉ）１つまたは複数の配置２のＭＯＤを含むＴＭＰにおいて、ｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、ｉｉ）ＭＯＤとＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｉｉｉ）複数のＭＯＤがタンデムに存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に使用される。
（ｉｉ）１つまたは複数の配置３のＭＯＤを含むＴＭＰにおいて、ｉ）ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、及びｉｉ）複数のＭＯＤがタンデムに存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に使用される。
（ｉｉｉ）１つまたは複数の配置４のＭＯＤを含むＴＭＰにおいて、ｉ）ＫＲＡＳエピトープとＭＯＤとの間、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｉｉｉ）複数のＭＯＤがタンデムに存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に使用される。
したがって、本開示は、配置２、配置３、または配置４の１つまたは複数のＭＯＤを含むＴＭＰの熱安定性を高める方法を提供し、当該方法は、本明細書に記載されるように、ＴＭＰの構成要素の２つ以上の間に、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含む。
下記実施例１に示すとおり、明らかになったことは、１つまたは複数の配置３のＭＯＤを有するＴＭＰにおいて、ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間で、可動性ペプチドリンカーの代わりに、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーを使用すると、得られるＴＭＰの熱安定性は、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（すなわち、（ＧＧＧＧＳ）３リンカー）（配列番号１８９）などのより長い可動性ペプチドリンカーを有する同様のＴＭＰに比べて、高くなり得るということであった。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、考えられることは、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーは、１５個以上のアミノ酸を有する可動性ペプチドリンカーで起こり得るＴＭＰ内の他のポリペプチドとＭＯＤとの相互作用を、低減または防止し、その結果、実施例１に記載されるような加速安定性試験により測定される熱安定性は高くなるということである。
ある場合、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーを使用すれば、それが１つまたは複数の配置３のＭＯＤを有するＴＭＰにおいてＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間に存在する場合、実施例１に記載される３７℃加速熱安定性試験によって測定される熱安定性は、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーの代わりに（ＧＧＧＧＳ）３リンカー（配列番号１８９）である可動性ペプチドリンカーを含む対照ＴＭＰの熱安定性に比べて．少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、あるいは少なくとも約１０倍向上する。
ある場合、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーを使用すれば、それが１つまたは複数の配置３のＭＯＤを有するＴＭＰにおいてＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間に存在する場合、実施例１に記載される４２℃加速熱安定性試験によって測定される熱安定性は、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーの代わりに（ＧＧＧＧＳ）３リンカー（配列番号１８９）である可動性ペプチドリンカーを含む対照ＴＭＰの熱安定性に比べて．少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、あるいは少なくとも約１０倍向上する。
システイン含有リンカー
上述したように、ある場合、リンカーペプチドは、システイン残基を有し、このシステイン残基は、ＴＭＰポリペプチド鎖の別の場所に存在するシステイン残基と鎖内ジスルフィド結合を形成し得る。例えば、上述したように、ある場合、ＴＭＰ、またはホモ二量体などの二量体化ＴＭＰは、ペプチドエピトープとシステイン残基を有するβ２Ｍポリペプチドとの間に、リンカーを含み、このシステイン残基は、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド中のシステイン残基と鎖内ジスルフィド結合を形成する。例えば、ＴＭＰ、またはホモ二量体などの二量体化ＴＭＰが、ペプチドエピトープとβ２Ｍポリペプチドとの間にシステイン含有リンカーを有する場合、リンカー中のシステイン残基は、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド中のアミノ酸２３６のシステイン残基（例えば、Ａ２３６Ｃ置換によって形成される）と鎖内ジスルフィド結合を形成する。
上述したように、ある場合、リンカーペプチドは、システイン残基を有し、このシステイン残基は、ＴＭＰポリペプチド鎖の別の場所に存在するシステイン残基と鎖内ジスルフィド結合を形成し得る。例えば、上述したように、ある場合、ＴＭＰ、またはホモ二量体などの二量体化ＴＭＰは、ペプチドエピトープとシステイン残基を有するβ２Ｍポリペプチドとの間に、リンカーを含み、このシステイン残基は、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド中のシステイン残基と鎖内ジスルフィド結合を形成する。例えば、ＴＭＰ、またはホモ二量体などの二量体化ＴＭＰが、ペプチドエピトープとβ２Ｍポリペプチドとの間にシステイン含有リンカーを有する場合、リンカー中のシステイン残基は、ＴＭＰに存在するＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド中のアミノ酸２３６のシステイン残基（例えば、Ａ２３６Ｃ置換によって形成される）と鎖内ジスルフィド結合を形成する。
ある場合、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳ（配列番号２１６）を有する。ある場合、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）を有し、ここでｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、例えば、１、２、または３である。ある場合、ペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１８）を有し、ここでｎは２である。
ある場合、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＣＧＧＧＳ（配列番号２１９）を有する。ある場合、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）を有し、ここでｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、例えば、１、２、または３である。
ある場合、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＣＧＳ（配列番号２２１）を有する。ある場合、ペプチドリンカーはアミノ酸配列ＧＧＣＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２２）を有し、ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり、例えば１、２または３である。
ある場合、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＣＳ（配列番号２２３）を有する。ある場合、ペプチドリンカーはアミノ酸配列ＧＧＧＣＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２４）を有し、ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、例えば１、２、または３である。
ある場合、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＣ（配列番号２２５）を有する。ある場合、ペプチドリンカーはアミノ酸配列ＧＧＧＧＣ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２６）を有し、ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、例えば１、２、または３である。
二量体化ＴＭＰ
ある場合、ＴＭＰは二量体を形成し得る。すなわち、本開示は、２つのＴＭＰの二量体を含むポリペプチドを提供する。従って、本開示は、互いに共有結合している２つのＴＭＰを有する二量体化ＴＭＰであるタンパク質を提供する。二量体の共有結合は、第１のＴＭＰ中のＩｇＦｃポリペプチドと第２のＴＭＰ中のＩｇＦｃポリペプチドとの間の１つ以上のジスルフィド結合であり得る。一例ではあるが、ＩｇＦｃは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの変異体とすることができ、この変異体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）をもたらす能力が実質的に低下している（例えば、図２Ｂまたは図２ＤのヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド）。ＴＭＰがＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、ＴＭＰは、典型的に、別のＴＭＰのＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドと自発的にジスルフィド結合を形成することにより、二量体に自己集合する。従って、例えば、第１のＴＭＰ及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチドは、１つ以上のジスルフィド結合によって互いに結合され得る。多くの場合、２つのＴＭＰは、アミノ酸配列が互いに同じであり、自発的に１つ以上のジスルフィド結合を形成するＩｇＦｃポリペプチドを含み、それによってホモ二量体である二量体化ＴＭＰを形成する。
ある場合、ＴＭＰは二量体を形成し得る。すなわち、本開示は、２つのＴＭＰの二量体を含むポリペプチドを提供する。従って、本開示は、互いに共有結合している２つのＴＭＰを有する二量体化ＴＭＰであるタンパク質を提供する。二量体の共有結合は、第１のＴＭＰ中のＩｇＦｃポリペプチドと第２のＴＭＰ中のＩｇＦｃポリペプチドとの間の１つ以上のジスルフィド結合であり得る。一例ではあるが、ＩｇＦｃは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの変異体とすることができ、この変異体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）をもたらす能力が実質的に低下している（例えば、図２Ｂまたは図２ＤのヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド）。ＴＭＰがＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、ＴＭＰは、典型的に、別のＴＭＰのＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドと自発的にジスルフィド結合を形成することにより、二量体に自己集合する。従って、例えば、第１のＴＭＰ及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチドは、１つ以上のジスルフィド結合によって互いに結合され得る。多くの場合、２つのＴＭＰは、アミノ酸配列が互いに同じであり、自発的に１つ以上のジスルフィド結合を形成するＩｇＦｃポリペプチドを含み、それによってホモ二量体である二量体化ＴＭＰを形成する。
従って、本開示はタンパク質を提供し、当該タンパク質は、ａ）第１のＴＭＰと、ｂ）第１のＴＭＰと同一であってもよい第２のＴＭＰとを含み、ここで、第１及び第２のＴＭＰは互いに共有結合している。共有結合は、第１のＴＭＰ中のＩｇＦｃポリペプチドと第２のＴＭＰ中のＩｇＦｃポリペプチドとの間のジスルフィド結合であり得る。
必要に応じて、各ＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチドは、種間二量体化配列、例えば、２つの異なるＴＭＰを選択的に二量体化することを可能にするノブ・イン・ホール（Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ）配列を含むことができる。種間結合配列は、その同族ポリペプチド配列（すなわち、種間配列及びそれに対応する種間配列）とヘテロ二量体を形成するのに有利であり、特にＩｇＦｃ配列変異体に基づきヘテロ二量体を形成するのに有利である。そのような種間ポリペプチド配列には、ノブ・イン・ホール、及び１つ以上のジスルフィド結合の形成を促進するノブ・イン・ホール配列がある。例えば、１つの種間結合対は、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインインターフェイスにあるＴ３６６ＹとＹ４０７Ｔの変異対を含むか、または他の免疫グロブリンの対応する残基を含む。Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９：７，６１７－６２１（１９９６）を参照のこと。第２の種間結合対は、Ｔ３６６Ｗ置換によるノブの形成と、相補的ＩｇＦｃ配列上の３つの置換Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖによる穴（ホール）の形成とを必要とする。Ｘｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ７：１，２３１－２４２（２０１５）を参照のこと。別の種間結合対は、Ｙ３４９Ｃ置換、Ｔ３６６Ｓ置換、Ｌ３６８Ａ置換、及びＹ４０７Ｖ置換を有する第１のＦｃポリペプチドと、Ｓ３５４Ｃ置換及びＴ３６６Ｗ置換を有する第２のＩｇＦｃポリペプチドとを有する（ジスルフィド結合はＹ３４９ＣとＳ３５４Ｃとの間に形成し得る）。例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ａｎｄ Ｋｏｎｔｈｅｒｍａｎｎ，ｍＡｂｓ ９：２，１８２－２１２（２０１５）を参照のこと。ノブ・イン・ホール修飾の有無にかかわらず、ＩｇＦｃポリペプチド配列は、ＩｇＦｃポリペプチド間のジスルフィド結合の形成（例えば、ヒンジ領域のジスルフィド結合）によって安定化され得る。従って、ある場合、二量体化ＴＭＰは、アミノ酸配列が同じではない２つのＴＭＰ鎖を有するヘテロ二量体であり得る。
また、種間二量体化配列を用いて、ＴＭＰと非ＴＭＰ分子との結合を可能にしてもよく、非ＴＭＰ分子は、ＴＭＰに付加的な機能性を付与することができる。例えば、ＴＭＰは、がん関連抗原に結合するポリペプチド（例えば、抗体またはその結合フラグメント、例えばｓｃＦｖ）を含む分子に結合することができ、それにより、ＴＭＰが、がん関連抗原を含む組織に局在できるようになる。
その他のポリペプチド
ＴＭＰのポリペプチド鎖は、上記のものに加えて、１つ以上のポリペプチド及び複合体薬（コンジュゲート薬）を含むことができる。好適なその他のポリペプチド（エピトープタグ及びアフィニティドメインを含む）ならびに薬物複合体は、上述した公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１に記載されており、エピトープタグ、アフィニティドメイン、及び薬物複合体に関するそれらの開示は、特にＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００４９８］～［００５０８］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００３５３］～［００３６３］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。１つまたは複数のその他のポリペプチドは、ＴＭＰポリペプチド鎖のＮ末端、ＴＭＰポリペプチド鎖のＣ末端、またはＴＭＰのポリペプチド鎖の内部に含めることができる。上述したように、その他のポリペプチドもまた、種間配列を使用してＴＭＰに結合することができる。
ＴＭＰのポリペプチド鎖は、上記のものに加えて、１つ以上のポリペプチド及び複合体薬（コンジュゲート薬）を含むことができる。好適なその他のポリペプチド（エピトープタグ及びアフィニティドメインを含む）ならびに薬物複合体は、上述した公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１に記載されており、エピトープタグ、アフィニティドメイン、及び薬物複合体に関するそれらの開示は、特にＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００４９８］～［００５０８］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００３５３］～［００３６３］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。１つまたは複数のその他のポリペプチドは、ＴＭＰポリペプチド鎖のＮ末端、ＴＭＰポリペプチド鎖のＣ末端、またはＴＭＰのポリペプチド鎖の内部に含めることができる。上述したように、その他のポリペプチドもまた、種間配列を使用してＴＭＰに結合することができる。
具体的なＴＭＰ及び二量体化ＴＭＰ
以下の記載において、具体的なＴＭＰの説明は、ＴＭＰ及び二量体化ＴＭＰの両方を包含することを意図している。二量体化ＴＭＰは、２つのＴＭＰを有しており、それらは、１つ以上の共有結合、例えば、それらの中のＩｇＦｃポリペプチド間に自発的に形成される１つ以上のジスルフィド結合によって結合されている。このような二量体化ＴＭＰは、以下のいずれかとすることができる。ｉ）２つのＴＭＰを有するホモ二量体（ここで、両方のＴＭＰは、同じアミノ酸配列を有する）、またはｉｉ）２つのＴＭＰを有するヘテロ二量体（ここで、２つのＴＭＰは、アミノ酸配列が互いに異なる）。
以下の記載において、具体的なＴＭＰの説明は、ＴＭＰ及び二量体化ＴＭＰの両方を包含することを意図している。二量体化ＴＭＰは、２つのＴＭＰを有しており、それらは、１つ以上の共有結合、例えば、それらの中のＩｇＦｃポリペプチド間に自発的に形成される１つ以上のジスルフィド結合によって結合されている。このような二量体化ＴＭＰは、以下のいずれかとすることができる。ｉ）２つのＴＭＰを有するホモ二量体（ここで、両方のＴＭＰは、同じアミノ酸配列を有する）、またはｉｉ）２つのＴＭＰを有するヘテロ二量体（ここで、２つのＴＭＰは、アミノ酸配列が互いに異なる）。
ある場合、ＴＭＰは、ｉ）ＫＲＡＳペプチド、ｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩポリペプチド（ここで、第１のＭＨＣクラスＩポリペプチドはβ２Ｍポリペプチドである）、ｉｉｉ）第２のＭＨＣクラスＩポリペプチド（ここで、第２のＭＨＣクラスＩポリペプチドはＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである）、ｉｖ）少なくとも１つのＭＯＤ、及びｖ）ＩｇＦｃポリペプチドを含む。ＴＭＰは、これらの構成要素の１つ以上の間に１つ以上のペプチドリンカーを含んでもよい。
１つまたは複数の配置２のＭＯＤを含むＴＭＰの場合、１つ以上のペプチドリンカーが、ｉ）ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間、ｉｉ）β２ＭポリペプチドとＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとの間、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、ｉｖ）ＭＯＤとＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、及びｖｉ）ＴＭＰがタンデムに２つ以上のＭＯＤを含む場合、それらＭＯＤの間に配置されていてもよい。上述したように、このようなＴＭＰにおいて、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーが、ｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、ｉｉ）ＭＯＤとＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｉｉｉ）タンデムに複数のＭＯＤが存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間など、タンデムなさらなるＭＯＤ同士の間、のいずれか１つ以上の間に配置されていてもよい。ある場合、剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーは、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個または１０～１４個のアミノ酸から構成される。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーはＧＧＳである。一般的に、可動性ペプチドリンカーは、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーによって結合されていない構成要素間に設けられることになり、ここで、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のリンカーは、上述したようなＣｙｓ含有リンカーをさらに含んでもよい。
１つまたは複数の配置３のＭＯＤを含むＴＭＰの場合、１つ以上のペプチドリンカーが、ｉ）ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間、ｉｉ）β２ＭポリペプチドとＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとの間、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間、ｉｖ）ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、及びｖ）ＴＭＰがタンデムに２つ以上のＭＯＤを含む場合には、それらのＭＯＤの間に配置されていてもよい。上述したように、そのようなＴＭＰにおいて、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーが、ｉ）ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、及びｉｉ）タンデムに複数のＭＯＤが存在する場合には、１つまたは複数のＭＯＤの間（例えば、タンデムに２つのＭＯＤが存在する場合には、第１のＭＯＤと第２のＭＯＤの間）のいずれか１つ以上の間に配置されていてもよい。ある場合、剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーは、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個または１０～１４個のアミノ酸から構成される。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーはＧＧＳである。一般に、可動性ペプチドリンカーは、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカーによって結合されていない構成要素間に設けられることになり、ここで、ＫＲＡＳペプチドとβ２Ｍポリペプチドとの間のリンカーは、さらに、上述したようなＣｙｓ含有リンカーを有してもよい。
上述したように、ある場合、ＴＭＰに存在する少なくとも１つのＭＯＤは野生型ＭＯＤである。他の場合、ＴＭＰに存在する少なくとも１つのＭＯＤは、変異型ＭＯＤであり、この変異型ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性は、対応する野生型ＭＯＤのｃｏ－ＭＯＤに対する親和性に比べて低い。
上記ＴＭＰの任意のものにおいて、ＫＲＡＳペプチドは、以下に示すＫＲＡＳペプチド配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を有する。例えば、ＫＲＡＳペプチドは、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、ＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）、ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有してもよい。
上記のＴＭＰにおいて、ある場合、第２のＭＨＣポリペプチドは、ＨＬＡ重鎖であり、このＨＬＡ重鎖は、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ２４ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｅ＊０１０１またはＨＬＡ－Ｅ＊０１．０３）、またはＨＬＡ－Ｇポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ｇ＊０１０１及び／またはＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４）に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ある場合、ＨＬＡ重鎖ポリペプチドはＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドである。ある場合、ＨＬＡ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドである。ある場合、ＨＬＡ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドである。ある場合、ＨＬＡ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ｅ＊０１０１またはＨＬＡ－Ｅ＊０１．０３＊０２０１ポリペプチドである。ある場合、ＨＬＡ重鎖ポリペプチドは、Ｙ８４Ｃ置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を有するＨＬＡ－Ｇ＊０１０１及び／またはＨＬＡ－Ｇ＊０１：０４Ａ＊１１０１ポリペプチドである。
ある場合、ＴＭＰは２つのＭＯＤを含み、ここで２つのＭＯＤは同じアミノ酸配列を有し、例えば、ＭＯＤは、図１７Ａの配列を有するｗｔＩＬ－２に比べてＩＬ２Ｒのα鎖及びβ鎖の両方に対する結合親和性が低い変異型ＩＬ－２ポリペプチド（例えば、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチド、またはＨ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチド）である。
ある場合、ＩｇＦｃポリペプチドは、細胞溶解を実質的に誘導しないヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド変異体であり、例えば、図２Ｂまたは図２Ｄに示すようなＬ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。
ある場合、ＴＭＰは配置３のＭＯＤを含み、ここでＨＬＡ重鎖ポリペプチドは野生型または変異型ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド（例えば、図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、３Ｄまたは３Ｅのいずれか１つのＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有するＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドであって、任意でＹ８４置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を含むＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド）である。ある場合、ＩｇＦｃポリペプチドは、細胞溶解を実質的に引き起こさないヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド変異体であり、例えば、図２Ｂまたは図２Ｄに示すようなＬ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。ある場合、ＭＯＤは、図１７Ａの配列を有するｗｔＩＬ－２に比べてＩＬ２Ｒのα鎖及びβ鎖の両方に対する結合親和性が低い変異型ＩＬ－２ポリペプチドであり、例えば、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチド、またはＨ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチドである。ある場合、ＫＲＡＳペプチドは、上記のＫＲＡＳペプチド配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を有する。例えば、ＫＲＡＳペプチドは、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、ＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）、ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有してもよい。そのような場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間に、剛性ペプチドリンカーを含み、ここで、剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。一方、ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含み、ここで短い可動性ペプチドリンカーは、２～４、２～５、３～６、４～８、５～１０または１０～１４個のアミノ酸から構成される。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーはＧＧＳである。ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤの２つのコピーを含む。ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤの２つのコピーを含み、かつＴＭＰは、ａ）第１の変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｂ）第１の変異型ＩＬ－２ＭＯＤと第２の変異型ＩＬ－２ＭＯＤとの間に、剛性ペプチドリンカーを含み、当該剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは、１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。
ある場合、ＴＭＰは配置３のＭＯＤを含み、ここでＨＬＡ重鎖ポリペプチドは野生型または変異型ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド（例えば、図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄまたは４Ｅのいずれか１つのＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドであって、任意でＹ８４置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を含むＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド）である。ある場合、ＩｇＦｃポリペプチドは、細胞溶解を実質的に引き起こさないヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド変異体であり、例えば、図２Ｂまたは図２Ｄに示すようなＬ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。ある場合、ＭＯＤは、図１７Ａの配列を有するｗｔＩＬ－２に比べてＩＬ２Ｒのα鎖及びβ鎖の両方に対する結合親和性が低い変異型ＩＬ－２ポリペプチドであり、例えば、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチド、またはＨ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチドである。ある場合、ＫＲＡＳペプチドは、上記のＫＲＡＳペプチド配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を有する。例えば、ＫＲＡＳペプチドは、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、ＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）、ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有してもよい。そのような場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間に、剛性ペプチドリンカーを含み、ここで、剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤの２つのコピーを含む。ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤの２つのコピーを含み、かつＴＭＰは、ａ）第１の変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｂ）第１の変異型ＩＬ－２ＭＯＤと第２の変異型ＩＬ－２ＭＯＤとの間に、剛性ペプチドリンカーを含み、当該剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは、１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。一方、ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含み、ここで短い可動性ペプチドリンカーは、２～４、２～５、３～６、４～８、５～１０または１０～１４個のアミノ酸から構成される。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーはＧＧＳである。
ある場合、ＴＭＰは配置３のＭＯＤを含み、ここでＨＬＡ重鎖ポリペプチドは野生型または変異型ＨＬＡ－Ａ＊２４０２ポリペプチド（例えば、図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄまたは５Ｅのいずれか１つのＨＬＡ－Ａ＊２４０２ポリペプチドに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するＨＬＡ－Ａ＊２４０２ポリペプチドであって、任意でＹ８４置換及び／またはＡ２３６Ｃ置換を含むＨＬＡ－Ａ＊２４０２ポリペプチド）である。ある場合、ＩｇＦｃポリペプチドは、細胞溶解を実質的に引き起こさないヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチド変異体であり、例えば、図２Ｂまたは図２Ｄに示すようなＬ２３４Ａ置換及びＬ２３５Ａ置換を有するヒトＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである。ある場合、ＭＯＤは、図１７Ａの配列を有するｗｔＩＬ－２に比べてＩＬ２Ｒのα鎖及びβ鎖の両方に対する結合親和性が低い変異型ＩＬ－２ポリペプチドであり、例えば、Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチド、またはＨ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチドである。ある場合、ＫＲＡＳペプチドは、上記のＫＲＡＳペプチド配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列を有する。例えば、ＫＲＡＳペプチドは、ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、ＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）、ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有してもよい。そのような場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間に、剛性ペプチドリンカーを含み、ここで、剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤの２つのコピーを含む。ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤの２つのコピーを含み、かつＴＭＰは、ａ）第１の変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間、及びｂ）第１の変異型ＩＬ－２ＭＯＤと第２の変異型ＩＬ－２ＭＯＤとの間に、剛性ペプチドリンカーを含み、当該剛性ペプチドリンカーは、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有し、ここで、ｎは、１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。一方、ある場合、ＴＭＰは、変異型ＩＬ－２ＭＯＤとＴＭＰに存在するＩｇＦｃポリペプチドとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含み、ここで短い可動性ペプチドリンカーは、２～４、２～５、３～６、４～８、５～１０または１０～１４個のアミノ酸から構成される。ある場合、短い可動性ペプチドリンカーはＧＧＳである。
上述のように、ＴＭＰは１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含むことができる。例えば、ＴＭＰは、Ｒ１２Ｃ置換を有するβ２Ｍポリペプチドと、Ａ２３６Ｃ置換を有するクラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとを含むことができ、それにより、β２Ｍポリペプチドの位置１２におけるＣｙｓとクラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドの位置２３６におけるＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成される。別の具体例として、ＴＭＰは、ｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４９）配列（ここで、ｎは１、２または３である）を有するペプチドリンカーによって結合されたＫＲＡＳエピトープ及びβ２Ｍポリペプチドと、ｉｉ）Ｙ８４Ｃ置換を有するクラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとを含むことができ、それにより当該ペプチドリンカー中のＣｙｓと当該クラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドの位置８４におけるＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成される。他の具体例において、ＴＭＰは、ｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４９）配列（ここで、ｎは１、２、または３である）を有するペプチドリンカーによって結合されたＫＲＡＳエピトープ及びβ２Ｍポリペプチド（ここで、当該β２Ｍポリペプチドは、Ｒ１２Ｃ置換を有する）と、ｉｉ）Ｙ８４Ｃ置換及びＡ２３６Ｃ置換を有するクラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとを含むことができ、それにより、ａ）当該ペプチドリンカーのＣｙｓと当該クラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドの位置８４におけるＣｙｓとの間に第１のジスルフィド結合が形成されており、かつｂ）当該β２Ｍポリペプチドの位置１２におけるＣｙｓと当該クラスＩ ＭＨＣ重鎖ポリペプチドの位置２３６におけるＣｙｓとの間に第２のジスルフィド結合が形成されている。簡略化のため、第１のジスルフィド結合を「Ｇ２Ｃ／Ｙ８４Ｃ」と呼び、第２のジスルフィド結合を「Ｒ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃ」と呼ぶ。ＴＭＰは、ａ）Ｇ２Ｃ／Ｙ８４Ｃジスルフィド結合を含みかつＲ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃジスルフィド結合を含まないか、ｂ）Ｒ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃジスルフィド結合を含みかつＧ２Ｃ／Ｙ８４Ｃジスルフィド結合を含まないか、またはｃ）Ｇ２Ｃ／Ｙ８４Ｃジスルフィド結合及びＲ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃジスルフィド結合を含むことができる。ある場合、ＭＨＣクラスＩ重鎖は、位置８４にある非天然のＣｙｓと、位置１３９にある非天然の残基とを有し、それによりＣｙｓ－８４とＣｙｓ－１３９との間に鎖内ジスルフィド結合が形成される。
ＴＭＰは、ａ）Ｇ２Ｃ／Ｙ８４Ｃジスルフィド結合を含み、Ｒ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃジスルフィド結合を含まず、かつｂ）配置２または配置３である少なくとも１つのＭＯＤを含むものとすることができる。ＴＭＰは、ａ）Ｒ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃジスルフィド結合を含み、Ｇ２Ｃ／Ｙ８４Ｃジスルフィド結合を含まず、かつｂ）配置２または配置３である少なくとも１つのＭＯＤを含むものとすることができる。ＴＭＰは、ａ）Ｇ２Ｃ／Ｙ８４Ｃジスルフィド結合及びＲ１２Ｃ／Ａ２３６Ｃジスルフィド結合と、ｂ）配置２または配置３である少なくとも１つのＭＯＤとを含むことができる。
ある場合、ＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを含み、当該ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、（ｉ）位置８４のＡｌａ及び位置２３６のＣｙｓを有するＨＬＡ－Ａ０２０１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）ポリペプチド、または（ｉｉ）位置８４及び位置１３９のＣｙｓを有するＨＬＡ－Ａ０２０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ１３９Ｃ）ポリペプチド、または（ｉｉｉ）位置８４のＣｙｓ及び位置２３６のアラニンを有するＨＬＡ－Ａ０２０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６）ポリペプチドを含む。これらの具体例は、図３Ｂ～３Ｅに示される。
ある場合、ＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを含み、当該ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、（ｉ）位置８４のＡｌａ及び位置２３６のＣｙｓを有するＨＬＡ－Ａ＊１１０１（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）ポリペプチド、または（ｉｉ）位置８４及び位置２３６のＣｙｓを有するＨＬＡ－Ａ＊１１０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）ポリペプチド、または（ｉｉｉ）位置８４のＣｙｓ及び位置２３６のアラニンを有するＨＬＡ－Ａ＊１１０１（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６）ポリペプチドを含む。これらの具体例は、図４Ｂ～４Ｅに示される。
ある場合、ＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドを含み、当該ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドは、（ｉ）位置８４のＡｌａ及び位置２３６のＣｙｓを有するＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ａ、Ａ２３６Ｃ）ポリペプチド、または（ｉｉ）位置８４及び位置２３６のＣｙｓを有するＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６Ｃ）ポリペプチド、または（ｉｉｉ）位置８４のＣｙｓ及び位置２３６のアラニンを有するＨＬＡ－Ａ２４（Ｙ８４Ｃ、Ａ２３６）ポリペプチドを含む。これらの具体例は、図５Ｂ～５Ｅに示される。
非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ａに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４０７４）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｂに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４３９０）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｃに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４３９１）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｄに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４６７）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｅに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４６８）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｆに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４６９）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｇに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４７０）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｈに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４７１）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｉに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４７２）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｊに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４７３）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｋに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４４７８）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｌに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５１４）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｍに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５１５）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｎに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５４５）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｏに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５４６）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｐに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５４７）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｑに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５４８）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｒに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５４９）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｓに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５５０）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｔに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５５１）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｕに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５５２）を含むことができる。非限定的な一具体例として、ＴＭＰは、図１４Ｖに示すアミノ酸配列（ＴＭＰ４５５３）を含むことができる。
ＴＭＰのさらなる非限定的な具体例が図１６Ａ～１６Ｄに示されており、ここで「（Ｘ）」は剛性ペプチドリンカーである。例えば、（Ｘ）は、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号２４４）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）、（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）、（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）、及び（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）から選択されるアミノ酸配列を有する剛性ペプチドリンカーであり、ここで、ｎは１～１０の整数である（例えば、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ａに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＡＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ａに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＥＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ａに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＫＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ａに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）はＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチドであり、例えば、（Ｘ）はＡ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）（ここでｎは１または２）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｂに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＥＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｂに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＫＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｂに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）はＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチドであり、例えば、（Ｘ）はＡ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）（ここでｎは１または２）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｃに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＥＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｃに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＫＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｃに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）はＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチドであり、例えば、（Ｘ）はＡ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）（ここでｎは１または２）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｄに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＥＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｄに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）は（ＫＰ）ｎ（ｎは２～８）である。別の一具体例として、ＴＭＰは、図１６Ｄに示すアミノ酸配列を有することができ、ここで（Ｘ）はＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチドであり、例えば、（Ｘ）はＡ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２４５）（ここでｎは１または２）である。図１６Ａ～１６Ｄに示す具体的なＴＭＰのいずれかにおいて、ＫＲＡＳペプチドを異なるＫＲＡＳペプチドに置換することができる。好適なＫＲＡＳペプチドは本明細書に記載されている。図１６Ａ～１６Ｄに示す具体的なＴＭＰのいずれかにおいて、変異型ＩＬ－２ポリペプチドの２つのコピーの間にあるペプチドリンカーを剛性ペプチドリンカーに置換することができる。
核酸、組換え発現ベクター、及び改変宿主細胞
本開示は、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。ある場合、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列は、１つ以上の転写制御因子に作動可能に結合される。ある場合、転写制御因子は、真核細胞で機能するプロモーターである。ある場合、核酸は組換え発現ベクターに存在する。
本開示は、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。ある場合、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列は、１つ以上の転写制御因子に作動可能に結合される。ある場合、転写制御因子は、真核細胞で機能するプロモーターである。ある場合、核酸は組換え発現ベクターに存在する。
従って、本開示は、ＴＭＰをコードする核酸を含む組換え発現ベクターを提供する。ある場合、組換え発現ベクターは非ウイルスベクターである。ある場合、組換え発現ベクターは、ウイルス構築物であり、例えば、組換えアデノ随伴ウイルス構築物（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号を参照のこと）、組換えアデノウイルス構築物、組換えレンチウイルス構築物、組換えレトロウイルス構築物、非統合ウイルスベクターなどである。
好適な発現ベクターは当業者に周知である。例えば、公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１を参照のこと。このような発現ベクターに関するこれらの開示は、特にＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００５１５］～［００５２０］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００４０１］～［００４０６］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
本開示はさらに遺伝子改変宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、上記のような核酸または発現ベクターで遺伝子改変されている。
好適な宿主細胞として、酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞などの真核細胞が挙げられる。ある場合、宿主細胞は、哺乳動物細胞株の細胞である。好適な哺乳動物細胞株として、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株などが挙げられる。好適な哺乳動物細胞株として、ＨｅＬａ細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ－２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
ある場合、宿主細胞は、内因性ＭＨＣβ２Ｍを合成しないように遺伝子改変された哺乳動物細胞である。
ある場合、宿主細胞は、内因性ＭＨＣクラスＩ重鎖を合成しないように遺伝子改変された哺乳動物細胞である。ある場合、宿主細胞は、内因性ＭＨＣβ２Ｍを合成しないように、かつ内因性ＭＨＣクラスＩ重鎖を合成しないように遺伝子改変された哺乳動物細胞である。
Ｔ細胞調節ポリペプチドを生成する方法
本開示のＴＭＰは、本開示の遺伝子改変された宿主細胞を適当な培養培地中でインビトロ培養することによって生成させることができ、このような培養は、ＴＭＰの産生をもたらす。例えば、哺乳動物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）を、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターで遺伝子改変することができ、そして遺伝子改変された哺乳動物宿主細胞を、適当な培養培地中でインビトロ培養することができ、それによって、遺伝子改変された哺乳動物宿主細胞は、ＴＭＰを産生するようになる。ＴＭＰは、例えば、遺伝子改変哺乳動物宿主細胞が培養されている培養培地から単離することができ、及び／または遺伝子改変哺乳動物宿主細胞の細胞溶解物から単離することができる。ＴＭＰは、様々な確立された方法のいずれかを用いて単離することができる。ＴＭＰがそのＣ末端にＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、細胞内プロセシングによって、ＩｇＦｃポリペプチドのＣ末端からＣ末端Ｌｙｓ残基を除去することができる。例えば、ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ｍＡｂｓ ７：４及びＳｉｓｓｏｌａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｊ．Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４６：１１６７を参照のこと。また、上述のように、それぞれがＩｇＦｃポリペプチド（例えば、ＩｇＧ１Ｆｃ）を含む２つのＴＭＰは、２つのＴＭＰのホモ二量体を自発的に形成することができ、ここで、個々のＴＭＰは、それぞれのＩｇＦｃ部分の間の１つ以上のジスルフィド結合によって結合される。
本開示のＴＭＰは、本開示の遺伝子改変された宿主細胞を適当な培養培地中でインビトロ培養することによって生成させることができ、このような培養は、ＴＭＰの産生をもたらす。例えば、哺乳動物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）を、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む組換え発現ベクターで遺伝子改変することができ、そして遺伝子改変された哺乳動物宿主細胞を、適当な培養培地中でインビトロ培養することができ、それによって、遺伝子改変された哺乳動物宿主細胞は、ＴＭＰを産生するようになる。ＴＭＰは、例えば、遺伝子改変哺乳動物宿主細胞が培養されている培養培地から単離することができ、及び／または遺伝子改変哺乳動物宿主細胞の細胞溶解物から単離することができる。ＴＭＰは、様々な確立された方法のいずれかを用いて単離することができる。ＴＭＰがそのＣ末端にＩｇＦｃポリペプチドを含む場合、細胞内プロセシングによって、ＩｇＦｃポリペプチドのＣ末端からＣ末端Ｌｙｓ残基を除去することができる。例えば、ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１５）ｍＡｂｓ ７：４及びＳｉｓｓｏｌａｋ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ｊ．Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．＆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４６：１１６７を参照のこと。また、上述のように、それぞれがＩｇＦｃポリペプチド（例えば、ＩｇＧ１Ｆｃ）を含む２つのＴＭＰは、２つのＴＭＰのホモ二量体を自発的に形成することができ、ここで、個々のＴＭＰは、それぞれのＩｇＦｃ部分の間の１つ以上のジスルフィド結合によって結合される。
組成物
本開示は、本明細書に開示されるＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本開示は、核酸または組換え発現ベクターを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。
本開示は、本明細書に開示されるＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。本開示は、核酸または組換え発現ベクターを含む組成物（例えば、医薬組成物）を提供する。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む組成物
組成物は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰに加えて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。そのような賦形剤は、例えば、担体、希釈剤、緩衝剤、塩、可溶化剤、界面活性剤、安定剤、またはその他の添加剤であり、例えば、製造工程を補助し、安定性、バイオアベイラビリティ及び／または患者の受容性を保護、維持または増強し得るものである。薬学的に許容される賦形剤は、当業者に周知である。
組成物は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰに加えて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。そのような賦形剤は、例えば、担体、希釈剤、緩衝剤、塩、可溶化剤、界面活性剤、安定剤、またはその他の添加剤であり、例えば、製造工程を補助し、安定性、バイオアベイラビリティ及び／または患者の受容性を保護、維持または増強し得るものである。薬学的に許容される賦形剤は、当業者に周知である。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰが注射剤として（例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、及び／または静脈内で）組織に直接投与される場合、製剤は、すぐに使用可能な剤形（患者に直接注射または注入できるか、または注入のために生理食塩水と混和することができるもの）として提供することができ、あるいは場合により、非水性の剤形（例えば、水に加えて元にもどすことができる安定に保存可能な粉末）として、あるいは水性の剤形（例えば、薬学的に許容される担体及び賦形剤から構成される液剤）として提供することができる。製剤はまた、投与後のＴＭＰの血中半減期を高めるように提供することもできる。例えば、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、コロイドとして調製されたリポソーム製剤として提供することができ、あるいは、血中半減期を延ばすためのその他の従来技術において提供することができる。製剤は、制御放出または徐放の剤形で提供することもできる。
液体組成物製剤中のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの濃度は、大きく変わり得る（例えば、約０．１重量％未満から、通常少なくとも約２重量％から２０重量％～５０重量％またはそれ以上まで）。この範囲内に含まれる濃度は、約５～約１５ｍｇ／ｍＬ、約８～約１２ｍｇ／ｍＬ、約９～約１１ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、及び約１５ｍｇ／ｍＬである。濃度は、液体組成物中のＴＭＰの安定性を含む多数の因子に依存し得る。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは液体組成物中に存在する。ある場合、組成物は、ａ）ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ、及びｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）を含む。ある場合、組成物は、無菌であり、ヒト対象への投与に適している。
核酸または組換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはｍＲＮＡ）またはＴＭＰをコードする組換え発現ベクターを含む医薬組成物を提供する。公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１は、そのような組成物の調製方法を開示している。例えば、ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００５３７］～［００５４６］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００４２３］～［００４３２］を参照のこと。これらの開示は、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
本開示は、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはｍＲＮＡ）またはＴＭＰをコードする組換え発現ベクターを含む医薬組成物を提供する。公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１は、そのような組成物の調製方法を開示している。例えば、ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００５３７］～［００５４６］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００４２３］～［００４３２］を参照のこと。これらの開示は、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
Ｔ細胞活性を調節する方法
本開示は、エピトープ特異的Ｔ細胞（例えば、がん関連変異を含むＫＲＡＳペプチドのようなＫＲＡＳエピトープに特異的なＴ細胞）の活性を選択的に調節する方法を提供し、当該方法は、Ｔ細胞にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを接触させる段階を含み、ここで、Ｔ細胞にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。ある場合、この接触はインビトロで行う。ある場合、この接触はインビボで行う。
本開示は、エピトープ特異的Ｔ細胞（例えば、がん関連変異を含むＫＲＡＳペプチドのようなＫＲＡＳエピトープに特異的なＴ細胞）の活性を選択的に調節する方法を提供し、当該方法は、Ｔ細胞にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを接触させる段階を含み、ここで、Ｔ細胞にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する。ある場合、この接触はインビトロで行う。ある場合、この接触はインビボで行う。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰが活性化ポリペプチドであるＭＯＤを含む場合、Ｔ細胞にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを接触させると、エピトープ特異的Ｔ細胞が活性化され、ＫＲＡＳエピトープを発現するがん細胞に対するＴ細胞の細胞傷害活性が増加し、及び／またはエピトープ特異的Ｔ細胞の数が増加する。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、それを必要とする個体に投与されると、エピトープ特異的Ｔ細胞応答とエピトープ非特異的Ｔ細胞応答の両方を誘導する。すなわち、ある場合、ＴＭＰは、それを必要とする個体に投与されると、（ｉ）ＴＭＰに存在するＫＲＡＳエピトープに特異的なＴＣＲとＴＭＰに存在するＭＯＤに結合するｃｏ－ＭＯＤとの両方を提示する第１のＴ細胞の活性を調節することにより、エピトープ特異的Ｔ細胞応答を誘導し、かつ（ｉｉ）ＴＭＰに存在するＫＲＡＳエピトープ以外のエピトープに特異的なＴＣＲとＴＭＰに存在するＭＯＤに結合するｃｏ－ＭＯＤとを提示する第２のＴ細胞の活性を調節することにより、エピトープ非特異的Ｔ細胞応答を誘導する。エピトープ特異的Ｔ細胞応答のエピトープ非特異的Ｔ細胞応答に対する比は、少なくとも２：１、少なくとも５：１、少なくとも１０：１、少なくとも１５：１、少なくとも２０：１、少なくとも２５：１、少なくとも５０：１、または少なくとも１００：１である。エピトープ特異的Ｔ細胞応答のエピトープ非特異的Ｔ細胞応答に対する比は、約２：１～約５：１、約５：１～約１０：１、約１０：１～約１５：１、約１５：１～約２０：１、約２０：１～約２５：１、約２５：１～約５０：１、約５０：１～約１００：１、または１００：１超である。この比率は、標的ＫＲＡＳエピトープに特異的なＴ細胞数の増加と、それに対する、その標的エピトープに特異的でないＴ細胞数の増加とを測定することによって決定される。例えば、通常のフローサイトメトリー法を用いることができる。Ｔ細胞の「活性を調節する」ことには、変異型ＩＬ－２などの活性化ＭＯＤが存在する場合、以下の１つ以上が含まれ得る。ｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞を活性化すること、ｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞の細胞傷害活性を誘導すること、ｉｉｉ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞による細胞毒素（例えば、パーフォリン、グランザイム、グラニュライシン）の産生及び放出を誘導すること、ｉｖ）細胞傷害性（例えば、ＣＤ８＋）Ｔ細胞の増殖を誘導すること。
上述したように、ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、それを必要とする個体に投与されると、エピトープ特異的Ｔ細胞の増殖を誘導する。エピトープ特異的Ｔ細胞の割合の増加は、通常のフローサイトメトリー法により測定することができる（例えば、下記の実施例２を参照のこと）。したがって、例えば、ＫＲＡＳエピトープに特異的な全ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合は、ＴＭＰとの接触後に、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、または４倍より高く増加し得る。
本開示は、ＭＯＤを標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法を提供し、当該方法は、Ｔ細胞の混合群にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを接触させる段階を含み、ここで、Ｔ細胞の混合群は、標的Ｔ細胞及び非標的Ｔ細胞を含み、ここで、標的Ｔ細胞は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ内に存在するＫＲＡＳエピトープに特異的であり（例えば、標的Ｔ細胞は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ内に存在するＫＲＡＳエピトープに特異的であり）、接触させることにより、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ内に存在する１つ以上のＭＯＤが標的Ｔ細胞に送達される。ある場合、Ｔ細胞群はインビトロである。ある場合、Ｔ細胞群は個体内のインビボである。ある場合、当該方法は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを個体に投与する段階を含む。ある場合、標的Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞である。ある場合、Ｔ細胞の混合群は、個体から得られた混合Ｔ細胞のインビトロ群であり、接触させることにより、標的Ｔ細胞の活性化及び／または増殖がもたらされ、活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞の群が生成される。ある場合、当該方法は、活性化及び／または増殖した標的Ｔ細胞の群を個体に投与する段階をさらに含む。
本開示は、個体から得られたＴ細胞の混合群において、目的のエピトープ（例えば、がんエピトープ、がん関連変異を含むＫＲＡＳペプチド）に結合する標的Ｔ細胞の存在を検出する方法を提供し、当該方法は、ａ）Ｔ細胞の混合群にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰをインビトロで接触させること（ここで、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、目的のＫＲＡＳエピトープを含む）、及びｂ）当該接触に応答しているＴ細胞の活性化及び／または増殖を検出する段階を含み、ここで、活性化及び／または増殖したＴ細胞は、標的Ｔ細胞が存在することを示す。
治療方法
本開示は、個体の治療方法を提供し、当該方法は、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰまたはＴＭＰをコードする１種以上の核酸を、個体を治療するのに有効な量で、個体に投与する段階を含む。また、ヒトまたは非ヒト動物の治療方法に使用するためのＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰも提供される。ある場合、治療方法は、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の組換え発現ベクターを、治療を必要とする個体に投与する段階を含む。ある場合、治療方法は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１種以上の核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）を、治療を必要とする個体に投与する段階を含む。ある場合、治療方法は、治療を必要とする個体にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与する段階を含む。治療可能な疾患には、例えば、がん、例えば、ＫＲＡＳペプチド（例えば、上述したような変異型ＫＲＡＳペプチド）を発現するがんが含まれる。したがって、本開示は、有効量のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを治療が必要な個体に投与する段階を含む治療方法を提供する。
本開示は、個体の治療方法を提供し、当該方法は、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰまたはＴＭＰをコードする１種以上の核酸を、個体を治療するのに有効な量で、個体に投与する段階を含む。また、ヒトまたは非ヒト動物の治療方法に使用するためのＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰも提供される。ある場合、治療方法は、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の組換え発現ベクターを、治療を必要とする個体に投与する段階を含む。ある場合、治療方法は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１種以上の核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ分子）を、治療を必要とする個体に投与する段階を含む。ある場合、治療方法は、治療を必要とする個体にＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与する段階を含む。治療可能な疾患には、例えば、がん、例えば、ＫＲＡＳペプチド（例えば、上述したような変異型ＫＲＡＳペプチド）を発現するがんが含まれる。したがって、本開示は、有効量のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを治療が必要な個体に投与する段階を含む治療方法を提供する。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを、個体におけるがんを治療するために、治療を必要とする個体に投与することができ、ここで、がんは、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰに存在するＫＲＡＳペプチドを発現するものである。例えば、がんは、その細胞がＫＲＡＳ（例えば、上述したようなＫＲＡＳの変異型）を発現または過剰発現するものであり得る。本開示は、個体におけるがんを治療する方法を提供し、当該方法は、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰの有効量、またはＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１種以上の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）の有効量を個体に投与する段階を含み、ここで、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰは、ＫＲＡＳエピトープであるＴ細胞エピトープを含み、かつＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰは、刺激性ＭＯＤを含む。ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの「有効量」は、後述するように単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、個体における全腫瘍量（すなわち、体内のがんの量）が減少するか、あるいは、患者における全腫瘍量が十分な期間比較的安定に維持され、標準的な固形がん効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）により判定した結果、患者において「安定した疾患」が確認されるようになる量である。例えば、Ａｙｋａｎ ａｎｄ Ｏｚａｔｌｉ（２０２０）Ｗｏｒｌｄ Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌ． １１：５３を参照のこと。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、後述するように単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、腫瘍の大きさが十分な量減少し、かつ、標準的な固形がん効果判定基準により判定した結果、十分な期間、患者において「部分寛解」が確認されるようになる量である。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、腫瘍の大きさが十分な量減少し、かつ、標準的な固形がん効果判定基準により判定した結果、十分な期間、患者において「完全寛解」が確認されるようになる量である。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与する前またはＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与しない場合の個体におけるがん細胞の数に比べて、個体におけるがん細胞の数を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる量である。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、実質的に検出できないレベルまで含めて、個体内のがん細胞の数を減少させる量である。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、治療を必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１回または複数回投与した場合に個体における腫瘍体積を減少させる量である。例えば、ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として、治療を必要とする個体（腫瘍を有する個体）に１回または複数回投与した場合に、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与する前またはＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与しない場合の個体における腫瘍体積に比べて、個体における腫瘍体積を少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少させる量である。腫瘍体積は、式（長さ×幅×幅）／２を用いて決定され、ここで、長さは最大腫瘍直径を表し、幅はそれに垂直な腫瘍直径を表す。ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、その個体の全生存期間を増加させる量である。例えば、ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与しない場合の個体の予想生存期間に比べて、個体の生存期間を少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、３ヶ月～６ヶ月、６ヶ月～１年、１年～２年、２年～５年、５年～１０年、または１０年超延ばす量である。
ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの有効量は、単独療法としてまたは併用療法の一部として（例えば、免疫チェックポイント阻害薬との併用療法の一部として）、治療を必要とする個体に１回または複数回投与した場合に、患者における循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）のレベルを、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与する前またはＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを投与しない場合の個体におけるｃｔＤＮＡレベルと比べて、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％低下させる量である。ｃｔＤＮＡのレベルは、任意の公知の方法を用いて決定することができ、また、同じ方法を一連の試料とともに用いれば、それが低下したか、どれだけの割合で低下したか決定することができる。
本開示の方法で治療可能ながんには、がん細胞がＫＲＡＳの変異型を発現するがんが含まれる。そのような具体例として腺がん及び造血器腫瘍が挙げられる。本開示の方法により治療可能ながんの具体例として、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、前立腺がん、腎臓がん、急性骨髄性白血病、中皮腫、甲状腺がん、頭頸部がん、胃がん、尿路上皮がん、子宮頸がん、及び卵巣子宮内膜がんが挙げられる。
上述のとおり、ある場合、対象を治療する方法を実施するにあたり、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを治療が必要な個体に投与する。別の場合、対象を治療する方法を実施するにあたり、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列（例えば、ＤＮＡまたはｍＲＮＡ）を含む１種以上の核酸を治療が必要な個体に投与する。例えば、別の場合、１種以上の核酸（例えば、１種以上の組換え発現ベクター）を治療が必要な個体に投与する。
投与量
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの好適な投与量は、様々な臨床的要因に基づいて、主治医または他の資格を有する医療従事者によって決定することができる。医療分野においてよく知られているように、任意の１人の患者に対する投与量は、多くの因子に依存する。そのような因子には、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与時間、及び投与経路、一般的な健康状態、及び同時に投与される他の薬剤が含まれる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの１回あたりの投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の間とすることができ、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の間、例えば０．５ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重の間、１ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重の間、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の間、１０ｍｇ／ｋｇ体重～１５ｍｇ／ｋｇ体重の間、１５ｍｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の間とすることができるが、特に前述の因子を考慮すると、この具体的な範囲を超える用量も想定される。処方が持続点滴である場合、投与量は、毎分体重１ｋｇあたり１μｇ～１０ｍｇの範囲とすることもできる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重～５０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの具体的な量として、１ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、及び約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重が挙げられる。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの好適な投与量は、様々な臨床的要因に基づいて、主治医または他の資格を有する医療従事者によって決定することができる。医療分野においてよく知られているように、任意の１人の患者に対する投与量は、多くの因子に依存する。そのような因子には、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与時間、及び投与経路、一般的な健康状態、及び同時に投与される他の薬剤が含まれる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの１回あたりの投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の間とすることができ、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の間、例えば０．５ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重の間、１ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重の間、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重の間、１０ｍｇ／ｋｇ体重～１５ｍｇ／ｋｇ体重の間、１５ｍｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の間とすることができるが、特に前述の因子を考慮すると、この具体的な範囲を超える用量も想定される。処方が持続点滴である場合、投与量は、毎分体重１ｋｇあたり１μｇ～１０ｍｇの範囲とすることもできる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの投与量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重～５０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができ、例えば、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重とすることができる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの具体的な量として、１ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、及び約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重が挙げられる。
当業者であれば、投与をどれだけ繰り返すべきか、体液または組織における投与薬剤の滞留時間及び濃度の測定値に基づいて、容易に推定することができる。治療が成功した後、疾患の再発を防止するための維持療法を患者に受けさせることが望ましい場合があり、この場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの投与における維持量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、または２０ｍｇ／ｋｇ体重超である。
用量が特定のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ、症状の重症度、及び副作用に対する対象の感受性の関数として変化し得ることは、当業者にとって容易に理解できるところである。所与の化合物に対する好ましい投与量は、当業者により、様々な手段によって容易に決定可能である。
ある場合、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクターを複数回投与する。ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクターの投与頻度は、様々な因子のいずれか、例えば症状の重篤度などに応じて変わり得る。例えば、ある場合、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクターは、月に１回、月に２回、月に３回、隔週（ｑｏｗ）、週に１回（ｑｗ）、２週に１回、３週に１回、４週に１回、週に２回（ｂｉｗ）、週に３回（ｔｉｗ）、週に４回、週に５回、週に６回、隔日（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与される。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを静脈内投与する場合、治療開始時には、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、または１ヶ月に１回の投与を一般的に採用することができる。
ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクターの投与期間、例えば、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクターが投与される期間は、様々な因子のいずれか、例えば、患者の反応などに応じて変わり得る。例えば、ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクターは、約１日～約１週間、約２週間～約４週間、約１ヶ月～約２ヶ月、約２ヶ月～約４ヶ月、約４ヶ月～約６ヶ月、約６ヶ月～約８ヶ月、約８ヶ月～約１年、約１年～約２年、または約２年～約４年、またはそれ以上の期間にわたって投与することができる。
投与経路
有効薬剤（ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクター）は、インビボ及びインビトロの方法、ならびに全身投与経路及び局所投与経路を含む、薬物送達に適した任意の利用可能な方法及び経路を用いて個体に投与される。
有効薬剤（ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、核酸、または組換え発現ベクター）は、インビボ及びインビトロの方法、ならびに全身投与経路及び局所投与経路を含む、薬物送達に適した任意の利用可能な方法及び経路を用いて個体に投与される。
本開示のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、典型的には静脈内投与により送達されるが、他の通常の薬学的に許容される投与経路、例えば、腫瘍内、腫瘍周囲、筋肉内、リンパ管内、気管内、頭蓋内、皮下、皮内、局所塗布、動脈内、直腸、鼻腔、経口、ならびに他の経腸及び非経口投与経路も使用することができる。必要であれば、複数の投与経路を、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び／または所望の効果に応じて、組み合わせることができ、あるいは、調整することができる。ＴＭＰもしくは二量体化ＴＭＰ、または核酸もしくは組換え発現ベクターは、単回投与または複数回投与することができる。
併用療法
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、１つ以上の追加の治療薬または療法と組み合わせて、それを必要とする個体に投与することができる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの好適な投与量は、ＴＭＰによる単独療法の投与量（上述）と同じであるか、または単独療法の投与量より少なくても多くてもよい。好適な追加の治療薬として、例えば、ｉ）免疫チェックポイント阻害薬、ｉｉ）がん化学療法薬、ｉｉｉ）ＫＲＡＳのがん関連変異型を阻害する薬剤、及びｉｖ）１つまたは複数の別のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰが挙げられる。好適な追加の療法として、例えば、放射線治療、手術（例えば、腫瘍の外科的切除）などが挙げられる。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、１つ以上の追加の治療薬または療法と組み合わせて、それを必要とする個体に投与することができる。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの好適な投与量は、ＴＭＰによる単独療法の投与量（上述）と同じであるか、または単独療法の投与量より少なくても多くてもよい。好適な追加の治療薬として、例えば、ｉ）免疫チェックポイント阻害薬、ｉｉ）がん化学療法薬、ｉｉｉ）ＫＲＡＳのがん関連変異型を阻害する薬剤、及びｉｖ）１つまたは複数の別のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰが挙げられる。好適な追加の療法として、例えば、放射線治療、手術（例えば、腫瘍の外科的切除）などが挙げられる。
ある場合、当該方法は、それを必要とする個体に、ａ）ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む第１の組成物、及びｂ）免疫チェックポイント阻害薬を含む第２の組成物を投与する段階を含む。ある場合、当該方法は、それを必要とする個体に、ａ）ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む第１の組成物、及びｂ）ＫＲＡＳのがん関連変異型（例えばＫＲＡＳ（Ｇ１２ＣまたはＧ１２Ｖ））を阻害する薬剤を含む第２の組成物を投与する段階を含む。ある場合、当該方法は、それを必要とする個体に、ａ）ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む第１の組成物、及びｂ）別のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む第２の組成物を投与する段階を含む。
ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、それを必要とする個体に、１つまたは複数の追加の治療薬が投与されるのと同時にまたは異なる時間に投与することができる。
したがって、例えば、治療方法は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び少なくとも１つの追加の治療薬を共に投与する段階を含むことができる。「共に投与する」とは、ある治療効果を達成するために、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰと少なくとも１つの追加の治療薬の両方を個体に投与（必ずしも同時である必要はない）することを意味する。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び少なくとも１つの追加の治療薬の投与は、実質的に同時に行うことができ、例えば、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、少なくとも１つの追加の治療薬の投与の約１分～約２４時間以内（例えば、約１分以内、約５分以内、約１５分以内、約３０分以内、約１時間以内、約４時間以内、約８時間以内、約１２時間以内、または約２４時間以内）に個体に投与することができる。ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、少なくとも１つの追加の治療薬による治療を受けているまたは受けたことがある個体に投与される。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び少なくとも１つの追加の治療薬の投与は、異なる時間及び／または異なる頻度で行うことができる。
別の具体例として、治療方法は、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び免疫チェックポイント阻害薬（例えば、免疫チェックポイントに特異的な抗体）を共に投与する段階を含むことができる。「共に投与する」とは、ある治療効果を達成するために、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰと免疫チェックポイントに特異的な抗体の両方を個体に投与（必ずしも同時である必要はない）することを意味する。ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び免疫チェックポイントに特異的な抗体の投与は、実質的に同時に行うことができ、例えば、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、免疫チェックポイントに特異的な抗体の投与の約１分～約２４時間以内（例えば、約１分以内、約５分以内、約１５分以内、約３０分以内、約１時間以内、約２時間以内、約４時間以内、約８時間以内、約１２時間以内、または約２４時間以内）に個体に投与することができる。一方、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰ及び免疫チェックポイント阻害薬を、異なるスケジュール（異なる日及び異なる週を含む）及び異なる頻度で投与することができる。ある場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、免疫チェックポイントに特異的な抗体による治療を受けているまたは受けたことがある個体に投与される。
具体的な免疫チェックポイント阻害薬には、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ９６、ＣＤ７３、ＣＤ４７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＳＦ１Ｒ、ＪＡＫ、ＰＩ３Ｋデルタ、ＰＩ３Ｋガンマ、ＴＡＭ、アルギナーゼ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢとしても知られる）、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１２２、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－Ｌ２などの免疫チェックポイントポリペプチドを標的とする阻害薬が含まれる。ある場合、免疫チェックポイントポリペプチドは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１２２、及びＣＤ１３７から選択される刺激性チェックポイント分子である。ある場合、免疫チェックポイントポリペプチドは、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＣＤ９６、ＴＩＧＩＴ、及びＶＩＳＴＡから選択される阻害性チェックポイント分子である。
ある場合、免疫チェックポイント阻害薬は、免疫チェックポイントに特異的な抗体である。好適な抗免疫チェックポイント抗体には、以下のものがあるが、これらに限定されるものではない。ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ／Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－４７３６（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アレルマブ（Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ）、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ、（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、ピジリズマブ（ＣｕｒｅＴｅｃｈ，Ｌｔｄ．）、ＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ Ｓ．Ａ．）、ＭＧＡ２７１（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）、ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、リリルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ウレルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＰＦ－０５０８２５６６（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩＰＨ２１０１（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－６４６９（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、ＣＰ－８７０，８９３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、モガムリズマブ（協和発酵キリン）、バルリルマブ（ＣｅｌＩＤｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、アベルマブ（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、ガリキシマブ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ＡＭＰ－５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、ＡＵＮＰ １２（Ａｕｒｉｇｅｎｅ及びＰｉｅｒｒｅ Ｆａｂｒｅ）、インドキシモド（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＮＬＧ－９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＩＮＣＢ０２４３６０（Ｉｎｃｙｔｅ）、ＫＮ０３５、及びそれらの組み合わせ。例えば、ある場合、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＰＤ－１抗体である。好適な抗ＰＤ－１抗体として、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５としても知られる）、ピジリズマブ、ＳＨＲ－１２１０、ＰＤＲ００１、及びＡＭＰ－２２４が挙げられる。ある場合、抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブまたはＰＤＲ００１である。好適な抗ＰＤ１抗体は、米国特許公開番号２０１７／００４４２５９に記載されている。ピジリズマブについては、例えば、Ｒｏｓｅｎｂｌａｔｔ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：４０９－１８を参照のこと。ある場合、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＣＴＬＡ－４抗体である。ある場合、抗ＣＴＬＡ－４抗体はイピリムマブまたはトレメリムマブである。トレメリムマブについては、例えば、Ｒｉｂａｓ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３１：６１６－２２を参照のこと。ある場合、免疫チェックポイント阻害薬は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。ある場合、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、ＢＭＳ－９３５５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６としても知られる）、ＫＮ０３５、またはＭＳＢ００１０７１８Ｃである。ある場合、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）またはＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）である。デュルバルマブについては、例えば、ＷＯ２０１１／０６６３８９を参照のこと。アテゾリズマブについては、例えば、米国特許第８，２１７，１４９号を参照のこと。
このようなチェックポイント阻害薬のうち、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、及びＣＴＬＡ－４に対する抗体が最も一般的であり、少なくともニボルマブ、トレメリムマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、チスレリズマブ、及びデュルバルマブが、ＦＤＡ及び／または米国以外の規制機関によって承認されている。本開示のＴＭＰ及び二量体化ＴＭＰはまた、複数のチェックポイント阻害薬の組み合わせ、例えば、ｉ）ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に対する抗体と（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４に対する抗体の組み合わせと共に投与してもよい。
ある場合、少なくとも１つの追加の治療薬は、ＫＲＡＳの変異型（例えば、ＫＲＡＳ（Ｇ１２Ｃ）、ＫＲＡＳ（Ｋ１１７Ａ）など）を選択的に阻害する薬剤である。ＫＲＡＳの変異型を選択的に阻害する薬剤の具体例として、ＡＲＳ－１６２０、ＡＭＧ５１０、ＫＲＡ－５３３、及びＭＲＴＸ８４９が挙げられる。
ある場合、少なくとも１つの追加の治療薬は、１つ以上の別のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む。ある場合、当該方法は、治療が必要な個体に、ａ）第１のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む第１の組成物（ここで、第１のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、ある１種のＴＭＰまたは二量体化である）、及びｂ）第２のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰを含む第２の組成物（ここで、第２のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、第１のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰと異なるＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰであり、例えば、異なるＫＲＡＳエピトープ及び／または１つ以上の異なるＭＯＤを含むものである）を投与する段階を含む。それに加えてまたはそれの代わりに、１つ以上の追加のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、ＫＲＡＳペプチドエピトープ以外のがん関連ペプチドであるエピトープを含むことができる。
治療に適した対象
本開示の方法による治療に適した対象には、がんを有する個体が含まれ、例えば、がんを有すると診断された個体、がんの治療を受けたが効果がなかった個体、及びがんの治療を受け、当初は効果があったがその後治療に抵抗性となった個体が含まれる。治療に適した対象として、がん細胞がＫＲＡＳの変異型を発現するがん（ここで、ＫＲＡＳの変異型は、がん関連変異型である）を有する個体が挙げられる。治療方法に適した対象として、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、前立腺がん、腎臓がん、急性骨髄性白血病、中皮腫、甲状腺がん、頭頸部がん、胃がん、尿路上皮がん、子宮頸がん、及び卵巣子宮内膜がんのようながんを有する個体が挙げられる。
本開示の方法による治療に適した対象には、がんを有する個体が含まれ、例えば、がんを有すると診断された個体、がんの治療を受けたが効果がなかった個体、及びがんの治療を受け、当初は効果があったがその後治療に抵抗性となった個体が含まれる。治療に適した対象として、がん細胞がＫＲＡＳの変異型を発現するがん（ここで、ＫＲＡＳの変異型は、がん関連変異型である）を有する個体が挙げられる。治療方法に適した対象として、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、乳がん、肺がん、卵巣がん、膵臓がん、結腸直腸がん、前立腺がん、腎臓がん、急性骨髄性白血病、中皮腫、甲状腺がん、頭頸部がん、胃がん、尿路上皮がん、子宮頸がん、及び卵巣子宮内膜がんのようながんを有する個体が挙げられる。
ある場合、対象は、免疫チェックポイント阻害薬による治療を受けている個体である。ある場合、対象は、免疫チェックポイント阻害薬による治療を受けたが、そのような治療を受けたにもかかわらず疾患が進行した個体である。ある場合、対象は、がん化学療法薬による治療を受けているまたは受けたことがある個体である。ある場合、対象は、免疫チェックポイント阻害薬による治療を受ける準備をしている個体、または免疫チェックポイント阻害薬による治療を受けているまたは受けたことがある個体である。ある場合、対象は、がん化学療法薬、放射線治療、手術、及び／または別の治療薬による治療を受ける準備をしている、治療を受けている、または治療を受けたことがある個体である。
検出方法
本開示のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、診断用途及び治療用途に有用である。後述するように、診断用途に使用される場合、本開示のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰはさらに検出可能な標識を含むことができ、この検出可能な標識を検出することにより、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの標的Ｔ細胞への結合が検出される。そのような診断用途に使用される場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、１つ以上のＭＯＤを含まなくともよく、そのような場合、ＭＯＤを含まないＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、抗原提示ポリペプチド（ＡＰＰ）と呼ばれ、この場合、ＫＲＡＳエピトープを提示するものである。ＴＭＰと同様に、ＡＰＰも二量体化することができる。したがって、ＴＭＰ及び二量体化ＴＭＰを用いた検出方法に関する以下の議論は、ＡＰＰ及び二量体化ＡＰＰの使用にも同様に当てはまると考えられる。図１４Ｍに「４５１５」として示される構築物は、そのようなＡＰＰの具体例である。
本開示のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、診断用途及び治療用途に有用である。後述するように、診断用途に使用される場合、本開示のＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰはさらに検出可能な標識を含むことができ、この検出可能な標識を検出することにより、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰの標的Ｔ細胞への結合が検出される。そのような診断用途に使用される場合、ＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、１つ以上のＭＯＤを含まなくともよく、そのような場合、ＭＯＤを含まないＴＭＰまたは二量体化ＴＭＰは、抗原提示ポリペプチド（ＡＰＰ）と呼ばれ、この場合、ＫＲＡＳエピトープを提示するものである。ＴＭＰと同様に、ＡＰＰも二量体化することができる。したがって、ＴＭＰ及び二量体化ＴＭＰを用いた検出方法に関する以下の議論は、ＡＰＰ及び二量体化ＡＰＰの使用にも同様に当てはまると考えられる。図１４Ｍに「４５１５」として示される構築物は、そのようなＡＰＰの具体例である。
従って、本開示は、抗原特異的Ｔ細胞の存在及び／または活性化を検出する方法を提供する。当該方法は、Ｔ細胞に本開示のＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰを接触させること、及びＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰのＴ細胞への結合、及び／またはＴ細胞の活性化を検出する段階を含む。本開示は、抗原特異的Ｔ細胞を検出する方法を提供し、当該方法は、Ｔ細胞に本開示のＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰを接触させる段階を含み、ここで、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰのＴ細胞への結合は、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰに存在するＫＲＡＳエピトープにＴ細胞が特異的であることを示すものであり、すなわち、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰに存在するＫＲＡＳエピトープに特異的なＴ細胞受容体をＴ細胞が有することを示すものである。
ある場合、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰは検出可能な標識を含む。好適な検出可能な標識として、放射性同位体、蛍光ポリペプチド、または蛍光産物を生成する酵素、及び着色産物を生成する酵素が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰが検出可能な標識を含む場合、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰのＴ細胞への結合は、検出可能な標識を検出することによって検出される。
ある場合、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰは、インビボイメージングでの使用に適した検出可能な標識を含む。そのような標識には、例えば、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）、近赤外（ＮＩＲ）光学イメージング、Ｘ線イメージング、コンピューター支援断層撮影法（ＣＡＴ）、もしくは磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、または他のインビボイメージング法での使用に適した検出可能な標識がある。インビボイメージングに適した標識の具体例として、ガドリニウムキレート（例えば、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、ＤＴＰＡ－ビスメチルアミド（ＢＭＡ）、ＤＯＴＡ（ドデカン四酢酸）、またはＨＰ－ＤＯ３Ａ（１，４，７－トリス（カルボキシメチル）－１０－（２’－ヒドロキシプロピル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン）とのガドリニウムキレート）、鉄キレート、マグネシウムキレート、マンガンキレート、銅キレート、クロムキレート、ヨウ素系材料、及び放射性核種が挙げられる。好適な放射性核種として、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３０Ｉ、１３１Ｉ、１３３Ｉ、１３５Ｉ、４７Ｓｃ、７２Ａｓ、７２Ｓｅ、９０Ｙ、８８Ｙ、９７Ｒｕ、１００Ｐｄ、１０１ｍＲｈ、１１９Ｓｂ、１２８Ｂａ、１９７Ｈｇ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、１０９Ｐｄ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、７５Ｂｒ、７７Ｂｒ、９９ｍＴｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、及び１８Ｆが挙げられるが、これらに限定されるものではない。ある場合、検出可能な標識は、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、７８Ｂｒ、８２Ｒｂ、８６Ｙ、９０Ｙ、２２Ｎａ、２６Ａｌ、４０Ｋ、８３Ｓｒ、８９Ｚｒ、または１２４Ｉなどの陽電子放出同位体である。ある場合、検出可能な標識は６４Ｃｕである。例えば、Ｗｏｏｄｈａｍ，Ａｎｄｒｅｗ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ ｖｉｖｏ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏ－ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｒｔｉｃｌｅｓ（２０２０）ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５９２－０２０－０９３４－５を参照のこと。
好適な蛍光タンパク質として、以下のものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）またはその変種、ＧＦＰの青色蛍光変種（ＢＦＰ）、ＧＦＰのシアン蛍光変種（ＣＦＰ）、ＧＦＰの黄色蛍光変種（ＹＦＰ）、高感度ＧＦＰ（ＥＧＦＰ）、高感度ＣＦＰ（ＥＣＦＰ）、高感度ＹＦＰ（ＥＹＦＰ）、ＧＦＰＳ６５Ｔ、エメラルド、トパーズ（ＴＹＦＰ）、ビーナス、シトリーン、ｍシトリーン、ＧＦＰｕｖ、不安定化ＥＧＦＰ（ｄＥＧＦＰ）、不安定化ＥＣＦＰ（ｄＥＣＦＰ）、不安定化ＥＹＦＰ（ｄＥＹＦＰ）、ｍＣＦＰｍ、セルリアン、Ｔ－サファイア、ＣｙＰｅｔ、ＹＰｅｔ、ｍＫＯ、ＨｃＲｅｄ、ｔ－ＨｃＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ＤｓＲｅｄ－モノマー、Ｊ－Ｒｅｄ、ダイマー２、ｔ－ダイマー２（１２）、ｍＲＦＰ１、ポシロポリン、レニラＧＦＰ、モンスターＧＦＰ、ｐａＧＦＰ、カエデタンパク質及びキンドリングタンパク質、フィコビリタンパク質、ならびにＢ－フィコエリトリン、Ｒ－フィコエリトリン及びアロフィコシアニンを含むフィコビリタンパク質コンジュゲート。蛍光タンパク質の他の具体例として、ｍＨｏｎｅｙｄｅｗ、ｍＢａｎａｎａ、ｍＯｒａｎｇｅ、ｄＴｏｍａｔｏ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ｍＴａｎｇｅｒｉｎｅ、ｍＳｔｒａｗｂｅｒｒｙ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＧｒａｐｅ１、ｍＲａｓｐｂｅｒｒｙ、ｍＧｒａｐｅ２、ｍＰｌｕｍ（Ｓｈａｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２：９０５－９０９）などがある。例えば、Ｍａｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：９６９－９７３に記載されているような、花虫網種由来の様々な蛍光タンパク質及び着色タンパク質のいずれもが、使用に適している。
好適な酵素として、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）、β－ガラクトシダーゼ（ＧＡＬ）、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、β－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、β－グルクロニダーゼ、インベルターゼ、キサンチンオキシダーゼ、ホタルルシフェラーゼ、グルコースオキシダーゼ（ＧＯ）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
ある場合、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰのＴ細胞への結合は、ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰに特異的で検出可能な標識抗体を用いて検出される。ＴＭＰ／ＡＰＰまたは二量体化ＴＭＰ／ＡＰＰに特異的な抗体は、放射性同位元素、蛍光ポリペプチド、蛍光産物を生成する酵素、または着色産物を生成する酵素などの検出可能な標識を含むことができる。
ある場合、検出されるＴ細胞は、複数のＴ細胞を含む試料中に存在する。例えば、検出されるＴ細胞は、１０～１０９個のＴ細胞、例えば１０～１０２個、１０２～１０４個、１０４～１０６個、１０６～１０７個、１０７～１０８個、または１０８～１０９個、あるいは１０９個超のＴ細胞を含むサンプル中に存在し得る。
ＨＬＡ／ペプチド結合アッセイ
ある特定のペプチド（例えば、ＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチド）がクラスＩ ＨＬＡ（ＨＬＡ重鎖及びβ２Ｍポリペプチドを含む）に結合するかどうか、そしてＨＬＡ複合体に結合したとき、エピトープをＴＣＲに効果的に提示できるかどうかは、多くの周知の方法のいずれかを用いて判定することができる。アッセイには、結合アッセイ及びＴ細胞活性化アッセイが含まれ、それらには、細胞ベースの結合アッセイ、生化学的結合アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、細胞毒性アッセイ、及びペプチド－ＨＬＡ四量体を用いた抗原特異的Ｔ細胞の検出が含まれる。そのようなアッセイは、公開された科学文献ならびに公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１に記載されている。この公報の特異的結合アッセイに関する開示は、特に段落［００２１７］～［００２２５］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
ある特定のペプチド（例えば、ＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチド）がクラスＩ ＨＬＡ（ＨＬＡ重鎖及びβ２Ｍポリペプチドを含む）に結合するかどうか、そしてＨＬＡ複合体に結合したとき、エピトープをＴＣＲに効果的に提示できるかどうかは、多くの周知の方法のいずれかを用いて判定することができる。アッセイには、結合アッセイ及びＴ細胞活性化アッセイが含まれ、それらには、細胞ベースの結合アッセイ、生化学的結合アッセイ、Ｔ細胞活性化アッセイ、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ、細胞毒性アッセイ、及びペプチド－ＨＬＡ四量体を用いた抗原特異的Ｔ細胞の検出が含まれる。そのようなアッセイは、公開された科学文献ならびに公開されたＰＣＴ出願ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１に記載されている。この公報の特異的結合アッセイに関する開示は、特に段落［００２１７］～［００２２５］を含め、参照により本明細書に明記されたものとして組み込まれる。
別の具体例として、ペプチド－ＨＬＡ複合体の多量体（例えば、四量体）が、蛍光タグまたは重金属タグを伴って生成される。この多量体を用いて、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）またはマスサイトメトリー（ＣｙＴＯＦ）により、特異的Ｔ細胞を同定及び定量することができる。エピトープ特異的Ｔ細胞を検出すれば、ペプチド結合ＨＬＡ分子が抗原特異的Ｔ細胞のサブセット上にある特異的ＴＣＲに結合できることを示す直接的な証拠が得られる。例えば、Ｋｌｅｎｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：２６３を参照のこと。
本開示の非限定的態様の具体例
態様セットＡ
上述した本主題の実施形態を含む態様は、単独で、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態と組み合わせて、有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様を以下に示す。本開示を読めば当業者に明らかなとおり、個々に番号付けした態様のそれぞれを採用してもよいし、それらを、先行するまたは後続する個々に番号付けした態様のいずれかと組み合わせてもよい。このことは、そのような態様のすべての組み合わせを支持するものであり、以下に明示する態様の組み合わせへの限定を意図するものではない。
態様セットＡ
上述した本主題の実施形態を含む態様は、単独で、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態と組み合わせて、有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様を以下に示す。本開示を読めば当業者に明らかなとおり、個々に番号付けした態様のそれぞれを採用してもよいし、それらを、先行するまたは後続する個々に番号付けした態様のいずれかと組み合わせてもよい。このことは、そのような態様のすべての組み合わせを支持するものであり、以下に明示する態様の組み合わせへの限定を意図するものではない。
態様１
一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約４アミノ酸長～約２５アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳペプチドと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第１の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチドと；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが、
（ａ）剛性ペプチドリンカー（任意で、前記ＴＭＰは、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に剛性ペプチドリンカーを含む）、及び／または
（ｂ）２～１４個のアミノ酸を含む短い可動性ペプチドリンカー（任意で、前記ＴＭＰは、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含む）
を含み、
任意で、前記ＴＭＰが、１つ以上の追加のペプチドリンカーを含む、前記ＴＭＰ。
一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約４アミノ酸長～約２５アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳペプチドと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第１の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチドと；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが、
（ａ）剛性ペプチドリンカー（任意で、前記ＴＭＰは、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に剛性ペプチドリンカーを含む）、及び／または
（ｂ）２～１４個のアミノ酸を含む短い可動性ペプチドリンカー（任意で、前記ＴＭＰは、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含む）
を含み、
任意で、前記ＴＭＰが、１つ以上の追加のペプチドリンカーを含む、前記ＴＭＰ。
態様２
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、図２Ａ～２Ｍのいずれか１つに示すアミノ酸配列に対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、図２Ａ～２Ｍのいずれか１つに示すアミノ酸配列に対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様３
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、細胞溶解を実質的に誘導せず、任意で、前記ＩｇＦｃが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである、態様１または態様２に従うＴＭＰ。
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、細胞溶解を実質的に誘導せず、任意で、前記ＩｇＦｃが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである、態様１または態様２に従うＴＭＰ。
態様４
１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含む、態様１～３のいずれか１つに従うＴＭＰ。
１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含む、態様１～３のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様５
前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されている、態様４に従うＴＭＰ。
前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されている、態様４に従うＴＭＰ。
態様６
前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓとが結合されており、任意で、前記第１のリンカーが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば、２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ－８４を置換したＣｙｓとが結合されている、態様４または態様５に従うＴＭＰ。
前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓとが結合されており、任意で、前記第１のリンカーが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば、２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ－８４を置換したＣｙｓとが結合されている、態様４または態様５に従うＴＭＰ。
態様７
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、及びＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～６のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、及びＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～６のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様８
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－ＥポリペプチドまたはＨＬＡ－Ｇポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～６のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－ＥポリペプチドまたはＨＬＡ－Ｇポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～６のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様９
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２、４－１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される活性化免疫調節ポリペプチドの野生型または変異型であり、任意で、前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つが、変異型免疫調節ポリペプチドであり、前記変異型免疫調節ポリペプチドが同族共刺激性ポリペプチドに対し、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの同族共刺激性ポリペプチドに対する親和性に比べ、低い親和性を示す、態様１～８のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２、４－１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される活性化免疫調節ポリペプチドの野生型または変異型であり、任意で、前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つが、変異型免疫調節ポリペプチドであり、前記変異型免疫調節ポリペプチドが同族共刺激性ポリペプチドに対し、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの同族共刺激性ポリペプチドに対する親和性に比べ、低い親和性を示す、態様１～８のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様１０
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様９に従うＴＭＰ。
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様９に従うＴＭＰ。
態様１１
前記免疫調節ポリペプチドの２つのコピーを含む、態様９または１０に従うＴＭＰ。
前記免疫調節ポリペプチドの２つのコピーを含む、態様９または１０に従うＴＭＰ。
態様１２
前記免疫調節ポリペプチドの２つのコピーがタンデムに配置されており、任意で、ペプチドリンカーが前記２つのコピーの間に配置されている、態様１１に従うＴＭＰ。
前記免疫調節ポリペプチドの２つのコピーがタンデムに配置されており、任意で、ペプチドリンカーが前記２つのコピーの間に配置されている、態様１１に従うＴＭＰ。
態様１３
前記ＫＲＡＳペプチドが、８アミノ酸長～１２アミノ酸長である、態様１～１２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記ＫＲＡＳペプチドが、８アミノ酸長～１２アミノ酸長である、態様１～１２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様１４
前記ＫＲＡＳペプチドが、
Ａ）ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、及びＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｂ）ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｃ）ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｄ）ＫＬＶＶＶＧＡＧＤＶ（配列番号１３６）及びＫＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１３７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；
Ｅ）ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；ならびに
Ｆ）ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳ（配列番号１５２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５３）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬＴ（配列番号１５４）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶＧ（配列番号１５６）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、及びＫＬＶＶＶＧＡＶＧ（配列番号１５７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）
からなる群から選択される配列を含む、態様１～１３のいずれかに従うＴＭＰ。
前記ＫＲＡＳペプチドが、
Ａ）ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、及びＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｂ）ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｃ）ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｄ）ＫＬＶＶＶＧＡＧＤＶ（配列番号１３６）及びＫＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１３７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；
Ｅ）ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；ならびに
Ｆ）ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳ（配列番号１５２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５３）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬＴ（配列番号１５４）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶＧ（配列番号１５６）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、及びＫＬＶＶＶＧＡＶＧ（配列番号１５７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）
からなる群から選択される配列を含む、態様１～１３のいずれかに従うＴＭＰ。
態様１５
Ａ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；または
Ｂ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫＶ（配列番号１１０）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドがＨＬＡ－Ａ１１＊０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
態様１～１３のいずれかに従うＴ細胞調節ポリペプチド。
Ａ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；または
Ｂ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫＶ（配列番号１１０）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドがＨＬＡ－Ａ１１＊０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
態様１～１３のいずれかに従うＴ細胞調節ポリペプチド。
態様１６
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド
を含み、
任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている、態様１～１５のいずれか１つに従うＴＭＰ。
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド
を含み、
任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている、態様１～１５のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様１７
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む、態様１６に従うＴＭＰ。
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む、態様１６に従うＴＭＰ。
態様１８
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む、態様１６に従うＴＭＰ。
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む、態様１６に従うＴＭＰ。
態様１９
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー及び第２のコピーが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様１７または態様１８に従うＴＭＰ。
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー及び第２のコピーが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様１７または態様１８に従うＴＭＰ。
態様２０
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド、
ｖｉｉｉ）前記剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む、態様１～１５のいずれか１つに従うＴＭＰ。
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド、
ｖｉｉｉ）前記剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む、態様１～１５のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様２１
前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（配列番号２２８）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）
からなる群から独立して選択される、態様１～２０のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（配列番号２２８）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）
からなる群から独立して選択される、態様１～２０のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様２２
前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは２、３、または４である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは２、３、または４である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（配列番号２２８）（ここでｎは２、３、または４である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）（ここでｎは２、３、４、または７である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）
からなる群から独立して選択される、態様１～２０のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは２、３、または４である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは２、３、または４である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（配列番号２２８）（ここでｎは２、３、または４である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）（ここでｎは２、３、４、または７である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）
からなる群から独立して選択される、態様１～２０のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様２３
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチド
からなる群から独立して選択される、態様１～２２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチド
からなる群から独立して選択される、態様１～２２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様２４
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２０３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２１３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２０８）（ここでｎは２～６である）；及び
ｉｖ）Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２００）（ここでｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、態様１～２２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２０３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２１３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２０８）（ここでｎは２～６である）；及び
ｉｖ）Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２００）（ここでｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、態様１～２２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様２５
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカー（配列番号２３５）（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）によって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含み；かつ
ｉ）前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）、ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）、ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）、及びｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチドからなる群から選択される、
態様１に従うＴＭＰ。
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカー（配列番号２３５）（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）によって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含み；かつ
ｉ）前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）、ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）、ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）、及びｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチドからなる群から選択される、
態様１に従うＴＭＰ。
態様２６
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１８）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５３）（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されており；かつ
ｉ）前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、アミノ酸配列（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）を含む、
態様２５に従うＴＭＰ。
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１８）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５３）（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されており；かつ
ｉ）前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、アミノ酸配列（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）を含む、
態様２５に従うＴＭＰ。
態様２７
図１４Ａ～１４Ｌ及び図１４Ｎ～１４Ｖのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
図１４Ａ～１４Ｌ及び図１４Ｎ～１４Ｖのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様２８
前記ＴＭＰが、図１６Ａ～１６Ｄのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含み、
（Ｘ）が、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチド
からなる群から選択される、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＴＭＰが、図１６Ａ～１６Ｄのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含み、
（Ｘ）が、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチド
からなる群から選択される、態様１に従うＴＭＰ。
態様２９
（Ｘ）が、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは２～６である）（配列番号：２０３）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは２～６である）（配列番号２１３）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは２～６である）（配列番号２０８）；及び
ｉｖ）Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２００）（ここでｎは１または２である）
からなる群から選択される、態様２８に従うＴＭＰ。
（Ｘ）が、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは２～６である）（配列番号：２０３）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは２～６である）（配列番号２１３）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは２～６である）（配列番号２０８）；及び
ｉｖ）Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２００）（ここでｎは１または２である）
からなる群から選択される、態様２８に従うＴＭＰ。
態様３０
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、
態様１～２２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、
態様１～２２のいずれか１つに従うＴＭＰ。
態様３１
前記短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、及び４～８個からなる群から選択される数のアミノ酸を含み、任意で、前記短い可動性ペプチドリンカーがＧＧＳである、態様３０に従うＴＭＰ。
前記短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、及び４～８個からなる群から選択される数のアミノ酸を含み、任意で、前記短い可動性ペプチドリンカーがＧＧＳである、態様３０に従うＴＭＰ。
態様３２
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、
態様３０または３１に従うＴＭＰ。
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３５）（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、
態様３０または３１に従うＴＭＰ。
態様３３
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１８）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５３）（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されている、
態様３２に従うＴＭＰ。
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１８）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５３）（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を有する変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されている、
態様３２に従うＴＭＰ。
態様３４
態様１～３３のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むホモ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一であり、かつ前記第１及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチド間にある１つ以上のジスルフィド結合によって共有結合されている、
前記ホモ二量体。
態様１～３３のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むホモ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一であり、かつ前記第１及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチド間にある１つ以上のジスルフィド結合によって共有結合されている、
前記ホモ二量体。
態様３５
態様１～３３のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むヘテロ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一ではなく、かつ１つ以上の共有結合によって結合されている、
前記ヘテロ二量体。
態様１～３３のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むヘテロ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一ではなく、かつ１つ以上の共有結合によって結合されている、
前記ヘテロ二量体。
態様３６
態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
態様３７
態様３６に従う核酸を含む、組換え発現ベクター。
態様３６に従う核酸を含む、組換え発現ベクター。
態様３８
態様３６に従う核酸または態様３７に従う組換え発現ベクターで遺伝子改変された、細胞。
態様３６に従う核酸または態様３７に従う組換え発現ベクターで遺伝子改変された、細胞。
態様３９
ａ）態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体と、
ｂ）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、医薬組成物。
ａ）態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体と、
ｂ）薬学的に許容される賦形剤と
を含む、医薬組成物。
態様４０
態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体を製造する方法であって、
細胞培養培地中で態様３８に従う細胞をインビトロで培養する段階
を含む、前記方法。
態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体を製造する方法であって、
細胞培養培地中で態様３８に従う細胞をインビトロで培養する段階
を含む、前記方法。
態様４１
ＫＲＡＳペプチドエピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、
前記Ｔ細胞に態様１～３３のいずれか１つに従うＴ細胞調節ポリペプチド、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体を接触させる段階
を含み、
前記接触によって、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、前記方法。
ＫＲＡＳペプチドエピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、
前記Ｔ細胞に態様１～３３のいずれか１つに従うＴ細胞調節ポリペプチド、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体を接触させる段階
を含み、
前記接触によって、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、前記方法。
態様４２
ＫＲＡＳに関連するがんを有する患者において前記がんを治療する方法であって、
態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体を含む医薬組成物の有効量を前記患者に投与する段階
を含む、前記方法。
ＫＲＡＳに関連するがんを有する患者において前記がんを治療する方法であって、
態様１～３３のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様３４に従うホモ二量体、または態様３５に従うヘテロ二量体を含む医薬組成物の有効量を前記患者に投与する段階
を含む、前記方法。
態様４３
前記患者に１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を共に投与する段階をさらに含む、態様４２に従う方法。
前記患者に１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を共に投与する段階をさらに含む、態様４２に従う方法。
態様４４
前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ４に特異的な抗体であり、任意で、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ニボルマブ、トレメリムマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、チスレリズマブ、デュルバルマブ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、態様４３に従う方法。
前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、またはＣＴＬＡ４に特異的な抗体であり、任意で、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ニボルマブ、トレメリムマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、セミプリマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、チスレリズマブ、デュルバルマブ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、態様４３に従う方法。
態様４５
Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）の熱安定性を向上させる方法であって、
前記ＴＭＰが、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約４アミノ酸長～約２５アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第一の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが１つまたは複数の配置２のＭＯＤを含む場合、前記方法が、（ｉ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、及び（ｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含み、任意で、２つ以上のＭＯＤが存在する場合、前記２つ以上のＭＯＤの少なくとも２つの間に剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含み、かつ
前記ＴＭＰが１つまたは複数の配置３のＭＯＤを含む場合、前記方法が、前記ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間に、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含み、任意で、２つ以上のＭＯＤが存在する場合、前記２つ以上のＭＯＤの少なくとも２つの間に剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含む、前記方法。
Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）の熱安定性を向上させる方法であって、
前記ＴＭＰが、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約４アミノ酸長～約２５アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第一の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが１つまたは複数の配置２のＭＯＤを含む場合、前記方法が、（ｉ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、及び（ｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間のいずれか１つ以上の間に、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含み、任意で、２つ以上のＭＯＤが存在する場合、前記２つ以上のＭＯＤの少なくとも２つの間に剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含み、かつ
前記ＴＭＰが１つまたは複数の配置３のＭＯＤを含む場合、前記方法が、前記ＩｇＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間に、剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含み、任意で、２つ以上のＭＯＤが存在する場合、前記２つ以上のＭＯＤの少なくとも２つの間に剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性リンカーを配置することを含む、前記方法。
態様４６
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチド
からなる群から独立して選択される、態様４５に従う方法。
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２４６）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２４７）（ここでｎは１～１０の整数である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２４８）（ここでｎは１～１０の整数である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫ（配列番号１９４）を含むペプチド
からなる群から独立して選択される、態様４５に従う方法。
態様４７
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２０３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２１３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２０８）（ここでｎは２～６である）；及び
ｉｖ）Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２００）（ここでｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、態様４５に従う方法。
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（配列番号２０３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（配列番号２１３）（ここでｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（配列番号２０８）（ここでｎは２～６である）；及び
ｉｖ）Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号２００）（ここでｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、態様４５に従う方法。
態様４８
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、態様４５に従う方法。
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、態様４５に従う方法。
態様４９
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個のアミノ酸、２～５個のアミノ酸、３～６個のアミノ酸、及び４～８個のアミノ酸からなる群から独立して選択され、任意で、前記短い可動性ペプチドリンカーがＧＧＳである、態様４５に従う方法。
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個のアミノ酸、２～５個のアミノ酸、３～６個のアミノ酸、及び４～８個のアミノ酸からなる群から独立して選択され、任意で、前記短い可動性ペプチドリンカーがＧＧＳである、態様４５に従う方法。
態様セットＢ
上述した本主題の実施形態を含む態様は、単独で、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態と組み合わせて、有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様を以下に示す。本開示を読めば当業者に明らかなとおり、個々に番号付けした態様のそれぞれを採用してもよいし、それらを、先行するまたは後続する個々に番号付けした態様のいずれかと組み合わせてもよい。このことは、そのような態様のすべての組み合わせを支持するものであり、以下に明示する態様の組み合わせへの限定を意図するものではない。
上述した本主題の実施形態を含む態様は、単独で、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態と組み合わせて、有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様を以下に示す。本開示を読めば当業者に明らかなとおり、個々に番号付けした態様のそれぞれを採用してもよいし、それらを、先行するまたは後続する個々に番号付けした態様のいずれかと組み合わせてもよい。このことは、そのような態様のすべての組み合わせを支持するものであり、以下に明示する態様の組み合わせへの限定を意図するものではない。
態様１
一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約７アミノ酸長～約１６アミノ酸長であり、任意で、８アミノ酸長～１２アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳペプチドと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第１の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチドと；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが、
（ａ）少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、任意で、前記ＴＭＰが、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に剛性ペプチドリンカーを含み、かつ／または
（ｂ）２～１４個のアミノ酸を含む少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、任意で、前記ＴＭＰが、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含み、
任意で、前記ＴＭＰが、１つ以上の追加のペプチドリンカーを含む、前記ＴＭＰ。
一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約７アミノ酸長～約１６アミノ酸長であり、任意で、８アミノ酸長～１２アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳペプチドと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第１の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチドと；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが、
（ａ）少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、任意で、前記ＴＭＰが、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に剛性ペプチドリンカーを含み、かつ／または
（ｂ）２～１４個のアミノ酸を含む少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、任意で、前記ＴＭＰが、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含み、
任意で、前記ＴＭＰが、１つ以上の追加のペプチドリンカーを含む、前記ＴＭＰ。
態様２
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、図２Ａ～２Ｍのいずれか１つに示すアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、図２Ａ～２Ｍのいずれか１つに示すアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様３
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、細胞溶解を実質的に誘導せず、任意で、前記ＩｇＦｃが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである、態様２に従うＴＭＰ。
前記ＩｇＦｃポリペプチドが、細胞溶解を実質的に誘導せず、任意で、前記ＩｇＦｃが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである、態様２に従うＴＭＰ。
態様４
１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含む、態様１に従うＴＭＰ。
１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様５
（ａ）前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
（ｂ）前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓに結合されており、任意で、前記第１のリンカーが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；または
（ｃ）前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており、前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓが前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓに結合されており、任意で、前記第１のリンカーが配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されている、
態様４に従うＴＭＰ。
（ａ）前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
（ｂ）前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓに結合されており、任意で、前記第１のリンカーが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；または
（ｃ）前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており、前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓが前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓに結合されており、任意で、前記第１のリンカーが配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されている、
態様４に従うＴＭＰ。
態様６
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、及びＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、及びＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様７
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－ＥポリペプチドまたはＨＬＡ－Ｇポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－ＥポリペプチドまたはＨＬＡ－Ｇポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様８
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＣＤ８０ポリペプチド、ＣＤ８６ポリペプチド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される活性化免疫調節ポリペプチドの野生型または変異型であり、任意で、前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つが、変異型免疫調節ポリペプチドであり、前記変異型免疫調節ポリペプチドが同族共刺激性ポリペプチドに対し、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの同族共刺激性ポリペプチドに対する親和性に比べ、低い親和性を示す、態様１に従うＴＭＰ。
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＣＤ８０ポリペプチド、ＣＤ８６ポリペプチド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される活性化免疫調節ポリペプチドの野生型または変異型であり、任意で、前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つが、変異型免疫調節ポリペプチドであり、前記変異型免疫調節ポリペプチドが同族共刺激性ポリペプチドに対し、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの同族共刺激性ポリペプチドに対する親和性に比べ、低い親和性を示す、態様１に従うＴＭＰ。
態様９
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様８に従うＴＭＰ。
前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様８に従うＴＭＰ。
態様１０
前記ＫＲＡＳペプチドが、
Ａ）ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、及びＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｂ）ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｃ）ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｄ）ＫＬＶＶＶＧＡＧＤＶ（配列番号１３６）及びＫＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１３７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；
Ｅ）ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；ならびに
Ｆ）ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳ（配列番号１５２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５３）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬＴ（配列番号１５４）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶＧ（配列番号１５６）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、及びＫＬＶＶＶＧＡＶＧ（配列番号１５７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）
からなる群から選択される配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＫＲＡＳペプチドが、
Ａ）ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、及びＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｂ）ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｃ）ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｄ）ＫＬＶＶＶＧＡＧＤＶ（配列番号１３６）及びＫＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１３７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；
Ｅ）ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；ならびに
Ｆ）ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳ（配列番号１５２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５３）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬＴ（配列番号１５４）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶＧ（配列番号１５６）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、及びＫＬＶＶＶＧＡＶＧ（配列番号１５７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）
からなる群から選択される配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様１１
Ａ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；または
Ｂ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ１１＊０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
態様１に従うＴ細胞調節ポリペプチド。
Ａ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；または
Ｂ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ１１＊０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
態様１に従うＴ細胞調節ポリペプチド。
態様１２
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド
を含み、
任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｘ）ペプチドリンカー、及び
ｘｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー、
ｘ）ペプチドリンカー、及び
ｘｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド、
ｖｉｉｉ）前記剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含み、任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている、
態様１に従うＴＭＰ。
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド
を含み、
任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｘ）ペプチドリンカー、及び
ｘｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー、
ｘ）ペプチドリンカー、及び
ｘｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド、
ｖｉｉｉ）前記剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含み、任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている、
態様１に従うＴＭＰ。
態様１３
前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、４、または７である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ
からなる群から独立して選択される、態様１に従うＴＭＰ。
前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、４、または７である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ
からなる群から独立して選択される、態様１に従うＴＭＰ。
態様１４
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫを含むペプチド（任意でｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、態様１に従うＴＭＰ。
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫを含むペプチド（任意でｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、態様１に従うＴＭＰ。
態様１５
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカー（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）によって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含み；かつ
ｉ）前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数である）、ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）、ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数である）、及びｉｖ）ＥＡＡＡＫを含むペプチドからなる群から選択される、
態様１に従うＴＭＰ。
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカー（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）によって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含み；かつ
ｉ）前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数である）、ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）、ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数である）、及びｉｖ）ＥＡＡＡＫを含むペプチドからなる群から選択される、
態様１に従うＴＭＰ。
態様１６
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されており；かつ
ｉ）前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、アミノ酸配列（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）を含む、
態様１５に従うＴＭＰ。
ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されており；かつ
ｉ）前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、アミノ酸配列（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）を含む、
態様１５に従うＴＭＰ。
態様１７
図１４Ａ～１４Ｌ及び図１４Ｎ～１４Ｖのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
図１４Ａ～１４Ｌ及び図１４Ｎ～１４Ｖのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含む、態様１に従うＴＭＰ。
態様１８
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、
態様１に従うＴＭＰ。
前記ＴＭＰが、少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、
態様１に従うＴＭＰ。
態様１９
態様１～１８のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むホモ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一であり、かつ前記第１及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチド間にある１つ以上のジスルフィド結合によって共有結合されている、
前記ホモ二量体。
態様１～１８のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むホモ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一であり、かつ前記第１及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチド間にある１つ以上のジスルフィド結合によって共有結合されている、
前記ホモ二量体。
態様２０
態様１～１８のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むヘテロ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一ではなく、かつ１つ以上の共有結合によって結合されている、
前記ヘテロ二量体。
態様１～１８のいずれか１つに従う第１及び第２のＴＭＰを含むヘテロ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一ではなく、かつ１つ以上の共有結合によって結合されている、
前記ヘテロ二量体。
態様２１
態様１～１８のいずれか１つに従うＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
態様１～１８のいずれか１つに従うＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
態様２２
態様２１に従う核酸を含む、組換え発現ベクター。
態様２１に従う核酸を含む、組換え発現ベクター。
態様２３
態様１～１８のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様１９に従うホモ二量体、または態様２０に従うヘテロ二量体を含む、医薬組成物。
態様１～１８のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様１９に従うホモ二量体、または態様２０に従うヘテロ二量体を含む、医薬組成物。
態様２４
ＫＲＡＳペプチドエピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、
前記Ｔ細胞に態様１～１８のいずれか１つに従うＴ細胞調節ポリペプチド、態様１９に従うホモ二量体、または態様２０に従うヘテロ二量体を接触させる段階
を含み、
前記接触によって、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、前記方法。
ＫＲＡＳペプチドエピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、
前記Ｔ細胞に態様１～１８のいずれか１つに従うＴ細胞調節ポリペプチド、態様１９に従うホモ二量体、または態様２０に従うヘテロ二量体を接触させる段階
を含み、
前記接触によって、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、前記方法。
態様２５
ＫＲＡＳに関連するがんを有する患者において前記がんを治療する方法であって、
態様１～１８のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様１９に従うホモ二量体、または態様２０に従うヘテロ二量体を含む医薬組成物の有効量を前記患者に投与する段階
を含む、前記方法。
ＫＲＡＳに関連するがんを有する患者において前記がんを治療する方法であって、
態様１～１８のいずれか１つに従うＴＭＰ、態様１９に従うホモ二量体、または態様２０に従うヘテロ二量体を含む医薬組成物の有効量を前記患者に投与する段階
を含む、前記方法。
態様２６
前記患者に１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を共に投与することをさらに含み、
任意で、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、またはＣＴＬＡ４に特異的な抗体である、
態様２５に従う方法。
前記患者に１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を共に投与することをさらに含み、
任意で、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、またはＣＴＬＡ４に特異的な抗体である、
態様２５に従う方法。
以下の実施例は、本開示をいかにして実施し使用するかについてある完結した開示及び記載を当業者に提供するよう記載されたものであり、本開示の範囲を限定しようとするものではなく、また、以下の実験がすべてまたは唯一の行われた実験であることを示そうとするものでもない。採用された数値（例えば、量、温度など）について正確性を保証するための努力がなされているが、実験誤差や偏りは考慮すべきである。特に断りのない限り、「部」は重量部、「温度」は摂氏温度、「圧力」は大気圧または大気圧に近い圧力である。標準的な略語を使用する場合があり、例えば、ｂｐは塩基対、ｋｂはキロ塩基、ｐｌはピコリットル、ｓまたはｓｅｃは秒、ｍｉｎは分、ｈまたはｈｒは時間、ａａはアミノ酸、ｋｂはキロ塩基、ｂｐは塩基対、ｎｔはヌクレオチド、ｉ．ｍ．は筋肉内、ｉ．ｐ．は腹腔内、ｓ．ｃ．は皮下を意味する。
実施例１：二量体化ＴＭＰの熱安定性
二量体化ＴＭＰの熱安定性を、４℃、３７℃、及び４２℃で実施した加速安定性試験により評価した。二量体化ＴＭＰの組成物を、上記の温度において、二量体化ＴＭＰ１０ｍｇ／ｍＬ溶液の濃度で、溶液（５００ｍＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４）中、１４日間保持した。１日目、７日目、及び１４日目に、溶液中に残存するモノマーの割合を、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。ＰＢＳ溶液は以下の通りであった。１０．１４ｍＭリン酸水素二ナトリウム、１．７６ｍＭリン酸二水素カリウム、２．７ｍＭ ＫＣｌ、及び０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４。
二量体化ＴＭＰの熱安定性を、４℃、３７℃、及び４２℃で実施した加速安定性試験により評価した。二量体化ＴＭＰの組成物を、上記の温度において、二量体化ＴＭＰ１０ｍｇ／ｍＬ溶液の濃度で、溶液（５００ｍＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．４）中、１４日間保持した。１日目、７日目、及び１４日目に、溶液中に残存するモノマーの割合を、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。ＰＢＳ溶液は以下の通りであった。１０．１４ｍＭリン酸水素二ナトリウム、１．７６ｍＭリン酸二水素カリウム、２．７ｍＭ ＫＣｌ、及び０．５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４。
ホモ二量体を自発的に形成するＴＭＰを、４℃、３７℃、及び４２℃においてその安定性について試験した。試験した一本鎖ＴＭＰのアミノ酸配列を図１９Ｃ及び図１４Ａ～１４Ｖに示す。ＴＭＰ４０７４のアミノ酸配列を図１９Ｃに示す。ＴＭＰ４０７４は、ｉ）ペプチドエピトープとしてのＧ１２Ｖ（７～１６）（ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２））、（ｉｉ）リンカーＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）２（配列番号２１８）、ｉｉｉ）アミノ酸１２がＣｙｓ（Ｒ１２Ｃ）であるβ２Ｍ、ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８９）リンカー、ｖ）アミノ酸８４のＣｙｓ（Ｙ８４Ｃ）及びアミノ酸２３６のＣｙｓ（Ａ２３６Ｃ）を含むＨＬＡ－Ａ＊１１：０１アレル重鎖ポリペプチド、ｖｉ）ＡＡＡＧＧ（配列番号１９２）リンカー、ｖｉｉ）位置１４及び１５にＡｌａ残基を有するＩｇＦｃポリペプチド（Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ）、ｖｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８９）リンカー、ｉｘ）アミノ酸１６及び４２にＡｌａ残基（Ｈ１６Ａ及びＦ４２Ａ）を有する変異型ＩＬ－２ポリペプチドの第１のコピー、ｘ）（ＧＧＧＧＳ）４（配列番号１９０）リンカー、ならびにｘｉ）上記変異型ＩＬ－２ポリペプチドの第２のコピーを含む。このＴＭＰは、ジスルフィド結合を有するホモ二量体を自発的に形成した。ジスルフィド結合は、それぞれのＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチドとＩｇＦｃポリペプチドとの間にあった。試験された二量体化ＴＭＰは、以下の表２の「構築物の特徴」に示すように二量体化ＴＭＰ４０７４と異なっている。
データを以下の表２にまとめて示す。表示された温度での１４日後に残存するモノマーの割合％を示している。
上記データ、特に二量体化ＴＭＰ４４７０及び４４７１の熱安定性データから明らかなことは、二量体化ＴＭＰ４４７０においてＩｇＦｃポリペプチドと変異型ＩＬ－２ポリペプチドとの間の可動性（Ｇ４Ｓ）３（配列番号１８９）リンカーを、剛性ペプチドリンカー（（ＡＰ）４（配列番号２０２）またはＡ（ＥＡＡＡＫ）２Ａ（配列番号２２０））に交換してＩｇＦｃポリペプチドと変異型ＩＬ－２ポリペプチドとの間に配置すると、ＴＭＰ４０７４に比べて、二量体化ＴＭＰの安定特性は３７℃及び４２℃の両方において向上するということである。二量体化ＴＭＰ４４６７の安定性データからもわかるように、ＩｇＦｃポリペプチド間の可動性ペプチドリンカーを（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号１８９）リンカーから短くしてＧＧＳリンカーにすることによっても、ＴＭＰ４０７４に比べて、３７℃及び４２℃の両方で熱安定特性が向上した。
実施例２：二量体化ＴＭＰのインビトロ活性
変異型ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ反応性Ｔ細胞を活性化する二量体化ＴＭＰの能力を、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を用いて発揮させた。用いたヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ１１によって提示されるＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ（アミノ酸７～１６）に反応性であるマウスＴＣＲ（ｍＴＣＲ）の定常領域を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ１）で形質導入されたものであった。用いたヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を「ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞」と呼ぶ。所定数のＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞を自己末梢血単核球（ＰＢＭＣ）と混合して細胞混合物を調製した。この細胞混合物を、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ ７～１６を提示する様々な濃度の一本鎖ＴＭＰと接触させ、３７℃で９日間インキュベートした。全細胞を採取し、細胞混合物における全ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＫＲＡＳ反応性Ｔ細胞の割合％をフローサイトメトリーで測定し、ｍＴＣＲ＋細胞の存在について調べた。そのデータを図１５Ａ～１５Ｅに示す。
変異型ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ反応性Ｔ細胞を活性化する二量体化ＴＭＰの能力を、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を用いて発揮させた。用いたヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＨＬＡ－Ａ１１によって提示されるＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ（アミノ酸７～１６）に反応性であるマウスＴＣＲ（ｍＴＣＲ）の定常領域を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ１）で形質導入されたものであった。用いたヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を「ＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞」と呼ぶ。所定数のＴＣＲ形質導入ＣＤ８＋Ｔ細胞を自己末梢血単核球（ＰＢＭＣ）と混合して細胞混合物を調製した。この細胞混合物を、ＫＲＡＳ Ｇ１２Ｖ ７～１６を提示する様々な濃度の一本鎖ＴＭＰと接触させ、３７℃で９日間インキュベートした。全細胞を採取し、細胞混合物における全ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＫＲＡＳ反応性Ｔ細胞の割合％をフローサイトメトリーで測定し、ｍＴＣＲ＋細胞の存在について調べた。そのデータを図１５Ａ～１５Ｅに示す。
データから明らかなように、剛性ペプチドリンカーを含む二量体化ＴＭＰ、すなわち、４４７０（ＩｇＦｃポリペプチドと変異型ＩＬ－２ポリペプチドとの間に剛性（ＡＰ）４リンカーを有する）及び４４７１（ＩｇＦｃポリペプチドと変異型ＩＬ－２ポリペプチドとの間に剛性ペプチドリンカーＡ（ＥＡＡＡＫ）２Ａ（配列番号２００）を有する）は、インビトロ活性を示した。同様に、ＩｇＦｃポリペプチドと変異型ＩＬ－２ポリペプチドとの間により短いＧＧＳリンカーを有する二量体化構築物４４６７もインビトロ活性を示した。
本開示をその具体的な実施形態を参照して説明してきたが、当業者に明らかなとおり、本開示の本質的な精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができ、等価なものと置き換えることができる。加えて、特定の状況、材料、組成物、方法、方法の１つまたは複数の工程を、本開示の目的、精神および範囲に合わせるために、多くの変更を行うことができる。そのような変更はすべて、本明細書に添付の特許請求の範囲に含まれるものである。
Claims (26)
- 一本鎖のＴ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、以下：
ｉ）がん細胞上に発現されるＫＲＡＳエピトープを含むＫＲＡＳペプチドであって、約７アミノ酸長～約１６アミノ酸長であり、任意で、８アミノ酸長～１２アミノ酸長である、前記ＫＲＡＳペプチドと；
ｉｉ）β２－ミクログロブリン（β２Ｍ）ポリペプチドである、第１の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドと；
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチドである、第２のＭＨＣポリペプチドと；
ｉｖ）１つ以上の免疫調節ポリペプチドと；
ｖ）免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドと
を含み、
前記ＴＭＰが、
（ａ）少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、任意で、前記ＴＭＰが、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に剛性ペプチドリンカーを含み、かつ／または
（ｂ）２～１４個のアミノ酸を含む少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、任意で、前記ＴＭＰが、前記ＩｇＦｃポリペプチドと前記１つ以上の免疫調節ポリペプチドの１つとの間に短い可動性ペプチドリンカーを含み、
任意で、前記ＴＭＰが、１つ以上の追加のペプチドリンカーを含む、前記ＴＭＰ。 - 前記ＩｇＦｃポリペプチドが、図２Ａ～２Ｍのいずれか１つに示すアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＩｇＦｃポリペプチドが、細胞溶解を実質的に誘導せず、任意で、前記ＩｇＦｃが、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドである、請求項２に記載のＴＭＰ。
- １つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- （ａ）前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
（ｂ）前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓに結合されており、任意で、前記第１のリンカーが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；または
（ｃ）前記β２Ｍポリペプチドと前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドとが、ジスルフィド結合によって結合されており、前記ジスルフィド結合が、前記β２Ｍポリペプチド中のＣｙｓ残基と前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチド中のＣｙｓ残基とを結合するものであり、任意で、前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２におけるＣｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており、前記β２－ミクログロブリンポリペプチドが、Ｃｙｓを含む第１のリンカーによって前記ペプチドに結合されており、かつジスルフィド結合によって、前記第１のリンカーに存在するＣｙｓが前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに存在するＣｙｓに結合されており、任意で、前記第１のリンカーが配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、例えば２または３である）を含み、かつジスルフィド結合によって、前記リンカー中の前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されている、
請求項４に記載のＴＭＰ。 - 前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、及びＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－ＥポリペプチドまたはＨＬＡ－Ｇポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＣＤ８０ポリペプチド、ＣＤ８６ポリペプチド、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される活性化免疫調節ポリペプチドの野生型または変異型であり、任意で、前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの少なくとも１つが、変異型免疫調節ポリペプチドであり、前記変異型免疫調節ポリペプチドが同族共刺激性ポリペプチドに対し、対応する野生型免疫調節ポリペプチドの同族共刺激性ポリペプチドに対する親和性に比べ、低い親和性を示す、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドが、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が低下した変異型ＩＬ－２であり、任意で、前記変異型ＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、請求項８に記載のＴＭＰ。
- 前記ＫＲＡＳペプチドが、
Ａ）ＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１０８）、ＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１０９）、ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＶＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１３）、ＶＴＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１４）、ＶＴＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１５）、ＶＴＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１６）、ＶＴＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１７）、ＶＴＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１８）、及びＶＴＶＧＡＣＧＶＧＫ（配列番号１１９）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または少なくとも９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｂ）ＶＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２０）、ＶＶＧＡＧＤＶＧＫ（配列番号１２１）、ＶＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２２）、及びＶＶＧＡＲＧＶＧＫ（配列番号１２３）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｃ）ＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２４）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２６）、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、ＫＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１２９）、ＬＬＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３０）、ＬＬＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３１）、ＬＬＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３２）、ＦＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１３３）、ＦＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１３４）、及びＦＬＶＶＶＧＡＣＧＶ（配列番号１３５）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長、または９アミノ酸長もしくは１０アミノ酸長である）；
Ｄ）ＫＬＶＶＶＧＡＧＤＶ（配列番号１３６）及びＫＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１３７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；
Ｅ）ＧＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３８）、ＡＧＤＶＧＫＳＡＬ（配列番号１３９）、ＤＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４０）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＹＫＬＶＶＶＧＡＶ（配列番号１４３）、ＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４４）、ＧＡＲＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４５）、ＥＹＫＬＶＶＶＧＡＲ（配列番号１４６）、ＲＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（配列番号１４７）、ＬＶＶＶＧＡＲＧＶ（配列番号１４８）、ＧＡＤＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４９）、ＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５０）、及びＧＡＣＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１５１）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）；ならびに
Ｆ）ＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）、ＶＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳ（配列番号１５２）、ＶＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５３）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４２）、ＡＶＧＶＧＫＳＡＬＴ（配列番号１５４）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡＬ（配列番号１４１）、ＧＡＶＧＶＧＫＳＡ（配列番号１５５）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶＧ（配列番号１５６）、ＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２５）、ＫＬＶＶＶＧＡＶＧＶ（配列番号１２８）、及びＫＬＶＶＶＧＡＶＧ（配列番号１５７）（ここで、前記ＫＲＡＳペプチドは、９アミノ酸長または１０アミノ酸長である）
からなる群から選択される配列を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。 - Ａ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＫＬＶＶＶＧＡＤＧＶ（配列番号１２７）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む；または
Ｂ）前記ＫＲＡＳペプチドが、ＶＶＶＧＡＤＧＶＧＫ（配列番号１１１）またはＶＶＧＡＶＧＶＧＫ（配列番号１１０）であり、かつ前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ１１＊０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載のＴ細胞調節ポリペプチド。 - Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド
を含み、
任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｘ）ペプチドリンカー、及び
ｘｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）可動性ペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）可動性ペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第１のコピー、
ｖｉｉｉ）剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、
ｉｘ）前記少なくとも１つの免疫調節ポリペプチドの第２のコピー、
ｘ）ペプチドリンカー、及び
ｘｉ）前記ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含む；または、
Ｎ末端からＣ末端への順に、
ｉ）前記ＫＲＡＳペプチド、
ｉｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｉｉｉ）前記β２Ｍポリペプチド、
ｉｖ）任意であるペプチドリンカー、
ｖ）前記ＭＨＣクラスＩ重鎖ポリペプチド、
ｖｉ）任意であるペプチドリンカー、
ｖｉｉ）前記１つ以上の免疫調節ポリペプチド、
ｖｉｉｉ）前記剛性ペプチドリンカーまたは短い可動性ペプチドリンカー、及び
ｉｘ）ＩｇＦｃポリペプチド
を含み、
任意で、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記ペプチドリンカーが、システインを含み、任意で、２つ以上の免疫調節ポリペプチドが存在する場合、前記２つ以上の免疫調節ポリペプチドのそれぞれの間にペプチドリンカーが配置されている、
請求項１に記載のＴＭＰ。 - 前記任意である１つ以上の追加のペプチドリンカーの各々が、それが存在する場合、以下：
ｉ）ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｉ）ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｉｉ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ＧＣＧＧＳ）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、または４である）；
ｉｖ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２、３、４、または７である）；及び
ｖ）ＡＡＡＧＧ
からなる群から独立して選択される、請求項１に記載のＴＭＰ。 - 前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、
各剛性ペプチドリンカーが、以下：
ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；
ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；
ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）；及び
ｉｖ）ＥＡＡＡＫを含むペプチド（任意でｎは１または２である）
からなる群から独立して選択される、請求項１に記載のＴＭＰ。 - ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＣＧＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２０）または配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２または３である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｂ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、残基８４のＣｙｓ及び残基２３６のＣｙｓを含み；
ｃ）前記β２Ｍポリペプチドが、残基１２のＣｙｓを含み；
ｄ）前記β２Ｍポリペプチドのアミノ酸残基１２における前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのアミノ酸残基２３６におけるＣｙｓにジスルフィド結合されており；
ｅ）ジスルフィド結合によって、前記ＫＲＡＳペプチドと前記β２Ｍポリペプチドとの間にある前記リンカーの前記Ｃｙｓが、前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドのＴｙｒ８４を置換したＣｙｓに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎリンカー（ここでｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、任意でｎは３または７である）によって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊３３０３ポリペプチド、ＨＬＡ－Ａ＊２４０１ポリペプチド、ＨＬＡ－Ｅポリペプチド、及びＨＬＡ－Ｇポリペプチドからなる群から選択されるＨＬＡ－Ａポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつ変異型ＩＬ－２を含み、前記変異型ＩＬ－２が、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含み；かつ
ｉ）前記ＴＭＰが、少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーを含み、前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、ｉ）（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数である）、ｉｉ）（ＥＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）、ｉｉｉ）（ＫＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数である）、及びｉｖ）ＥＡＡＡＫを含むペプチドからなる群から選択される、
請求項１に記載のＴＭＰ。 - ａ）前記β２Ｍポリペプチドが、配列ＧＣＧＧＳ（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２１７）（ここでｎは２である）を含む第１のリンカーによって前記ＫＲＡＳペプチドに結合されており；
ｆ）前記β２Ｍポリペプチドが、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（ここでｎは３または７である）リンカーによって前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドに結合されており；
ｇ）前記ＭＨＣ重鎖ポリペプチドが、ＨＬＡ－Ａ＊１１０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；
ｈ）前記ＴＭＰが、２つの免疫調節ポリペプチドを含み、前記２つの免疫調節ポリペプチドが、同一であり、タンデムに配置されており、かつＨ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換を含む変異型ＩＬ－２を含み、かつ前記２つの免疫調節ポリペプチドが、ペプチドリンカーによって結合されており；かつ
ｉ）前記少なくとも１つの剛性ペプチドリンカーが、アミノ酸配列（ＡＰ）ｎ（ここでｎは１～１０の整数であり、任意でｎは２～６である）を含む、
請求項１５に記載のＴＭＰ。 - 図１４Ａ～１４Ｌ及び図１４Ｎ～１４Ｖのいずれか１つに示すアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＴＭＰが、少なくとも１つの短い可動性ペプチドリンカーを含み、
各短い可動性ペプチドリンカーが、２～４個、２～５個、３～６個、４～８個、５～１０個、及び１０～１４個からなる群から選択される数のアミノ酸を含む可動性ペプチドリンカーからなる群から独立して選択される、
請求項１に記載のＴＭＰ。 - 請求項１～１８のいずれか１項に記載の第１及び第２のＴＭＰを含むホモ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一であり、かつ前記第１及び第２のＴＭＰのＩｇＦｃポリペプチド間にある１つ以上のジスルフィド結合によって共有結合されている、
前記ホモ二量体。 - 請求項１～１８のいずれか１項に記載の第１及び第２のＴＭＰを含むヘテロ二量体であって、
前記第１及び第２のＴＭＰが、同一ではなく、かつ１つ以上の共有結合によって結合されている、
前記ヘテロ二量体。 - 請求項１～１８のいずれか１項に記載のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
- 請求項２１に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
- 請求項１～１８のいずれか１項に記載のＴＭＰ、請求項１９に記載のホモ二量体、または請求項２０に記載のヘテロ二量体を含む、医薬組成物。
- ＫＲＡＳペプチドエピトープに特異的なＴ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、
前記Ｔ細胞に、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＴ細胞調節ポリペプチド、請求項１９に記載のホモ二量体、または請求項２０に記載のヘテロ二量体を接触させる段階
を含み、
前記接触によって、前記エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、前記方法。 - ＫＲＡＳに関連するがんを有する患者において前記がんを治療する方法であって、
請求項１～１８のいずれか１項に記載のＴＭＰ、請求項１９に記載のホモ二量体、または請求項２０に記載のヘテロ二量体を含む医薬組成物の有効量を前記患者に投与する段階
を含む、前記方法。 - 前記患者に１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を共に投与する段階をさらに含み、
任意で、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、またはＣＴＬＡ４に特異的な抗体である、
請求項２５に記載の方法。
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