CN117561280A - 携带TGF-β的抗原呈递多肽复合物及其使用方法 - Google Patents
携带TGF-β的抗原呈递多肽复合物及其使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117561280A CN117561280A CN202280043538.3A CN202280043538A CN117561280A CN 117561280 A CN117561280 A CN 117561280A CN 202280043538 A CN202280043538 A CN 202280043538A CN 117561280 A CN117561280 A CN 117561280A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sequence
- polypeptide
- mapp
- tgf
- presentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 1139
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 996
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 966
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 title abstract description 160
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 title abstract description 160
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical group C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 title description 151
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title description 8
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 claims abstract description 116
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 claims abstract description 116
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 54
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 461
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 400
- 230000000447 dimerizing effect Effects 0.000 claims description 152
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 claims description 112
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 claims description 99
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 claims description 99
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 81
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 claims description 71
- 238000000120 microwave digestion Methods 0.000 claims description 60
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 49
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 48
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 45
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 38
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 33
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 26
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 claims description 18
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 14
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 14
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 12
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 claims description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 10
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 101100284398 Bos taurus BoLA-DQB gene Proteins 0.000 claims description 8
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 8
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 7
- 108010067802 HLA-DR alpha-Chains Proteins 0.000 claims description 5
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 4
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004405 Collectins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000909 Collectins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 2
- JARGNLJYKBUKSJ-KGZKBUQUSA-N (2r)-2-amino-5-[[(2r)-1-(carboxymethylamino)-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid;hydrobromide Chemical compound Br.OC(=O)[C@H](N)CCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCC(O)=O JARGNLJYKBUKSJ-KGZKBUQUSA-N 0.000 claims 1
- 102000002627 4-1BB Ligand Human genes 0.000 claims 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims 1
- 108010044804 gamma-glutamyl-seryl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 108700026078 glutathione trisulfide Proteins 0.000 claims 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 80
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 27
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 27
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 abstract description 26
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 abstract description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 25
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract description 19
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 abstract description 15
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 abstract description 15
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 abstract 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 abstract 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 399
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 355
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 203
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 60
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 60
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 59
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 35
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 33
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 33
- 101150034979 DRB3 gene Proteins 0.000 description 32
- 101100278514 Oryza sativa subsp. japonica DRB2 gene Proteins 0.000 description 32
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 32
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 31
- 101100117569 Oryza sativa subsp. japonica DRB6 gene Proteins 0.000 description 27
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 27
- 101150082328 DRB5 gene Proteins 0.000 description 26
- 101100117565 Oryza sativa subsp. japonica DRB4 gene Proteins 0.000 description 25
- 125000000151 cysteine group Chemical class N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 25
- -1 respectively) Proteins 0.000 description 24
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 22
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 21
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 21
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 17
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 17
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 16
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 15
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 15
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 14
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 13
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 13
- 102100021651 SUN domain-containing ossification factor Human genes 0.000 description 13
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 12
- 230000006870 function Effects 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 10
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 10
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 10
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 102220011926 rs386134160 Human genes 0.000 description 10
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 8
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 description 8
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 102220558658 Nuclear protein 1_E55A_mutation Human genes 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 7
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 102220608636 Secreted phosphoprotein 24_F30A_mutation Human genes 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical class N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 4
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- VYXXMAGSIYIYGD-NWAYQTQBSA-N propan-2-yl 2-[[[(2R)-1-(6-aminopurin-9-yl)propan-2-yl]oxymethyl-(pyrimidine-4-carbonylamino)phosphoryl]amino]-2-methylpropanoate Chemical compound CC(C)OC(=O)C(C)(C)NP(=O)(CO[C@H](C)Cn1cnc2c(N)ncnc12)NC(=O)c1ccncn1 VYXXMAGSIYIYGD-NWAYQTQBSA-N 0.000 description 4
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 4
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 102220636477 Eukaryotic translation initiation factor 4B_F24A_mutation Human genes 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 3
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102000008121 Latent TGF-beta Binding Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010049807 Latent TGF-beta Binding Proteins Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102220030905 rs35181923 Human genes 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 3
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- WWYNJERNGUHSAO-XUDSTZEESA-N (+)-Norgestrel Chemical compound O=C1CC[C@@H]2[C@H]3CC[C@](CC)([C@](CC4)(O)C#C)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 WWYNJERNGUHSAO-XUDSTZEESA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102100021927 60S ribosomal protein L27a Human genes 0.000 description 2
- 101710187898 60S ribosomal protein L28 Proteins 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 208000009903 Camurati-Engelmann Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 2
- 102210012665 DRB1*03 Human genes 0.000 description 2
- 102220473254 Emerin_S49A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 101150089023 FASLG gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 2
- 102100033079 HLA class II histocompatibility antigen, DM alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 102100031258 HLA class II histocompatibility antigen, DM beta chain Human genes 0.000 description 2
- 102100036243 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Human genes 0.000 description 2
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 2
- 108010050568 HLA-DM antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010020987 HLA-DO antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010067148 HLA-DQbeta antigen Proteins 0.000 description 2
- 108010046732 HLA-DR4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000984189 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000984186 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Proteins 0.000 description 2
- 101500026551 Homo sapiens Transforming growth factor beta-3 Proteins 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 2
- 229940124753 IL-2 agonist Drugs 0.000 description 2
- 102220500062 Interferon-induced GTP-binding protein Mx2_V77A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 125000003290 L-leucino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102100025583 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100025578 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Human genes 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102220513430 SH3 domain-binding protein 4_I50A_mutation Human genes 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040113 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A Human genes 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 2
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940125388 beta agonist Drugs 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229960004400 levonorgestrel Drugs 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 102200074039 rs1064583 Human genes 0.000 description 2
- 102220265335 rs139105272 Human genes 0.000 description 2
- 102200068707 rs281865211 Human genes 0.000 description 2
- 102220075834 rs369735050 Human genes 0.000 description 2
- 102220094400 rs876660759 Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical group O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 1
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- 101710170885 Alpha-catulin Proteins 0.000 description 1
- 102220469367 Apolipoprotein C-I_T71S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220547885 Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD_L15A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 1
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 1
- 208000013627 Camurati-Engelmann disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000014447 Complement C1q Human genes 0.000 description 1
- 108010078043 Complement C1q Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 101150044325 DRB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102210048109 DRB1*01:01 Human genes 0.000 description 1
- 102210048110 DRB1*01:02 Human genes 0.000 description 1
- 102210047355 DRB1*01:03 Human genes 0.000 description 1
- 102210047356 DRB1*03:01 Human genes 0.000 description 1
- 102210048112 DRB1*04:01 Human genes 0.000 description 1
- 102220511094 Endothelial cell-specific molecule 1_L14A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241001331845 Equus asinus x caballus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 101000658547 Escherichia coli (strain K12) Type I restriction enzyme EcoKI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658543 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoAI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658546 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoEI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658530 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoR124II endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658540 Escherichia coli Type I restriction enzyme EcoprrI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000015212 Fas Ligand Protein Human genes 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 1
- 102100031547 HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100031546 HLA class II histocompatibility antigen, DO beta chain Human genes 0.000 description 1
- 102100040505 HLA class II histocompatibility antigen, DR alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010041384 HLA-DPA antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010047762 HLA-DQ8 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010053491 HLA-DR beta-Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010064885 HLA-DR3 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000658545 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Type I restriction enyme HindI endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000727806 Homo sapiens Chloride anion exchanger Proteins 0.000 description 1
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 1
- 101000866278 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101000866281 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO beta chain Proteins 0.000 description 1
- 101000864089 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000930802 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000968032 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Proteins 0.000 description 1
- 101000840258 Homo sapiens Immunoglobulin J chain Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000994437 Homo sapiens Protein jagged-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 description 1
- 101100207070 Homo sapiens TNFSF8 gene Proteins 0.000 description 1
- 101500025614 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101500025624 Homo sapiens Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000764263 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102100029571 Immunoglobulin J chain Human genes 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102220624338 Interferon alpha-8_T51A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 1
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000018170 Lymphotoxin beta Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010091221 Lymphotoxin beta Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101000658548 Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440) Putative type I restriction enzyme MjaIXP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658542 Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440) Putative type I restriction enzyme MjaVIIIP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000658529 Methanocaldococcus jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM 10045 / NBRC 100440) Putative type I restriction enzyme MjaVIIP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100207071 Mus musculus Tnfsf8 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 101100117570 Oryza sativa subsp. japonica DRB7 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 1
- 108010001441 Phosphopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100032702 Protein jagged-1 Human genes 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102100021912 Sperm-associated antigen 7 Human genes 0.000 description 1
- 101001042773 Staphylococcus aureus (strain COL) Type I restriction enzyme SauCOLORF180P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000838760 Staphylococcus aureus (strain MRSA252) Type I restriction enzyme SauMRSORF196P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000838761 Staphylococcus aureus (strain MSSA476) Type I restriction enzyme SauMSSORF170P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000838758 Staphylococcus aureus (strain MW2) Type I restriction enzyme SauMW2ORF169P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101001042566 Staphylococcus aureus (strain Mu50 / ATCC 700699) Type I restriction enzyme SauMu50ORF195P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000838763 Staphylococcus aureus (strain N315) Type I restriction enzyme SauN315I endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000838759 Staphylococcus epidermidis (strain ATCC 35984 / RP62A) Type I restriction enzyme SepRPIP endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000838756 Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus (strain ATCC 15305 / DSM 20229 / NCIMB 8711 / NCTC 7292 / S-41) Type I restriction enzyme SsaAORF53P endonuclease subunit Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100033456 TGF-beta receptor type-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710084191 TGF-beta receptor type-1 Proteins 0.000 description 1
- 102220536512 THAP domain-containing protein 1_S52A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102220593730 Tissue alpha-L-fucosidase_S68L_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100033663 Transforming growth factor beta receptor type 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710132313 Transforming growth factor beta receptor type 3 Proteins 0.000 description 1
- 102220527687 Transmembrane emp24 domain-containing protein 3_L15E_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102100026890 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100032100 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 1
- 102220550275 Usher syndrome type-1C protein-binding protein 1_N77Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 101001105586 Xenopus laevis 60S ribosomal protein L18-A Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108010079292 betaglycan Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 108091008034 costimulatory receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 229950004003 fresolimumab Drugs 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical group 0.000 description 1
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 102000045427 human SLC26A3 Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical group 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229950005555 metelimumab Drugs 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102200154383 rs121912761 Human genes 0.000 description 1
- 102200044937 rs121913396 Human genes 0.000 description 1
- 102220257391 rs1553393940 Human genes 0.000 description 1
- 102200033503 rs1555826433 Human genes 0.000 description 1
- 102220012488 rs397516129 Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000009834 selective interaction Effects 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 102000035025 signaling receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091005475 signaling receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036964 tight binding Effects 0.000 description 1
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 102000029947 transforming growth factor beta binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091014793 transforming growth factor beta binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70575—NGF/TNF-superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本公开提供了多聚体抗原呈递多肽(MAPP)，其包含T1D相关肽表位和能够充当细胞TGF‑β受体激动剂的可逆掩蔽的TGF‑β肽。所述MAPP能够在II类MHC受体背景下将所述T1D相关肽表位呈递至T细胞。本公开提供了包含编码那些MAPP的核苷酸序列的核酸，以及用编码那些MAPP的核酸进行遗传修饰的细胞。本公开的MAPP可用于选择性调节具有识别由所述MAPP呈递的所述T1D表位的T细胞受体的T细胞的活性。因此，本公开提供了用于调节所述T细胞活性的组合物和方法，以及用于治疗患有T1D的人的组合物和方法。
Description
本申请含有经由EFS-web以电子方式提交的序列表，其既充当纸质拷贝又充当计算机可读形式(CRF)，并且由标题为“2910_29PCT_seqlist_ST25”的文件组成，所述文件于2022年4月20日创建，大小为298,917字节，并且其以引用的方式整体并入本文。
I.引言
适应性免疫反应涉及存在于T细胞表面上的T细胞受体(TCR)与通过主要组织相容性复合物(MHC；在人中也称为人白细胞抗原(“HLA”)复合物)非共价呈递在抗原呈递细胞(APC)表面上的小抗原分子的接合。此接合代表免疫系统的靶向机制，并且是T细胞调节(激活或抑制)和效应功能所必需的分子相互作用。除了表位特异性细胞靶向外，靶向T细胞还通过例如APC上发现的共刺激蛋白与T细胞上的对应物共刺激蛋白(例如，受体)的接合来激活。表位/TCR结合和APC共刺激蛋白与T细胞共刺激蛋白的接合这两种信号都是驱动T细胞特异性和激活或抑制所必需的。TCR对给定表位具有特异性；然而，共刺激蛋白不具有表位特异性，而是通常在所有T细胞或T细胞亚群上表达。
APC通常用于捕获来自外来生物体的蛋白质或异常蛋白质并将其分解成适用作信号的较小片段，以供较大的免疫系统(包括T细胞)进行审查。特别地，APC将蛋白质分解成小肽片段，所述小肽片段然后与主要组织相容性复合物(“MHC”)的蛋白质配对并展示在细胞表面上。MHC与肽片段(也称为T细胞表位)的细胞表面展示提供了由T细胞监视的基础支架，从而允许特异性识别。肽片段可以是病原体衍生的(传染原衍生的)、肿瘤衍生的或衍生自天然宿主蛋白(自身蛋白)。此外，APC可以识别其他外来组分，诸如细菌毒素、病毒蛋白、病毒DNA、病毒RNA等，所述组分的存在表明威胁级别增加。APC通过另外的共刺激信号将此信息传递至T细胞，以便产生更有效的反应。
T细胞通过专门的细胞表面受体(T细胞受体(“TCR”))来识别肽-主要组织相容性复合物(“pMHC”)复合物。每个T细胞的TCR都是独特的；因此，每个T细胞对于特定的pMHC靶标具有高度特异性。为了充分应对各种潜在威胁，人体内存在大量(约10,000,000)的具有不同TCR的不同T细胞。此外，对特定T细胞肽具有特异性的任何给定T细胞最初只占总T细胞群的很小一部分。尽管通常处于休眠状态且数量有限，但携带特定TCR的T细胞可以很容易地被APC激活和扩增，以产生涉及数百万个T细胞的高效T细胞反应。此类激活的T细胞反应能够攻击和清除病毒感染、细菌感染以及包括肿瘤在内的其他细胞威胁。相反，过度活跃的T细胞针对自身抗原或共享抗原的反应(诸如针对1型糖尿病(T1D)的那些)的广泛、非特异性激活可能会导致不适当地攻击和破坏健康组织或细胞的T细胞。
MHC蛋白在人中被称为人白细胞抗原(HLA)。HLA蛋白分为两大类，I类和II类蛋白，它们由不同的基因座编码。除非另有明确说明，否则出于本公开的目的，提及MHC或HLA蛋白是指II类MHC或HLA蛋白。HLA II类蛋白各自包含由不同基因座编码的α和β多肽链。HLA II类基因座包括HLA-DM(HLA-DMA和HLA-DMB，其分别编码HLA-DMα链和HLA-DMβ链)、HLA-DO(HLA-DOA和HLA-DOB，其分别编码HLA-DOα链和HLA-DOβ链)、HLA-DP(HLA-DPA和HLA-DPB，其分别编码HLA-DPα链和HLA-DPβ链)、HLA-DQ(HLA-DQA和HLA-DQB，其分别编码HLA-DQα链和HLA-DQβ链)和HLA-DR(HLA-DRA和HLA-DRB，其分别编码HLA-DRα链和HLA-DRβ链)。
尽管免疫系统被设计为避免对身体的蛋白质和其他潜在抗原物质形成免疫反应，但在一些情况下，免疫系统会形成对自身抗原具有特异性的T细胞，从而导致自身免疫性疾病，特别是1型糖尿病(T1D)。
转化生长因子β(TGF-β)是一种属于转化生长因子超家族的细胞因子，所述细胞因子包括三种哺乳动物(人)同种型：TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3。TGF-β被合成为前体分子，其含有前肽区以及同二聚化为TGF-β的活性形式的TGF-β序列。TGF-β由巨噬细胞和其他细胞类型以潜伏复合物的形式分泌，在所述复合物中TGF-β与其他两种多肽-潜伏TGF-β结合蛋白(LTBP)和潜态相关肽(LAP)结合。潜伏TGF-β复合物储存在细胞外基质(ECM)中，例如，经由血小板反应蛋白-1(其可被纤溶酶激活)被CD36结合至细胞表面，或结合至潜伏转化生长因子β结合蛋白1、2、3和/或4(LTBP1-4)。
TGF-β的生物学功能在潜伏TGF-β激活后可见，所述激活响应于ECM扰动而受到严格调节。TGF-β可能被多种细胞或组织特异性途径或在多种细胞或组织类型中观察到的途径激活；然而，此类激活途径背后的完整机制尚不完全清楚。激活剂包括但不限于蛋白酶、整合素、pH和活性氧(ROS)。实际上，细胞/组织结合的潜伏TGF-β复合物发挥功能，感知并响应环境扰动，从而以空间和/或时间方式释放活性TGF-β。释放的TGF-β根据其释放的内容物发挥促进或抑制细胞增殖的作用。它还募集干细胞/祖细胞以参与组织再生/重塑过程。TGF-β配体表达、生物利用度、激活、受体功能或转录后修饰的异常会干扰正常功能，并可能导致与许多疾病相关的病理后果，诸如通过募集过量祖细胞(例如，在骨关节炎或卡穆拉蒂-恩格尔曼病(Camurati–Engelmann disease)中)，或通过驻留细胞转分化为不利的谱系(例如，在癌症转移或组织/器官纤维化过期间上皮间质转化中)。Xu等人Bone Research,6(文章号2)(2018)。
文献中已描述了通过隔离TGF-β以有效中和其作用而在蛋白质水平上调节TGF-β作用的许多方法，并且有时被称为“TGF-β陷阱”。例如，已开发出单克隆抗体诸如针对TGF-β1的美替木单抗(Metelimumab)(CAT192)和针对TGF-β的多种同种型的非苏木单抗(Fresolimumab)用于在体内结合、隔离和中和TGF-β。此外，还开发了紧密结合且隔离TGF-β从而隔离且中和它的受体陷阱(参见例如Swaagrtra等人,Mol Cancer Ther；11(7):1477-87(2012)和美国专利公开号2018/0327477)。
II.发明内容
本公开提供多聚体抗原呈递多肽复合物(单数“MAPP”和复数“MAPPs”)，其至少是异二聚体并且包含至少一种框架多肽和至少一种二聚化多肽。框架多肽包含一个或多个多肽二聚化序列，其允许与具有对应物二聚化序列的其他多肽(二聚化多肽)特异性结合，从而形成至少异二聚体(参见例如图1A和1B)。框架多肽还包含多聚化序列，其允许两个或更多个框架多肽缔合，从而形成更高阶结构(例如，两个或更多个异二聚体的双链体，“双链体MAPP”，参见例如图1A和1B)。框架多肽的二聚化序列和多聚化序列(或对应物二聚化序列)都不包含MHC II类(例如，HLA)α链或β链多肽序列；因此，由这些序列引起的相互作用不考虑框架肽和/或二聚化肽的二聚化或多聚化。
本公开还提供了一种免疫调节多肽(“MOD”)，其包含被对TGF-β序列具有亲和力的肽(“掩蔽序列”)可逆地掩蔽的TGF-β氨基酸序列，它们一起被称为“掩蔽的TGF-βMOD”。除了框架多肽和二聚化多肽以外，本文所述的MAPP还包含掩蔽的TGF-βMOD的TGF-β序列和掩蔽序列中的一者或两者。单独的MAPP可以包含完整的掩蔽的TGF-βMOD，其中TGF-β序列和掩蔽序列都存在于同一多肽上(即以“顺式”放置，参见例如图1C的(c)和(d))。或者，单个MAPP可以包含完整的掩蔽的TGF-βMOD，其中TGF-β序列和掩蔽序列以“反式”存在，位于MAPP的单独多肽(例如，框架多肽和二聚化多肽)上。当掩蔽序列和TGF-β序列以反式放置，它们可能是存在于单独的MAPP中的部分多肽(例如，两个不同MAPP的框架多肽)，并且当这些多肽以更高阶MAPP复合物形式(例如，双链体MAPP，参见例如图1C的(a))聚集在一起时，就会形成完整的掩蔽的TGF-βMOD。当掩蔽序列和TGF-β序列是不同MAPP中的部分多肽时，更高阶MAPP(双链体)中的TGF-β序列和掩蔽序列之间的配对可以通过使用种间多聚化序列来获得(参见例如图1C的(a)和(b))。
与上文讨论的旨在结合和隔离TGF-β并充当TGF-β作用的拮抗剂的TGF-β陷阱和相关分子不同，掩蔽的TGF-βMOD提供活性TGF-β多肽(例如，TGF-β信号传导通路激动剂)。掩蔽的TGF-βMOD的TGF-β多肽和掩蔽多肽(例如，TGF-β受体片段)彼此相互作用以可逆地掩蔽TGF-β多肽序列，从而允许TGF-β多肽序列与其细胞受体相互作用。此外，掩蔽序列与可以清除TGF-β的细胞受体(诸如非信号传导TβRIII)竞争，从而允许MAPP将活性TGF-β激动剂有效地递送至靶细胞。虽然MAPP构建体允许将可逆掩蔽的TGF-β表位特异性/选择性呈递至靶细胞，但它还提供用于呈递一种或多种另外的MOD的位点。MAPP构建体包括一种或多种另外的MOD的能力因此允许组合呈递TGF-β和另外的MOD，从而以基本上表位特异性/选择性的方式指导靶T细胞的反应。
因此，本文描述的含有MAPP、双链体MAPP和更高阶MAPP(例如，三链体MAPP)的框架肽和二聚化肽提供了一种手段，通过所述手段可以在II类MHC(例如，II类HLA)的背景下将表位呈递肽(“肽表位”或简称“表位”)呈递到显示对所述表位具有特异性的TCR的靶T细胞，同时允许将至少一个掩蔽的TGF-βMOD以及任选的一个或多个另外的MOD灵活地呈递至靶T细胞以调节靶T细胞。因此，MAPP和更高阶MAPP复合物允许以表位选择性(例如，依赖性/特异性)方式递送一个或多个掩蔽的TGF-βMOD，所述方式允许(i)与靶T细胞(诸如对表位具有选择性的CD4+细胞)形成活性免疫突触，以及(ii)调节(例如，控制/调控)靶T细胞对表位的反应。
如本文所用，术语“MAPP”和“MAPPs”应理解为在不同的上下文中是指包含框架和二聚化肽结构的异二聚体以及那些MAPP异二聚体的更高阶复合物(诸如双链体(双链体MAPP))。当提及MAPP和更高阶复合物时，这样做的目的是为了强调。本领域技术人员将清楚何时仅具体提及更高阶结构(例如，提及双链体MAPP等)。
本文描述的含有MAPP、双链体MAPP和更高阶MAPP(例如，三链体MAPP)的框架和二聚化肽提供了一种手段，通过所述手段可以在II类MHC(例如，II类HLA)的背景下将表位呈递肽(“肽表位”或简称“表位”)呈递到显示对所述表位具有特异性的TCR的靶T细胞，同时允许灵活地呈递至少一个掩蔽的TGF-βMOD以及任选的一个或多个另外的MOD。因此，MAPP和更高阶MAPP复合物允许以表位选择性(例如，依赖性/特异性)方式递送一个或多个掩蔽的TGF-βMOD，所述方式允许(i)与靶T细胞(诸如对表位具有选择性的CD4+细胞)形成活性免疫突触，以及(ii)调节(例如，控制/调控)靶T细胞对表位的反应。
MAPP将肽表位呈递至靶T细胞是经由包含MHC II类多肽和肽表位的部分来完成的。此类部分可以是(i)单个多肽链，或(ii)包含两个或更多个多肽链的复合物。
当肽表位、MHC II类多肽和任选的一种或多种MOD提供在单一多肽链中时，其被称为“呈递序列”。参见例如图15。呈递序列可以作为框架多肽或二聚化多肽的一部分整合到MAPP中。MAPP可以具有作为框架多肽或二聚化多肽中一者或两者的一部分的呈递序列。例如，比较图9的结构A至D和图10的结构A至D。
作为利用单一多肽呈递表位的替代方案，MHC组分(例如，α1、α2、β1和β2结构域序列)和表位可以分为两个单独的多肽序列，它们在本文中一起表示为“呈递复合物”。参见例如图17至20。通过具有呈递复合物第一氨基酸序列(“呈递复合物第一序列”)作为框架多肽或二聚化多肽的一部分将呈递复合物整合到MAPP中。其余MHC序列是称为呈递复合物第二氨基酸序列(“呈递复合物第二序列”)的多肽的一部分。存在的肽表位和任何独立选择的MOD可以是包含呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的多肽的一部分。呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列通常通过α链和β链多肽序列之间的非共价相互作用缔合，并且可以通过MHC序列或附接至MHC序列的N端或C端的肽/多肽接头之间的二硫键来稳定。如果存在于那些多肽中，呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列还可以通过二聚化序列或种间二聚化序列缔合。
尽管单个MAPP可以不包含呈递序列或呈递复合物，但出于本公开的目的，除非另有说明，否则MAPP应理解为包含至少一个呈递序列或呈递复合物。
包含呈递序列的MAPP通常含有一个或两个呈递序列。因此，双链体MAPP通常包含两个、三个或四个呈递序列，而且也可以包含一个呈递序列(例如，如果一个MAPP不包含呈递序列)。MAPP和双链体MAPP可以包含更多的呈递序列，这取决于例如框架多肽中二聚化序列的数量。呈递序列可以作为框架多肽、二聚化多肽或两者的一部分整合到MAPP中。例如，比较图9的结构A至D和图10的结构A至D。
同样，具有呈递复合物的MAPP通常含有一个或两个呈递复合物，因此，具有呈递复合物的双链体MAPP通常包含两个、三个或四个呈递复合物，而且也可以包含一个呈递复合物(例如，如果一个MAPP不包含呈递复合物)。如上所述，MAPP和双链体MAPP可以包含更多的呈递复合物，这取决于例如框架多肽中二聚化序列的数量。
本公开的MAPP可以具有包含以下的结构：
框架多肽，其包含(例如，从N端到C端)二聚化序列和多聚化序列；和
二聚化多肽，其包含与框架多肽的二聚化序列互补的对应物二聚化序列，并且通过共价(例如，二硫键)和/或非共价相互作用与框架多肽二聚化以形成异二聚体；以及
至少一个(例如，至少两个)呈递序列和/或呈递复合物，
其中每个呈递序列包含T1D肽表位，以及MHC II类α1、α2、β1和β2结构域多肽序列；
其中每个呈递复合物包含共同构成肽表位的呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列以及MHC II类α1、α2、β1和β2结构域多肽序列，其中肽表位是呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的一部分以及α1、α2、β1和β2结构域多肽序列中的至少一者；
其中二聚化多肽和/或框架多肽中的至少一者或两者(例如，框架多肽、二聚化多肽或两个多肽)包含呈递序列或呈递复合物第一序列(例如，位于框架多肽的二聚化序列的N端侧上或二聚化多肽的对应物二聚化序列的N端侧上)；
其中框架多肽、二聚化多肽、呈递序列或呈递复合物包含(i)TGF-β序列，(ii)掩蔽序列，或(iii)至少一个(例如，至少两个)掩蔽的TGF-β免疫调节多肽(掩蔽的TGF-βMOD)，每个掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽序列和TGF-β序列；
其中框架多肽或二聚化肽(包括存在的呈递序列或呈递复合物)任选地包含至少一个(例如，至少两个、至少三个或更多个)另外的MOD(野生型和/或变体)或串联的另外的MOD对(两个野生型、两个变体或者一个野生型和一个变体)(例如，位于二聚化多肽或框架多肽的N端或C端，和/或位于二聚化序列的C端侧上)；并且
其中框架多肽、二聚化多肽、呈递序列、呈递复合物第一序列和/或呈递复合物第二序列任选地包含一个或多个独立选择的接头序列。(参见例如图1A和1B)。
此类MAPP可以复合以形成双链体或更高阶MAPP，其至少包含第一MAPP异二聚体和第二MAPP异二聚体，其中：
(i)第一MAPP包含具有第一多聚化序列和第一二聚化序列的第一框架多肽，以及具有与第一二聚化序列互补的第一对应物二聚化序列的第一二聚化多肽；并且
(ii)第二MAPP包含具有第二多聚化序列和第二二聚化序列的第二框架多肽，以及具有与第二二聚化序列互补的第二对应物二聚化序列的第二二聚化多肽；
其中第一框架多肽和第二框架多肽通过任选地包含一个或多个链间共价键(例如，一个或两个二硫键)的第一多聚化序列和第二多聚化序列之间的结合相互作用来缔合，并且多聚化序列不相同(例如，不是同一类型和/或不一致)，并且基本上不与二聚化序列或对应物二聚化序列缔合或结合。参见例如图19至23中的双链体；并且
其中双链体或更高阶MAPP包含至少一个掩蔽的TGF-βMOD，其中掩蔽序列和TGF-β序列以顺式或反式存在。
应当理解，二聚化序列和多聚化序列是不同的多肽序列并且不以任何实质性方式彼此结合，例如，框架多肽在任何实质性程度上不会形成发夹结构、自聚合或自聚集。本公开的MAPP可以遵循以下限制条款：框架多肽的二聚化序列和多聚化序列均不包含与图4至图18B中任一者中的MHC-II类多肽的至少20(例如，至少30、40、50、60或70)个连续氨基酸具有至少85％(例如，90％、95％或98％)序列同一性的MHC-II类多肽序列。还应当理解，α1、α2、β1和β2结构域多肽序列均不包含将MAPP锚定在细胞膜中的跨膜结构域或其部分。
虽然如本公开中使用的术语MAPP是指包含框架多肽和二聚化多肽异二聚体的MAPP，但术语MAPP及其复数MAPPs也是指其包含两个或更多个异二聚体拷贝的更高阶复合物。当提及高阶复合物的特定形式(例如，异二聚体的双链体)时，它们被指定为双链体、三链体等。因此，除非另有说明，否则当使用术语MAPP或MAPPs时，所述术语包括更高阶复合物，诸如双链体MAPP，特别是涉及治疗应用和治疗时。
MAPP及其更高阶复合物(双链体、三链体等)包含MHC II类多肽序列，并且用于呈递至TCR的T1D肽表位可以将肽呈递至具有对所述表位具有特异性的TCR的T细胞(例如，CD4+T细胞)。一旦与T细胞的TCR接合，含有TGF-βMOD的MAPP对T细胞的作用取决于哪些另外的MOD(例如，IL-2MOD多肽)(如果有的话)作为MAPP的一部分存在。
本公开的含有掩蔽的TGF-βMOD的MAPP可以充当产生TGF-β驱动的T细胞反应的方式。例如，TGF-β本身可以抑制T细胞的效应细胞功能的发育，激活巨噬细胞，且/或在局部免疫和炎症作用消退后促进组织修复。因此，含有TGF-βMOD的MAPP可以在体外或体内应用，包括作为诱导任何那些功能的治疗剂。TGF-β还调节功能不同的T细胞亚群的分化。在IL-1和/或IL-6存在下TGF-β促进Th17谱系细胞的发育，特别是在不存在IL-2或IL-2激动剂(例如，与IL-2受体结合并充当其激动剂的抗体)的情况下。
含有MAPP的TGF-βMOD，特别是包含一个或多个IL-2MOD(例如，变体MOD)或与IL-2或IL-2激动剂共同施用的那些，可以引起对MAPP呈递的表位具有特异性/选择性的CD4+FOXP3+T reg细胞的诱导和/或增殖和/或维持(存活)。在体外或体内使T细胞与MAPP和IL-2的组合(作为IL-2MOD、IL-2R激动剂或IL-2)接触有效抑制效应T辅助(Th)细胞分化为Th1、Th2和/或Th17谱系的细胞。因此，含有掩蔽的TGF-βMOD的MAPP(例如，携带IL-2MOD的那些)能够通过例如诱导、增殖和/或维持响应于MAPP而诱导/产生的T reg细胞来抑制对包含MAPP的表位的免疫反应，并且抑制这些T reg细胞的任何下游效应，包括抑制CD8+T细胞(活性和/或增殖)和/或抑制B细胞(例如，抗体产生和/或增殖)。因此，MAPP(例如，双链体MAPP)可以提供在体外和体内抑制T细胞和B细胞活性的方法，以及MAPP(例如，双链体MAPP)作为体内或体外治疗方法的治疗剂的用途。因此，本公开提供了在与免疫失调/功能障碍相关的病症(包括自身免疫性疾病1型糖尿病(“T1D”))中在体外和体内调节T细胞和/或B细胞的活性的方法。
除上述内容以外，含有MOD的MAPP(包括掩蔽的TGF-βMOD)可以充当将MOD选择性地递送至对MAPP相关表位具有特异性的T细胞，从而导致对这些MAPP的MOD驱动的反应(例如，与MAPP相关表位具有反应性的CD4+效应T细胞数量减少和/或抑制)的手段。根据所选的MOD，并入对其在T细胞上的同源受体的亲和力增加的一个或多个MOD(“co-MOD”)可能会降低MAPP和双链体MAPP对表位特异性T细胞的特异性，其中MOD-co-MOD结合相互作用与MHC/表位显著竞争结合至靶细胞TCR。相反，同样取决于所选的MOD，包含对其共MOD的亲和力降低的MOD以及表位对TCR的亲和力可能提供增强的MAPP和双链体MAPP的选择性，同时保留MOD的所需活性。当MOD已经对其同源受体具有相对较低的亲和力时，降低亲和力的突变对于它们并入MAPP而言可能是不需要的和/或不期望的。
本公开的MAPP(例如，双链体MAPP)调节T细胞的能力提供了在体外和体内调节T细胞活性的方法，因此MAPP(例如，双链体MAPP)可用作可用于治疗T1D的方法中的治疗剂。
本公开提供了包含编码单独的MAPP多肽和MAPP(例如，MAPP的所有多肽)的核苷酸序列的核酸和编码单独的MAPP多肽和MAPP的载体，以及用核酸和载体进行遗传修饰以产生单独的MAPP多肽和/或MAPP蛋白(例如，双链体MAPP)的细胞。本公开还提供了利用此类细胞产生MAPP、双链体MAPP和更高阶MAPP的方法。
III.附图说明
图1A被提供来说明用于描述具有呈递序列的MAPP和双链体MAPP的术语。肽从N端(左)到C端(右)取向。此图示出了第一框架多肽和第二框架多肽，其在这种情况下是不同的，并且在这种情况下具有包含杵和对应物臼的特定多聚化序列。此类“杵臼结构”构型可以包括不具有稳定二硫键(本文中为“KiH”)或具有稳定二硫键(本文中为“KiHs-s”)的杵臼结构构型。还示出了具有N端肽表位和对应物二聚化序列的第一二聚化多肽和第二二聚化多肽。虚线圆圈表示用于添加多肽序列(包括MOD序列)的五个潜在位置(在下文中讨论)。此图描绘了第一异二聚体MAPP和第二异二聚体MAPP的形成，每个MAPP包含框架多肽和二聚化多肽。异二聚体可以通过多聚化序列相互作用以形成多聚体(如图所示的双链体MAPP)。使用杵臼结构序列允许组装不对称的种间双链体MAPP，其中例如在位置1和1'和/或位置3和3'处提供不同的MOD序列。虽然多肽链之间通过肽相互作用序列的相互作用的性质最初可以是非共价，但可以发生链间二硫键形成反应，从而在例如二聚化序列或多聚化序列处提供共价连接的多肽。在整个图中，连接MAPP多肽的各个元件的线是充当接头(例如，肽接头)的任选氨基酸。
图1B与图1A相似，并且被提供来说明用于描述具有呈递复合物的MAPP和双链体MAPP的术语(表位未示出)。单词“序列”可以缩写为“seq.”。
图1C示出了具有种间多聚化序列、表位呈递序列和至少一个掩蔽的TGF-βMOD的MAPP。在(a)和(b)中，将掩蔽多肽序列和掩蔽的TGF-βMOD的TGF-β序列以反式置于MAPP的3和3'位置处。在(c)和(d)中，MAPP在MAPP的3和3'位置处具有两个掩蔽的TGF-βMOD，其中掩蔽多肽序列和每个掩蔽的TGF-βMOD的TGF-β序列以顺式放置。在(a)和(c)中，掩蔽的TGF-βMOD示出处于“闭合”位置。在(b)和(d)中，掩蔽的TGF-βMOD示出处于“打开”位置。另外的MOD(诸如IL-2)可以置于其他位置诸如位置1和1’处。
图1D与图1C相似，但是所示出的每个MAPP具有表位呈递复合物而不是呈递序列。单词“序列”可以缩写为“seq.”。
图2A至2H提供免疫球蛋白多肽的氨基酸序列，包含其重链恒定区(“Ig Fc”或“Fc”，例如，IgG1的CH2-CH3结构域)(SEQ ID NO:1-13)。
图2I提供了Ig CH1结构域的序列(SEQ ID NO:14)。
图2J提供了人Ig-J链的序列(SEQ ID NO:78)。
图3A提供了Igκ链(κ链)恒定区的序列(SEQ ID NO:15)。
图3B提供了Igλ链(λ链)恒定区的序列(SEQ ID NO:16)。
图4提供了HLA II类DRA(有时称为DRA1)α链的氨基酸序列(SEQ ID NO:17)。
图5提供了HLA II类DRB1β链的氨基酸序列(SEQ ID NO:18-54)。
图6提供了HLA II类DRB3β链的氨基酸序列(SEQ ID NO:55-58)。
图7提供了HLA II类DRB4β链的氨基酸序列(SEQ ID NO:59-60)。
图8提供了HLA II类DRB5β链的氨基酸序列(SEQ ID NO:61)。
图9提供了一系列基于框架多肽的双链体MAPP结构，其具有(i)多聚化序列，和(ii)可以相同或不同的第一二聚化序列和第二二聚化序列。此结构一般显示在A中，其中位置1-5和1′-5′表示另外的肽序列(例如，MOD多肽序列)的位置。MHC/表位部分被一般性地说明，并且可以是呈递序列(参见例如图15至16)或呈递复合物(参见图17至22)。位置4和4'显示在呈递序列的N端或呈递复合物多肽的N端处，并且位置5和5'显示在这些多肽的C端处。位置1和1'显示在框架肽的N端处，并且位置3和3'显示在框架多肽的C端处。在A和C中，框架多肽经由多聚化序列之间的非共价结合来多聚化以形成异二聚体的双链体。在B和D中，使用免疫球蛋白Fc区杵臼结构基序将框架多肽多聚化以形成异二聚体的双链体，但也可以使用共价结合多聚化序列的其他方法。在C中，双链体含有异二聚体，其中两个不同的不对称种间二聚化序列将框架肽及其相关二聚化肽结合在一起。在D中，框架肽通过杵臼结构Fc基序连接在一起，并且二聚化肽和框架肽通过不同的二聚化序列连接在一起以形成异二聚体的双链体。
图10在A至D中提供如图9所示的一系列MAPP结构，其中在框架肽的N端添加呈递序列或呈递复合物。位置4和4'仍可充当肽添加(例如，MOD多肽添加)的位置。
图11在A至D中提供如图9所示的一系列MAPP结构，其中二聚化序列是与Ig轻链序列(CL)配对的Ig CH1序列(CH1)。框架肽通过Ig Fc(例如，CH2和CH3)区的相互作用来多聚化(在此情况下为二聚体)，其中B和D中的结构具有杵臼结构基序以允许形成异双链体。所述肽也通过二硫键(例如，在Ig Fc区肽之间形成的那些)连接在一起。
图12提供了如图11所示的一系列MAPP结构，其中在框架肽的N端添加了呈递序列或呈递复合物。位置4和4′仍可充当肽添加(例如，MOD多肽添加)的位置。
图13在A到H中提供了如图11所示的一系列MAPP结构。在每种情况下，二聚化肽上都存在缺少MOD序列的呈递序列(标记为单链MHC和表位)。位置2、2′、4、4′、5和5′未填充且未编号显示。位置1和1′被一个或多个MOD(例如出于说明目的，IL-2、PD-L1和4-1BBL的野生型(wt.)和/或变体)取代，尽管也可以使用其他MOD，例如，野生型和/或变体CD80或CD86。在A至D中，使用位置3和3′以呈递具有呈反式(在MAPP双链体的不同多肽上)的掩蔽序列和TGF-β多肽序列的掩蔽的TGF-βMOD。E至H中的位置3、3′分别与A至D中的位置相似，然而，E至H中的位置3和3′各自携带具有呈顺式的掩蔽序列和TGF-β序列的掩蔽的TGF-β。E至H中的FcCH2、CH3序列可以被种间序列诸如A至D中所示的KiH Fc序列置换。在每种情况下，掩蔽的TGF-βMOD均处于闭合位置，其中掩蔽物接合TGF-β多肽序列，使得其不能有效地充当细胞TGF-β受体的激动剂。
图14示出了作为结构A至D的四种MAPP异二聚体构建体，其可以形成双链体MAPP。图34至37中提供了结构A至D的多肽序列，其中“MOD”是PDL1，然而，可以利用其他MOD，诸如IL-2。掩蔽序列和TGF-β序列可以顺式或反式并入例如框架肽(A至C中的Fc序列或D中的CH1序列)的羧基端(3或3'位置)。
图15在A至C中示出了三种不同的MHC II类呈递序列(从N端到C端的表位)。序列任选地在指定位置处包含一个或多个独立选择的MOD(包括串联的两个或更多个MOD)。
图16在A至I中示出了九种不同的MHC II类呈递序列的实施方案(从左到右为N端到C端)。
图17至22示出了一系列MHC II类呈递复合物，从左到右为N端到C端。携带符号“-//-”的序列是呈递复合物第一序列。另一个序列是其缔合的呈递复合物第二序列。符号“-//-”表示复合物与二聚化肽或框架肽的其余部分的附接点。在图20A至L中，呈递复合物第一序列及其缔合的呈递复合物第二序列包括将肽联结在一起的二聚化序列(示出为与Ig轻链恒定区Cκ(κ链)缔合的Ig Fc区，尽管也可以利用其他序列)。在图21A至F和22A至F中，呈递复合物第一序列及其缔合的呈递复合物第二序列包括将肽联结在一起的二聚化序列(示出为亮氨酸拉链对，尽管也可以利用其他序列)。
图23提供了一个表格，其示出了可以并入用于T1D治疗的MAPP中的HLA II类等位基因、MOD和T1D表位的实例。
图24为作为前蛋白原的TGF-β的三种不同同种型的序列和TGF-β3的成熟形式以及成熟蛋白的C77S突变体。
图25提供了TGF-β同种型1-3的比对，对应于TGF-β2的成熟形式的残基加粗，除了TGF-β2的氨基酸残基Lys 25、Cys 77、Ile 92和Lys 94及其在TGF-β同种型1和3的其他形式中的对应残基加下划线并且为斜体但不加粗。TGF-β1(NP_000651.3和P01137)、TGF-β2(AAA50405.1)和TGF-β-3同种型1(NP_0013168.1)。
图26A提供了1型TGF-β受体(TβRI)及其胞外域的序列。
图26B提供了2型TGF-β受体(TβRII)、其胞外域和胞外域片段的序列。同种型B中以加粗且加下划线表示的位置是成熟多肽的氨基酸F30、D32、S52、E55和D118，其中任一者都可以被除天然存在的氨基酸以外的氨基酸取代。胞外域片段基于NCBI参考序列NP_003233.4和UniProtKB参考P37173；其中胞外域序列对应于那些序列的氨基酸49至159。用丙氨酸“A”(加粗、斜体且加下划线)取代成熟蛋白的天冬氨酸“D119”被标记为“D118A”取代，以便在信号肽被理解为长度为23个氨基酸而不是NCBI记录中的22个氨基酸时与描述该取代的文献保持一致。氨基酸D119编号分配基于成熟蛋白，因此，当包含22个氨基酸信号序列时，它是前体蛋白的D141。D32(有时被天冬酰胺(D32N)取代)的位置对应于前体蛋白中的D55。成熟同种型A中缺乏其信号序列的对应氨基酸是F55、D57、S77、E80和D143(参见例如SEQ ID NO:198)。
图26C提供了3型TGF-β受体(TβRIII)的序列。
图27在(a)处提供了实施例1的MAPP的结构，其在框架多肽的C端(位置3和3′)具有掩蔽序列和TGF-β多肽。示出了处于闭合位置的掩蔽的TGF-β，其中掩蔽物接合TGF-β多肽。还已示出处于开放位置的所述结构，其中TGF-β可与TGF-β受体相互作用。(b)中的图示出了表达和纯化后的SDS PAGE凝胶的八种不同的MAPP(泳道1-8)和四种对照蛋白(泳道9-12)。未示出任选的二硫键将表位(II类pHLA结构中的圆圈)固定在MHC/HLA结合裂隙中(例如，连接到表位的接头和MHCα链之间)。
图28提供了形成实施例1的八种MAPP和四种对照蛋白的多肽的氨基酸序列。
IV.具体实施方式
A.定义
本文可互换使用的术语“多核苷酸”和“核酸”是指任何长度的核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸)的聚合形式。因此，此术语包括但不限于单链、双链或多链DNA或RNA、基因组DNA、cDNA、DNA-RNA杂交体或包含嘌呤碱基和嘧啶碱基或其他天然的、化学或生物化学修饰的、非天然的或衍生的核苷酸碱基的聚合物。
术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，并且是指氨基酸的聚合形式，除非另有说明，否则其为天然存在的蛋白原L-氨基酸，其在哺乳动物细胞翻译期间生物合成并入蛋白质中。此外，如本文所用，“多肽”和“蛋白质”包括对天然序列的修饰，诸如缺失、添加和取代(在自然界中通常是保守性的，如本领域人员已知的)，只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可以是故意的，如通过定点诱变，或者可以是偶然的，诸如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于聚合酶链反应(PCR)扩增或其他重组DNA方法而导致的错误。对已知多肽中的特定残基或残基编号(例如，人DRA MHC II类多肽的位置72或75)的提及被理解为是指野生型多肽中该位置处的氨基酸(即，I72或K75)。在野生型多肽的序列通过添加或删除一个或多个氨基酸而改变的程度上，特定残基或残基编号将是指改变的多肽中的相同特定氨基酸(例如，在肽的N端处添加一个氨基酸的情况下，参考位置I72将被理解为指示氨基酸Ile，其现在是位置73)。特定位置处的氨基酸取代由缩写表示，所述缩写依次包括原始氨基酸、位置编号和取代的氨基酸，例如用半胱氨酸取代位置72处的Ile表示为I72C。
核酸或多肽与另一多核苷酸或多肽具有一定的百分比“序列同一性”，这意味着在比对时，该百分比的碱基或氨基酸是相同的，并且当比较两个序列时是在相同的相对位置上。可以多种不同方式确定序列同一性。为了确定序列同一性，可以使用各种方便的方法和计算机程序(例如，BLAST、T-COFFEE、MUSCLE、MAFFT等)来比对序列，所述方法和程序可在包括BLAST+2.10.0的blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi、ebi.ac.uk/Tools/msa/tcoffee/、ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/和mafft.cbrc.jp/alignment/software/的万维网网址上获得。参见例如Altschul等人(1990),J.Mol.Biol.215:403-10。除非另有说明，否则本文描述的百分比序列同一性是使用BLAST程序确定的那些。
如本文所用，氨基酸(单数“aa”或复数“aas”)意指在哺乳动物细胞翻译中并入多肽和蛋白质中的天然存在的蛋白原氨基酸。除非另有说明，否则为：L(Leu，亮氨酸)、A(Ala，丙氨酸)、G(Gly，甘氨酸)、S(Ser，丝氨酸)、V(Val，缬氨酸)、F(Phe，苯丙氨酸)、Y(Tyr，酪氨酸)、H(His，组氨酸)、R(Arg，精氨酸)、N(Asn，天冬酰胺)、E(Glu，谷氨酸)、D(Asp，天冬氨酸)、C(Cys，半胱氨酸)、Q(Gln，谷氨酰胺)、I(Ile，异亮氨酸)、M(Met，蛋氨酸)、P(Pro，脯氨酸)、T(Thr，苏氨酸)、K(Lys，赖氨酸)和W(Trp，色氨酸)。氨基酸还包括氨基酸羟脯氨酸和硒代半胱氨酸，它们出现在哺乳动物细胞中发现的一些蛋白质中，然而，除非明确指明它们的存在，否则不应理解为包括它们。
如本文所用，术语“体内”是指发生在例如T1D患者身体内部的任何过程或程序。
如本文所用，“体外”是指发生在身体外部的任何过程或程序。
术语“保守氨基酸取代”是指蛋白质中具有类似侧链的氨基酸残基的可互换性。例如，具有脂肪族侧链的一组氨基酸由甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸组成；具有脂肪族-羟基侧链的一组氨基酸由丝氨酸和苏氨酸组成；具有含酰胺侧链的一组氨基酸由天冬酰胺和谷氨酰胺组成；具有芳香族侧链的一组氨基酸由苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸组成；具有碱性侧链的一组氨基酸由赖氨酸、精氨酸和组氨酸组成；具有酸性侧链的一组氨基酸由谷氨酸和天冬氨酸组成；并且具有含硫侧链的一组氨基酸由半胱氨酸和甲硫氨酸组成。示例性保守氨基酸取代基团是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸-甘氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。
术语“结合”是指由于例如共价、静电、疏水以及离子和/或氢键相互作用(包括诸如盐桥和水桥的相互作用)导致的分子和/或原子之间的直接缔合。
如本文所用，“共价键合”或“共价结合”是指在两个不同分子之间形成一个或多个共价化学键。当参考MAPP和T细胞上的T细胞受体(TCR)之间的相互作用使用时，术语“结合”是指MAPP和TCR之间的非共价相互作用。
如本文所用，“亲和力”通常是指非共价结合的强度，增加的结合亲和力与较低的KD相关。如本文所用，术语“亲和力”可以通过两种剂(例如，抗体和抗原)的可逆结合的解离常数(KD)来描述。如本文所用，术语“亲合力”是指在稀释后，两种或更多种剂的复合物对于解离的抗性。
“T细胞”包括所有类型的表达CD3的免疫细胞，包括辅助T细胞(CD4+辅助T细胞)、细胞毒性T细胞(CD8+细胞)、调节性T细胞(Treg)和NK-T细胞。
如本文所用，术语“免疫调节多肽”(也称为“共刺激多肽”或如上所述的“MOD”)包括多肽或其部分的野生型或变体，其可以特异性结合存在于T细胞上的同源共免疫调节多肽(“co-MOD”)，并且当T细胞的TCR与对所述TCR具有特异性的MHC表位部分接合时向T细胞提供调节信号。除非另有说明，否则术语“MOD”包括野生型和/或变体MOD，并且包括提及野生型和变体MOD的说明是为了强调其中的一者、另一者或两者被提及。MOD接合其co-MOD所提供的信号介导(例如，指导)T细胞反应。此类反应包括但不限于增殖、激活、分化以及增殖、激活和/或分化的压制/抑制等。
如本文所用，“异源”意指分别不存在于天然核酸或蛋白质中的核苷酸或多肽。
如本文所用，“重组”意指特定核酸(DNA或RNA)为克隆、限制、聚合酶链反应(PCR)和/或连接步骤的各种组合的产物，所述步骤产生具有可与天然系统中发现的内源核酸区分开的结构编码或非编码序列的构建体。编码多肽的DNA序列可以由cDNA片段或一系列合成寡核苷酸组装，以提供能够由包含在细胞中或无细胞转录和翻译系统中的重组转录单元表达的合成核酸。
术语“重组表达载体”或“DNA构建体”在本文中可互换使用，是指包含载体和至少一个插入物的DNA分子。通常出于表达和/或繁殖插入物的目的或为了构建其他重组核苷酸序列而产生重组表达载体。插入物可以或不可以可操作地连接至启动子序列并且可以或不可以可操作地连接至DNA调节序列。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等在本文中用于一般意指获得所需药理作用和/或生理作用。就完全或部分预防疾病或其症状而言，所述效果可以是预防性的，且/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于所述疾病的不良反应而言，所述效果可以是治疗性的。如本文所用，“治疗”涵盖哺乳动物的疾病或症状的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病或症状在可能易于获得所述疾病或症状但尚未诊断为患有所述疾病或症状的受试者体内发生；(b)抑制疾病或症状，即阻止其发展；和/或(c)减轻疾病，即引起疾病消退。可以在疾病或损伤发作之前、期间或之后施用治疗剂。对其中治疗使患者的不期望临床症状稳定或减少的正在进行的疾病的治疗特别感兴趣。此种治疗期望在受影响组织功能完全失去之前进行。主题疗法将期望在疾病的症状阶段期间施用，并且在一些情况下在疾病的症状阶段之后施用。
术语“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”在本文中可互换使用，并且是指期望诊断、治疗或疗法的任何哺乳动物受试者。哺乳动物包括人和非人灵长类动物，此外还包括啮齿类动物(例如，大鼠；小鼠)、兔类动物(例如，兔)、有蹄类动物(例如，牛、绵羊、猪、马、山羊等)、猫科动物、犬科动物等。
除非另有说明，否则术语“基本上”旨在涵盖“完全”和“大部分但不完全”。例如，“基本上不诱导细胞裂解”的Ig Fc意指根本不诱导细胞裂解或大部分但不完全不诱导细胞裂解的Ig Fc。
如本文所用，与量结合使用的术语“约”表示所述量可以变化10％。例如，“约100”意指90-110的量。当在范围的上下文中使用约的情况下，参考所述范围的较低量使用的“约”意指所述较低量包括比所述范围的较低量低10％的量，并且参考所述范围的较高量使用的“约”意指所述较高量包括比所述范围的较高量高10％的量。例如，约100至约1000意指范围从90延伸至1100。
术语“纯化”、“分离”等是指从含有不所需物质(例如，污染物)的溶液中取出所需物质(例如，MAPP)，或者从含有期望物质的溶液中去除不期望的物质，从而基本上只留下所需物质。在一些情况下，纯化的物质可以基本上不含其他物质，例如污染物。如本领域技术人员将理解的，在确定物质的纯度时，通常不考虑溶液本身的组分(例如，水或缓冲液或盐)。
当提供数值范围时，应当理解，在本公开内涵盖该范围的上限和下限之间的每个中间值到所述范围下限的十分之一以及所述范围中的任何其他规定的值或中间值。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围中，所述上限和下限也涵盖在本公开内，属于规定的范围内的任何明确排除的极限。其中还包括规定的范围值(例如，上限或下限)、排除这些值的范围。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本公开所属领域中的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然在实践或检测本公开时也可以使用与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料，但是现在描述优选的方法和材料。本文提及的所有出版物都以引用的方式并入本文，以结合所引用的出版物公开并描述方法和/或材料。
必须指出，如在本文和所附权利要求中所用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地指出。因此，例如，提及“Treg”包括多个此类Treg，并且提及“MHC II类α链”包括提及本领域技术人员已知的一种或多种MHC II类α链及其等效物，等等。还应当注意的是，权利要求可以被起草来排除任何可选元素。因此，这种陈述意图充当结合权利要求要素的叙述来使用诸如“仅仅”、“仅”等排他性术语或使用“否定”限制的前提基础。
应理解，出于清晰目的而在分开的实施方案的上下文中所描述的本公开的某些特征也可以在单个实施方案中组合提供。相反，出于简明目的而在单个实施方案的上下文中描述的本公开的各种特征也可以分开地或以任何合适的子组合来提供。属于本公开的实施方案的所有组合确切地涵盖在本公开中并且在本文中公开如同每个和每一种组合均单独地和明确地公开一样。另外，各种实施方案及其要素的所有子组合也确切地涵盖在本公开中并且在本文中公开如同每个和每一种此类子组合均单独地和明确地在本文中公开一样。
B.描述
1.MAPP结构以及框架肽和二聚化肽的作用
本公开提供了用于治疗T1D的MAPP。如上所述，MAPP包含至少一个框架多肽和至少一个二聚化多肽。框架多肽包含一个或多个多肽二聚化序列，其允许与具有对应物二聚化序列的其他多肽(二聚化多肽)特异性结合，从而形成至少异二聚体(参见图1A和1B)。框架多肽还包含多聚化序列，其允许两个或更多个框架多肽缔合，从而形成更高阶结构(例如，两个或更多个异二聚体的双链体，“双链体MAPP”，参见例如图1A和1B)。框架多肽的二聚化序列和多聚化序列(或对应物二聚化序列)都不包含MHC(例如，HLA)II类α链或β链多肽序列；因此，由这些序列引起的相互作用不考虑框架肽和/或二聚化肽的二聚化或多聚化。因此，框架多肽提供了一种结构，可以通过二聚化序列处的相互作用来将其他多肽组织在所述结构上，并且所述结构可以借助多聚化序列与其他框架多肽相互作用。
图1C和1D示出了作为实例的一系列双链体MAPP，其中掩蔽的TGF-βMOD处于闭合或开放位置。在(a)和(b)中，将掩蔽多肽序列和掩蔽的TGF-βMOD的TGF-β序列以反式置于MAPP的3和3′位置处。在(c)和(d)中，MAPP在MAPP的3和3′位置处具有两个掩蔽的TGF-βMOD，其中掩蔽多肽序列和每个掩蔽的TGF-βMOD的TGF-β序列以顺式放置。因为(c)和(d)中每个MOD的掩蔽序列和TGF-β序列都以顺式放置，框架多肽的第一多聚化序列和第二多聚化序列不必是种间对。在(a)和(c)中，掩蔽的TGF-βMOD显示处于“闭合”位置，其中TGF-β序列被掩蔽多肽接合并且不能与细胞受体相互作用。在(b)和(d)中，掩蔽的TGF-βMOD显示处于“开放”位置，其中TGF-β序列可与细胞受体相互作用。另外的MOD(诸如IL-2)可以置于其他位置诸如位置1和1’处。
上文讨论的MAPP、双链体MAPP和更高阶MAPP(例如，三链体MAPP)提供了一种方式，通过所述方式可以将肽表位(在MHC(例如，HLA)的背景中)和掩蔽的TGF-βMOD递送至对所述表位显示TCR特异性的靶T细胞，同时允许灵活呈递除掩蔽的TGF-βMOD以外的一种或多种MOD。因此，MAPP、双链体MAPP和更高阶MAPP允许以表位选择性(例如，依赖性/特异性)方式递送一种或多种MOD，所述方式允许用对表位具有选择性的靶T细胞形成活性免疫突触，以及控制/调节靶T细胞对表位的反应。靶T细胞对MAPP的反应取决于MAPP呈递的MOD和表位。因此，其中MAPP包含刺激性或激活性MOD(例如，IL-2、CD80、CD86和/或4-1BBL)，其以表位选择性方式增加T细胞增殖和/或效应功能。相反，当MAPP包含抑制性(suppressive/inhibitory)MOD(例如，FasL和/或PD-L1)时，它们通常以表位选择性方式降低T细胞激活、增殖和/或效应功能。MAPP，特别是当包含一个或多个掩蔽的TGF-βMOD和一个或多个IL-2MOD多肽序列时，可以起到以表位选择性方式增加Treg的诱导或增殖的作用。本公开的MAPP(其携带单独至少一个掩蔽的TGF-βMOD或其与一个或多个IL-2MOD多肽序列组合)也可以与另外的MOD诸如PD-L1或4-1BBL组合以提供另外的调节信号。
MAPP的框架/二聚化多肽结构及其更高阶结构也可以被理解为提供定位MOD和表位呈递复合物或表位呈递序列的灵活性。当MOD和表位呈递复合物(或表位呈递序列)都被定位以提供所需的生物活性以及MAPP的其他所需特性(例如，热稳定性和可制造性)时，双链体MAPP和更高阶MAPP结构可能特别有用。在一些情况下，当MOD和呈递复合物或呈递序列位于多肽的N端(例如，各自可以位于不同框架多肽和/或二聚化多肽序列的N端)时，可以获得可接受的特性组合。在一些情况下，当MOD和呈递复合物或呈递序列位于多肽的C端(例如，各自可以位于不同框架多肽和/或二聚化多肽序列的C端)时，可以获得可接受的特性组合。在一些情况下，当MOD和呈递复合物或呈递序列分别位于多肽的N端和C端(例如，MOD可以位于不同框架多肽和/或二聚化多肽序列的N端并且呈递复合物或呈递序列可以位于不同框架多肽和/或二聚化多肽序列的C端)时，可以获得可接受的特性组合。在一些情况下，当MOD和呈递复合物或呈递序列分别位于多肽的C端和N端(例如，MOD可以位于不同框架多肽和/或二聚化多肽序列的C端并且呈递复合物或呈递序列可以位于不同框架多肽和/或二聚化多肽序列的N端)时，可以获得可接受的特性组合。
掩蔽的TGF-βMOD放置的实例包括将包含掩蔽序列和TGF-β序列的掩蔽的TGF-βMOD以顺式定位在MAPP框架多肽或二聚化多肽的羧基端(例如，参见例如图1A和1B的位置3、3′、5或5')。包含呈顺式的掩蔽序列和TGF-β序列的掩蔽的TGF-βMOD也可以定位在例如MAPP框架多肽或二聚化多肽的氨基端(例如，参见例如图1的位置1、1′、4或4′)。还可以利用MAPP的其他位置，包括呈递复合物第二序列的N端或C端。
掩蔽序列和TGF-β序列呈反式的TGF-βMOD的放置(在MAPP的不同多肽上)通过使掩蔽序列和TGF-β序列都在MAPP多肽的羧基端或N端来举例说明。举例来说，在双链体MAPP中，掩蔽序列和TGF-β序列可能都位于框架肽的羧基端(参见例如图1C和1D的结构(a)和(b))。包含呈反式的掩蔽序列和TGF-β序列的掩蔽的TGF-βMOD也可以定位在例如MAPP框架多肽的氨基端(位置1'和1)。
MAPP(特别是更高阶MAPP，诸如双链体)的结构可以通过使用具有彼此特异性配对的不同序列的多肽对来指定。框架多肽的多聚化是由多聚化序列之间的相互作用产生的，并且二聚化(框架多肽和二聚化多肽的相互作用)是由框架多肽上的二聚化序列与二聚化多肽上的对应物二聚化的相互作用产生的。例如，在双链体MAPP中，多聚化序列可以是IgFc重链(例如，CH2-CH3)序列，并且二聚化序列和对应物二聚化序列可以是相同的(例如，所有亮氨酸拉链序列)。另外的控制程度可以通过利用彼此特异性/选择性配对的不同肽序列来获得，所述不同肽序列在本文中通常称为“种间序列”，在二聚化序列的情况下称为“种间二聚化序列”，或在多聚化序列的情况称为“种间多聚化序列”，并且其产生不对称的种间序列对。因此，MAPP的结构允许将每个多肽多样且有效地置于MAPP结构中(参见例如图9至13)。种间序列包括用例如杵臼结构变化修饰的Ig重链Fc(例如，CH2-CH3)区；和与Jun肽序列配对的Fos肽序列。因此，MAPP结构包括但不限于其中每个或一些二聚化序列不同(允许不同的肽配对)的MAPP。例如，其中每个多聚化和二聚化序列都不同并且提供单独的肽配对的双链体MAPP。
在一个实施方案中，框架肽多聚化序列是Ig Fc重链区(任选地种间Fc序列，诸如杵臼结构Fc序列)，并且二聚化序列是相同的(例如，与轻链λ或κ恒定区序列配对的Ig CH1序列)(参见例如图11和22，结构A至D)。在另一个实施方案中，框架肽多聚化序列是Ig Fc重链区(任选地和种间Fc序列，诸如杵臼结构Fc序列)，并且选择不同的二聚化序列(例如，包含与轻链λ或κ序列配对的Ig CH1的二聚化序列对和包含亮氨酸拉链对的二聚化序列，参见例如图13，结构E至H)。例如，在双链体MAPP中，多聚化序列可以是杵臼结构Ig序列，一个二聚化序列及其对应物二聚化序列可以是亮氨酸拉链序列，并且第二二聚化序列及其对应物二聚化序列可以是Ig CH1和Ig CLλ结构域对。
MAPP及其更高阶复合物(双链体、三链体等)相应地包含MHC II类多肽序列，所述多肽序列结合用于呈递至TCR的表位，因此可以将肽呈递至T细胞(例如，CD4+T细胞)。MAPP对具有表位特异性TCR的T细胞的影响取决于除了掩蔽的TGF-βMOD以外还有哪些MOD(如果有的话)存在于MAPP中。如上所述，包含MOD的MAPP、双链体MAPP和更高阶MAPP允许MOD以表位选择性方式递送至T细胞，并且MOD主要根据刺激的特定细胞类型和环境决定MAPP-T细胞接合的效果。虽然不受任何特定理论的束缚，但在一些情况下，MAPP(例如，双链体MAPP)将MOD和表位递呈至T细胞的效果可能相对于抗原呈递细胞(APC)中遇到的情况得到增强，在所述情况下表位可以扩散远离MHC(例如，HLA)复合物以及APC呈递的任何MOD。MAPP不会发生这种情况，其中表位和MOD是MAPP多肽的一部分并且不能扩散开，即使表位对MHC复合物的亲和力通常允许其离开相当的细胞复合物。表位无法扩散远离MAPP或更高阶MAPP复合物的MHC和MOD组分可能受到进一步限制，其中MAPP的多肽(例如，框架、二聚化序列以及(如果存在的话)呈递复合物第二序列)彼此共价附接(例如，通过二硫键)。因此，相对于表位可以扩散远离呈递MHC的系统，MAPP及其更高阶结构可能能够以表位选择性方式延长MOD向T细胞的递送。
并入一种或多种对其T细胞上的同源受体具有亲和力的MOD(“co-MOD”)可以降低MAPP(例如，双链体MAPP)对表位选择性/特异性T细胞的特异性。当MOD/co-MOD结合相互作用强度(结合能)增加并与MHC/表位显著竞争结合至靶细胞TCR时，MAPP的表位选择性/特异性的降低变得更加明显。因此，包括对其co-MOD的亲和力降低的变体MOD(包括TGF-βMOD)可能会提供较低的MOD结合能贡献，从而允许MHC表位相互作用，其中TCR主导结合并提供表位与T细胞的选择性相互作用，同时保留MOD的活性。具有降低MOD对其co-MOD的亲和力的一个或多个取代(或缺失或插入)的变体MOD可以单独或与野生型MOD多肽序列组合并入MAPP及其更高阶复合物中。野生型和变体MOD将在下文进一步描述。包含与TGF-β多肽序列紧密结合的掩蔽序列有效地降低了TGF-β多肽序列对细胞受体的表观亲和力，从而降低了TGF-β多肽在MAPP与T细胞缔合中对细胞TβR结合的贡献，这允许MHC表位与TCR相互作用以主导T细胞结合相互作用并实现表位特异性/选择性T细胞相互作用，并且允许将掩蔽的TGF-βMOD和MAPP上的任何其他MOD表位特异性/选择性递送至靶T细胞。
因此，MAPP以表位选择性/特异性方式调节T细胞的能力提供了体外和体内调节T细胞活性的方法，并且因此提供了治疗由免疫失调/功能障碍引起的自身免疫性T1D糖尿病的方法。
本公开提供了包含编码MAPP多肽的核苷酸序列的核酸、用所述核酸进行遗传修饰并能够产生MAPP的细胞以及利用此类细胞产生MAPP及其更高阶复合物的方法。
存在于MAPP中的每个呈递序列或呈递复合物包含足以结合肽表位并将其呈递至TCR的MHC II类α和β链多肽序列(例如，人MHC II类序列)。MHC II类肽可以包含被设计以稳定MHC、稳定MHC-肽表位复合物和/或稳定MAPP的序列变异。序列变异还可以用于增强基于细胞的系统中制备的MAPP的细胞表达以及MAPP及其更高阶复合物(诸如双链体MAPP)的稳定性(例如，热稳定性)。下文描述了一些适用于在MAPP中使用的MHC II类序列。
如附图的描述中所指示的，MAPP可以包含MAPP的任何两个或更多个组分之间的一个或多个独立选择的肽序列(一个或多个“接头”)，其在图中可以示出为MAPP的肽和/或多肽元件之间的线。用作接头的相同序列也可以位于MAPP肽的N端和/或C端以防止例如蛋白水解降解。接头序列包括但不限于包含以下的多肽：甘氨酸；甘氨酸和丝氨酸；甘氨酸和丙氨酸；丙氨酸和丝氨酸；以及甘氨酸、丙氨酸和丝氨酸；可以包含用于形成多肽内或多肽间二硫键的半胱氨酸的任一种。下文更详细地描述各种接头。
2.示例性MAPP结构
本公开的MAPP包含(i)具有多聚化序列和至少一个二聚化序列的框架多肽，和(ii)具有与框架多肽的二聚化序列结合的对应物二聚化序列的二聚化多肽。如上所述，本公开的MAPP还包含一个、两个或更多个掩蔽的TGF-βMOD，以及一个或多个表位呈递序列或一个或多个表位呈递复合物。此类MAPP的示例性结构出现在图1A至1D和图9至13中，在一些情况下至少一个MOD示出为掩蔽的TGF-βMOD。图13中描绘的结构代表具有至少一个掩蔽的TGF-βMOD、多聚化框架多肽和表位呈递序列(具有“表位”的“单链MHC”)的MAPP。在图1A和图9至12中，结构代表具有多聚化框架多肽的MAPP，其中表位MHC组合代表表位呈递序列或表位呈递复合物。
MHC(例如，HLA)序列的相互作用在本文中不被认为导致多聚化和/或二聚化。在一个实施方案中，框架多肽的二聚化序列或多聚化序列以及二聚化多肽的对应物二聚化序列均不包含与MHC II类多肽(例如，图4至8中任一者中的多肽)的至少15(例如，20、30、40、50、60或70)个连续氨基酸具有至少90％(例如，95％或98％)序列同一性的MHC II类多肽。在实施方案中，MAPP包含至少一个或至少两个二聚化肽，其包含表位呈递序列。参见例如图1A和1B。
一组含有掩蔽的TGF-βMOD的表位呈递序列，除了掩蔽的TGF-βMOD外，还包含：从N端到C端具有二聚化序列和多聚化序列的多聚化框架多肽；以及二聚化多肽，其包含与框架多肽的二聚化序列互补的对应物二聚化序列并且通过共价和/或非共价相互作用与框架多肽二聚化以形成异二聚体；其中二聚化多肽和框架多肽中的至少一者(例如，一者或两者)包含位于它们的二聚化序列或对应物二聚化序列的N端侧上的呈递序列。在此种MAPP中，呈递序列可以包含肽表位和一个或多个MHC多肽序列，其中肽表位序列位于：(i)呈递序列的N端处或其10个氨基酸、15个氨基酸、20个氨基酸或25个氨基酸内，或(ii)位于呈递序列的N端的多肽中，所述呈递序列从N端到C端包含MOD、一个或多个任选的接头和肽表位；任选地框架多肽、二聚化肽和呈递序列中的至少一者(例如，一者、两者或每一者)包含位于其N端和/或C端(或位于二聚化序列或对应物二聚化序列的N端或C端侧上)的一个或多个独立选择的MOD；其中MHC多肽序列是MHC II类多肽序列，它们包含MHC II类α1、α2、β1和β2多肽序列(例如，人MHC II类序列)。在一个实施方案中，框架多肽的二聚化序列或多聚化序列均不包含与图4至18B中任一者中MHC II类多肽的至少15(例如，至少20、30、40、50、60或70)个连续氨基酸具有至少90％(例如，95％或98％)序列同一性的II类MHC肽。
另一组具有表位呈递复合物的MAPP包含：从N端到C端具有二聚化序列和多聚化序列的多聚化框架多肽；以及二聚化多肽，其包含与框架多肽的二聚化序列互补的对应物二聚化序列，并且通过共价和/或非共价相互作用与框架多肽二聚化以形成异二聚体；其中二聚化多肽中的至少一者(例如，一者或两者)和/或框架多肽中的至少一者(例如，一者或两者)包含位于它们的二聚化序列的N端侧上的呈递复合物第一序列。呈递复合物第二序列与呈递复合物第一序列缔合(例如，非共价或共价缔合，诸如通过一个或两个链间二硫键)以形成呈递复合物。在此种MAPP中，每个呈递复合物第一序列及其缔合的呈递复合物第二序列包含一个或多个MHC多肽序列，其中序列之一还包含肽表位。肽表位可以位于(i)呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的N端处或其10个氨基酸、15个氨基酸、20个氨基酸或25个氨基酸内，或(ii)位于呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的N端处的多肽中，其中多肽从N端到C端包含MOD、一个或多个任选的接头和肽表位。任选地，框架多肽、二聚化肽和呈递复合物的肽中的至少一者(例如，一者、两者或每一者)包含位于它们的N端和/或C端(或位于二聚化序列的N端或C端侧上)的一个或多个独立选择的MOD。
可以构建MAPP，使得框架多肽的二聚化序列或多聚化序列均不包含与图4至18B中任一者中MHC II类多肽的至少15(例如，至少20、30、40、50、60或70)个连续氨基酸具有至少90％(例如，95％或98％)序列同一性的II类MHC肽。
如上所述，框架多肽的二聚化序列可以与二聚化肽相互作用以形成异二聚体。框架多肽的多聚化序列可以与另一框架多肽多聚化序列缔合，从而形成异二聚体的双链体(或更高阶结构，诸如三链体、四链体或五链体)。其中多聚化序列是种间的(例如，杵臼结构Fc肽对)，并且至少一种异二聚体包含种间二聚化对和对应物二聚化对，可以形成两种不同的异二聚体。当不同的异二聚体组合以形成双链体MAPP时，两种异二聚体之间的任何一种或多种组分(例如，MOD)可能不同(例如，在类型或位置上)。
C.MAPP组分
1.框架多肽和二聚化多肽
如从前面的部分可以理解的，框架多肽充当MAPP的结构基础或骨架，从而允许将MAPP复合物中的其他元件组织在一起。框架肽通过结合相互作用与其他肽相互作用，主要是在二聚化序列和多聚化序列处。二聚化序列处的相互作用允许非框架肽(例如，二聚化肽)与框架肽的缔合。相反，多聚化序列涉及两个或更多个框架肽的相互作用。
MAPP的框架多肽包含至少一个多聚化序列和至少一个独立选择的二聚化序列，所述二聚化序列与多聚化序列不同或不是同一类型(例如，不是两个亮氨酸拉链变体)。通过利用用于在多聚化序列和二聚化序列处相互作用的不同类型的序列，可以控制所述框架多肽与其他框架多肽以及二聚化多肽的相互作用。在一个实施方案中，框架多肽包含一个多聚化序列和一个二聚化序列。在一个实施方案中，框架多肽包含至少一个多聚化序列和至少两个独立选择的二聚化序列。框架肽可以在框架多肽的任何元件之间或包含多聚化序列和二聚化序列的框架多肽的末端处含有肽序列(例如，接头序列和/或MOD序列)。
除了通过MAPP的多聚化序列和二聚化序列提供MAPP的结构组织外，框架肽，特别是其N端和C端还可以充当用于放置元件的位置，所述元件诸如MOD序列、表位、呈递序列和/或呈递复合物第一序列(表位呈递复合物的一个多肽，参见图1B)。当置于框架多肽的N端和/或C端时，此类多肽元件是框架多肽的一部分(例如，在细胞中形成的单个翻译产物)。
在MAPP内，所有二聚化序列可以是非种间的(诸如亮氨酸拉链对)，而多聚化序列是种间的或非种间的(参见例如图19和20的结构A和B)。例如，在具有第一框架多肽和第二框架多肽的双链体MAPP中，多聚化序列可以是非种间的(例如，IgFc序列诸如CH2、CH3结构域序列或亮氨酸拉链)或多聚化序列可以是种间杵臼结构序列对；其中第一框架多肽和第二框架多肽的二聚化序列作为非种间亮氨酸拉链多肽。当采用Fc多肽时，其可以来自例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，其可以是人多肽序列、人源化多肽序列、合成重链恒定区的Fc区多肽或共有重链恒定区。
在MAPP内，所有二聚化序列可以是种间的，而多聚化序列不是种间的(参见例如图13A)。例如，在具有第一框架多肽和第二框架多肽的双链体MAPP中，多聚化序列可以是IgFc序列，其中ZW1序列或其对应物用作第一框架多肽的二聚化序列，并且Ig CH1结构域或其对应物Ig CLκ序列用作第二框架多肽的二聚化序列。
MAPP中的所有二聚化序列或所有二聚化序列和多聚化序列可能不同，因为它们仅结合存在于MAPP中的特定结合配偶体(例如，每个都是不同种间序列对的一部分)。例如，在具有第一框架多肽和第二框架多肽的双链体MAPP中，多聚化序列可以是杵臼结构IgFc序列对，其中ZW1序列或其对应物用作第一框架多肽的二聚化序列，并且Ig CH1或其对应物IgCL序列用作第二框架多肽的二聚化序列。
2.多聚化多肽序列和二聚化多肽序列
当允许多肽相互作用的氨基酸序列参与在框架多肽和二聚化多肽之间形成二聚体时，所述氨基酸序列可以用作二聚化序列或对应物二聚化序列。当相同类型的氨基酸序列用于在框架多肽之间形成双链体或更高阶结构(三聚体、四聚体、五聚体等)时，所述氨基酸序列可以用作多聚化序列。在任何给定的MAPP中，可以彼此相互作用的序列不被用作二聚化序列和多聚化序列。换句话说，相同的氨基酸序列对可以充当二聚化序列或多聚化序列，这取决于所述氨基酸序列对是否：将两个或更多个框架肽聚集在一起，在这种情况下所述氨基酸序列对是多聚化序列；或者所述氨基酸序列对将二聚化和多聚化序列聚集在一起，在这种情况下所述氨基酸序列对被指定为二聚化序列。
当二聚化序列或多聚化序列采用配对或多聚化的相同序列(例如，一些亮氨酸拉链序列)时，它们可以形成如图9结构A中所示的对称对或多聚体(例如，同二聚体)。相反，当配对的二聚化序列或多聚化序列不相同并且需要特定的互补对应物序列以形成二聚体时，它们是种间结合序列并且可以形成不对称对。免疫球蛋白(例如，IgFc)多肽和非免疫球蛋白多肽两者本质上可以是种间的或非种间的。例如，Fos/Jun结合对和Ig CH1多肽序列与轻链恒定区CL序列形成种间结合对。天然Ig Fc区往往是非种间的，但如下所述，可以形成种间对(例如，KiH对)。卷曲螺旋序列，包括亮氨酸拉链序列，可以是种间亮氨酸拉链或非种间亮氨酸拉链序列。参见例如Zeng等人,(1997)PNAS(USA)94:3673-3678；和Li等人,(2012),Nature Comms.3:662。
种间结合序列在一些情况下可以形成一定量的同二聚体，但优先通过与其对应物种间结合序列更强烈地结合而二聚化。因此，当将种间二聚化序列及其对应物种间结合序列并入一对多肽中时，倾向于形成特异性异二聚体。举例来说，当将种间二聚化序列及其对应物并入一对多肽中时，它们在将多肽的等摩尔混合物组合时(例如在PBS缓冲液中，20℃)可以选择性形成多于70％、80％、90％、95％、98％或99％的异二聚体。多肽的其余部分可以作为单体或同二聚体存在，其可以与异二聚体分离。参见例如图9具有种间多聚化序列的结构B和具有两个不同种间二聚化序列的结构C。此外，由于种间序列对其对应物序列具有选择性，它们可以限制与细胞表达的其他蛋白质(例如，在培养物中或在受试者中)的相互作用，特别是当种间序列不是天然存在的或者是天然存在的蛋白质序列的变体时。
当序列不与彼此的对应物序列形成复合物(结合)时，序列被认为与其他序列正交。参见图9结构D，其中MAPP包含一个种间多聚化序列和两个独立选择的种间二聚化序列，所有这些序列彼此正交。本文描述的任何MAPP可以具有两个或更多个(例如，三个、四个或更多个)正交二聚化序列。在一个实施方案中，具有多聚化框架肽的MAPP可以具有正交多聚化和二聚化结构域(其中二聚化结构域可以彼此正交或不正交)。
例如在美国专利公开号2003/0138440中提供了允许多肽以足够的亲和力相互作用以用作二聚化序列和/或多聚化序列的一些序列。序列可以具有相对紧凑的大小(例如，诸如小于约300、250、225、200、175、150、125、100、75、60、50、40或30个氨基酸)。在一个实施方案中，二聚化序列和/或多聚化序列中的至少一者(例如，至少两者或所有)小于300个氨基酸。在一个实施方案中，二聚化序列和/或多聚化序列中的至少一者(例如，至少两者或所有)小于200个氨基酸。在一个实施方案中，二聚化序列和/或多聚化序列中的至少一者(例如，至少两者或所有)小于100个氨基酸。在一个实施方案中，二聚化序列和/或多聚化序列中的至少一者(例如，至少两者或所有)小于75个氨基酸。在另一个实施方案中，二聚化序列和/或多聚化序列中的至少一者(例如，至少两者或所有)小于50个氨基酸。在一个实施方案中，二聚化序列和/或多聚化序列中的至少一者(例如，至少两者或所有)小于30个氨基酸。
二聚化/多聚化序列包括但不限于：免疫球蛋白重链恒定区(Ig Fc)多肽序列(例如，包含免疫球蛋白的CH2-CH3区的序列，诸如图2A至2H和SEQ ID NO:1至13中提供的那些)；胶原凝集素家族的多肽(例如，ACRP30或ACRP30样蛋白)，其含有由胶原重复Gly-Xaa-Yaa和/或Gly-Xaa-Pro(可重复10-40次)组成的胶原结构域；卷曲螺旋结构域；亮氨酸拉链结构域；种间Ig Fc重链恒定区(诸如下文更详细描述的杵臼结构序列)；Fos/Jun结合对；免疫球蛋白重链恒定区(CH2-CH3)序列，以及；Ig CH1和轻链恒定区CL序列(Ig CH1/CL对，诸如与Ig CLκ或λ轻链恒定区序列配对的Ig CH1序列)。
MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含免疫球蛋白重链恒定区(例如，CH2-CH3结构域)多肽序列，其充当二聚化序列或多聚化序列。当框架多肽包含IgFc多聚化序列和CH1二聚化序列时，其可以包含图2A至2H中任一者中列出的全部或部分天然或变体免疫球蛋白序列，所述免疫球蛋白序列包含CH1、CH2和CH3结构域以及任何可能存在的铰链序列。Ig Fc序列或者CH1、CH2和CH3结构域中的任何一个或多个可以与图2A至2H中描绘的Fc区的氨基酸序列具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性。特别地，图2A至2H中提供的一些序列中提供的C端赖氨酸(例如，图2D、2E、2F和2G中的IgG序列)可能在MAPP的细胞加工期间被去除，并且可能不存在于所表达的一些或全部MAPP分子上。参见例如van den Bremer等人.(2015)mAbs 7:4；以及Sissolak等人(2019)J.Industrial Microbiol.&Biotechnol.46:1167。
此类免疫球蛋白序列可以通过形成一个或两个链间二硫键将MAPP复合物的多肽共价连接在一起，从而稳定MAPP，特别是在应用一对种间Ig序列诸如杵臼结构多肽对时。当Fc多肽序列单独或与CH1多肽序列组合用作多聚化序列或二聚化序列时，其可以来自例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，其可以是人多肽序列、人源化多肽序列、合成重链恒定区的Fc区多肽或共有重链恒定区。如下文所讨论的，Ig Fc区还可以含有取代，所述取代可以基本上消除Ig Fc实现补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力。
MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2A中描绘的IgA Fc序列(SEQ IDNO:1)的至少150个连续氨基酸(至少175、至少200、至少225、至少250、至少275、至少300、至少325或至少350个连续氨基酸)或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2B中描绘的IgD Fc序列(SEQ ID NO:2)的至少150个连续氨基酸(至少175、至少200、至少225、至少250、至少275、至少300、至少325或至少350个连续氨基酸)或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2C中描绘的IgE Fc序列(SEQ ID NO:3)的至少125个连续氨基酸(至少300、至少325或至少350个连续氨基酸)或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。
MAPP可以包含一个或多个IgG Fc序列作为二聚化序列和/或多聚化序列。MAPP的Fc多肽可以是人IgG1 Fc、人IgG2 Fc、人IgG3 Fc、人IgG4 Fc等。在一些情况下，Fc序列与图2D至2G中描绘的Fc区的氨基酸序列具有至少约70％、至少约80％、有至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性。MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型IgG1 Fc多肽序列(SEQ ID NO:4)的至少125个连续氨基酸(例如，至少150、至少175、至少200或至少220个连续氨基酸)或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2E中描绘的IgG2 Fc多肽序列(SEQ ID NO:9)的至少125个(例如，至少150、至少175、至少200或至少225个)连续氨基酸或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2F中描绘的IgG3 Fc序列(SEQ ID NO:10)的至少125个(例如，至少150、至少175、至少200、至少225或至少240个)连续氨基酸或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2G中描绘的IgG4 Fc序列(SEQ ID NO:11或12)的至少125个(例如，至少150、至少175、至少200或至少220个)连续氨基酸或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。
MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2I中提供的IgG1 CH1序列的至少80个(至少90、至少100、至少110或至少全部112个)连续氨基酸或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。
MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含与图2H中描绘的IgM Fc多肽序列(SEQID NO:13)的至少125个(至少150、至少175、至少200、至少225或至少250个)连续氨基酸或全部氨基酸具有至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性的序列。
包含免疫球蛋白序列(例如，图2A至2H中所描绘的)的MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以通过在邻近免疫球蛋白铰链区的半胱氨酸之间形成至少一个或至少两个链间二硫键而共价连接在一起。此类二硫键可以稳定框架多肽和二聚化多肽异二聚体的相互作用，或例如当二硫键在框架多聚化序列之间时稳定此类异二聚体的双链体。
框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽具有100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽具有至少约70％(例如，至少约80％、90％、95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列(例如，作为多聚化序列)，所述氨基酸序列包含N297(如图2D的SEQ ID NO:7中编号的N77)被除天冬酰胺以外的氨基酸的取代。在一种情况下，N297被丙氨酸取代(N297A)。N297处的取代导致糖修饰的去除，并且产生与野生型蛋白相比补体组分1q(“C1q”)结合减少的抗体序列，因此减少补体依赖性细胞毒性(“CDC”)。K322(例如，K322A)取代显示FcγR结合亲和力和ADCC的降低显著减少，而C1q结合和CDC功能基本上或完全消除。Hezareh等人,(2001)J.Virol.75:12161-168。
IgG的下铰链区中的氨基酸L234和其他氨基酸(例如，对应于IgG的SEQ ID NO:8的氨基酸14-19的氨基酸234至239，诸如L235、G236、G237、P238、S239)参与同Fcγ受体(FcγR)的结合，因此，该位置处的突变减少了与受体的结合(相对于野生型蛋白)，并导致抗体依赖性细胞毒性(或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性，“ADCC”)减少。Hezareh等人(2001)已证明双突变体(L234A、L235A)不能有效结合FcγR或C1q，并且ADCC和CDC功能基本上或完全被消除。在下铰链区中具有取代的框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽的至少125个连续氨基酸(例如，至少150、至少175、至少200或至少210个连续氨基酸)或全部氨基酸具有至少约70％(例如，至少约80％、90％、95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其包含L234(图2D中描绘的氨基酸序列的L14)被除亮氨酸以外的氨基酸的取代。
鉴于前述，框架多肽或二聚化多肽，特别是用作多聚化序列或二聚化序列的Ig Fc序列可以包含减少或基本上消除ADCC和/或CDC反应的取代。框架多肽或二聚化多肽，特别是用作多聚化序列或二聚化序列的Ig Fc序列可以包含减少或基本上消除ADCC和/或CDC的取代。
在下铰链区中具有取代的框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽具有至少约70％(例如，至少约80％、90％、95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列(例如，作为多聚化序列)，所述氨基酸序列包含用除亮氨酸以外的氨基酸的L235(图2D中描绘的氨基酸序列的L15)的取代。在一些情况下，存在于MAPP中且在下铰链区中具有取代的框架多肽和/或二聚化多肽包含L234A和L235A(“LALA”)取代(对应于图2D中描绘的野生型氨基酸序列的位置14和15的位置；参见例如SEQ ID NO:8)。
在下铰链区中具有取代的框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽具有至少约70％(例如，至少约80％、90％、95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列(例如，作为多聚化序列)，所述氨基酸序列包含P331(图2D中描绘的氨基酸序列的P111)被除脯氨酸以外的氨基酸的取代。P331处的取代(如N297处的取代)导致相对于野生型蛋白而言与C1q的结合减少，从而减少补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一个实施方案中，取代是P331S取代。在另一个实施方案中，取代是P331A取代。
框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽具有至少约70％(例如，至少约80％、90％、95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列(例如，作为多聚化序列)，并且包含D270、K322和/或P329(对应于图2D中SEQ ID NO:4的D50、K102和P109)的取代，其相对于野生型蛋白减少了与C1q蛋白的结合。
框架多肽或二聚化多肽可以包含与图2D中描绘的野生型人IgG1 Fc多肽具有至少约70％(例如，至少约80％、90％、95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列(例如，作为多聚化序列)，所述氨基酸序列包含在L234和/或L235(图2D中描绘的氨基酸序列的L14和/或L15)处被除亮氨酸以外的氨基酸的取代诸如L234A和L235A，以及P331(图2D中描绘的氨基酸序列的P111)被除脯氨酸以外的氨基酸的取代诸如P331S。在一种情况下，存在于MAPP中的框架多肽或二聚化多肽包含图2D中描绘的“三重突变体”氨基酸序列(SEQ IDNO:6)(人IgG1 Fc)，其包含L234F、L235E和P331S取代(对应于图2D中描绘的氨基酸序列的氨基酸位置14、15和111)。
当需要MAPP的两个多肽之间的不对称配对时，存在于MAPP中的框架多肽或二聚化多肽可以包含种间结合序列，基本上由种间结合序列组成或由种间结合序列组成。种间结合序列有利于与其同源多肽序列(即，种间序列及其对应物种间序列)形成异二聚体，特别是基于免疫球蛋白Fc(Ig Fc)序列变体的异二聚体。此类种间多肽序列包括KiH、KiHs-s、HA-TF、ZW-1、7.8.60、DD-KK、EW-RVT、EW-RVTs-s和A107序列。一个种间结合对包含IgG1的CH3结构域界面中的T366Y和Y407T突变体对，或其他免疫球蛋白的对应残基。参见Ridgway等人,Protein Engineering 9:7,617-621(1996)。第二种间结合对涉及通过T366W取代形成杵，以及通过互补Ig Fc序列上的三重取代T366S、L368A和Y407V形成臼。参见Xu等人mAbs7:1,231-242(2015)。另一个种间结合对具有：第一Fc多肽，其具有Y349C、T366S、L368A和Y407V取代；以及第二Ig Fc多肽，其具有S354C和T366W取代(可以在Y349C与S354C之间形成二硫键)。参见例如Brinkmann和Konthermann,mAbs 9:2,182–212(2015)。具有或不具有杵臼结构修饰的Ig Fc多肽序列可以通过在Ig Fc多肽之间形成二硫键(例如，铰链区二硫键)来稳定。下表总结了若干种基于免疫球蛋白序列的种间结合序列，交叉引用了它们出现在图2D中列出的以括号“{}”示出的野生型IgG1序列(SEQ ID NO:4)中的氨基酸位置的编号。
表1.种间免疫球蛋白序列及其同源对应物种间序列
表1由Ha等人,Frontiers in Immunol.7:1-16(2016)修改。
*氨基酸形成稳定的二硫键。
除了表1中的种间序列对以外，框架多肽和/或二聚化多肽还可以包含种间“SEED”序列，其具有衍生自种间序列的IgG1 CH3结构域中的IgA的45个残基，以及衍生自其对应物种间序列的IgA CH3中的IgG1的57个残基。参见Ha等人,Frontiers in Immunol.7:1-16(2016)。
MAPP中发现的框架多肽或二聚化多肽可以包含种间结合序列或其对应物种间结合序列，所述序列选自由以下组成的组：KiH；KiHs-s；HA-TF；ZW-1；7.8.60；DD-KK；EW-RVT；EW-RVTs-s；A107；或SEED序列。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有T146W序列取代的IgG1 KiH或KiHs-s序列，并且其对应物种间KiH或KiHs-s结合配偶体多肽包含具有T146S、L148A和Y187V序列取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列。框架多肽或二聚化多肽中的一者或两者任选地包含以下一个或多个位置处的取代：L234和L235(例如，L234A/L235A“LALA”或L234F/L235E)；N297(例如，N297A)；P331(例如，P331S)；L351(例如，L351K)；T366(例如，T366S)；P395(例如，P395V)；F405(例如，F405R)；Y407(例如，Y407A)；和K409(例如，K409Y)。这些取代出现于：图2D的野生型IgG1序列中的L14和L15(例如，L14A/L15A“LALA”或L14F/L15E)；N77(例如，N77A)；P111(例如，P111S)；L131(例如，L131K)；T146(例如，T146S)；P175(例如，P175V)；F185(例如，F185R)；Y187(例如，Y187A)；和K189(例如，K189Y)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有T146WKiH序列取代的IgG1序列，并且其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T146S、L148A和Y187V KiH序列取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有T146W和S134C KiHs-s取代的IgG1序列，并且其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T146S、L148A、Y187V和Y129C KiHs-s取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有S144H和F185A HA-TF取代的IgG1序列，并且其对应物种间结合配偶体多肽包含具有Y129T和T174F HA-TF取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有T130V、L131Y、F185A和Y187V ZW1取代的IgG1序列，并且其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T130V、T146L、K172L和T174W ZW1取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有K140D、D179M和Y187A 7.8.60取代的IgG1序列，并且其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T130V、E125R、Q127R、T146V和K189V 7.8.60取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有K189D和K172D DD-KK取代的IgG1序列，并且其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T130V、D179K和E136K DD-KK取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有K140E和K189W EW-RVT取代的IgG1序列，其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T130V、Q127R、D179V和F185T EW-RVT取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有K140E、K189W和Y129C EW-RVTs-s取代的IgG1序列，其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T130V、Q127R、D179V、F185T和S134C EW-RVTs-s取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列。框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
MAPP可以包含框架多肽或二聚化多肽，所述框架多肽或二聚化多肽包含具有K150E和K189W A107取代的IgG1序列，其对应物种间结合配偶体多肽包含具有T130V、E137N、D179V和F185T A107取代的IgG1序列，其中框架多肽和/或二聚化多肽包含与图2D的野生型IgG1的至少100个(例如，至少125、150、170、180、190、200、210、220或全部227个)连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％或至少97％序列同一性的序列；其中框架多肽和/或二聚化多肽序列中的一者或两者可以包含另外的取代，诸如L14和/或L15取代(例如，“LALA”取代L234A和L235A)，和/或N77(N297，例如，N297A或N297G)。
作为使用免疫球蛋白CH2和CH3重链恒定区作为二聚化序列或多聚化序列的替代方案，免疫球蛋白轻链恒定区(参见图3A和3B)可以与Ig CH1序列(参见图2I)配对作为框架多肽的多聚化序列或二聚化序列及其对应物序列。
MAPP框架多肽或二聚化多肽可以包含Ig CHl结构域(例如，图2I的多肽)，并且将与其形成复合物的序列(其对应物结合配偶体)包含Igκ链恒定区序列，其中框架多肽或二聚化多肽包含分别与SEQ ID NO:14和/或15的至少70、至少80、至少90、至少100或至少110个连续氨基酸具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％序列同一性的序列。参见图2I和3A。可以修饰Ig CH1和Igκ序列以增加它们对彼此的亲和力，并相应地增加利用它们作为二聚化序列或多聚化序列形成的任何异二聚体的稳定性。增加CH1-Igκ异二聚体稳定性的取代是Chen等人,MAbs,8(4):761-774(2016)中鉴定为MD13组合的那些。在MD13组合中，两个取代被引入到每个IgCH1和Igκ序列中。Ig CH1序列被修饰以含有S64E和S66V取代(图2I中所示序列的S70E和S72V)。Igκ序列被修饰以含有S69L和T71S取代(图3A中所示序列的S68L和T70S)。
MAPP的框架多肽或二聚化多肽可以包含Ig CH1结构域(例如，图2I的SEQ ID NO:14的多肽)，并且其对应物序列包含诸如图3B中所示的Igλ链恒定区序列(SEQ ID NO:16)，其中框架多肽或二聚化多肽包含与图3B中所示序列的至少70个(例如，至少80、至少90或至少100个)连续氨基酸具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％序列同一性的序列。
MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以各自包含亮氨酸拉链多肽作为二聚化序列或多聚化序列。亮氨酸拉链多肽彼此结合形成二聚体(例如，同二聚体)。亮氨酸拉链多肽的非限制性实例包括包含以下氨基酸序列中的任一者的肽：RMKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGER(SEQ ID NO:62)；LSSIEK-KQEEQTS-WLIWISNELTL-IRNELAQS(SEQ ID NO:63)；LSSIEKKLE-EITSQLIQIS-NELTLIRNELAQ(SEQ ID NO:64)；LSSIE-KKL-E--EITSQLQUALIFICATION(SEQ ID NO:65)；LSSIEKKL-EEITSQLQQ-IRNELTLI-RNELAQ(SEQ IDNO:66)；LSSLEKKLEEL-TSQLIQLRNELT-LLRNELAQ(SEQ ID NO:67)；ISSLE-KKIEE-LTSQI-QQLRNEITLLRNEIA(SEQ ID NO:68)。在一些情况下，亮氨酸拉链多肽包含以下氨基酸序列：LEIEAAFLERENT-ALET-RVAE-LRQR-VQRLR-NRV-SQYRT-RYGPLGGGK(SEQ ID NO:69)。另外的亮氨酸拉链多肽是本领域已知的，其中许多适合用作多聚化序列或二聚化序列。
MAPP的框架多肽和/或二聚化多肽可以包含形成二聚体的卷曲螺旋多肽。卷曲螺旋多肽的非限制性实例包括例如以下氨基酸序列中的任一者的肽：LKSVENRLAVVENQLKT-VIEE-LK-TVKDLLSN(SEQ ID NO:70)；LARIE-EKLKTIKAQLSEIASTLNMIREQLAQ(SEQ ID NO:71)；VSRLE-EKVKT-LKSQV-TELAS-TVSLL-REQVAQ(SEQ ID NO:72)；IQSEKKIEDI-SSLI-G-QIQSEITLIRNEIAQ(SEQ ID NO:73)；和LMSLE-KKLEE-LTQTLMQLQNELSMLKNELAQ(SEQ ID NO:74)。
MAPP可以包含一对两个框架多肽和/或框架多肽和二聚化多肽，其各自具有包含至少一个半胱氨酸残基的氨基酸序列，所述半胱氨酸残基可以形成二硫键，从而允许通过半胱氨酸残基之间的二硫键稳定的那些多肽的同二聚化或异二聚化。此类氨基酸序列的实例包括：VDLEGST-SN-G-RQ--CA-GIRL(SEQ ID NO:75)；EDDVTTTEELAPALVPPPKG-TCA-GW-MA(SEQ ID NO:76)；和GHDQE-TTTQG-PGVLL-PLPKGACTGQMA(SEQ ID NO:77)。
一些适用作多聚化(寡聚化)序列的氨基酸序列允许形成能够形成比包含框架多肽和二聚化多肽的异二聚体的双链体更大的结构的MAPP。在一些情况下，可以形成三链体、四链体、五链体。此类氨基酸序列包括但不限于IgM恒定区(参见例如图2H)，其形成六聚体或五聚体(特别是当与缺乏信号序列的成熟j链肽(诸如图2J(SEQ ID NO:78)中提供的)组合时)。也可以应用形成三聚体的胶原结构域。胶原结构域可以包含三个氨基酸序列Gly-Xaa-Xaa和/或GlyXaaYaa，其中Xaa和Yaa独立地为任何氨基酸，所述序列出现或重复多次(例如，10至40次，诸如10-20、20-30或30-40次)。在此类序列中，在大于25％、50％、75％、80％、90％或95％的Gly-Xaa-Yaa出现中，或者在每个Gly-Xaa-Yaa出现中，Xaa和Yaa常常分别是脯氨酸和羟脯氨酸。在一些情况下，胶原结构域包含重复10至40次，例如10-20、20-30或30-40次的序列Gly-Xaa-Pro。胶原寡聚肽可以包含以下氨基酸序列：VTAFSNMDDMLQKAHL-VIEGTFIYLRDSTEFFIRVRDGW-KKLQLGE-LIPIP-ADSPP-PP-AL-SSNP(SEQ ID NO:79)。
在一些情况下，合适的框架多肽(例如，具有Ig Fc多聚序列的那些)将是半衰期延长的多肽。因此，在一些情况下，与具有带有不同氨基酸序列的框架多肽的对照MAPP相比，合适的框架多肽增加了MAPP的体内半衰期(例如，血清半衰期)。例如，在一些情况下，与具有带有不同氨基酸序列的框架多肽的对照MAPP相比，框架多肽增加了MAPP的体内半衰期(例如，哺乳动物诸如人中的血清半衰期)。半衰期可以延长至少约10％、至少约15％、至少约25％、至少约50％、至少约100％、至少约2倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约25倍、至少约50倍、至少约100倍或大于100倍。例如，在一些情况下，与缺乏Ig Fc多肽序列的对照MAPP双链体相比，Ig Fc多肽序列(例如，用作多聚化序列以形成包含框架多肽和二聚化多肽的MAPP异二聚体的双链体)增加MAPP双链体的稳定性和/或体内半衰期(例如，血清半衰期)至少约10％、至少约15％、至少约25％、至少约50％、至少约100％、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约5倍、至少约10倍、至少约25倍、至少约50倍、至少约100倍或超过100倍。
3.呈递序列和呈递复合物
如下文更详细讨论的，II类MHC多肽包含两种类型的多肽链：α链和β链。更具体地，MHC II类α链多肽包含α1和α2结构域，并且β链多肽包含β1和β2结构域。呈递序列和呈递复合物包含足以结合TCR并将表位呈递至TCR的MHC II类多肽。呈递序列和呈递复合物还可以包含另外的蛋白质(肽)元件，包括一个或多个独立选择的MOD和/或一个或多个独立选择的接头(例如，置于不同结构域之间的接头)。如本文所讨论的，除非另有说明，否则呈递序列和呈递复合物均不包含足以将MAPP分子(例如，超过50％的MAPP分子)锚定在哺乳动物细胞膜(例如，CHO细胞膜)中(当在其中表达时)中的MHC跨膜结构域(或细胞内结构域，诸如胞质尾区)。
从概念上讲，每个呈递序列和呈递复合物可以被认为是完全能够结合和呈递肽表位的“可溶性MHC”。除非另有说明，否则在呈递序列时，所有MHCα1、α2、β1和β2结构域序列以及表位多肽存在于单个多肽链中(通过翻译产生的氨基酸的单个线性序列)。参见例如图25和26。
当MHCα1、α2、β1和β2结构域序列被分成两条或更多条多肽链时，“可溶性MHC”被称为呈递复合物。呈递复合物具有一条为框架肽或二聚化肽的一部分的链，称为“呈递复合物第一序列”。呈递复合物的第二条链被称为“呈递复合物第二序列”。呈递复合物第二序列可以与存在于呈递复合物第一序列中的MHC组分非共价缔合(通过如图27至29中的MHC-II类α1、α2、β1和β2结构域组分之间的结合相互作用)，另外，呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列之间存在一个或多个二硫键。或者，在呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列之间的一个或多个二硫键存在或不存在下，呈递复合物第二序列可以通过MHC-II类α1、α2、β1和β2结构域组分之间的结合相互作用并通过结合序列(例如，诸如图30、31结构A至E和图32中的种间结合序列)与存在于呈递复合物第一序列中的MHC组分非共价缔合。
在一些情况下，MAPP的一个或多个呈递序列包含将感兴趣的表位结合和呈递至TCR所需的所有II类组分；例如，α1、α2、β1和β2结构域和单个多肽序列中的表位。在包含呈递复合物的MAPP中，肽表位可以是呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的一部分。
如上所述，呈递序列和呈递复合物通常将包含作为MAPP多肽链的一部分的肽表位。然而，可以制备包含MHC组分但不包含作为MAPP多肽链的一部分的肽表位的MAPP。在此类实施方案中，非共价装载到MHC口袋中的表位可以是单独的肽(例如，磷酸肽、脂肽、糖基化肽等)或非肽表位，并且可以从MAPP解离。
4.MHC II类多肽
如上所述，含有表位的MAPP包含各种物种的MHC II类多肽，包括人MHC多肽(HLA多肽)、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠等)MHC多肽以及其他哺乳动物物种(例如，兔类动物、非人灵长类动物、犬科动物、猫科动物、有蹄类动物(例如，马科动物、牛科动物、绵羊科动物、山羊科动物等))的MHC多肽等。
出于本公开的目的，术语“MHC多肽”意在包括II类MHC多肽，包括α链和β链或其部分。更具体地，MHC II类多肽包括II类MHCα链的α1和α2结构域以及II类MHCβ链的β1和β2结构域，它们代表了表位呈递所需的全部或大部分细胞外II类蛋白。在一个实施方案中，MAPP中的α和βII类MHC多肽序列都是人来源的。
MAPP及其更高阶复合物(例如，双链体MAPP)旨在在生理条件下可溶于水性介质(例如，以治疗水平可溶于人血浆)。除非另外明确说明，否则如上所述，本文描述的MAPP不旨在包含足以将MAPP分子(例如，超过50％的MAPP分子)或其肽锚定在表达MAPP的细胞(例如，真核细胞，诸如哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢细胞或“CHO”细胞)的膜中的MAPP分子)的膜中的膜锚定结构域(诸如MHC II类α和β链的跨膜区)或其部分。类似地，除非另有明确说明，否则本文所述的MAPP不包含可能存在于一些天然存在的MHC II类蛋白中的前导和/或细胞内部分(例如，胞质尾区)。
a.T1D及其风险相关等位基因和单倍型
MHC II类的某些等位基因和单倍型与疾病相关，例如，与发展T1D的风险增加相关。参见例如Erlich等人(2008)Diabetes 57:1084；Gough和Simmonds(2007)Curr.Genomics 8:453；Mitchell等人(2007)Robbins Basic Pathology Philadelphia:Saunders,第8版；Margaritte-Jeannin等人(2004)Tissue Antigens 63:562；以及Kurko等人(2013)Clin.Rev.Allergy Immunol.45:170。
(i)1型糖尿病(T1D)中的MHC II类多肽
显示与T1D的相关性增加的等位基因/同种型代表了用于并入到涉及T1D治疗的MAPP中的MHC IIα1、α2、β1和β2多肽序列的合适来源。T1D与属于HLA-DR3和HLA-DR4单倍型/血清型的等位基因相关，其中与HLA-DQ8(例如，HLA-DQB1*03:02)和HLA-DQ2血清型的等位基因相关的风险最强。一些高风险和中等风险单倍型及其与各种DR血清型的相关性在表2中示出，所述表2采用自Kantárová和Buc,Physiol.Res.56:255-266(2007)。
DRB1基因的血清型定义的DR3和DR4蛋白同种型/单倍型与表达此类等位基因的个体发展T1D的风险增加相关。DR3血清型包括编码DRB1*03:01、*03:02、*03:03和*03:04蛋白的等位基因，其中HLA-DRB1*0301等位基因通常与T1D易感性相关。DR4血清型包括编码DRB1*04:01、*04:02、*04:03、*04:04、*04:05、*04:06、*04:07、*04:08、*04:09、*04:10、*04:11、*04:12和*04:13蛋白质的等位基因。某些HLA-DR4(例如，HLA-DRB1*0401和HLA-DRB1*0405)使个体易患T1D，而HLA-DRB1*04:03等位基因/同种型可以提供保护。DRB1*16:01还显示，相对于健康对照，糖尿病儿童的频率增加(Deja等人,Mediators ofInflammation 2006:1-7(2006))。显示与T1D的相关性增加的等位基因/同种型代表了MHCIIα1、α2、β1和β2多肽序列的合适来源。
上述与T1D风险增加相关的等位基因代表可以从中获取存在于MAPP中的α1、α2、β1和/或β2多肽序列的合适候选物。
b.MHC II类α和β多肽
如上所述，MAPP包含II类MHC多肽。天然存在的II类MHC多肽包含α链和β链(例如，HLAα链和β链)。同时MHC II类多肽包括MHC II类DPα和β多肽、DMα和β多肽、DOα和β多肽、DQα和β多肽以及DRα和β多肽。用于治疗T1D的主要感兴趣的多肽是DQα和β多肽以及DRα和β多肽。如本文所用，术语“II类MHC多肽”是指II类MHCα链多肽、II类MHCβ链多肽或仅II类MHCα和/或β链多肽的一部分或前述的组合。例如，如本文所用，术语“II类MHC多肽”可以是包括以下的多肽：i)仅II类MHCα链的α1结构域；ii)仅II类MHCα链的α2结构域；iii)仅II类MHCα链的α1结构域和α2结构域；iv)仅II类MHCβ链的β1结构域；v)仅II类MHCβ链的β2结构域；vi)仅II类MHCβ链的β1结构域和β2结构域；vii)II类MHCα链的α1结构域、II类MHCβ链的β1结构域和II类MHC的β2结构域；等等。
人MHC或HLA基因座本质上具有高度多态性，因此如本文所用，术语“II类MHC多肽”包括任何已知的II类MHC多肽的等位基因形式。参见例如由安东尼诺南研究所(AnthonyNolan Research Institute)运营的HLA命名网站，其可以在万维网hla.alleles.org/nomenclature/index.html上获取，这表明存在许多DRA等位基因、DRB1等位基因、DRB3等位基因、DRB4等位基因、DRB5等位基因、DRB6等位基因、DRB7等位基因、DRB9等位基因、DQA1等位基因、DQB1等位基因、DPA1、DPB1等位基因、DMA等位基因、DMB等位基因、DOA等位基因和DOB等位基因。
在一些情况下，MAPP包含II类MHCα链，不具有可能存在于天然存在的II类MHCα链中的前导、跨膜和细胞内部分(例如，胞质尾区)。因此，在一些情况下，MAPP仅包含II类MHCα链的α1和α2部分；并且不包含可能存在于天然存在的II类MHCα链中的前导、跨膜和细胞内部分(例如，胞质尾区)。
在一些情况下，MAPP包含II类MHCβ链，不具有可能存在于天然存在的II类MHCβ链中的前导、跨膜和细胞内部分(例如，胞质尾区)。因此，在一些情况下，MAPP仅包含II类MHCβ链的β1和β2部分；并且不包括可能存在于天然存在的II类MHCβ链中的前导、跨膜和细胞内部分(例如，胞质尾区)。
(i)MHC II类α链
MHC II类α链包含α1结构域和α2结构域。在一些情况下，存在于抗原呈递细胞中的α1和α2结构域来自同一MHC II类α链多肽。在一些情况下，存在于抗原呈递细胞中的α1和α2结构域来自两种不同的MHC II类α链多肽。
适用于包含在MAPP的呈递序列或呈递复合物中的MHC II类α链可能缺乏信号肽。适用于包含在MAPP中的MHC II类α链可以具有约60个氨基酸至约200个氨基酸的长度；例如，适用于包含在MAPP中的MHC II类α链可以具有约60个氨基酸至约80个氨基酸、80个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约140个氨基酸、约140个氨基酸至约170个氨基酸、约170个氨基酸至约200个氨基酸的长度。适用于包含在MAPP中的MHC II类α1结构域可以具有约30个氨基酸至约95个氨基酸的长度；例如，适用于包含在本公开的MAPP中的MHC II类α1结构域可以具有约30个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸或约70个氨基酸至约95个氨基酸的长度。在一个实施方案中，MAPP的MHC II类α1结构域为约70个氨基酸至约95个氨基酸。适用于包含在MAPP中的MHC II类α2结构域可以具有约30个氨基酸至约95个氨基酸的长度；例如，适用于包含在MAPP中的MHC II类α2结构域可以具有约30个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、或约70个氨基酸至约95个氨基酸的长度。在一个实施方案中，MAPP的MHC II类α2结构域为约70个氨基酸至约95个氨基酸。
(a)DRA多肽
适合包含在MAPP中的MHC II类DRA多肽可以与图4中描绘的DRA氨基酸序列或其天然存在的等位基因变体的氨基酸26至氨基酸203的氨基酸序列的至少150个、至少160个或至少170个连续氨基酸(α1和α2结构域区)具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。在一些情况下，DRA多肽具有约178个氨基酸(例如，175、176、177、178、179或180个氨基酸)的长度。
如本文所用，术语“DRA多肽”包括等位基因变体，例如天然存在的等位基因变体。因此，在一些情况下，合适的DRA多肽包含DRA*01:02:01(参见图4)的氨基酸26-203或其等位基因变体。在一些情况下，等位基因变体是DRA*01:01多肽(例如，来自DRA*01:01:01:01等位基因)，其与DRA*01:02的不同之处在于242位置处的亮氨酸被缬氨酸代替(参见图4)。
适合包含在MAPP多肽中的DRA可以与图4中描绘的DRA*01:02序列的氨基酸26至氨基酸216的序列的至少160个、至少170个或至少180个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。“DRA多肽”包括等位基因变体，例如天然存在的等位基因变体。
因此，在一些情况下，合适的DRA多肽包含以下氨基酸序列：IKEEH VIIQAEFYLNPDQSGEFMFD FDGDEIFHVD MAKKETVWRL EEFGRFASFE AQGALANIAV DKANLEIMTK RSNYTPITNVPPEVTVLTNS PVELREPNVL ICFIDKFTPP VVNVTWLRNG KPVTTGVSET VFLPREDHLF RKFHYLPFLPSTEDVYDCRV EHWGLDEPLL KHW(SEQ ID NO:80，DRA*01:02的氨基酸26-203，参见图4)，或其等位基因变体。在一些情况下，等位基因变体是DRA*01:01等位基因变体，其与DRA*01:02多肽的不同之处在于图4中序列的242位置处的亮氨酸被缬氨酸代替。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRA多肽相对于野生型DRA多肽包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)(例如，用于形成稳定MAPP的二硫键)。
在一些情况下，MAPP包含变体DRA多肽，其包含非天然存在的Cys残基(例如，用于形成稳定MAPP的二硫键)。例如，在一些情况下，MAPP包含变体DRA多肽，其包含选自E3C、E4C、F12C、G28C、D29C、I72C、K75C、T80C、P81C、I82C、T93C、N94C和S95C的至少一个氨基酸取代(参见例如图4SEQ ID NO:17)。
适合包含在MAPP多肽中的DRAα1结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：VIIQAEFYLN PDQSGEFMFD FDGDEIFHVD MAKKETVWRLEEFGRFASFE AQGALANIAV DKANLEIMTK RSNYTPITN(SEQ ID NO:81)；并且可以具有约84个氨基酸(例如，80、81、82、83、84、85或86个氨基酸)的长度。
适合包含在MAPP多肽中的DRAα2结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：V PPEVTVLTNSPVELREPNVL ICFIDKFTPPVVNVTWLRNG KPVTTGVSET VFLPREDHLF RKFHYLPFLP STEDVYDCRV EHWGLDEPLL KHW(SEQ IDNO:82)；并且可以具有约94个氨基酸(例如，90、91、92、93、94、95、96、97或98个氨基酸)的长度。
(b)DQA多肽
适合包含在MAPP中的MHC II类αDQA多肽可以与DQA1*0101、DQA1*0301或DQA1*0401的α1、α2、β1和/或β2结构域具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。在一些情况下，DQA多肽具有约178个氨基酸(例如，175、176、177、178、179或180个氨基酸)的长度。这些HLA多肽的序列可以在例如由安东尼诺南研究运营的万维网hla.alleles.org/nomenclature/index.html和由美国国家医学图书馆运行的www.ncbi.nlm.nih.gov(国家生物技术信息中心或“NCBI”)上获取。
(ii)MHC II类β链
MHC II类β链包含β1结构域和β2结构域。在一些情况下，存在于抗原呈递细胞中的β1和β2结构域来自同一MHC II类β链多肽。在一些情况下，存在于抗原呈递细胞中的β1和β2结构域来自两种不同的MHC II类β链多肽。
适用于包含在MAPP(例如，更高阶MAPP构建体诸如双链体MAPP)中的MHC II类β链缺乏信号肽。适用于包含在MAPP中的MHC II类β链可以具有约60个氨基酸至约210个氨基酸的长度；例如，适用于包含在MAPP中的MHC II类β链可以具有约60个氨基酸至约90个氨基酸、约90个氨基酸至约120个氨基酸、约120个氨基酸至约150个氨基酸、约150个氨基酸至约180个氨基酸、约180个氨基酸至210个氨基酸的长度。适用于包含在MAPP中的MHC II类β1结构域可以具有约30个氨基酸至约105个氨基酸的长度；例如，适用于包含在MAPP中的MHC II类β1结构域可以具有约30个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、约70个氨基酸至约90个氨基酸、约90个氨基酸至约105鹅氨基酸的长度。适用于包含在MAPP中的MHC II类β2结构域可以具有约30个氨基酸至约105个氨基酸的长度；例如，适用于包含在MAPP中的MHC II类β2结构域可以具有约30个氨基酸至约50个氨基酸、约50个氨基酸至约70个氨基酸、约70个氨基酸至约90个氨基酸、约90个氨基酸至约105鹅氨基酸的长度。
适用于包含在MAPP中的MHC II类β链多肽相对于野生型MHC II类β链多肽可以包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)(例如，用于形成稳定MAPP的二硫键)。例如，在一些情况下，MHC II类β链多肽是变体DRB1 MHC II类多肽，其包含选自由以下组成的组的氨基酸取代：P5C、F7C、Q10C、N19C、G20C、H33C、G151C、D152C和W153C。在一些情况下，MHC II类β链多肽是变体DRB1多肽，其包含与缺乏信号肽的以下成熟DRB1氨基酸序列具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：GDTRPRFLEQVKHECHFFNGTERVRFLDRYFYHQEEYVRFDSDVGEYRAVTELGRPDAEYWNS
QKDLLEQKRAAVDTYCRHNYGVGESFTVQRRVYPEVTVYPAKTQPLQHHNLLVCSVNGFYPA
SIEVRWFRNGQEEKTGVVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSLTSPLTVEWRARSESAQSKM(SEQ ID NO:83)，并且包含选自由以下组成的组的一个或多个(例如，两个或更多个)氨基酸处的半胱氨酸取代：P5C、F7C、Q10C、N19C、G20C、H33C、G151C、D152C和W153C。在一些情况下，MHC II类β链多肽是成熟DRB3多肽、成熟DRB4多肽或成熟DRB5多肽(缺乏它们的信号序列)的变体，其在位置5、7、10、19、20、33、151、152和153中的一个或多个(例如，两个或更多)处包含半胱氨酸取代(例如，P5C、F7C、Q10C、N19C、G20C、N33C、G151C、D152C和/或W153C取代)。
(a)DRB多肽
(1)DRB1多肽
在一些情况下，适合包含在MAPP中的MHC II类β链多肽是DRB1多肽。在一个实施方案中，DRB1多肽可以与图5中描绘的任何DRB1氨基酸序列(包括天然存在的等位基因变体)的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。图5显示了DRB1前体蛋白，其中氨基酸1-29为信号序列(加下划线)，30-124为β1区(加粗)，125-227为β2区(加粗且加下划线)，并且228-250为跨膜区。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB1多肽相对于野生型DRB1多肽包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)(例如，用于形成稳定MAPP的二硫键)。
适用于并入到MAPP中的合适MHC II类β链多肽可以是DRB1多肽，其中所述DRB1多肽与图5中提供的DRB1序列(包括以下DRB1多肽中的一个)的氨基酸30至氨基酸227(β1和β2结构域区)的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性：
(i)图5中的DRB1-1(DRB1*01:01)β链氨基酸序列Swiss-Prot/UniProt参考(“sp”)P04229.2；
(ii)图5中的DRB1-3(DRB1*03:01)β链氨基酸序列sp P01912.2；
(iii)图5中的DRB1-4(DRB1*04:01)β链氨基酸序列sp P13760.1；
(iv)图5中的DRB1-7(DRB1*07:01)β链氨基酸序列sp P13761.1；
(v)图5中的DRB1-8(DRB1*08:01)β链氨基酸序列sp Q30134.2；
(vi)图5中的DRB1-9(DRB1*09:01)β链氨基酸序列sp Q9TQE0.1；
(vii)图5中的DRB1-10(DRB1*10:01)β链氨基酸序列sp Q30167.2；
(viii)图5中的DRB1-11(DRB1*11:01)β链氨基酸序列sp P20039.1；
(ix)图5中的DRB1-12(DRB1*12:01)β链氨基酸序列sp Q95IE3.1；
(x)图5中的DRB1-13(DRB1*13:01)β链氨基酸序列sp Q5Y7A7.1；
(xi)图5中的DRB1-14(DRB1*14:01)β链氨基酸序列sp Q9GIY3.1；
(xii)图5中的DRB1-15(DRB1*15:01)β链氨基酸序列sp P01911；和
(xiii)图5中的DRB1-16(DRB1*16:01)β链氨基酸序列sp Q29974.1。
在一些情况下，DRB1β链多肽具有约198个氨基酸，包括例如，195、196、197、198、199、200、201或202个氨基酸的长度。
适合并入到MAPP中的“DRB1多肽”包括等位基因变体，例如天然存在的等位基因变体。因此，在一些情况下，合适的DRB1多肽包含图5中提供的DRB1*04:01(DRB1-4)的氨基酸31-227(SEQ ID NO:24)或其等位基因变体。
另一种合适的DRB1多肽可以包含与以下DRB1*04:01氨基酸序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的序列：
GDTRPRFLEQVKHECHFFNGTERVRFLDRYFYHQEEYVRFDSDVGEYRAVTELGRPDAEYWNSQKDLLEQKRAAVDTYCRHNYGVGESFTVQRRVYPEVTVYPAKTQPLQHHNLLVCSVNGFYPASIEVRWFRNGQEEKTGVVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSLTSPLTVEWRARSESAQSKM(SEQ ID NO:84)，其可以携带一个或多个半胱氨酸取代。在一个实施方案中，半胱氨酸取代是P5C取代。在一个实施方案中，半胱氨酸取代是G151C取代。在一个实施方案中，半胱氨酸取代是W153C取代。
合适的DRB1β1结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：DTRPRFLEQVKHECHFFNGTERVRFLDRYFYHQEEYVRFDSDVGEYRAVTELGRPDAEYWNSQKDLLEQKRAAVDTYCRHNYGVGESFTVQRRV(SEQ ID NO:85)；并且可以具有约95个氨基酸，包括例如，92、93、94、95、96、97或98个氨基酸的长度。
合适的DRB1β1结构域可以包含以下氨基酸序列： 其中P5被Cys取代(以加粗且斜体文本示出)。
合适的DRB1β2结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：YPEVTVYPAKTQPLQHHNLLVCSVNGFYPGSIEVRWFRNGQEEKTGVVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSLTSPLTVEWRARSESAQSK(SEQ ID NO:87)；并且可以具有约103个氨基酸，包括例如，100、101、102、103、104、105或106个氨基酸的长度。
合适的DRB1β2结构域可以包含以下氨基酸序列： 其中W153被Cys取代(以加粗且斜体文本示出)。
(2)DRB3多肽
在一些情况下，适合包含在MAPP中的MHC II类β链多肽是DRB3多肽。在一个实施方案中，DRB3多肽可以与图6中描绘的任何DRB3氨基酸序列的氨基酸30-227具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，图6显示了DRB3前体蛋白，其中氨基酸1-29为信号肽(加下划线)，30-124形成β1区(以加粗显示)，125-227形成β2区，并且228-250为跨膜区。适用于并入到MAPP中的DRB3β链多肽可以与以下DRB3多肽中的一个的氨基酸30-227(β1和β2结构域区)具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性：
(i)图6中的DRB1-3(DRB3*01:01)β链氨基酸序列GenBank NP_072049.1；
(ii)图6中GenBank登录号EAX03632.1中的DRB1-3β链氨基酸序列；
(iii)图6中的DRB1-3(DRB3*02:01)β链氨基酸序列GenBank CAA23781.1；和
(iv)图6中的DRB1-3(DRB3*03:01)β链氨基酸序列GenBank AAN15205.1。
适用于包含在MAPP中的DRB3多肽相对于野生型DRB3多肽可以包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)(例如，用于形成稳定MAPP的二硫键)。
如本文所用，术语“DRB3多肽”包括等位基因变体，例如天然存在的等位基因变体。因此，在一些情况下，合适的DRB3多肽包含图6中提供的DRB3*01:01(SEQ ID NO:55)的氨基酸30至227或其等位基因变体。因此，在一些情况下，合适的DRB3多肽包含与以下序列的至少170个、至少180个、或至少190个连续氨基酸具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列：DTRPRFLELR KSECHFFNGT ERVRYLDRYFHNQEEFLRFD SDVGEYRAVT ELGRPVAESW NSQKDLLEQK RGRVDNYCRH NYGVGESFTV QRRVHPQVTVYPAKTQPLQH HNLLVCSVSG FYPGSIEVRW FRNGQEEKAG VVSTGLIQNG DWTFQTLVML ETVPRSGEVYTCQVEHPSVT SALTVEWRAR SESAQSK(SEQ ID NO:89)，或其等位基因变体。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB3多肽相对于野生型DRB3多肽包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)。因此，例如，在一些情况下，MHC II类β链多肽是变体DRB3MHC II类多肽，其包含选自由以下组成的组的氨基酸处的非天然存在的Cys：成熟DRB3多肽(缺乏图6中描绘的N端信号肽MVCLKLPGGSSLAALTVTLMVLSSRLAFA(SEQ ID NO:90))的P5C、F7C、L10C、N19C、G20C、N33C、G151C、D152C和W153C。
合适的DRB3β1结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：DTRPRFLELR KSECHFFNGT ERVRYLDRYF HNQEEFLRFD SDVGEYRAVTELGRPVAESW NSQKDLLEQK RGRVDNYCRH NYGVGESFTV QRRV(SEQ ID NO:91)；并且可以具有约95个氨基酸(例如，93、94、95、96、97或98个氨基酸)的长度。合适的DRB3β1结构域可以包含以下氨基酸序列：DTRPRFLELR KSECHFFNGT ERVRYLDRYF HNQEEFLRFD SDVGEYRAVTELGRPVAESW NSQKDLLEQK RGRVDNYCRH NYGVGESFTV QRRV(SEQ ID NO:91)，或天然存在的等位基因变体。合适的DRB3β2结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：HPQVTV YPAKTQPLQH HNLLVCSVSG FYPGSIEVRW FRNGQEEKAGVVSTGLIQNG DWTFQTLVML ETVPRSGEVY TCQVEHPSVT SALTVEWRAR SESAQSK(SEQ ID NO:92)；并且可以具有约103个氨基酸(例如，100、101、102、103、104或105个氨基酸)的长度。合适的DRB3β2结构域可以包含以下氨基酸序列：HPQVTV YPAKTQPLQH HNLLVCSVSG FYPGSIEVRWFRNGQEEKAG VVSTGLIQNG DWTFQTLVML ETVPRSGEVY TCQVEHPSVT SALTVEWRAR SESAQSK(SEQID NO:92)，或其天然存在的等位基因变体。
(3)DRB4多肽
在一些情况下，适合包含在MAPP中的MHC II类β链多肽是DRB4多肽。DRB4多肽可以与图7中描绘的DRB4氨基酸序列的氨基酸30-227(β1和β2结构域区)具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。在一些情况下，DRB4多肽具有约198个氨基酸，包括例如，195、196、197、198、199、200、201或202个氨基酸的长度。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB4多肽相对于野生型DRB4多肽包含氨基酸取代，其中氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)。
如本文所用，术语“DRB4多肽”包括等位基因变体，例如天然存在的等位基因变体。因此，在一些情况下，合适的DRB4多肽包含图7中提供的DRB4*01:03(SEQ ID NO:60)的氨基酸30至227或其等位基因变体。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB4多肽相对于野生型DRB4多肽包含氨基酸取代，其中氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)。因此，例如，在一些情况下，MHC II类β链多肽是包含非天然存在的Cys残基的变体DRB4MHC II类多肽；例如，其中变体DRB4 MHC II类多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸取代：成熟DRB4多肽(缺乏图7中描绘的N端信号肽MVCLKLPGGSCMAALTVTL(SEQ ID NO:93))的P15C、F17C、Q20C、N29C、G30C、N43C、G161C、D162C和W163C。
合适的DRB4β1结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：t vlssplalag dtqprfleqa kcechflngt ervwnliryi ynqeeyarynsdlgeyqavt elgrpdaeyw nsqkdllerr raevdtycry nygvvesftv qrrv(SEQ ID NO:94)；并且可以具有约95个氨基酸(例如，93、94、95、96、97或98个氨基酸)的长度。
合适的DRB4β2结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：QPKVTV YPSKTQPLQH HNLLVCSVNG FYPGSIEVRW FRNGQEEKAGVVSTGLIQNG DWTFQTLVML ETVPRSGEVY TCQVEHPSMM SPLTVQWSAR SESAQSK(SEQ ID NO:95)；并且可以具有约103个氨基酸(例如，100、101、102、103、104或105个氨基酸)的长度。
(4)DRB5多肽
在一些情况下，适合包含在MAPP中的MHC II类β链多肽是DRB5多肽。DRB5多肽可以与图8中描绘的DRB5氨基酸序列的氨基酸30-227(β1和β2结构域区)具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。在一些情况下，DRB5多肽具有约198个氨基酸(包括例如，195、196、197、198、199、200、201或202个氨基酸)的长度。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB5多肽相对于野生型DRB5多肽包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)(例如，用于形成稳定MAPP的二硫键)。
如本文所用，术语“DRB5多肽”包括等位基因变体，例如天然存在的等位基因变体。因此，在一些情况下，合适的DRB4多肽包含图8中提供的DRB5*01:01(SEQ ID NO:61)的氨基酸30至227或其等位基因变体。
合适的DRB5β1结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：m vlssplalag dtrprflqqd kyechffngt ervrflhrdi ynqeedlrfdsdvgeyravt elgrpdaeyw nsqkdfledr raavdtycrh nygvgesftv QRRV(SEQ ID NO:96)；并且可以具有约95个氨基酸(例如，93、94、95、96、97或98个氨基酸)的长度。
合适的DRB5β2结构域，包括其天然存在的等位基因变体，可以包含与以下氨基酸序列具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：EPKVTV YPARTQTLQH HNLLVCSVNG FYPGSIEVRW FRNSQEEKAGVVSTGLIQNG DWTFQTLVML ETVPRSGEVY TCQVEHPSVT SPLTVEWRAQ SESAQS(SEQ ID NO:97)；并且可以具有约103个氨基酸(例如，100、101、102、103、104或105个氨基酸)的长度。
(b)DQB多肽
适合包含在MAPP中的MHC II类αDQB多肽可以与DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0402或DQB1*0501的α1、α2、β1和/或β2结构域具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性。在一些情况下，DQA多肽具有约178个氨基酸(例如，175、176、177、178、179或180个氨基酸)的长度。这些HLA多肽的序列可以在例如由安东尼诺南研究运营的万维网hla.alleles.org/nomenclature/index.html和由美国国家医学图书馆运行的www.ncbi.nlm.nih.gov(国家生物技术信息中心或“NCBI”)上获取。
c.个体疾病风险相关等位基因
(i)DRB1
(a)DRB1*01:01
MAPP可以包含DRB1*01:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*01:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*01:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*01:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*01:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*01:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(b)DRB1*01:02
MAPP可以包含DRB1*01:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*01:02氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*01:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*01:02氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*01:02多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*01:02氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(c)DRB1*01:03
MAPP可以包含DRB1*01:03多肽，其包含与图5中提供的DRB1*01:03氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*01:03多肽，其包含与图5中提供的DRB1*01:03氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*01:03多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*01:03氨基酸的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(d)DRB1*03:01
DRB1*0301(图5中的“DRB1*03:01”)与发展T1D的风险增加相关。因此，MAPP可以包含DRB1*03:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*03:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*03:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*03:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*03:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*03:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(e)DRB1*03:02
MAPP可以包含DRB1*03:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*03:02氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*03:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*03:02氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*03:02多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*03:02氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(f)DRB1*03:04：
MAPP可以包含DRB1*03:04多肽，其包含与图5中提供的DRB1*03:04氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*03:04多肽，其包含与图5中提供的DRB1*03:04氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*03:04多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*03:04氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(g)DRB1*04:01
MAPP可以包含DRB1*04:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*04:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*04:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*04:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*04:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*04:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(h)DRB1*04:02
MAPP可以包含DRB1*04:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*04:02氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*04:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*04:02氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*04:02多肽，其包含与图5中提供的DRB1*04:02氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(i)DRB1*08:01
MAPP可以包含DRB1*08:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*08:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*08:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*08:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*08:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*08:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(j)DRB1*09:01
MAPP可以包含DRB1*09:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*09:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*09:01多肽，其包含与图5中提供的DRB1*09:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB1*09:01多肽，其包含与图5中描绘的DRB1*09:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(ii)DRB3
在一些情况下，MAPP包含DRB3等位基因的MHC II类β链多肽。
(a)DRB3*03:01
MAPP可以包含DRB3*03:01多肽，其包含与图6中提供的DRB3*03:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB3*03:01多肽，其包含与图6中提供的DRB3*03:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB3*03:01多肽，其包含与图6中描绘的DRB3*03:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(iii)DRB4
在一些情况下，MAPP包含DRB4等位基因的MHC II类β链多肽。
MAPP可以包含DRB4*01:01多肽，其包含与图7中提供的DRB4*01:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB4*01:01多肽，其包含与图7中提供的DRB4*01:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB3*03:01多肽，其包含与图7中提供的DRB4*01:01氨基酸序列的氨基酸125-227具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(iv)DRB5
MAPP可以包含DRB5等位基因的MHC II类β链多肽。在一些情况下，DRB5多肽具有约198个氨基酸(例如，195、196、197、198、199、200、201或202个氨基酸)的长度。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB5多肽相对于野生型DRB5多肽包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)。
(a)DRB5*01:01
MAPP可以包含DRB5*01:01多肽，其包含与图8中提供的DRB5*01:01氨基酸序列的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，适用于包含在MAPP中的DRB5多肽相对于野生型DRB5多肽包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代用Cys置换氨基酸(除Cys外)。因此，例如，在一些情况下，MHC II类β链多肽是包含非天然存在的Cys残基的变体DRB5 MHC II类多肽；例如，其中变体DRB5 MHC II类多肽包含选自由以下组成的组的氨基酸取代：成熟DRB5多肽(缺乏图8中描绘的N端信号肽MVCLKLPGGSYMAKLTVTL(SEQ ID NO:98))的P15C、F17C、Q20C、N29C、G30C、N43C、G161C、D162C和W163C，或其天然存在的等位基因变体。
MAPP可以包含DRB5*01:01β1结构域多肽，其包含与图8中提供的DRB5*01:01氨基酸序列的氨基酸30-124具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，MAPP包含DRB5*01:01多肽，其包含与图8中描绘的DRB5*01:01β2结构域氨基酸序列或其天然存在的等位基因变体的氨基酸30至氨基酸227的序列的至少170个、至少180个或至少190个连续氨基酸具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
d.二硫键以及呈递序列和呈递复合物
涉及MHC肽序列的二硫键可以包含在MAPP的呈递序列或呈递复合物中。二硫键可以增加稳定性(例如，热稳定性)和/或协助将肽表位定位在由其α和β链序列形成的MHC的结合口袋/槽中。二硫键可以在两个MHC肽序列之间(例如，位于α链中的半胱氨酸和位于β链序列中的半胱氨酸)。二硫键，特别是用于定位肽表位的二硫键可以在两个MHC肽序列之间，或者可替代地在MHC肽序列与附接肽表位和MHC序列的接头(例如，图15结构A和B中表位和β1结构域序列之间的接头)之间。用于稳定和/或定位表位的二硫键可以使用MHC序列内发现的半胱氨酸和/或利用分子生物学和蛋白质工程技术在一个或多个MHC序列中提供的半胱氨酸来得到。如上所述，α链可以包含例如成熟α链(缺乏其信号序列)的位置3、4、12、28、29、72、75、80、81、82、93、94或95处的半胱氨酸。对于DRA多肽，半胱氨酸取代包括例如E3C、E4C、F12C、G28C、D29C、I72C、K75C、T80C、P81C、I82C、T93C、N94C和S95C处的那些(参见图4)。β链可以包含例如在成熟β链(缺少其信号序列)的位置5、7、10、19、20、33、151、152或153处的半胱氨酸。对于DB1多肽，可能的半胱氨酸取代包括在位置P5C、F7C、Q10C(对于一些DRB1等位基因可能是Y10C或E10C)、N19C、G20C、H33C(对于一些DRB1等位基因可能是N33C)、G151C、D152C和W153C处的那些。
MHC复合物主体中α和β链序列之间的稳定二硫键(主体二硫键)包括表3中列出的α和β链位置之间的那些，此表还提供了HLA DRA*01:02和DRB*0401序列的特定半胱氨酸取代。MHC(例如，HLA)α和β链之间的稳定二硫键可以并入本文描述的任何MAPP结构中。例如，此类二硫键可以并入诸如图15中所示那些的呈递序列和图14的MAPP中所示的呈递序列中。稳定二硫键可以例如并入呈递序列中，所述呈递序列从N端到C端依次具有β1、β2、α1和α2结构域(参见例如图15结构B)。
表3
MHCα和β链序列之间有助于定位肽表位和/或稳定呈递序列或呈递复合物的结构的二硫键在MAPP的第一氨基酸和第二氨基酸之间形成。第一氨基酸是(i)靠近肽表位(或肽表位和接头)与MHC肽序列附接的点的氨基酸位置，或(ii)与MHC肽表位附接的接头中的氨基酸(半胱氨酸)，而第二氨基酸为MHC肽序列中别处的位置。举例来说，当呈递序列从N端到C端包含肽表位、β1结构域、β2结构域、α1结构域和α2结构域氨基酸序列时，β1结构域的前十个氨基酸(例如，氨基酸5-10)内被取代的半胱氨酸可以充当第一氨基酸，并且在与位于例如呈递序列的α1结构域或α2结构域中的第二半胱氨酸结合时提供锚定肽表位和/或稳定MAPP的点。MHCα和β链序列之间有助于定位肽表位和/或稳定呈递序列或呈递复合物的结构的二硫键的一些实例包括表4中列出的那些。
表4
因此，例如，当复合物的呈递序列在N端至C端方向包含与β1结构域结合的肽表位时，在β链的位置5-7之一处取代的半胱氨酸与α链的氨基酸位置80-82之一处的半胱氨酸之间的二硫键可以用于定位肽表位或稳定呈递序列的结构。举例来说，β链P5C取代和α链P81C取代之间的二硫键可以用于定位肽表位和/或稳定呈递序列。相同类型的二硫键适用于呈递复合物，并且呈递复合物和呈递序列都可以具有另外的二硫键(例如，如表3所示)以实现稳定。
当使用与肽表位附接的接头中的半胱氨酸残基来定位肽表位和/或稳定呈递序列或呈递复合物的结构时，半胱氨酸通常位于接近接头和肽表位相遇的点的氨基酸处。例如，当MAPP包含位于接头肽序列的N端侧上的表位时，半胱氨酸可以在接头和肽表位相遇的位置的约6个氨基酸内，也就是说在包含构建体表位-aa1-aa2、aa3-aa4-aa5-(接头/MAPP剩余部分)的MAPP的氨基酸1-5(aa1、aa2、aa3、aa4或aa5)之一处。当接头包含序列GGGGS(SEQ IDNO:99)的重复时，aa1至aa5是G1、G2、G3、G4和S5，并且接头取代可以称为例如“G2C”。这由SEQ ID NO:100举例说明，其具有四个GGGGS重复，其中接头(aa2)的位置2处的氨基酸是被半胱氨酸取代的甘氨酸：GCGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:100)。呈递序列或呈递复合物中适用于与MHC肽(例如，α链肽序列，诸如DRA肽)中的半胱氨酸形成二硫键的含有半胱氨酸的接头的实例在表5中列出，所述呈递序列或呈递复合物包含置于与MHCβ链(诸如DRB多肽(即，MAPP包含结构表位-aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-[接头的其余部分(如果存在的话)]-MHCβ1结构域，诸如DRBβ1结构域))结合的接头的N端侧上的表位。表5中还提供了DRA多肽中取代的半胱氨酸的位置(参见例如图4)，其将形成用于定位肽表位和/或稳定呈递序列或呈递复合物的结构的二硫键。
表5
具有包含表5中列举的表位-接头-DRB结构的呈递序列或呈递复合物的MAPP(参见例如：图14；图15结构A和B；图16结构A、D、F和H至I；图17；图18和图19A至F)可以具有例如二硫键，用于定位肽表位和/或稳定呈递序列或呈递复合物的结构。二硫键可以在接头氨基酸2(例如，G2C)和DRA氨基酸72处的半胱氨酸(例如，I72C)之间形成。二硫键可以在接头氨基酸2(例如，G2C)和DRA氨基酸72处的半胱氨酸(例如，K75C)之间形成。
当在呈递序列或呈递复合物的接头和MHC多肽之间形成二硫键时，呈递序列或呈递复合物可以具有另外的二硫键(例如，如表3所示)以实现稳定。
5.免疫调节多肽(“MOD”)
MAPP可以包含一个或多个免疫调节多肽或“MOD”。适用于包含在MAPP中的MOD包括但不限于：IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-21、IL-23、CD7、CD30L、CD40、CD70、CD80、(B7-1)、CD83、CD86(B7-2)、HVEM(CD270)、ILT3(免疫球蛋白样转录物3)、ILT4(免疫球蛋白样转录物4)、Fas配体(FasL)、ICAM(细胞间粘附分子)、ICOS-L(诱导型共刺激配体)、JAG1(CD339)、淋巴毒素β受体、3/TR6、OX40L(CD252)、PD-L1、PD-L2、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、4-1BBL及其任一者的片段，诸如能够通过其同源受体接合并进行信号传导的胞外域片段。一些适用于包含在MAPP中的MOD多肽及其“co-MOD”(“共免疫调节多肽”或同源共刺激受体)包括来自下表中列举的蛋白质对的具有T细胞调节活性的多肽序列：
示例性MOD和Co-MOD对
在一些情况下，MOD选自IL-2多肽、4-1BBL多肽、B7-1多肽、B7-2多肽、ICOS-L多肽、OX-40L多肽、CD80多肽、CD86多肽、PD-L1多肽、FasL多肽、TGFβ多肽和PD-L2多肽。在一些情况下，MAPP或双链体MAPP包含两个不同的MOD，诸如IL-2MOD或IL-2变体MOD多肽和CD80或CD86 MOD多肽。在另一种情况下，MAPP或双链体MAPP包含IL-2MOD或IL-2变体MOD多肽和PD-L1 MOD多肽。在一些情况下，MOD可以相同或不同，串联存在于MAPP或双链体MAPP中。当MOD串联存在时，它们的序列在单个多肽上彼此直接相邻，没有任何插入序列或者仅由接头多肽分隔(例如，没有MHC序列或表位序列介入)。MOD多肽可以包含全长MOD的全部或部分细胞外部分。因此，例如，在一些情况下，MOD可以排除通常在天然存在的MOD中发现的信号肽、跨膜结构域和细胞内结构域中的一种或多种。除非另有说明，否则存在于MAPP或双链体MAPP中的MOD不包含信号肽、细胞内结构域或跨膜结构域的足以将大量(例如，超过5％或10％)MAPP或双链体MAPP锚定在哺乳动物细胞膜中的部分。
在一些情况下，适用于包含在MAPP中的MOD包含天然存在的MOD的氨基酸序列的全部或一部分(例如，细胞外部分)。在其他情况下，适用于包含在MAPP中的MOD是与天然存在的MOD的氨基酸序列相比包含至少一个氨基酸取代的变体MOD。在一些情况下，变体MOD对co-MOD表现出的结合亲和力低于对应天然存在的MOD(例如，不包含存在于变体中的氨基酸取代的MOD)对co-MOD的亲和力。MOD多肽序列中改变亲和力的合适变型可以通过沿着肽的长度扫描(进行氨基酸取代，例如，丙氨酸取代或“丙氨酸扫描”或带电残基改变)并测试其亲和力来鉴定。一旦鉴定了改变亲和力的关键氨基酸位置，这些位置就可以进行垂直扫描，其中测试了除丙氨酸外的一个或多个氨基酸取代的效果。
a.MOD和亲和力降低的变体MOD
MOD可以包含野生型氨基酸序列，或者可以包含相对于野生型氨基酸序列的一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。免疫调节多肽可以仅包含全长免疫调节多肽的细胞外部分。或者，MOD可以包含天然存在的MOD多肽的氨基酸序列的全部或一部分(例如，细胞外部分)。
与天然存在的免疫调节多肽的氨基酸序列相比，变体MOD包含至少一个氨基酸取代、添加和/或缺失。如上所述，在一些情况下，变体MOD对co-MOD表现出的结合亲和力低于对应天然存在的MOD(例如，不包含存在于变体中的氨基酸取代的免疫调节多肽)对co-MOD的亲和力。
蛋白质(诸如PD-L1、CD80、CD86、4-1BBL和IL-2)的MOD多肽和变体，包括亲和力降低的变体，描述于公开的文献中，例如公开的PCT申请WO2020132138A1中，所述专利涉及PD-L1、CD80、CD86、4-1BBL、IL-2的免疫调节多肽和特定变体免疫调节多肽的公开内容以引用的方式明确并入本文，具体包括WO2020132138A1的段落[00260]-[00455]。
对共免疫调节结构域表现出降低的亲和力的合适免疫调节结构域可以与野生型免疫调节结构域具有1个氨基酸至20个氨基酸的差异。例如，在一些情况下，与对应参考(例如，野生型)MOD相比，存在于MAPP中的变体MOD可以包含单个氨基酸取代。与对应参考(例如，野生型)MOD相比，存在于MAPP中的变体MOD可以包含2个氨基酸取代。与对应参考(例如，野生型)MOD相比，存在于MAPP中的变体MOD可以包含3或4个氨基酸取代。与对应参考(例如，野生型)MOD相比，存在于MAPP中的变体MOD可以包含5或6个氨基酸取代。与对应参考(例如，野生型)MOD相比，存在于MAPP中的变体MOD可以包含7、8、9或10个氨基酸取代。与对应参考(例如，野生型)MOD相比，存在于MAPP中的变体MOD可以包含11-15或15-20个氨基酸取代。
如上所讨论的，与对应野生型MOD对同源co-MOD的亲和力相比，适用于包含在MAPP中的变体MOD可以对同源co-MOD表现出降低的亲和力。
遵循公开的PCT申请WO 2020/132138 A1中阐述的程序，可以使用纯化的MOD多肽序列和纯化的同源co-MOD多肽通过生物层干涉测量法(BLI)确定MOD多肽序列与其同源co-MOD多肽之间的结合亲和力。
b.掩蔽的TGF-βMOD
如上所述，本公开的MAPP包含至少一种被结合TGF-β多肽的多肽(“掩蔽多肽”)可逆地掩蔽的TGF-β多肽，它们一起形成掩蔽的TGF-βMOD。掩蔽多肽可以是例如用于可逆地掩蔽存在于MAPP中的TGF-β多肽的TGF-β受体多肽或抗体，其中TGF-β多肽能够以其他方式充当细胞TGF受体的激动剂。掩蔽的TGF-βMOD提供活性TGF-β多肽(例如，TGF-β信号传导途径激动剂)。TGF-β多肽和掩蔽多肽(例如，TGF-β受体片段)彼此相互作用以可逆地掩蔽TGF-β多肽，从而允许TGF-β多肽与其细胞受体相互作用。此外，掩蔽序列与可以清除TGF-β的细胞受体(诸如非信号传导TβRIII)竞争，从而允许TGF-βMOD(因此允许MAPP)将活性TGF-β激动剂有效地递送至靶细胞。虽然本文讨论的MAPP构建体允许将可逆掩蔽的TGF-β表位特异性呈递至靶T细胞，但它们还提供用于呈递一种或多种另外的MOD的位点。MAPP构建体包括一种或多种另外的MOD的能力因此允许TGF-β和另外的MOD的组合呈递以基本上表位特异性/选择性的方式指导靶T细胞的反应，以便提供靶T细胞的调节。因此，MAPP允许以表位选择性(例如，依赖性/特异性)方式递送一个或多个掩蔽的TGF-βMOD，所述方式允许(i)与靶T细胞(诸如对表位具有选择性的CD4+细胞)形成活性免疫突触，以及(ii)调节(例如，控制/调控)靶T细胞对表位的反应。一旦与T细胞的TCR结合，含有掩蔽的TGF-βMOD的MAPP对T细胞的影响将取决于任何另外的MOD是否作为MAPP的一部分存在，如果有，则存在所述另外的MOD。
此外，尽管本公开的MAPP可以包含一个或多个掩蔽的TGF-βMOD和一个或多个另外的MOD，诸如野生型或变体IL-2、PD-L1和/或4-1BBL MOD(如上所述)，但如果期望，本公开的MAPP可以仅包含一个或多个掩蔽的TGF-βMOD。即，一个或多个另外的MOD，诸如野生型或变体IL-2、PD-L1和/或4-1BBL MOD，不需要包含在本公开的MAPP中。本公开的含有掩蔽的TGF-βMOD的MAPP可以充当产生TGF-β驱动的T细胞反应的方式。例如，TGF-β本身可以抑制T细胞的效应细胞功能的发育，激活巨噬细胞，且/或在局部免疫和炎症作用消退后促进组织修复。
尽管掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽的TGF-β多肽，但是TGF-β多肽仍然可以充当TβR激动剂，因为TGF-β多肽-掩蔽复合物是可逆的并且在开放状态(其中TGF-β多肽可接触细胞受体)与闭合状态(其中掩蔽物结合GFT-β多肽)之间“呼吸”。因此，掩蔽多肽用于结合TGF-β多肽并防止其与例如普遍存在的非信号传导TβR3分子形成紧密复合物，所述TβR3分子可以清除原本游离的TGF-β。此外，因为TGF-β的活性形式是对TBR3具有更高亲和力的二聚体，因此可以将限制二聚化的取代(例如，用丝氨酸取代位置77处的半胱氨酸的C77S取代)并入TGF-β序列中，以便避免被此受体清除。
掩蔽序列的一种作用是降低TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3多肽对TβR的有效亲和力。同时，可以改变掩蔽多肽对TGF-β多肽的亲和力，使得其更容易与TGF-β多肽解离，使得TGF-β多肽更容易接触细胞TβR蛋白。即，当掩蔽多肽对TGF-β多肽的亲和力降低时，掩蔽的TGF-βMOD将花费更多时间处于开放状态。尽管处于开放状态的TGF-β多肽可用于与细胞受体结合，但由于TβRII蛋白通常是异聚体TβR1/TβR2信号传导复合物中与TGF-β相互作用的第一个肽，因此控制TGF-β多肽对TβRII的亲和力有效地控制了TGF-β进入活性信号传导复合物。在例如TGF-β2的Lys 25、Ile 92和/或Lys 94中的一个或多个、两个或更多个或全部三个(或TGF-β1、TGF-β3的对应位置)处并入取代降低了对TβRII多肽的亲和力。降低的亲和力允许靶细胞的TCR与MAPP MHC多肽和表位之间的相互作用有效控制结合并允许靶细胞特异性相互作用。
当TβRII多肽用作掩蔽多肽时，与细胞TβRI受体直接相互作用和脱靶信号传导的可能性可以通过适当修饰掩蔽序列来解决。当期望阻断/限制掩蔽的TGF-β多肽通过TβRI的信号传导和/或修饰(例如，降低)掩蔽TβRII多肽对TGF-β的亲和力时，可以在掩蔽TβRII多肽中并入N端缺失和/或氨基酸取代。可以进行的修饰包括N端氨基酸的缺失(例如，N端Δ14或Δ25缺失)和/或L27、F30、D32、S49、I50、T51、S52、I53、E55、V77、D118和/或E119的一个或多个处的取代。导致TβRI与TβRII相关性降低以及对TGF-β的亲和力降低的一些特异性TβRII修饰包括L27A、F30A、D32A、D32N、S49A、I50A、T51A、S52A、S52L、I53A、E55A、V77A、D118A、D118R、E119A和/或E119Q中的任何一种或多种。
在一些情况下，存在于MAPP中的TGF-β多肽是变体TGF-β多肽，包括与野生型TGF-β多肽相比，对至少一类TGF-β受体的亲和力较低或者对至少一类TGF-β受体具有选择性的变体TGF-β多肽。
虽然TGF-β1多肽、TGF-β2多肽或TGF-β3多肽可以作为掩蔽的TGF-β多肽的一部分并入MAPP中，但多种因素可能影响特定TGF-β多肽的选择、以及将采用的特定序列和氨基酸取代。例如，当在某些哺乳动物细胞系(例如，CHO细胞)中表达时，TGF-β1和TGF-β3多肽的氨基酸序列会受到“截取(clipping)”。此外，二聚化TGF-β(例如，TGF-β2)对TβR3(β聚糖受体)的亲和力高于对TβR2受体的亲和力，这可能导致生物活性掩蔽的蛋白与大量体内非信号传导TβR3分子的脱靶结合和损失。为了使与TβR3的高亲和力脱靶结合最小化，可能期望取代导致二聚体TGF-β分子的残基，所述分子通过二硫键连接。因此，半胱氨酸77(C77)可以被半胱氨酸以外的氨基酸(例如，形成C77S取代的丝氨酸)取代。
TGF-β多肽的氨基酸序列是本领域已知的。在一些情况下，存在于掩蔽的TGF-β多肽中的TGF-β多肽是TGF-β1多肽。在一些情况下，存在于掩蔽的TGF-β多肽中的TGF-β多肽是TGF-β2多肽。在一些情况下，存在于掩蔽的TGF-β多肽中的TGF-β多肽是TGF-β3多肽。
合适的TGF-β多肽可以具有约70个氨基酸至约125个氨基酸的长度；例如，合适的TGF-β多肽可以具有约70个氨基酸至约80个氨基酸、约80个氨基酸至约90个氨基酸；约90个氨基酸至约100个氨基酸；约100个氨基酸至约105个氨基酸、约105个氨基酸至约110个氨基酸、约110个氨基酸至约112个氨基酸、约113个氨基酸至约120个氨基酸或约120个氨基酸至约125个氨基酸的长度。合适的TGF-β多肽可以包含与人TGF-β1多肽、人TGF-β2多肽或人TGF-β3多肽的成熟形式的至少80个、至少90个、至少100个或至少110个连续氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(i)TGF-β1多肽
合适的TGF-β1多肽可以包含与以下TGF-β1氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或112个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列： (SEQ ID NO:101；长度为112个氨基酸)；其中TGF-β1多肽的长度为约112个氨基酸。TGF-β1前蛋白原在图24中提供为SEQ ID NO:194。氨基酸R25、C77、V92和R94加粗且斜体。参见图24。
在一些情况下，合适的TGF-β1多肽包含C77S取代。因此，在一些情况下，合适的TGF-β1多肽包含与以下TGF-β1氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或112个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列： 其中氨基酸77是Ser。位置25、77、92和94加粗且斜体。
(ii)TGF-β2多肽
合适的TGF-β2多肽可以包含与以下TGF-β2氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或112个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列： 其中TGF-β2多肽的长度为约112个氨基酸。TGF-β2前蛋白原在图//34中提供为SEQ ID NO:195。残基Lys 25、Cys 77、Ile 92和Lys 94加粗且斜体。
在一些情况下，合适的TGF-β2多肽包含C77S取代。因此，在一些情况下，合适的TGF-β2多肽包含与以下TGF-β2氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或112个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列： 其中氨基酸77被加粗且斜体的Ser取代。
(iii)TGF-β3多肽
合适的TGF-β3多肽可以包含与以下TGF-β3氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或112个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列： 其中TGF-β3多肽的长度为约112个氨基酸。TGF-β3同种型1前蛋白原在图34中提供为SEQ ID NO:196。位置25、77、92和94加粗且斜体。
在一些情况下，合适的TGF-β3多肽包含C77S取代。在一些情况下，合适的TGF-β3多肽包含与以下TGF-β3氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或112个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列： 其中氨基酸77是Ser。位置25、77、92和94加粗且斜体。
(iv)其他TGF-β多肽序列变异
除了改变TGF-β分子二聚化的序列变异(例如，半胱氨酸77取代，诸如C77S)以外，还可以将具有影响亲和力和其他性质的序列变异的TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3多肽并入到掩蔽的TGF-βMOD中。当对掩蔽多肽(例如，TβR多肽，诸如TβRII多肽)的亲和力降低的变体TGF-β存在于掩蔽的TGF-βMOD中时，那些组分更容易解离，使得TGF-β多肽更容易接触细胞TβR蛋白。因为TβRII蛋白通常是异聚TβR信号传导复合物中与TGF-β相互作用的第一个肽，因此与TβRII的相互作用有效控制TGF-β进入活性信号传导复合物。因此，控制TGF-β对TβRII的亲和力的变体可以有效控制掩蔽的TGF-βMOD进入活性信号传导复合物。
本公开包括并提供了掩蔽的TGF-βMOD，其包含掩蔽TβR(例如，TβRII)多肽序列和/或变体TGF-β多肽的变体，所述TGF-β多肽对彼此的亲和力发生改变(例如，降低)(相对于不含序列变异的其他方面相同的掩蔽的TGF-βMOD)。TGF-β多肽与TβR(例如，TβRII)多肽之间的亲和力可以使用如上所述的MOD及其co-MOD的(BLI)来确定。
(a)其他TGF-β2序列变体
本公开包括并提供了掩蔽的TGF-β2MOD，其包含掩蔽TβR(例如，TβRII)多肽序列和/或野生型或变体TGF-β2多肽；其中变体多肽对掩蔽TβR的亲和力降低(相对于不含序列变异的其他方面相同的野生型TGF-β多肽序列)。
本公开提供了一种掩蔽的TGF-βMOD，其包含掩蔽TβRII受体序列和与SEQ ID NO:103的至少100个连续氨基酸具有大于85％(例如，大于90％、95％、98％或99％)序列同一性的变体TGF-β2多肽，并且所述变体TGF-β2多肽包含降低变体TGF-β2多肽对TβRII受体序列的亲和力的取代。
在一些情况下，掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽TβRII多肽和变体TGF-β(例如，TGF-β2)多肽，其包含Lys 25、Ile 92和/或Lys 94中的一个或多个、两个或更多个或全部三个处的取代(参见SEQ ID NO:103的残基的位置，以及图25的TGF-β1和TGF-β3中的对应残基)。这些氨基酸残基已显示影响TGF-β2对TβRII多肽的亲和力(参见Crescenzo等人,J.Mol.Biol.355:47–62(2006))。MAPP任选地包含一个或多个独立选择的MOD，诸如IL-2或其变体。在一种情况下，掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽TβRII多肽和在SEQ ID NO:103的位置25处具有除Lys或Arg以外的氨基酸的TGF-β2多肽；其中MAPP任选地包含一个或多个另外的独立选择的MOD(例如，一个或多个IL-2MOD多肽或其亲和力降低的变体)。具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD可以包含在SEQ ID NO:103的位置92处具有除Ile或Val以外的氨基酸(或在位置92处除Ile、Val或Leu以外的氨基酸)的TGF-β2多肽；其中MAPP任选地包含一个或多个另外的独立选择的MOD(例如，一个或多个IL-2MOD多肽或其亲和力降低的变体)。具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD可以包含在SEQ ID NO:103的位置94处具有除Lys或Arg以外的氨基酸的TGF-β2多肽；其中MAPP任选地包含一个或多个另外的独立选择的MOD(例如，一个或多个IL-2MOD多肽或其亲和力降低的变体)。具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD可以包含TGF-β2多肽，其包含Lys 25、Ile 92和/或Lys 94处的一个或多个、两个或更多个或全部三个处的取代；其中MAPP任选地包含一个或多个另外的独立选择的MOD。具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD可以包含TGF-β2多肽，其包含Lys 25、Ile 92和/或Lys 94的一个或多个、两个或更多个或全部三个处的取代；其中MAPP任选地包含一个或多个另外的独立选择的IL-2MOD或其亲合力降低的变体。
(b)另外的TGF-β1和TGF-β3序列变体与串联放置
在一些情况下，掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽TβRII多肽和变体TGF-β1或TGF-β3多肽，其包含对应于TGF-β2SEQ ID NO:103中的Lys 25、Ile 92和/或Lys 94的一个或多个、两个或更多个或全部三个氨基酸位置处的取代。在TGF-β1或TGF-β3中，对应于Lys 25的氨基酸是Arg 25，对应于Ile 92的氨基酸是Val 92，对应于Lys 94的氨基酸是Arg 94，其中每一个都是保守取代。参见例如TGF-β1的SEQ ID NO:194和102，以及TGF-β3的SEQ ID NO:196和106。
如上所述，掩蔽的TGF-βMOD任选地包含一个或多个独立选择的MOD，诸如IL-2或其变体。在一种情况下，具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD包含在位置25处具有除Arg或Lys以外的氨基酸的TGF-β1或β3多肽；并且任选地包含一个或多个独立选择的MOD(例如，一个或多个IL-2MOD多肽或其亲和力降低的变体)。在一种情况下，具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD包含在位置92处具有除Val或Ile以外的氨基酸(或在位置92处除Ile、Val或Leu以外的氨基酸)的TGF-β1或β3多肽；并且任选地包含一个或多个独立选择的MOD(例如，一个或多个IL-2MOD多肽或其亲和力降低的变体)。在另一种情况下，具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD包含具有除Arg或Lys以外的氨基酸的TGF-β2多肽；并且任选地包含一个或多个独立选择的MOD(例如，一个或多个IL-2MOD多肽或其亲和力降低的变体)。在一种具体情况下，具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD包含有包含在Arg 25、Val 92和/或Arg 94中的一个或多个、两个或更多个或全部三个处的取代的TGF-β1或β3多肽，并且还包含一个或多个独立选择的MOD(例如、IL-2或变体IL-2MOD)。在另一种具体情况下，具有掩蔽TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD包含有包含在Arg25、Val 92和/或Arg 94中的一个或多个、两个或更多个或全部三个处的取代的TGF-β1或β3多肽，并且还包含一个或多个独立选择的IL-2MOD或其亲合力降低的变体。
(v)TGF-β受体多肽和结合并掩蔽TGF-β的其他多肽
在任何上述TGF-β多肽或多肽复合物中，结合并掩蔽TGF-β多肽的多肽(“掩蔽多肽”)可以采取多种形式，包括TβRI、TβRII、TβRIII和抗TGF-β多肽或抗体相关分子的片段(例如，抗体的抗原结合片段、Fab、Fab'、单链抗体、scFv、肽适体或纳米抗体)。
(a)TGF-β受体多肽
在掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β可以通过利用TGF-β受体片段(例如，TβRI、TβRII或TβRIII的胞外域序列)来实现，所述TGF-β受体片段包含足以结合TGF-β多肽(例如，TGF-β1、TGF-β2或TGF-β3)的多肽序列。在一个实施方案中，掩蔽序列包含全部或部分的TβRI、TβRII或TβRIII胞外域。
(1)TGF-β受体I(TβRI)
掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的多肽序列可以衍生自TβRI(例如，同种型1SEQ IDNO:197)并且可以包含全部或部分的TβRI胞外域(氨基酸34-126)。适用于掩蔽TGF-β的TβRI多肽可以包含与以下TβRI胞外域氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个或103个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：LQCFCHL CTKDNFTCVT DGLCFVSVTETTDKVIHNSM CIAEIDLIPR DRPFVCAPSS KTGSVTTTYC CNQDHCNKIE LPTTVKSSPG LGPVEL(SEQID NO:107)。
(2)TGF-β受体II(TβRII)
掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的多肽序列可以衍生自TβRII(例如，同种型A SEQID NO:198)，并且可以包含全部或部分的TβRII胞外域序列(氨基酸24至177)。适用于掩蔽TGF-β的TβRII同种型A多肽可以包含与以下TβRII同种型A胞外域氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个、至少150个或至少154个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：IPPHVQK SDVEMEAQKD EIICPSCNRTAHPLRHINND MIVTDNNGAV KFPQLCKFCD VRFSTCDNQK SCMSNCSITS ICEKPQEVCV AVWRKNDENITLETVCHDPK LPYHDFILED AASPKCIMKE KKKPGETFFM CSCSSDECND NIIFSEE(SEQ ID NO:108)。对应于B同种型中的D118的天冬氨酸残基的位置加粗且斜体。
掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的多肽序列可以衍生自TβRII(同种型B SEQ ID NO:199)并且可以包含全部或部分的TβRII胞外域序列(氨基酸24至166)。适用于掩蔽TGF-β的TβRII同种型B多肽可以包含与TβRII同种型B胞外域氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个或143个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：IPPHVQKSVN NDMIVTDNNG AVKFPQLCKF CDVRFSTCDN QKSCMSNCSITSICEKPQEV CVAVWRKNDE NITLETVCHD PKLPYHDFIL EDAASPKCIM KEKKKPGETF FMCSCSSDECNDNIIFSEEY NTSNPDLLLV IFQ(SEQ ID NO:109)。如下文所讨论的，F30、D32、S52、E55或D118(斜体且加粗)中的任何一个或多个可以被除那些位置处天然存在的氨基酸以外的氨基酸(例如，丙氨酸)取代。掩蔽TGF-β的多肽序列可以包含携带D118A或D118R取代的SEQ ID NO:109的多肽。掩蔽TGF-β的序列可以包含携带D118A或D118R取代和F30A、D32N、S52L和/或E55A取代中的一个或多个的SEQ ID NO:109的肽。
尽管TβRII的胞外域可以用作掩蔽多肽，但蛋白质的该区具有带电荷且疏水的斑块，其可能导致不利的pI，并且可能对表达所述多肽的细胞有毒性。此外，将TβRII胞外域与活性TGF-β多肽组合可以产生复合物，所述复合物可以与细胞表面TβRI组合并引起信号传导受体的激活(例如，通过Smad途径的信号传导)。通过去除或改变参与TβRI缔合的序列来修饰用于掩蔽TGF-β的TβRII胞外域序列，可以避免被掩蔽的TGF-β对细胞的不预期的刺激，除非通过其自身的细胞表面异二聚体TβRI/TβRII复合物。TβRII的修饰还可以改变(例如，降低)TβRII对TGF-β(例如，TGF-β3)的亲和力，从而允许控制TGF-β暴露以及其作为信号传导分子的可及性。包含对TGF-β(例如，TGF-β3)具有最高亲和力的TβR(例如，TβRII)肽的掩蔽的TGF-βMOD最紧密地掩蔽TGF-β序列并且需要更高的剂量来实现相同的效果。相比之下，TβRII中降低亲和力的氨基酸取代暴露了TGF-β多肽，并且在较低剂量下具有生物学效果。
因此，当期望阻断/限制掩蔽的TGF-β多肽通过TβRI的信号传导和/或修饰(例如，降低)掩蔽TβRII多肽对TGF-β的亲和力时，可以将对TβRII的许多改变并入TβRII多肽序列中。可以进行的修饰包括上述N端氨基酸(诸如14或25个N端氨基酸(1至14个氨基酸或1至25个氨基酸；Δ14、Δ25修饰))的缺失，和/或在L27、F30、D32、S49、I50、T51、S52、I53、E55、V77、D118和/或E119中的一个或多个处的取代。导致TβRI与TβRII相关性降低以及对TGF-β的亲和力降低的一些特异性TβRII修饰包括基于SEQ ID NO:109的L27A、F30A、D32A、D32N、S49A、I50A、T51A、S52A、S52L、I53A、E55A、V77A、D118A、D118R、E119A和/或E119Q中的任何一种或多种。参见例如J.Groppe等人Mol Cell 29,157-168,(2008)和De Crescenzo等人JMB355,47-62(2006)得到这些取代对TGF-β3-TβRII和TβRI-TβRII复合物的影响。TβRII的修饰，包括N端Δ25缺失和/或F24处的取代(例如，F24A取代)，基本上或完全阻断了通过经典SMAD信号传导途径的信号。在一个方面，成熟TβRII B同种型(SEQ ID NO:109)的位置118处的天冬氨酸(D118)被除Asp或Glu以外的氨基酸置换，诸如被Ala置换以得到“D118A”取代或被Arg置换以得到D118R取代。对应于D118的Asp残基表示为SEQ ID No:108、199、109、110、111、112、113(图26B中以加粗且加下划线表示)。长度为1至25个氨基酸的N端缺失(例如，Δ25缺失)和/或F24处的取代(例如，F24A取代)可以与D118取代(例如，D118A或D118R)组合。。长度为1至25个氨基酸的N端缺失(例如，Δ25缺失)和/或F24处的取代(例如，F24A取代)也可以与L27、F30、D32、S49、150、T51、S52、I53、E55、V77、D118和/或E119(例如，D118A)取代中任一者处的取代组合，并且特别是针对上述SEQ ID NO:109中的那些位置列举的任何特定取代，以改变亲和力。
TβRII多肽的N端的缺失还可以导致TβRI相互作用的丧失并阻止包含TβRII多肽的掩蔽的TGF-βMOD充当参与并激活TβRI信号传导的组成型活性复合物。TβRII多肽的14个氨基酸的缺失(Δ14)显著降低了蛋白质与TβRI的相互作用，而TβRII的Δ25氨基酸缺失似乎完全消除了与TβRI的相互作用。N端缺失也显著改变了蛋白质的pI，Δ14TβRII胞外域突变体显示出约4.5-5.0(例如，约4.74)的pI。因此，TGF-βMOD可以包含具有N端缺失的TβRII胞外域多肽(例如，SEQ ID NO:108或199的多肽)，所述N端缺失诸如14至25个氨基酸(例如，14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸)。可以用于在掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β多肽的修饰的胞外域序列，包括限制与TβRI相互作用的那些序列，在以下段落中描述。
在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含与TβRII同种型B胞外域序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个、至少120个、至少130个、至少140个或142个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的序列：IPPHVQKSVN NDMIVTDNNG AVKFPQLCKFCDVRFSTCDN QKSCMSNCSI TSICEKPQEV CVAVWRKNDE NITLETVCHD PKLPYHDFIL EDAASPKCIMKEKKKPGETF FMCSCSSDEC NDNIIFSEE(SEQ ID NO:110)。F30、D32、S52、E55或D118(斜体且加粗)中的任何一个或多个可以被除那些位置处天然存在的氨基酸外的氨基酸(例如，丙氨酸)取代。在一个实施方案中，掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A取代的SEQ ID NO:110的肽。在一个实施方案中，掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A取代和F30A、D32N、S52L和/或E55A取代中的一个或多个的SEQ ID NO:110的多肽。
由于掩蔽的TGF-β/TβRII复合物与TβRI相互作用而阻断无意(inadvertent)细胞信号传导的TβRII N端缺失组合(诸如14个至25个氨基酸(例如，14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸))可以与其他TβRII胞外域取代组合，包括F30、D32、S52、E55和/或D118中的任何一个或多个处的那些。缺失和取代的组合确保了掩蔽的TGF-βMOD不会引起细胞信号传导，除非通过细胞膜结合的TβRI和TβRII受体。
在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含与TβRII同种型B胞外域序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个、至少110个或114个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的序列：VTDNNG AVKFPQLCKF CDVRFSTCDN QKSCMSNCSI TSICEKPQEV CVAVWRKNDENITLETVCHD PKLPYHDFIL EDAASPKCIM KEKKKPGETF FMCSCSSDEC NDNIIFSEE(SEQ ID NO:111)，其具有缺失的氨基酸1-14(Δ14)。F30、D32、S52、E55或D118(斜体且加粗)中的任何一个或多个可以被除那些位置处天然存在的氨基酸外的氨基酸(例如，丙氨酸)取代。在一个实施方案中，掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A取代的SEQ ID NO:111的肽。在一个实施方案中，掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A取代和F30A、D32N、S52L和/或E55A取代中的一个或多个的SEQ ID NO:111的多肽。
在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含与TβRII同种型B胞外域序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个或104个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的序列：QLCKF CDVRFSTCDN QKSCMSNCSI TSICEKPQEV CVAVWRKNDE NITLETVCHD PKLPYHDFILEDAASPKCIM KEKKKPGETF FMCSCSSDEC NDNIIFSEE(SEQ ID NO:112)，其具有缺失的氨基酸1-25(Δ25)。F30、D32、S52、E55或D118(斜体且加粗)中的任何一个或多个可以被除那些位置处天然存在的氨基酸外的氨基酸(例如，丙氨酸)取代。在一个实施方案中，掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A取代的SEQ ID NO:112的多肽(如图26B中的SEQ ID NO:113所示)。在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A取代和F30A、D32N、S52L和/或E55A取代中的一个或多个的SEQ ID NO:112的肽。在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A和F30A取代的SEQ ID NO:112(参见图5B)的肽。在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A和D32N取代的SEQ IDNO:112(参见图26B)的肽。在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A和S52L取代的SEQ ID NO:112(参见图26B)的肽。在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的序列包含携带D118A和E55A的SEQ ID NO:112(参见图26B)的肽。
(3)TGF-β受体III(TβRIII)
在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD中掩蔽TGF-β的多肽序列可以衍生自TβRIII(例如，同种型A SEQ ID NO:200和同种型B 125)，并且可以包含全部或部分的TβRIII胞外域(A同种型的氨基酸27-787或B同种型的27-786)。在一些情况下，适用于掩蔽TGF-β的TβRIII多肽包含与TβRIII A同种型或B同种型胞外域序列(例如，在图26C中提供为SEQ IDNO:200或SEQ ID NO:201)的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个或120个氨基酸具有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
(b)抗体
虽然TGF-β受体多肽(例如，胞外域序列)可以用于结合并掩蔽掩蔽的TGF-βMOD中的TGF-β多肽，但结合TGF-β序列的其他多肽序列(蛋白质序列)也可以用作掩蔽多肽。可以用于掩蔽TGF-β的合适多肽或蛋白质序列为对TGF-β具有亲和力的抗体(例如，对TGF-β1、TGF-β2或TGF-β3中的一种或多种具有特异性的抗体)或抗体相关分子，诸如对TGF-β多肽具有亲和力的抗TGF-β抗体片段、纳米抗体，并且特别地单链抗TGF-β多肽(例如，其中任一种都可以是人源化的)。已描述了一些结合并中和TGF-β的抗体，包括scFV抗体。参见例如US9,090,685。在本公开中描述的本发明的整个实施方案和/或方面中，用于掩蔽TGF-β多肽的TβR(例如，TβRII)序列可以用对TGF-β多肽具有亲和力的掩蔽抗体序列(例如，scFv或纳米抗体)置换。例如，在图1中的每个掩蔽的TGF-βMOD中，其中TGF-β受体序列用于掩蔽TGF-β多肽，受体多肽可以用对TGF-β多肽具有亲和力的掩蔽抗体多肽(例如，scFV或纳米抗体)置换。
使用抗体作为掩蔽多肽的一个潜在优势(例如，单链抗体)在于将其限制为待掩蔽的TGF-β多肽的同种型的能力。举例来说，当存在于TGF-βMOD中时，基于美替木单抗(CAT192)的针对TGF-β1的单链抗体序列(例如，Lord等人,mAbs 10(3):444-452(2018))可以用于掩蔽该TGF-β同种型。在另一个实施方案中，当存在于TGF-βMOD中时，对TGF-β2具有特异性的单链抗体序列用于掩蔽该TGF-β同种型。在另一个实施方案中，当存在于TGF-βMOD中时，对TGF-β3具有特异性的单链抗体序列用于掩蔽该TGF-β同种型。单链抗体还可以对TGF-β同种型的组合(例如，掩蔽的TGF-βMOD中出现的选自由以下组成的组的胞外域序列：TGF-β1和TGF-β2；TGF-β1和TGF-β3；以及TGF-β2和TGF-β3)具有特异性。单链抗体还可以对在掩蔽的TGF-βMOD中出现的TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3胞外域序列具有泛特异性。参见例如WO 2014/164709。可以通过多种方法制备对TGF-β同种型具有所需特异性和亲和力的抗体和单链抗体，所述方法包括筛选杂交瘤和/或修饰(例如，组合修饰)对靶TGF-β多肽序列具有亲和力的抗体的可变区序列。
在一个实施方案中，掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽TGF-β序列(例如，TGF-β3序列)的单链抗体。在一个此类实施方案中，单链氨基酸序列对包含C77S取代的SEQ ID NO:105(参见SEQ ID NO:196)中列出的TGF-β3具有特异性。
(i)TGF-β和TGF-β掩蔽序列在MAPP中的放置
掩蔽的TGF-βMOD的掩蔽序列(例如，TGF-β受体序列)可以是与TGF-β序列相同的多肽的一部分，即掩蔽序列和TGF-β序列都以“顺式”存在。或者，掩蔽序列(例如，TGF-β受体序列)和TGF-β序列可以是不同多肽的一部分，即它们以“反式”存在。
当掩蔽的TGF-βMOD的掩蔽序列和TGF-β序列存在于MAPP的单个氨基酸序列(单个多肽)中(以顺式放置)时，氨基酸序列可以在N端至C端方向排列为：a)TGF-β受体序列，然后是TGF-β序列，或b)TGF-β序列，然后是TGF-β受体序列。无论从N端至C端的顺序如何，掩蔽的TGF-βMOD的多肽序列可以在其N端或C端与任何其他MAPP多肽连接。独立选择的接头多肽(例如，Gly4Ser重复)可以用于连接掩蔽序列(例如，TGF-β受体序列)和TGF-β序列，并且还用于将TGF-βMOD连接至MAPP的多肽(例如，框架多肽或二聚化多肽)。举例来说，顺式掩蔽的TGF-βMOD可以连接至MAPP多肽的C端并且具有N端至C端的顺序：a)TGF-β受体序列(例如，TβRII序列)，然后是TGF-β序列(例如，TGF-β3)。为了进一步说明此实例，顺式掩蔽的TGF-βMOD可以与框架多肽连接(例如，在其C端)，并且顺式掩蔽的TGF-βMOD可以任选地在另一MOD(诸如IL-2)之后。
一个具有顺式TβR和TGF-β的掩蔽的TGF-βMOD(顺式掩蔽的TGF-βMOD)的实例是序列QLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSAECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSALDTNYCFRNLEENCCVRPLYIDFRQDLGWKWVHEPKGYYANFCSGPCPYLRSADTTHSTVLGLYNTLNPEASASPSCVPQDLEPLTILYYVGRTPKVEQLSNMVVKSCKCS(SEQ ID NO:209)，其中：氨基酸1-111是N端25个氨基酸被移除(Δ25)且具有D118A取代的人TβRII掩蔽序列；氨基酸112-136是接头(五个Gly4Ser重复)；并且137-248是具有C77S取代的人TGF-β3序列。此类序列可以例如通过其N端直接或间接地经由独立选择的接头附接至MAPP多肽的C端(例如，框架多肽)。此外，顺式掩蔽的TGF-βMOD序列可将另一MOD序列(例如，人IL-2或变体IL-2MOD多肽序列)附加在其上。
当掩蔽的TGF-βMOD的掩蔽序列(例如，TGF-β受体序列)和TGF-β序列作为不同MAPP多肽的一部分(以反式放置)存在时，这些多肽序列附接至相互作用的不同(单独)MAPP多肽上，从而将TGF-β序列与掩蔽多肽(例如，TGF-β受体序列)配对。TGF-β序列和掩蔽序列可以位于MAPP多肽(例如，框架多肽或二聚化多肽)的N端或C端。独立选择的接头多肽(例如，Gly4Ser重复)可以用于将掩蔽序列(例如，TGF-β受体序列)或TGF-β序列连接至其他MAPP多肽。举例来说，在反式掩蔽的TGF-βMOD中，TGF-β受体序列(例如，TβRII)可以是一个框架多肽的一部分和第二框架多肽的TGF-β序列(例如，TGF-β3)部分，其中第一框架多肽和第二框架多肽通过种间多聚化序列缔合。为了进一步说明此实例，TGF-β序列和TGF-β受体序列可以位于框架多肽的C端，并且任选地后面可以有另一个MOD，诸如IL-2。举例来说，具有带有种间多聚化序列的第一框架多肽和第二框架多肽的MAPP可以具有位于第一框架多肽C端的掩蔽TβR序列和位于第二框架多肽C端的TGF-β多肽(位置3和3'(参见例如图1A和1B)。掩蔽TβR序列可以是例如缺乏其N端25个氨基酸(Δ25)并携带D118A取代的TβRII序列：SQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLP YHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSAECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO:114)。TGF-β多肽可以是携带C77S取代的人TGF-β3多肽：ALDTNYCFRNLEENCCVRPLYIDFRQDLGWKWVHEPKGYYANFCSGPCPYLRSADTTHS TVLGLYNTLNPEASASPSCVPQDLEPLTILYYVGRTPKVEQLSNMVVKSCKCS(SEQ ID NO:115)。独立选择的接头可以用于将TGF-β和TβR序列连接至框架多肽。参见例如实施例1，图27和28。
c.IL-2及其变体
作为一个非限制性实例，存在于MAPP中的MOD或变体MOD是IL-2或变体IL-2多肽。在一些情况下，存在于MAPP中的变体MOD是IL-2多肽。野生型IL-2与IL-2受体(IL-2R)结合。野生型IL-2氨基酸序列可以如下：
(UniProt P60568的氨基酸21-153，SEQ ID NO:116)。
野生型IL2与细胞表面上的IL2受体(IL2R)结合。在一些情况下，IL2受体是异源三聚体多肽，其包含α链(IL-2Rα；也称为CD25)、β链(IL-2Rβ；也称为CD122)以及γ链(IL-2Rγ；也称为CD132)。人IL-2Rα、IL2Rβ和IL-2Rγ的氨基酸序列在所附序列表中分别提供为SEQ IDNO:117、SEQ ID NO:118和SEQ ID NO:119的，并且还提供于例如美国专利公开号20200407416中。
在一些情况下，与包含SEQ ID NO:116中列出的氨基酸序列的IL-2多肽的结合亲和力相比，变体IL-2多肽对人IL-2R的IL-2Rα、IL2Rβ和/或IL-2Rγ链中的一个或多个表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，当在相同条件下测定时，变体IL-2多肽以比包含SEQ ID NO:116中列出的氨基酸序列的IL-2多肽对IL-2R的α、β和/或γ链(例如，包含有包含SEQ ID NO:117-119中列出的氨基酸序列的多肽的IL-2R)的结合亲和力低至少10％、低至少20％、低至少30％、低至少40％、低至少50％、低至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或低超过95％的结合亲和力结合人IL-2R的IL-2Rα、IL2Rβ和/或IL-2Rγ链中的一个或多个。
例如，具有在位置42处的苯丙氨酸(例如，被丙氨酸)取代的IL-2变体表现出与IL-2Rα链的结合显著减少，在这种情况下变体可以减少Treg的激活。具有在位置16处的组氨酸(例如，被丙氨酸)取代的IL-2变体表现出与IL2Rβ链的结合减少，从而降低MAPP通过IL-2MOD的脱靶结合与非靶标T细胞结合的可能性。一些IL-2变体，例如具有F42和H16氨基酸的取代的那些，表现出与IL-2Rα链的结合显著减少，并且与IL2Rβ链的结合也减少。参见例如Quayle等人,Clin Cancer Res；26(8)2020年4月15日。
在一些情况下，与SEQ ID NO:116中列出的IL-2氨基酸序列相比，变体IL-2多肽具有单个氨基酸取代。在一些情况下，与SEQ ID NO:116中列出的IL-2氨基酸序列相比，变体IL-2多肽具有2至10个氨基酸取代。在一些情况下，与SEQ ID NO:116中列出的IL-2氨基酸序列相比，变体IL-2多肽具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代。在一些情况下，与SEQID NO:116中列出的IL-2氨基酸序列相比，变体IL-2多肽具有2或3个氨基酸取代。
合适的变体IL-2多肽序列包括包含与SEQ ID NO:116的至少80个(例如，90、100、110、120、130或133个)连续氨基酸序列具有至少80％(例如，至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列的多肽序列。可以引入取代的潜在氨基酸包括以下位置中的一个或多个：
(i)位置15，其中氨基酸不是E(例如，A)；
(ii)位置16，其中氨基酸不是H(例如，A、T、N、C、Q、M、V或W)；
(iii)位置20是除D以外的氨基酸(例如，A)；
(iv)位置42，其中氨基酸不是F(例如，A、M、P、S、T、Y、V或H)；
(v)位置45，其中氨基酸不是Y(例如，A)；
(vi)位置88，其中氨基酸不是N(例如，A或R)；
(vii)位置126，其中氨基酸不是Q(例如，A)。
以上取代的组合包括(H16X、F42X)、(D20X、F42X)、(E15X、D20X、F42X)、(H16X、D20X、F42X)、(H16X、F42X、R88X)、(H16X、F42X、Q126X)、(D20X、F42X、Q126X)、(D20X、F42X和Y4X)、(H16X、D20X、F42X和Y45X)、(D20X、F42X、Y45X、Q126X)、(H16X、D20X、F42X、Y45X、Q126X)，其中X是取代的氨基酸，任选地选自以下：位置15、20、45、126-A；位置16-A或T，或N、C、Q、M、V或W；位置42-A，或M、P、S、T、Y、V或H；位置88-A或R。
IL-2变体包含与SEQ ID NO:116的至少80(例如，至少90、100、110、120或130)个连续氨基酸具有至少90％(例如，至少95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的多肽，其中位置16处的氨基酸是除H以外的氨基酸。在一种情况下，位置H16被Asn、Cys、Gln、Met、Val或Trp取代。在一种情况下，位置H16被Ala取代。在另一种情况下，位置H16被Thr取代。另外或可选地，IL-2变体包含与SEQ ID NO:116的至少80(例如，至少90、100、110、120或130)个连续氨基酸具有至少90％(例如，至少95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的多肽，其中位置42处的氨基酸是除F以外的氨基酸。在一种情况下，位置F42被Met、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr、Val或His取代。在一种情况下，位置F42被Ala取代。
IL-2变体包含有包含氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含在位置H16和/或F42处具有取代(例如，H16A和/或F42A取代)的全部或部分人IL-2多肽。
IL-2变体包含与SEQ ID NO:116的至少80(例如，至少100、110、120或130)个连续氨基酸具有至少90％(例如，至少95％、98％或99％)氨基酸序列同一性的多肽，其中位置16处的氨基酸是除H以外的氨基酸，并且位置42处的氨基酸是除F以外的氨基酸。在一种情况下，H16的位置被Ala或Thr取代，并且F42的位置被Ala或Thr取代。在一种情况下，位置H16被Ala取代并且位置F42被Ala取代(H16A和F42A变体)。在第二种情况下，位置H16被Thr取代并且位置F42被Ala取代(H16T和F42A变体)。在第三种情况中，位置H16被Ala取代并且位置F42被Thr取代(H16A和F42T变体)。在第四种情况中，位置H16被Thr取代并且位置F42被Thr Ala取代(H16T和F42T变体)。如上所述，此类变体将表现出与人IL-2Rα链和IL2Rβ链的结合减少。
在本文提供的任何野生型或变体IL-2序列中，位置125处的半胱氨酸可以被除胱氨酸以外的氨基酸诸如丙氨酸取代(C125A取代)。除了由取代提供的任何稳定性以外，它还可以用于例如含有表位的肽或另外的肽将与MAPP中别处的半胱氨酸残基缀合的情况，从而避免来自IL-2MOD序列的C125的竞争。
d.PD-L1及其变体
作为一个非限制性实例，存在于MAPP中的MOD或变体MOD是PD-L1或变体PD-L1多肽。野生型PD-L1与PD1结合。
野生型人PD-L1多肽可以包含以下氨基酸序列：MRIFAVFIFM TYWHLLNAFTVTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKDQLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGYPKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNILNVSIKICLT LSPST(SEQ ID NO:120)；其中氨基酸1-18形成信号序列，氨基酸19-127形成Ig样V型或IgV结构域，并且133-225形成Ig样C2型结构域。
野生型人PD-L1胞外域氨基酸序列可以包含以下氨基酸序列：FT VTVPKDLYVVEYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSSDHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPGNI LNVSIKI(SEQID NO:121)；其中氨基酸1-109形成Ig样V型或“IgV”结构域，并且氨基酸115-207形成Ig样C2型结构域。
野生型人PD-L1胞外域氨基酸序列还可以包含以下氨基酸序列：FT VTVPKDLYVVEYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSSDHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPELP LAHPPNERLNVSIKI(SEQ ID NO:122)；其中氨基酸1-109形成Ig样V型或“IgV”结构域，并且氨基酸115-207形成Ig样C2型结构域。参见例如NCBI登录号和版本3BIK_A，其包含N端丙氨酸作为其第一氨基酸。
适合用作MOD的野生型PD-L1 IgV结构域可以包含SEQ ID NO:120的氨基酸18和氨基酸IgV氨基酸19-127，以及羧基端稳定序列，例如像以下序列的最后七个氨基酸(加粗且斜体)： 其中稳定序列的羧基包含组氨酸(例如，位于Tyr(Y)的C端侧约5个残基处，显示为SEQ ID NO:123的氨基酸117的组氨酸)至约氨基酸122，所述组氨酸可以在氨基酸82和83处(SEQ ID NO:120中的加粗且斜体(SEQ ID NO:120的Q107和L106))与主链酰胺形成稳定的静电键。作为替代方案，可以通过取代氨基酸82或83(SEQ ID NO:120的Q107和L106)之一和氨基酸残基121、122或123(相当于SEQ ID NO:120的氨基酸位置139-141)之一来形成稳定二硫键。
野生型PD-1多肽可以包含以下氨基酸序列：PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNATFTCSFSNTS ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPGQDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGTYLCGAISLAP KAQIKESLRAELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL(SEQ ID NO:124)。
在一些情况下，与包含SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:121中列出的氨基酸序列的PD-L1多肽的结合亲和力相比，变体PD-L1多肽(例如，SEQ ID NO:121或PD-L1的IgV结构域的变体)对PD-1(例如，包含SEQ ID NO:124中列出的氨基酸序列的PD-1多肽)表现出降低的结合亲和力。例如，在一些情况下，变体PD-L1多肽结合PD-1(例如，包含SEQ ID NO:124中列出的氨基酸序列的PD-1多肽)，其结合亲和力比包含SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:121中所示氨基酸序列的PD-L1多肽的结合亲和力低至少10％、低至少20％、低至少30％、低至少40％、低至少50％、低至少60％、低至少70％、低至少80％、低至少90％、低至少95％或低超过95％。
e.4-1BBL及其变体
在一些情况下，野生型和/或变体4-1BBL MOD多肽序列作为MAPP中的MOD存在。野生型4-1BBL与4-1BB(CD137)结合。
野生型4-1BBL氨基酸序列可以如下：MEYASDASLD PEAPWPPAPR ARACRVLPWALVAGLLLLLL LAAACAVFLA CPWAVSGARA SPGSAASPRL REGPELSPDDPAGLLDLRQG MFAQLVAQNVLLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDTKELVVAKAGV YYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQ RLGVHLHTEA RARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPS PRSE(SEQ ID NO:125)。NCBI参考序列：NP_003802.1，其中氨基酸29-49是跨膜区。
在一些情况下，变体4-1BBL多肽是人4-1BBL的肿瘤坏死因子(TNF)同源结构域(THD)的变体。人4-1BBL的THD的野生型氨基酸序列可以包含例如如下SEQ ID NO:126-128之一：
D PAGLLDLRQG MFAQLVAQNV LLIDGPLSWY SDPGLAGVSL TGGLSYKEDT KELVVAKAGVYYVFFQLELR RVVAGEGSGS VSLALHLQPL RSAAGAAALA LTVDLPPASS EARNSAFGFQ GRLLHLSAGQRLGVHLHTEA RARHAWQLTQ GATVLGLFRV TPEIPAGLPS PRSE(SEQ ID NO:127)；和
野生型4-1BB氨基酸序列可以如下：MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSNCPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCSMCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPARE PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDGCSCRFPEEEE GGCEL(SEQ ID NO:129)。
与包含SEQ ID NO:126-128之一中列出的氨基酸序列的4-1BBL多肽的结合亲和力相比，变体4-1BBL多肽对4-1BB表现出降低的结合亲和力。例如，当在相同条件下测定时，变体4-1BBL多肽可以结合4-1BB的结合亲和力比包含SEQ ID NO:126-128之一中列出的氨基酸序列的4-1BBL多肽对4-1BB多肽(例如，包含SEQ ID NO:129中列出的氨基酸序列的4-1BB多肽)的结合亲和力低至少10％、低至少20％、低至少30％、低至少40％、低至少50％、低至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或低超过95％。
适合在MAPP中用作MOD的4-1BBL变体包括具有至少一个氨基酸取代且与SEQ IDNO:126、127或128之一具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的那些多肽。
适用于包含在MAPP中的4-1BBL变体包括具有至少一个氨基酸取代(例如，两个、三个或四个取代)的那些，包括与SEQ ID NO:126的至少140个(例如，至少160、175、180或181个)连续氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％氨基酸序列同一性的那些。
6.接头
如上所述，MAPP可以包含插入在以下之间的接头序列(氨基酸、肽或多肽接头序列)或“接头”：MAPP的任何两个元件(例如，表位和MHC多肽)之间；MHC多肽和Ig Fc多肽之间；第一MHC多肽和第二MHC多肽之间；等。尽管称为“接头”，但用于接头的序列也可以置于MAPP多肽的N端和/或C端以例如稳定MAPP多肽或保护其免受蛋白水解降解。
合适的多肽接头(也称为“间隔区”)是本领域已知的并且可以容易地选择，并且可以具有多种合适长度中的任意长度，例如，长度为2至50个氨基酸，例如，2至10个氨基酸、10至20个氨基酸、20至30个氨基酸、30至40个氨基酸、40至50个氨基酸或长于50个氨基酸。在实施方案中，合适的接头的长度可以为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35个氨基酸。接头通常可以分为三组，即柔性接头、刚性接头和可切割接头。参见例如Chen等人(2013)Adv.DrugDeliv.Rev.65:1357；和Klein等人(2014)Protein Engineering,Design&Selection 27:325。除非另有说明，否则本公开的MAPP中使用的接头不是本领域通常已知的可切割接头。
MAPP中的多肽接头可以包括例如包含以下、基本上由以下组成或由以下组成的多肽：i)Gly和Ser；ii)Ala和Ser；iii)Gly、Ala和Ser；iv)Gly、Ser和Cys(例如，单个Cys残基)；v)Ala、Ser和Cys(例如，单个Cys残基)；以及vi)Gly、Ala、Ser和Cys(例如，单个Cys残基)。示例性接头可以包括甘氨酸聚合物、甘氨酸-丝氨酸聚合物、甘氨酸-丙氨酸聚合物；丙氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如包含序列GSGGS(SEQ ID NO:130)或GGGS(SEQ ID NO:131)的聚合物，其中任一者可以重复1至10次(例如，重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次))；以及本领域已知的其他柔性接头。可以使用甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物两者；Gly和Ser都是相对非结构化的，因此可以充当组分之间的中性系链。甘氨酸聚合物甚至比丙氨酸显著更大程度地接近phi-psi空间，并且比具有较长侧链的残基限制性小得多(参见Scheraga,Rev.Computational Chem.11173-142(1992))。示例性接头可以还包含氨基酸序列，其包括但不限于GGSG(SEQ ID NO:132)、GGSGG(SEQ ID NO:133)、GSGSG(SEQ ID NO:134)、GSGGG(SEQ ID NO:135)、GGGSG(SEQ ID NO:136)、GSSSG(SEQ ID NO:137)(其中任一者可以重复1至10次(例如，重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次))，或其组合等。接头还可以包含序列Gly(Ser)4(SEQ ID NO:138)或(Gly)4Ser(SEQ ID NO:99)，其中任一者都可以重复1至10次(例如、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)。在一个实施方案中，接头包含氨基酸序列AAAGG(SEQ IDNO:139)，其可以重复1至10次。
刚性多肽接头包含氨基酸序列，其通过维持结构域之间基本上固定的距离/空间间隔来有效地分离蛋白质结构域，从而减少或基本上消除此类结构域之间的不利相互作用。因此，当需要使MAPP结构域之间的相互作用最小化时，可以采用刚性多肽接头。刚性肽接头包括富含脯氨酸的肽接头和具有非柔性螺旋结构(诸如α螺旋结构)的肽接头。刚性肽接头的实例包括例如(EAAAK)n(SEQ ID NO:140)、A(EAAAK)nA(SEQ ID NO:141)、A(EAAAK)nALEA(EAAAK)nA(SEQ ID NO:142)、(Lys-Pro)n、(Glu-Pro)n、(Thr-Pro-Arg)n和(Ala-Pro)n，其中n是整数1至20(例如，n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20)。合适的包含EAAAK(SEQ ID NO:143)的刚性接头的非限制性实例包括EAAAK(SEQ IDNO:143)、(EAAAK)2(SEQ ID NO:144)、(EAAAK)3(SEQ ID NO:145)、A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A(SEQ ID NO:146)和AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO:147)。包含(AP)n的合适刚性接头的非限制性实例包括PAPAP(SEQ ID NO:148；本文中也称为“(AP)2”)；APAPAPAP(SEQ ID NO:149；本文中也称为“(AP)4”)；APAPAPAPAPAP(SEQ ID NO:150；本文中也称为“(AP)6”)；APAPAPAPAPAPAPAP(SEQ ID NO:151；本文中也称为“(AP)8”)；和APAPAPAPAPAPAPAPAPAP(SEQ ID NO:152；本文中也称为“(AP)10”)。包含(KP)n的合适刚性接头的非限制性实例包括KPKP(SEQ ID NO:153；本文中也称为“(KP)2”)；KPKPKPKP(SEQ ID NO:154；本文中也称为“(KP)4”)；KPKPKPKPKPKP(SEQ ID NO:155；本文中也称为“(KP)6”)；KPKPKPKPKPKPKPKP(SEQID NO:156；本文中也称为“(KP)8”)；和KPKPKPKPKPKPKPKPKPKP(SEQ ID NO:157；本文中也称为“(KP)10”)。包含(EP)n的合适刚性接头的非限制性实例包括EPEP(SEQ ID NO:158；本文中也称为“(EP)2”)；EPEPEPEP(SEQ ID NO:159；本文中也称为“(EP)4”)；EPEPEPEPEPEP(SEQ ID NO:160；本文中也称为“(EP)6”)；EPEPEPEPEPEPEPEP(SEQ ID NO:161；本文中也称为“(EP)8”)；和EPEPEPEPEPEPEPEPEPEP(SEQ ID NO:162；本文中也称为“(EP)10”)。
在一些情况下，存在于MAPP的多肽中的接头多肽包含可以与存在于MAPP的另一多肽中的半胱氨酸残基形成二硫键的半胱氨酸残基。在一些情况下，例如，接头包含选自(CGGGS)、(GCGGS)、(GGCGS)、(GGGCS)和(GGGGC)的氨基酸序列，接头的其余部分包含Gly和Ser残基(例如，可以重复1至10次(诸如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)的GGGGS单元)。含有半胱氨酸的接头也可以选自序列GCGASGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:163)、GCGGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:100)和GCGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:164)。
因此，表位所附接的接头的长度可以是约5至约50个氨基酸。可以附接表位的接头的长度可以是例如约5至约50个氨基酸，并且所述接头包含多于50％的Gly和Ser残基以及一个半胱氨酸残基。可以附接表位的接头的长度可以是约5至约50个氨基酸，并且所述接头包含多于50％的(Gly)4S重复以及一个任选的半胱氨酸残基。可以附接表位的接头可以是重复3至8(例如，3至7)次的(Gly)4S序列，任选地具有一个被半胱氨酸残基置换的氨基酸。
7.表位
多种肽表位(本文中也称为“表位”)可以存在于MAPP或更高阶MAPP复合物(诸如双链体MAPP)中，并且可呈递至T细胞表面上的TCR。
存在于MAPP(例如，双链体MAPP)中的肽表位被设计以被具有T细胞受体(“TCR”)的靶T细胞特异性结合，所述T细胞受体对表位具有特异性并且特异性结合MAPP的肽表位。因此，表位特异性T细胞结合具有参考氨基酸序列的肽表位，但基本上不结合与参考氨基酸序列不同的表位。
a.具有II类MHC呈递序列和呈递复合物的MAPP中的肽表位
可以被具有II类MHC呈递序列或II类MHC呈递复合物的MAPP结合并呈递至TCR的表位是衍生自与T1D相关的自身抗原的T1D相关肽表位。存在于MAPP中的1型糖尿病相关表位(本文也称为“T1D肽表位”或“T1D表位”)将T1D相关肽表位呈递至T细胞表面上的TCR。
T1D肽表位可以具有约4个氨基酸至约25个氨基酸(aa)的长度，例如，表位可以具有5个氨基酸至10个氨基酸、10个氨基酸至15个氨基酸、15个氨基酸至20个氨基酸，或20个氨基酸至25个氨基酸的长度。例如，存在于MAPP中的T1D表位可以具有4个氨基酸、5个氨基酸、6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸、10个氨基酸、11个氨基酸、12个氨基酸、13个氨基酸、14个氨基酸、15个氨基酸、16个氨基酸、17个氨基酸、18个氨基酸、19个氨基酸、20个氨基酸、21个氨基酸、22个氨基酸、23个氨基酸、24个氨基酸或25个氨基酸的长度。在一些情况下，存在于MAPP中的T1D肽表位具有10个氨基酸至20个氨基酸，例如10个氨基酸、11个氨基酸、12个氨基酸、13个氨基酸、14个氨基酸、15个氨基酸、16个氨基酸、17个氨基酸、18个氨基酸、19个氨基酸和20个氨基酸的长度。
与1型糖尿病(T1D)相关的抗原包括例如前胰岛素原、胰岛素原、胰岛素、胰岛素B链、胰岛素A链、胰岛素原C肽、谷氨酸脱羧酶的65千道尔顿(kDa)同种型(GAD65)、谷氨酸脱羧酶的67kDa同种型(GAD67)、酪氨酸磷酸酶(IA-2)、热休克蛋白HSP65、胰岛特异性葡萄糖6-磷酸酶催化亚基相关蛋白(IGRP)、胰岛抗原2(IA2)以及锌转运蛋白(ZnT8)。参见例如Mallone等人(2011)Clin.Dev.Immunol.2011:513210；以及美国专利公开号2017/0045529。与特定自身免疫性病症“相关”的抗原是作为存在于患有该自身免疫性病症(在此情况下为T1D)的个体中的自身抗体和/或自身反应性T细胞的靶标的抗原，其中此类自身抗体和/或自身反应性T细胞介导与自身免疫性病症相关的病理状态。适合包含在MAPP中的T1D肽表位可以是前述T1D相关抗原中任一种的长度为4个氨基酸至约25个氨基酸的肽表位。
作为一个非限制性实例，T1D肽表位是胰岛素原73-90(GAGSLQPLALEGSLQKR；SEQID NO:165)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下胰岛素(InsA(1-15)肽：GIVDQCCTSICSLYQ(SEQ ID NO:166)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下胰岛素(InsA(1-15；D4E)肽：GIVEQCCTSICSLYQ(SEQ ID NO:167)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下GAD65(555-567)肽：NFFRMVISNPAAT(SEQ ID NO:168)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下GAD65(555-567；F557I)肽：NFIRMVISNPAAT(SEQ ID NO:169)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下胰岛抗原2(IA2)肽：SFYLKNVQTQETRTLTQFHF(SEQ IDNO:170)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下胰岛素原肽：SLQPLALEGSLQSRG(SEQID NO:171)。作为另一个非限制性实例，T1D肽表位是以下胰岛素原肽GSLQPLALEGSLQSRGIV(SEQ ID NO:172；proIns 75-92(K88S))。
在一些情况下，合适的T1D肽表位包含与以下人前胰岛素原氨基酸序列(其中斜体氨基酸1-24形成信号肽)的氨基酸25-110具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的4至25个连续氨基酸： 其中T1D肽表位的长度为4个氨基酸、5个氨基酸、6个氨基酸、7个氨基酸、8个氨基酸、9个氨基酸、10个氨基酸、11个氨基酸、12个氨基酸、13个氨基酸、14个氨基酸、15个氨基酸、16个氨基酸、17个氨基酸、18个氨基酸、19个氨基酸、20个氨基酸、21个氨基酸、22个氨基酸、23个氨基酸、24个氨基酸或25个氨基酸。在一些情况下，T1D肽表位具有氨基酸序列：GAGSLQPLALEGSLQKRG(SEQ IDNO:174)(proIns 73-90)。在一些情况下，T1D肽表位具有氨基酸序列：SLQPLALEGSLQKRG(SEQ ID NO:175)(proIns 76-90)。在一些情况下，T1D肽表位具有氨基酸序列：SLQPLALEGSLQSRG(SEQ ID NO:176)(proIns 76-90；K88S)。在一些情况下，T1D肽表位具有氨基酸序列：QPLALEGSLQKRG(SEQ ID NO:177)。在一些情况下，T1D肽表位具有氨基酸序列：QPLALEGSLQSRG(SEQ ID NO:178)。
8.另外的多肽
MAPP的多肽链(例如，二聚化或框架多肽)可以包含除上述那些以外的一个或多个多肽。合适的另外的多肽包括表位标签和亲和结构域。一个或多个另外的多肽可以包含在MAPP的多肽链的N端、MAPP的多肽链的C端或MAPP的多肽链内(内部)。
a.亲和标签和亲和结构域
合适的亲和标签/多肽亲和结构域包括但不限于血凝素(HA；例如，YPYDVPDYA(SEQID NO:179))；FLAG(例如，DYKDDDDK(SEQ ID NO:180))；c-myc(例如，EQKLISEEDL(SEQ IDNO:181))等。
亲和标签/结构域包含可以与结合配偶体相互作用的肽序列，例如像固定在固体支持物上、可用于鉴定或纯化的肽序列。当与表达的蛋白质融合时，编码多个连续单个氨基酸(诸如组氨酸)的DNA序列可以用于通过与树脂柱(诸如镍琼脂糖凝胶)高亲和力结合来对重组蛋白质进行一步纯化。示例性亲和标签/结构域包括HisX5(HHHHH)(SEQ ID NO:182)、HisX6(HHHHHH)(SEQ ID NO:183)、C-myc(EQKLISEEDL)(SEQ ID NO:181)、Flag(DYKDDDDK)(SEQ ID NO:180)、StrepTag(WSHPQFEK)(SEQ ID NO:184)、血凝素(例如，HA标签(YPYDVPDYA))(SEQ ID NO:179)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、硫氧还蛋白、纤维素结合结构域、RYIRS(SEQ ID NO:185)、FHHT(SEQ ID NO:186)、几丁质结合结构域、S-肽、T7肽、SH2结构域、C端RNA标签、WEAAAREACCRECCARA(SEQ ID NO:187)、金属结合结构域(例如，锌结合结构域或钙结合结构域诸如来自钙结合蛋白的结构域，所述钙结合蛋白例如钙调蛋白、肌钙蛋白C、钙调磷酸酶B、肌球蛋白轻链、恢复蛋白、S-调节蛋白、视锥蛋白、VILIP、神经钙蛋白、海马钙蛋白、神经钙传感蛋白(frequenin)、钙牵蛋白、钙蛋白酶大亚基、S100蛋白、小白蛋白、钙结合蛋白D9K、钙结合蛋白D28K、钙视网膜蛋白、内含肽、生物素、链霉亲和素、MyoD、Id、亮氨酸拉链序列和麦芽糖结合蛋白)。
D.核酸
本公开提供了一种核酸，其包含编码携带T1D相关表位的MAPP的一个或多个多肽的核苷酸序列。在一些情况下，核酸是重组表达载体；因此，本公开提供了包含编码氨基酸的核苷酸序列的重组表达载体。
1.编码MAPP或形成更高阶复合物(诸如双链体MAPP)的MAPP的核酸，所述MAPP包含至少一个二聚化序列和多聚化序列
本公开提供了包含编码MAPP的核苷酸序列的核酸，所述MAPP具有框架多肽，其包含至少一个二聚化序列和至少一个允许框架多肽的两个分子形成二聚体或更高阶复合物的多聚化序列。核酸可以另外包含编码二聚化肽的核苷酸序列。当MAPP包含呈递序列时，编码框架多肽和/或二聚化肽中的一者或两者的核酸可以包含编码呈递序列的序列。当MAPP包含呈递复合物时，编码框架多肽和/或二聚化肽中的一者或两者的核酸还可以包含编码呈递复合物第一序列和/或呈递复合物第二序列的序列。编码MAPP的核酸序列还可以编码肽表位。包含任何MAPP多肽的核苷酸序列可以可操作地连接至转录控制元件，例如启动子。显然，MAPP的各个多肽(例如，框架多肽和二聚化多肽)可以在单个核酸上编码(例如，在单独的启动子的控制下)，或者，可以位于两个或更多个单独的核酸上(例如，质粒)。
2.重组表达载体
本公开提供了包含编码MAPP或其更高阶复合物的一个或多个多肽的核酸的重组表达载体。在一些情况下，重组表达载体是非病毒载体。在一些情况下，重组表达载体是病毒构建体，诸如重组腺相关病毒构建体(参见例如美国专利号7,078,387)、重组腺病毒构建体、重组慢病毒构建体、重组逆转录病毒构建体、非整合病毒载体等。
合适的表达载体包括但不限于病毒载体(例如，基于以下的病毒载体：牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；腺病毒(参见例如Li等人,Invest Opthalmol Vis Sci 35:2543 2549,1994；Borras等人,Gene Ther 6:515 524,1999；Li和Davidson,PNAS 92:7700 7704,1995；Sakamoto等人,H Gene Ther 5:1088 1097,1999；WO 94/12649、WO 93/03769；WO 93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984以及WO 95/00655)；腺相关病毒(参见例如Ali等人,HumGene Ther 9:81 86,1998；Flannery等人,PNAS 94:6916 6921,1997；Bennett等人,InvestOpthalmol Vis Sci 38:2857 2863,1997；Jomary等人,Gene Ther 4:683 690,1997；Rolling等人,Hum Gene Ther 10:641 648,1999；Ali等人,Hum Mol Genet 5:591 594,1996；Srivastava的WO 93/09239、Samulski等人,J.Vir.(1989)63:3822-3828；Mendelson等人,Virol.(1988)166:154-165；以及Flotte等人,PNAS(1993)90:10613-10617)；SV40；单纯疱疹病毒；人免疫缺陷病毒(参见例如Miyoshi等人,PNAS 94:10319 23,1997；Takahashi等人,J Virol.73:7812 7816,1999)；逆转录病毒载体(例如，鼠白血病病毒、脾坏死病毒和衍生自逆转录病毒(诸如劳斯肉瘤病毒(Rous Sarcoma Virus)、哈维肉瘤病毒(HarveySarcoma Virus)、禽白血病病毒)的载体PNAS、慢病毒、人免疫缺陷病毒、骨髓增殖性肉瘤病毒和乳腺肿瘤病毒)；等等。众多合适的表达载体为本领域技术人员已知并且许多为商业上可获得的。
根据所用的宿主/载体系统，可在表达载体中使用多种合适的转录和翻译控制元件中的任一种，包括组成型启动子和诱导型启动子、转录增强子元件、转录终止子等(参见例如Bitter等人(1987)Methods in Enzymology,153:516-544)。
在一些情况下，编码MAPP的一个或多个多肽的核苷酸序列可操作地连接到控制元件，例如转录控制元件，诸如启动子。转录控制元件可以在真核细胞(例如，哺乳动物细胞，诸如人、仓鼠或小鼠细胞)或原核细胞(例如，细菌)中起作用。在一些情况下，编码靶向DNA的RNA和/或定点修饰多肽的核苷酸序列可操作地连接至多个控制元件，所述控制元件允许原核细胞和真核细胞中编码靶向DNA的RNA和/或定点修饰多肽的核苷酸序列的表达。
合适的真核启动子(在真核细胞中发挥作用的启动子)的非限制性实例包括巨细胞病毒(CMV)立即早期、单纯疱疹病毒(HSV)胸苷激酶、早期和晚期SV40、来自逆转录病毒的长端重复序列(LTR)和小鼠金属硫蛋白-I。适当的载体和启动子的选择完全在本领域普通技术人员的水平范围内。表达载体还可以含有翻译起始的核糖体结合位点和转录终止子。表达载体还可以包含用于扩增表达的适当序列。
E.遗传修饰的宿主细胞
本公开提供了一种遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞用编码或编码并表达MAPP蛋白或MAPP的更高阶复合物(例如，双链体MAPP)的核酸进行遗传修饰。
合适的宿主细胞包括真核细胞，诸如酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。在一些情况下，宿主细胞是哺乳动物细胞系的细胞。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系、非人灵长类动物细胞系、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)细胞系等。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于HeLa细胞(例如，美国典型培养物保藏所(ATCC)号CCL-2TM)、CHO细胞(例如，ATCC号CRL9618、CCL61、CRL-9618TM、CCL-61TM、CRL9096)、293细胞(例如，ATCC号CRL-1573TM)、Vero细胞、NIH 3T3细胞(例如，ATCC号CRL-1658)、Huh-7细胞、BHK细胞(例如，ATCC号CCL10、CCL-10TM)、PC12细胞(ATCC号CRL1721、CRL-1721TM)、COS细胞、COS-7细胞(ATCC号CRL1651)、RAT1细胞、小鼠L细胞(ATCC号CCLI.3)、人胚肾(HEK)细胞(ATCC号CRL1573)、HLHepG2细胞等。在一些情况下，宿主细胞是经过遗传修饰修饰使得其不合成内源MHC II类重链(MHC-H)的哺乳动物细胞。
可以使用遗传修饰的宿主细胞来产生MAPP和更高阶MAPP复合物。例如，可以使用遗传修饰的宿主细胞来产生双链体MAPP。例如，将包含编码MAPP多肽的核苷酸序列的表达载体引入宿主细胞中，从而生成遗传修饰的宿主细胞，所述遗传修饰的宿主细胞产生多肽(例如，分泌的可溶性蛋白)。
F.产生MAPP的方法
本公开提供了产生具有至少一个呈递T1D相关肽表位的掩蔽的TGF-βMOD的MAPP(例如，双链体MAPP)的方法。所述方法通常涉及在培养基中培养宿主细胞，所述宿主细胞用包含编码MAPP的核苷酸序列的重组表达载体进行遗传修饰(例如，本公开的遗传修饰的宿主细胞)；以及从遗传修饰的宿主细胞和/或培养基中分离MAPP。如上所述，在一些情况下，MAPP的单个多肽链在单独的核酸(例如，重组表达载体)中编码。在一些情况下，MAPP的所有多肽链均在单个重组表达载体中编码。
可以使用蛋白质纯化的标准方法从用于表达的宿主细胞(例如，从表达宿主细胞的裂解物)和/或培养宿主细胞的培养基中分离MAPP。例如，可以制备宿主细胞的裂解物，并且可以使用高效液相色谱法(HPLC)、排阻色谱法(例如，尺寸排阻色谱法)、凝胶电泳、亲和色谱法或其他纯化技术从裂解物中纯化MAPP。或者，在MAPP从表达宿主细胞分泌到培养基中的情况下，可以使用HPLC、排阻色谱法、凝胶电泳、亲和色谱法或其他纯化技术从培养基中纯化MAPP。在一些情况下，纯化MAPP，例如，生成的组合物包含至少80重量％、至少约85重量％、至少约95重量％或至少约99.5重量％的MAPP，这与同产品的制备及其纯化方法有关的污染物有关。百分比可以基于总蛋白质。
在一些情况下，例如，在表达的MAPP包含亲和标签或亲和结构域的情况下，可以使用亲和标签的固定结合配偶体来纯化MAPP。例如，在MAPP包含Ig Fc多肽的情况下，可以通过亲和色谱法从遗传修饰的哺乳动物宿主细胞和/或从包含MAPP的培养基中分离MAPP，例如在蛋白A柱、蛋白G柱等上。合适的哺乳动物细胞的实例是CHO细胞；例如，Expi-CHO-STM细胞(例如，ThermoFisher Scientific，目录号A29127)。
MAPP的多肽将自组装成异二聚体，并且在适用的情况下，在例如框架多肽或框架多肽和二聚化多肽之间自发形成二硫键。还如上所述，当两个框架多肽都包含具有合适的半胱氨酸残基的Ig Fc多肽时，二硫键将在各自的Ig Fc多肽之间自发形成以将框架多肽和二聚化多肽的两个异二聚体彼此共价连接来形成共价连接的双链体MAPP。
G.组合物
1.包含MAPP的组合物
本公开提供了组合物，包括药物组合物，其包含MAPP和/或MAPP的更高阶复合物(例如，双链体MAPP)。除了MAPP以外，药物组合物还可以包含一种或多种已知的载剂、赋形剂、稀释剂、缓冲液、盐、表面活性剂(例如，非离子表面活性剂)、氨基酸(例如，精氨酸)等，其中多种是本领域已知的并且不需要在本文中详细讨论。例如，参见“Remington:TheScience and Practice of Pharmacy”,第19版(1995)或最新版本，Mack Publishing Co。
在一些情况下，主题药物组合物将适用于向受试者施用，例如，将为无菌的和/或基本不含热原的。例如，在一些实施方案中，主题药物组合物将适用于向人受试者施用，例如，在组合物为无菌的并且不含可检测热原和/或其他毒素，或此类可检测热原和/或其他毒素低于容许极限的情况下。
组合物可以例如是水溶液或其他溶液、粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、栓剂、胶囊、混悬剂、喷雾剂等形式。组合物可以根据以下所述的各种施用途径来配制。
当MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)作为注射剂(例如，皮下、腹膜内、肌内、淋巴内和/或静脉内)直接施用到组织中时，制剂可以提供为即用剂型或非水性形式(例如，可重构的储存稳定的粉剂)或水性形式，诸如由药学上可接受的载剂和赋形剂组成的液体。还可以提供MAPP以增强主题蛋白质在施用后的血清半衰期。例如，蛋白质可以脂质体制剂的形式提供，被制备为胶体，或用于延长血清半衰期的其他常规技术。多种方法可用于制备脂质体，如以下所述：例如Szoka等人1980Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9:467、美国专利号4,235,871、4,501,728和4,837,028。制剂还可以控释或缓释形式提供。
在一些情况下，MAPP组合物包含：a)MAPP更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)；和b)盐水(例如，0.9％ NaCl)。在一些情况下，组合物是无菌的和/或基本上无热原的，或者可检测热原和/或其他毒素的量低于容许极限。在一些情况下，组合物适用于向人受试者施用，例如，在组合物为无菌的并且不含可检测热原和/或其他毒素，或者可检测热原和/或其他毒素的量低于容许极限的情况下。因此，本公开提供了一种组合物，其包含：a)MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)；和b)盐水(例如，0.9％ NaCl)，其中组合物是无菌的并且基本上不含可检测的热原和/或其他毒素，或者此类可检测热原和/或其他毒素低于容许极限。
其他适用于包含在适用于肠胃外施用的制剂中的组分的实例包括等渗无菌注射溶液、抗氧化剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质、悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。药物组合物可以存在于容器，例如无菌容器，诸如注射器中。制剂可以存在于单位剂量或多剂量密封容器，诸如安瓿和小瓶中，并且可以储存在冷冻干燥(冻干)条件下，只需要在临用前添加注射用无菌液体赋形剂(例如水)。可以用无菌粉剂、颗粒剂和片剂制备临时注射溶液和混悬剂。
制剂中MAPP的浓度变化很大。例如，MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)可以小于约0.1重量％(通常至少约2重量％)至多达20重量％至50重量％或更多(例如，1重量％至10重量％、5重量％至15重量％、10重量％至20重量％或20重量％-50重量％)存在。通常将主要基于流体体积、粘度和根据所选特定施用模式和患者需要的基于患者的因素来选择浓度。
本公开提供了一种包含组合物(例如，液体组合物)的容器。容器可以是例如注射器、安瓿等。在一些情况下，容器是无菌的。在一些情况下，容器和组合物都是无菌的并且基本上不含可检测热原和/或其他毒素，或此类可检测热原和/或其他毒素低于容许极限。药物组合物或包含本文阐述的组合物(例如，药物组合物)的容器可以包装为试剂盒。试剂盒可以包含例如组合物或包含组合物的容器以及这些材料的使用说明书。包装为试剂盒的材料可以是无菌的和/或基本上不含可检测热原和/或其他毒素，或此类可检测热原和/或其他毒素低于容许极限。
H.使用MAPP的方法
MAPP和更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)可用于调节T细胞活性。因此，本公开提供了调节T细胞活性的方法，所述方法通常涉及使靶T细胞与更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)接触。
1.调节T细胞活性的方法
本公开提供了一种选择性调节表位特异性T细胞的活性的方法，所述方法包括使T细胞与包含T1D肽表位的MAPP接触，其中使T细胞与MAPP接触选择性地调节表位特异性T细胞的活性。在一些情况下，接触发生在体内(例如，在哺乳动物诸如人、大鼠、小鼠、狗、猫、猪、马或灵长类动物中)。在一些情况下，接触发生在体外。在一些情况下，接触发生在体内。
在一些情况下，MAPP降低自身反应性T细胞和/或自身反应性B细胞的活性。在一些情况下，MAPP增加调节性T细胞(Treg)的数量和/或活性，从而导致自身反应性T细胞和/或自身反应性B细胞的活性降低。
在一些情况下，使MAPP与表位特异性CD4+T细胞接触。在一些情况下，表位特异性T细胞是CD4+CD8+(双阳性)T细胞(参见例如Boher等人Front.Immunol.,2019年3月29日于以下网址:doi.org/10.3389/fimmu.2019.00622和Matsuzaki等人J.Immuno.Therapy ofCancer 7:文章编号:7(2019))。在一些情况下，表位特异性T细胞是NK-T细胞(参见例如Nakamura等人J,Immunol.2003年8月1日；171(3):1266-71)。在一些情况下，表位特异性T细胞是T(Treg)。接触可以导致调节T细胞的活性，这可以导致但不限于调节性T细胞的增殖和/或维持(例如，当存在IL-2MOD多肽时，其效果可以通过视黄酸(诸如全反式视黄酸)的存在而放大)。
在一些情况下，使MAPP与表位特异性CD4+T细胞接触。在一些情况下，CD4+T细胞是Th1，其尤其产生干扰素γ等，并且其可以是自身免疫抑制的靶标。在一些情况下，CD4+T细胞是Th2细胞，其尤其产生IL-4等。Th2细胞可能受到抑制以抑制自身免疫性疾病诸如T1D。在一些情况下，CD4+T细胞是Th17细胞，其尤其产生IL-17等，并且其可以受到抑制以抑制自身免疫性疾病诸如T1D。在一些情况下，CD4+T细胞是Th9细胞，其尤其产生IL-9等，并且其可以受到抑制以抑制其在自身免疫性疾患诸如T1D中的作用。在一些情况下，CD4+T细胞是Tfh细胞，其尤其产生IL-21和IL-4等，并且其可以受到抑制以抑制自身免疫性疾病诸如T1D。
在一些情况下，与MAPP接触的T细胞是调节性T细胞(Treg)，其为CD4+、FOXP3+和CD25+。Treg可以抑制自身反应性T细胞。
本公开提供了一种增加Treg增殖的方法，所述方法包括使Treg与MAPP接触，其中所述接触增加了对MAPP呈递的表位具有特异性/选择性的Treg的增殖。本公开提供了一种增加个体中表位特异性Treg数量的方法，所述方法包括向个体施用MAPP，其中所述施用导致个体中对由MAPP呈递的表位具有特异性的Treg数量增加。例如，Treg的数量可以增加至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少2倍、至少2.5倍、至少5倍、至少10倍或大于10倍。
在一些情况下，与MAPP接触的细胞是辅助T细胞，其中使辅助T细胞与MAPP接触通过例如抑制转录因子T-bet和/或GATA3的表达来抑制或阻断对由MAPP呈递的表位具有特异性/选择性的Th1和/或Th2细胞的增殖和/或分化。Th1和/或Th2细胞的抑制导致效应细胞(诸如对表位具有特异性的CD8+细胞毒性T细胞)的活性和/或数量减少。
在一些情况下，MAPP与受到IL-2受体激活的T细胞相互作用，所述IL-2受体激活由T细胞环境中MAPP的IL-2MOD或IL-2提供，导致：(i)激活、增殖或维持对由MAPP呈递的表位具有特异性的T reg细胞；和/或(ii)抑制表位特异性Th1细胞发育；和/或(iii)抑制表位特异性Th2细胞发育；和/或(iv)抑制表位特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)发育。添加视黄酸(例如，全反式视黄酸)可以增强本文所述的携带TGF-β的MAPP在任何那些功能中的作用，特别是在MAPP携带一个或多个IL-2MOD的情况下T reg细胞的激活、增殖或维持。当表位是TD1相关表位时，MAPP可以用于抑制对所述表位的反应并实现T1D治疗。
MAPP可以在IL-2和PD1受体激动剂存在下与T细胞相互作用，其中一者或两者可以在相互作用期间由MAPP的IL-2或PD-L1 MOD和/或存在于T细胞环境中的IL-2或PD-L1提供。在这种情况下，MAPP与IL-2和PD1受体激动剂一起可以调节对MAPP呈递的表位具有特异性的Treg细胞(例如，诱导调节性T细胞)的发育、维持和功能。参见例如Exp Med.,206(13):3015–3029(2009)。因此，掩蔽的携带TGF-βMOD的MAPP以及IL-2受体和PD1受体的激动剂(例如，携带一个或多个掩蔽的TGF-βMOD以及另外一个或多个IL-2MOD和一个或多个PD-L1 MOD的MAPP)可以用于抑制对与T1D相关的自身抗原的表位的免疫反应。
2.治疗方法
本公开提供了治疗方法，所述方法包括向个体施用包含一定量的MAPP或更高阶MAPP诸如双链体MAPP的组合物，其有效选择性地调节个体的T1D表位特异性T细胞的活性并有效治疗所述个体。在一些情况下，治疗方法包括向有需要的个体施用药物组合物，所述药物组合物包含有效量的MAPP或更高阶MAPP诸如双链体MAPP，其可用于治疗人患者和实验动物模型(例如，非肥胖糖尿病(NOD)小鼠和生物育种(BB)大鼠)中发生的1型糖尿病(T1D)。
本公开提供了一种选择性调节个体中T1D表位特异性T细胞的活性的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量的MAPP或更高阶MAPP(诸如双链MAPP)的药物组合物，其中MAPP选择性调节个体中表位特异性T细胞的活性。选择性调节表位特异性T细胞的活性可以治疗个体的T1D。因此，本公开提供了一种治疗方法，所述治疗方法包括向有需要的个体施用包含有效量的MAPP或更高阶MAPP(诸如双链体MAPP)的药物组合物以达到治疗T1D的目的。
本公开提供了一种治疗个体的T1D的方法，所述方法包括向个体施用包含有效量的MAPP或更高阶MAPP(诸如双链体MAPP)的药物组合物，其中MAPP包含T1D肽表位(如上所述)，并且其中MAPP包含PD-L1。在一些情况下，MAPP或更高阶MAPP的“有效量”是当以一个或多个剂量施用于有需要的个体时，与施用MAPP前或未施用MAPP的情况下个体的自身反应性(即，与T1D相关抗原具有反应性)T细胞数量相比，将自身反应性CD4+和/或CD8+T细胞的数量减少例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少95％(例如，10％至50％或50％至95％)的量。在一些情况下，MAPP的“有效量”是当以一个或多个剂量施用于有需要的个体时减少所述个体中的Th1细胞因子(例如，IL-2、IL-10和TNF-α/β)的产生的量。在一些情况下，MAPP的“有效量”是当以一个或多个剂量施用于有需要的个体时减少所述个体中的Th2细胞因子(例如，IL-4、IL-5和/或IL-13)的产生的量。在一些情况下，MAPP的“有效量”是当以一个或多个剂量施用于有需要的个体时减少所述个体中的Th17细胞因子(例如，IL-17A、IL-17F和/或IL-22)的产生的量。在一些情况下，MAPP的“有效量”是当以一个或多个剂量施用于有需要的个体时改善个体的与T1D相关的一种或多种症状的量。在一些情况下，MAPP减少CD4+自身反应性T细胞的数量(即，与T1D相关抗原具有反应性的CD4+T细胞的数量)，这进而导致CD8+自身反应性T细胞的减少。在一些情况下，MAPP会增加对由MAPP呈递的T1D肽表位具有特异性的CD4+Treg的数量或活性(例如，IL-10和/或TGF-β产生)，这进而可能减少对表位具有特异性的CD4+自身反应性T细胞、B细胞和/或CD8+自身反应性T细胞的数量或活性。
本公开提供了一种降低患有或疑似患有T1D的个体(例如，哺乳动物诸如人)中的升高的血糖(例如，葡萄糖)的方法，所述方法包括向个体施用有效量的MAPP或一种或多种包含编码MAPP的核苷酸序列的核酸，其中MAPP包含T1D肽表位(如上所述)。个体可以是空腹血糖超过130或约140mg/dL或餐后血糖超过180或约200mg/dL的人，并且其中相对于接受MAPP之前的水平，治疗降低了个体的空腹血糖(例如像降低至低于130mg/dL的水平)或餐后血糖(例如，像降低至低于180mg/dL)。血糖的降低可以维持至少约一周、至少约两周、至少约一个月(30天)或多于一个月的时间。
本公开提供了一种降低患有或疑似患有T1D的个体(例如，哺乳动物诸如人)中的糖尿病前期糖基化血红蛋白(称为血红蛋白A1C(也称为血红蛋白A1c或HbA1c))水平(在5.7％至6.4％范围内)或糖尿病血红蛋白A1C水平(高于6.4％)的方法，所述方法包括向个体施用有效量的MAPP或一种或多种包含编码MAPP的核苷酸序列的核酸，其中MAPP包含T1D肽表位(如上所述)。相对于接受MAPP之前的水平，治疗降低了个体的糖尿病血红蛋白A1C(例如，至低于6.4％，且优选地低于5.7％)，或糖尿病前期A1C(例如像至低于5.7％且进入正常范围)。血红蛋白A1C的降低可以维持至少约一周、至少约两周、至少约一个月(30天)或多于一个月的时间。
3.选择性递送MOD的方法
本公开提供了一种将单独的TGF-β或其与MOD多肽诸如IL-2、4-1BBL、PD-L1或其任何亲和力降低的变体(例如，本文公开的PD-L1和/或IL-2变体)的组合递送至选定的T细胞或选定的T细胞群的方法，例如以使得TCR对给定的T1D相关表位具有特异性的方式进行递送。如本文所用，短语“选择性递送”和“选择性提供”意指其中MAPP提供可检测的TGF-β调节的大多数T细胞包含特异性或优先结合MAPP的表位的TCR。
因此，本公开提供了一种将TGF-β(掩蔽的TGF-β)和MOD多肽(诸如PD-L1多肽)或天然存在的MOD多肽的亲和力降低的变体(诸如PD-L1变体)选择性地递送至靶T细胞的方法，所述靶T细胞携带对由MAPP(例如，双链体MAPP)呈递的T1D表位具有特异性的TCR。本公开提供了一种将TGF-β和IL-2MOD多肽序列或IL-2的亲和力降低的变体选择性地递送至靶T细胞的方法，所述靶T细胞携带对由MAPP(例如，双链体MAPP)呈递的T1D表位具有特异性的TCR。所述方法包括使T细胞群与MAPP(例如，双链体MAPP)接触。T细胞群体可以是混合群体，其包含：i)具有对靶表位具有特异性的TCR的靶T细胞；和ii)对由MAPP相关肽表位呈递的靶表位不具有特异性的非靶T细胞(例如，对除表位特异性T细胞结合的表位以外的表位具有特异性的T细胞)。对存在于MAPP(例如，双链体MAPP)中的肽表位具有特异性的表位特异性T细胞与MAPP提供的肽MHC复合物结合，从而将MAPP中的TGF-β和任何其他另外的MOD多肽(例如，PD-L1或PD-L1的亲和力降低的变体)选择性地递送至结合的T细胞。
因此，本公开提供了一种将TGF-β和IL-2MOD、PD-L1 MOD和/或IL-2和/或PD-L1的亲和力降低的变体递送至T细胞的方法，所述T细胞对由MAPP呈递的T1D表位具有选择性。类似地，本公开提供了一种将TGF-β和IL-2、MOD多肽和/或天然存在的IL-2MOD多肽的亲和力降低的变体递送至靶T细胞的方法，所述靶T细胞对由MAPP呈递的T1D表位具有选择性。在一些情况下，IL-2MOD携带位置H16和/或F42处的取代(例如，H16和F42诸如H16A和F42A)(参见上文SEQ ID NO:116)。
例如，使MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)与T细胞群体接触，所述T细胞群体包含：i)对存在于MAPP或更高阶MAPP复合物中的表位具有特异性的靶T细胞；和ii)非靶T细胞，例如，对不是存在于MAPP或更高阶MAPP复合物中的表位的第二表位具有特异性的T细胞。接触群体会导致存在于MAPP中的TGF-β和任何其他MOD多肽基本上选择性递送(例如，天然存在的或变体MOD多肽)至靶T细胞。小于50％、小于40％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于5％、或小于4％、3％、2％或1％的MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)可以结合非靶T细胞，因此，将存在于MAPP中的掩蔽的TGF-βMOD多肽以及任何另外的MOD(例如，野生型或变体IL-2、PD-L1和/或4-1BBL MOD)选择性递送至靶T细胞(因此，不能有效递送至非靶T细胞)。
向其选择性递送MOD和/或变体MOD的T细胞群体可以是在体内。在一些情况下，向其选择性递送MOD和/或变体MOD的T细胞群体是在体外。
在一些情况下，向其选择性递送MOD和/或变体MOD的T细胞群体可以是在体内。在一些情况下，T细胞群体在体外。例如，从个体获得混合T细胞群体，并且与MAPP(例如，双链体MAPP)体外接触。此类接触可以包括在体外细胞培养的背景下将T细胞单次或多次暴露于一个或多个确定的剂量和/或暴露时间表，可以用于确定混合T细胞群体是否包含对由MAPP呈递的表位具有特异性的T细胞。对由MAPP呈递的表位具有特异性的T细胞的存在可以通过测定包含混合T细胞群体的样品来确定，所述T细胞群体包含对表位不具有特异性的T细胞(非靶T细胞)，并且可以包含对表位具有特异性的T细胞(靶T细胞)。已知的测定可以用于检测靶T细胞的所需调节，从而提供体外测定，其可以确定特定MAPP(例如，双链体MAPP)是否拥有与个体中存在的T细胞结合的表位，因此确定MAPP是否具有作为此个体的治疗组合物的潜在用途。用于检测靶T细胞的所需调节(例如，激活/增殖或抑制(inhibition)/抑制(suppression))的合适已知测定包括例如T细胞表型、数量和/或抗原特异性的流式细胞术表征。这种检测表位特异性T细胞的存在的测定(例如，伴随诊断)还可以包括另外的测定(例如，效应细胞因子ELISpot测定)和/或适当的对照(例如，抗原特异性和抗原非特异性多聚肽-HLA染色试剂)以确定MAPP或更高阶MAPP复合物是否选择性结合、调节(激活或抑制)和/或扩增靶T细胞。因此，例如，本公开提供了一种在获得自个体的混合T细胞群体中检测是否存在结合感兴趣表位的靶T细胞的方法，所述方法包括：a)使混合T细胞群体与包含本公开的表位的MAPP(例如，双链体MAPP)体外接触；和b)检测响应于所述接触的T细胞的调节(激活或抑制)和/或增殖，其中T细胞的调节和/或增殖指示靶T细胞的存在。替代地和/或另外地，如果所需T细胞群体(例如，Treg)的激活和/或扩增(增殖)是使用MAPP(例如，双链体MAPP)获得的，那么可以将全部或一部分包含激活/扩增的T细胞的T细胞群体作为治疗向个体施用。
MAPP靶向的T细胞群可以在个体体内。在此情况下，本公开的用于将TGF-β和任何另外的MOD多肽(例如，野生型或变体IL-2多肽)选择性递送至表位特异性T细胞的方法包括向个体施用MAPP(例如，双链体MAPP)。
在一些情况下，向其中选择性递送存在于MAPP中的TGF-β和任何另外的MOD多肽序列(例如，野生型或亲和力降低的IL-2和/或PD-L1 MOD)的表位特异性T细胞在本文中是指可以抑制(inhibit/suppress)自身反应性T细胞的活性的靶调节性T细胞(Treg)。
I.剂量
合适的剂量可以由主治医师或其他合格的医务人员基于各种临床因素来确定。如在医学领域中众所周知，用于任何一个患者的剂量取决于许多因素，包括患者的身材、体表面积、年龄、待施用的特定多肽或核酸、患者性别、施用时间和途径、一般健康状况以及目前正在施用的其他药物。MAPP(无论是作为单个异二聚体，还是如上所述作为更高阶复合物诸如双链体MAPP)可以以下量施用：每剂1ng/kg体重与20mg/kg体重之间；例如，0.1μg/kg体重至1.0mg/kg体重、0.1mg/kg体重至0.5mg/kg体重、0.5mg/kg体重至1mg/kg体重、1.0mg/kg体重至5mg/kg体重、5mg/kg体重至10mg/kg体重、10mg/kg体重至15mg/kg体重和15mg/kg体重至20mg/kg体重。预计剂量低于0.1mg/kg体重或高于20mg/kg，特别是考虑到上述因素。因此，量包括约0.1mg/kg体重至约0.5mg/kg体重、约0.5mg/kg体重至约1mg/kg体重、约1.0mg/kg体重至约5mg/kg体重、约5mg/kg体重至约10mg/kg体重、约10mg/kg体重至约15mg/kg体重、约15mg/kg体重至约20mg/kg体重和高于约20mg/kg体重。
技术人员将易于了解，剂量水平可以随着MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)、症状的严重程度和受试者对副作用的敏感性而变化。给定化合物的优选剂量可以由本领域的技术人员通过多种方式容易地确定。
在一些情况下，施用多剂量的MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)。MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)的施用频率可以根据多种因素中的任一种而变化，例如症状的严重程度、患者反应等。例如，在一些情况下，每月一次、每月两次、每月三次、每隔一周一次(qow)、每三周一次、每四周一次、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一天一次(qod)、每天一次(qd)、每天两次(qid)或每天三次(tid)施用MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)。
MAPP的施用持续时间(例如，施用MAPP的时间段)可以根据多种因素(例如，患者反应等)中的任一种变化。例如，可以在一段时间内施用MAPP，所述一段时间的范围为约一天至约一周、约两周至约四周、约一个月至约两个月、约两个月至约四个月、约四个月至约六个月、约六个月至约八个月、约八个月至约1年、约1年至约2年、约2年至约4年或更久，包括在患者的一生持续施用。
当治疗持续时间有限时，在成功治疗后，可能需要使患者接受定期维持治疗以防止T1D疾病状态的复发，其中MAPP以维持剂量施用，其范围为上述那些，即0.1mg/kg体重至约0.5mg/kg体重、约0.5mg/kg体重至约1mg/kg体重、约1.0mg/kg体重至约5mg/kg体重、约5mg/kg体重至约10mg/kg体重、约10mg/kg体重至约15mg/kg体重、约15mg/kg体重至约20mg/kg体重和高于约20mg/kg体重。定期维持治疗可以是每月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月一次、每六个月一次或频率低于每六个月一次。
J.施用途径
使用任何适用于药物递送的可用方法和途径(包括体内和体外方法，以及全身和局部施用途径)将MAPP或更高阶MAPP复合物施用于个体。可以使用适用于递送常规药物的任何可用的常规方法和途径(包括全身或局部途径)将MAPP或更高阶MAPP复合物施用于宿主。一般来说，考虑在方法中使用的施用途径包括但不一定限于肠道、肠胃外和吸入途径。
常规的和药学上可接受的施用途径包括肌内、气管内、皮下、真皮内、局部应用、静脉内、动脉内、经直肠、经鼻、口服和其他肠道和肠胃外施用途径。其中，静脉注射、肌内注射和皮下注射可能更为常用。施用途径可以根据例如MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)和/或所需效果来组合(如果需要)或调整。MAPP或更高阶MAPP复合物可以单剂量或多剂量施用。
K.适用于治疗的受试者
适用于用方法治疗的受试者包括患有T1D的个体，包括已诊断为患有T1D的个体，以及已接受T1D治疗但对治疗没有反应的个体。合适的受试者还可以包括已诊断为可能发展T1D或具有表明T1D即将发作的症状的个体。
适用于治疗的受试者包括患有T1D或具有发展T1D的遗传倾向(包括T1D家族史)的受试者(例如，患有T1D的患者的祖父母、父母或兄弟姐妹)。如上所述，许多血清型与发展T1D的巨大风险相关(例如，DR3、DR4、DQ2.5和DQ 8.1)，并且其他血清型与发展T1D的中等风险相关(例如，DR1、DR8、DR9和DQ5)。
适用于治疗的受试者包括患有T1D的个体，包括已诊断为患有T1D的个体，以及已接受T1D治疗但对治疗没有反应的个体，其空腹血糖(8小时不进食或不喝水后的血糖)超过约130mg/dL(或约140mg/dL)，且/或在用餐后2小时血糖高于约180mg/dL(或约200m/dL)(餐后高血糖)。这包括具有以下的个体：(i)T1D遗传倾向，诸如T1D家族史和/或与T1D相关的血清型(例如，DR4)，和(ii)空腹血糖升高超过130或约140mg/dL，或餐后血糖超过180或约200mg/dL。参见例如www.cdc.gov/diabetes/managing/managing-blood-sugar/bloodglucosemonitoring.html。
适用于治疗的受试者包括患有T1D的个体，包括已诊断为患有T1D的个体，以及已接受T1D治疗但对治疗没有反应的个体，其血红蛋白A1C水平为5.7％至6.4％(糖尿病前期水平)或血红蛋白A1C水平高于6.4％(糖尿病水平)。参见例如www.cdc.gov/diabetes/managing/managing-blood-sugar/a1c.html。这包括同时具有糖尿病前期或糖尿病A1C水平和T1D遗传倾向(诸如T1D家族史和/或与T1D相关的血清型(例如，DR4))的个体。
V.某些方面
上文所述的本发明主题的某些方面(包括实施方案/方面)可以单独或与一个或多个下文列举的其他方面组合地为有利的。此外，虽然已参考下文列举的某些方面以及在权利要求中公开了本发明主题，但是在不脱离本公开的领域和范围的情况下，对所描述的方面/实施方案的多种修改、改变和变化是可能的。因此，本公开不旨在限于所描述的实施方案、方面和权利要求，而是具有由本公开的语言及其等同物定义的完整范围。
1.一种多聚体抗原呈递多肽复合物(MAPP)，其包含：
框架多肽，其包含(例如，从N端到C端)二聚化序列和多聚化序列；
二聚化多肽，其包含与框架多肽的二聚化序列互补的对应物二聚化序列，并且通过共价(例如，二硫键)和/或非共价相互作用与框架多肽二聚化以形成MAPP异二聚体；以及至少一个(例如，至少两个)呈递序列和/或呈递复合物，
其中每个呈递序列包含T1D肽表位，以及MHC II类α1、α2、β1和β2结构域多肽序列；
其中每个呈递复合物包含共同构成T1D肽表位的呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列以及MHC II类α1、α2、β1和β2结构域多肽序列，其中肽表位是呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的一部分连同α1、α2、β1或β2结构域多肽序列中的至少一者；
其中二聚化多肽和/或框架多肽中的至少一者或两者(例如，框架多肽、二聚化多肽或两者)包含呈递序列或呈递复合物第一序列(例如，位于框架多肽的二聚化序列的N端侧上或二聚化多肽的对应物二聚化序列的N端侧上)；
其中框架多肽、二聚化多肽、呈递序列或呈递复合物包含(i)TGF-β序列，(ii)掩蔽序列，或(iii)至少一个(例如，至少两个)掩蔽的TGF-β免疫调节多肽(掩蔽的TGF-βMOD)，每个掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽序列和TGF-β序列；
其中框架多肽或二聚化肽(包括存在的呈递序列或呈递复合物)任选地包含至少一个(例如，至少两个、至少三个或更多个)另外的MOD(野生型和/或变体)或串联的另外的MOD对(两个野生型、两个变体或者一个野生型和一个变体)(例如，位于二聚化多肽或框架多肽的N端或C端，和/或位于二聚化序列的C端侧上)；并且
其中框架多肽、二聚化多肽、呈递序列、呈递复合物第一序列和/或呈递复合物第二序列任选地包含一个或多个独立选择的接头序列。(参见例如图1A和1B)。
应当理解，二聚化序列和多聚化序列是不同的多肽序列并且不以任何实质性方式彼此结合，例如，框架多肽在任何实质性程度上不会形成发夹结构、自聚合或自聚集。类似地，此方面可以遵循以下限制条款：框架多肽的二聚化序列和多聚化序列均不包含与图4至图8B中任一者中的MHC-II类多肽的至少20(例如，至少30、40、50、60或70)个连续氨基酸具有至少85％(例如，90％、95％或98％)序列同一性的MHC-II类多肽序列。还应当理解，α1、α2、β1和β2结构域多肽序列均不包含将MAPP锚定在细胞膜中的跨膜结构域或其部分。
2.如方面1所述的MAPP，其中所述MHC II类α1和α2结构域多肽序列包含与HLA DRα(DRA)、DQα1(DQA1)或DQα2(DQA2)α1和α2结构域多肽序列具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性的人II类α1和α2结构域多肽序列。
3.如方面1或2所述的MAPP，其中所述MHC II类β1和β2结构域多肽序列包含所选择的与HLA DRβ1(DRB1)、DRβ3(DRB3)、DRβ4(DRB4)、DRβ5(DRB5)、DQβ1(DQB1)和DQβ2(DQB2)β1和β2结构域多肽序列具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性的人II类β1和β2结构域多肽序列。
4.如任一前述方面所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物(例如，至少两个、三个或全部呈递序列和/或复合物)包含：
a.各自与图4中提供的HLA DRα(DRA)多肽序列的全部或至少约50个(例如，约60、70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性的α1和α2结构域多肽序列；和
b.各自与图5、6、7或8中任一者提供的HLA DRβ1(DRB1)、DRβ3(DRB3)、DRβ4(DRB4)或DRβ5(DRB5)多肽序列的全部或至少约50个(例如，约60、70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性的β1和β2结构域多肽序列。
例如，如方面4所述的MAPP可以是如下MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物(例如，至少两个或全部呈递序列和/或复合物)包含：
α1和α2结构域多肽序列，其各自与图4中提供的HLA DRα(DRA)多肽序列的α1或α2结构域具有至少98％或100％序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与图5、6、7或8中任一者提供的HLA DRβ1(DRB1)、DRβ3(DRB3)、DRβ4(DRB4)或DRβ5(DRB5)β1多肽序列的β1或β2结构域具有至少98％或100％序列同一性。
5.如方面1-4中任一项所述的MAPP，其中：
β1和β2结构域多肽序列各自与图5中提供的HLA DRβ1(DRB1)多肽序列(例如，DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0405、DRB1*0801或DRB1*0901)的全部或至少约50个(例如，至少约60、70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
例如，如方面5所述的MAPP可以是如下MAPP，其中β1和β2结构域多肽序列各自与图5中提供的HLA DRβ1(DRB1)多肽序列(例如，DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0405、DRB1*0801或DRB1*0901)的β1或β2结构域具有至少98％或100％序列同一性。
6.如方面5所述的MAPP，其中：
β1和β2结构域多肽序列各自与图5中提供的HLA DRβ1(DRB1)(DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0402或DRB1*0405)多肽序列的全部或至少约50个(例如，至少约60、70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
例如，如方面6所述的MAPP可以是如下MAPP，其中β1和β2结构域多肽序列各自与图5中提供的多肽序列DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0402，或DRB1*0405的β1或β2结构域具有至少98％或100％序列同一性。
7.如权利要求1至3中任一项所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含：
a.α1和α2结构域多肽序列，其各自与HLA DQα1或DQα2(DQA1或DQA2)多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
b.β1和β2结构域多肽序列，其各自与HLA DQβ1或DQβ2(DQB1或DQB2)多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
例如，如方面7所述的MAPP可以是如下MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物(例如，至少两个或全部呈递序列和/或复合物)包含：
α1和α2结构域多肽序列，其各自与HLA DQα1或DQα2(DQA1或DQA2)多肽序列的α1或α2结构域具有至少98％或100％序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与HLA DQβ1(DQB1)多肽序列的β1或β2结构域具有至少98％或100％序列同一性。
8.如权利要求1至3中任一项所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与HLA DQα1(DQA1)序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性，以及β1和β2结构域多肽序列，其各自与HLA DQβ1(DQB1)β1或β2结构域多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；或
(ii)α1和α2结构域多肽序列，其各自与HLA DQα2(DQA2)多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性，以及β1和β2结构域多肽序列，其各自与HLA DQβ2(DQB2)多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
例如，如方面8所述的MAPP可以是如下MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含以下之一：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1多肽序列的α1或α2结构域具有至少98％或100％序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1多肽序列的β1或β2具有至少98％或100％序列同一性；或
(ii)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA2多肽序列的α1或α2结构域具有至少98％或100％序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB2多肽序列的β1或β2具有至少98％或100％序列同一性。
9.如权利要求1至3中任一项所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1*0501多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1*0201多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；或
(ii)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1*0301多肽序列的全部或至少约60个(例如，至少约70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1*0302多肽序列的全部或至少约60个(例如，70、80、85或90个)连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
例如，如方面9所述的MAPP可以是如下MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含以下之一：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1*0501多肽序列的α1或α2结构域具有至少98％或100％序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1*0201多肽序列的β1或β2具有至少98％或100％序列同一性；或
(ii)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1*0301多肽序列的α1或α2结构域具有至少98％或100％序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1*0302多肽序列的β1或β2具有至少98％或100％序列同一性。
10.如任一前述方面所述的MAPP，其中所述MAPP包含至少一个：
(i)包含Gly(polyG或聚甘氨酸)、Gly和Ala(例如，GA或AG)、Ala和Ser(例如，AS或SA)、Gly和Ser(例如，GS、GSGGS、GGGS、GGSG、GGSGG、GSSGG、GSGGG、GGGSG、GSSSG、GGGGS)或Ala和Gly(例如，AAAGG)的接头，其中任一者可以重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次；
(ii)包含选自CGGGS、GCGGS、GGCGS、GGGCS和GGGGC的含半胱氨酸接头序列的接头，所述接头的其余部分包含Gly和Ser残基(例如，GGGGS单元可以重复1至10次)；或
(iii)至少一种刚性肽接头。
11.如任一前述方面所述的MAPP，其中所述MAPP包含独立地选自GCGASGGGGSGGGGS、GCGGSGGGGSGGGGSGGGGS、GCGGSGGGGSGGGGS和GCGGS(G4S)的一个或多个接头氨基酸序列，其中G4S单元可以重复1至10次(例如，重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次)；其中接头半胱氨酸残基任选地形成二硫键(例如，与MAPP的另一个肽序列)。
12.如任一前述方面所述的MAPP，其中至少一个(例如，至少两个)呈递序列包含一个或多个MOD多肽序列，并且其中呈递序列具有选自图15或图16中的那些的结构。
13.如任一前述方面所述的MAPP，其中当MAPP包含呈递序列时，并且其中呈递序列在N端到C端方向上包含：
a)所述T1D肽表位、所述β1、α1、α2和β2结构域多肽序列(参见例如图15结构A)；
b)所述T1D肽表位、所述β1、β2、α1和α2结构域多肽序列(参见例如图15结构B)；或
c)所述T1D肽表位、所述α1、α2、β1和β2结构域多肽序列(参见例如图15结构C)；并且
其中呈递序列任选地包含一个或多个MOD或变体MOD多肽序列；并且
其中所述呈递序列任选地包含一个或多个独立选择的接头序列(例如，在N端或C端连接所述肽表位、所述α1、α2、β1和/或β2结构域中的任何一个或多个)。
14.如任一前述方面所述的MAPP，其中至少一个(例如，至少两个)呈递序列包含一个或多个MOD多肽序列。
15.如任一前述方面所述的MAPP，其中至少一个呈递序列(例如，至少两个呈递序列)包含一个或多个MOD多肽序列，并且其中呈递序列具有选自图15A至C或图16A至I中列出的那些的结构。
16.如方面1至11中任一项所述的MAPP，其包含至少一个呈递复合物(例如，至少两个呈递复合物)，其中至少一个呈递复合物包含呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列，其中：
(i)呈递复合物第一序列包含α1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和β1结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1的N端)(参见例如图17，结构A、B和D)；
(ii)呈递复合物第一序列包含α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β2的N端)(参见例如图17，结构A、B和D)；
(iii)呈递复合物第一序列包含β1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和α1结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α1的N端)；
(iv)呈递复合物第一序列包含β2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和α2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α2的N端)；
(v)呈递复合物第一序列包含α1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和β1和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)；
(vi)呈递复合物第一序列包含α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和β1和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)；
(vii)呈递复合物第一序列包含α1和/或α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和β1和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)(参见例如图17结构A、B和D；图18结构B、D和F；以及图19结构B)；或
(viii)呈递复合物第一序列包含β1和/或β2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含T1D肽表位序列和α1和α2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α1和/或α2的N端)(参见例如图19结构D、E、F、G和H)，并且
其中所述至少一个呈递复合物任选地包含一个或多个或两个或更多个MOD或变体MOD。
17.如方面1至11中任一项所述的MAPP，其包含至少一个呈递复合物(例如，至少两个呈递复合物)，其中至少一个呈递复合物包含呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列，并且其中：
(i)呈递复合物第一序列包含肽表位序列和α1结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α1序列的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含β1结构域多肽序列；
(ii)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和α2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α2的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含β2结构域多肽序列(参见例如图17结构C；图19结构C)；
(iii)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和β1结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含α1结构域多肽序列(参见例如图17结构C；图28结构A、C和E；以及图19结构A)；
(iv)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β2的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含α2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α2的N端)(参见例如图17结构C；图28结构A、C和E；以及图19结构A、G和C)；
(v)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和α1结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α1序列的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含β1和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)；
(vi)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和α2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α2序列的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含β1和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)；
(vii)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和α1和/或α2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于α1和/或α2的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含β1和β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)(参见例如图19结构C)；或
(viii)呈递复合物第一序列包含T1D肽表位序列和β1和/或β2结构域多肽序列(例如，T1D表位位于β1和/或β2的N端)，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含α1和α2结构域多肽序列(参见例如图17结构C；图18结构A、B、C和E；以及图19结构A、D、E和F)；并且
其中所述至少一个呈递复合物任选地包含一个或多个或两个或更多个MOD或变体MOD。
18.如方面1至11中任一项所述的MAPP，其包含至少一个呈递复合物，所述呈递复合物包含一个或多个(例如，两个或更多个)MOD或变体MOD多肽序列。
19.如方面1至11中任一项所述的MAPP，其包含至少一个(例如，至少两个)呈递复合物，其中所述至少一个呈递复合物具有选自图17、18或19中的那些的结构。
20.如方面1至11中任一项所述的MAPP，其包含至少一个(例如，至少两个)呈递复合物，其中所述至少一个呈递复合物具有选自图20至22中的那些的结构。
21.如任一前述方面所述的MAPP，其中至少一个呈递序列、呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列在呈递序列、呈递复合物第一序列或呈递复合物第二序列的N端的10个氨基酸、15个氨基酸、20个氨基酸或25个氨基酸内具有T1D肽表位序列。
22.如任一前述方面所述的MAPP，其包含有包含含半胱氨酸接头的呈递序列或呈递复合物，其中含半胱氨酸接头中的半胱氨酸残基在MAPP的呈递序列与另一多肽之间或在MAPP(例如，具有呈递复合物第二序列)的呈递复合物第一序列和另一多肽之间形成二硫键。
23.如任一前述方面所述的MAPP，其包含至少一个呈递序列或呈递复合物，所述呈递序列或呈递复合物包含在MHCα1或α2结构域多肽序列之一与β1或β2结构域多肽序列之一之间形成的二硫键。
24.如任一前述方面所述的MAPP，其包含：
至少一个呈递序列或呈递复合物，其包含位于以下位置的半胱氨酸之间形成的二硫键：
α链位置3和β链位置19或20、
α链位置4和β链位置19或20、
α链位置28和β链位置151、152或153、
α链位置29和β链位置151、152或153、
α链位置80、81或82和β链位置33、
α链位置93和β链位置153或156、
α链位置94和β链位置120或156，或
α链位置95和β链位置120或156。
25.如任一前述方面所述的MAPP，其包含至少一个呈递序列或呈递复合物，所述呈递序列或呈递复合物包含位于以下位置的半胱氨酸之间形成的二硫键：
α链位置12和β链位置7或10、
α链位置80和β链位置5或7、
α链位置81和β链位置5或7，或
α链位置82和β链位置5或7。
26.如任一前述方面所述的MAPP，其包含：
至少一个呈递序列或至少一个呈递复合物，其包含具有结构(aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-[接头的其余部分(如果存在)])的含半胱氨酸多肽接头，所述结构位于肽表位(例如，N端肽表位)和β1结构域多肽序列之间，使得至少一个呈递序列或至少一个呈递复合物包含以下形式的子结构
{表位-aa1-aa2-aa3-aa4-aa5-[接头的其余部分(如果存在或键合)]-β1结构域}；
其中呈递序列或呈递复合物包含位于aa1至aa5中任一者处的半胱氨酸与位于MHCα链多肽序列(例如，α1或α2结构域多肽序列)中的半胱氨酸之间的二硫键。
27.如方面26所述的MAPP，其中位于MHCα链中的半胱氨酸位于成熟α链的位置72或75处(例如，缺乏其信号序列的成熟DRA多肽序列的位置72或75，或其他MHCα链序列中的等效位置，参见表5和相关文本)。
28.如方面26或27所述的MAPP，其中多肽接头的aa3是位于aa1至aa5中任一者处的半胱氨酸(Cys)。
29.如方面27至28中任一项所述的MAPP，其中aa1至aa5是氨基酸序列Gly Gly CysGly Ser。
30.如方面27至29中任一项所述的MAPP，其中呈递序列包含与SEQ ID NO:17的成熟DRA多肽的氨基酸26-203具有大于90％或大于95％序列同一性的多肽(参见图4)，并且位于aa1至aa5中任一者处的半胱氨酸与位于MHCα链多肽序列中的半胱氨酸之间的二硫键是在多肽接头的位置3(即aa3)处的半胱氨酸与DRA多肽的位置72或75(对应于图4中具有25个氨基酸信号肽的序列的位置97和100)处取代的半胱氨酸(即，I72C或K75C取代)之间形成的。
31.如任一前述方面所述的MAPP，其包含至少一个呈递序列或呈递复合物，所述呈递序列或呈递复合物包含位于以下位置的半胱氨酸之间形成的二硫键：
α链位置80和β链位置5或7；或
α链位置81和β链位置5或7。
32.如任一前述方面所述的MAPP，其中二聚化序列和多聚化序列独立地选自非种间序列或种间序列。
33.如方面32所述的MAPP，其中种间序列和非种间序列选自由以下组成的组：免疫球蛋白重链恒定区(Ig Fc，例如，CH2-CH3)；胶原凝集素多肽、卷曲螺旋结构域、亮氨酸拉链结构域；Fos多肽；Jun多肽；Ig CH1；Ig CLκ；Ig CLλ；不含二硫化物的杵臼结构(“KiH”)；具有稳定二硫键的杵臼结构(“KiHs-s”)；HA-TF；ZW-1；7.8.60；DD-KK；EW-RVT；EW-RVTs-s；和A107序列。
34.如任一前述方面所述的MAPP，其复合以形成双链体或更高阶MAPP，所述双链体或更高阶MAPP包含如方面1-33中任一项所述的至少第一MAPP异二聚体和第二MAPP异二聚体，其中：
(i)第一MAPP包含具有第一多聚化序列和第一二聚化序列的第一框架多肽，以及具有与第一二聚化序列互补的第一对应物二聚化序列的第一二聚化多肽；并且
(ii)第二MAPP包含具有第二多聚化序列和第二二聚化序列的第二框架多肽，以及具有与第二二聚化序列互补的第二对应物二聚化序列的第二二聚化多肽；
其中第一框架多肽和第二框架多肽通过任选地包含一个或多个链间共价键(例如，一个或两个二硫键)的第一多聚化序列和第二多聚化序列之间的结合相互作用来缔合，并且多聚化序列不相同(例如，不是同一类型和/或不一致)，并且基本上不与二聚化序列或对应物二聚化序列缔合或结合。参见例如图9至13中的双链体；并且
其中双链体或更高阶MAPP包含具有以顺式或反式存在的掩蔽序列和TGF-β序列的至少一个掩蔽的TGF-βMOD。
35.如方面34所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列是相同的，并且第一对应物二聚化序列和第二对应物二聚化序列是相同的。参见例如图11、12和13结构A至H。
36.如方面34所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列基本上不彼此缔合或结合。
37.如方面34所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列是形成种间对的种间多聚化序列，第一二聚化序列和第二二聚化序列是相同的，并且第一对应物二聚化序列和第二对应物二聚化序列是相同的。参见例如图9结构B和图11结构B和D。
38.如方面37所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列基本上不彼此缔合或结合。
39.如方面37至38中任一项所述的双链体MAPP，其中第一框架多肽或第二框架多肽包含不存在于另一个框架多肽上的至少一个MOD(例如，两个或三个MOD)，任选地其中至少一个MOD包含作为野生型MOD序列的变体的多肽序列。
40.如方面34所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列是相同的，第一二聚化序列和第一对应物二聚化序列是形成第一种间对的种间二聚化序列，并且
第二二聚化序列和第二对应物二聚化序列是形成第二种间对的种间二聚化序列。参见例如图9结构C。
41.如方面40所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列是相同的，并且第一对应物二聚化序列和第二对应物二聚化序列是相同的。参见例如图11结构A。
42.如方面40所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列不同，基本上不彼此缔合或结合。
43.如方面40所述的双链体MAPP，其中第一种间对的多肽与第二种间对的多肽不同(不一致)，并且不与第二种间对的多肽结合或相互作用。
44.如方面42至43中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化多肽或第二二聚化多肽包含不存在于另一个二聚化多肽上的至少一个MOD(例如，两个或三个MOD或变体MOD)任选地其中至少一个MOD包含作为野生型MOD序列的变体的多肽序列。
45.如方面34所述的双链体MAPP，其中
第一多聚化序列和第二多聚化序列是形成种间多聚化对的种间多聚化序列，
第一二聚化序列和第一对应物二聚化序列是形成第一种间对的种间二聚化序列，并且
第二二聚化序列和第二对应物二聚化序列是形成第二种间对的种间二聚化序列。参见例如图9结构D。
46.如方面45所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列是相同的，并且第一对应物二聚化序列和第二对应物二聚化序列是相同的。参见例如图11结构D。
47.如方面45所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列基本上不彼此缔合或结合。
48.如方面45所述的双链体MAPP，其中多肽的第一种间对的多肽与第二种间对的多肽不同(不一致)，并且不与第二种间对的多肽结合或相互作用。
49.如方面45至48中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化多肽或第二二聚化多肽包含不存在于另一个二聚化多肽上的至少一个MOD(例如，两个或三个MOD或变体MOD)，任选地其中至少一个MOD包含作为野生型MOD序列的变体的多肽序列。
50.如方面45至49中任一项所述的双链体MAPP，其中第一框架多肽或第二框架多肽包含不存在于另一个框架多肽上的至少一个MOD(例如，两个或三个MOD或变体MOD)，任选地其中至少一个MOD包含作为野生型MOD序列的变体的多肽序列。
51.如方面34至50中任一项所述的双链体MAPP，其中：
(i)当第一多聚化序列和第二多聚化序列不是种间多聚化对时，多聚化序列选自由以下组成的组：免疫球蛋白重链恒定区(例如，Ig CH2-CH3)、胶原凝集素家族二聚化序列、卷曲螺旋结构域和亮氨酸拉链结构域；并且
(ii)当第一多聚化序列和第二多聚化序列是种间多聚化对时，多聚化序列选自由以下组成的组：Fos和Jun多肽对、Ig CH1和Ig CLκ或λ恒定区多肽对和种间Ig Fc对(例如，KiH对、KiHs-s对、HA-TF多肽对、ZW-1多肽对、7.8.60多肽对、DD-KK多肽对、EW-RVT多肽对、EW-RVTs-s多肽对，或A107多肽对)。
52.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列、第一二聚化序列及其对应物第一二聚化序列以及第二二聚化序列及其对应物二聚化序列各自选自由以下组成的组：免疫球蛋白重链恒定区(例如，IgFc CH2-CH3)、胶原凝集素家族二聚化序列、卷曲螺旋结构域和亮氨酸拉链结构域，并且
其中第一二聚化序列和第二二聚化序列是独立选择的并且可以相同或不同。
53.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列选自由以下组成的组：免疫球蛋白重链恒定区(例如，Ig CH2-CH3区)、胶原凝集素家族二聚化序列、卷曲螺旋结构域和亮氨酸拉链结构域；并且
其中第一二聚化序列及其对应物二聚化序列独立地选自由以下组成的组：Fos和Jun多肽对、Ig CH1和Ig CLκ或λ恒定区多肽对、KiH对、KiHs-s对、HA-TF多肽对、ZW-1多肽对、7.8.60多肽对、DD-KK多肽对、EW-RVT多肽对、EW-RVTs-s多肽对和A107多肽对；并且
其中存在于MAPP中的二聚化序列和对应物二聚化对可以相同或不同。
54.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列选自由以下组成的组：Fos和Jun多肽对、Ig CH1和Ig CLκ或λ恒定区多肽对、KiH对、AKiHs-s对、HA-TF多肽对、ZW-1多肽对、7.8.60多肽对、DD-KK多肽对、EW-RVT多肽对、EW-RVTs-s多肽对和A107多肽对，
其中第一二聚化序列和第二二聚化序列及其对应物二聚化序列独立地选自由以下组成的组：免疫球蛋白重链恒定区(例如，Ig CH2-CH3)、胶原凝集素家族二聚化序列、卷曲螺旋结构域和亮氨酸拉链结构域；并且
其中存在于MAPP中的二聚化序列和对应物二聚化对可以相同或不同。
55.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列、第一二聚化序列及其对应物第一二聚化序列以及第二二聚化序列及其对应物二聚化序列各自选自由以下组成的组中的对：Fos和Jun多肽对、Ig CH1(参见例如图2A、2B和2E至2I)和Ig CLκ或λ恒定区多肽对、KiH对、KiHs-s对、HA-TF多肽对、ZW-1多肽对、7.8.60多肽对、DD-KK多肽对、EW-RVT多肽对、EW-RVTs-s多肽对和A107多肽对，并且
其中包含第一二聚化序列和第二二聚化序列的对可以相同或不同。
56.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列包含有包含CH2-CH3结构域的Ig Fc区，并且第一二聚化序列和第二二聚化序列包含独立选择的IgCH1、Ig CLκ或λ、亮氨酸拉链、Fos或Jun结构域。
57.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列包含IgFc区，并且第一二聚化序列和第二二聚化序列包含独立选择的Ig CH1、Ig CLκ或λ结构域。
58.如方面56至57中任一项所述的双链体MAPP，其中Ig CH2-CH3结构域选自由IgA、IgD、IgE、IgG和IgM Fc区组成的组。
59.如方面56至58中任一项所述的双链体MAPP，其中Ig Fc区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4 CH2-CH3结构域(例如，与SEQ ID NO:4-12的Fc区的CH2和/或CH3结构域的氨基酸序列具有至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％、至少约99％或100％氨基酸序列同一性)。
60.如方面56至59中任一项所述的双链体MAPP，其中Ig Fc区是IgG1CH2-CH3结构域。
61.如方面51所述的双链体MAPP，其中第一多聚化序列和第二多聚化序列是种间Ig Fc对。
62.如方面61所述的双链体MAPP，其中种间Ig Fc对选自由以下组成的组：KiH对、KiHs-s对、HA-TF多肽对、ZW-1多肽对、7.8.60多肽对、DD-KK多肽对、EW-RVT多肽对、EW-RVTs-s多肽对和A107多肽对。
63.如方面61或62所述的双链体MAPP，其中种间Ig Fc对是KiH对。
64.如方面61至63中任一项所述的双链体MAPP，其中杵臼结构对还包含至少一个稳定二硫键(例如，KiHs-s对)。
65.如方面61至64中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列包含独立选择的Ig CH1、Ig CLκ或λ、亮氨酸拉链、Fos或Jun结构域。
66.如方面61至64中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列包含Ig CH1或Ig CLκ或λ结构域。
67.如方面61至64中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和第二二聚化序列包含Ig CH1结构域。
68.如方面63至64中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列和/或第二二聚化序列不包含Ig CH1结构域。
69.如方面1至68中任一项所述的MAPP，其中二聚化序列及其对应物二聚化序列通过至少一个(例如，两个)二硫键共价连接；或
70.如方面34-69中任一项所述的双链体MAPP，其中第一MAPP的二聚化序列和对应物二聚化序列和/或第二MAPP的二聚化序列和对应物二聚化序列通过至少一个(例如，两个)二硫键共价连接。
71.如方面34至70中任一项所述的双链体MAPP，其中第一MAPP和第二MAPP的第一框架多肽和第二框架多肽的多聚化序列通过至少一个(例如，两个)二硫键共价连接。参见例如图11至13。
72.如方面34至71中任一项所述的双链体MAPP，其中第一二聚化序列及其对应物二聚化序列和/或第二二聚化序列及其对应物二聚化序列通过至少一个(例如，两个)二硫键共价连接，并且第一MAPP和第二MAPP的第一框架多肽和第二框架多肽的多聚化序列通过至少一个(例如，两个)二硫键共价连接。参见例如图12和13。
73.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中MAPP仅包含一个呈递序列或一个呈递复合物，或者双链体MAPP仅包含两个呈递序列或两个呈递复合物。参见例如图1A和1B。参见例如第一MAPP异二聚体或第二MAPP异二聚体。
74.如方面73所述的MAPP或双链体MAPP，其中MAPP的一个呈递序列或呈递复合物或双链体MAPP的两个呈递序列或呈递复合物设置在二聚化多肽上，并且进一步地，当MAPP或双链体MAPP包含呈递复合物时，呈递复合物第一序列位于二聚化多肽上(例如，位于对应物二聚化序列的N端侧上)。参见例如图1A和1B。
75.如方面73所述的MAPP或双链体MAPP，其中MAPP的一个呈递序列或呈递复合物第一序列或双链体MAPP的两个呈递序列或呈递复合物第一序列设置在框架多肽上(是框架多肽的一部分)(例如，位于二聚化序列的N端侧上)。
76.如方面34至72中任一项所述的双链体MAPP，其中双链体MAPP仅包含一个呈递序列或一个呈递复合物。
77.如方面76所述的双链体MAPP，其中一个呈递复合物的一个呈递序列或呈递复合物第一序列是二聚化多肽的氨基酸序列(是二聚化多肽的一部分)(例如，位于一个二聚化多肽的对应物二聚化序列的N端侧上)。
78.如方面76所述的双链体MAPP，其中一个呈递复合物的一个呈递序列或呈递复合物第一序列是框架多肽的氨基酸序列(是框架多肽的一部分)(例如，位于二聚化序列的N端侧上)。
79.如方面34至72中任一项所述的双链体MAPP，其中双链体MAPP包含至少两个呈递序列或至少两个呈递复合物。参见例如图1A和1B中的双链体。
80.如方面79所述的双链体MAPP，其中至少两个呈递复合物的至少两个呈递序列或呈递复合物第一序列之一是第一二聚化多肽的一部分，并且至少两个呈递序列或呈递复合物第一序列的第二个是第二二聚化多肽的一部分(例如，位于其对应物二聚化序列的N端侧上)。参见例如图1A和1B中的双链体。
81.如方面79所述的双链体MAPP，其中至少两个呈递复合物的至少两个呈递序列之一或呈递复合物第一序列中的每一个是第一框架多肽的一部分，并且至少两个呈递序列或呈递复合物第一序列的第二个是第二框架多肽的一部分(例如，位于其二聚化序列的N端侧上)。
82.如方面34至72中任一项所述的双链体MAPP，其中双链体MAPP包含至少四个呈递序列或四个呈递复合物。参见例如图10结构A至D。
83.如方面74所述的双链体MAPP，其中四个呈递序列中的每一个或四个呈递复合物的呈递复合物第一序列中的每一个各自是第一二聚化多肽、第二二聚化多肽、第一框架多肽和第二框架多肽中不同者的每个部分(例如，位于其二聚化序列或对应物二聚化序列的N端侧上)。参见例如图10结构A至D。
84.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中至少一个框架多肽或二聚化多肽包含一个或多个IgFc区，并且其中一个或多个IgFc区中的至少一者包含限制补体依赖性细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的一个或多个取代。
85.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中MAPP或双链体MAPP的框架多肽或二聚化多肽包含一个或多个IgFc区，并且其中一个或多个IgFc区中的至少一者包含在L234、L235、G236、G237、P238、S239、D270、N297、K322、P329和/或P331处的一个或多个取代，(分别为图2D中的野生型IgG1氨基酸序列的氨基酸L14、L15、G16、G17、P18、S19、N77、D50、K102、P109和P111)。
86.如方面85所述的MAPP或双链体MAPP，其中框架多肽或二聚化多肽包含IgFc区，所述IgFc区包含在N297处的取代(例如，N297A)。
87.如方面85所述的MAPP或双链体MAPP，其中框架多肽或二聚化多肽包含IgFc区，所述IgFc区包含在L234和/或L235处的取代(例如，L234A和/或L235A)。
88.如方面85所述的MAPP或双链体MAPP，其中框架多肽或二聚化多肽包含IgFc区，所述IgFc区包含在P331处的取代(例如，P331A或P331S)。
89.如方面85所述的MAPP或双链体MAPP，其中框架多肽或二聚化多肽包含Ig Fc区，所述Ig Fc区包含：(i)一个或多个选自由L234、L235和P331组成的组的取代(例如，L234F、L235E和/或P331S取代)；或(ii)D270、K322和P329中的任何一个或多个(例如，D270、K322和/或P329取代)。
90.如方面85所述的MAPP或双链体MAPP，其中框架多肽或二聚化多肽包含IgFc区，所述IgFc区包含：(i)一个或多个选自由L234、L235和P331组成的组的取代；或(ii)一个或多个选自由D270、K322和/或P329组成的组的取代。
91.如方面1至90中任一项所述的MAPP，其复合以形成两个异二聚体的双链体MAPP、三个异二聚体的三链体MAPP、四个异二聚体的四链体MAPP、五个异二聚体的五链体MAPP或六个异二聚体的六链体MAPP。
92.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中至少一个掩蔽的TGF-βMOD(例如，所有掩蔽的TGF-βMOD)的掩蔽序列和TGF-β序列与通过种间多聚化序列或种间二聚化序列相互作用的不同MAPP多肽(诸如不同框架多肽或二聚化多肽)的掩蔽序列和TGF-β序列部分“反式”存在(参见例如图13A至D，其中IgG KIH序列的相互作用使掩蔽序列接近TGF-β氨基酸序列)。
93.如方面92所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列或TGF-β序列之一存在于二聚化多肽的羧基端(例如，图1A中的位置5或5′)。
94.如方面92所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列或TGF-β序列之一存在于二聚化多肽或框架多肽的氨基端(例如，图1A、1B或9至12的位置1、1′、4、4'、4”或4′”)。
95.如方面92所述的双链体MAPP，其中掩蔽序列或TGF-β序列之一存在于第一框架多肽的羧基端，并且掩蔽序列和TGF-β氨基酸序列中的另一者存在于第二框架多肽的羧基端(例如，图1A或图1C或1D的(a)或(b)的位置3和3')。
96.如方面1至91中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中至少一个掩蔽的TGF-βMOD(例如，所有掩蔽的TGF-βMOD)包含以“顺式”存在的掩蔽序列和TGF-β序列作为单个多肽氨基酸序列的一部分(参见例如图13E至H)。
97.如方面96所述的MAPP或双链体MAPP，其中包含以“顺式”存在的掩蔽序列和TGF-β序列的至少一个掩蔽的TGF-βMOD(例如，每个掩蔽的TGF-βMOD)存在于二聚化多肽的羧基端(例如，图1A中的位置5或5′)。
98.如方面96所述的MAPP或双链体MAPP，其中包含以“顺式”存在的掩蔽序列和TGF-β序列的至少一个掩蔽的TGF-βMOD(例如，每个掩蔽的TGF-βMOD)存在于二聚化或框架多肽的氨基端(例如，图1A、1B或9至12的位置1、1'、4、4'、4”或4'”)。
99.如方面96所述的MAPP或双链体MAPP，其中包含以“顺式”存在的掩蔽序列和TGF-β序列的至少一个掩蔽的TGF-βMOD(例如，每个掩蔽的TGF-βMOD)存在于框架多肽的羧基端(例如，图1A或图1C或1D的(c)或(d)的位置3或3')。
100.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中存在于至少一个掩蔽的TGF-βMOD中的TGF-β序列是任选地包含C77的取代的TGF-β1多肽。
101.如方面100所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β1多肽包含与图24中列出的成熟TGF-β1氨基酸序列(SEQ ID NO:194)的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或112个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的氨基酸序列。
102.如方面100所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β1多肽包含与TGF-β1氨基酸序列AL DTNYCFSSTE KNCCVRQLYIDFRKDLGWKW IHEPKGYHAN FCLGPCPYIW SLDTQYSKVLALYNQHNPGA SAAPCCVPQA LEPLPIVYYV GRKPKVEQLS NMIVRSCKCS(SEQ ID NO:101)的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或连续112个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的氨基酸序列。例如，如方面154所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与成熟TGF-β1氨基酸序列SEQ ID NO:101具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的TGF-β1氨基酸序列。
103.如方面100至102中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β1氨基酸序列包含C77S取代。
104.如方面1-99中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中存在于至少一个掩蔽的TGF-βMOD中的TGF-β序列是任选地包含C77的取代的TGF-β2多肽。
105.如方面104所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β2多肽包含与图24中列出的成熟TGF-β2氨基酸序列(SEQ ID NO:109)的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或112个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的氨基酸序列。
106.如方面104所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β2多肽包含与TGF-β2氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或112个连续氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的氨基酸序列。例如，如方面158所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TGF-β2氨基酸序列SEQ ID NO:104具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的TGF-β2氨基酸序列。
107.如方面104至106中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β2氨基酸序列包含C77S取代。
108.如方面1-99中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中存在于至少一个掩蔽的TGF-βMOD中的TGF-β序列是任选地包含C77的取代的TGF-β3多肽。
109.如方面108所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β3多肽包含与图24列出的TGF-β3氨基酸序列(SEQ ID NO:196)的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或112个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的氨基酸序列。
110.如方面108所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β3多肽包含与TGF-β3氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或112个连续氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的氨基酸序列。例如，如方面162所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TGF-β3氨基酸序列SEQ ID NO:105具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性，并且任选地包含C77的取代的TGF-β3氨基酸序列。
111.如方面108至110中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β3氨基酸序列包含C77S取代。
112.如方面100至111中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中TGF-β序列包含在位置25、92和/或94中的一个或多个处的取代。
113.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中存在于至少一个掩蔽的TGF-βMOD中的掩蔽序列是TGF-β受体(TβR)多肽、抗TGF-β抗体(例如，抗TGF-β1、抗TGF-β2和/或抗TGF-β3)或抗体相关多肽/氨基酸序列(例如，抗原结合片段、Fab、Fab'、单链抗体、scFv、肽适体或纳米抗体氨基酸序列)。
114.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含全部或部分TβRI胞外域。
115.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与以下TβRI胞外域氨基酸序列的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个或103个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：LQCFCHLCTKDNFTCVT DGLCFVSVTE TTDKVIHNSM CIAEIDLIPR DRPFVCAPSS KTGSVTTTYC CNQDHCNKIELPTTVKSSPG LGPVEL(SEQ ID NO:107)(参见例如图26A)。例如，如方面167所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRI胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:107具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
116.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含全部或部分TβRII胞外域(参见例如图26B)。
117.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与TβRII同种型A胞外域氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110、至少120、至少130、至少140、至少150或至少154个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其任选地包含在对应于成熟同种型B的F30、D32、S52、E55和D118的F55、D57、S77、E80和D143中的任何一个或多个处的取代。例如，如方面169所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRII同种型A胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:108具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列，并且任选地包含在F55、D57、S77、E80和D143中的任何一个或多个处的取代。
118.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与TβRII同种型B胞外域氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110、至少120、至少130、至少140或143个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其任选地包含在成熟同种型B的F30、D32、S52、E55和D118中的任何一个或多个处的取代。例如，如方面170所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRII同种型B胞外域氨基酸序列SEQ IDNO:109具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
119.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与TβRII同种型B胞外域氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110、至少120、至少130、至少140或142个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其任选地包含在成熟同种型B的F30、D32、S52、E55和D118中的任何一个或多个处的取代。例如，如方面171所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRII同种型B胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:110具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
120.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与TβRII同种型BΔ14胞外域氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或114个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其任选地包含在成熟同种型B的F30、D32、S52、E55和D118中的任何一个或多个处的取代。例如，如方面172所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRII同种型BΔ14胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:111具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
121.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与TβRII同种型BΔ25胞外域氨基酸序列 的至少70、至少80、至少90、至少100或104个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其任选地包含在对应于成熟同种型B的F30、D32、S52、E55和D118的F55、D57、S77、E80和D143中的任何一个或多个处的取代。例如，如方面173所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRII同种型BΔ25胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:112具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
122.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与含有氨基酸序列 的TβRII同种型BΔ25胞外域的至少70、至少80、至少90、至少100、至少110或111个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其任选地包含在成熟同种型B的F30、D32、S52、E55和E55中的任何一个或多个处的取代。例如，如方面174所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRII同种型BΔ25胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:188具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
123.如方面117所述的MAPP或双链体MAPP，其包含TβRII同种型A序列中选自由以下组成的组的至少一个氨基酸(例如，至少两个氨基酸)的取代：同种型A的L52、F55、D57、S74、I75、T76、S77、I78、E80、V102、D143和E144。
124.如方面123所述的MAPP或双链体MAPP，其中至少一个氨基酸(例如，至少两个氨基酸)选自由以下组成的组L52A、F55A、D57A、D57N、S74A、I75A、T76A、S77A、S77L、I78A、E80A、V102A、D143A、D143R、E144A和/或E144Q。
125.如方面118-122中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其包含TβRII同种型B序列中选自由以下组成的组的至少一个氨基酸(例如，至少两个氨基酸)的取代：L27、F30、D32、S49、I50、T51、S52、I53、E55、V77、D118和/或E119处的取代。
126.如方面125所述的MAPP或双链体MAPP，其包含TβRII同种型B序列中选自由以下组成的组的至少一个氨基酸(例如，至少两个氨基酸)的取代：L27A、F30A、D32A、D32N、S49A、I50A、T51A、S52A、S52L、I53A、E55A、V77A、D118A、D118R、E119A和/或E119Q。
127.如方面125或126所述的MAPP或双链体MAPP，其包含TβRII同种型B序列中的D118A或D118R取代。
128.如方面127所述的MAPP或双链体MAPP，其不止包含TβRII同种型B序列中的F30A、D32N、S52L和/或E55A取代。
129.如方面118-128中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其包含TβRII受体成熟多肽氨基酸序列中的N端缺失。
130.如方面129所述的MAPP或双链体MAPP，其中成熟TβRII多肽序列的1至14或1至25氨基酸已从成熟多肽的N端缺失(参见例如图26B SEQ ID NO:111和112)。
131.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含全部或部分TβRIII胞外域(参见例如图26C)。
132.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含与TβRIII A同种型或B同种型胞外域序列(例如，提供于图26C的SEQ ID NO:200或SEQ ID NO:201)的至少70个、至少80个、至少90个、至少100个或120个氨基酸具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。例如，如方面173所述的MAPP或双链体MAPP可以包含与TβRIII同种型A或B胞外域氨基酸序列SEQ ID NO:200或201具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)氨基酸序列同一性的掩蔽序列。
133.如方面113所述的MAPP或双链体MAPP，其中掩蔽序列包含抗TGF-β抗体或抗体相关多肽/氨基酸序列。
134.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其包含：至少一个另外的MOD(野生型或变体)、串联的至少一个另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)，其中至少一个MOD或至少一个MOD对位于独立地选自位置1、1'、2、2'、3、3'、4、4'、4”、4”'、5和/或5′(参见图1A和1B)的一个或多个位置处，但条件是所选择的那些独立选择的位置不被掩蔽的TGF-βMOD掩蔽序列或TGF-β序列占据。
135.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中：
至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)位于：
(i)至少一个框架多肽二聚化序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图9和11中任一者的位置1和1')；
(ii)可以是框架多肽一部分的至少一个框架多肽二聚化序列和任何MHC II类多肽序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图10和图12中的位置4”和4”′)；和/或
(iii)至少一个框架多肽框架多聚化序列的C端侧上(例如，在C端)(参见例如图1和9至13中任一者的位置3和3′)。
136.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中：
至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)位于：
(i)每个框架多肽二聚化序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图9和11中任一者的位置1和1′)；
(ii)可以是框架多肽的一部分的每个框架多肽二聚化序列和任何MHC II类多肽序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图10和图12中的位置4”和4”′)；和/或
(iii)每个框架多肽框架多聚化序列的C端侧上(例如，在C端)(参见例如图1和9至13中任一者的位置3和3')。
137.如方面134至136所述的MAPP或双链体MAPP，其包含：
(i)至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)，位于至少一个(例如，每个)框架多肽二聚化序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图9和11中任一者的位置1和1′)，或位于可以是框架多肽的一部分的至少一个(例如，每个)框架多肽二聚化序列和任何MHC II类多肽序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图10和图12中的位置4”和4”′)；和/或
(ii)至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)，位于至少一个(例如，每个)框架多肽框架多聚化序列的C端侧上(例如，在C端)(参见例如图1和9至13中任一者的位置3和3′)。
138.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其包含：至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)，位于：
(i)至少一个(例如，两个或每个)二聚化多肽对应物二聚化序列的N端侧上(例如，在N端)(参见例如图1和10至12中任一者的位置4和4′)；和/或
(ii)至少一个(例如，两个或每个)二聚化多肽对应物二聚化序列的C端侧上(例如，在C端)(参见例如图1和9至12中任一者的位置5和5′)。
139.如方面134至138中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中当至少一个(例如，至少两个或每个)二聚化多肽包含呈递序列时，至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)可以位于：
(i)对应物二聚化序列与α1、α2、β1、β2序列和T1D表位序列之间；
(ii)任何α1、α2、β1、β2与T1D表位序列之间；
(iii)T1D表位与α1和α2或β1和β2序列之间；和/或
(iv)呈递序列的N端。参见图15。
140.如方面134至138中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中当二聚化多肽包含呈递复合物时，至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)可以位于：
(i)存在于呈递复合物第一序列中的对应物二聚化序列与任何α1、α2、β1和/或β2或T1D表位序列之间；
(ii)存在于呈递复合物第一序列中的任何α1、α2、β1和/或β2或T1D表位序列之间；
(iii)呈递复合物第一序列的N端；
(iv)呈递复合物第二序列的N端；
(v)存在于呈递复合物第二序列中的任何α1、α2、β1和/或β2与T1D表位序列之间；和/或
(vi)呈递复合物第二序列的C端。参见例如图17A至D、图18C至F、图19A至H、图20C至L和图21A至F。
141.如方面34至140中任一项所述的双链体MAPP，其包含：位置1和/或1'处的至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)。
142.如方面34至140中任一项所述的双链体MAPP，其包含：在位置1和/或1'处的至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)，以及在位置3和/或3'处的至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)。
143.如方面34至140中任一项所述的双链体MAPP，其包含：在位置1和/或1'处的至少一个另外的MOD(野生型或变体)或串联的另外的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)，以及在位置5和/或5'处的至少一个MOD(野生型或变体)或串联的MOD对(均为野生型、均为变体或一个野生型和一个变体)。
144.如任何前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的MOD(野生型或变体)或另外的MOD对(野生型或变体)独立地选自由以下组成的组：IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15、IL-17、IL-21、IL-23、CD7、CD30L、CD40、CD70、CD80、(B7-1)、CD83、CD86(B7-2)、HVEM(CD270)、ILT3(免疫球蛋白样转录物3)、ILT4(免疫球蛋白样转录物4)、Fas配体(FasL)、ICAM(细胞间粘附分子)、ICOS-L(诱导型共刺激配体)、JAG1(CD339)、淋巴毒素β受体、3/TR6、OX40L(CD252)、PD-L1、PD-L2、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3和4-1BBL多肽序列。
145.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的MOD(野生型或变体)或另外的MOD对(野生型或变体)独立地选自由以下组成的组：4-1BBL、PD-L1、IL-2、OX40L(CD252)、ICOS-L、ICAM、CD30L、CD40、CD83、HVEM(CD270)、JAG1(CD339)、CD70、CD80和CD86多肽序列。
146.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的MOD(野生型或变体)或另外的MOD对(野生型或变体)独立地选自由以下组成的组：IL-2、PD-L1、4-1BBL多肽序列及其任何变体。例如，MAPP或双链体MAPP可以包含至少一个IL-2MOD(野生型或变体)和/或至少一个PD-L1(野生型或变体)多肽序列。
147.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的MOD(野生型或变体)或另外的MOD对(野生型或变体)包含至少一个IL-2MOD(野生型或变体)多肽序列或串联的至少一个IL-2MOD对(野生型或变体)多肽序列(任选位于位置1或1')。
148.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的MOD(野生型或变体)或另外的MOD对(野生型或变体)包含至少一个PD-L1 MOD(野生型或变体)或变体MOD多肽序列，其任选地位于位置1或1′。
149.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的MOD(野生型或变体)或另外的MOD对(野生型或变体)包含至少一个4-1BBL MOD(野生型或变体)多肽序列，其任选地位于位置1或1′。
150.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其还包含另外的多肽或共价附接至一个或多个框架多肽和/或二聚化多肽的有效载荷。
151.如方面150所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的肽是亲和标签。
152.如方面150所述的MAPP或双链体MAPP，其中另外的肽选自由以下组成的组：抗体或其抗原结合片段/部分(例如，scFv或纳米抗体诸如重链纳米抗体或轻链纳米抗体)。
153.如方面1所述的MAPP，其中MAPP包含：
框架多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)T1D肽表位，(ii)人MHC II类β1和β2结构域，(iii)人II类α1和α2结构域，(iv)人或人源化IgG CH1，以及(v)Ig Fc区(例如，具有任选的“LALA”取代的CH2 CH3区)，(i)至(v)中的每一者任选地由独立选择的接头肽序列分隔；和
二聚化多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)人PD-L1细胞外结构域多肽和(ii)人或人源化κ轻恒定区，其中(i)和(ii)任选地通过接头肽序列分隔。参见例如图14结构A。
154.如方面1所述的MAPP，其中MAPP包含：
框架多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)人PD-L1细胞外结构域多肽，(ii)人或人源化CH3 KIHS-S臼，以及(iii)人IgG Fc序列(例如，具有任选的“LALA”取代的IgG1CH2和CH3区)，(i)至(iii)中的每一者任选地由独立选择的接头肽序列分隔；和
二聚化多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)T1D肽表位，(ii)人MHC II类β1和β2结构域，(iii)人II类α1和α2结构域，以及(iv)具有CH3 KIHS-S杵的人或人源化IgG1，(i)至(iv)中的每一者任选地由独立选择的接头肽序列分隔。参见例如图14结构B。
155.如方面1所述的MAPP，其中MAPP包含：
框架多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)人PD-L1细胞外结构域多肽，(ii)人或人源化CH1(任选地具有M13稳定取代)，以及(iii)人Ig Fc序列(例如，具有任选的“LALA”取代的IgG1 CH2和CH3区)，(i)至(iii)中的每一者任选地由独立选择的接头肽序列分隔；和
二聚化多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)T1D肽表位，(ii)人MHC II类β1和β2结构域，(iii)人II类α1和α2结构域，以及(iv)人或人源化κ轻链序列(任选地具有MD13稳定取代)，(i)至(iv)中的每一者任选地由独立选择的接头肽序列分隔。参见例如图14结构C。
156.如方面1所述的MAPP，其中MAPP包含：
框架多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)T1D肽表位，(ii)人MHC II类β1和β2结构域，(iii)人II类α1和α2结构域，(iv)IgG Fc区(例如，具有任选的“LALA”取代的CH2和CH3区)，(v)人或人源化IgG CH1，(i)至(v)中的每一者任选地由独立选择的接头肽序列分隔；和
二聚化多肽，其从N端到C端包含以下氨基酸序列：(i)人PD-L1细胞外结构域多肽和(ii)人或人源化κ轻恒定区，其中(i)和(ii)任选地通过接头肽序列分隔。参见例如图14结构D。
157.一种如方面153至156中任一项所述的MAPP的双链体，其中双链体通过IgFc多聚化序列之间的相互作用形成。
158.如方面153至157中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中免疫球蛋白(Ig)序列是Ig G序列(例如，Ig G1序列)。
159.如方面153至158中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类α1和α2是DRAα1和α2结构域。
160.如方面153至159中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类α1和α2结构域与DRA*0101α1和α2结构域具有超过95％同一性。
161.如方面153至160中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类β1和β2是DRB1β1和β2结构域。
162.如方面153至161中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类β1和β2结构域与DRB1*01:01、DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0405、DRB1*0801或DRB1*0901β1和β2结构域具有超过95％同一性。
163.如方面153至162中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类β1和β2结构域与DRB1*03:01或DRB1*04:01具有超过95％同一性。
164.如方面153至163中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类α1和α2结构域与DRA*01:01具有超过95％的同一性，并且MHC II类β1和β2结构域与DRB1*03:01或DRB1*04:01具有超过95％同一性。
165.如方面153至158中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类α1和α2是DQA1α1和α2结构域。
166.如方面153至158中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类α1和α2结构域与DQA*01:01、DQA*03:01、DQA*04:01或DQA*05:01具有超过95％同一性。
167.如方面165至166中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类β1和β2是DQB1β1和β2结构域。
168.如方面165至167中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类β1和β2结构域与DQB1*02:01、DQB1*03:02、DQB1*03:03、DQB1*04:02或DQB1*05:01β1和β2结构域具有超过95％同一性。
169.如方面165至168中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类β1和β2结构域与DQB1*02:01或DQB1*03:02具有超过95％同一性。
170.如方面165至169中任一项所述的MAPP或双链体MAPP，其中MHC II类α1和α2结构域与DQA*03:01或DQA*05:01具有超过95％的同一性，并且MHC II类β1和β2结构域与DQB1*02:01或DQB1*03:02具有超过95％同一性。
171.如任一前述方面所述的MAPP或更高阶MAPP(例如，双链体MAPP)，其中T1D肽表位选自以下的表位：前胰岛素原、胰岛素原、胰岛素、胰岛素B链、胰岛素A链、谷氨酸脱羧酶的65kDa同种型(GAD65)、谷氨酸脱羧酶的67kDa同种型(GAD67)、酪氨酸磷酸酶(IA-2)、热休克蛋白HSP65、胰岛特异性葡萄糖6-磷酸酶催化亚基相关蛋白(IGRP)、胰岛抗原2(IA2)以及锌转运蛋白(ZnT8)。
172.如方面171所述的MAPP或更高阶MAPP(例如，双链体MAPP)，其中T1D肽表位选自由以下组成的组：胰岛素原73-90(GAGSLQPLALEGSLQKR；SEQ ID NO:165)、胰岛素(InsA(1-15)肽GIVDQCCTSICSLYQ(SEQ ID NO:166))、胰岛素(InsA(1-15；D4E)肽GIVEQCCTSICSLYQ(SEQ ID NO:167))、GAD65(555-567)肽NFFRMVISNPAAT(SEQ ID NO:168)、GAD65(555-567；F557I)肽NFIRMVISNPAAT(SEQ ID NO:169)、胰岛抗原2(IA2)肽SFYLKNVQTQETRTLTQFHF(SEQ ID NO:170)、胰岛素原肽SLQPLALEGSLQSRG(SEQ ID NO:171)和胰岛素原肽GSLQPLALEGSLQSRGIV(SEQ ID NO:172；proIns 75-92(K88S))。
173.如方面171所述的MAPP或更高阶MAPP(例如，双链体MAPP)，其中T1D肽包含与人前胰岛素原氨基酸序列(其中斜体氨基酸1-24形成信号肽) 的氨基酸25-110具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的4至25个连续氨基酸。
174.如方面171所述的MAPP或更高阶MAPP(例如，双链体MAPP)，其中T1D肽表位具有氨基酸序列：GAGSLQPLALEGSLQKRG(SEQ ID NO:174)(proIns 73-90)、SLQPLALEGSLQKRG(SEQ ID NO:175)(proIns 76-90)、SLQPLALEGSLQSRG(SEQ ID NO:176)(proIns 76-90；K88S)、QPLALEGSLQKRG(SEQ ID NO:177)或序列QPLALEGSLQSRG(SEQ ID NO:178)。
175.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中T1D肽表位是约4个氨基酸(aa)至约25个氨基酸(例如，表位可以具有4个氨基酸至10个氨基酸、约6个氨基酸至约12个氨基酸、8个氨基酸至20个氨基酸、10个氨基酸至15个氨基酸、10个氨基酸至20个氨基酸、15个氨基酸至20个氨基酸或20个氨基酸至25个氨基酸的长度)。
176.如任一前述方面所述的MAPP或双链体MAPP，其中肽表位是约810个氨基酸至约20个氨基酸。
177.一种药物组合物，其包含如前述方面中任一项所述的MAPP或双链体MAPP。
178.一种治疗或预防T1D的方法，所述方法包括向患者/受试者(例如，有需要的糖尿病或糖尿病前期患者)施用包含有效量的如方面1至176中任一项所述的一种或多种MAPP或更高阶MAPP(例如，双链体MAPP)复合物的药物组合物。
179.如方面178所述的方法，其中相对于施用MAPP或双链体MAPP前的血红蛋白A1C或血糖水平，MAPP或双链体MAPP降低糖尿病或糖尿病前期患者/受试者中的血红蛋白A1C或血糖(例如，葡萄糖)水平。
180.如方面178至179中任一项所述的方法，其中将一种或多种MAPP或双链体MAPP施用于哺乳动物患者或受试者。
181.如方面178至180中任一项所述的方法，其中受试者是人。
182.如方面178至180中任一项所述的方法，其中受试者非人(例如，啮齿动物、兔类动物、牛、犬、猫、啮齿动物、鼠、山羊、猿、绵羊、马、兔、猪等)。
183.一种根据方面1至176中任一项所述的MAPP或双链体MAPP的框架多肽，其任选地包含另外的多肽。
184.一种根据方面1至176中任一项所述的MAPP或双链体MAPP的二聚化多肽，其任选地包含另外的多肽。
185.一种编码如方面1至176中任一项所述的框架多肽的核酸序列，其中框架多肽任选地包含另外的多肽。
186.一种编码如方面1至176中任一项所述的二聚化多肽的核酸序列，其中二聚化多肽任选地包含另外的多肽。
187.一种或多种核酸，其包含编码根据方面1至176中任一项所述的MAPP或更高阶MAPP复合物(例如，双链体MAPP)的一种或多种核酸序列。
188.如方面187所述的一种或多种核酸，其包含可操作地连接至启动子的编码框架多肽的核酸序列，和/或可操作地连接至启动子的编码二聚化多肽的核酸序列。
189.一种或多种重组表达载体，其包含一种或多种核酸分子，所述核酸分子包含编码如实施方案1至176中任一项所述的MAPP的序列。
190.一种产生表达MAPP或双链体MAPP的细胞的方法，所述方法包括将根据方面187或188所述的一种或多种核酸分子或根据方面189所述的一种或多种表达载体在体外引入细胞中；选择产生MAPP或双链体MAPP的细胞；以及任选地选择包含未整合或整合到至少一条细胞染色体中的一种或多种核酸的全部或部分的细胞。
191.如方面190所述的方法，其中细胞是选自由以下组成的组的哺乳动物细胞系的细胞：HeLa细胞、CHO细胞、293细胞、Vero细胞、NIH 3T3细胞、Huh-7细胞、BHK细胞、PC12、COS细胞、COS-7细胞、RAT1细胞、小鼠L细胞、人胚肾(HEK)细胞和HLHepG2细胞。
192.一种细胞，其瞬时或稳定表达由如方面190或191所述的方法制备的MAPP或双链体MAPP。
193.如方面192所述的细胞，其中相对于其他方面相同但不表达MAPP或双链体MAPP的细胞，所述细胞表达约25至约350(例如，20-50、50-100、100-200、200-300、300-350)mg/l或更多的MAPP或双链体MAPP，而不显著降低(例如，降低小于5％、10％或15％)活力。
194.一种将一个或多个MOD多肽和/或变体MOD多肽选择性递送至患有或疑似患有T1D的细胞、组织、患者或受试者的方法，所述方法包括向患有或疑似患有T1D的患者/受试者施用有效量的一种或多种MAPP或更高阶MAPP(例如，如方面1至176中任一项所述的双链体MAPP)。
VI.实施例
实施例1
实施例1示出了异二聚体形式的8种MAPP和4种对照蛋白的制备，每个异二聚体包含框架多肽和二聚化多肽，其通过其种间IgG1 CH2-CH3“KIH”序列之间的相互作用形成了更高阶双链体结构。MAPP蛋白1-8包含二聚化多肽，所述二聚化多肽从N端到C端包含肽表位序列、与具有插入接头的Ig Cκ(Cκ)轻链序列融合的呈递序列。参见例如图1A(一般性地)和(更具体地)图1C的“(a)和(b)”，其示出了双链体MAPP，其在二聚化肽的末端具有呈递序列并且携带具有以“反式”置于框架多肽的羧基端(MAPP的位置3和3')的掩蔽肽和掩蔽的TGF-β肽的MAPP。附接至Cκ(Cκ)多肽序列的呈递序列的整体结构示于图24(b)。图37在(a)中提供了具有在MAPP的位置1和1’处具有H16A F42A取代的变体IL-2MOD的构建体的更详细的呈现。将之间的链内二硫键用于稳定MHCα和β多肽序列，在这种情况下在R5C和P81C取代之间。类似地，CH1和Cκ(Cκ和κ轻链或κL)之间的链间二硫键(以红色显示)稳定了它们的相互作用。CH1和Cκ序列包含发现基于Chen等人在MAbs8(4):761–774(2016)中描述的针对HIVgp140的MD13抗体来稳定其相互作用的取代(参见例如图2I和3A)。框架多肽种间多聚化杵臼结构(KIH)序列相互作用通过铰链区二硫键对和多聚化序列中以虚线示出的另外的二硫键来稳定，使KIH成为种间KIHs-s序列。四种对照蛋白共享上述八种MAPP的结构，然而，二聚化肽上不存在表位、呈递序列和相关接头。
下表详细介绍了八种MAPP蛋白和四种对照蛋白中的每一种。肽表位序列标记为TXA23和OVA。TXA23代表人H+/K+ATP酶α亚基的氨基酸630–641(参见例如GenBank：登录号BAD96979.1，其中这些氨基酸残基位于位置632-643处)。OVA代表来自原鸡属(鸡)卵清蛋白的肽表位，特别是氨基酸324-340(参见例如Genbank登录号AUD54707.1氨基酸324-340)。MAPP中的呈递序列是鼠II类MHC序列。更具体地，α和β链序列衍生自具有P81C取代的鼠II类I-adα链(参见例如GenBank：AAR19089.1)；以及具有R5C取代的II类I-adβ链(参见例如NCBI登录GI：4139969)。P81C和R5C取代允许形成使MHC序列稳定的链内二硫键。IL-2MOD序列出现在一个(1X)或两个(2X)框架多肽的N端处，并显示为在具有杵(位置“1”)或具有臼(位置1′)的框架多肽上，如图1A和图1C所描绘。图28中提供了MAPP和对照蛋白中每种多肽的序列。
培养物中(例如，在CHO细胞中)表达的并通过在固定化蛋白A上进行尺寸分离和亲和色谱纯化的蛋白质的还原性SDS PAGE凝胶提供于图27(b)中。凝胶的左侧提供了最左侧泳道中出现的蛋白质标准品的分子量。凝胶顶部的数字对应于下表中的“蛋白质编号”。下表中提供了每个MAPP和对照蛋白中肽的理论分子量，以及双链体MAPP和对照蛋白在尺寸排阻色谱上的保留时间。还提供了基于尺寸排阻色谱分析的曲线下面积的未聚集双链体MAPP和对照蛋白(％单体)的MAPP和对照蛋白的量。
其他表位(包括T1D相关表位)以及对这些表位具有特异性的人和小鼠MHC序列可以用于置换本实施例中采用的示例性表位和鼠MHC序列。
序列表
<110> 库尔生物制药有限公司(Cue Biopharma, Inc.)
<120> 携带TGF-β的抗原呈递多肽复合物及其使用方法
<130> 2910-29 pct
<150> 63/177,954
<151> 2021-04-21
<160> 209
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 353
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr
1 5 10 15
Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe
20 25 30
Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val
35 40 45
Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr
50 55 60
Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly
65 70 75 80
Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp
85 90 95
Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro
100 105 110
Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser
115 120 125
Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn
130 135 140
Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe
145 150 155 160
Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu
165 170 175
Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys
180 185 190
Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr
195 200 205
Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn
210 215 220
Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu Glu Leu
225 230 235 240
Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe Ser
245 250 255
Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu Pro
260 265 270
Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln Gly
275 280 285
Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu Asp
290 295 300
Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala Leu
305 310 315 320
Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys Pro
325 330 335
Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys
340 345 350
Tyr
<210> 2
<211> 383
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg His
1 5 10 15
Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly Tyr
20 25 30
His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser Gln
35 40 45
Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr Met
50 55 60
Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly Glu
65 70 75 80
Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu Ile
85 90 95
Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr
100 105 110
Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro
115 120 125
Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu
130 135 140
Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys
145 150 155 160
Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val
165 170 175
Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val
180 185 190
Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys
195 200 205
Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn
210 215 220
Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp
225 230 235 240
Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro
245 250 255
Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val
260 265 270
Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala
275 280 285
Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu
290 295 300
Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala
305 310 315 320
Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Arg Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp
325 330 335
Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr
340 345 350
Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser
355 360 365
Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys
370 375 380
<210> 3
<211> 222
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Ala Asp Pro Cys Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser
1 5 10 15
Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr
20 25 30
Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr
35 40 45
Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu
50 55 60
Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val
65 70 75 80
Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr
85 90 95
His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser
100 105 110
Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp
115 120 125
Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe
130 135 140
Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser
165 170 175
Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu
180 185 190
Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro
195 200 205
Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 4
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 5
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 6
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 7
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 8
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 9
<211> 325
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser
1 5 10 15
Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
20 25 30
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
35 40 45
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
50 55 60
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr
85 90 95
Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro
100 105 110
Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
115 120 125
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
130 135 140
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
145 150 155 160
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
165 170 175
Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu
180 185 190
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala
195 200 205
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
210 215 220
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
225 230 235 240
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
245 250 255
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
260 265 270
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
275 280 285
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
290 295 300
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
305 310 315 320
Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 10
<211> 246
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Leu Lys Thr
1 5 10 15
Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
20 25 30
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
35 40 45
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
50 55 60
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
65 70 75 80
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
85 90 95
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
100 105 110
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
115 120 125
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
130 135 140
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
145 150 155 160
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
165 170 175
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
180 185 190
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
195 200 205
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
210 215 220
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
225 230 235 240
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 11
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 12
<211> 223
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
<210> 13
<211> 453
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn
1 5 10 15
Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp
20 25 30
Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser
35 40 45
Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln
65 70 75 80
Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn
85 90 95
Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys
100 105 110
Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg
115 120 125
Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile
130 135 140
Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val Thr
145 150 155 160
Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr
165 170 175
Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln
180 185 190
Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln
195 200 205
Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val
210 215 220
Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr
245 250 255
Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr Asn
260 265 270
Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala
275 280 285
Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr
290 295 300
Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg
305 310 315 320
Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro
325 330 335
Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu
340 345 350
Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg
355 360 365
Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro
370 375 380
Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val
385 390 395 400
Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Val Ala
405 410 415
His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Thr Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr
435 440 445
Ala Gly Thr Cys Tyr
450
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
Phe Thr Val Arg Glu Thr Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
1 5 10 15
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
20 25 30
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
35 40 45
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
50 55 60
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
85 90 95
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
100 105 110
<210> 15
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 15
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 16
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 16
Gly Gln Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 17
<211> 254
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
Met Ala Ile Ser Gly Val Pro Val Leu Gly Phe Phe Ile Ile Ala Val
1 5 10 15
Leu Met Ser Ala Gln Glu Ser Trp Ala Ile Lys Glu Glu His Val Ile
20 25 30
Ile Gln Ala Glu Phe Tyr Leu Asn Pro Asp Gln Ser Gly Glu Phe Met
35 40 45
Phe Asp Phe Asp Gly Asp Glu Ile Phe His Val Asp Met Ala Lys Lys
50 55 60
Glu Thr Val Trp Arg Leu Glu Glu Phe Gly Arg Phe Ala Ser Phe Glu
65 70 75 80
Ala Gln Gly Ala Leu Ala Asn Ile Ala Val Asp Lys Ala Asn Leu Glu
85 90 95
Ile Met Thr Lys Arg Ser Asn Tyr Thr Pro Ile Thr Asn Val Pro Pro
100 105 110
Glu Val Thr Val Leu Thr Asn Ser Pro Val Glu Leu Arg Glu Pro Asn
115 120 125
Val Leu Ile Cys Phe Ile Asp Lys Phe Thr Pro Pro Val Val Asn Val
130 135 140
Thr Trp Leu Arg Asn Gly Lys Pro Val Thr Thr Gly Val Ser Glu Thr
145 150 155 160
Val Phe Leu Pro Arg Glu Asp His Leu Phe Arg Lys Phe His Tyr Leu
165 170 175
Pro Phe Leu Pro Ser Thr Glu Asp Val Tyr Asp Cys Arg Val Glu His
180 185 190
Trp Gly Leu Asp Glu Pro Leu Leu Lys His Trp Glu Phe Asp Ala Pro
195 200 205
Ser Pro Leu Pro Glu Thr Thr Glu Asn Val Val Cys Ala Leu Gly Leu
210 215 220
Thr Val Gly Leu Val Gly Ile Ile Ile Gly Thr Ile Phe Ile Ile Lys
225 230 235 240
Gly Leu Arg Lys Ser Asn Ala Ala Glu Arg Arg Gly Pro Leu
245 250
<210> 18
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Leu Lys Phe Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Leu Leu Glu Arg Cys Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Glu Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 19
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Leu Lys Phe Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Leu Leu Glu Arg Cys Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Ala Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Glu Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 20
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Leu Lys Phe Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Leu Leu Glu Arg Cys Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Glu Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Glu Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 21
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asn Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Arg Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 22
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asn Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Arg Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 23
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Arg Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 24
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 25
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Glu Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 26
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 27
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 28
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Ser Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 29
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 30
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
Met Val Cys Leu Lys Phe Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 31
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Gln Pro Arg Phe Leu Trp Gln Gly Lys Tyr Lys Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Gln Phe Leu Glu Arg Leu Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Gly Gln Val Asp Thr Val Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Met Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 32
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Gly Glu Cys Tyr Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Ser Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Leu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Ser Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 33
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Gly Glu Cys Tyr Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Leu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Ser Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 34
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Gly Glu Cys Tyr Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Ser Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Leu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Ser Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 35
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Gln Pro Arg Phe Leu Lys Gln Asp Lys Phe Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu His Arg Gly Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asn Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Val Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Glu Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Met Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 36
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Glu Val Lys Phe Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Leu Leu Glu Arg Arg Val His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Ala Arg Tyr Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Gln Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Met Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Pro Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 37
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Glu Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 38
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Glu Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Glu Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 39
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Glu Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 40
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Gly Glu Cys Tyr Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Leu Leu Glu Arg His Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Leu Leu Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Ala Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 41
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asn Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Glu Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 42
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Ser Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Asp Lys Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 43
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Ala Ala Glu His Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His Tyr Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 44
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asn Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 45
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys Gln Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 46
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
Met Val Cys Leu Arg Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Val Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Tyr Ser Thr Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asn Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Arg Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 47
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 47
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 48
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 48
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 49
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 49
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg His Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 50
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 51
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 51
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 52
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Phe Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 53
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ser Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Ile
85 90 95
Leu Glu Gln Ala Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 54
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 54
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Trp Gln Pro Lys Arg Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Ser Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Leu Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Met Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 55
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Ser Leu Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Arg Leu Ala Phe Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Leu Arg Lys Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Arg Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Gln Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Ala Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 56
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 56
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Ser Leu Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Arg Leu Ala Phe Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Leu Arg Lys Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Gln Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Gln Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Ala Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 57
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Ser Leu Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Arg Leu Ala Phe Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Leu Leu Lys Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Glu Arg His Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Ala Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Arg
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Gln Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Gln Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Phe Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Ser Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 58
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Ser Leu Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Arg Leu Ala Phe Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Glu Leu Leu Lys Ser Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Glu Arg Tyr Phe His Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Gln Lys Arg Gly Gln Val Asp Asn Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro Gln Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile His Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Phe Leu Ser
260 265
<210> 59
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Thr Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Gln Pro Arg Phe Leu Glu Gln Ala Lys Cys Glu Cys His Phe Leu Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Trp Asn Leu Ile Arg Tyr Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Ala Arg Tyr Asn Ser Asp Leu Gly Glu Tyr Gln Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg Tyr Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Ser Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Met Met Ser Pro Leu Thr Val Gln Trp Ser Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Thr Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Leu Leu Ser
260 265
<210> 60
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Thr Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Gln Pro Arg Phe Leu Glu Gln Ala Lys Cys Glu Cys His Phe Leu Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Trp Asn Leu Ile Arg Tyr Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Tyr Ala Arg Tyr Asn Ser Asp Leu Gly Glu Tyr Gln Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu
85 90 95
Leu Glu Arg Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg Tyr Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Val Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Gln Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Met Met Ser Pro Leu Thr Val Gln Trp Ser Ala Arg Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Thr Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Arg Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu Gln Pro Thr Gly Leu Leu Ser
260 265
<210> 61
<211> 266
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Tyr Met Ala Lys Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr
20 25 30
Arg Pro Arg Phe Leu Gln Gln Asp Lys Tyr Glu Cys His Phe Phe Asn
35 40 45
Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu His Arg Asp Ile Tyr Asn Gln Glu
50 55 60
Glu Asp Leu Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr
65 70 75 80
Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe
85 90 95
Leu Glu Asp Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Glu Pro Lys Val
115 120 125
Thr Val Tyr Pro Ala Arg Thr Gln Thr Leu Gln His His Asn Leu Leu
130 135 140
Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val Arg Trp
145 150 155 160
Phe Arg Asn Ser Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr Gly Leu
165 170 175
Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu Glu Thr
180 185 190
Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His Pro Ser
195 200 205
Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Gln Ser Glu Ser Ala
210 215 220
Gln Ser Lys Met Leu Ser Gly Val Gly Gly Phe Val Leu Gly Leu Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Ala Gly Leu Phe Ile Tyr Phe Lys Asn Gln Lys Gly His
245 250 255
Ser Gly Leu His Pro Thr Gly Leu Val Ser
260 265
<210> 62
<211> 33
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 62
Arg Met Lys Gln Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys Ile
1 5 10 15
Tyr His Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly Glu
20 25 30
Arg
<210> 63
<211> 32
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
Leu Ser Ser Ile Glu Lys Lys Gln Glu Glu Gln Thr Ser Trp Leu Ile
1 5 10 15
Trp Ile Ser Asn Glu Leu Thr Leu Ile Arg Asn Glu Leu Ala Gln Ser
20 25 30
<210> 64
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 64
Leu Ser Ser Ile Glu Lys Lys Leu Glu Glu Ile Thr Ser Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ile Ser Asn Glu Leu Thr Leu Ile Arg Asn Glu Leu Ala Gln
20 25 30
<210> 65
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 65
Leu Ser Ser Ile Glu Lys Lys Leu Glu Glu Ile Thr Ser Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ile Arg Asn Glu Leu Thr Leu Ile Arg Asn Glu Leu Ala Gln
20 25 30
<210> 66
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 66
Leu Ser Ser Ile Glu Lys Lys Leu Glu Glu Ile Thr Ser Gln Leu Gln
1 5 10 15
Gln Ile Arg Asn Glu Leu Thr Leu Ile Arg Asn Glu Leu Ala Gln
20 25 30
<210> 67
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 67
Leu Ser Ser Leu Glu Lys Lys Leu Glu Glu Leu Thr Ser Gln Leu Ile
1 5 10 15
Gln Leu Arg Asn Glu Leu Thr Leu Leu Arg Asn Glu Leu Ala Gln
20 25 30
<210> 68
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 68
Ile Ser Ser Leu Glu Lys Lys Ile Glu Glu Leu Thr Ser Gln Ile Gln
1 5 10 15
Gln Leu Arg Asn Glu Ile Thr Leu Leu Arg Asn Glu Ile Ala Gln
20 25 30
<210> 69
<211> 47
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 69
Leu Glu Ile Glu Ala Ala Phe Leu Glu Arg Glu Asn Thr Ala Leu Glu
1 5 10 15
Thr Arg Val Ala Glu Leu Arg Gln Arg Val Gln Arg Leu Arg Asn Arg
20 25 30
Val Ser Gln Tyr Arg Thr Arg Tyr Gly Pro Leu Gly Gly Gly Lys
35 40 45
<210> 70
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 70
Leu Lys Ser Val Glu Asn Arg Leu Ala Val Val Glu Asn Gln Leu Lys
1 5 10 15
Thr Val Ile Glu Glu Leu Lys Thr Val Lys Asp Leu Leu Ser Asn
20 25 30
<210> 71
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 71
Leu Ala Arg Ile Glu Glu Lys Leu Lys Thr Ile Lys Ala Gln Leu Ser
1 5 10 15
Glu Ile Ala Ser Thr Leu Asn Met Ile Arg Glu Gln Leu Ala Gln
20 25 30
<210> 72
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 72
Val Ser Arg Leu Glu Glu Lys Val Lys Thr Leu Lys Ser Gln Val Thr
1 5 10 15
Glu Leu Ala Ser Thr Val Ser Leu Leu Arg Glu Gln Val Ala Gln
20 25 30
<210> 73
<211> 30
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 73
Ile Gln Ser Glu Lys Lys Ile Glu Asp Ile Ser Ser Leu Ile Gly Gln
1 5 10 15
Ile Gln Ser Glu Ile Thr Leu Ile Arg Asn Glu Ile Ala Gln
20 25 30
<210> 74
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 74
Leu Met Ser Leu Glu Lys Lys Leu Glu Glu Leu Thr Gln Thr Leu Met
1 5 10 15
Gln Leu Gln Asn Glu Leu Ser Met Leu Lys Asn Glu Leu Ala Gln
20 25 30
<210> 75
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 75
Val Asp Leu Glu Gly Ser Thr Ser Asn Gly Arg Gln Cys Ala Gly Ile
1 5 10 15
Arg Leu
<210> 76
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 76
Glu Asp Asp Val Thr Thr Thr Glu Glu Leu Ala Pro Ala Leu Val Pro
1 5 10 15
Pro Pro Lys Gly Thr Cys Ala Gly Trp Met Ala
20 25
<210> 77
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 77
Gly His Asp Gln Glu Thr Thr Thr Gln Gly Pro Gly Val Leu Leu Pro
1 5 10 15
Leu Pro Lys Gly Ala Cys Thr Gly Gln Met Ala
20 25
<210> 78
<211> 159
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 78
Met Lys Asn His Leu Leu Phe Trp Gly Val Leu Ala Val Phe Ile Lys
1 5 10 15
Ala Val His Val Lys Ala Gln Glu Asp Glu Arg Ile Val Leu Val Asp
20 25 30
Asn Lys Cys Lys Cys Ala Arg Ile Thr Ser Arg Ile Ile Arg Ser Ser
35 40 45
Glu Asp Pro Asn Glu Asp Ile Val Glu Arg Asn Ile Arg Ile Ile Val
50 55 60
Pro Leu Asn Asn Arg Glu Asn Ile Ser Asp Pro Thr Ser Pro Leu Arg
65 70 75 80
Thr Arg Phe Val Tyr His Leu Ser Asp Leu Cys Lys Lys Cys Asp Pro
85 90 95
Thr Glu Val Glu Leu Asp Asn Gln Ile Val Thr Ala Thr Gln Ser Asn
100 105 110
Ile Cys Asp Glu Asp Ser Ala Thr Glu Thr Cys Tyr Thr Tyr Asp Arg
115 120 125
Asn Lys Cys Tyr Thr Ala Val Val Pro Leu Val Tyr Gly Gly Glu Thr
130 135 140
Lys Met Val Glu Thr Ala Leu Thr Pro Asp Ala Cys Tyr Pro Asp
145 150 155
<210> 79
<211> 64
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 79
Val Thr Ala Phe Ser Asn Met Asp Asp Met Leu Gln Lys Ala His Leu
1 5 10 15
Val Ile Glu Gly Thr Phe Ile Tyr Leu Arg Asp Ser Thr Glu Phe Phe
20 25 30
Ile Arg Val Arg Asp Gly Trp Lys Lys Leu Gln Leu Gly Glu Leu Ile
35 40 45
Pro Ile Pro Ala Asp Ser Pro Pro Pro Pro Ala Leu Ser Ser Asn Pro
50 55 60
<210> 80
<211> 178
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 80
Ile Lys Glu Glu His Val Ile Ile Gln Ala Glu Phe Tyr Leu Asn Pro
1 5 10 15
Asp Gln Ser Gly Glu Phe Met Phe Asp Phe Asp Gly Asp Glu Ile Phe
20 25 30
His Val Asp Met Ala Lys Lys Glu Thr Val Trp Arg Leu Glu Glu Phe
35 40 45
Gly Arg Phe Ala Ser Phe Glu Ala Gln Gly Ala Leu Ala Asn Ile Ala
50 55 60
Val Asp Lys Ala Asn Leu Glu Ile Met Thr Lys Arg Ser Asn Tyr Thr
65 70 75 80
Pro Ile Thr Asn Val Pro Pro Glu Val Thr Val Leu Thr Asn Ser Pro
85 90 95
Val Glu Leu Arg Glu Pro Asn Val Leu Ile Cys Phe Ile Asp Lys Phe
100 105 110
Thr Pro Pro Val Val Asn Val Thr Trp Leu Arg Asn Gly Lys Pro Val
115 120 125
Thr Thr Gly Val Ser Glu Thr Val Phe Leu Pro Arg Glu Asp His Leu
130 135 140
Phe Arg Lys Phe His Tyr Leu Pro Phe Leu Pro Ser Thr Glu Asp Val
145 150 155 160
Tyr Asp Cys Arg Val Glu His Trp Gly Leu Asp Glu Pro Leu Leu Lys
165 170 175
His Trp
<210> 81
<211> 79
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 81
Val Ile Ile Gln Ala Glu Phe Tyr Leu Asn Pro Asp Gln Ser Gly Glu
1 5 10 15
Phe Met Phe Asp Phe Asp Gly Asp Glu Ile Phe His Val Asp Met Ala
20 25 30
Lys Lys Glu Thr Val Trp Arg Leu Glu Glu Phe Gly Arg Phe Ala Ser
35 40 45
Phe Glu Ala Gln Gly Ala Leu Ala Asn Ile Ala Val Asp Lys Ala Asn
50 55 60
Leu Glu Ile Met Thr Lys Arg Ser Asn Tyr Thr Pro Ile Thr Asn
65 70 75
<210> 82
<211> 94
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 82
Val Pro Pro Glu Val Thr Val Leu Thr Asn Ser Pro Val Glu Leu Arg
1 5 10 15
Glu Pro Asn Val Leu Ile Cys Phe Ile Asp Lys Phe Thr Pro Pro Val
20 25 30
Val Asn Val Thr Trp Leu Arg Asn Gly Lys Pro Val Thr Thr Gly Val
35 40 45
Ser Glu Thr Val Phe Leu Pro Arg Glu Asp His Leu Phe Arg Lys Phe
50 55 60
His Tyr Leu Pro Phe Leu Pro Ser Thr Glu Asp Val Tyr Asp Cys Arg
65 70 75 80
Val Glu His Trp Gly Leu Asp Glu Pro Leu Leu Lys His Trp
85 90
<210> 83
<211> 199
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 83
Gly Asp Thr Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His
1 5 10 15
Phe Phe Asn Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr
20 25 30
His Gln Glu Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg
35 40 45
Ala Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln
50 55 60
Lys Asp Leu Leu Glu Gln Lys Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg
65 70 75 80
His Asn Tyr Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr
85 90 95
Pro Glu Val Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His
100 105 110
Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Ser Ile Glu
115 120 125
Val Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser
130 135 140
Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met
145 150 155 160
Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu
165 170 175
His Pro Ser Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser
180 185 190
Glu Ser Ala Gln Ser Lys Met
195
<210> 84
<211> 199
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 84
Gly Asp Thr Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His
1 5 10 15
Phe Phe Asn Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr
20 25 30
His Gln Glu Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg
35 40 45
Ala Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln
50 55 60
Lys Asp Leu Leu Glu Gln Lys Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg
65 70 75 80
His Asn Tyr Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val Tyr
85 90 95
Pro Glu Val Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His
100 105 110
Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Ser Ile Glu
115 120 125
Val Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val Ser
130 135 140
Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met
145 150 155 160
Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu
165 170 175
His Pro Ser Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser
180 185 190
Glu Ser Ala Gln Ser Lys Met
195
<210> 85
<211> 94
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 85
Asp Thr Arg Pro Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His Phe
1 5 10 15
Phe Asn Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr His
20 25 30
Gln Glu Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala
35 40 45
Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys
50 55 60
Asp Leu Leu Glu Gln Lys Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His
65 70 75 80
Asn Tyr Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val
85 90
<210> 86
<211> 95
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 86
Gly Asp Thr Arg Cys Arg Phe Leu Glu Gln Val Lys His Glu Cys His
1 5 10 15
Phe Phe Asn Gly Thr Glu Arg Val Arg Phe Leu Asp Arg Tyr Phe Tyr
20 25 30
His Gln Glu Glu Tyr Val Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg
35 40 45
Ala Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln
50 55 60
Lys Asp Leu Leu Glu Gln Lys Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg
65 70 75 80
His Asn Tyr Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val
85 90 95
<210> 87
<211> 103
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 87
Tyr Pro Glu Val Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His
1 5 10 15
His Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile
20 25 30
Glu Val Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val
35 40 45
Ser Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val
50 55 60
Met Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val
65 70 75 80
Glu His Pro Ser Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg
85 90 95
Ser Glu Ser Ala Gln Ser Lys
100
<210> 88
<211> 104
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 88
Tyr Pro Glu Val Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His
1 5 10 15
His Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Ser Ile
20 25 30
Glu Val Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Thr Gly Val Val
35 40 45
Ser Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Cys Thr Phe Gln Thr Leu Val
50 55 60
Met Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val
65 70 75 80
Glu His Pro Ser Leu Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg
85 90 95
Ser Glu Ser Ala Gln Ser Lys Met
100
<210> 89
<211> 197
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 89
Asp Thr Arg Pro Arg Phe Leu Glu Leu Arg Lys Ser Glu Cys His Phe
1 5 10 15
Phe Asn Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn
20 25 30
Gln Glu Glu Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala
35 40 45
Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys
50 55 60
Asp Leu Leu Glu Gln Lys Arg Gly Arg Val Asp Asn Tyr Cys Arg His
65 70 75 80
Asn Tyr Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val His Pro
85 90 95
Gln Val Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His His Asn
100 105 110
Leu Leu Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile Glu Val
115 120 125
Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val Ser Thr
130 135 140
Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val Met Leu
145 150 155 160
Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val Glu His
165 170 175
Pro Ser Val Thr Ser Ala Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg Ser Glu
180 185 190
Ser Ala Gln Ser Lys
195
<210> 90
<211> 29
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 90
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Ser Leu Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu Met Val Leu Ser Ser Arg Leu Ala Phe Ala
20 25
<210> 91
<211> 94
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 91
Asp Thr Arg Pro Arg Phe Leu Glu Leu Arg Lys Ser Glu Cys His Phe
1 5 10 15
Phe Asn Gly Thr Glu Arg Val Arg Tyr Leu Asp Arg Tyr Phe His Asn
20 25 30
Gln Glu Glu Phe Leu Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala
35 40 45
Val Thr Glu Leu Gly Arg Pro Val Ala Glu Ser Trp Asn Ser Gln Lys
50 55 60
Asp Leu Leu Glu Gln Lys Arg Gly Arg Val Asp Asn Tyr Cys Arg His
65 70 75 80
Asn Tyr Gly Val Gly Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val
85 90
<210> 92
<211> 103
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 92
His Pro Gln Val Thr Val Tyr Pro Ala Lys Thr Gln Pro Leu Gln His
1 5 10 15
His Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Ser Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile
20 25 30
Glu Val Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val
35 40 45
Ser Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val
50 55 60
Met Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val
65 70 75 80
Glu His Pro Ser Val Thr Ser Ala Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Arg
85 90 95
Ser Glu Ser Ala Gln Ser Lys
100
<210> 93
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 93
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Cys Met Ala Ala Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu
<210> 94
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 94
Thr Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr Gln Pro Arg
1 5 10 15
Phe Leu Glu Gln Ala Lys Cys Glu Cys His Phe Leu Asn Gly Thr Glu
20 25 30
Arg Val Trp Asn Leu Ile Arg Tyr Ile Tyr Asn Gln Glu Glu Tyr Ala
35 40 45
Arg Tyr Asn Ser Asp Leu Gly Glu Tyr Gln Ala Val Thr Glu Leu Gly
50 55 60
Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Leu Leu Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Ala Glu Val Asp Thr Tyr Cys Arg Tyr Asn Tyr Gly Val Val
85 90 95
Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val
100 105
<210> 95
<211> 103
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 95
Gln Pro Lys Val Thr Val Tyr Pro Ser Lys Thr Gln Pro Leu Gln His
1 5 10 15
His Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile
20 25 30
Glu Val Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val
35 40 45
Ser Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val
50 55 60
Met Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val
65 70 75 80
Glu His Pro Ser Met Met Ser Pro Leu Thr Val Gln Trp Ser Ala Arg
85 90 95
Ser Glu Ser Ala Gln Ser Lys
100
<210> 96
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 96
Met Val Leu Ser Ser Pro Leu Ala Leu Ala Gly Asp Thr Arg Pro Arg
1 5 10 15
Phe Leu Gln Gln Asp Lys Tyr Glu Cys His Phe Phe Asn Gly Thr Glu
20 25 30
Arg Val Arg Phe Leu His Arg Asp Ile Tyr Asn Gln Glu Glu Asp Leu
35 40 45
Arg Phe Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr Glu Leu Gly
50 55 60
Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Lys Asp Phe Leu Glu Asp
65 70 75 80
Arg Arg Ala Ala Val Asp Thr Tyr Cys Arg His Asn Tyr Gly Val Gly
85 90 95
Glu Ser Phe Thr Val Gln Arg Arg Val
100 105
<210> 97
<211> 102
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 97
Glu Pro Lys Val Thr Val Tyr Pro Ala Arg Thr Gln Thr Leu Gln His
1 5 10 15
His Asn Leu Leu Val Cys Ser Val Asn Gly Phe Tyr Pro Gly Ser Ile
20 25 30
Glu Val Arg Trp Phe Arg Asn Ser Gln Glu Glu Lys Ala Gly Val Val
35 40 45
Ser Thr Gly Leu Ile Gln Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Thr Leu Val
50 55 60
Met Leu Glu Thr Val Pro Arg Ser Gly Glu Val Tyr Thr Cys Gln Val
65 70 75 80
Glu His Pro Ser Val Thr Ser Pro Leu Thr Val Glu Trp Arg Ala Gln
85 90 95
Ser Glu Ser Ala Gln Ser
100
<210> 98
<211> 19
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 98
Met Val Cys Leu Lys Leu Pro Gly Gly Ser Tyr Met Ala Lys Leu Thr
1 5 10 15
Val Thr Leu
<210> 99
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 99
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 100
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 100
Gly Cys Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 101
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 101
Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser Thr Glu Lys Asn Cys Cys
1 5 10 15
Val Arg Gln Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Lys Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn Phe Cys Leu Gly Pro Cys
35 40 45
Pro Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln Tyr Ser Lys Val Leu Ala Leu
50 55 60
Tyr Asn Gln His Asn Pro Gly Ala Ser Ala Ala Pro Cys Cys Val Pro
65 70 75 80
Gln Ala Leu Glu Pro Leu Pro Ile Val Tyr Tyr Val Gly Arg Lys Pro
85 90 95
Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Arg Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 102
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 102
Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser Thr Glu Lys Asn Cys Cys
1 5 10 15
Val Arg Gln Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Lys Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn Phe Cys Leu Gly Pro Cys
35 40 45
Pro Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln Tyr Ser Lys Val Leu Ala Leu
50 55 60
Tyr Asn Gln His Asn Pro Gly Ala Ser Ala Ala Pro Ser Cys Val Pro
65 70 75 80
Gln Ala Leu Glu Pro Leu Pro Ile Val Tyr Tyr Val Gly Arg Lys Pro
85 90 95
Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Arg Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 103
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 103
Ala Leu Asp Ala Ala Tyr Cys Phe Arg Asn Val Gln Asp Asn Cys Cys
1 5 10 15
Leu Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Lys Arg Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr Asn Ala Asn Phe Cys Ala Gly Ala Cys
35 40 45
Pro Tyr Leu Trp Ser Ser Asp Thr Gln His Ser Arg Val Leu Ser Leu
50 55 60
Tyr Asn Thr Ile Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Cys Cys Val Ser
65 70 75 80
Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Ile Gly Lys Thr Pro
85 90 95
Lys Ile Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 104
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 104
Ala Leu Asp Ala Ala Tyr Cys Phe Arg Asn Val Gln Asp Asn Cys Cys
1 5 10 15
Leu Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Lys Arg Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr Asn Ala Asn Phe Cys Ala Gly Ala Cys
35 40 45
Pro Tyr Leu Trp Ser Ser Asp Thr Gln His Ser Arg Val Leu Ser Leu
50 55 60
Tyr Asn Thr Ile Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Ser Cys Val Ser
65 70 75 80
Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Ile Gly Lys Thr Pro
85 90 95
Lys Ile Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 105
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 105
Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Arg Asn Leu Glu Glu Asn Cys Cys
1 5 10 15
Val Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Gln Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Val His Glu Pro Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn Phe Cys Ser Gly Pro Cys
35 40 45
Pro Tyr Leu Arg Ser Ala Asp Thr Thr His Ser Thr Val Leu Gly Leu
50 55 60
Tyr Asn Thr Leu Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Cys Cys Val Pro
65 70 75 80
Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Val Gly Arg Thr Pro
85 90 95
Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Val Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 106
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 106
Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Arg Asn Leu Glu Glu Asn Cys Cys
1 5 10 15
Val Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Gln Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Val His Glu Pro Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn Phe Cys Ser Gly Pro Cys
35 40 45
Pro Tyr Leu Arg Ser Ala Asp Thr Thr His Ser Thr Val Leu Gly Leu
50 55 60
Tyr Asn Thr Leu Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Ser Cys Val Pro
65 70 75 80
Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Val Gly Arg Thr Pro
85 90 95
Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Val Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 107
<211> 93
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 107
Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys Val
1 5 10 15
Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys Val
20 25 30
Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg Asp
35 40 45
Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr Thr
50 55 60
Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro Thr
65 70 75 80
Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu
85 90
<210> 108
<211> 154
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 108
Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp Val Glu Met Glu Ala Gln Lys
1 5 10 15
Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn Arg Thr Ala His Pro Leu Arg
20 25 30
His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys
35 40 45
Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp
50 55 60
Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu
65 70 75 80
Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn
85 90 95
Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp
100 105 110
Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys
115 120 125
Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu
130 135 140
Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu
145 150
<210> 109
<211> 143
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 109
Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
1 5 10 15
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
20 25 30
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
35 40 45
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
50 55 60
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
65 70 75 80
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
85 90 95
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
100 105 110
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
115 120 125
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln
130 135 140
<210> 110
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 110
Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
1 5 10 15
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
20 25 30
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
35 40 45
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
50 55 60
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
65 70 75 80
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
85 90 95
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
100 105 110
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
115 120 125
Glu
<210> 111
<211> 114
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 111
Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys
1 5 10 15
Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn
20 25 30
Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala
35 40 45
Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His
50 55 60
Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser
65 70 75 80
Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe
85 90 95
Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser
100 105 110
Glu Glu
<210> 112
<211> 104
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 112
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
1 5 10 15
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
20 25 30
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
35 40 45
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
50 55 60
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
85 90 95
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu
100
<210> 113
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 113
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
1 5 10 15
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
20 25 30
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
35 40 45
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
50 55 60
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Ala Glu Cys Asn
85 90 95
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
100 105 110
<210> 114
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 114
Ser Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn
1 5 10 15
Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys
20 25 30
Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile
35 40 45
Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe
50 55 60
Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys
65 70 75 80
Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Ala Glu Cys
85 90 95
Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
100 105 110
<210> 115
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 115
Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Arg Asn Leu Glu Glu Asn Cys Cys
1 5 10 15
Val Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Gln Asp Leu Gly Trp Lys Trp
20 25 30
Val His Glu Pro Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn Phe Cys Ser Gly Pro Cys
35 40 45
Pro Tyr Leu Arg Ser Ala Asp Thr Thr His Ser Thr Val Leu Gly Leu
50 55 60
Tyr Asn Thr Leu Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Ser Cys Val Pro
65 70 75 80
Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Val Gly Arg Thr Pro
85 90 95
Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Val Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
100 105 110
<210> 116
<211> 133
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 116
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 117
<211> 251
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 117
Glu Leu Cys Asp Asp Asp Pro Pro Glu Ile Pro His Ala Thr Phe Lys
1 5 10 15
Ala Met Ala Tyr Lys Glu Gly Thr Met Leu Asn Cys Glu Cys Lys Arg
20 25 30
Gly Phe Arg Arg Ile Lys Ser Gly Ser Leu Tyr Met Leu Cys Thr Gly
35 40 45
Asn Ser Ser His Ser Ser Trp Asp Asn Gln Cys Gln Cys Thr Ser Ser
50 55 60
Ala Thr Arg Asn Thr Thr Lys Gln Val Thr Pro Gln Pro Glu Glu Gln
65 70 75 80
Lys Glu Arg Lys Thr Thr Glu Met Gln Ser Pro Met Gln Pro Val Asp
85 90 95
Gln Ala Ser Leu Pro Gly His Cys Arg Glu Pro Pro Pro Trp Glu Asn
100 105 110
Glu Ala Thr Glu Arg Ile Tyr His Phe Val Val Gly Gln Met Val Tyr
115 120 125
Tyr Gln Cys Val Gln Gly Tyr Arg Ala Leu His Arg Gly Pro Ala Glu
130 135 140
Ser Val Cys Lys Met Thr His Gly Lys Thr Arg Trp Thr Gln Pro Gln
145 150 155 160
Leu Ile Cys Thr Gly Glu Met Glu Thr Ser Gln Phe Pro Gly Glu Glu
165 170 175
Lys Pro Gln Ala Ser Pro Glu Gly Arg Pro Glu Ser Glu Thr Ser Cys
180 185 190
Leu Val Thr Thr Thr Asp Phe Gln Ile Gln Thr Glu Met Ala Ala Thr
195 200 205
Met Glu Thr Ser Ile Phe Thr Thr Glu Tyr Gln Val Ala Val Ala Gly
210 215 220
Cys Val Phe Leu Leu Ile Ser Val Leu Leu Leu Ser Gly Leu Thr Trp
225 230 235 240
Gln Arg Arg Gln Arg Lys Ser Arg Arg Thr Ile
245 250
<210> 118
<211> 524
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 118
Val Asn Gly Thr Ser Gln Phe Thr Cys Phe Tyr Asn Ser Arg Ala Asn
1 5 10 15
Ile Ser Cys Val Trp Ser Gln Asp Gly Ala Leu Gln Asp Thr Ser Cys
20 25 30
Gln Val His Ala Trp Pro Asp Arg Arg Arg Trp Asn Gln Thr Cys Glu
35 40 45
Leu Leu Pro Val Ser Gln Ala Ser Trp Ala Cys Asn Leu Ile Leu Gly
50 55 60
Ala Pro Asp Ser Gln Lys Leu Thr Thr Val Asp Ile Val Thr Leu Arg
65 70 75 80
Val Leu Cys Arg Glu Gly Val Arg Trp Arg Val Met Ala Ile Gln Asp
85 90 95
Phe Lys Pro Phe Glu Asn Leu Arg Leu Met Ala Pro Ile Ser Leu Gln
100 105 110
Val Val His Val Glu Thr His Arg Cys Asn Ile Ser Trp Glu Ile Ser
115 120 125
Gln Ala Ser His Tyr Phe Glu Arg His Leu Glu Phe Glu Ala Arg Thr
130 135 140
Leu Ser Pro Gly His Thr Trp Glu Glu Ala Pro Leu Leu Thr Leu Lys
145 150 155 160
Gln Lys Gln Glu Trp Ile Cys Leu Glu Thr Leu Thr Pro Asp Thr Gln
165 170 175
Tyr Glu Phe Gln Val Arg Val Lys Pro Leu Gln Gly Glu Phe Thr Thr
180 185 190
Trp Ser Pro Trp Ser Gln Pro Leu Ala Phe Arg Thr Lys Pro Ala Ala
195 200 205
Leu Gly Lys Asp Thr Ile Pro Trp Leu Gly His Leu Leu Val Gly Leu
210 215 220
Ser Gly Ala Phe Gly Phe Ile Ile Leu Val Tyr Leu Leu Ile Asn Cys
225 230 235 240
Arg Asn Thr Gly Pro Trp Leu Lys Lys Val Leu Lys Cys Asn Thr Pro
245 250 255
Asp Pro Ser Lys Phe Phe Ser Gln Leu Ser Ser Glu His Gly Gly Asp
260 265 270
Val Gln Lys Trp Leu Ser Ser Pro Phe Pro Ser Ser Ser Phe Ser Pro
275 280 285
Gly Gly Leu Ala Pro Glu Ile Ser Pro Leu Glu Val Leu Glu Arg Asp
290 295 300
Lys Val Thr Gln Leu Leu Leu Gln Gln Asp Lys Val Pro Glu Pro Ala
305 310 315 320
Ser Leu Ser Ser Asn His Ser Leu Thr Ser Cys Phe Thr Asn Gln Gly
325 330 335
Tyr Phe Phe Phe His Leu Pro Asp Ala Leu Glu Ile Glu Ala Cys Gln
340 345 350
Val Tyr Phe Thr Tyr Asp Pro Tyr Ser Glu Glu Asp Pro Asp Glu Gly
355 360 365
Val Ala Gly Ala Pro Thr Gly Ser Ser Pro Gln Pro Leu Gln Pro Leu
370 375 380
Ser Gly Glu Asp Asp Ala Tyr Cys Thr Phe Pro Ser Arg Asp Asp Leu
385 390 395 400
Leu Leu Phe Ser Pro Ser Leu Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Ser Thr
405 410 415
Ala Pro Gly Gly Ser Gly Ala Gly Glu Glu Arg Met Pro Pro Ser Leu
420 425 430
Gln Glu Arg Val Pro Arg Asp Trp Asp Pro Gln Pro Leu Gly Pro Pro
435 440 445
Thr Pro Gly Val Pro Asp Leu Val Asp Phe Gln Pro Pro Pro Glu Leu
450 455 460
Val Leu Arg Glu Ala Gly Glu Glu Val Pro Asp Ala Gly Pro Arg Glu
465 470 475 480
Gly Val Ser Phe Pro Trp Ser Arg Pro Pro Gly Gln Gly Glu Phe Arg
485 490 495
Ala Leu Asn Ala Arg Leu Pro Leu Asn Thr Asp Ala Tyr Leu Ser Leu
500 505 510
Gln Glu Leu Gln Gly Gln Asp Pro Thr His Leu Val
515 520
<210> 119
<211> 347
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 119
Leu Asn Thr Thr Ile Leu Thr Pro Asn Gly Asn Glu Asp Thr Thr Ala
1 5 10 15
Asp Phe Phe Leu Thr Thr Met Pro Thr Asp Ser Leu Ser Val Ser Thr
20 25 30
Leu Pro Leu Pro Glu Val Gln Cys Phe Val Phe Asn Val Glu Tyr Met
35 40 45
Asn Cys Thr Trp Asn Ser Ser Ser Glu Pro Gln Pro Thr Asn Leu Thr
50 55 60
Leu His Tyr Trp Tyr Lys Asn Ser Asp Asn Asp Lys Val Gln Lys Cys
65 70 75 80
Ser His Tyr Leu Phe Ser Glu Glu Ile Thr Ser Gly Cys Gln Leu Gln
85 90 95
Lys Lys Glu Ile His Leu Tyr Gln Thr Phe Val Val Gln Leu Gln Asp
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Arg Arg Gln Ala Thr Gln Met Leu Lys Leu Gln Asn
115 120 125
Leu Val Ile Pro Trp Ala Pro Glu Asn Leu Thr Leu His Lys Leu Ser
130 135 140
Glu Ser Gln Leu Glu Leu Asn Trp Asn Asn Arg Phe Leu Asn His Cys
145 150 155 160
Leu Glu His Leu Val Gln Tyr Arg Thr Asp Trp Asp His Ser Trp Thr
165 170 175
Glu Gln Ser Val Asp Tyr Arg His Lys Phe Ser Leu Pro Ser Val Asp
180 185 190
Gly Gln Lys Arg Tyr Thr Phe Arg Val Arg Ser Arg Phe Asn Pro Leu
195 200 205
Cys Gly Ser Ala Gln His Trp Ser Glu Trp Ser His Pro Ile His Trp
210 215 220
Gly Ser Asn Thr Ser Lys Glu Asn Pro Phe Leu Phe Ala Leu Glu Ala
225 230 235 240
Val Val Ile Ser Val Gly Ser Met Gly Leu Ile Ile Ser Leu Leu Cys
245 250 255
Val Tyr Phe Trp Leu Glu Arg Thr Met Pro Arg Ile Pro Thr Leu Lys
260 265 270
Asn Leu Glu Asp Leu Val Thr Glu Tyr His Gly Asn Phe Ser Ala Trp
275 280 285
Ser Gly Val Ser Lys Gly Leu Ala Glu Ser Leu Gln Pro Asp Tyr Ser
290 295 300
Glu Arg Leu Cys Leu Val Ser Glu Ile Pro Pro Lys Gly Gly Ala Leu
305 310 315 320
Gly Glu Gly Pro Gly Ala Ser Pro Cys Asn Gln His Ser Pro Tyr Trp
325 330 335
Ala Pro Pro Cys Tyr Thr Leu Lys Pro Glu Thr
340 345
<210> 120
<211> 245
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 120
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Gly Asn Ile Leu Asn Val Ser Ile Lys Ile Cys Leu Thr
225 230 235 240
Leu Ser Pro Ser Thr
245
<210> 121
<211> 219
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 121
Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser
1 5 10 15
Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu
20 25 30
Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln
35 40 45
Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg
50 55 60
Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys
85 90 95
Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val
100 105 110
Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro
115 120 125
Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys
130 135 140
Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys
145 150 155 160
Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr
165 170 175
Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr
180 185 190
Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile
195 200 205
Pro Gly Asn Ile Leu Asn Val Ser Ile Lys Ile
210 215
<210> 122
<211> 227
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 122
Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser
1 5 10 15
Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu
20 25 30
Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln
35 40 45
Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg
50 55 60
Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys
85 90 95
Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val
100 105 110
Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro
115 120 125
Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys
130 135 140
Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys
145 150 155 160
Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr
165 170 175
Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr
180 185 190
Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile
195 200 205
Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Leu Asn Val Ser
210 215 220
Ile Lys Ile
225
<210> 123
<211> 124
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 123
Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly
1 5 10 15
Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp
20 25 30
Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile
35 40 45
Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Thr Gln His Ser Ser Tyr
50 55 60
Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala
65 70 75 80
Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg
85 90 95
Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys
100 105 110
Val Asn Ala Pro Tyr Ala Ala Ala Leu His Glu His
115 120
<210> 124
<211> 268
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 124
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser
145 150 155 160
Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala
165 170 175
Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp
180 185 190
Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe
195 200 205
Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu
210 215 220
Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser
225 230 235 240
Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro
245 250 255
Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260 265
<210> 125
<211> 254
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 125
Met Glu Tyr Ala Ser Asp Ala Ser Leu Asp Pro Glu Ala Pro Trp Pro
1 5 10 15
Pro Ala Pro Arg Ala Arg Ala Cys Arg Val Leu Pro Trp Ala Leu Val
20 25 30
Ala Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Cys Ala Val Phe
35 40 45
Leu Ala Cys Pro Trp Ala Val Ser Gly Ala Arg Ala Ser Pro Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Ser Pro Arg Leu Arg Glu Gly Pro Glu Leu Ser Pro Asp Asp
65 70 75 80
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
85 90 95
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
100 105 110
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
130 135 140
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
165 170 175
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
180 185 190
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
195 200 205
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
210 215 220
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
225 230 235 240
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
245 250
<210> 126
<211> 174
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 126
Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu Val
1 5 10 15
Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser Asp
20 25 30
Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys Glu
35 40 45
Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val Phe
50 55 60
Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly Ser
65 70 75 80
Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly Ala
85 90 95
Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu Ala
100 105 110
Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser Ala
115 120 125
Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg His
130 135 140
Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg Val
145 150 155 160
Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
165 170
<210> 127
<211> 175
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 127
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
1 5 10 15
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
20 25 30
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
35 40 45
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
50 55 60
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
65 70 75 80
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
85 90 95
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
100 105 110
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
115 120 125
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
130 135 140
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
145 150 155 160
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala Gly Leu Pro Ser Pro Arg Ser Glu
165 170 175
<210> 128
<211> 167
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 128
Asp Pro Ala Gly Leu Leu Asp Leu Arg Gln Gly Met Phe Ala Gln Leu
1 5 10 15
Val Ala Gln Asn Val Leu Leu Ile Asp Gly Pro Leu Ser Trp Tyr Ser
20 25 30
Asp Pro Gly Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Gly Gly Leu Ser Tyr Lys
35 40 45
Glu Asp Thr Lys Glu Leu Val Val Ala Lys Ala Gly Val Tyr Tyr Val
50 55 60
Phe Phe Gln Leu Glu Leu Arg Arg Val Val Ala Gly Glu Gly Ser Gly
65 70 75 80
Ser Val Ser Leu Ala Leu His Leu Gln Pro Leu Arg Ser Ala Ala Gly
85 90 95
Ala Ala Ala Leu Ala Leu Thr Val Asp Leu Pro Pro Ala Ser Ser Glu
100 105 110
Ala Arg Asn Ser Ala Phe Gly Phe Gln Gly Arg Leu Leu His Leu Ser
115 120 125
Ala Gly Gln Arg Leu Gly Val His Leu His Thr Glu Ala Arg Ala Arg
130 135 140
His Ala Trp Gln Leu Thr Gln Gly Ala Thr Val Leu Gly Leu Phe Arg
145 150 155 160
Val Thr Pro Glu Ile Pro Ala
165
<210> 129
<211> 255
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 129
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 130
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 130
Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 131
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 131
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 132
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 132
Gly Gly Ser Gly
1
<210> 133
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 133
Gly Gly Ser Gly Gly
1 5
<210> 134
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 134
Gly Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 135
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 135
Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 136
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 136
Gly Gly Gly Ser Gly
1 5
<210> 137
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 137
Gly Ser Ser Ser Gly
1 5
<210> 138
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 138
Gly Ser Ser Ser Ser
1 5
<210> 139
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 139
Ala Ala Ala Gly Gly
1 5
<210> 140
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。EAAAK可以重复2至20次。
<400> 140
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 141
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。EAAAK子集可以重复2至20次。
<400> 141
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5
<210> 142
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。EAAAK子集可以独立地重复2至20次。
<400> 142
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5 10 15
<210> 143
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽
<400> 143
Glu Ala Ala Ala Lys
1 5
<210> 144
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 144
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10
<210> 145
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 145
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 146
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 146
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
20 25 30
Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
35 40 45
<210> 147
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 147
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5 10
<210> 148
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 148
Pro Ala Pro Ala Pro
1 5
<210> 149
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 149
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5
<210> 150
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 150
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10
<210> 151
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 151
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
<210> 152
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 152
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro
20
<210> 153
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 153
Lys Pro Lys Pro
1
<210> 154
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 154
Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro
1 5
<210> 155
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 155
Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro
1 5 10
<210> 156
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 156
Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro
1 5 10 15
<210> 157
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 157
Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro Lys Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Pro
20
<210> 158
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 158
Glu Pro Glu Pro
1
<210> 159
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 159
Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro
1 5
<210> 160
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 160
Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro
1 5 10
<210> 161
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 161
Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro
1 5 10 15
<210> 162
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 162
Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro
1 5 10 15
Glu Pro Glu Pro
20
<210> 163
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 163
Gly Cys Gly Ala Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 164
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 适合用作接头的肽。
<400> 164
Gly Cys Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 165
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 165
Gly Ala Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys
1 5 10 15
Arg
<210> 166
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 166
Gly Ile Val Asp Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln
1 5 10 15
<210> 167
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 167
Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln
1 5 10 15
<210> 168
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 168
Asn Phe Phe Arg Met Val Ile Ser Asn Pro Ala Ala Thr
1 5 10
<210> 169
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 169
Asn Phe Ile Arg Met Val Ile Ser Asn Pro Ala Ala Thr
1 5 10
<210> 170
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 170
Ser Phe Tyr Leu Lys Asn Val Gln Thr Gln Glu Thr Arg Thr Leu Thr
1 5 10 15
Gln Phe His Phe
20
<210> 171
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 171
Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Ser Arg Gly
1 5 10 15
<210> 172
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 172
Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Ser Arg Gly
1 5 10 15
Ile Val
<210> 173
<211> 110
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 173
Met Ala Leu Trp Met Arg Leu Leu Pro Leu Leu Ala Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Trp Gly Pro Asp Pro Ala Ala Ala Phe Val Asn Gln His Leu Cys Gly
20 25 30
Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly Phe
35 40 45
Phe Tyr Thr Pro Lys Thr Arg Arg Glu Ala Glu Asp Leu Gln Val Gly
50 55 60
Gln Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gln Pro Leu
65 70 75 80
Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys Arg Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys
85 90 95
Thr Ser Ile Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Asn Tyr Cys Asn
100 105 110
<210> 174
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 174
Gly Ala Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys
1 5 10 15
Arg Gly
<210> 175
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 175
Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys Arg Gly
1 5 10 15
<210> 176
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 176
Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Ser Arg Gly
1 5 10 15
<210> 177
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 177
Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys Arg Gly
1 5 10
<210> 178
<211> 13
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 178
Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Ser Arg Gly
1 5 10
<210> 179
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲和结构域-血凝素
<400> 179
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala
1 5
<210> 180
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位标签FLAG
<400> 180
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5
<210> 181
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 表位标签c-myc
<400> 181
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu
1 5 10
<210> 182
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 182
His His His His His
1 5
<210> 183
<211> 6
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 183
His His His His His His
1 5
<210> 184
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> Strep标签
<400> 184
Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys
1 5
<210> 185
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 亲和标签
<400> 185
Arg Tyr Ile Arg Ser
1 5
<210> 186
<211> 4
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 186
Phe His His Thr
1
<210> 187
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 187
Trp Glu Ala Ala Ala Arg Glu Ala Cys Cys Arg Glu Cys Cys Ala Arg
1 5 10 15
Ala
<210> 188
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 188
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
1 5 10 15
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
20 25 30
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
35 40 45
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
50 55 60
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Ala Glu Cys Asn
85 90 95
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
100 105 110
<210> 189
<211> 15
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 189
Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu Arg Gly
1 5 10 15
<210> 190
<211> 20
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 190
Tyr Val Val Lys Ser Phe Asp Arg Ser Thr Lys Val Ile Asp Phe His
1 5 10 15
Tyr Pro Asn Glu
20
<210> 191
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 191
Ala Met Met Ile Ala Arg Phe Lys Met Phe Pro Glu Val Lys Glu Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 192
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 192
Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala
1 5
<210> 193
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 193
Val Tyr Leu Lys Thr Asn Val Phe Leu Gly Gly Gly Ala Ser
1 5 10
<210> 194
<211> 390
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 194
Met Pro Pro Ser Gly Leu Arg Leu Leu Pro Leu Leu Leu Pro Leu Leu
1 5 10 15
Trp Leu Leu Val Leu Thr Pro Gly Arg Pro Ala Ala Gly Leu Ser Thr
20 25 30
Cys Lys Thr Ile Asp Met Glu Leu Val Lys Arg Lys Arg Ile Glu Ala
35 40 45
Ile Arg Gly Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Ala Ser Pro Pro Ser
50 55 60
Gln Gly Glu Val Pro Pro Gly Pro Leu Pro Glu Ala Val Leu Ala Leu
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Arg Asp Arg Val Ala Gly Glu Ser Ala Glu Pro Glu
85 90 95
Pro Glu Pro Glu Ala Asp Tyr Tyr Ala Lys Glu Val Thr Arg Val Leu
100 105 110
Met Val Glu Thr His Asn Glu Ile Tyr Asp Lys Phe Lys Gln Ser Thr
115 120 125
His Ser Ile Tyr Met Phe Phe Asn Thr Ser Glu Leu Arg Glu Ala Val
130 135 140
Pro Glu Pro Val Leu Leu Ser Arg Ala Glu Leu Arg Leu Leu Arg Leu
145 150 155 160
Lys Leu Lys Val Glu Gln His Val Glu Leu Tyr Gln Lys Tyr Ser Asn
165 170 175
Asn Ser Trp Arg Tyr Leu Ser Asn Arg Leu Leu Ala Pro Ser Asp Ser
180 185 190
Pro Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Gly Val Val Arg Gln Trp Leu
195 200 205
Ser Arg Gly Gly Glu Ile Glu Gly Phe Arg Leu Ser Ala His Cys Ser
210 215 220
Cys Asp Ser Arg Asp Asn Thr Leu Gln Val Asp Ile Asn Gly Phe Thr
225 230 235 240
Thr Gly Arg Arg Gly Asp Leu Ala Thr Ile His Gly Met Asn Arg Pro
245 250 255
Phe Leu Leu Leu Met Ala Thr Pro Leu Glu Arg Ala Gln His Leu Gln
260 265 270
Ser Ser Arg His Arg Arg Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser
275 280 285
Thr Glu Lys Asn Cys Cys Val Arg Gln Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Lys
290 295 300
Asp Leu Gly Trp Lys Trp Ile His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn
305 310 315 320
Phe Cys Leu Gly Pro Cys Pro Tyr Ile Trp Ser Leu Asp Thr Gln Tyr
325 330 335
Ser Lys Val Leu Ala Leu Tyr Asn Gln His Asn Pro Gly Ala Ser Ala
340 345 350
Ala Pro Cys Cys Val Pro Gln Ala Leu Glu Pro Leu Pro Ile Val Tyr
355 360 365
Tyr Val Gly Arg Lys Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Ile Val
370 375 380
Arg Ser Cys Lys Cys Ser
385 390
<210> 195
<211> 413
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 195
Met His Tyr Cys Val Leu Ser Ala Phe Leu Ile Leu His Leu Val Thr
1 5 10 15
Val Ala Leu Ser Leu Ser Thr Cys Ser Thr Leu Asp Met Asp Gln Phe
20 25 30
Met Arg Lys Arg Ile Glu Ala Ile Arg Gly Gln Ile Leu Ser Lys Leu
35 40 45
Lys Leu Thr Ser Pro Pro Glu Asp Tyr Pro Glu Pro Glu Glu Val Pro
50 55 60
Pro Glu Val Ile Ser Ile Tyr Asn Ser Thr Arg Asp Leu Leu Gln Glu
65 70 75 80
Lys Ala Ser Arg Arg Ala Ala Ala Cys Glu Arg Glu Arg Ser Asp Glu
85 90 95
Glu Tyr Tyr Ala Lys Glu Val Tyr Lys Ile Asp Met Pro Pro Phe Phe
100 105 110
Pro Ser Glu Ala Ile Pro Pro Thr Phe Tyr Arg Pro Tyr Phe Arg Ile
115 120 125
Val Arg Phe Asp Val Ser Ala Met Glu Lys Asn Ala Ser Asn Leu Val
130 135 140
Lys Ala Glu Phe Arg Val Phe Arg Leu Gln Asn Pro Lys Ala Arg Val
145 150 155 160
Pro Glu Gln Arg Ile Glu Leu Tyr Gln Ile Leu Lys Ser Lys Asp Leu
165 170 175
Thr Ser Pro Thr Gln Arg Tyr Ile Asp Ser Lys Val Val Lys Thr Arg
180 185 190
Ala Glu Gly Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Asp Ala Val His Glu
195 200 205
Trp Leu His His Lys Asp Arg Asn Leu Gly Phe Lys Ile Ser Leu His
210 215 220
Cys Pro Cys Cys Thr Phe Val Pro Ser Asn Asn Tyr Ile Ile Pro Asn
225 230 235 240
Lys Ser Glu Glu Leu Glu Ala Arg Phe Ala Gly Ile Asp Gly Thr Ser
245 250 255
Thr Tyr Thr Ser Gly Asp Gln Lys Thr Ile Lys Ser Thr Arg Lys Lys
260 265 270
Asn Ser Gly Lys Thr Pro His Leu Leu Leu Met Leu Leu Pro Ser Tyr
275 280 285
Arg Leu Glu Ser Gln Gln Thr Asn Arg Arg Lys Lys Arg Ala Leu Asp
290 295 300
Ala Ala Tyr Cys Phe Arg Asn Val Gln Asp Asn Cys Cys Leu Arg Pro
305 310 315 320
Leu Tyr Ile Asp Phe Lys Arg Asp Leu Gly Trp Lys Trp Ile His Glu
325 330 335
Pro Lys Gly Tyr Asn Ala Asn Phe Cys Ala Gly Ala Cys Pro Tyr Leu
340 345 350
Trp Ser Ser Asp Thr Gln His Ser Arg Val Leu Ser Leu Tyr Asn Thr
355 360 365
Ile Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Cys Cys Val Ser Gln Asp Leu
370 375 380
Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Ile Gly Lys Thr Pro Lys Ile Glu
385 390 395 400
Gln Leu Ser Asn Met Ile Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
405 410
<210> 196
<211> 412
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 196
Met Lys Met His Leu Gln Arg Ala Leu Val Val Leu Ala Leu Leu Asn
1 5 10 15
Phe Ala Thr Val Ser Leu Ser Leu Ser Thr Cys Thr Thr Leu Asp Phe
20 25 30
Gly His Ile Lys Lys Lys Arg Val Glu Ala Ile Arg Gly Gln Ile Leu
35 40 45
Ser Lys Leu Arg Leu Thr Ser Pro Pro Glu Pro Thr Val Met Thr His
50 55 60
Val Pro Tyr Gln Val Leu Ala Leu Tyr Asn Ser Thr Arg Glu Leu Leu
65 70 75 80
Glu Glu Met His Gly Glu Arg Glu Glu Gly Cys Thr Gln Glu Asn Thr
85 90 95
Glu Ser Glu Tyr Tyr Ala Lys Glu Ile His Lys Phe Asp Met Ile Gln
100 105 110
Gly Leu Ala Glu His Asn Glu Leu Ala Val Cys Pro Lys Gly Ile Thr
115 120 125
Ser Lys Val Phe Arg Phe Asn Val Ser Ser Val Glu Lys Asn Arg Thr
130 135 140
Asn Leu Phe Arg Ala Glu Phe Arg Val Leu Arg Val Pro Asn Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Arg Asn Glu Gln Arg Ile Glu Leu Phe Gln Ile Leu Arg Pro
165 170 175
Asp Glu His Ile Ala Lys Gln Arg Tyr Ile Gly Gly Lys Asn Leu Pro
180 185 190
Thr Arg Gly Thr Ala Glu Trp Leu Ser Phe Asp Val Thr Asp Thr Val
195 200 205
Arg Glu Trp Leu Leu Arg Arg Glu Ser Asn Leu Gly Leu Glu Ile Ser
210 215 220
Ile His Cys Pro Cys His Thr Phe Gln Pro Asn Gly Asp Ile Leu Glu
225 230 235 240
Asn Ile His Glu Val Met Glu Ile Lys Phe Lys Gly Val Asp Asn Glu
245 250 255
Asp Asp His Gly Arg Gly Asp Leu Gly Arg Leu Lys Lys Gln Lys Asp
260 265 270
His His Asn Pro His Leu Ile Leu Met Met Ile Pro Pro His Arg Leu
275 280 285
Asp Asn Pro Gly Gln Gly Gly Gln Arg Lys Lys Arg Ala Leu Asp Thr
290 295 300
Asn Tyr Cys Phe Arg Asn Leu Glu Glu Asn Cys Cys Val Arg Pro Leu
305 310 315 320
Tyr Ile Asp Phe Arg Gln Asp Leu Gly Trp Lys Trp Val His Glu Pro
325 330 335
Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn Phe Cys Ser Gly Pro Cys Pro Tyr Leu Arg
340 345 350
Ser Ala Asp Thr Thr His Ser Thr Val Leu Gly Leu Tyr Asn Thr Leu
355 360 365
Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Cys Cys Val Pro Gln Asp Leu Glu
370 375 380
Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Val Gly Arg Thr Pro Lys Val Glu Gln
385 390 395 400
Leu Ser Asn Met Val Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
405 410
<210> 197
<211> 503
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 197
Met Glu Ala Ala Val Ala Ala Pro Arg Pro Arg Leu Leu Leu Leu Val
1 5 10 15
Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Leu Leu Pro Gly Ala Thr
20 25 30
Ala Leu Gln Cys Phe Cys His Leu Cys Thr Lys Asp Asn Phe Thr Cys
35 40 45
Val Thr Asp Gly Leu Cys Phe Val Ser Val Thr Glu Thr Thr Asp Lys
50 55 60
Val Ile His Asn Ser Met Cys Ile Ala Glu Ile Asp Leu Ile Pro Arg
65 70 75 80
Asp Arg Pro Phe Val Cys Ala Pro Ser Ser Lys Thr Gly Ser Val Thr
85 90 95
Thr Thr Tyr Cys Cys Asn Gln Asp His Cys Asn Lys Ile Glu Leu Pro
100 105 110
Thr Thr Val Lys Ser Ser Pro Gly Leu Gly Pro Val Glu Leu Ala Ala
115 120 125
Val Ile Ala Gly Pro Val Cys Phe Val Cys Ile Ser Leu Met Leu Met
130 135 140
Val Tyr Ile Cys His Asn Arg Thr Val Ile His His Arg Val Pro Asn
145 150 155 160
Glu Glu Asp Pro Ser Leu Asp Arg Pro Phe Ile Ser Glu Gly Thr Thr
165 170 175
Leu Lys Asp Leu Ile Tyr Asp Met Thr Thr Ser Gly Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Leu Pro Leu Leu Val Gln Arg Thr Ile Ala Arg Thr Ile Val Leu Gln
195 200 205
Glu Ser Ile Gly Lys Gly Arg Phe Gly Glu Val Trp Arg Gly Lys Trp
210 215 220
Arg Gly Glu Glu Val Ala Val Lys Ile Phe Ser Ser Arg Glu Glu Arg
225 230 235 240
Ser Trp Phe Arg Glu Ala Glu Ile Tyr Gln Thr Val Met Leu Arg His
245 250 255
Glu Asn Ile Leu Gly Phe Ile Ala Ala Asp Asn Lys Asp Asn Gly Thr
260 265 270
Trp Thr Gln Leu Trp Leu Val Ser Asp Tyr His Glu His Gly Ser Leu
275 280 285
Phe Asp Tyr Leu Asn Arg Tyr Thr Val Thr Val Glu Gly Met Ile Lys
290 295 300
Leu Ala Leu Ser Thr Ala Ser Gly Leu Ala His Leu His Met Glu Ile
305 310 315 320
Val Gly Thr Gln Gly Lys Pro Ala Ile Ala His Arg Asp Leu Lys Ser
325 330 335
Lys Asn Ile Leu Val Lys Lys Asn Gly Thr Cys Cys Ile Ala Asp Leu
340 345 350
Gly Leu Ala Val Arg His Asp Ser Ala Thr Asp Thr Ile Asp Ile Ala
355 360 365
Pro Asn His Arg Val Gly Thr Lys Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu
370 375 380
Asp Asp Ser Ile Asn Met Lys His Phe Glu Ser Phe Lys Arg Ala Asp
385 390 395 400
Ile Tyr Ala Met Gly Leu Val Phe Trp Glu Ile Ala Arg Arg Cys Ser
405 410 415
Ile Gly Gly Ile His Glu Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Tyr Asp Leu Val
420 425 430
Pro Ser Asp Pro Ser Val Glu Glu Met Arg Lys Val Val Cys Glu Gln
435 440 445
Lys Leu Arg Pro Asn Ile Pro Asn Arg Trp Gln Ser Cys Glu Ala Leu
450 455 460
Arg Val Met Ala Lys Ile Met Arg Glu Cys Trp Tyr Ala Asn Gly Ala
465 470 475 480
Ala Arg Leu Thr Ala Leu Arg Ile Lys Lys Thr Leu Ser Gln Leu Ser
485 490 495
Gln Gln Glu Gly Ile Lys Met
500
<210> 198
<211> 592
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 198
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Asp
20 25 30
Val Glu Met Glu Ala Gln Lys Asp Glu Ile Ile Cys Pro Ser Cys Asn
35 40 45
Arg Thr Ala His Pro Leu Arg His Ile Asn Asn Asp Met Ile Val Thr
50 55 60
Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp
65 70 75 80
Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys
85 90 95
Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val
100 105 110
Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp
115 120 125
Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro
130 135 140
Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met
145 150 155 160
Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu
165 170 175
Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu Leu Leu Val Ile Phe Gln Val
180 185 190
Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu Gly Val Ala Ile Ser Val Ile
195 200 205
Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser
210 215 220
Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys Leu Met Glu Phe Ser Glu His
225 230 235 240
Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys
245 250 255
Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp
260 265 270
Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu
275 280 285
Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu Thr Val Ala Val Lys Ile Phe
290 295 300
Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser
305 310 315 320
Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu
325 330 335
Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe
340 345 350
His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr Leu Thr Arg His Val Ile Ser
355 360 365
Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala
370 375 380
His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile
385 390 395 400
Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu
405 410 415
Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr
420 425 430
Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg
435 440 445
Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser Arg Met Asn Leu Glu Asn Val
450 455 460
Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr Ser Met Ala Leu Val Leu Trp
465 470 475 480
Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu
485 490 495
Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu His Pro Cys Val Glu Ser Met
500 505 510
Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe
515 520 525
Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu
530 535 540
Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala
545 550 555 560
Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser
565 570 575
Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
580 585 590
<210> 199
<211> 567
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 199
Met Gly Arg Gly Leu Leu Arg Gly Leu Trp Pro Leu His Ile Val Leu
1 5 10 15
Trp Thr Arg Ile Ala Ser Thr Ile Pro Pro His Val Gln Lys Ser Val
20 25 30
Asn Asn Asp Met Ile Val Thr Asp Asn Asn Gly Ala Val Lys Phe Pro
35 40 45
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
50 55 60
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
65 70 75 80
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
85 90 95
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
115 120 125
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Asp Glu Cys Asn
130 135 140
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Leu
145 150 155 160
Leu Leu Val Ile Phe Gln Val Thr Gly Ile Ser Leu Leu Pro Pro Leu
165 170 175
Gly Val Ala Ile Ser Val Ile Ile Ile Phe Tyr Cys Tyr Arg Val Asn
180 185 190
Arg Gln Gln Lys Leu Ser Ser Thr Trp Glu Thr Gly Lys Thr Arg Lys
195 200 205
Leu Met Glu Phe Ser Glu His Cys Ala Ile Ile Leu Glu Asp Asp Arg
210 215 220
Ser Asp Ile Ser Ser Thr Cys Ala Asn Asn Ile Asn His Asn Thr Glu
225 230 235 240
Leu Leu Pro Ile Glu Leu Asp Thr Leu Val Gly Lys Gly Arg Phe Ala
245 250 255
Glu Val Tyr Lys Ala Lys Leu Lys Gln Asn Thr Ser Glu Gln Phe Glu
260 265 270
Thr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Tyr Glu Glu Tyr Ala Ser Trp Lys
275 280 285
Thr Glu Lys Asp Ile Phe Ser Asp Ile Asn Leu Lys His Glu Asn Ile
290 295 300
Leu Gln Phe Leu Thr Ala Glu Glu Arg Lys Thr Glu Leu Gly Lys Gln
305 310 315 320
Tyr Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Ala Lys Gly Asn Leu Gln Glu Tyr
325 330 335
Leu Thr Arg His Val Ile Ser Trp Glu Asp Leu Arg Lys Leu Gly Ser
340 345 350
Ser Leu Ala Arg Gly Ile Ala His Leu His Ser Asp His Thr Pro Cys
355 360 365
Gly Arg Pro Lys Met Pro Ile Val His Arg Asp Leu Lys Ser Ser Asn
370 375 380
Ile Leu Val Lys Asn Asp Leu Thr Cys Cys Leu Cys Asp Phe Gly Leu
385 390 395 400
Ser Leu Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ser Val Asp Asp Leu Ala Asn Ser
405 410 415
Gly Gln Val Gly Thr Ala Arg Tyr Met Ala Pro Glu Val Leu Glu Ser
420 425 430
Arg Met Asn Leu Glu Asn Val Glu Ser Phe Lys Gln Thr Asp Val Tyr
435 440 445
Ser Met Ala Leu Val Leu Trp Glu Met Thr Ser Arg Cys Asn Ala Val
450 455 460
Gly Glu Val Lys Asp Tyr Glu Pro Pro Phe Gly Ser Lys Val Arg Glu
465 470 475 480
His Pro Cys Val Glu Ser Met Lys Asp Asn Val Leu Arg Asp Arg Gly
485 490 495
Arg Pro Glu Ile Pro Ser Phe Trp Leu Asn His Gln Gly Ile Gln Met
500 505 510
Val Cys Glu Thr Leu Thr Glu Cys Trp Asp His Asp Pro Glu Ala Arg
515 520 525
Leu Thr Ala Gln Cys Val Ala Glu Arg Phe Ser Glu Leu Glu His Leu
530 535 540
Asp Arg Leu Ser Gly Arg Ser Cys Ser Glu Glu Lys Ile Pro Glu Asp
545 550 555 560
Gly Ser Leu Asn Thr Thr Lys
565
<210> 200
<211> 851
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 200
Met Thr Ser His Tyr Val Ile Ala Ile Phe Ala Leu Met Ser Ser Cys
1 5 10 15
Leu Ala Thr Ala Gly Pro Glu Pro Gly Ala Leu Cys Glu Leu Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ser His Pro Val Gln Ala Leu Met Glu Ser Phe Thr Val
35 40 45
Leu Ser Gly Cys Ala Ser Arg Gly Thr Thr Gly Leu Pro Gln Glu Val
50 55 60
His Val Leu Asn Leu Arg Thr Ala Gly Gln Gly Pro Gly Gln Leu Gln
65 70 75 80
Arg Glu Val Thr Leu His Leu Asn Pro Ile Ser Ser Val His Ile His
85 90 95
His Lys Ser Val Val Phe Leu Leu Asn Ser Pro His Pro Leu Val Trp
100 105 110
His Leu Lys Thr Glu Arg Leu Ala Thr Gly Val Ser Arg Leu Phe Leu
115 120 125
Val Ser Glu Gly Ser Val Val Gln Phe Ser Ser Ala Asn Phe Ser Leu
130 135 140
Thr Ala Glu Thr Glu Glu Arg Asn Phe Pro His Gly Asn Glu His Leu
145 150 155 160
Leu Asn Trp Ala Arg Lys Glu Tyr Gly Ala Val Thr Ser Phe Thr Glu
165 170 175
Leu Lys Ile Ala Arg Asn Ile Tyr Ile Lys Val Gly Glu Asp Gln Val
180 185 190
Phe Pro Pro Lys Cys Asn Ile Gly Lys Asn Phe Leu Ser Leu Asn Tyr
195 200 205
Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Pro Lys Ala Ala Glu Gly Cys Val Met Ser
210 215 220
Ser Gln Pro Gln Asn Glu Glu Val His Ile Ile Glu Leu Ile Thr Pro
225 230 235 240
Asn Ser Asn Pro Tyr Ser Ala Phe Gln Val Asp Ile Thr Ile Asp Ile
245 250 255
Arg Pro Ser Gln Glu Asp Leu Glu Val Val Lys Asn Leu Ile Leu Ile
260 265 270
Leu Lys Cys Lys Lys Ser Val Asn Trp Val Ile Lys Ser Phe Asp Val
275 280 285
Lys Gly Ser Leu Lys Ile Ile Ala Pro Asn Ser Ile Gly Phe Gly Lys
290 295 300
Glu Ser Glu Arg Ser Met Thr Met Thr Lys Ser Ile Arg Asp Asp Ile
305 310 315 320
Pro Ser Thr Gln Gly Asn Leu Val Lys Trp Ala Leu Asp Asn Gly Tyr
325 330 335
Ser Pro Ile Thr Ser Tyr Thr Met Ala Pro Val Ala Asn Arg Phe His
340 345 350
Leu Arg Leu Glu Asn Asn Ala Glu Glu Met Gly Asp Glu Glu Val His
355 360 365
Thr Ile Pro Pro Glu Leu Arg Ile Leu Leu Asp Pro Gly Ala Leu Pro
370 375 380
Ala Leu Gln Asn Pro Pro Ile Arg Gly Gly Glu Gly Gln Asn Gly Gly
385 390 395 400
Leu Pro Phe Pro Phe Pro Asp Ile Ser Arg Arg Val Trp Asn Glu Glu
405 410 415
Gly Glu Asp Gly Leu Pro Arg Pro Lys Asp Pro Val Ile Pro Ser Ile
420 425 430
Gln Leu Phe Pro Gly Leu Arg Glu Pro Glu Glu Val Gln Gly Ser Val
435 440 445
Asp Ile Ala Leu Ser Val Lys Cys Asp Asn Glu Lys Met Ile Val Ala
450 455 460
Val Glu Lys Asp Ser Phe Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Gly Met Asp Val
465 470 475 480
Thr Leu Leu Asp Pro Thr Cys Lys Ala Lys Met Asn Gly Thr His Phe
485 490 495
Val Leu Glu Ser Pro Leu Asn Gly Cys Gly Thr Arg Pro Arg Trp Ser
500 505 510
Ala Leu Asp Gly Val Val Tyr Tyr Asn Ser Ile Val Ile Gln Val Pro
515 520 525
Ala Leu Gly Asp Ser Ser Gly Trp Pro Asp Gly Tyr Glu Asp Leu Glu
530 535 540
Ser Gly Asp Asn Gly Phe Pro Gly Asp Met Asp Glu Gly Asp Ala Ser
545 550 555 560
Leu Phe Thr Arg Pro Glu Ile Val Val Phe Asn Cys Ser Leu Gln Gln
565 570 575
Val Arg Asn Pro Ser Ser Phe Gln Glu Gln Pro His Gly Asn Ile Thr
580 585 590
Phe Asn Met Glu Leu Tyr Asn Thr Asp Leu Phe Leu Val Pro Ser Gln
595 600 605
Gly Val Phe Ser Val Pro Glu Asn Gly His Val Tyr Val Glu Val Ser
610 615 620
Val Thr Lys Ala Glu Gln Glu Leu Gly Phe Ala Ile Gln Thr Cys Phe
625 630 635 640
Ile Ser Pro Tyr Ser Asn Pro Asp Arg Met Ser His Tyr Thr Ile Ile
645 650 655
Glu Asn Ile Cys Pro Lys Asp Glu Ser Val Lys Phe Tyr Ser Pro Lys
660 665 670
Arg Val His Phe Pro Ile Pro Gln Ala Asp Met Asp Lys Lys Arg Phe
675 680 685
Ser Phe Val Phe Lys Pro Val Phe Asn Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln
690 695 700
Cys Glu Leu Thr Leu Cys Thr Lys Met Glu Lys His Pro Gln Lys Leu
705 710 715 720
Pro Lys Cys Val Pro Pro Asp Glu Ala Cys Thr Ser Leu Asp Ala Ser
725 730 735
Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn Lys Lys Thr Phe Thr Lys Pro Leu
740 745 750
Ala Val Ile His His Glu Ala Glu Ser Lys Glu Lys Gly Pro Ser Met
755 760 765
Lys Glu Pro Asn Pro Ile Ser Pro Pro Ile Phe His Gly Leu Asp Thr
770 775 780
Leu Thr Val Met Gly Ile Ala Phe Ala Ala Phe Val Ile Gly Ala Leu
785 790 795 800
Leu Thr Gly Ala Leu Trp Tyr Ile Tyr Ser His Thr Gly Glu Thr Ala
805 810 815
Gly Arg Gln Gln Val Pro Thr Ser Pro Pro Ala Ser Glu Asn Ser Ser
820 825 830
Ala Ala His Ser Ile Gly Ser Thr Gln Ser Thr Pro Cys Ser Ser Ser
835 840 845
Ser Thr Ala
850
<210> 201
<211> 850
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 201
Met Thr Ser His Tyr Val Ile Ala Ile Phe Ala Leu Met Ser Ser Cys
1 5 10 15
Leu Ala Thr Ala Gly Pro Glu Pro Gly Ala Leu Cys Glu Leu Ser Pro
20 25 30
Val Ser Ala Ser His Pro Val Gln Ala Leu Met Glu Ser Phe Thr Val
35 40 45
Leu Ser Gly Cys Ala Ser Arg Gly Thr Thr Gly Leu Pro Gln Glu Val
50 55 60
His Val Leu Asn Leu Arg Thr Ala Gly Gln Gly Pro Gly Gln Leu Gln
65 70 75 80
Arg Glu Val Thr Leu His Leu Asn Pro Ile Ser Ser Val His Ile His
85 90 95
His Lys Ser Val Val Phe Leu Leu Asn Ser Pro His Pro Leu Val Trp
100 105 110
His Leu Lys Thr Glu Arg Leu Ala Thr Gly Val Ser Arg Leu Phe Leu
115 120 125
Val Ser Glu Gly Ser Val Val Gln Phe Ser Ser Ala Asn Phe Ser Leu
130 135 140
Thr Ala Glu Thr Glu Glu Arg Asn Phe Pro His Gly Asn Glu His Leu
145 150 155 160
Leu Asn Trp Ala Arg Lys Glu Tyr Gly Ala Val Thr Ser Phe Thr Glu
165 170 175
Leu Lys Ile Ala Arg Asn Ile Tyr Ile Lys Val Gly Glu Asp Gln Val
180 185 190
Phe Pro Pro Lys Cys Asn Ile Gly Lys Asn Phe Leu Ser Leu Asn Tyr
195 200 205
Leu Ala Glu Tyr Leu Gln Pro Lys Ala Ala Glu Gly Cys Val Met Ser
210 215 220
Ser Gln Pro Gln Asn Glu Glu Val His Ile Ile Glu Leu Ile Thr Pro
225 230 235 240
Asn Ser Asn Pro Tyr Ser Ala Phe Gln Val Asp Ile Thr Ile Asp Ile
245 250 255
Arg Pro Ser Gln Glu Asp Leu Glu Val Val Lys Asn Leu Ile Leu Ile
260 265 270
Leu Lys Cys Lys Lys Ser Val Asn Trp Val Ile Lys Ser Phe Asp Val
275 280 285
Lys Gly Ser Leu Lys Ile Ile Ala Pro Asn Ser Ile Gly Phe Gly Lys
290 295 300
Glu Ser Glu Arg Ser Met Thr Met Thr Lys Ser Ile Arg Asp Asp Ile
305 310 315 320
Pro Ser Thr Gln Gly Asn Leu Val Lys Trp Ala Leu Asp Asn Gly Tyr
325 330 335
Ser Pro Ile Thr Ser Tyr Thr Met Ala Pro Val Ala Asn Arg Phe His
340 345 350
Leu Arg Leu Glu Asn Asn Glu Glu Met Gly Asp Glu Glu Val His Thr
355 360 365
Ile Pro Pro Glu Leu Arg Ile Leu Leu Asp Pro Gly Ala Leu Pro Ala
370 375 380
Leu Gln Asn Pro Pro Ile Arg Gly Gly Glu Gly Gln Asn Gly Gly Leu
385 390 395 400
Pro Phe Pro Phe Pro Asp Ile Ser Arg Arg Val Trp Asn Glu Glu Gly
405 410 415
Glu Asp Gly Leu Pro Arg Pro Lys Asp Pro Val Ile Pro Ser Ile Gln
420 425 430
Leu Phe Pro Gly Leu Arg Glu Pro Glu Glu Val Gln Gly Ser Val Asp
435 440 445
Ile Ala Leu Ser Val Lys Cys Asp Asn Glu Lys Met Ile Val Ala Val
450 455 460
Glu Lys Asp Ser Phe Gln Ala Ser Gly Tyr Ser Gly Met Asp Val Thr
465 470 475 480
Leu Leu Asp Pro Thr Cys Lys Ala Lys Met Asn Gly Thr His Phe Val
485 490 495
Leu Glu Ser Pro Leu Asn Gly Cys Gly Thr Arg Pro Arg Trp Ser Ala
500 505 510
Leu Asp Gly Val Val Tyr Tyr Asn Ser Ile Val Ile Gln Val Pro Ala
515 520 525
Leu Gly Asp Ser Ser Gly Trp Pro Asp Gly Tyr Glu Asp Leu Glu Ser
530 535 540
Gly Asp Asn Gly Phe Pro Gly Asp Met Asp Glu Gly Asp Ala Ser Leu
545 550 555 560
Phe Thr Arg Pro Glu Ile Val Val Phe Asn Cys Ser Leu Gln Gln Val
565 570 575
Arg Asn Pro Ser Ser Phe Gln Glu Gln Pro His Gly Asn Ile Thr Phe
580 585 590
Asn Met Glu Leu Tyr Asn Thr Asp Leu Phe Leu Val Pro Ser Gln Gly
595 600 605
Val Phe Ser Val Pro Glu Asn Gly His Val Tyr Val Glu Val Ser Val
610 615 620
Thr Lys Ala Glu Gln Glu Leu Gly Phe Ala Ile Gln Thr Cys Phe Ile
625 630 635 640
Ser Pro Tyr Ser Asn Pro Asp Arg Met Ser His Tyr Thr Ile Ile Glu
645 650 655
Asn Ile Cys Pro Lys Asp Glu Ser Val Lys Phe Tyr Ser Pro Lys Arg
660 665 670
Val His Phe Pro Ile Pro Gln Ala Asp Met Asp Lys Lys Arg Phe Ser
675 680 685
Phe Val Phe Lys Pro Val Phe Asn Thr Ser Leu Leu Phe Leu Gln Cys
690 695 700
Glu Leu Thr Leu Cys Thr Lys Met Glu Lys His Pro Gln Lys Leu Pro
705 710 715 720
Lys Cys Val Pro Pro Asp Glu Ala Cys Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile
725 730 735
Ile Trp Ala Met Met Gln Asn Lys Lys Thr Phe Thr Lys Pro Leu Ala
740 745 750
Val Ile His His Glu Ala Glu Ser Lys Glu Lys Gly Pro Ser Met Lys
755 760 765
Glu Pro Asn Pro Ile Ser Pro Pro Ile Phe His Gly Leu Asp Thr Leu
770 775 780
Thr Val Met Gly Ile Ala Phe Ala Ala Phe Val Ile Gly Ala Leu Leu
785 790 795 800
Thr Gly Ala Leu Trp Tyr Ile Tyr Ser His Thr Gly Glu Thr Ala Gly
805 810 815
Arg Gln Gln Val Pro Thr Ser Pro Pro Ala Ser Glu Asn Ser Ser Ala
820 825 830
Ala His Ser Ile Gly Ser Thr Gln Ser Thr Pro Cys Ser Ser Ser Ser
835 840 845
Thr Ala
850
<210> 202
<211> 614
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 202
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
145 150 155 160
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
165 170 175
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
195 200 205
Gly Leu Tyr Glu Leu Val Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
210 215 220
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
225 230 235 240
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
245 250 255
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
260 265 270
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
275 280 285
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
290 295 300
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
305 310 315 320
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
325 330 335
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
340 345 350
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
355 360 365
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
370 375 380
Cys Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
385 390 395 400
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
405 410 415
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
420 425 430
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
435 440 445
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
450 455 460
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
465 470 475 480
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
485 490 495
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Arg Asn
500 505 510
Leu Glu Glu Asn Cys Cys Val Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Gln
515 520 525
Asp Leu Gly Trp Lys Trp Val His Glu Pro Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn
530 535 540
Phe Cys Ser Gly Pro Cys Pro Tyr Leu Arg Ser Ala Asp Thr Thr His
545 550 555 560
Ser Thr Val Leu Gly Leu Tyr Asn Thr Leu Asn Pro Glu Ala Ser Ala
565 570 575
Ser Pro Ser Cys Val Pro Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr
580 585 590
Tyr Val Gly Arg Thr Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Val Val
595 600 605
Lys Ser Cys Lys Cys Ser
610
<210> 203
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 203
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Glu
50 55 60
Leu Val Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
325 330 335
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
340 345 350
Gly Ser Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Arg Asn Leu Glu Glu Asn
355 360 365
Cys Cys Val Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe Arg Gln Asp Leu Gly Trp
370 375 380
Lys Trp Val His Glu Pro Lys Gly Tyr Tyr Ala Asn Phe Cys Ser Gly
385 390 395 400
Pro Cys Pro Tyr Leu Arg Ser Ala Asp Thr Thr His Ser Thr Val Leu
405 410 415
Gly Leu Tyr Asn Thr Leu Asn Pro Glu Ala Ser Ala Ser Pro Ser Cys
420 425 430
Val Pro Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile Leu Tyr Tyr Val Gly Arg
435 440 445
Thr Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met Val Val Lys Ser Cys Lys
450 455 460
Cys Ser
465
<210> 204
<211> 603
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 204
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu Ala
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Ala Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
145 150 155 160
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
165 170 175
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
195 200 205
Gly Leu Tyr Glu Leu Val Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
210 215 220
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
225 230 235 240
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
245 250 255
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
260 265 270
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
275 280 285
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
290 295 300
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
305 310 315 320
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
325 330 335
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
340 345 350
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
355 360 365
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
370 375 380
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
385 390 395 400
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
405 410 415
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
420 425 430
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
435 440 445
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
450 455 460
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly
465 470 475 480
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Cys Lys
485 490 495
Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met
500 505 510
Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys
515 520 525
Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val
530 535 540
Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala
545 550 555 560
Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr
565 570 575
Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Ala Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile
580 585 590
Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
595 600
<210> 205
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 205
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Glu
50 55 60
Leu Val Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
325 330 335
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val
340 345 350
Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser
355 360 365
Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp
370 375 380
Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro
385 390 395 400
Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys
405 410 415
Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys
420 425 430
Ser Cys Ser Ser Ala Glu Cys Asn Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu
435 440 445
Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp
450 455
<210> 206
<211> 561
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 206
Pro Ile Thr Ala Lys Ala Ile Ala Ala Ser Val Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys His Phe
20 25 30
Val Val Gln Phe Lys Gly Glu Cys Tyr Tyr Thr Asn Gly Thr Gln Arg
35 40 45
Ile Arg Leu Val Thr Arg Tyr Ile Tyr Asn Arg Glu Glu Tyr Val Arg
50 55 60
Tyr Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val Thr Glu Leu Gly Arg
65 70 75 80
Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Pro Glu Ile Leu Glu Arg Thr
85 90 95
Arg Ala Glu Val Asp Thr Ala Cys Arg His Asn Tyr Glu Gly Pro Glu
100 105 110
Thr Ser Thr Ser Leu Arg Arg Leu Glu Gln Pro Asn Val Ala Ile Ser
115 120 125
Leu Ser Arg Thr Glu Ala Leu Asn His His Asn Thr Leu Val Cys Ser
130 135 140
Val Thr Asp Phe Tyr Pro Ala Lys Ile Lys Val Arg Trp Phe Arg Asn
145 150 155 160
Gly Gln Glu Glu Thr Val Gly Val Ser Ser Thr Gln Leu Ile Arg Asn
165 170 175
Gly Asp Trp Thr Phe Gln Val Leu Val Met Leu Glu Met Thr Pro His
180 185 190
Gln Gly Glu Val Tyr Thr Cys His Val Glu His Pro Ser Leu Lys Ser
195 200 205
Pro Ile Thr Val Glu Trp Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
210 215 220
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Glu Asp Asp Ile Glu Ala Asp His Val Gly Phe Tyr Gly Thr Thr
245 250 255
Val Tyr Gln Ser Pro Gly Asp Ile Gly Gln Tyr Thr His Glu Phe Asp
260 265 270
Gly Asp Glu Leu Phe Tyr Val Asp Leu Asp Lys Lys Lys Thr Val Trp
275 280 285
Arg Leu Pro Glu Phe Gly Gln Leu Ile Leu Phe Glu Pro Gln Gly Gly
290 295 300
Leu Gln Asn Ile Ala Ala Glu Lys His Asn Leu Gly Ile Leu Thr Lys
305 310 315 320
Arg Ser Asn Phe Thr Cys Ala Thr Asn Glu Ala Pro Gln Ala Thr Val
325 330 335
Phe Pro Lys Ser Pro Val Leu Leu Gly Gln Pro Asn Thr Leu Ile Cys
340 345 350
Phe Val Asp Asn Ile Phe Pro Pro Val Ile Asn Ile Thr Trp Leu Arg
355 360 365
Asn Ser Lys Ser Val Thr Asp Gly Val Tyr Glu Thr Ser Phe Leu Val
370 375 380
Asn Arg Asp His Ser Phe His Lys Leu Ser Tyr Leu Thr Phe Ile Pro
385 390 395 400
Ser Asp Asp Asp Ile Tyr Asp Cys Lys Val Glu His Trp Gly Leu Glu
405 410 415
Glu Pro Val Leu Lys His Trp Glu Pro Glu Ile Pro Ala Pro Met Ser
420 425 430
Glu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
450 455 460
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
465 470 475 480
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
485 490 495
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
500 505 510
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Leu Ser Ser Leu Thr Leu
515 520 525
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
530 535 540
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
545 550 555 560
Cys
<210> 207
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 207
Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly
1 5 10 15
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Ser Glu Cys His Phe Val Val Gln Phe Lys Gly Glu Cys Tyr Tyr Thr
35 40 45
Asn Gly Thr Gln Arg Ile Arg Leu Val Thr Arg Tyr Ile Tyr Asn Arg
50 55 60
Glu Glu Tyr Val Arg Tyr Asp Ser Asp Val Gly Glu Tyr Arg Ala Val
65 70 75 80
Thr Glu Leu Gly Arg Pro Asp Ala Glu Tyr Trp Asn Ser Gln Pro Glu
85 90 95
Ile Leu Glu Arg Thr Arg Ala Glu Val Asp Thr Ala Cys Arg His Asn
100 105 110
Tyr Glu Gly Pro Glu Thr Ser Thr Ser Leu Arg Arg Leu Glu Gln Pro
115 120 125
Asn Val Ala Ile Ser Leu Ser Arg Thr Glu Ala Leu Asn His His Asn
130 135 140
Thr Leu Val Cys Ser Val Thr Asp Phe Tyr Pro Ala Lys Ile Lys Val
145 150 155 160
Arg Trp Phe Arg Asn Gly Gln Glu Glu Thr Val Gly Val Ser Ser Thr
165 170 175
Gln Leu Ile Arg Asn Gly Asp Trp Thr Phe Gln Val Leu Val Met Leu
180 185 190
Glu Met Thr Pro His Gln Gly Glu Val Tyr Thr Cys His Val Glu His
195 200 205
Pro Ser Leu Lys Ser Pro Ile Thr Val Glu Trp Ser Ser Gly Gly Gly
210 215 220
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Asp Asp Ile Glu Ala Asp His Val Gly
245 250 255
Phe Tyr Gly Thr Thr Val Tyr Gln Ser Pro Gly Asp Ile Gly Gln Tyr
260 265 270
Thr His Glu Phe Asp Gly Asp Glu Leu Phe Tyr Val Asp Leu Asp Lys
275 280 285
Lys Lys Thr Val Trp Arg Leu Pro Glu Phe Gly Gln Leu Ile Leu Phe
290 295 300
Glu Pro Gln Gly Gly Leu Gln Asn Ile Ala Ala Glu Lys His Asn Leu
305 310 315 320
Gly Ile Leu Thr Lys Arg Ser Asn Phe Thr Cys Ala Thr Asn Glu Ala
325 330 335
Pro Gln Ala Thr Val Phe Pro Lys Ser Pro Val Leu Leu Gly Gln Pro
340 345 350
Asn Thr Leu Ile Cys Phe Val Asp Asn Ile Phe Pro Pro Val Ile Asn
355 360 365
Ile Thr Trp Leu Arg Asn Ser Lys Ser Val Thr Asp Gly Val Tyr Glu
370 375 380
Thr Ser Phe Leu Val Asn Arg Asp His Ser Phe His Lys Leu Ser Tyr
385 390 395 400
Leu Thr Phe Ile Pro Ser Asp Asp Asp Ile Tyr Asp Cys Lys Val Glu
405 410 415
His Trp Gly Leu Glu Glu Pro Val Leu Lys His Trp Glu Pro Glu Ile
420 425 430
Pro Ala Pro Met Ser Glu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Val Ala Ala
450 455 460
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
465 470 475 480
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
485 490 495
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
500 505 510
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Leu
515 520 525
Ser Ser Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
530 535 540
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
545 550 555 560
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
565
<210> 208
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 构建体
<400> 208
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Leu Ser Ser Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 209
<211> 248
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 209
Gln Leu Cys Lys Phe Cys Asp Val Arg Phe Ser Thr Cys Asp Asn Gln
1 5 10 15
Lys Ser Cys Met Ser Asn Cys Ser Ile Thr Ser Ile Cys Glu Lys Pro
20 25 30
Gln Glu Val Cys Val Ala Val Trp Arg Lys Asn Asp Glu Asn Ile Thr
35 40 45
Leu Glu Thr Val Cys His Asp Pro Lys Leu Pro Tyr His Asp Phe Ile
50 55 60
Leu Glu Asp Ala Ala Ser Pro Lys Cys Ile Met Lys Glu Lys Lys Lys
65 70 75 80
Pro Gly Glu Thr Phe Phe Met Cys Ser Cys Ser Ser Ala Glu Cys Asn
85 90 95
Asp Asn Ile Ile Phe Ser Glu Glu Tyr Asn Thr Ser Asn Pro Asp Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe
130 135 140
Arg Asn Leu Glu Glu Asn Cys Cys Val Arg Pro Leu Tyr Ile Asp Phe
145 150 155 160
Arg Gln Asp Leu Gly Trp Lys Trp Val His Glu Pro Lys Gly Tyr Tyr
165 170 175
Ala Asn Phe Cys Ser Gly Pro Cys Pro Tyr Leu Arg Ser Ala Asp Thr
180 185 190
Thr His Ser Thr Val Leu Gly Leu Tyr Asn Thr Leu Asn Pro Glu Ala
195 200 205
Ser Ala Ser Pro Ser Cys Val Pro Gln Asp Leu Glu Pro Leu Thr Ile
210 215 220
Leu Tyr Tyr Val Gly Arg Thr Pro Lys Val Glu Gln Leu Ser Asn Met
225 230 235 240
Val Val Lys Ser Cys Lys Cys Ser
245
Claims (19)
1.一种多聚体抗原呈递多肽(MAPP)，所述多聚体抗原呈递多肽包含：
(i)框架多肽，其包含二聚化序列和多聚化序列，
(ii)二聚化多肽，其包含与所述框架多肽的所述二聚化序列互补的对应物二聚化序列，所述二聚化序列和所述对应物二聚化序列通过共价和/或非共价相互作用二聚化以形成MAPP异二聚体，和
(iii)至少一个呈递序列和/或呈递复合物；
其中
(a)每个呈递序列包含(i)T1D肽表位，和(ii)MHC II类α1、α2、β1和β2结构域多肽序列；
(b)每个呈递复合物包含呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列，其中
所述呈递复合物第一序列或所述呈递复合物第二序列包含所述肽表位以及所述α1、α2、β1和β2多肽序列中的至少一者，并且
所述呈递复合物第一序列和所述呈递复合物第二序列一起包含T1D肽表位和MHC II类α1、α2、β1和β2结构域多肽序列，
(c)所述二聚化多肽和/或所述框架多肽中的一者或两者包含呈递序列或呈递复合物第一序列，并且
(d)所述框架多肽、所述二聚化多肽、所述呈递序列或所述呈递复合物包含(i)TGF-β序列，(ii)掩蔽序列，或(iii)至少一个掩蔽的TGF-β免疫调节多肽(“掩蔽的TGF-βMOD”)，每个掩蔽的TGF-βMOD包含掩蔽序列和TGF-β序列；并且
(e)至少一个框架多肽、二聚化肽、呈递序列或呈递复合物包含一个或多个独立选择的另外的MOD和/或另外的变体MOD多肽序列；并且
其中所述框架多肽、所述二聚化多肽、所述呈递序列、所述呈递复合物第一序列和/或所述呈递复合物第二序列任选地包含一个或多个独立选择的接头序列。
2.如权利要求1所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与HLA DRA*01*01或HLA DRA*01*02多肽序列的全部或至少约50个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
(ii)β1和β2结构域多肽序列，其各自与DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0402、DRB1*0405、DRB1*0801或DRB1*0901多肽序列的至少约60个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
3.如权利要求1所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与HLA DQα1或DQα2(DQA1或DQA2)多肽序列的至少60个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
(ii)β1和β2结构域多肽序列，其各自与HLA DQβ1或DQβ2(DQB1或DQB2)多肽序列的至少60个连续氨基酸具有90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
4.如权利要求3所述的MAPP，其中至少一个呈递序列或呈递复合物包含：
(i)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1*0501多肽序列的至少60个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1*0201多肽序列的至少60个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；或
(ii)α1和α2结构域多肽序列，其各自与DQA1*0301多肽序列的至少60个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性；和
β1和β2结构域多肽序列，其各自与DQB1*0302多肽序列的至少60个连续氨基酸具有至少90％或至少95％(例如，至少98％或100％)序列同一性。
5.如权利要求1所述的MAPP，其中所述MAPP包含至少一个接头，其包含：
(i)GSGGS,GGGS、GGSG、GGSGG、GSGSG、GSGGG、GGGSG、GSSSG、GGGGS序列，其中任一者可以重复1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次；或
(ii)含半胱氨酸接头序列，其选自CGGGS、GCGGS、GGCGS、GGGCS和GGGGC，所述接头的其余部分包含Gly和Ser残基。
6.如权利要求1所述的MAPP，其中所述MAPP包含呈递序列，并且其中所述呈递序列在N端到C端方向上包含：
(i)所述T1D肽表位、所述β1、α1、α2和β2结构域多肽序列；
(ii)所述T1D肽表位、所述β1、β2、α1和α2结构域多肽序列；或
(iii)所述T1D肽表位、所述α1、α2、β1和β2结构域多肽序列，
其中所述呈递序列任选地包含一个或多个野生型或变体MOD多肽序列；并且
其中所述呈递序列任选地包含一个或多个独立选择的接头多肽。
7.如权利要求1所述的MAPP，其包含至少一个呈递复合物，其中所述至少一个呈递复合物包含呈递复合物第一序列和呈递复合物第二序列，并且其中：
(i)所述呈递复合物第一序列包含所述α1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述β1结构域多肽序列；
(ii)所述呈递复合物第一序列包含所述α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述β2结构域多肽序列；
(iii)所述呈递复合物第一序列包含所述β1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述α1结构域多肽序列；
(iv)所述呈递复合物第一序列包含所述β2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述α2结构域多肽序列；
(v)所述呈递复合物第一序列包含所述α1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述β1和β2结构域多肽序列；
(vi)所述呈递复合物第一序列包含所述α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述β1和β2结构域多肽序列；
(vii)所述呈递复合物第一序列包含所述α1和/或α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述β1和β2结构域多肽序列；
(viii)所述呈递复合物第一序列包含所述β1和/或β2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述T1D肽表位序列和所述α1和α2结构域多肽序列；
(ix)所述呈递复合物第一序列包含所述肽表位序列和所述α1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述β1结构域多肽序列；
(x)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述β2结构域多肽序列；
(xi)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述β1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述α1结构域多肽序列；
(xii)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述β2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述α2结构域多肽序列；
(xiii)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述α1结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述β1和β2结构域多肽序列；
(xiv)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述β1和β2结构域多肽序列；
(xv)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述α1和/或α2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述β1和β2结构域多肽序列；或
(xvi)所述呈递复合物第一序列包含所述T1D肽表位序列和所述β1和/或β2结构域多肽序列，并且其缔合的呈递复合物第二序列包含所述α1和α2结构域多肽序列，
并且进一步地，其中所述至少一个呈递复合物任选地包含一个或多个或两个或更多个野生型或变体MOD。
8.如任一前述权利要求所述的MAPP，其复合以形成双链体或更高阶MAPP，所述双链体或更高阶MAPP包含如权利要求1-7中任一项所述的至少第一MAPP异二聚体和第二MAPP异二聚体，其中：
(i)所述第一MAPP异二聚体包含具有第一多聚化序列和第一二聚化序列的第一框架多肽，以及具有与所述第一二聚化序列互补的第一对应物二聚化序列的第一二聚化多肽；并且
(ii)所述第二MAPP异二聚体包含具有第二多聚化序列和第二二聚化序列的第二框架多肽，以及具有与所述第二二聚化序列互补的第二对应物二聚化序列的第二二聚化多肽；
其中所述第一框架多肽和所述第二框架多肽通过任选地包含一个或多个链间共价键的所述第一多聚化序列和所述第二多聚化序列之间的结合相互作用来缔合，并且所述多聚化序列与所述二聚化序列或所述对应物二聚化序列不相同，并且基本上不与所述二聚化序列或对应物二聚化序列缔合或结合；并且
其中所述双链体或更高阶MAPP包含具有以顺式或反式存在的所述掩蔽序列和所述TGF-β序列的至少一个掩蔽的TGF-βMOD。
9.如权利要求8所述的双链体MAPP，其中当所述多聚化序列不是种间多聚化对时，所述多聚化序列选自由以下组成的组：免疫球蛋白重链恒定区、胶原凝集素家族二聚化序列、卷曲螺旋结构域和亮氨酸拉链结构域；并且
其中当所述多聚化序列是种间多聚化对时，所述多聚化序列选自由以下组成的组：Fos和Jun多肽对、Ig CH1和Ig CLκ或λ恒定区多肽对、无二硫键的杵臼结构(“KiH”)对、具有稳定二硫键的杵臼结构(“KiHs-s”)对、HA-TF多肽对、ZW-1多肽对、7.8.60多肽对、DD-KK多肽对、EW-RVT多肽对、EW-RVTs-s多肽对和A107多肽对。
10.如权利要求8所述的双链体MAPP，其中所述多聚化序列包含Ig Fc区并且所述第一二聚化序列和所述第二二聚化序列包含独立选择的Ig CH1、Ig CLκ或λ、亮氨酸拉链、Fos或Jun结构域。
11.如权利要求8所述的双链体MAPP，其中：
(i)所述第一框架多肽和所述第二框架多肽的所述多聚化序列通过至少一个二硫键共价连接；或
(ii)所述第一二聚化序列及其对应物二聚化序列和/或所述第二二聚化序列及其对应物二聚化序列通过至少一个二硫键共价连接，并且所述第一框架多肽和所述第二框架多肽的所述多聚化序列通过至少一个二硫键共价连接。
12.如权利要求8所述的双链体MAPP，其包含至少一个野生型或变体的另外的MOD多肽序列，其中每个另外的MOD独立地选自由以下组成的组：IL-2、PD-L1、CD80、CD86和4-1BBL多肽序列。
13.如权利要求12所述的双链体MAPP，其包含至少一个野生型或变体IL-2多肽或至少一个野生型或变体PD-L1多肽。
14.如权利要求13所述的双链体MAPP，其中所述肽表位为约10个氨基酸至约20个氨基酸。
15.一种治疗或预防T1D的方法，所述方法包括向患者/受试者施用有效量的如权利要求1-7中任一项所述的一种或多种MAPP和/或如权利要求8-14中任一项所述的双链体MAPP。
16.一种或多种核酸分子，其包含编码权利要求1-7中任一项所述的MAPP的序列。
17.一种产生表达MAPP或双链体MAPP的细胞的方法，所述方法包括将根据权利要求16所述的一种或多种核酸分子在体外引入细胞中；选择产生所述MAPP或双链体MAPP的细胞；以及任选地选择包含未整合或整合到至少一条细胞染色体中的所述一种或多种核酸的全部或部分的细胞。
18.一种或多种细胞，其瞬时或稳定表达由如权利要求17所述的方法制备的所述MAPP或双链体MAPP；任选地，其中相对于其他方面相同但不表达所述MAPP或双链体MAPP的细胞，所述细胞表达约25至约350mg/l或更多的所述MAPP或双链体MAPP，而不显著降低活力。
19.一种将一种或多种MOD多肽和/或变体MOD多肽选择性递送至患有或疑似患有T1D的人患者的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的如权利要求1-7所述的一种或多种MAPP和/或如权利要求8-14所述的另一种双链体MAPP。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202163177954P | 2021-04-21 | 2021-04-21 | |
| US63/177,954 | 2021-04-21 | ||
| PCT/US2022/025526 WO2022226054A2 (en) | 2021-04-21 | 2022-04-20 | Antigen presenting polypeptide complexes bearing tgf-beta and methods of use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117561280A true CN117561280A (zh) | 2024-02-13 |
Family
ID=83723774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202280043538.3A Pending CN117561280A (zh) | 2021-04-21 | 2022-04-20 | 携带TGF-β的抗原呈递多肽复合物及其使用方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240190933A1 (zh) |
| EP (1) | EP4326402A2 (zh) |
| JP (1) | JP2024515205A (zh) |
| CN (1) | CN117561280A (zh) |
| AU (1) | AU2022263441A1 (zh) |
| CA (1) | CA3216278A1 (zh) |
| WO (1) | WO2022226054A2 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020534352A (ja) | 2017-09-07 | 2020-11-26 | キュー バイオファーマ，インコーポレーテッド | コンジュゲーション部位を有するｔ細胞調節多量体ポリペプチド及びその使用方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2269505T3 (es) * | 2000-10-30 | 2007-04-01 | Genpat77 Pharmacogenetics Ag | Procedimiento para la obtencion de inhibidores tirc7 y sus ligandos y sus usos. |
| WO2016037009A1 (en) * | 2014-09-03 | 2016-03-10 | Hudson-Alpha Institute For Biotechnology | Biomarkers for triple-negative breast cancer |
| WO2019051126A1 (en) * | 2017-09-07 | 2019-03-14 | Cue Biopharma, Inc. | ANTIGEN PRESENTING POLYPEPTIDES COMPRISING CHEMICAL CONJUGATION SITES AND METHODS OF USE THEREOF |
| KR20200064083A (ko) * | 2017-09-07 | 2020-06-05 | 큐 바이오파마, 인크. | 항원-제시 폴리펩티드 및 이의 사용 방법 |
-
2022
- 2022-04-20 CA CA3216278A patent/CA3216278A1/en active Pending
- 2022-04-20 US US18/287,754 patent/US20240190933A1/en active Pending
- 2022-04-20 AU AU2022263441A patent/AU2022263441A1/en active Pending
- 2022-04-20 JP JP2023564568A patent/JP2024515205A/ja active Pending
- 2022-04-20 WO PCT/US2022/025526 patent/WO2022226054A2/en active Application Filing
- 2022-04-20 EP EP22792401.6A patent/EP4326402A2/en active Pending
- 2022-04-20 CN CN202280043538.3A patent/CN117561280A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2022263441A1 (en) | 2023-11-09 |
| EP4326402A2 (en) | 2024-02-28 |
| CA3216278A1 (en) | 2022-10-27 |
| JP2024515205A (ja) | 2024-04-05 |
| WO2022226054A9 (en) | 2023-07-27 |
| US20240190933A1 (en) | 2024-06-13 |
| AU2022263441A9 (en) | 2023-11-16 |
| WO2022226054A3 (en) | 2022-12-08 |
| WO2022226054A2 (en) | 2022-10-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2022046544A (ja) | ｓｙｎＴａｃポリペプチド及びその使用 | |
| JP2021500855A (ja) | 抗原提示ポリペプチドおよびその使用方法 | |
| TW201930337A (zh) | 多聚體ｔ細胞調節多肽及其使用方法 | |
| CN109414498A (zh) | T细胞调节性多聚体多肽及其使用方法 | |
| JP2022515331A (ja) | 多量体ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法 | |
| JP2022515330A (ja) | 多量体ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法 | |
| US20230338509A1 (en) | T cell modulatory polypeptides and methods of use thereof | |
| US20230414777A1 (en) | Antigen Presenting Polypeptide Complexes and Methods of Use Thereof | |
| US20220089680A1 (en) | Multimeric t-cell modulatory polypeptides and methods of use thereof | |
| US20240101627A1 (en) | Mhc class ii t-cell modulatory polypeptides for treating type 1 diabetes mellitus (t1d) and methods of use thereof | |
| CN117561280A (zh) | 携带TGF-β的抗原呈递多肽复合物及其使用方法 | |
| US20230218731A1 (en) | Antigen Presenting Polypeptide Complexes and Methods of Use Thereof | |
| JP2024516610A (ja) | Ｍｈｃクラスｉｉ ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法 | |
| CA3174130A1 (en) | Tgf-beta polypeptides | |
| US20240270815A1 (en) | Antigen Presenting Polypeptide Complexes and Methods of Use Thereof | |
| US20240197846A1 (en) | Antigen-Presenting Polypeptides with Chemical Conjugation Sites and Methods of Use Thereof | |
| US20240181025A1 (en) | Antigen Presenting Polypeptide Complexes Bearing TGF-Beta and Methods of Use Thereof | |
| TWI856047B (zh) | 多聚體ｔ細胞調節多肽及其使用方法 | |
| WO2024006576A1 (en) | Mhc class ii protein constructs |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |