JP2024516610A - Ｍｈｃクラスｉｉ ｔ細胞調節ポリペプチド及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
本開示は、ＡＩペプチドエピトープと、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと、１つ以上の免疫調節ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドと、マスキングポリペプチドと、を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するための組成物及び方法、ならびに自己免疫疾患を有する人を治療するための組成物及び方法を提供する。TIFF2024516610000030.tif87159
Description
相互参照
本出願は、２０２１年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／１７７，６６０号の利益を主張するものであり、当該出願は、その全体が参照により本明細書に援用される。
本出願は、２０２１年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／１７７，６６０号の利益を主張するものであり、当該出願は、その全体が参照により本明細書に援用される。
テキストファイルとして提供される配列表の参照による援用
２０２２年３月２８日に作成され、４７８ＫＢのサイズを有するテキストファイル「ＣＵＥＢ－１４３ＷＯ＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」が配列表として本出願とともに提供される。テキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
２０２２年３月２８日に作成され、４７８ＫＢのサイズを有するテキストファイル「ＣＵＥＢ－１４３ＷＯ＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」が配列表として本出願とともに提供される。テキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
序文
哺乳類の免疫系の適切な機能の中核をなすのは、２つの特殊な細胞種である抗原提示細胞（「ＡＰＣ」）とＴ細胞との間における活動とコミュニケーションの連携である。ＡＰＣは、外来生物由来のタンパク質、または異常なタンパク質（例えば、がん細胞における遺伝子突然変異によるもの）を捕捉し、それを、Ｔ細胞を含むより大きな免疫系による精査のためのシグナルに適した小さな断片に分解する役割を持つ。特に、ＡＰＣは、タンパク質を小さなペプチド断片に分解し、次に、それが主要組織適合遺伝子複合体（「ＭＨＣ」）のタンパク質と対になり、細胞表面に提示される。Ｔ細胞エピトープとしても知られる、ペプチド断片を含むＭＨＣの細胞表面の提示は、Ｔ細胞による監視の基本的な足がかりを提供し、これにより、Ｔ細胞は、特異的な認識が可能になる。ペプチド断片は、病原体由来、腫瘍由来、または天然宿主タンパク質（自己タンパク質）由来であり得る。更に、ＡＰＣは、その存在が脅威レベルの激化を意味する、細菌毒素、ウイルスタンパク質、ウイルスＤＮＡ、ウイルスＲＮＡなどの他の外来成分を認識することができる。ＡＰＣは、より効果的な応答をもたらすために、更なる共刺激シグナルを介して、この情報をＴ細胞に中継する。
哺乳類の免疫系の適切な機能の中核をなすのは、２つの特殊な細胞種である抗原提示細胞（「ＡＰＣ」）とＴ細胞との間における活動とコミュニケーションの連携である。ＡＰＣは、外来生物由来のタンパク質、または異常なタンパク質（例えば、がん細胞における遺伝子突然変異によるもの）を捕捉し、それを、Ｔ細胞を含むより大きな免疫系による精査のためのシグナルに適した小さな断片に分解する役割を持つ。特に、ＡＰＣは、タンパク質を小さなペプチド断片に分解し、次に、それが主要組織適合遺伝子複合体（「ＭＨＣ」）のタンパク質と対になり、細胞表面に提示される。Ｔ細胞エピトープとしても知られる、ペプチド断片を含むＭＨＣの細胞表面の提示は、Ｔ細胞による監視の基本的な足がかりを提供し、これにより、Ｔ細胞は、特異的な認識が可能になる。ペプチド断片は、病原体由来、腫瘍由来、または天然宿主タンパク質（自己タンパク質）由来であり得る。更に、ＡＰＣは、その存在が脅威レベルの激化を意味する、細菌毒素、ウイルスタンパク質、ウイルスＤＮＡ、ウイルスＲＮＡなどの他の外来成分を認識することができる。ＡＰＣは、より効果的な応答をもたらすために、更なる共刺激シグナルを介して、この情報をＴ細胞に中継する。
Ｔ細胞は、特殊な細胞表面受容体であるＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）を介して、ペプチド－主要組織適合遺伝子複合体（「ｐＭＨＣ」）複合体を認識する。ＴＣＲは、各Ｔ細胞に固有のものであり、その結果、各Ｔ細胞は、特定のｐＭＨＣ標的に極めて特異的である。潜在的脅威にあふれた世界に適切に対処するために、人体内には、明確に異なるＴＣＲを有する別個のＴ細胞が多数（約１０，０００，０００）存在する。更に、特定のＴ細胞ペプチドに特異的である任意の所与のＴ細胞は、最初は、全Ｔ細胞集団のごく小さな部分でしかない。通常は、休眠状態で、数も限られているが、特定のＴＣＲを持つＴ細胞は、ＡＰＣによって容易に活性化及び増幅され、何百万ものＴ細胞が関与する極めて強力なＴ細胞応答をもたらすことができる。このように活性化されたＴ細胞応答は、以下に例示するように、ウイルス感染、細菌感染、及び腫瘍を含む他の細胞脅威を攻撃し、除去することが可能である。逆に、自己抗原または共通抗原に対する、過活性のＴ細胞応答の広範な非特異的活性化は、健康な組織または細胞を不適切に攻撃及び破壊するＴ細胞を発生させることがある。
概要
本開示は、自己免疫疾患関連ペプチドエピトープと、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと、１つ以上の免疫調節ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドと、マスキングポリペプチドと、を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するための組成物及び方法、ならびに自己免疫疾患を有する人を治療するための組成物及び方法を提供する。
本開示は、自己免疫疾患関連ペプチドエピトープと、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと、１つ以上の免疫調節ポリペプチドと、ＴＧＦ－βポリペプチドと、マスキングポリペプチドと、を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するための組成物及び方法、ならびに自己免疫疾患を有する人を治療するための組成物及び方法を提供する。
定義
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかである、任意の長さのヌクレオチドの重合形態を指す。したがって、本用語は、限定するものではないが、一本鎖、二本鎖もしくは多本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリン及びピリミジン塩基もしくは他の天然、化学的もしくは生化学的修飾、非天然もしくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含む重合体を含む。
「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかである、任意の長さのヌクレオチドの重合形態を指す。したがって、本用語は、限定するものではないが、一本鎖、二本鎖もしくは多本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリン及びピリミジン塩基もしくは他の天然、化学的もしくは生化学的修飾、非天然もしくは誘導体化ヌクレオチド塩基を含む重合体を含む。
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、任意の長さのアミノ酸の重合形態を指し、これらには、コードアミノ酸及び非コードアミノ酸、化学的もしくは生化学的に修飾されたアミノ酸、または誘導体化されたアミノ酸、ならびに修飾されたペプチド骨格を有するポリペプチドが含まれ得る。更に、本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」は、そのタンパク質が所望の活性を保持する限り、天然配列に対して欠失、付加及び置換（当業者に知られているように一般に天然では保存的置換）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的変異導入法のように意図的なものであってもよいし、タンパク質を産生する宿主による変異またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅もしくは他の組み換えＤＮＡ法によるエラーなどの偶発的なものであってもよい。本明細書における既知のポリペプチドの特定の残基または残基数への言及、例えば、ヒトＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドの位置７２または７５は、野生型ポリペプチドにおける当該位置のアミノ酸を指すと理解される（すなわち、Ｉ７２またはＫ７５）。野生型ポリペプチドの配列が１つ以上のアミノ酸の付加または欠失のいずれかによって改変される限りにおいて、特定の残基または残基番号への言及は、改変された後の位置番号にあることが理解される、改変されたポリペプチドにおける同じ特定のアミノ酸を指すように、対応して変更されることを当業者であれば理解するであろう。例えば、ヒトＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドが、Ｎ末端で１つのアミノ酸の付加によって改変される場合、位置７２もしくは７５、または残基Ｉ７２もしくはＫ７５への言及は、位置７３もしくは７６、または残基Ｉ７３及びＫ７６にあるアミノ酸を示すことが理解される。同様に、本明細書において、特定の位置にある特定のアミノ酸の置換への言及、例えば、Ｉ７２Ｃは、野生型ポリペプチドの位置７２にあるアミノ酸、すなわち、イソロイシンに対するシステインの置換を指すことが理解される。例えば、野生型ポリペプチドが、位置７２にあるアミノ酸をイソロイシンから代替アミノ酸へ変更するように改変される場合、Ｉ７２Ｃへの言及は、代替アミノ酸のシステイン置換を指すことが理解される。そのような場合、ポリペプチドが、１つ以上のアミノ酸の付加または欠失によって更に改変される場合、Ｉ７２Ｃへの言及は、改変された後の位置番号における代替アミノ酸のシステインによる置換を指すことが理解される。ポリペプチド、例えば、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の「非天然Ｃｙｓ残基」への言及は、そのポリペプチドが、対応する野生型ポリペプチドにはＣｙｓが存在しない場所にＣｙｓ残基を含むことを意味する。これは、野生型配列に存在するアミノ酸、例えば、ＤＲＡ＊０１０１ポリペプチドの位置７２または７５（図１３Ｇ及び図１３Ｈ参照）を、野生型ＤＲＡ＊０１０１ポリペプチド（図１３Ａ参照）に存在するイソロイシン（Ｉ）またはリシン（Ｋ）残基の代わりにシステインに置換する、通常のタンパク質工学によって達成することができる。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが別のポリヌクレオチドまたはポリペプチドに対して、あるパーセントの「配列同一性」を有するということは、整列させ、２つの配列を比較したとき、当該パーセンテージの塩基またはアミノ酸が同じであり、同じ相対位置にあることを意味する。配列同一性は、多数の異なる方法で決定することができる。配列同一性を決定するには、様々な簡便な方法及びコンピュータープログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ、Ｔ－ＣＯＦＦＥＥ、ＭＵＳＣＬＥ、ＭＡＦＦＴなど）を使用して配列を整列させることができ、こうした方法及びコンピュータープログラムは、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｌｉ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｔｃｏｆｆｅｅ／、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｍｕｓｃｌｅ／、ｍａｆｆｔ．ｃｂｒｃ．ｊｐ／ａｌｉｇｎｍｅｎｔ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／を含むワールドワイドウェブ上のサイトを通じて利用可能である。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０を参照されたい。特に指定がない限り、本明細書において言及される「配列同一性」は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３に記載されているＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ）によって決定される。
本明細書で使用される場合、「マスキングされた」とは、ある分子（例えば、マスキングされるポリペプチドまたはマスキングされるタンパク質）が、マスキング分子（例えば、ポリペプチド、タンパク質またはタンパク質断片）によって結合されるか、または別様に係合され、それにより、その分子に対する親和性を同じく有する他のタンパク質（例えば、細胞表面受容体）に対して、マスキングされた分子の利用可能性を制限することを意味する。
相互特異的結合配列は、ポリペプチドの非対称的な対形成（ヘテロ二量体形成）を可能にする二量体化配列である。相互特異的結合配列は、その同種の結合パートナーである、対応する相互特異的結合配列（複数可）とのヘテロ二量体の形成を選好する（ホモ二量体の形成とは対照的）。キー・イン・ホール（またはキー・イントゥ・ホール）のＦｃポリペプチドペアは、相互特異的結合配列及びその対応する相互特異的結合配列の一例である。
ＭＯＤポリペプチドの配置を説明するために本明細書で使用される「タンデム」とは、２つ以上のＭＯＤが、隔てられるとしてもリンカーでのみ隔てられたポリペプチド上に、隣接して配置されることを意味する。
本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、体内、例えば、自己免疫疾患を有する患者の体内で生じる任意のプロセスまたは手順を指す。
本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」は、体外で生じる任意のプロセスまたは手順を指す。
「保存的アミノ酸置換」という用語は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のタンパク質の互換性を指す。例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンからなる脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群；セリン及びトレオニンからなる脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群；アスパラギン及びグルタミンからなるアミド含有側鎖を有するアミノ酸の群；フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンからなる芳香族側鎖を有するアミノ酸の群；リシン、アルギニン、及びヒスチジンからなる塩基性側鎖を有するアミノ酸の群；グルタミン酸及びアスパラギン酸からなる酸性側鎖を有するアミノ酸の群；ならびにシステイン及びメチオニンからなる硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群。例示的な保存的アミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リシン－アルギニン、アラニン－バリン－グリシン、及びアスパラギン－グルタミンである。
本明細書で（例えば、Ｔ細胞上のポリペプチド（例えば、Ｔ細胞受容体）に対するＴ細胞調節抗原提示ポリペプチドの結合に関して）使用される「結合」という用語は、２つの分子間の非共有結合的な相互作用を指す。非共有結合は、例えば、静電的、疎水性、イオン性及び／または水素結合相互作用（塩橋及び水橋などの相互作用を含む）による２つの分子間の直接的会合を指す。「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔ ｂｏｎｄ）」は、本明細書で使用されるとき、２つの異なる分子間での１つ以上の共有化学結合の形成を指す。
本明細書で使用される「免疫学的シナプス」または「免疫シナプス」という用語は、一般に、適応免疫応答において相互作用する２つの免疫細胞の間の天然の界面を指し、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）または標的細胞とエフェクター細胞、例えば、リンパ球、エフェクターＴ細胞、ナチュラルキラー細胞などとの間の界面が含まれる。ＡＰＣとＴ細胞との間の免疫学的シナプスは、例えば、Ｂｒｏｍｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１９：３７５－９６（当該文献の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されているように、一般に、Ｔ細胞抗原受容体と主要組織適合遺伝子複合体分子との相互作用によって開始される。
「Ｔ細胞」は、ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋細胞）、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋細胞）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、及びＮＫ－Ｔ細胞を含む、ＣＤ３を発現する全てのタイプの免疫細胞を含む。
「免疫調節ポリペプチド」（「ＭＯＤ」とも称される）という用語は、本明細書で使用されるとき、Ｔ細胞上の同種の免疫共調節ポリペプチドに特異的に結合することによって、一次シグナル（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、ペプチドをロードした主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）ポリペプチドとの結合によってもたらされるもの）に加えて、Ｔ細胞応答（限定するものではないが、増殖、活性化、分化などを含む）を媒介するシグナルをもたらす、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞、Ｂ細胞など）上のポリペプチド、またはＡＰＣ上のポリペプチドの一部を含む。
「異種」とは、本明細書で使用されるとき、未変性の核酸またはタンパク質にはみられないヌクレオチドまたはポリペプチドをそれぞれ意味する。
「組み換え」とは、本明細書で使用されるとき、特定の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が、天然系でみられる内因性核酸とは区別可能な構造的なコード配列または非コード配列を有するコンストラクトをもたらす、クローニング、制限、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）及び／またはライゲーションの各工程の様々な組み合わせの産物であることを意味する。ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、ｃＤＮＡ断片または一連の合成オリゴヌクレオチドからアセンブリし、細胞または無細胞転写翻訳系に含有される組み換え転写単位から発現可能な合成核酸を提供することができる。
「組み換え発現ベクター」または「ＤＮＡコンストラクト」という用語は、ベクター及び少なくとも１つのインサートを含むＤＮＡ分子を指すために本明細書中で区別なく使用される。組み換え発現ベクターは、通常、インサート（複数可）の発現及び／または伝播のために、あるいは、他の組み換えヌクレオチド配列の構築のために作製される。インサート（複数可）は、プロモーター配列に作動可能に連結されても連結されなくてもよく、ＤＮＡ制御配列に作動可能に連結されても連結されなくてもよい。
本明細書で使用されるとき、「親和性」という用語は、２つの作用物質（例えば、抗体及び抗原）の可逆的結合の平衡定数を指し、解離定数（ＫＤ）で表される。本明細書で使用されるとき、「アビディティ」という用語は、希釈後における２つ以上の作用物質の複合体の解離抵抗性を指す。
「治療」、「治療すること」などの用語は、一般に、所望の薬理学的作用及び／または生理学的作用を得ることを意味するために本明細書で使用される。作用は、疾患もしくはその症状を完全もしくは部分的に防ぐという点で予防的であり得、及び／または疾患及び／または当該疾患に起因し得る有害作用を部分的もしくは完全に治すという点で治療的であり得る。本明細書で使用される「治療」は、哺乳動物における疾患または症状のあらゆる治療を包含し、（ａ）疾患もしくは症状に罹患する素因があり得るが、まだ罹患の診断を受けていない対象における疾患もしくは症状の発症予防、（ｂ）疾患もしくは症状の阻害、すなわち、その発生の阻止、及び／または（ｃ）疾患の緩和、すなわち、疾患の退行の誘起を含む。治療薬は、疾患または損傷の発生前、発生中、または発生後に投与され得る。進行中の疾患の治療が特に対象となるが、この場合、治療は、患者の望ましくない臨床症状を安定化または軽減させるものである。そのような治療は、望ましくは、患部組織における機能が完全に失われる前に実施される。主題の治療法は、望ましくは、疾患の症候期中、いくつかの場合においては、疾患の症候期後に投与される。
「個体」、「対象」、「宿主」及び「患者」という用語は、本明細書中で区別なく使用され、診断、治療、または治療法が望まれるあらゆる哺乳類対象を指す。哺乳類は、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類（例えば、ラット、マウス）、ウサギ類（例えば、ウサギ）、有蹄類（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ヤギなど）などを含む。
別途指定のない限り、「実質的に」という用語は、「全体的に」及び「大部分であるが全体的ではない」の両方を包含することが意図される。例えば、「細胞溶解を実質的に誘導しない」Ｉｇ Ｆｃは、細胞溶解を全く誘導しないか、または細胞溶解を概ね誘導しないが完全ではない、Ｉｇ Ｆｃを意味する。
本明細書で使用される場合、量に関連して使用される「約」という用語は、量が１０％変動し得ることを示す。例えば、「約１００」は、９０～１１０の量を意味する。約が範囲の文脈で使用される場合、範囲の下限量に関して使用される「約」は、その下限量が範囲の下限量よりも１０％低い量を含むことを意味し、範囲の上限量に関して使用される「約」は、その上限量が範囲の上限量よりも１０％高い量を含むことを意味する。例えば、約１００～約１０００は、範囲が９０～１１００に及ぶことを意味する。
「精製する」、「単離する」などの用語は、望ましくない物質、例えば、夾雑物を含有する溶液から所望の物質、例えば、ＴＭＰを取り出すこと、または所望の物質を含有する溶液から望ましくない物質を除去し、本質的に所望の物質のみを残すことを指す。いくつかの場合において、精製した物質は、他の物質、例えば、夾雑物を本質的に含み得ない。
本開示は、記載される特定の実施形態に限定されず、当然のことながら、それ自体多様であり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的にしており、添付の特許請求の範囲に記載される本開示の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定を意図するものではないことも理解されたい。
値の範囲が記載される場合、その範囲の上限値と下限値との間にある、別途明確な記載がない限りはその下限値の単位の１０分の１までの各値、及びその指定範囲内の任意の他の指定値または間にある値は、本開示内に包含されることが理解される。これらのより狭い範囲の上限値及び下限値は、指定範囲内の任意の特定の限界値が除外される場合には、より狭い範囲に独立して含まれ得、また本開示内に包含される。指定範囲が限界値の一方または両方を含む場合、当該含まれる限界値の一方または両方を除いた範囲もまた本開示に含まれる。
別途の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等の任意の方法及び材料を本開示の実施または検証に使用することができるが、好ましい方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての公開物は、当該公開物に関連して引用される方法及び／または材料を開示及び記載するために、参照により本明細書に援用される。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、別途明記されない限り、複数の指示物を含むことに留意すべきである。したがって、例えば、「免疫調節ポリペプチド」への言及は、複数のかかる免疫調節ポリペプチドを含み、「Ｔｒｅｇ」への言及は、１つ以上のＴｒｅｇ及び当業者に知られているその同等物を含むなどとなる。更に、特許請求の範囲は、何らかの任意選択の要素、または共通する一般的なもしくは特定的な特徴、特性、もしくは活性を共有する要素の一覧もしくは他の列挙に含まれる任意の要素を除外するように作成される場合があることにも留意されたい。したがって、本記述は、請求項の要素の詳述に関連した「だけ」、「のみ」などの排他的用語の使用、または「否定による」限定の使用に対する前提として働くことが意図される。
明確を期すために、本開示のいくつかの特徴が別個の実施形態の文脈で記載されるが、１つの実施形態で組み合わせて提供され得ることも認識される。逆に、煩雑になるのを避けるために、本開示の様々な特徴が１つの実施形態の文脈で記載されるが、これもまた別個に提供されてもよいし、任意の好適な部分的組み合わせで提供されてもよい。本開示に関する実施形態の全ての組み合わせが本開示に明確に包含され、ありとあらゆる組み合わせが個別にかつ明確に開示された場合と同様に本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態及びその要素の全ての部分的組み合わせもまた本開示に明確に包含され、ありとあらゆるそのような部分的組み合わせが個別にかつ明確に本明細書に開示された場合と同様に本明細書に開示される。
本明細書で考察される公開物は、本出願の出願日以前の開示についてのみ記載される。本明細書におけるいかなる記載も、先行開示に基づいて、本開示がかかる公開物に先行する権利がないという自認を構成するものではない。更に、記載される公開日は、実際の公開日とは異なる場合があり、これは個別に確認する必要がある場合がある。本開示の見出しは、参照の便宜を図るためだけのものであり、本開示の範囲または添付する特許請求の範囲の範囲を定義、説明、または限定するものではない。
詳細な説明
本開示は、自己免疫疾患関連ペプチドエピトープと、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと、１つ以上の任意選択の免疫調節ポリペプチド（「ＭＯＤ」）と、ＴＧＦ－βポリペプチドと、マスキングポリペプチド（ＴＧＦ－βポリペプチドとマスキングポリペプチドが一緒になり、「マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ」を構成する）を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するための組成物及び方法、ならびに自己免疫疾患を有する個人を治療するための組成物及び方法を提供する。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＭＯＤを含まず、そのようなＴＭＰは、ＴＧＦβの送達に有用である。
本開示は、自己免疫疾患関連ペプチドエピトープと、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと、１つ以上の任意選択の免疫調節ポリペプチド（「ＭＯＤ」）と、ＴＧＦ－βポリペプチドと、マスキングポリペプチド（ＴＧＦ－βポリペプチドとマスキングポリペプチドが一緒になり、「マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ」を構成する）を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）を提供する。本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節するための組成物及び方法、ならびに自己免疫疾患を有する個人を治療するための組成物及び方法を提供する。本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＭＯＤを含まず、そのようなＴＭＰは、ＴＧＦβの送達に有用である。
Ｔ細胞調節ポリペプチド（「ＴＭＰ」）
本開示は、ＴＭＰであって、ｉ）本開示のＴＭＰ中に存在する場合、Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチド（これ以降、「ＡＩペプチド」）と、ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｉｉｉ）マスキングポリペプチドと、ｉｖ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（すなわち、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド）と、ｖ）任意選択により、１つ以上のＭＯＤと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の骨格ポリペプチド（例えば、１つ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド）を含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む（例えば、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドのそれぞれは、前述のポリペプチドのうちの任意の２つの間にある、ＴＭＰを提供する。ＴＭＰは、一本鎖ポリペプチド、ヘテロ二量体ポリペプチド、及びそのような一本鎖ポリペプチドとヘテロ二量体ポリペプチドの二量体または多量体の形態であり得、例示的な構成は、後述される。
本開示は、ＴＭＰであって、ｉ）本開示のＴＭＰ中に存在する場合、Ｔ細胞の表面上のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチド（これ以降、「ＡＩペプチド」）と、ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｉｉｉ）マスキングポリペプチドと、ｉｖ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（すなわち、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド）と、ｖ）任意選択により、１つ以上のＭＯＤと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の骨格ポリペプチド（例えば、１つ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチド）を含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む（例えば、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドのそれぞれは、前述のポリペプチドのうちの任意の２つの間にある、ＴＭＰを提供する。ＴＭＰは、一本鎖ポリペプチド、ヘテロ二量体ポリペプチド、及びそのような一本鎖ポリペプチドとヘテロ二量体ポリペプチドの二量体または多量体の形態であり得、例示的な構成は、後述される。
更に、本開示のＴＭＰは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤと、野生型またはバリアントＩＬ－２、ＰＤ－Ｌ１及び／または４－１ＢＢＬ ＭＯＤ（上述されるもの）などの１つ以上の追加のＭＯＤの両方を含み得るが、所望により、本開示のＴＭＰは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤのみを含んでもよい。すなわち、野生型またはバリアントＩＬ－２、ＰＤ－Ｌ１及び／または４－１ＢＢＬ ＭＯＤなどの１つ以上の追加のＭＯＤは、本開示のＴＭＰに含まれる必要はない。したがって、以下の考察において、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤに加えた１つ以上のＭＯＤの存在は、任意選択であることを理解されたい。
例示的なＴＭＰ構造の簡単な概要
Ａ）いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、相互特異的結合配列を有する骨格ポリペプチド（例えば、Ｉｇ Ｆｃ）を含むヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用し、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意選択により、１つ以上のＭＯＤを含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。そのようなＴＭＰの例は、図１Ａ～１Ｄに模式的に示される。いくつかの場合において、図１Ｅ～１Ｈに模式的に示されるように、第１及び第２のポリペプチドは、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドとＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドとの間のジスルフィド結合によって連結される。
Ａ）いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、相互特異的結合配列を有する骨格ポリペプチド（例えば、Ｉｇ Ｆｃ）を含むヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用し、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意選択により、１つ以上のＭＯＤを含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。そのようなＴＭＰの例は、図１Ａ～１Ｄに模式的に示される。いくつかの場合において、図１Ｅ～１Ｈに模式的に示されるように、第１及び第２のポリペプチドは、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドとＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドとの間のジスルフィド結合によって連結される。
Ｂ）いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、１つ以上のヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意選択により、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチド鎖は、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む。本開示のＴＭＰは、そのようなヘテロ二量体を２つ含むホモ二量体であり得、ヘテロ二量体の一方のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、他方のヘテロ二量体のＩｇ Ｆｃポリペプチドにジスルフィド連結される。そのようなＴＭＰの例は、図２Ａ～２Ｄに模式的に示される。
Ｃ）いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、一本鎖ポリペプチドであり、すなわち、単一ポリペプチド鎖は、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド）と、ｉｉｉ）任意選択により、１つ以上のＭＯＤと、ｉｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖ）マスキングポリペプチドと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、任意選択により、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、を含む。そのようなＴＭＰの例は、図３Ａ～３Ｄに模式的に示される。本開示のＴＭＰは、そのような一本鎖ポリペプチドを２コピー含むホモ二量体であり得、一本鎖ポリペプチドは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、２つの一本鎖ポリペプチドの一方のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、２つの一本鎖ポリペプチドの他方のＩｇ Ｆｃポリペプチドにジスルフィド連結される。あるいは、ＴＭＰは、後述される相互特異的結合配列を含むポリペプチドによって接続された２つの異なる一本鎖ＴＭＰのヘテロ二量体を含み得る。
前述の構成について、以下で詳しく説明される。本明細書におけるＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドへの言及は、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１とα２の両方のドメインを含み得、本明細書におけるＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドへの言及は、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１とβ２の両方のドメインを含み得る。これらの４つのドメインは、エピトープペプチドの提示に必要な細胞外クラスＩＩタンパク質の全部または大部分を表す。
Ａ）相互特異的結合配列を含むヘテロ二量体ＴＭＰ
いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、相互特異的結合配列を有する骨格ポリペプチド（例えば、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド）を含むヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用し、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意選択により、１つ以上のＭＯＤを含む。ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。そのようなＴＭＰの非限定的な例は、図１Ａ～１Ｄに模式的に示される。図１Ａ～１Ｄは、骨格ポリペプチドをノブ・イン・ホール（「ＫｉＨ」）Ｆｃポリペプチドとして図示しているが、相互特異的結合配列を有する他の骨格ポリペプチドが使用されてもよいことを理解されたい。
いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、相互特異的結合配列を有する骨格ポリペプチド（例えば、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド）を含むヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用し、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、任意選択により、１つ以上のＭＯＤを含む。ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。そのようなＴＭＰの非限定的な例は、図１Ａ～１Ｄに模式的に示される。図１Ａ～１Ｄは、骨格ポリペプチドをノブ・イン・ホール（「ＫｉＨ」）Ｆｃポリペプチドとして図示しているが、相互特異的結合配列を有する他の骨格ポリペプチドが使用されてもよいことを理解されたい。
構成成分の配置
そのようなＴＭＰの構成成分は、様々に配置することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰは、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチド、及びｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用する、第２の骨格ポリペプチド、及びｖ）マスキングポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含む。いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤ及びＴＧＦ－βポリペプチドは、同じポリペプチド上にある。いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤ及びマスキングポリペプチドは、同じポリペプチド上にある。いくつかの場合において、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ＫｉＨ配列を含む。
そのようなＴＭＰの構成成分は、様々に配置することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰは、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチド、及びｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用する、第２の骨格ポリペプチド、及びｖ）マスキングポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含む。いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤ及びＴＧＦ－βポリペプチドは、同じポリペプチド上にある。いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤ及びマスキングポリペプチドは、同じポリペプチド上にある。いくつかの場合において、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ＫｉＨ配列を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチド、ｖ）マスキングポリペプチド、及びｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｖ）第１のポリペプチドの相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ヘテロ二量体において互いに相互作用し、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含む。いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、第１のポリペプチド上にある。いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、第２のポリペプチド上にある。いくつかの場合において、相互特異的結合配列及び対応する相互特異的結合配列は、ＫｉＨ配列を含む。
ＴＭＰの構成成分の様々な配置の更なる例は、図１Ａ～１Ｄに模式的に示される。図１Ａ～１Ｄにおいて、骨格ポリペプチドは、ＫｉＨ Ｉｇ Ｆｃポリペプチドであり、マスキングポリペプチドは、「マスク」と称される。例えば、図１Ａに模式的に示されるように、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第１のＩｇ Ｆｃ、及びｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第２のＩｇ Ｆｃ、ｖ）マスキングポリペプチド、及びｖｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体であり、第１のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、第２のＩｇ Ｆｃポリペプチドと二量体化し、ＴＭＰは、ＴＭＰの構成成分のいずれか２つ（任意の２つの隣接する構成成分）の間に任意選択のペプチドリンカーを含む。
別の例として、図１Ｂに模式的に示されるように、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第１のＩｇ Ｆｃ、ｖ）マスキングポリペプチド、及びｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第２のＩｇ Ｆｃ、及びｖ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体であり、第１のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、第２のＩｇ Ｆｃポリペプチドと二量体化し、ＴＭＰは、ＴＭＰの構成成分のいずれか２つ（任意の２つの隣接する構成成分）の間に任意選択のペプチドリンカーを含む。
別の例として、図１Ｃに模式的に示されるように、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第１のＩｇ Ｆｃ、及びｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤ、ｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第２のＩｇ Ｆｃ、及びｖｉ）マスキングポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体であり、第１のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、第２のＩｇ Ｆｃポリペプチドと二量体化し、ＴＭＰは、ＴＭＰの構成成分のいずれか２つ（任意の２つの隣接する構成成分）の間に任意選択のペプチドリンカーを含む。
別の例として、図１Ｄに模式的に示されるように、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第１のＩｇ Ｆｃ、ｖ）マスキングポリペプチド、及びｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤ、及びｖ）相互特異的結合配列（ＫｉＨ配列として図示）を含む第２のＩｇ Ｆｃを含む、第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体であり、第１のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、第２のＩｇ Ｆｃポリペプチドと二量体化し、ＴＭＰは、ＴＭＰの構成成分のいずれか２つ（任意の２つの隣接する構成成分）の間に任意選択のペプチドリンカーを含む。
いくつかの場合において、図１Ｅ～１Ｈに模式的に示されるように、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、天然に存在するＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド中には存在しないＣｙｓ残基を含み、そのＣｙｓ残基間でジスルフィド結合が形成され、それにより、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドがジスルフィド連結する。導入されたＣｙｓ残基を含む好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、以下に記載される。加えて、骨格タンパク質がＩｇ Ｆｃポリペプチドである場合、第１のポリペプチドのＩｇ Ｆｃポリペプチドと第２のポリペプチドのＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間に、１つ以上のジスルフィド結合が形成され得る。そのようなジスルフィド結合は、図２７に模式的に示される。
相互特異的結合配列を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むヘテロ二量体である例示的なＴＭＰのアミノ酸配列は、１）図２８Ａ及び図２８Ｂ、２）図３１Ａ及び図３１Ｂ、ならびに３）図３２Ａ及び３２Ｂに示される。
追加のＭＯＤを含まないＴＭＰ
上記のとおり、上述の実施形態のいずれも、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ以外のＭＯＤを含めずに提供することができる。そのようなＴＭＰの非限定的な例は、１）図２９Ａ～２９Ｂ、及び２）図３０Ａ～３０Ｂに示される。そのようなＴＭＰは、例えば、ＴＭＰ中に存在するＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと複合体化した場合、ＴＭＰ中に存在するペプチドに対して特異的なＴＣＲを表面上に発現するＴ細胞に、ＴＧＦβを選択的に送達するのに有用である。
上記のとおり、上述の実施形態のいずれも、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ以外のＭＯＤを含めずに提供することができる。そのようなＴＭＰの非限定的な例は、１）図２９Ａ～２９Ｂ、及び２）図３０Ａ～３０Ｂに示される。そのようなＴＭＰは、例えば、ＴＭＰ中に存在するＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと複合体化した場合、ＴＭＰ中に存在するペプチドに対して特異的なＴＣＲを表面上に発現するＴ細胞に、ＴＧＦβを選択的に送達するのに有用である。
相互特異的結合配列を有する骨格ポリペプチド
骨格ポリペプチドは、とりわけ、ＴＭＰの他の構成成分を組織化する際のフレームワークを提供する構造要素として機能する。マスキングポリペプチド及びＴＧＦ－βポリペプチドがトランスに（ＴＭＰの異なるポリペプチド上に）位置する場合、相互特異的及び非相互特異的な二重鎖（または更に高次の構造）を形成する骨格ポリペプチドは、マスキングポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドの会合を保持することができる。骨格の性質に応じて、タンパク質フォールディング及び二量体化または多量体化（例えば、ホモ二量体化またはヘテロ二量体化）の点で、より高次の構造を提供する組織化要素として作用し得る。骨格はまた、特にＩｇ重鎖定常領域（例えば、Ｉｇ Ｆｃ）である場合、血清安定性に寄与し得る。好適な骨格ポリペプチドは、いくつかの場合において、半減期延長ポリペプチドである。いくつかの場合において、好適な骨格ポリペプチドは、異なる非Ｉｇ配列を含む骨格ポリペプチドを有する対照ＴＭＰと比較して、ＴＭＰのｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍を超えて増大させる。一例として、いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列（例えば、ＫｉＨ配列ペアなどの相互特異的Ｉｇ配列を含むもの）は、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列をリンカー（例えば、等しい配列長のＧＧＧＳアミノ酸の繰り返し；配列番号２３４）で置き換えた対照ＴＭＰと比較して、ＴＭＰの安定性及び／またはｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を増大させる。ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の増大は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超であり得る。Ｉｇ ＦｃポリペプチドがＴＭＰに採用される場合、Ｉｇ Ｆｃは、ＴＭＰの自発的な二量体形成を妨げる変異を含むことができ（例えば、Ｔｉａｎｌｅｉ Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８７（２３），ｐｐ １９３９９－１９４０８（Ｊｕｎｅ １，２０１２）参照）、更に、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介した細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を低下させるまたは実質的に排除する変異（例えば、後述されるＬＡＬＡ変異）を含んでもよい。
骨格ポリペプチドは、とりわけ、ＴＭＰの他の構成成分を組織化する際のフレームワークを提供する構造要素として機能する。マスキングポリペプチド及びＴＧＦ－βポリペプチドがトランスに（ＴＭＰの異なるポリペプチド上に）位置する場合、相互特異的及び非相互特異的な二重鎖（または更に高次の構造）を形成する骨格ポリペプチドは、マスキングポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドの会合を保持することができる。骨格の性質に応じて、タンパク質フォールディング及び二量体化または多量体化（例えば、ホモ二量体化またはヘテロ二量体化）の点で、より高次の構造を提供する組織化要素として作用し得る。骨格はまた、特にＩｇ重鎖定常領域（例えば、Ｉｇ Ｆｃ）である場合、血清安定性に寄与し得る。好適な骨格ポリペプチドは、いくつかの場合において、半減期延長ポリペプチドである。いくつかの場合において、好適な骨格ポリペプチドは、異なる非Ｉｇ配列を含む骨格ポリペプチドを有する対照ＴＭＰと比較して、ＴＭＰのｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍を超えて増大させる。一例として、いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列（例えば、ＫｉＨ配列ペアなどの相互特異的Ｉｇ配列を含むもの）は、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列をリンカー（例えば、等しい配列長のＧＧＧＳアミノ酸の繰り返し；配列番号２３４）で置き換えた対照ＴＭＰと比較して、ＴＭＰの安定性及び／またはｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を増大させる。ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の増大は、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍超であり得る。Ｉｇ ＦｃポリペプチドがＴＭＰに採用される場合、Ｉｇ Ｆｃは、ＴＭＰの自発的な二量体形成を妨げる変異を含むことができ（例えば、Ｔｉａｎｌｅｉ Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８７（２３），ｐｐ １９３９９－１９４０８（Ｊｕｎｅ １，２０１２）参照）、更に、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介した細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を低下させるまたは実質的に排除する変異（例えば、後述されるＬＡＬＡ変異）を含んでもよい。
ＴＭＰの骨格ポリペプチドが、骨格ポリペプチドと別の骨格ポリペプチドが相互作用する（特異的に結合する）ことを可能にする１つ以上のアミノ酸配列を含む場合、ＴＭＰは、ホモ二量体を形成することができる。ＴＭＰはまた、骨格ポリペプチドと他の骨格ポリペプチドとが相互作用して（特異的に結合して）、より高次の構造を形成することを可能にする１つ以上のアミノ酸配列を含み得る。より高次の多量体構造を形成する配列は、より高次のＴＭＰ（三量体、四量体、五量体など）の形成を可能にする。例として、ＩｇＭ Ｆｃ領域を含む骨格ポリペプチドは、五量体（特にＪ鎖配列も発現する場合）または六量体ＴＭＰの形成を可能にする。Ｐｅｔｒｕｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．７７（６）：９５９－６１（２０１１）。
十分な親和性で互いにまたはそれ自体と特異的に結合する様々なポリペプチドをＴＭＰの二量体化配列として利用することができる（例えば、米国特許公開第２００３／０１３８４４０号参照）。ポリペプチドは、比較的コンパクトな大きさ（例えば、約３００、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５、１００、７５、または５０アミノ酸未満など）であり得る。二量体化／多量体化ポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｉｇ Ｆｃ）ポリペプチド（ＩｇのＣＨ２－ＣＨ３領域を含むポリペプチド；例えば、参照）；Ｆｃ ＫｉＨポリペプチド；コラーゲンリピートＧｌｙ－Ｘａａ－Ｙａａからなるコラーゲンドメインを含有するコレクチンファミリーのポリペプチド（例えば、ＡＣＲＰ３０またはＡＣＲＰ３０様タンパク質）；コイルドコイルドメイン；ロイシン－ジッパードメイン；Ｆｏｓ／Ｊｕｎ結合ペア；Ｉｇ重鎖領域１（ＣＨ１）及び軽鎖定常領域ＣＬ配列（κまたはλ Ｉｇ軽鎖定常領域配列と対形成するＣＨ１配列などのＣＨ１／ＣＬペア）を含むが、これらに限定されない。
いくつかの場合において、骨格ポリペプチドは、二量体化または多量体化配列として機能するＩｇ重鎖定常領域（ＣＨ２－ＣＨ３）ポリペプチド配列を含む（例えば、図２１Ａ～２１Ｍ参照）。いくつかの場合において、Ｉｇポリペプチドは、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の活性化を介した細胞溶解を誘導する能力が低下しており、したがって、細胞溶解を誘導するＩｇポリペプチドの能力を低下させるまたは実質的に排除する変異を含み得る。いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａ～２１Ｍのいずれか１つに示されるＩｇ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。そのようなＩｇ Ｆｃポリペプチドは、例えば、１つまたは２つの鎖間ジスルフィド結合を形成することによって、ＴＭＰのポリペプチド同士を共有結合的に連結することができる。後述されるように、特に、ＫｉＨポリペプチドペアなどの相互特異的Ｉｇ配列ペアが採用される場合、二量体を安定化させるために、追加のジスルフィド結合が導入され得る。
一実施形態において、ＴＭＰの骨格ポリペプチドは、図２Ｋに示されるＩｇＡ Ｆｃ配列の少なくとも１５０の連続するアミノ酸（少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、または少なくとも３５０の連続するアミノ酸）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２Ｉに示されるＩｇＤ Ｆｃ配列の少なくとも１５０の連続するアミノ酸（少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、または少なくとも３５０の連続するアミノ酸）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２１Ｌに示されるＩｇＥ Ｆｃ配列の少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、または少なくとも２００の連続するアミノ酸）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２１Ａ～２１Ｆのいずれか１つに示されるＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列などの野生型ＩｇＧ Ｆｃポリペプチドの少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、または少なくとも２００の連続するアミノ酸）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２１Ｇに示されるＩｇＧ２ Ｆｃポリペプチドアミノ酸配列の少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、または少なくとも３００）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２１Ｈに示されるＩｇＧ３ Ｆｃアミノ酸配列の少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、または少なくとも２２５）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２１Ｍに示されるＩｇＧ４ Ｆｃアミノ酸配列の少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、または少なくとも２５０）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態において、骨格ポリペプチドは、図２１Ｊに示されるＩｇＭ Ｆｃポリペプチド配列の少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、または少なくとも２５０）、または全てのアミノ酸に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。上述の骨格ポリペプチドは、ヒンジ領域に隣接するシステイン間に１つまたは２つの鎖間ジスルフィド結合が形成されることによって、一緒に共有結合的に連結され得る。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、図２１Ｆに示されるヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％（例えば、少なくとも約８０％、９０％、９５％、９８％、９９％または１００％）のアミノ酸配列同一性を有し、Ｎ２９７のアラニンによる置換（Ｎ２９７Ａ置換、または図２１Ｆでの番号付けはＮ７７）置換を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｎ２９７（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＮ７７）のアスパラギン以外のアミノ酸による置換を除き、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含む。Ｎ２９７における置換は、炭水化物修飾の除去につながり、その結果、抗体配列は、野生型タンパク質と比較して補体成分１ｑ（「Ｃ１ｑ」）の結合が減少し、したがって、補体依存性細胞傷害が減少する。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４）のロイシン以外のアミノ酸による置換を除き、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含む。ＩｇＧの下部ヒンジ領域のＬ２３４及び他のアミノ酸（例えば、図２１Ａのアミノ酸１４～１９に対応する、アミノ酸２３４－ＬＬＧＧＰＳ－２３９（配列番号１７２））は、Ｆｃラムダ受容体（ＦｃλＲ）への結合に関与しており、したがって、その位置における変異は、受容体への結合を減少させる（野生型タンパク質と比べて）。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３５（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１５）のロイシン以外のアミノ酸による置換を除き、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）置換（図２Ｄに示される野生型アミノ酸配列の位置１４及び１５に対応する位置；例えば、配列番号７５参照）を含む、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（例えば、野生型ヒトＩｇＧ１配列）を含む。図２１Ｂを参照されたい。これらの２つの変異は、例えば、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の活性化を介した細胞溶解を誘導するＩｇＧ１ Ｆｃの能力を低下させるか、実質的に排除する。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｐ３３１（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＰ１１１）のプロリン以外のアミノ酸による置換を有する、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含み、いくつかの場合において、置換は、Ｐ３３１Ｓ置換である。Ｐ３３１における置換は、Ｎ２９７における置換と同様に、野生型タンパク質と比べてＣ１ｑへの結合が減少し、それにより、補体依存性細胞傷害が減少する。Ｃ１ｑへの結合を減少させるために、Ｄ２７０、Ｋ３２２、及び／またはＰ３２９（図２１ＡのＤ５０、Ｋ１２２、及びＰ１１９に対応する）の置換、例えば、アラニンによる置換は、単独で、またはＰ３３１置換の代わりに利用することができる。上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４Ａ及び／またはＬ２３５Ａ置換（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４及び／またはＬ１５におけるロイシンのＡｌａによる置換）を含むＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。図２１Ｂを参照されたい。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４及び／またはＬ２３５（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４及び／またはＬ１５）におけるロイシン以外のアミノ酸による置換、及びＰ３３１（図２Ｄに示されるアミノ酸配列のＰ１１１）のプロリン以外のアミノ酸による置換を除き、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する骨格ポリペプチドの二量体化配列は、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ（図２１Ｅに示されるアミノ酸配列のアミノ酸位置１４、１５、及び１１１に対応する）置換を含む、図２１Ｅに示される「トリプル変異体」アミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含む。
上記のとおり、ヘテロ二量体ＴＭＰの各ポリペプチド鎖のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、２つの鎖が選択的に二量体化することを可能にする相互特異的二量体化配列、例えば、ＫｉＨ配列を含み得る。相互特異的結合配列は、特にＩｇ Ｆｃ配列バリアントに基づくものである場合、その同種のポリペプチド配列との（すなわち、相互特異的配列及びその対応する相互特異的配列の）ヘテロ二量体の形成を選好する。そのような相互特異的ポリペプチド配列は、ＫｉＨ、及び１つ以上のジスルフィド結合の形成を容易にするＫｉＨ配列を含む。例えば、１つの相互特異的結合ペアは、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン界面上のＴ３６６Ｙ及びＹ４０７Ｔ変異体ペア、または他の免疫グロブリンの対応する残基を含む。Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９：７，６１７－６２１（１９９６）を参照されたい。第２の相互特異的結合ペアは、Ｔ３６６Ｗ置換によるノブと、相補的なＩｇ Ｆｃ配列上のＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖのトリプル置換によるホールの形成を伴う。Ｘｕ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ７：１，２３１－２４２（２０１５）を参照されたい。別の相互特異的結合ペアは、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を含む第１のＦｃポリペプチドと、Ｓ３５４Ｃ、及びＴ３６６Ｗ置換を含む第２のＩｇ Ｆｃポリペプチドとを有する（Ｙ３４９ＣとＳ３５４Ｃとの間にジスルフィド結合が形成され得る）。例えば、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ａｎｄ Ｋｏｎｔｈｅｒｍａｎｎ，ｍＡｂｓ ９：２，１８２－２１２（２０１５）を参照されたい。Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列は、ＫｉＨ修飾の有無にかかわらず、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド間のジスルフィド結合（例えば、ヒンジ領域のジスルフィド結合）の形成によって安定化し得る。
免疫グロブリン配列に基づくいくつかの相互特異的結合配列は、以下の表１にまとめられており、図２１Ａに示される野生型ＩｇＧ１配列に現れるアミノ酸位置のナンバリングとの相互参照が括弧「｛｝」中に示されている。図２１Ａ：ｉ）ヒンジ：アミノ酸１～１０、ｉｉ）ＣＨ２：アミノ酸１１～１２０、ｉｉｉ）ＣＨ３：アミノ酸１２１～２２７、ｉｖ）Ｆｃアミノ酸１１～２２７。
（表１）相互特異的免疫グロブリン配列及びその同種の対応する相互特異的配列
表１は、Ｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１－１６（２０１６）より改変。
＊アミノ酸は、安定化ジスルフィド結合を形成する。
＊アミノ酸は、安定化ジスルフィド結合を形成する。
表１の配列の相互特異的ペアに加えて、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、相互特異的配列のＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインにＩｇＡに由来する４５残基を有し、その対応する相互特異的配列中のＩｇＡ ＣＨ３にＩｇＧ１に由来する５７残基を有する相互特異的「ＳＥＥＤ」配列を含み得る。Ｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１－１６（２０１６）を参照されたい。
ＴＭＰ中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドは、ノブ・イン・ホール（ＫｉＨ）、安定化ジスルフィドを含むノブ・イン・ホール（ＫｉＨｓ－ｓ）、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、Ａ１０７、またはＳＥＥＤ配列からなる群から選択される相互特異的結合配列またはその対応する相互特異的結合配列を含み得る。
ＴＭＰは、Ｔ１４６Ｗ ＫｉＨ配列置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み得、その対応する相互特異的結合パートナーポリペプチドは、Ｔ１４６Ｗ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７Ｖ ＫｉＨ配列置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、任意選択により、Ｌ２３４及びＬ２３５（例えば、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ「ＬＡＬＡ」またはＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ）、Ｎ２９７（例えば、Ｎ２９７Ａ）、Ｐ３３１（例えば、Ｐ３３１Ｓ）、Ｌ３５１（例えば、Ｌ３５１Ｋ）、Ｔ３６６（例えば、Ｔ３６６Ｓ）、Ｐ３９５（例えば、Ｐ３９５Ｖ）、Ｆ４０５（例えば、Ｆ４０５Ｒ）、Ｙ４０７（例えば、Ｙ４０７Ａ）、ならびにＫ４０９（例えば、Ｋ４０９Ｙ）のうちの１つ以上に置換を含む。これらの置換は、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１配列において、Ｌ１４及びＬ１５（例えば、Ｌ１４Ａ／Ｌ１５Ａ「ＬＡＬＡ」またはＬ１４Ｆ／Ｌ１５Ｅ）、Ｎ７７（例えば、Ｎ７７Ａ）、Ｐ１１１（例えば、Ｐ１１１Ｓ）、Ｌ１３１（例えば、Ｌ１３１Ｋ）、Ｔ１４６（例えば、Ｔ１４６Ｓ）、Ｐ１７５（例えば、Ｐ１７５Ｖ）、Ｆ１８５（例えば、Ｆ１８５Ｒ）、Ｙ１８７（例えば、Ｙ１８７Ａ）、ならびにＫ１８９（例えば、Ｋ１８９Ｙ）に現れる。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｔ１４６Ｗ ＫｉＨ配列置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７Ｖ ＫｉＨ配列置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｔ１４６Ｗ及びＳ１３４Ｃ ＫｉＨｓ－ｓ置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、Ｙ１８７Ｖ及びＹ１２９Ｃ ＫｉＨｓ－ｓ置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｓ１４４Ｈ及びＦ１８５Ａ ＨＡ－ＴＦ置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｙ１２９Ｔ及びＴ１７４Ｆ ＨＡ－ＴＦ置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｔ１３０Ｖ、Ｌ１３１Ｙ、Ｆ１８５Ａ、及びＹ１８７Ｖ ＺＷ１置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１３０Ｖ、Ｔ１４６Ｌ、Ｋ１７２Ｌ、及びＴ１７４Ｗ ＺＷ１置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列の一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｋ１４０Ｄ、Ｄ１７９Ｍ、及びＹ１８７Ａ ７．８．６０置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１３０Ｖ Ｅ１２５Ｒ、Ｑ１２７Ｒ、Ｔ１４６Ｖ、及びＫ１８９Ｖ ７．８．６０置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチド配列の一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｋ１８９Ｄ及びＫ１７２Ｄ ＤＤ－ＫＫ置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１３０Ｖ Ｄ１７９Ｋ及びＥ１３６Ｋ ＤＤ－ＫＫ置換を有するＩｇＧ１配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｋ１４０Ｅ及びＫ１８９Ｗ ＥＷ－ＲＶＴ置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１３０Ｖ Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５Ｔ ＥＷ－ＲＶＴ置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換；図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４及びＬ１５に対応する）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｋ１４０Ｅ、Ｋ１８９Ｗ、及びＹ１２９Ｃ ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１３０Ｖ Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、Ｆ１８５Ｔ、及びＳ１３４Ｃ ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換；図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４及びＬ１５に対応する）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
いくつかの場合におけるＴＭＰは、Ｋ１５０Ｅ及びＫ１８９Ｗ Ａ１０７置換を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、その対応する相互特異的結合パートナーＩｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｔ１３０Ｖ Ｅ１３７Ｎ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５Ｔ Ａ１０７置換を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、図２１Ａの野生型ＩｇＧ１の少なくとも１００（例えば、少なくとも１２５、１５０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方は、Ｌ１４及び／またはＬ１５置換（例えば、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの「ＬＡＬＡ」置換）、及び／またはＮ７７（Ｎ２９７例えば、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｇ）などの追加の置換を含み得る。
非限定的な一例として、いくつかの場合において、ａ）ＴＭＰの第１のポリペプチドは、次のアミノ酸配列：
に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％を有するアミノ酸配列を含むＩｇ Ｆｃポリペプチド（図２８Ａにおいて「ＩｇＧ Ｆｃ（ＬＡＬＡ）ＫｉＨ鎖Ａ（Ｓ３５４Ｃ；Ｔ３６６Ｗ）」と称される）を含み、アミノ酸１４はＬｅｕであり、アミノ酸１５はＬｅｕであり、アミノ酸１３４はＣｙｓであり、アミノ酸１４６はＴｒｐである。
またｂ）ＴＭＰの第２のポリペプチドは、次のアミノ酸配列：
に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％を有するアミノ酸配列を含むＩｇ Ｆｃポリペプチド（図２８Ｂにおいて、「ＩｇＧ Ｆｃ（ＬＡＬＡ）ＫｉＨ鎖Ｂ（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）」と称される）を含み、アミノ酸１４はＬｅｕであり、アミノ酸１５はＬｅｕであり、アミノ酸１２９はＣｙｓであり、アミノ酸１４６はＳｅｒであり、アミノ酸１４８はＡｌａであり、アミノ酸１８７はＶａｌである。
いくつかの場合において、ａ）ＴＭＰの第１のポリペプチドは、次のアミノ酸配列：
を有するＩｇ Ｆｃポリペプチド（図２８Ａにおいて、「ＩｇＧ Ｆｃ（ＬＡＬＡ）ＫｉＨ鎖Ａ（Ｓ３５４Ｃ；Ｔ３６６Ｗ）」と称される）を含み、ｂ）ＴＭＰの第２の第２のポリペプチドは、次のアミノ酸配列：
を有するＩｇ Ｆｃポリペプチド（図２８Ｂにおいて、「ＩｇＧ Ｆｃ（ＬＡＬＡ）ＫｉＨ鎖Ｂ（Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ）」と称される）を含む。
Ｂ）ジスルフィド連結を含むヘテロ二量体ＴＭＰ
いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、１つ以上のヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド及び第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチド鎖は、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドもマスキングポリペプチドも含まない。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドもマスキングポリペプチドも含まず、第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドを含む。本開示のＴＭＰは、そのようなヘテロ二量体を２つ含むホモ二量体であり得、ヘテロ二量体の一方のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、他方のヘテロ二量体のＩｇ Ｆｃポリペプチドにジスルフィド連結される。そのようなＴＭＰの非限定的な例は、図２Ａ～２Ｄに模式的に示される。ＴＭＰは、２つのジスルフィド連結ヘテロ二量体を含み得る。両方のヘテロ二量体がＩｇ Ｆｃポリペプチドを含む場合、それぞれのＩｇ Ｆｃポリペプチドの間にジスルフィド結合が自発的に形成され、２つのヘテロ二量体を互いに共有結合的に連結する。あるいは、本開示のＴＭＰは、そのようなヘテロ二量体を２つ含むヘテロ二量体であり得、ヘテロ二量体の一方のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、上述の相互特異的結合配列を使用して、他方のヘテロ二量体のＩｇ Ｆｃポリペプチドにジスルフィド連結される。
いくつかの場合における本開示のＴＭＰは、１つ以上のヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド及び第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチド鎖は、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドもマスキングポリペプチドも含まない。いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドもマスキングポリペプチドも含まず、第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドを含む。本開示のＴＭＰは、そのようなヘテロ二量体を２つ含むホモ二量体であり得、ヘテロ二量体の一方のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、他方のヘテロ二量体のＩｇ Ｆｃポリペプチドにジスルフィド連結される。そのようなＴＭＰの非限定的な例は、図２Ａ～２Ｄに模式的に示される。ＴＭＰは、２つのジスルフィド連結ヘテロ二量体を含み得る。両方のヘテロ二量体がＩｇ Ｆｃポリペプチドを含む場合、それぞれのＩｇ Ｆｃポリペプチドの間にジスルフィド結合が自発的に形成され、２つのヘテロ二量体を互いに共有結合的に連結する。あるいは、本開示のＴＭＰは、そのようなヘテロ二量体を２つ含むヘテロ二量体であり得、ヘテロ二量体の一方のＩｇ Ｆｃポリペプチドは、上述の相互特異的結合配列を使用して、他方のヘテロ二量体のＩｇ Ｆｃポリペプチドにジスルフィド連結される。
構成成分の配置
いくつかの場合において、ＴＭＰは、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉｉ）任意選択により、ＡＩペプチドを第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、ヘテロ二量体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉｉ）任意選択により、ＡＩペプチドを第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、ヘテロ二量体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、ａ）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉ）任意選択により、ＡＩペプチドを第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）ｉ）第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、またはｉｉ）第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ｉ）第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、ｉｉ）第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、ｉｉｉ）第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、ヘテロ二量体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結され、任意選択により、ＴＭＰは、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む（例えば、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドのそれぞれは、前述のポリペプチドのうちの任意の２つの間にある）。
第１の非限定的な例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ１）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ１）ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、ｉｉｉ）マスキングポリペプチド、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤ、及びｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され、いくつかの場合において、第２のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続される。
第２の非限定的な例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ２）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、及びｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ２）ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｉ）第１のポリペプチドがＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合はマスキングポリペプチド、または第１のポリペプチドがマスキングポリペプチドを含む場合はＴＧＦ－βポリペプチド、ｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤ、及びｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され、いくつかの場合において、第２のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続される。
第３の非限定的な例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ３）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチド、及びｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ３）ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｉ）第１のポリペプチドがＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合はマスキングポリペプチド、または第１のポリペプチドがマスキングポリペプチドを含む場合はＴＧＦ－βポリペプチド、ｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され、いくつかの場合において、第２のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続される。
第４の非限定的な例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ４）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチド、及びｉｖ）１つ以上のＭＯＤを含む、第１のポリペプチドと、ｂ４）ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ｉｉ）第１のポリペプチドがＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合はマスキングポリペプチド、または第１のポリペプチドがマスキングポリペプチドを含む場合はＴＧＦ－βポリペプチド、ｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され、いくつかの場合において、第２のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続される。
第５の非限定的な例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ５）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチド、及びｉｖ）１つ以上のＭＯＤ、及びｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ５）ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及びｉｉ）第１のポリペプチドがＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合はマスキングポリペプチド、または第１のポリペプチドがマスキングポリペプチドを含む場合はＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され、いくつかの場合において、第２のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続される。
第６の非限定的な例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ６）ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、ｉｖ）マスキングポリペプチド、ｖ）１つ以上のＭＯＤ、及びｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ６）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続される。
いくつかの場合において、図２Ａに模式的に示されるように、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）マスキングポリペプチド、及びｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、及びｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、及びｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｉ）マスキングポリペプチド、及びｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、図２Ｂに模式的に示されるように、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）マスキングポリペプチド、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、及びｖ）１つ以上のＭＯＤを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、及びｖ）１つ以上のＭＯＤを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、ｉｉ）マスキングポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、図２Ｃに模式的に示されるように、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）マスキングポリペプチド、及びｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、及びｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、及びｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、及びｉｉｉ）マスキングポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、図２Ｄに模式的に示されるように、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）マスキングポリペプチド、及びｉｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、及びｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、ｉｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチド、及びｉｖ）マスキングポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、及びｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、ＴＭＰは、任意選択により、構成成分のいずれか２つの間に、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む。第１及び第２のポリペプチドは、以下に記載されるように、ジスルフィド結合、例えば、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖のＣｙｓ残基間に形成されるジスルフィド結合によって、互いに共有結合的に連結される。
ジスルフィド連結
上記のとおり、ＴＭＰのヘテロ二量体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている。例えば、少なくとも１つのジスルフィド結合は、ｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓと第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、またはｉｉ）第１のポリペプチドのペプチドリンカー中に存在するＣｙｓと第２のポリペプチド中に存在するＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、またはｉｉ）第２のポリペプチドのペプチドリンカー中に存在するＣｙｓと第１のポリペプチド中に存在するＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、またはｉｖ）第１のポリペプチド中のリンカー中に存在するＣｙｓと第２のポリペプチド中のリンカー中に存在するＣｙｓとの間に存在する。
上記のとおり、ＴＭＰのヘテロ二量体の第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている。例えば、少なくとも１つのジスルフィド結合は、ｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓと第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、またはｉｉ）第１のポリペプチドのペプチドリンカー中に存在するＣｙｓと第２のポリペプチド中に存在するＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、またはｉｉ）第２のポリペプチドのペプチドリンカー中に存在するＣｙｓと第１のポリペプチド中に存在するＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、またはｉｖ）第１のポリペプチド中のリンカー中に存在するＣｙｓと第２のポリペプチド中のリンカー中に存在するＣｙｓとの間に存在する。
１）２つのＭＨＣクラスＩＩポリペプチド間のジスルフィド結合
上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰのヘテロ二量体の第１のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ヘテロ二量体は、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間に形成されるジスルフィド結合を含む。例えば、いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含むＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含むＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドを含み、ヘテロ二量体は、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間に形成されるジスルフィド結合を含む。
上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰのヘテロ二量体の第１のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ヘテロ二量体は、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間に形成されるジスルフィド結合を含む。例えば、いくつかの場合において、第１のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含むＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含み、第２のポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）をもたらすアミノ酸置換を含むＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドを含み、ヘテロ二量体は、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間に形成されるジスルフィド結合を含む。
構成成分の配置
いくつかの場合において、例えば、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉｉ）任意選択により、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドであって、第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーによって接続される、第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結され、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである。
いくつかの場合において、例えば、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉｉ）任意選択により、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドであって、第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーによって接続される、第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結され、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである。
別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、ｉｉ）１つ以上のＭＯＤ、及びｉｉｉ）任意選択により、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドであって、第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーによって接続される、第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結され、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである。
別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、ｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、及びｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドであって、第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結され、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである。
別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉｉ）Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーによって接続される、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉ）任意選択により、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドであって、任意選択によるＩｇ Ｆｃが存在する場合、第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結され、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである。
別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーによって接続される、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）Ｃｙｓ（「第２のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含む第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド、及びｉｉ）任意選択により、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドであって、任意選択によるＩｇ Ｆｃが存在する場合、第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーによって接続される、第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結され、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである。
Ｃｙｓ残基の位置
上記のとおり、いくつかの場合において、いくつかの場合におけるＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、任意選択により、第１及び／または第２のポリペプチドは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含み、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第２の」Ｃｙｓ）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間に形成されるジスルフィド結合によって接続される。
上記のとおり、いくつかの場合において、いくつかの場合におけるＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチド、及びｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、任意選択により、第１及び／または第２のポリペプチドは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第１のＣｙｓ」）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含み、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓ（「第２の」Ｃｙｓ）によるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、第１のＣｙｓと第２のＣｙｓとの間に形成されるジスルフィド結合によって接続される。
第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図５または図２０Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｐ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｑ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃから選択されるアミノ酸置換を有する、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり得る。第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図４または図１９Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｅ３Ｃ、Ｅ４Ｃ、Ｆ１２Ｃ、Ｇ２８Ｃ、Ｄ２９Ｃ、Ｉ７２Ｃ、Ｋ７５Ｃ、Ｔ８０Ｃ、Ｐ８１Ｃ、Ｉ８２Ｃ、Ｔ９３Ｃ、Ｎ９４Ｃ、及びＳ９５Ｃから選択されるアミノ酸置換を有する、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり得る。
一例として、いくつかの場合において、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｐ５Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、及びＷ１５３からなる群から選択される残基に置換を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｐ８１Ｃ、Ｉ８２Ｃ、及びＤ２９Ｃからなる群から選択される置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである。例えば、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、図５または図２０Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ポリペプチドは、５、３３、１５１、及び１５３からなる群から選択される残基位置にＣｙｓを含み、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、図４または図１９Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ポリペプチドは、８１、８２、及び２９からなる群から選択される残基にＣｙｓを含む。
別の例として、ジスルフィドは、以下の表２の特定のＣｙｓ残基ペアのうちの１つの間に形成され得る。
（表２）
例えば、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図５または図２０Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図４または図１９Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、β鎖ポリペプチド及びα鎖ポリペプチドは、β鎖ポリペプチド残基５とα鎖ポリペプチド残基８１；β鎖ポリペプチド残基３３とα鎖ポリペプチド残基８１；β鎖ポリペプチド残基３３とα鎖ポリペプチド残基８２；β鎖ポリペプチド残基１５１とα鎖ポリペプチド残基２９；及びβ鎖ポリペプチド残基１５３とα鎖ポリペプチド残基２９からなる群から選択されるＣｙｓ残基ペアの間で形成されるジスルフィドによって接続される。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｐ５Ｃ置換を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド及びＰ８１Ｃ置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基５にあるＣｙｓと、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基８１にあるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。いくつかの場合において、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーを、第１または第２のポリペプチドの構成成分を接続するために使用することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＩＬ－２ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦａｓＬポリペプチドもしくはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、いくつかの場合において、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）置換を任意選択により含む、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。いくつかの場合において、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図２０Ｂに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置５にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図１９Ｊに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置８１にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｈ３３Ｃ置換を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド及びＰ８１Ｃ置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基３３にあるＣｙｓと、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基８１にあるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。いくつかの場合において、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーを、第１または第２のポリペプチドの構成成分を接続するために使用することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＩＬ－２ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦａｓＬポリペプチドもしくはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、いくつかの場合において、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）置換を任意選択により含む、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。いくつかの場合において、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図２０Ｇに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置３３にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図１９Ｊに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置８１にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｈ３３Ｃ置換を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド及びＩ８２Ｃ置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基３３にあるＣｙｓと、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基８１にあるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。いくつかの場合において、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーを、第１または第２のポリペプチドの構成成分を接続するために使用することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＩＬ－２ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦａｓＬポリペプチドもしくはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、いくつかの場合において、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）置換を任意選択により含む、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。いくつかの場合において、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図２０Ｇに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置３３にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図１９Ｋに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置８２にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｇ１５１Ｃ置換を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド及びＤ２９Ｃ置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基３３にあるＣｙｓと、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基８１にあるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。いくつかの場合において、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーを、第１または第２のポリペプチドの構成成分を接続するために使用することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＩＬ－２ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦａｓＬポリペプチドもしくはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、いくつかの場合において、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）置換を任意選択により含む、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。いくつかの場合において、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図２０Ｈに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置１５１にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図１９Ｆに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置２９にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｗ１５３Ｃ置換を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド及びＤ２９Ｃ置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基３３にあるＣｙｓと、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の残基８１にあるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。いくつかの場合において、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーを、第１または第２のポリペプチドの構成成分を接続するために使用することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在する１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、ＩＬ－２ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦａｓＬポリペプチドもしくはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、いくつかの場合において、ＩｇＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）置換を任意選択により含む、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。いくつかの場合において、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図２０Ｊに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置１５３にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図１９Ｆに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、位置２９にＣｙｓを含む。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
２）ペプチドリンカーとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間のジスルフィド結合
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む。所望される場合、リンカーは、ヘテロ二量体の２つのポリペプチドの間にジスルフィド結合を形成するために使用することができるＣｙｓを含み得る。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間にペプチドリンカーを含む。所望される場合、リンカーは、ヘテロ二量体の２つのポリペプチドの間にジスルフィド結合を形成するために使用することができるＣｙｓを含み得る。
構成成分の配置
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に（任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーを含む）、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖、及び（任意選択により）ｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖中のＣｙｓが第１のポリペプチドリンカー中のＣｙｓとジスルフィド結合を形成するように、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）のアミノ酸置換を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に（任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーを含む）、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖、及び（任意選択により）ｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖中のＣｙｓが第１のポリペプチドリンカー中のＣｙｓとジスルフィド結合を形成するように、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）のアミノ酸置換を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、及びｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に（任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーを含む）、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖、ｉｉ）１つ以上のＭＯＤ、及びｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、例えば、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。Ｃｙｓを含む他のペプチドリンカーが使用されてもよい。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖中のＣｙｓがリンカー中のＣｙｓとジスルフィド結合を形成するように、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）のアミノ酸置換を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、及びｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に（任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーを含む）、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖、及びｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、例えば、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。Ｃｙｓを含む他のペプチドリンカーが使用されてもよい。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖中のＣｙｓがリンカー中のＣｙｓとジスルフィド結合を形成するように、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）のアミノ酸置換を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、及びｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、任意選択によりＣｙｓを含まないリンカーによって接続される、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖、及び（任意選択により）ｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、例えば、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。Ｃｙｓを含む他のペプチドリンカーが使用されてもよい。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖中のＣｙｓがリンカー中のＣｙｓとジスルフィド結合を形成するように、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）のアミノ酸置換を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、及びｉｖ）１つ以上のＭＯＤを含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、任意選択によりＣｙｓを含まないリンカーによって接続される、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖、及び（任意選択により）ｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、例えば、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。Ｃｙｓを含む他のペプチドリンカーが使用されてもよい。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖中のＣｙｓがリンカー中のＣｙｓとジスルフィド結合を形成するように、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）のアミノ酸置換を含む。
Ｃｙｓ残基の位置
上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、及びｉｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、第１または第２のポリペプチドは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含み、第１及び第２のポリペプチドは、ペプチドリンカー中のＣｙｓと、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の置換によって提供されるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。
上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含むペプチドリンカー、及びｉｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む、第１のポリペプチド鎖と、ｂ）第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む第２のポリペプチドと、を含む、ヘテロ二量体を含み、第１及び／または第２のポリペプチドは、１つ以上のＭＯＤを含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、第１または第２のポリペプチドは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含み、第１及び第２のポリペプチドは、ペプチドリンカー中のＣｙｓと、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の置換によって提供されるＣｙｓとの間のジスルフィド結合を介して連結される。
例えば、いくつかの場合において、ペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含み得、式中、ｎは、１～１０の整数であり（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、一般に、ｎ＝２または３が有用である）、第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、Ｃｙｓによるアミノ酸（Ｃｙｓ以外）の置換を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである。
ＡＩペプチドとＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間のＣｙｓ含有リンカー及びジスルフィド結合を形成することができるＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中のＣｙｓ残基の具体例は、以下の表３に記載される。
（表３）
いくつかの場合において、第１及び第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドがそれぞれＤＲＢ及びＤＲＡポリペプチドである場合、ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図５または図２０Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、図４または図１９Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得、例えば、位置７２または位置７５にＣｙｓを含み得る。上の実施形態のいずれかにおいて、ｎ＝０、１、２、３、４またはそれ以上であるが、典型的に、２または３が使用され、合計で１５または２０アミノ酸のリンカー長が作製されるが、より長い長さも可能であり得る。上の実施形態のいずれかにおいて、任意選択により、Ｃｙｓを含まないリンカーを、第１または第２のポリペプチドの他の構成成分を接続するために使用することができる。いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが存在し、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４Ａ及びＬ１５Ａ）置換を任意選択により含む、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドもしくはそのバリアント、４－１ＢＢＬポリペプチドもしくはそのバリアント、ＩＬ－２ポリペプチドもしくはそのバリアント、またはＦａｓＬポリペプチドもしくはそのバリアントである。
３）第１及び第２のポリペプチド中のペプチドリンカー間のジスルフィド結合
いくつかの場合において、ＴＭＰは、第１のポリペプチド中のＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間の第１のＣｙｓ含有ペプチドリンカー、及び第２のポリペプチド中の２つの構成成分の間の第２のＣｙｓ含有ペプチドリンカーを含む。そのような場合、第１及び第２のＣｙｓ含有リンカーのＣｙｓ残基は、ヘテロ二量体の２つのポリペプチド間にジスルフィド結合を形成するために使用することができる。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、第１のポリペプチド中のＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間の第１のＣｙｓ含有ペプチドリンカー、及び第２のポリペプチド中の２つの構成成分の間の第２のＣｙｓ含有ペプチドリンカーを含む。そのような場合、第１及び第２のＣｙｓ含有リンカーのＣｙｓ残基は、ヘテロ二量体の２つのポリペプチド間にジスルフィド結合を形成するために使用することができる。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含む第１のペプチドリンカー、及びｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド（例えば、図５または図２０Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド）を含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）１つ以上のＭＯＤ、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖（例えば、図４または図１９Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド）、及び（任意選択により）ｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。第２のポリペプチドは、Ｃｙｓを含む第２のペプチドリンカーを含み、第２のペプチドリンカーは、ＭＯＤ（複数可）とＭＨＣクラスＩＩ α鎖との間、またはＭＨＣクラスＩＩ α鎖とＩｇ Ｆｃ（存在する場合）との間のいずれかに位置する。第２のポリペプチドは、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーを含み得る。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ａ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチド、ｉｉ）Ｃｙｓを含む第１のペプチドリンカー、及びｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド（例えば、図５または図２０Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド）を含む、第１のポリペプチドと、ｂ）Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖（例えば、図４または図１９Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド）、ｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、及びｉｉｉ）１つ以上のＭＯＤを含む、第２のポリペプチドと、を含み、第１または第２のポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、第１または第２のポリペプチドは、マスキングポリペプチドを含む。第２のポリペプチドは、Ｃｙｓを含む第２のペプチドリンカーを含み、第２のペプチドリンカーは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖とＩｇ Ｆｃとの間、またはＩＧ Ｆｃと１つ以上のＭＯＤとの間のいずれかに位置する。第２のポリペプチドは、任意選択により、Ｃｙｓを含まない１つ以上のリンカーを含み得る。Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。
Ｃ）一本鎖ＴＭＰ
上記のとおり、いくつかの場合において、本開示のＴＭＰは、一本鎖（単一ポリペプチド鎖）ＴＭＰである。一本鎖ＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。本開示の一本鎖ＴＭＰはまた、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み得る。一本鎖ＴＭＰは、２つ以上のＭＯＤを含み得、ここで、２つ以上のＭＯＤは、同じアミノ酸配列または異なるアミノ酸配列を有し得る。一本鎖ＴＭＰの非限定的な例は、図３Ａ～３Ｄに模式的に示される。
上記のとおり、いくつかの場合において、本開示のＴＭＰは、一本鎖（単一ポリペプチド鎖）ＴＭＰである。一本鎖ＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。本開示の一本鎖ＴＭＰはまた、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み得る。一本鎖ＴＭＰは、２つ以上のＭＯＤを含み得、ここで、２つ以上のＭＯＤは、同じアミノ酸配列または異なるアミノ酸配列を有し得る。一本鎖ＴＭＰの非限定的な例は、図３Ａ～３Ｄに模式的に示される。
構成成分の配置
一本鎖ＴＭＰの構成成分の配置は、変わり得る。第１の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
一本鎖ＴＭＰの構成成分の配置は、変わり得る。第１の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
第２の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）１つ以上のＭＯＤと、ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、を含む。第１のポリペプチドの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
第３の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
第４の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖｉｉ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
第５の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖｉｉ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
第６の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
第７の非限定的な例として、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドと、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドまたはマスキングポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドまたはＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、を含む。一本鎖ＴＭＰの構成成分は、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続され得る。
いくつかの場合において、図３Ａに模式的に示されるように、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）マスキングポリペプチドと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖ）マスキングポリペプチドと、ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、図３Ｂに模式的に示されるように、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドと、ｖｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉｉ）マスキングポリペプチド、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、図３Ｃに模式的に示されるように、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖ）マスキングポリペプチドと、ｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉ）マスキングポリペプチドと、ｖｉｉ）１つ以上のＭＯＤと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、図３Ｄに模式的に示されるように、いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖｉ）マスキングポリペプチドと、ｖｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、Ｎ末端からＣ末端の順に、ｉ）ＡＩペプチドと、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドと、ｖ）１つ以上のＭＯＤと、ｖｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、ｖｉｉ）マスキングポリペプチドと、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドと、を含む。上記の実施形態のいずれか１つにおいて、ＴＭＰは、単一のＭＯＤを含み得る。上記の実施形態のいずれか１つにおいて、ＴＭＰは、２コピーのＭＯＤを含み得、その２コピーは、タンデムに並んでいてもよいし、リンカーによって分離されていてもよい。上記の実施形態のいずれか１つにおいて、ＴＭＰは、３コピーのＭＯＤを含み得、その３コピーは、タンデムに並んでいてもよいし、リンカーによって分離されていてもよい。
上記の実施形態のいずれか１つにおいて、ＴＭＰは、ｉ）ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとの間、ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドとの間、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドとマスキングポリペプチドとの間、ｉｖ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドとＭＯＤとの間、ｖ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、ｖｉ）マスキングポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、ｖｉｉ）ＴＧＦ－βポリペプチドとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、ｖｉｉｉ）Ｉｇ ＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、ｉｘ）ＭＯＤとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、ＴＭＰの任意の他の２つの構成成分の間のうちの１つ以上にペプチドリンカーを含む。例示的な好適なリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８３）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８である）；ＡＡＡＧＧ（配列番号１８４）、及びＧＧＳＡＡＡＧＧ（配列番号１７５）を含む。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃは、ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドまたはそのバリアントである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃは、ＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチドまたはそのバリアントである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドまたはそのバリアントであり、いくつかの場合において、１つ以上のＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチドまたはそのバリアントである。いくつかの場合において、ＡＩペプチドは、多発性硬化症関連ペプチド、関節リウマチ関連ペプチド、全身性エリテマトーデス関連ペプチド、アジソン病関連ペプチド、重症筋無力症関連ペプチド、シェーグレン症候群関連ペプチド、及び乾癬関連ペプチドからなる群から選択されるペプチドである。上の実施形態のいずれかにおいて、いくつかの場合において、ＴＭＰは、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含む。
いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰは、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含み、鎖内ジスルフィド結合は、ａ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド中に存在するＣｙｓとＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド中に存在するＣｙｓとの間、ｂ）ペプチドリンカー中に存在するＣｙｓとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間に形成され得る。
ＴＭＰは、２つの同一の一本鎖ＴＭＰのホモ二量体を含み得る。一本鎖ＴＭＰがＩｇ Ｆｃポリペプチドを含む場合、ホモ二量体は、ホモ二量体中に存在する２つの一本鎖ＴＭＰのそれぞれのＩｇ Ｆｃポリペプチド間に形成される１つ以上のジスルフィド結合を含み得る。あるいは、ＴＭＰは、上述の相互特異的結合配列、例えば、ＫｉＨ配列を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを有するポリペプチドを含む、２つの異なる一本鎖ＴＭＰのヘテロ二量体を含み得る。
ホモ二量体及びヘテロ二量体
本開示は、本開示のＴＭＰのうちの２つを含む、タンパク質を提供する。いくつかの場合において、タンパク質は、２つのＴＭＰヘテロ二量体を含む、ホモ二量体である。いくつかの場合において、タンパク質は、２つの一本鎖ＴＭＰを含む、ホモ二量体である。いくつかの場合において、タンパク質は、２つのＴＭＰヘテロ二量体を含む、ヘテロ二量体である。いくつかの場合において、タンパク質は、２つの一本鎖ＴＭＰを含む、ヘテロ二量体である。
本開示は、本開示のＴＭＰのうちの２つを含む、タンパク質を提供する。いくつかの場合において、タンパク質は、２つのＴＭＰヘテロ二量体を含む、ホモ二量体である。いくつかの場合において、タンパク質は、２つの一本鎖ＴＭＰを含む、ホモ二量体である。いくつかの場合において、タンパク質は、２つのＴＭＰヘテロ二量体を含む、ヘテロ二量体である。いくつかの場合において、タンパク質は、２つの一本鎖ＴＭＰを含む、ヘテロ二量体である。
本開示は、２つのＴＭＰヘテロ二量体、例えば、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体を含むホモ二量体である、タンパク質を提供し、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体は同じである（すなわち、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体の第１のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有し、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体の第２のポリペプチドは、同じアミノ酸配列を有する）。第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体は、例えば、第１のＴＭＰヘテロ二量体中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドと第２のＴＭＰヘテロ二量体中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間の１つ以上のジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結され得る。
本開示は、２つのＴＭＰヘテロ二量体、例えば、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体を含むヘテロ二量体である、タンパク質を提供し、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体は、同じではない（すなわち、第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体の第１のポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を有し、及び／または第１のＴＭＰヘテロ二量体及び第２のＴＭＰヘテロ二量体の第２のポリペプチドは、異なるアミノ酸配列を有する）。いくつかの場合において、第１及び第２のＴＭＰヘテロ二量体の第１及び第２のポリペプチドは、ＭＯＤが異なることを除き、同一である。例えば、いくつかの場合において、第１のＴＭＰヘテロ二量体は、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドを含み、第２のＴＭＰヘテロ二量体は、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、１つ以上のＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを含む。別の例として、いくつかの場合において、第１のＴＭＰヘテロ二量体は、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドを含み、第２のＴＭＰヘテロ二量体は、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、１つ以上の４－１ＢＢＬポリペプチドを含む。
本開示は、２つの一本鎖ＴＭＰ、例えば、第１の一本鎖ＴＭＰ及び第２の一本鎖ＴＭＰを含むホモ二量体である、タンパク質を提供し、第１の一本鎖ＴＭＰ及び第２の一本鎖ＴＭＰは、同じである（同じアミノ酸配列を有する）。第１の一本鎖ＴＭＰ及び第２の一本鎖ＴＭＰは、例えば、第１の一本鎖ＴＭＰ中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドと、第２の一本鎖ＴＭＰ中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間の１つ以上のジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結され得る。
本開示は、２つの一本鎖ＴＭＰ、例えば、第１の一本鎖ＴＭＰ及び第２の一本鎖ＴＭＰを含むヘテロ二量体である、タンパク質を提供し、第１の一本鎖ＴＭＰ及び第２の一本鎖ＴＭＰは、同じではない（異なるアミノ酸配列を有する）。そのような場合において、２つの一本鎖ＴＭＰは、上述の相互特異的結合配列、例えば、ＫｉＨ配列を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドを有するポリペプチドを含み得る。いくつかの場合において、第１及び第２の一本鎖ＴＭＰの第１及び第２のポリペプチドは、ＭＯＤが異なることを除き、同一である。例えば、いくつかの場合において、第１の一本鎖ＴＭＰは、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドを含み、第２の一本鎖ＴＭＰは、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、１つ以上のＰＤ－Ｌ１ポリペプチドを含む。別の例として、いくつかの場合において、第１の一本鎖ＴＭＰは、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチドを含み、第２の一本鎖ＴＭＰは、１つ以上のＭＯＤを含み、その１つ以上のＭＯＤは、１つ以上の４－１ＢＢＬポリペプチドを含む。第１の一本鎖ＴＭＰ及び第２の一本鎖ＴＭＰは、例えば、第１の一本鎖ＴＭＰ中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドと、第２の一本鎖ＴＭＰ中に存在するＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間の１つ以上のジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結され得る。
免疫調節ポリペプチド（「ＭＯＤ」）
本開示のＴＭＰに含めるのに好適なＭＯＤには、ＩＬ－２、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、及びＨＶＥＭが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＩＣＯＳ－Ｌポリペプチド、ＯＸ－４０Ｌポリペプチド、ＣＤ８０ポリペプチド、ＣＤ８６ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、ＦａｓＬポリペプチド、及びＰＤ－Ｌ２ポリペプチドから選択される。いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド及びＦａｓＬポリペプチドから選択される。
本開示のＴＭＰに含めるのに好適なＭＯＤには、ＩＬ－２、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、３／ＴＲ６、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、及びＨＶＥＭが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、ＩＣＯＳ－Ｌポリペプチド、ＯＸ－４０Ｌポリペプチド、ＣＤ８０ポリペプチド、ＣＤ８６ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、ＦａｓＬポリペプチド、及びＰＤ－Ｌ２ポリペプチドから選択される。いくつかの場合において、ＭＯＤは、ＩＬ－２ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド及びＦａｓＬポリペプチドから選択される。
上記のとおり、ＭＯＤは、野生型アミノ酸配列を含み得るか、または野生型アミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。ＭＯＤは、完全長のＭＯＤの細胞外部分のみを含み得る。したがって、例えば、ＭＯＤは、いくつかの場合において、天然ＭＯＤに通常みられる、シグナルペプチド、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインのうちの１つ以上を除外することができる。
いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＯＤは、天然ＭＯＤのアミノ酸配列の全てまたは一部（例えば、細胞外部分）を含む。他の場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＯＤは、天然ＭＯＤのアミノ酸配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むバリアントＭＯＤである。いくつかの場合において、バリアントＭＯＤは、免疫共調節ポリペプチド（「ｃｏ－ＭＯＤ」）に対する対応する天然ＭＯＤ（例えば、バリアントに存在するアミノ酸置換（複数可）を含まないＭＯＤ）の親和性よりも低い、免疫共調節ポリペプチドに対する結合親和性を呈する。
ｃｏ－ＭＯＤに対して親和性の低下を呈する好適なＭＯＤは、野生型ＭＯＤと１アミノ酸（ａａ）～２０アミノ酸の違いを有し得る。例えば、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するバリアントＭＯＤは、アミノ酸配列が、対応する野生型ＭＯＤと１アミノ酸、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、または１０アミノ酸異なる。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するバリアントＭＯＤは、アミノ酸配列が、対応する野生型ＭＯＤと１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸異なる。一例として、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するバリアントＭＯＤは、対応する参照（例えば、野生型）ＭＯＤと比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のアミノ酸置換を含む。
ＴＭＰに含めるのに好適なバリアントＭＯＤは、同種のｃｏ－ＭＯＤに対して、対応する野生型ＭＯＤの同種のｃｏ－ＭＯＤに対する親和性と比較して、親和性の低下を呈する。
ＭＯＤと同種のｃｏ－ＭＯＤの例示的なペアとしては、以下の表４に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
（表４）
ＭＯＤとその同種のｃｏ－ＭＯＤとの間の結合親和性は、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２０２０／１３２１３８Ａ１に記載されている手順に従って、精製されたＭＯＤ及び精製された同種のｃｏ－ＭＯＤを使用するバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によって決定することができる。
ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ、及びＩＬ－２などの親和性低下バリアントを含むＭＯＤ及びバリアントは、公開文献、例えば、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１に記載されており、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ、ＩＬ－２のＭＯＤ及び特定のバリアントＭＯＤに関するその開示は、特に、ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１の段落［００２６０］～［００４５５］及びＷＯ２０１９／０５１０９１の段落［００１５７］～［００３５２］を含め、参照により本明細書に明示的に援用される。
特に興味深いのは、サイトカインＩＬ－２のバリアントであるＭＯＤである。野生型ＩＬ－２は、Ｔ細胞の表面上のＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒ）に結合する。野生型ＩＬ－２は、ＩＬ－２Ｒに対して強い親和性を有し、大部分または実質的に全てのＣＤ８＋Ｔ細胞に結合して活性化する。そのため、薬物アルデスロイキン（商品名Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））などの野生型ＩＬ－２の合成型は、ＩＬ－２が標的Ｔ細胞と非標的Ｔ細胞の両方を無差別に活性化するため、がんの治療のためにヒトに投与すると、深刻な副作用を持つことが知られている。
ＩＬ－２受容体は、いくつかの場合において、アルファ鎖（ＩＬ－２Ｒα；ＣＤ２５とも称される）、ベータ鎖（ＩＬ－２Ｒβ；ＣＤ１２２とも称される：及びガンマ鎖（ＩＬ－２Ｒγ；ＣＤ１３２とも称される）を含む、ヘテロ三量体ポリペプチドである。ヒトＩＬ－２、ヒトＩＬ－２Ｒα、ＩＬ２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγのアミノ酸配列は、知られている。例えば、上述のＰＣＴ出願公開ＷＯ２０２０１３２１３８Ａ１及びＷＯ２０１９／０５１０９１を参照されたい。例えば、野生型ＩＬ－２ポリペプチドは、図２２Ａに示されるアミノ酸配列を有し得る。ヒトＩＬ－２Ｒα、ヒトＩＬ－２Ｒβ、及びヒトＩＬ－２Ｒγのアミノ酸配列は、それぞれ図２２Ｂ、２２Ｃ、及び２２Ｄに示される。
いくつかの場合において、本開示のＩＬ－２バリアントＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒαに対する結合の減少を呈し、それにより、ＩＬ－２バリアントによるＴｒｅｇの活性化を最小化または実質的に低下させる。代替的にまたは追加的に、いくつかの場合において、本開示のＩＬ－２バリアントＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒβ及び／またはＩＬ－２Ｒγに対する結合の減少を呈し、それにより、ＩＬ－２バリアントＭＯＤは、ＩＬ－２Ｒに対して全体的に低下した親和性を呈する。いくつかの場合において、本開示のＩＬ－２バリアントＭＯＤは、両方の特性を呈し、すなわち、ＩＬ－２Ｒαに対する結合の減少または実質的な無結合を呈し、また、ＩＬ－２Ｒβ及び／またはＩＬ－２Ｒγに対する結合の低下を示し、それにより、ＩＬ－２バリアントポリペプチドは、ＩＬ－２Ｒに対して全体的に低下した親和性を呈する。例えば、Ｈ１６及びＦ４２に置換を有するＩＬ－２バリアントで、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合の減少が示されている。Ｑｕａｙｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；２６（８）Ａｐｒｉｌ １５，２０２０を参照されたい。これには、Ｈ１６Ａ及びＦ４２Ａ置換を含むＩＬ－２ポリペプチドのヒトＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性が、野生型ＩＬ２結合と比較して、それぞれ１１０分の１及び３分の１に減少するが、これは、主にこれらの相互作用のそれぞれのオフレートが速いことに起因することが開示されている。ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合の減少を呈するバリアントを含むそのようなバリアントを含むＴＭＰは、ＴＭＰ上のペプチドエピトープに対して特異的な標的ＴＣＲを含有するＴ細胞上のＩＬ－２受容体に優先的に結合して活性化する能力を示しており、したがって、非標的Ｔ細胞、すなわち、ＴＭＰ上のペプチドエピトープに特異的に結合するＴＣＲを含有しないＴ細胞にＩＬ－２を送達する可能性が低くなる。すなわち、ＩＬ－２バリアントＭＯＤとＴ細胞上のその共刺激ポリペプチドとの結合は、ＩＬ－２の結合よりも、ＭＨＣエピトープ部分の結合によって実質的に駆動される。
したがって、好適なＩＬ－２バリアントＭＯＤは、図２２Ａに示される野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、図２２Ａに示される野生型ＩＬ－２アミノ酸配列と１つ以上のアミノ酸の違いを有する、ポリペプチドを含む。いくつかの場合において、本開示のそのようなバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、図２２Ａに示される野生型ＩＬ－２アミノ酸配列を含むＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性と比較して、ＩＬ－２Ｒに対する結合親和性の低下を示す。例えば、いくつかの場合において、バリアントＩＬ－２ポリペプチドは、同一条件下にてアッセイしたとき、図２２Ａに示される野生型ＩＬ－２アミノ酸配列を含むＩＬ－２ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒ（例えば、図２２Ｂ～２２Ｄに示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含むＩＬ－２Ｒ）に対する結合親和性よりも、少なくとも１０％低い、少なくとも１５％低い、少なくとも２０％低い、少なくとも２５％、少なくとも３０％低い、少なくとも３５％低い、少なくとも４０％低い、少なくとも４５％低い、少なくとも５０％低い、少なくとも５５％低い、少なくとも６０％低い、少なくとも６５％低い、少なくとも７０％低い、少なくとも７５％低い、少なくとも８０％低い、少なくとも８５％低い、少なくとも９０％低い、少なくとも９５％低い、または９５％を超えて低い結合親和性で、ＩＬ－２Ｒに結合する。
いくつかの場合において、好適なバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、アミノ酸配列：
に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、すなわち、バリアントＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２のアミノ酸配列を有するが、Ｈ１６Ａ及びＦ４２Ａ置換を含む（太字で示す）。あるいは、前述の配列であるが、Ｈ１６及び／またはＦ４２におけるＡｌａ以外の置換を有するものを採用してもよく、例えば、Ｈ１６Ａの代わりにＨ１６Ｔを採用してもよい。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、アミノ酸配列：
を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、アミノ酸配列：
を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰは、そのようなバリアントＩＬ－２ポリペプチドを２コピー含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＭＯＤは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドである。ＭＯＤとして好適であり得るＰＤ－Ｌ１バリアントは、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１９／０５１０９１及びＷＯ２０１７／２０１１３１に開示されている。いくつかの場合において、ＴＭＰのＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、次のＰＤ－Ｌ１エクトドメインアミノ酸配列：ＦＴ ＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶ ＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣ ＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬ ＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥ ＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧ ＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳ ＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤ ＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱ ＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧ ＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧ ＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶ ＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲ ＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥ ＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹ ＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳ ＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴ ＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬ ＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮ ＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴ ＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨ ＴＡＥＬＶＩＰＧＮＩ ＬＮＶＳＩＫＩ（配列番号１３０）に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。図２２Ｅも参照されたい。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＭＯＤは、４－１ＢＢＬポリペプチドである。いくつかの場合において、ＴＭＰの４－１ＢＢＬポリペプチドは、次の４－１ＢＢＬアミノ酸配列：ＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧ ＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶ ＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹ ＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬ ＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴ ＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶ ＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲ ＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳ ＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬ ＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡ ＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳ ＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱ ＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱ ＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡ ＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱ ＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶ ＴＰＥＩＰＡ（配列番号１３１）に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。図２２Ｆも参照されたい。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＭＯＤは、ＦａｓＬポリペプチド、例えば、ＦａｓＬポリペプチドの細胞外ドメインである。いくつかの場合において、ＴＭＰのＦａｓＬポリペプチドは、次のＦａｓＬ細胞外ドメインアミノ酸配列：ＱＬＦＨＬＱＫＥ ＬＡＥＬＲＥＳＴＳＱ ＭＨＴＡＳＳＬＥＫＱ ＩＧＨＰＳＰＰＰＥＫ ＫＥＬＲＫＶＡＨＬＴ ＧＫＳＮＳＲＳＭＰＬ ＥＷＥＤＴＹＧＩＶＬ ＬＳＧＶＫＹＫＫＧＧ ＬＶＩＮＥＴＧＬＹＦ ＶＹＳＫＶＹＦＲＧＱ ＳＣＮＮＬＰＬＳＨＫ ＶＹＭＲＮＳＫＹＰＱ ＤＬＶＭＭＥＧＫＭＭ ＳＹＣＴＴＧＱＭＷＡ ＲＳＳＹＬＧＡＶＦＮ ＬＴＳＡＤＨＬＹＶＮ ＶＳＥＬＳＬＶＮＦＥ ＥＳＱＴＦＦＧＬＹＫ Ｌ（配列番号１８７）に対して、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
クラスＩＩ ＭＨＣポリペプチド
上記のとおり、本開示のＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む。ＴＭＰは、ヒトＭＨＣポリペプチド（ＨＬＡポリペプチド）、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）のＭＨＣポリペプチド、及び他の哺乳動物種（例えば、ウサギ目、非ヒト霊長類、イヌ科動物、ネコ科動物、有蹄類（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギなど）のＭＨＣポリペプチドなどを含む、様々な種のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み得る。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドの例は、図４～１８、図１９Ａ～１９Ｎ、及び図２０Ａ～２０Ｊに示される。
上記のとおり、本開示のＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む。ＴＭＰは、ヒトＭＨＣポリペプチド（ＨＬＡポリペプチド）、げっ歯類（例えば、マウス、ラットなど）のＭＨＣポリペプチド、及び他の哺乳動物種（例えば、ウサギ目、非ヒト霊長類、イヌ科動物、ネコ科動物、有蹄類（例えば、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギなど）のＭＨＣポリペプチドなどを含む、様々な種のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含み得る。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドの例は、図４～１８、図１９Ａ～１９Ｎ、及び図２０Ａ～２０Ｊに示される。
ＭＨＣタンパク質は、ヒトの場合、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と称される。ＨＬＡクラスＩＩ遺伝子座には、ＨＬＡ－ＤＭ（ＨＬＡ－ＤＭ α鎖及びＨＬＡ－ＤＭ β鎖をそれぞれコードするＨＬＡ－ＤＭＡ及びＨＬＡ－ＤＭＢ）、ＨＬＡ－ＤＯ（ＨＬＡ－ＤＯ α鎖及びＨＬＡ－ＤＯ β鎖をそれぞれコードするＨＬＡ－ＤＯＡ及びＨＬＡ－ＤＯＢ）、ＨＬＡ－ＤＰ（ＨＬＡ－ＤＰ α鎖及びＨＬＡ－ＤＰ β鎖をそれぞれコードするＨＬＡ－ＤＰＡ及びＨＬＡ－ＤＰＢ）、ＨＬＡ－ＤＱ（ＨＬＡ－ＤＱ α鎖及びＨＬＡ－ＤＱ β鎖をそれぞれコードするＨＬＡ－ＤＱＡ及びＨＬＡ－ＤＱＢ）、及びＨＬＡ－ＤＲ（ＨＬＡ－ＤＲ α鎖及びＨＬＡ－ＤＲ β鎖をそれぞれコードするＨＬＡ－ＤＲＡ及びＨＬＡ－ＤＲＢ）が含まれる。
本開示の目的上、「ＭＨＣポリペプチド」という用語は、α鎖及びβ鎖またはその一部を含む、クラスＩＩ ＭＨＣポリペプチドを含むことを意味する。より具体的には、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１及びα２ドメイン、ならびにクラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１及びβ２ドメインを含み、これらは、エピトープペプチドの提示に必要な細胞外クラスＩＩタンパク質の全部または大部分を表す。いくつかの場合において、ＴＭＰ中のα及びβの両方のクラスＩＩ ＭＨＣポリペプチド配列は、ヒト起源であるか、またはそのようなポリペプチドのバリアントである。
別途明示されない限り、ＴＭＰ中のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖及びβ鎖の膜アンカードメイン（膜貫通領域）、または得られるＴＭＰもしくはそのペプチドを、ＴＭＰが発現される細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣または「ＣＨＯ」細胞などの哺乳動物細胞などの真核細胞）の膜に係留するのに十分であるその任意の部分を含むことを意図していない。同様に、別途明示されない限り、本明細書に記載されるＴＭＰ中のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、いくつかの天然ＭＨＣクラスＩＩタンパク質中に存在し得るリーダー部分及び／または細胞内部分（例えば、細胞質尾部）を含まない。
本開示のＴＭＰは、ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドを含む。天然クラスＩＩ ＭＨＣポリペプチドは、α鎖及びβ鎖（例えば、ＨＬＡ α鎖及びβ鎖）を含む。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドには、ＭＨＣクラスＩＩ ＤＰ α及びβポリペプチド、ＤＭ α及びβポリペプチド、ＤＯ α及びβポリペプチド、ＤＱ α及びβポリペプチド、ならびにＤＲ α及びβポリペプチドが含まれる。本明細書で使用される場合、「クラスＩＩ ＭＨＣポリペプチド」は、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖ポリペプチド、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖ポリペプチド、またはクラスＩＩ ＭＨＣ α鎖及び／またはβ鎖ポリペプチドの一部のみを含み得る。例えば、「クラスＩＩ ＭＨＣポリペプチド」は、ｉ）クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１ドメインのみ、ｉｉ）クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα２ドメインのみ、ｉｉｉ）クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１ドメイン及びα２ドメインのみ、ｉｖ）クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１ドメインのみ、ｖ）クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ２ドメインのみ、ｖｉ）クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１ドメイン及びβ２ドメインのみ、ｖｉｉ）クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１ドメイン、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１ドメイン、及びクラスＩＩ ＭＨＣのβ２ドメインなどを含む、ポリペプチドであり得る。多くの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖ポリペプチドのα１ドメイン及びα２ドメインのみを含み、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖ポリペプチドのβ１ドメイン及びβ２ドメインのみを含む。
ヒトＭＨＣまたはＨＬＡ遺伝子座は、本質的に非常に多型であり、Ａｎｔｈｏｎｙ Ｎｏｌａｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅが運営するＨＬＡ命名法サイト（ワールドワイドウェブ：ｈｌａ．ａｌｌｅｌｅｓ．ｏｒｇ／ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌで利用可能）によると、２０１９年４月８日現在、７個のＤＲＡアレル、２，４７９個のＤＲＢ１アレル、１個のＤＲＢ２アレル、２２５個のＤＲＢ３アレル、１２１個のＤＲＢ４アレル、８５個のＤＲＢ５アレル、３個のＤＲＢ６アレル、２個のＤＲＢ７アレル、１個のＤＲＢ８アレル、６個のＤＲＢ９アレル、１４９個のＤＱＡ１アレル、１，５６１個のＤＱＢ１アレル、１０６個のＤＰＡ１、１，３６０個のＤＰＢ１アレル、７個のＤＭＡアレル、１３個のＤＭＢアレル、１２個のＤＯＡアレル及び１３個のＤＯＢアレルが存在することが示されている。本明細書で使用される場合、「クラスＩＩ ＭＨＣポリペプチド」という用語は、任意の既知のクラスＩＩ ＭＨＣポリペプチドのアレル型を含む。
ＴＭＰは、天然クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖中に存在し得るリーダー部分、膜貫通部分、及び細胞内部分（例えば、細胞質尾部）を含まない、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖を含み得る。したがって、ＴＭＰは、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１及びα２部分のみを含み得、天然クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖中に存在し得るリーダー部分、膜貫通部分、及び細胞内部分（例えば、細胞質尾部）を含まない。
ＴＭＰは、天然クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖中に存在し得るリーダー部分、膜貫通部分、及び細胞内部分（例えば、細胞質尾部）を含まない、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖を含み得る。したがって、ＴＭＰは、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１及びβ２ドメイン部分のみを含み得、天然クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖中に存在し得るリーダー部分、膜貫通部分、及び細胞内部分（例えば、細胞質尾部）を含まない。
ａ）ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖
ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖は、α１ドメイン及びα２ドメインを含む。いくつかの場合において、抗原提示細胞中に存在するα１及びα２ドメインは、同じＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドに由来する。いくつかの場合において、抗原提示細胞中に存在するα１及びα２ドメインは、２つの異なるＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドに由来する。上記のとおり、本明細書におけるＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドへの言及は、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１とα２の両方のドメインを含み得る。
ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖は、α１ドメイン及びα２ドメインを含む。いくつかの場合において、抗原提示細胞中に存在するα１及びα２ドメインは、同じＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドに由来する。いくつかの場合において、抗原提示細胞中に存在するα１及びα２ドメインは、２つの異なるＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドに由来する。上記のとおり、本明細書におけるＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドへの言及は、クラスＩＩ ＭＨＣ α鎖のα１とα２の両方のドメインを含み得る。
ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖は、シグナルペプチドが欠如し得る。ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖は、約６０アミノ酸（ａａ）～約２００アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖は、約６０アミノ酸～約８０アミノ酸、８０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１４０アミノ酸、約１４０アミノ酸～約１７０アミノ酸、約１７０アミノ酸～約２００アミノ酸の長さを有し得る。ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ α１ドメインは、約３０アミノ酸～約９５アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ α１ドメインは、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、または約７０アミノ酸～約９５アミノ酸の長さを有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩＩ α１ドメインは、約７０アミノ酸～約９５アミノ酸である。ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ α２ドメインは、約３０アミノ酸～約９５アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ α２ドメインは、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、または約７０アミノ酸～約９５アミノ酸の長さを有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＭＨＣクラスＩＩ α２ドメインは、約７０アミノ酸～約９５アミノ酸である。
ＤＲＡポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＲＡポリペプチドである。ＤＲＡポリペプチドは、その天然アレルバリアントを含む、図４に示されるＤＲＡアミノ酸配列のアミノ酸２６からアミノ酸２０３までのアミノ酸配列の少なくとも１５０、少なくとも１６０、または少なくとも１７０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＲＡポリペプチドは、約１７８アミノ酸（例えば、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、または１８０アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＲＡポリペプチドである。ＤＲＡポリペプチドは、その天然アレルバリアントを含む、図４に示されるＤＲＡアミノ酸配列のアミノ酸２６からアミノ酸２０３までのアミノ酸配列の少なくとも１５０、少なくとも１６０、または少なくとも１７０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＲＡポリペプチドは、約１７８アミノ酸（例えば、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、または１８０アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＲＡポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＲＡポリペプチドは、ＤＲＡ＊０１：０２：０１（図４参照）のアミノ酸２６～２０３、またはそのアレルバリアントを含む。いくつかの場合において、アレルバリアントは、位置２４２（図４参照）にあるロイシンの代わりにバリンを有することにより、ＤＲＡ＊０１：０２とは異なるＤＲＡ＊０１：０１：０１：０１アレルバリアントである。
ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＡは、図４に示されるＤＲＡ＊０１：０２配列のアミノ酸２６～アミノ酸２１６の配列の少なくとも１６０、少なくとも１７０、または少なくとも１８０の連続するアミノ酸と、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。「ＤＲＡポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。
したがって、いくつかの場合において、好適なＤＲＡポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＩＫＥＥＨ ＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮ ＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤ ＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤ ＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬ ＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥ ＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶ ＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫ ＲＳＮＹＴＰＩＴＮＶ ＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳ ＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬ ＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰ ＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧ ＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴ ＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦ ＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰ ＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶ ＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬ ＫＨＷ（配列番号１８８、ＤＲＡ＊０１：０２のアミノ酸２６～２０３、図４参照）、またはそのアレルバリアントを含む。いくつかの場合において、アレルバリアントは、図４中の配列の位置２４２にあるロイシンの代わりにバリンを有することにより、ＤＲＡ＊０１：０２：０１とは異なるＤＲＡ＊０１：０１：０１：０１アレルバリアントである。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＡポリペプチドは、野生型ＤＲＡポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
ＴＭＰは、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＤＲＡポリペプチドを含み得る。例えば、ＴＭＰは、Ｅ３Ｃ、Ｅ４Ｃ、Ｆ１２Ｃ、Ｇ２８Ｃ、Ｄ２９Ｃ、Ｉ７２Ｃ、Ｋ７５Ｃ、Ｔ８０Ｃ、Ｐ８１Ｃ、Ｉ８２Ｃ、Ｔ９３Ｃ、Ｎ９４Ｃ、及びＳ９５Ｃから選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＡポリペプチドを含み得る。
ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＡ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＶＩＩＱＡＥＦＹＬＮ ＰＤＱＳＧＥＦＭＦＤ ＦＤＧＤＥＩＦＨＶＤ ＭＡＫＫＥＴＶＷＲＬ ＥＥＦＧＲＦＡＳＦＥ ＡＱＧＡＬＡＮＩＡＶ ＤＫＡＮＬＥＩＭＴＫ ＲＳＮＹＴＰＩＴＮ（配列番号１８９）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約８４アミノ酸（例えば、８０、８１、８２、８３、８４、８５、または８６アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＡ α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：Ｖ ＰＰＥＶＴＶＬＴＮＳＰＶＥＬＲＥＰＮＶＬ ＩＣＦＩＤＫＦＴＰＰ ＶＶＮＶＴＷＬＲＮＧ ＫＰＶＴＴＧＶＳＥＴ ＶＦＬＰＲＥＤＨＬＦ ＲＫＦＨＹＬＰＦＬＰ ＳＴＥＤＶＹＤＣＲＶ ＥＨＷＧＬＤＥＰＬＬ ＫＨＷ（配列番号１９０）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、または９８アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＭＡポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＭＡポリペプチドである。ＤＭＡポリペプチドは、その天然アレルバリアントを含む、図９に示されるＤＭＡ＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸２７～２１７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＭＡポリペプチドは、約１９１アミノ酸（例えば、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、または１９３アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＭＡポリペプチドである。ＤＭＡポリペプチドは、その天然アレルバリアントを含む、図９に示されるＤＭＡ＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸２７～２１７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＭＡポリペプチドは、約１９１アミノ酸（例えば、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、または１９３アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＭＡポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＭＡポリペプチドは、ＤＭＡ＊０１：０１：０１（図９参照）のアミノ酸２７～２１７、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＭＡ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＶＰＥＡ ＰＴＰＭＷＰＤＤＬＱ ＮＨＴＦＬＨＴＶＹＣ ＱＤＧＳＰＳＶＧＬＳ ＥＡＹＤＥＤＱＬＦＦ ＦＤＦＳＱＮＴＲＶＰ ＲＬＰＥＦＡＤＷＡＱ ＥＱＧＤＡＰＡＩＬＦ ＤＫＥＦＣＥＷＭＩＱ ＱＩＧＰＫＬＤＧＫＩ ＰＶＳＲ（配列番号１９１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９８アミノ酸（例えば、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、または１０１アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＭＡ α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＧＦＰＩＡＥ ＶＦＴＬＫＰＬＥＦＧ ＫＰＮＴＬＶＣＦＶＳ ＮＬＦＰＰＭＬＴＶＮ ＷＱＨＨＳＶＰＶＥＧ ＦＧＰＴＦＶＳＡＶＤ ＧＬＳＦＱＡＦＳＹＬ ＮＦＴＰＥＰＳＤＩＦ ＳＣＩＶＴＨＥＩＤＲ ＹＴＡＩＡＹＷ（配列番号１９２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９３アミノ酸（例えば、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＯＡポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＯＡポリペプチドである。ＤＯＡポリペプチドは、図１１に示されるＤＯＡ＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸２６～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＯＡポリペプチドは、約１７９アミノ酸（例えば、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、または１８２アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＯＡポリペプチドである。ＤＯＡポリペプチドは、図１１に示されるＤＯＡ＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸２６～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＯＡポリペプチドは、約１７９アミノ酸（例えば、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、または１８２アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＯＡポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＯＡポリペプチドは、ＤＯＡ＊０１：０１１（図１１参照）のアミノ酸２６～２０４、またはそのアレルバリアントを含む。いくつかの場合において、アレルバリアントは、ＤＯＡ＊０１：０１と比較して、位置８０にあるシステインの代わりにアルギニン（Ｒ８０Ｃ）を有することによるＤＯＡ＊０１：０２または位置７４にあるロイシンの代わりにバリン（Ｌ７４Ｖ）を有することによるＤＯＡ＊０１：０３バリアントであり得る。
好適なＤＯＡ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：
に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約８５アミノ酸（例えば、８３、８４、８５、８６、８７、または８８アミノ酸）の長さを有し得る。好適なα１ドメイン配列は、ＤＯＡ＊０１：０２及びＤＯＡ＊０１：０３に見出されるＬ７４Ｖ及び／またはＲ８０Ｃ置換を組み込むことができる（Ｌ７４及びＲ８０に対応するアミノ酸が斜体及び太字で示されている）。
好適なＤＯＡ α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＶＰＰＲＶＴＶＬＰＫ ＳＲＶＥＬＧＱＰＮＩ ＬＩＣＩＶＤＮＩＦＰ ＰＶＩＮＩＴＷＬＲＮ ＧＱＴＶＴＥＧＶＡＱ ＴＳＦＹＳＱＰＤＨＬ ＦＲＫＦＨＹＬＰＦＶ ＰＳＡＥＤＶＹＤＣＱ ＶＥＨＷＧＬＤＡＰＬ ＬＲＨＷ（配列番号１９４）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９１、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＰＡ１ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＰＡ１ポリペプチドである。ＤＰＡ１ポリペプチドは、図１３に示されるＤＰＡ１アミノ酸配列のアミノ酸２９～２０９と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＰＡ１ポリペプチドは、約１８１アミノ酸（例えば、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、または１８４アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＰＡ１ポリペプチドである。ＤＰＡ１ポリペプチドは、図１３に示されるＤＰＡ１アミノ酸配列のアミノ酸２９～２０９と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＰＡ１ポリペプチドは、約１８１アミノ酸（例えば、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、または１８４アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＰＡ１ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＰＡ１ポリペプチドは、ＤＰＡ１＊０１：０３（図１３参照）のアミノ酸２９～２０９、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＰＡ１ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＡＩＫＡＤＨＶＳＴＹ ＡＡＦＶＱＴＨＲＰＴ ＧＥＦＭＦＥＦＤＥＤ ＥＭＦＹＶＤＬＤＫＫ ＥＴＶＷＨＬＥＥＦＧ ＱＡＦＳＦＥＡＱＧＧ ＬＡＮＩＡＩＬＮＮＮ ＬＮＴＬＩＱＲＳＮＨ ＴＱＡＴＮ（配列番号１９５）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約８７アミノ酸（例えば、８４、８５、８６、８７、８８、または８９アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＰＡ１ α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＤＰＰＥＶ ＴＶＦＰＫＥＰＶＥＬ ＧＱＰＮＴＬＩＣＨＩ ＤＫＦＦＰＰＶＬＮＶ ＴＷＬＣＮＧＥＬＶＴ ＥＧＶＡＥＳＬＦＬＰ ＲＴＤＹＳＦＨＫＦＨ ＹＬＴＦＶＰＳＡＥＤ ＦＹＤＣＲＶＥＨＷＧ ＬＤＱＰＬＬＫＨＷ（配列番号１９６）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９７アミノ酸（例えば、９１、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
別のＤＰＡ１ポリペプチドは、ＤＰＡ１＊０２：０１（図１３参照）のアミノ酸２９～２０９、または少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％のアミノ酸配列同一性を有するそのバリアントを含む。好適なＤＰＡ１ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、ＤＰＡ１＊０２：０１のアミノ酸２９～１１５に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約８７アミノ酸（例えば、８４、８５、８６、８７、８８、または８９アミノ酸）の長さを有し得る。好適なＤＰＡ１ α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、ＤＰＡ１＊０２：０１：０１：０１のアミノ酸１１６～２０９に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９７アミノ酸（例えば、９１、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＱＡ１ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＱＡ１ポリペプチドである。好適なＤＱＡ１ポリペプチドは、その天然アレルバリアントを含め、図１５に示されるＤＱＡ１アミノ酸配列のいずれかのアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。いくつかの場合において、ＤＱＡ１ポリペプチドは、約１８１アミノ酸（例えば、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、または１８３アミノ酸）の長さを有する。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（「ＩＭＧＴ」）／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０１のＤＱＡ１＊０１：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０３、ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿００２１１３のＤＱＡ１＊０１：０２ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０７のＤＱＡ１＊０２：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０９のＤＱＡ１＊０３：０１：α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６１２のＤＱＡ１＊０４：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６１３のＤＱＡ１＊０５：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６２０のＤＱＡ１＊０６：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＱＡ１ポリペプチドである。好適なＤＱＡ１ポリペプチドは、その天然アレルバリアントを含め、図１５に示されるＤＱＡ１アミノ酸配列のいずれかのアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。いくつかの場合において、ＤＱＡ１ポリペプチドは、約１８１アミノ酸（例えば、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、または１８３アミノ酸）の長さを有する。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（「ＩＭＧＴ」）／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０１のＤＱＡ１＊０１：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０３、ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿００２１１３のＤＱＡ１＊０１：０２ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０７のＤＱＡ１＊０２：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６０９のＤＱＡ１＊０３：０１：α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６１２のＤＱＡ１＊０４：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６１３のＤＱＡ１＊０５：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＱＡ１ α鎖ポリペプチドは、図１５中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００６２０のＤＱＡ１＊０６：０１ α鎖アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。
「ＤＱＡ１ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＱＡ１ポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＥＤＩＶＡＤＨ ＶＡＳＣＧＶＮＬＹＱ ＦＹＧＰＳＧＱＹＴＨ ＥＦＤＧＤＥＱＦＹＶ ＤＬＥＲＫＥＴＡＷＲ ＷＰＥＦＳＫＦＧＧＦ ＤＰＱＧＡＬＲＮＭＡ ＶＡＫＨＮＬＮＩＭＩ ＫＲＹＮＳＴＡＡＴＮ ＥＶＰＥＶＴＶＦＳＫ ＳＰＶＴＬＧＱＰＮＴ ＬＩＣＬＶＤＮＩＦＰ ＰＶＶＮＩＴＷＬＳＮ ＧＱＳＶＴＥＧＶＳＥ ＴＳＦＬＳＫＳＤＨＳ ＦＦＫＩＳＹＬＴＦＬ ＰＳＡＤＥＩＹＤＣＫ ＶＥＨＷＧＬＤＱＰＬ ＬＫＨＷ（配列番号１９７）、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＱＡ１ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＥＤＩＶＡＤＨ ＶＡＳＣＧＶＮＬＹＱ ＦＹＧＰＳＧＱＹＴＨ ＥＦＤＧＤＥＱＦＹＶ ＤＬＥＲＫＥＴＡＷＲ ＷＰＥＦＳＫＦＧＧＦ ＤＰＱＧＡＬＲＮＭＡ ＶＡＫＨＮＬＮＩＭＩ ＫＲＹＮＳＴＡＡＴＮ（配列番号１９８）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約８７アミノ酸（例えば、８４、８５、８６、８７、８８、または８９アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＱＡ１α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＥＶＰＥＶＴＶＦＳＫ ＳＰＶＴＬＧＱＰＮＴ ＬＩＣＬＶＤＮＩＦＰ ＰＶＶＮＩＴＷＬＳＮ ＧＱＳＶＴＥＧＶＳＥ ＴＳＦＬＳＫＳＤＨＳ ＦＦＫＩＳＹＬＴＦＬ ＰＳＡＤＥＩＹＤＣＫ ＶＥＨＷＧＬＤＱＰＬ ＬＫＨＷ（配列番号１９９）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９１、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＱＡ２ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＱＡ２ポリペプチドである。ＤＱＡ２ポリペプチドは、図１６に示されるＤＱＡ２アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＱＡ２ポリペプチドは、約１８１アミノ酸（例えば、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、または１８３アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドは、ＤＱＡ２ポリペプチドである。ＤＱＡ２ポリペプチドは、図１６に示されるＤＱＡ２アミノ酸配列のアミノ酸２４～２０４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＱＡ２ポリペプチドは、約１８１アミノ酸（例えば、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、または１８３アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＱＡ２ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＱＡ２ポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＥＤＩＶＡＤＨ ＶＡＳＹＧＶＮＦＹＱ ＳＨＧＰＳＧＱＹＴＨ ＥＦＤＧＤＥＥＦＹＶ ＤＬＥＴＫＥＴＶＷＱ ＬＰＭＦＳＫＦＩＳＦ ＤＰＱＳＡＬＲＮＭＡ ＶＧＫＨＴＬＥＦＭＭ ＲＱＳＮＳＴＡＡＴＮ ＥＶＰＥＶＴＶＦＳＫ ＦＰＶＴＬＧＱＰＮＴ ＬＩＣＬＶＤＮＩＦＰ ＰＶＶＮＩＴＷＬＳＮ ＧＨＳＶＴＥＧＶＳＥ ＴＳＦＬＳＫＳＤＨＳ ＦＦＫＩＳＹＬＴＦＬ ＰＳＡＤＥＩＹＤＣＫ ＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬ ＬＫＨＷ（配列番号２００）、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＱＡ２ α１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＥＤＩＶＡＤＨ ＶＡＳＹＧＶＮＦＹＱ ＳＨＧＰＳＧＱＹＴＨ ＥＦＤＧＤＥＥＦＹＶ ＤＬＥＴＫＥＴＶＷＱ ＬＰＭＦＳＫＦＩＳＦ ＤＰＱＳＡＬＲＮＭＡ ＶＧＫＨＴＬＥＦＭＭ ＲＱＳＮＳＴＡＡＴＮ（配列番号２０１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約８７アミノ酸（例えば、８４、８５、８６、８７、８８、または８９アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＱＡ２ α２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＥＶＰＥＶＴＶＦＳＫ ＦＰＶＴＬＧＱＰＮＴ ＬＩＣＬＶＤＮＩＦＰ ＰＶＶＮＩＴＷＬＳＮ ＧＨＳＶＴＥＧＶＳＥ ＴＳＦＬＳＫＳＤＨＳ ＦＦＫＩＳＹＬＴＦＬ ＰＳＡＤＥＩＹＤＣＫ ＶＥＨＷＧＬＤＥＰＬ ＬＫＨＷ（配列番号２０２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９１、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ｂ）ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖
ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖は、β１ドメイン及びβ２ドメインを含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するβ１及びβ２ドメインは、同じＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドに由来する。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するβ１及びβ２ドメインは、２つの異なるＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドに由来する。上記のとおり、本明細書におけるＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドへの言及は、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１及びβ２の両方のドメインを含み得る。
ＭＨＣクラスＩＩベータ鎖は、β１ドメイン及びβ２ドメインを含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するβ１及びβ２ドメインは、同じＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドに由来する。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するβ１及びβ２ドメインは、２つの異なるＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドに由来する。上記のとおり、本明細書におけるＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドへの言及は、クラスＩＩ ＭＨＣ β鎖のβ１及びβ２の両方のドメインを含み得る。
ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩベータ鎖配列は、シグナルペプチドを欠く。ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩベータ鎖は、約６０アミノ酸～約２１０アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩベータ鎖は、約６０アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１２０アミノ酸、約１２０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約１８０アミノ酸、約１８０アミノ酸～２１０アミノ酸の長さを有し得る。ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ β１ドメインは、約３０アミノ酸～約１０５アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ β１ドメインは、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１０５アミノ酸の長さを有し得る。ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ β２ドメインは、約３０アミノ酸～約１０５アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ β２ドメインは、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７０アミノ酸、約７０アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１０５アミノ酸の長さを有し得る。
ＴＭＰに含めるのに好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、野生型ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み得、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。例えば、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、Ｐ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｑ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＢ１ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである。いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、次のＤＲＢ１アミノ酸配列：ＧＤＴＲＰＲＦＬＥＱＶＫＨＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＨＱＥＥＹＶＲＦＤＳＤＶＧＥＹＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＬＬＥＱＫＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＧＥＳＦＴＶＱＲＲＶＹＰＥＶＴＶＹＰＡＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＮＧＦＹＰＡＳＩＥＶＲＷＦＲＮＧＱＥＥＫＴＧＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＬＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫＭ（配列番号１０３）に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｐ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｑ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む、バリアントＤＲＢ１ポリペプチドである。いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、バリアントＤＲＢ１ポリペプチドの前述のアミノ酸置換のいずれかに対応するアミノ酸置換を含む、バリアントＤＲＢ３ポリペプチド、バリアントＤＲＢ４ポリペプチド、またはバリアントＤＲＢ５ポリペプチドである。例えば、図７Ｂに示されるように、ｉ）ＤＲＢ１のＰ５に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチド（Ｎ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＳＬＡＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＲＬＡＦＡ（配列番号２０３）を欠く）のＰ５であり、ｉｉ）ＤＲＢ１のＦ７に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＦ７であり、ｉｉｉ）ＤＲＢ１のＱ１０に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＬ１０であり、ｉｖ）ＤＲＢ１のＮ１９に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＮ１９であり、ｖ）ＤＲＢ１のＧ２０に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＧ２０であり、ｖｉ）ＤＲＢ１のＨ３３に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＮ３３であり、ｖｉｉ）ＤＲＢ１のＧ１５１に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＧ１５１であり、ｖｉｉｉ）ＤＲＢ１のＤ１５２に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＤ１５２であり、ｉｘ）ＤＲＢ１のＷ１５３に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ３ポリペプチドのＷ１５３である。別の例として、図７Ｃに示されるように、ｉ）ＤＲＢ１のＰ５に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチド（Ｎ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＡＡＬＴＶＴＬ（配列番号２０４）を欠く）のＰ１５であり、ｉｉ）ＤＲＢ１のＦ７に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＦ１７であり、ｉｉｉ）ＤＲＢ１のＱ１０に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＱ２０であり、ｉｖ）ＤＲＢ１のＮ１９に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＮ２９であり、ｖ）ＤＲＢ１のＧ２０に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＧ３０であり、ｖｉ）ＤＲＢ１のＨ３３に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＮ４３であり、ｖｉｉ）ＤＲＢ１のＧ１５１に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＧ１６１であり、ｖｉｉｉ）ＤＲＢ１のＤ１５２に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＤ１６２であり、ｉｘ）ＤＲＢ１のＷ１５３に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ４ポリペプチドのＷ１５３である。別の例として、図７Ｄに示されるように、ｉ）ＤＲＢ１のＰ５に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチド（Ｎ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＹＭＡＫＬＴＶＴＬ（配列番号２０５）を欠く）のＰ１５であり、ｉｉ）ＤＲＢ１のＦ７に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＦ１７であり、ｉｉｉ）ＤＲＢ１のＱ１０に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＱ２０であり、ｉｖ）ＤＲＢ１のＮ１９に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＮ２９であり、ｖ）ＤＲＢ１のＧ２０に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＧ３０であり、ｖｉ）ＤＲＢ１のＨ３３に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＮ４３であり、ｖｉｉ）ＤＲＢ１のＧ１５１に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＧ１６１であり、ｖｉｉｉ）ＤＲＢ１のＤ１５２に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＤ１６２であり、ｉｘ）ＤＲＢ１のＷ１５３に対応するアミノ酸は、成熟ＤＲＢ５ポリペプチドのＷ１６３である。
ＤＲＢ１ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＲＢ１ポリペプチドである。一実施形態において、ＤＲＢ１ポリペプチドは、天然アレルバリアントを含む、図５に示されるいずれかのＤＲＢ１アミノ酸配列のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。図５は、ＤＲＢ１前駆体タンパク質を示し、アミノ酸１～２９はシグナル配列（下線）であり、３０～１２４はβ１領域（太字）を形成し、１２５～２２７はβ２領域（太字及び下線）であり、２２８～２５０は膜貫通領域である。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ１ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ１ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＲＢ１ポリペプチドである。一実施形態において、ＤＲＢ１ポリペプチドは、天然アレルバリアントを含む、図５に示されるいずれかのＤＲＢ１アミノ酸配列のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。図５は、ＤＲＢ１前駆体タンパク質を示し、アミノ酸１～２９はシグナル配列（下線）であり、３０～１２４はβ１領域（太字）を形成し、１２５～２２７はβ２領域（太字及び下線）であり、２２８～２５０は膜貫通領域である。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ１ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ１ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１（ＤＲＢ１＊０１：０１）ベータ鎖アミノ酸配列Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ／ＵｎｉＰｒｏｔ参照（「ｓｐ」）Ｐ０４２２９．２のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ１＊０３：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｐ０１９１２．２のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－４（ＤＲＢ１＊０４：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｐ１３７６０．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－７（ＤＲＢ１＊０７：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｐ１３７６１．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－８（ＤＲＢ１＊０８：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ３０１３４．２のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－９（ＤＲＢ１＊０９：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ９ＴＱＥ０．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１０（ＤＲＢ１＊１０：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ３０１６７．２のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１１（ＤＲＢ１＊１１：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｐ２００３９．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１２（ＤＲＢ１＊１２：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ９５ＩＥ３．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１３（ＤＲＢ１＊１３：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ５Ｙ７Ａ７．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１４（ＤＲＢ１＊１４：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ９ＧＩＹ３．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１５（ＤＲＢ１＊１５：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｐ０１９１１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＴＭＰのＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、図５中のＤＲＢ１－１６（ＤＲＢ１＊１６：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ｓｐ Ｑ２９９７４．１のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＲＢ１ β鎖ポリペプチドは、約１９８アミノ酸（例えば、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、または２０２アミノ酸）の長さを有する。
ＴＭＰに含めるのに好適な「ＤＲＢ１ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含み得る。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＲＢ１ポリペプチドは、図５に提供されるＤＲＢ１＊０４：０１（ＤＲＢ１－４）のアミノ酸３１～２２７またはそのアレルバリアントを含む。
別の好適なＤＲＢ１ポリペプチドは、次のＤＲＢ１＊０４：０１アミノ酸配列：ＧＤＴＲＰＲＦＬＥＱＶＫＨＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＨＱＥＥＹＶＲＦＤＳＤＶＧＥＹＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＬＬＥＱＫＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＧＥＳＦＴＶＱＲＲＶＹＰＥＶＴＶＹＰＡＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＮＧＦＹＰＡＳＩＥＶＲＷＦＲＮＧＱＥＥＫＴＧＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＬＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫＭ（配列番号１０３）の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含み得、これは１つ以上のシステイン置換を有し得る。一実施形態において、システイン置換は、Ｐ５Ｃ置換である。一実施形態において、システイン置換は、Ｇ１５１Ｃ置換である。一実施形態において、システイン置換は、Ｗ１５３Ｃ置換である。
好適なＤＲＢ１β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＤＴＲＰＲＦＬＥＱＶＫＨＥＣＨＦＦＮＧＴＥＲＶＲＦＬＤＲＹＦＹＨＱＥＥＹＶＲＦＤＳＤＶＧＥＹＲＡＶＴＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷＮＳＱＫＤＬＬＥＱＫＲＡＡＶＤＴＹＣＲＨＮＹＧＶＧＥＳＦＴＶＱＲＲＶ（配列番号２０６）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９５アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、９６、９７、または９８アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＲＢ１ β１ドメインは、次のアミノ酸配列：
を含み得、Ｐ５がＣｙｓで置換されている（太字及び斜体で示される）。
好適なＤＲＢ１β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＹＰＥＶＴＶＹＰＡＫＴＱＰＬＱＨＨＮＬＬＶＣＳＶＮＧＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷＦＲＮＧＱＥＥＫＴＧＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹＴＣＱＶＥＨＰＳＬＴＳＰＬＴＶＥＷＲＡＲＳＥＳＡＱＳＫ（配列番号２０８）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約１０３アミノ酸（例えば、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、または１０６アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＲＢ１ β２ドメインは、次のアミノ酸配列：
を含み得、Ｗ１５３がＣｙｓで置換されている（太字及び斜体で示される）。
ＤＲＢ３ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＲＢ３ポリペプチドである。一実施形態において、ＤＲＢ３ポリペプチドは、図６に示される任意のＤＲＢ３アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得、これは、ＤＲＢ３前駆体タンパク質を示し、アミノ酸１～２９はシグナル配列（下線）であり、３０～１２４はβ１領域（太字で示される）を形成し、１２５～２２７はβ２領域を形成し、２２８～２５０は膜貫通領域である。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ３＊０１：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿０７２０４９．１のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＧｅｎＢａｎｋアクセッションＥＡＸ０３６３２．１のＤＲＢ１－３ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＧｅｎＢａｎｋ ＣＡＡ２３７８１．１のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ３＊０２：０１）ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＧｅｎＢａｎｋ ＡＡＮ１５２０５．１のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ３＊０３：０１）ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ３ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ３ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＲＢ３ポリペプチドである。一実施形態において、ＤＲＢ３ポリペプチドは、図６に示される任意のＤＲＢ３アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得、これは、ＤＲＢ３前駆体タンパク質を示し、アミノ酸１～２９はシグナル配列（下線）であり、３０～１２４はβ１領域（太字で示される）を形成し、１２５～２２７はβ２領域を形成し、２２８～２５０は膜貫通領域である。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ３＊０１：０１）ベータ鎖アミノ酸配列ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿０７２０４９．１のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＧｅｎＢａｎｋアクセッションＥＡＸ０３６３２．１のＤＲＢ１－３ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＧｅｎＢａｎｋ ＣＡＡ２３７８１．１のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ３＊０２：０１）ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図６中のＧｅｎＢａｎｋ ＡＡＮ１５２０５．１のＤＲＢ１－３（ＤＲＢ３＊０３：０１）ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ３ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ３ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
ＴＭＰへの組み込みに好適な「ＤＲＢ３ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含み得る。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＲＢ３ポリペプチドは、図６に提供されるＤＲＢ３＊０１：０１のアミノ酸３０～２２７、またはそのアレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＲＢ３ポリペプチドは、次の配列：ＤＴＲＰＲＦＬＥＬＲ ＫＳＥＣＨＦＦＮＧＴ ＥＲＶＲＹＬＤＲＹＦ ＨＮＱＥＥＦＬＲＦＤ ＳＤＶＧＥＹＲＡＶＴ ＥＬＧＲＰＶＡＥＳＷ ＮＳＱＫＤＬＬＥＱＫ ＲＧＲＶＤＮＹＣＲＨ ＮＹＧＶＧＥＳＦＴＶ ＱＲＲＶＨＰＱＶＴＶ ＹＰＡＫＴＱＰＬＱＨ ＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧ ＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷ ＦＲＮＧＱＥＥＫＡＧ ＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧ ＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬ ＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹ ＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴ ＳＡＬＴＶＥＷＲＡＲ ＳＥＳＡＱＳＫ（配列番号２１０）またはそのアレルバリアントの少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ３ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ３ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。したがって、例えば、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、（成熟ＤＲＢ３ポリペプチド（図６に示されるＮ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＳＬＡＡＬＴＶＴＬＭＶＬＳＳＲＬＡＦＡ（配列番号２０３）を欠くもの））のＰ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｌ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｎ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸に非天然Ｃｙｓを含むバリアントＤＲＢ３ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである。
好適なＤＲＢ３ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＤＴＲＰＲＦＬＥＬＲ ＫＳＥＣＨＦＦＮＧＴ ＥＲＶＲＹＬＤＲＹＦ ＨＮＱＥＥＦＬＲＦＤ ＳＤＶＧＥＹＲＡＶＴ ＥＬＧＲＰＶＡＥＳＷ ＮＳＱＫＤＬＬＥＱＫ ＲＧＲＶＤＮＹＣＲＨ ＮＹＧＶＧＥＳＦＴＶ（配列番号２１１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９５アミノ酸（例えば、９３、９４、９５、９６、９７、または９８アミノ酸）の長さを有し得る。好適なＤＲＢ３ β１ドメインは、次のアミノ酸配列：ＤＴＲＰＲＦＬＥＬＲ ＫＳＥＣＨＦＦＮＧＴ ＥＲＶＲＹＬＤＲＹＦ ＨＮＱＥＥＦＬＲＦＤ ＳＤＶＧＥＹＲＡＶＴ ＥＬＧＲＰＶＡＥＳＷ ＮＳＱＫＤＬＬＥＱＫ ＲＧＲＶＤＮＹＣＲＨ ＮＹＧＶＧＥＳＦＴＶ ＱＲＲＶ（配列番号２１１）、または天然アレルバリアントを含み得る。好適なＤＲＢ３ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＨＰＱＶＴＶ ＹＰＡＫＴＱＰＬＱＨ ＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧ ＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷ ＦＲＮＧＱＥＥＫＡＧ ＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧ ＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬ ＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹ ＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴ ＳＡＬＴＶＥＷＲＡＲ ＳＥＳＡＱＳＫ（配列番号２１２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約１０３アミノ酸（例えば、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、または１０５アミノ酸）の長さを有し得る。好適なＤＲＢ３ β２ドメインは、次のアミノ酸配列：ＨＰＱＶＴＶ ＹＰＡＫＴＱＰＬＱＨ ＨＮＬＬＶＣＳＶＳＧ ＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷ ＦＲＮＧＱＥＥＫＡＧ ＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧ ＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬ ＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹ ＴＣＱＶＥＨＰＳＶＴ ＳＡＬＴＶＥＷＲＡＲ ＳＥＳＡＱＳＫ（配列番号２１２）、またはその天然アレルバリアントを含み得る。
ＤＲＢ４ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＲＢ４ポリペプチドである。ＤＲＢ４ポリペプチドは、図７に示されるＤＲＢ４アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＲＢ４ポリペプチドは、約１９８アミノ酸（例えば、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、または２０２アミノ酸）の長さを有する。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ４ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ４ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＲＢ４ポリペプチドである。ＤＲＢ４ポリペプチドは、図７に示されるＤＲＢ４アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＲＢ４ポリペプチドは、約１９８アミノ酸（例えば、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、または２０２アミノ酸）の長さを有する。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ４ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ４ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
ＴＭＰに含めるのに好適な「ＤＲＢ４ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含み得る。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＲＢ４ポリペプチドは、図７に提供されるＤＲＢ４＊０１：０１（配列番号４１）もしくはＤＲＢ４＊０１：０３（配列番号４２）のアミノ酸３０～２２７、またはそのアレルバリアントを含む。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ４ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ４ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。したがって、例えば、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＤＲＢ４ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、例えば、バリアントＤＲＢ４ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、成熟ＤＲＢ４ポリペプチド（図７に示されるＮ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＣＭＡＡＬＴＶＴＬ（配列番号２０４）を欠くもの）のＰ１５Ｃ、Ｆ１７Ｃ、Ｑ２０Ｃ、Ｎ２９Ｃ、Ｇ３０Ｃ、Ｎ４３Ｃ、Ｇ１６１Ｃ、Ｄ１６２Ｃ、及びＷ１６３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
好適なＤＲＢ４ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：Ｔ ＶＬＳＳＰＬＡＬＡＧ ＤＴＱＰＲＦＬＥＱＡ ＫＣＥＣＨＦＬＮＧＴ ＥＲＶＷＮＬＩＲＹＩ ＹＮＱＥＥＹＡＲＹＮ ＳＤＬＧＥＹＱＡＶＴ ＥＬＧＲＰＤＡＥＹＷ ＮＳＱＫＤＬＬＥＲＲ ＲＡＥＶＤＴＹＣＲＹ ＮＹＧＶＶＥＳＦＴＶ（配列番号２１３）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９５アミノ酸（例えば、９３、９４、９５、９６、９７、または９８アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＲＢ４ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＱＰＫＶＴＶ ＹＰＳＫＴＱＰＬＱＨ ＨＮＬＬＶＣＳＶＮＧ ＦＹＰＧＳＩＥＶＲＷ ＦＲＮＧＱＥＥＫＡＧ ＶＶＳＴＧＬＩＱＮＧ ＤＷＴＦＱＴＬＶＭＬ ＥＴＶＰＲＳＧＥＶＹ ＴＣＱＶＥＨＰＳＭＭ ＳＰＬＴＶＱＷＳＡＲ ＳＥＳＡＱＳＫ（配列番号２１４）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約１０３アミノ酸（例えば、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、または１０５アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＲＢ５ポリペプチド
ＴＭＰは、ＤＲＢ５アレルのＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含み得る。いくつかの場合において、ＤＲＢ５ポリペプチドは、約１９８アミノ酸（例えば、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、または２０２アミノ酸）の長さを有する。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ５ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ５ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
ＴＭＰは、ＤＲＢ５アレルのＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含み得る。いくつかの場合において、ＤＲＢ５ポリペプチドは、約１９８アミノ酸（例えば、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、または２０２アミノ酸）の長さを有する。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ５ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ５ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。
ＤＲＢ５＊０１：０１
ＴＭＰは、図８に提供されるＤＲＢ５＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＤＲＢ５＊０１：０１ポリペプチドを含み得る。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ５ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ５ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。したがって、例えば、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＤＲＢ５ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、例えば、バリアントＤＲＢ５ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、（図８に示される成熟ＤＲＢ５ポリペプチド（Ｎ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＹＭＡＫＬＴＶＴＬ（配列番号２０５）を欠くもの）またはその天然アレルバリアントのＰ１５Ｃ、Ｆ１７Ｃ、Ｑ２０Ｃ、Ｎ２９Ｃ、Ｇ３０Ｃ、Ｎ４３Ｃ、Ｇ１６１Ｃ、Ｄ１６２Ｃ、及びＷ１６３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
ＴＭＰは、図８に提供されるＤＲＢ５＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸３０からアミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＤＲＢ５＊０１：０１ポリペプチドを含み得る。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なＤＲＢ５ポリペプチドは、野生型ＤＲＢ５ポリペプチドに対してアミノ酸置換を含み、アミノ酸置換は、アミノ酸（Ｃｙｓ以外）をＣｙｓで置き換えるものである。したがって、例えば、いくつかの場合において、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＤＲＢ５ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、例えば、バリアントＤＲＢ５ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドは、（図８に示される成熟ＤＲＢ５ポリペプチド（Ｎ末端シグナルペプチドＭＶＣＬＫＬＰＧＧＳＹＭＡＫＬＴＶＴＬ（配列番号２０５）を欠くもの）またはその天然アレルバリアントのＰ１５Ｃ、Ｆ１７Ｃ、Ｑ２０Ｃ、Ｎ２９Ｃ、Ｇ３０Ｃ、Ｎ４３Ｃ、Ｇ１６１Ｃ、Ｄ１６２Ｃ、及びＷ１６３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
ＴＭＰは、図８に提供されるＤＲＢ５＊０１：０１アミノ酸配列のアミノ酸３０～１２４に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＤＲＢ５＊０１：０１ β１ドメインポリペプチドを含み得る。ＴＭＰは、図８に示されるＤＲＢ５＊０１：０１ β２ドメインアミノ酸配列またはその天然アレルバリアントのアミノ酸３０～アミノ酸２２７までの配列の少なくとも１７０、少なくとも１８０、または少なくとも１９０の連続するアミノ酸に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＤＲＢ５＊０１：０１ポリペプチドを含む。
ＤＭＢポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＭＢポリペプチドである。ＤＭＢポリペプチドは、図１０に示されるＤＭＢアミノ酸配列のアミノ酸１９～２０７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＭＢポリペプチドは、約１８９アミノ酸（例えば、１８７、１８８、１８９、１９０、または１９１アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＭＢポリペプチドである。ＤＭＢポリペプチドは、図１０に示されるＤＭＢアミノ酸配列のアミノ酸１９～２０７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＭＢポリペプチドは、約１８９アミノ酸（例えば、１８７、１８８、１８９、１９０、または１９１アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＭＢポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＭＢポリペプチドは、図１０に提供されるＤＭＢ＊０１：０３（配列番号４５）のアミノ酸１９～２０７、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＭＢ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＧＧ ＦＶＡＨＶＥＳＴＣＬ ＬＤＤＡＧＴＰＫＤＦ ＴＹＣＩＳＦＮＫＤＬ ＬＴＣＷＤＰＥＥＮＫ ＭＡＰＣＥＦＧＶＬＮ ＳＬＡＮＶＬＳＱＨＬ ＮＱＫＤＴＬＭＱＲＬ ＲＮＧＬＱＮＣＡＴＨ ＴＱＰＦＷＧＳＬＴＮ ＲＴ（配列番号２１５）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＭＢ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＲＰＰＳＶＱＶＡ ＫＴＴＰＦＮＴＲＥＰ ＶＭＬＡＣＹＶＷＧＦ ＹＰＡＥＶＴＩＴＷＲ ＫＮＧＫＬＶＭＰＨＳ ＳＡＨＫＴＡＱＰＮＧ ＤＷＴＹＱＴＬＳＨＬ ＡＬＴＰＳＹＧＤＴＹ ＴＣＶＶＥＨＴＧＡＰ ＥＰＩＬＲＤＷ（配列番号２１６）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９５アミノ酸（例えば、９３、９４、９５、９６、９７、または９８アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＯＢポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＯＢポリペプチドである。ＤＯＢポリペプチドは、図１２に示されるＤＯＢアミノ酸配列のアミノ酸２７～２１４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＯＢポリペプチドは、約１８８アミノ酸（例えば、１８６、１８７、１８８、１８９、または１９０アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＯＢポリペプチドである。ＤＯＢポリペプチドは、図１２に示されるＤＯＢアミノ酸配列のアミノ酸２７～２１４と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＯＢポリペプチドは、約１８８アミノ酸（例えば、１８６、１８７、１８８、１８９、または１９０アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＯＢポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＯＢポリペプチドは、図１２に提供されるＤＯＢ＊０１：０１（配列番号４７）のアミノ酸２７～２１４、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＯＢ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＴＤＳＰ ＥＤＦＶＩＱＡＫＡＤ ＣＹＦＴＮＧＴＥＫＶ ＱＦＶＶＲＦＩＦＮＬ ＥＥＹＶＲＦＤＳＤＶ ＧＭＦＶＡＬＴＫＬＧ ＱＰＤＡＥＱＷＮＳＲ ＬＤＬＬＥＲＳＲＱＡ ＶＤＧＶＣＲＨＮＹＲ ＬＧＡＰＦＴＶＧＲＫ（配列番号２１７）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＯＢ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＶＱＰＥＶＴＶＹＰＥ ＲＴＰＬＬＨＱＨＮＬ ＬＨＣＳＶＴＧＦＹＰ ＧＤＩＫＩＫＷＦＬＮ ＧＱＥＥＲＡＧＶＭＳ ＴＧＰＩＲＮＧＤＷＴ ＦＱＴＶＶＭＬＥＭＴ ＰＥＬＧＨＶＹＴＣＬ ＶＤＨＳＳＬＬＳＰＶ ＳＶＥＷ（配列番号２１８）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＰＢ１ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＰＢ１ポリペプチドである。ＤＰＢ１ポリペプチドは、図１４に示されるＤＰＢ１アミノ酸配列のいずれかのアミノ酸３０～２１５と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＰＢ１ポリペプチドは、約１８６アミノ酸（例えば、１８４、１８５、１８６、１８７、または１８８アミノ酸）の長さを有する。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５１４のＤＰＢ１＊０１：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５１７のＤＰＢ１＊０２：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２０のＤＰＢ１＊０３：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２１、ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿００２１１２．３のＤＰＢ１＊０４：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２４のＤＰＢ１＊０６：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２８のＤＰＢ１＊１１：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５９０のＤＰＢ１＊７１：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ０２０４６のＤＰＢ１＊１０４：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ１０３６４のＤＰＢ１＊１４１：０１ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＰＢ１ポリペプチドである。ＤＰＢ１ポリペプチドは、図１４に示されるＤＰＢ１アミノ酸配列のいずれかのアミノ酸３０～２１５と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＰＢ１ポリペプチドは、約１８６アミノ酸（例えば、１８４、１８５、１８６、１８７、または１８８アミノ酸）の長さを有する。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５１４のＤＰＢ１＊０１：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５１７のＤＰＢ１＊０２：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２０のＤＰＢ１＊０３：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２１、ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿００２１１２．３のＤＰＢ１＊０４：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２４のＤＰＢ１＊０６：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５２８のＤＰＢ１＊１１：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ００５９０のＤＰＢ１＊７１：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ０２０４６のＤＰＢ１＊１０４：０１ β鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。一実施形態において、ＤＲＢ３ β鎖ポリペプチドは、図１４中のＩＭＧＴ／ＨＬＡ Ａｃｃ番号：ＨＬＡ１０３６４のＤＰＢ１＊１４１：０１ベータ鎖アミノ酸配列のアミノ酸３０～２２７と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。
「ＤＰＢ１ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＰＢ１ポリペプチドは、次のアミノ酸配列：Ｒ ＡＴＰＥＮＹＬＦＱＧ ＲＱＥＣＹＡＦＮＧＴ ＱＲＦＬＥＲＹＩＹＮ ＲＥＥＦＡＲＦＤＳＤ ＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬ ＧＲＰＡＡＥＹＷＮＳ ＱＫＤＩＬＥＥＫＲＡ ＶＰＤＲＭＣＲＨＮＹ ＥＬＧＧＰＭＴＬＱＲ ＲＶＱＰＲＶＮＶＳＰ ＳＫＫＧＰＬＱＨＨＮ ＬＬＶＣＨＶＴＤＦＹ ＰＧＳＩＱＶＲＷＦＬ ＮＧＱＥＥＴＡＧＶＶ ＳＴＮＬＩＲＮＧＤＷ ＴＦＱＩＬＶＭＬＥＭ ＴＰＱＱＧＤＶＹＴＣ ＱＶＥＨＴＳＬＤＳＰ ＶＴＶＥＷ（配列番号２１９）、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＰＢ１ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：Ｒ ＡＴＰＥＮＹＬＦＱＧ ＲＱＥＣＹＡＦＮＧＴ ＱＲＦＬＥＲＹＩＹＮ ＲＥＥＦＡＲＦＤＳＤ ＶＧＥＦＲＡＶＴＥＬ ＧＲＰＡＡＥＹＷＮＳ ＱＫＤＩＬＥＥＫＲＡ ＶＰＤＲＭＣＲＨＮＹ ＥＬＧＧＰＭＴＬＱＲ Ｒ（配列番号２２０）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９２アミノ酸（例えば、９０、９１、９２、９３、または９４アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＰＢ１ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＶＱＰＲＶＮＶＳＰ ＳＫＫＧＰＬＱＨＨＮ ＬＬＶＣＨＶＴＤＦＹ ＰＧＳＩＱＶＲＷＦＬ ＮＧＱＥＥＴＡＧＶＶ ＳＴＮＬＩＲＮＧＤＷ ＴＦＱＩＬＶＭＬＥＭ ＴＰＱＱＧＤＶＹＴＣ ＱＶＥＨＴＳＬＤＳＰ ＶＴＶＥＷ（配列番号２２１）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＱＢ１ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＱＢ１ポリペプチドである。ＤＱＢ１ポリペプチドは、図１７に示されるＤＱＢ１アミノ酸配列のアミノ酸３３～２２０と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＱＢ１ポリペプチドは、約１８８アミノ酸（例えば、１８６、１８７、１８８、１９０、１９１、または１９２アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＱＢ１ポリペプチドである。ＤＱＢ１ポリペプチドは、図１７に示されるＤＱＢ１アミノ酸配列のアミノ酸３３～２２０と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＱＢ１ポリペプチドは、約１８８アミノ酸（例えば、１８６、１８７、１８８、１９０、１９１、または１９２アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＱＢ１ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＱＢ１ポリペプチドは、図１７に提供されるＤＱＢ１＊０６：０２のアミノ酸３３～２２０（配列番号８５）、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＱＢ１ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＲＤＳＰＥＤＦＶ ＦＱＦＫＧＭＣＹＦＴ ＮＧＴＥＲＶＲＬＶＴ ＲＹＩＹＮＲＥＥＹＡ ＲＦＤＳＤＶＧＶＹＲ ＡＶＴＰＱＧＲＰＤＡ ＥＹＷＮＳＱＫＥＶＬ ＥＧＴＲＡＥＬＤＴＶ ＣＲＨＮＹＥＶＡＦＲ ＧＩＬＱＲＲ（配列番号２２２）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、または９６アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＱＢ１ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＶＥＰＴ ＶＴＩＳＰＳＲＴＥＡ ＬＮＨＨＮＬＬＶＣＳ ＶＴＤＦＹＰＧＱＩＫ ＶＲＷＦＲＮＤＱＥＥ ＴＡＧＶＶＳＴＰＬＩ ＲＮＧＤＷＴＦＱＩＬ ＶＭＬＥＭＴＰＱＲＧ ＤＶＹＴＣＨＶＥＨＰ ＳＬＱＳＰＩＴＶＥＷ（配列番号２２３）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、または９６アミノ酸）の長さを有し得る。
ＤＱＢ２ポリペプチド
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＱＢ２ポリペプチドである。ＤＱＢ２ポリペプチドは、図１８Ａまたは図１８Ｂに示されるＤＱＢ２アミノ酸配列のアミノ酸３３～２１５と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＱＢ２ポリペプチドは、約１８２アミノ酸（例えば、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、または１８２アミノ酸）の長さを有する。
いくつかの場合において、好適なＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドは、ＤＱＢ２ポリペプチドである。ＤＱＢ２ポリペプチドは、図１８Ａまたは図１８Ｂに示されるＤＱＢ２アミノ酸配列のアミノ酸３３～２１５と、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有し得る。いくつかの場合において、ＤＱＢ２ポリペプチドは、約１８２アミノ酸（例えば、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、または１８２アミノ酸）の長さを有する。
「ＤＱＢ２ポリペプチド」は、アレルバリアント、例えば、天然アレルバリアントを含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＤＱＢ２ポリペプチドは、次のアミノ酸配列：ＤＦＬＶＱＦＫ ＧＭＣＹＦＴＮＧＴＥ ＲＶＲＧＶＡＲＹＩＹ ＮＲＥＥＹＧＲＦＤＳ ＤＶＧＥＦＱＡＶＴＥ ＬＧＲＳＩＥＤＷＮＮ ＹＫＤＦＬＥＱＥＲＡ ＡＶＤＫＶＣＲＨＮＹ ＥＡＥＬＲＴＴＬＱＲ ＱＶＥＰＴＶＴＩＳＰ ＳＲＴＥＡＬＮＨＨＮ ＬＬＶＣＳＶＴＤＦＹ ＰＡＱＩＫＶＲＷＦＲ ＮＤＱＥＥＴＡＧＶＶ ＳＴＳＬＩＲＮＧＤＷ ＴＦＱＩＬＶＭＬＥＩ ＴＰＱＲＧＤＩＹＴＣ ＱＶＥＨＰＳＬＱＳＰ ＩＴＶＥＷ（配列番号２２４）、またはそのアレルバリアントを含む。
好適なＤＱＢ２ β１ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＤＦＬＶＱＦＫ ＧＭＣＹＦＴＮＧＴＥ ＲＶＲＧＶＡＲＹＩＹ ＮＲＥＥＹＧＲＦＤＳ ＤＶＧＥＦＱＡＶＴＥ ＬＧＲＳＩＥＤＷＮＮ ＹＫＤＦＬＥＱＥＲＡ ＡＶＤＫＶＣＲＨＮＹ ＥＡＥＬＲＴＴＬＱＲ ＱＶＥＰＴＶ（配列番号２２５）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２ ９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
好適なＤＱＢ２ β２ドメインは、その天然アレルバリアントを含め、次のアミノ酸配列：ＴＩＳＰ ＳＲＴＥＡＬＮＨＨＮ ＬＬＶＣＳＶＴＤＦＹ ＰＡＱＩＫＶＲＷＦＲ ＮＤＱＥＥＴＡＧＶＶ ＳＴＳＬＩＲＮＧＤＷ ＴＦＱＩＬＶＭＬＥＩ ＴＰＱＲＧＤＩＹＴＣ ＱＶＥＨＰＳＬＱＳＰ ＩＴＶＥＷ（配列番号２２６）に対して、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、約９４アミノ酸（例えば、９２、９３、９４、９５、９６、または９７アミノ酸）の長さを有し得る。
疾患リスクに関連したＭＨＣクラスＩＩのアレル及びハプロタイプ
ＭＨＣクラスＩＩのある特定のアレル及びハプロタイプは、疾患に関連しており、例えば、特定の疾患を発症するリスクを高めている。例えば、Ｅｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５７：１０８４；Ｇｏｕｇｈ ａｎｄ Ｓｉｍｍｏｎｄｓ（２００７）Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８：４５３；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｂａｓｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｓａｕｎｄｅｒｓ，８ｔｈ ｅｄ．；Ｍａｒｇａｒｉｔｔｅ－Ｊｅａｎｎｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ６３：５６２；及びＫｕｒｋｏ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｌｉｎ．Ｒｅｖ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：１７０を参照されたい。
ＭＨＣクラスＩＩのある特定のアレル及びハプロタイプは、疾患に関連しており、例えば、特定の疾患を発症するリスクを高めている。例えば、Ｅｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ５７：１０８４；Ｇｏｕｇｈ ａｎｄ Ｓｉｍｍｏｎｄｓ（２００７）Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８：４５３；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｂａｓｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｓａｕｎｄｅｒｓ，８ｔｈ ｅｄ．；Ｍａｒｇａｒｉｔｔｅ－Ｊｅａｎｎｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ６３：５６２；及びＫｕｒｋｏ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｌｉｎ．Ｒｅｖ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：１７０を参照されたい。
そのようなＨＬＡハプロタイプ及び／またはアレルを発現する個体が所与の自己免疫疾患を発症するリスクの高さと関連しているＨＬＡハプロタイプ及びアレルは、図２６に提供される表に示される。本開示のＴＭＰは、図２６に提供される表に記載されるＨＬＡハプロタイプ及び／またはアレルのうちのいずれかを含み得る。図２６に提供される表はまた、特定の自己免疫疾患に関連する自己抗原の例も提供する。ＴＭＰは、表に記載される自己抗原のうちのいずれかのエピトープペプチド（例えば、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のエピトープペプチド）を含み得る。
以下は、図３３に提供される表の注記である：１）ＡＨ８．１（ＨＬＡ Ａ１－Ｂ８－ＤＲ３－ＤＱ２ハプロタイプ）；２）ＤＱ３アレルは、ＤＱＢ１＊０３アレル、例えばＤＱＢ１＊０３：０１～ＤＱＢ１＊０３：０５タンパク質を含む；３）ＤＱ５アレルは、ＤＱＢ１＊０５アレル、例えばＤＱＢ１＊０５：０１～ＤＱＢ１＊０５：０４を含み、ＤＱＡ１＊０１：０１に関連し得る；４）ＤＲ２アレルは、ＤＲＢｌ＊１５：０１～１５：０４及びＤＲＢｌ＊１６：０１～１６：０６を含む；５）ＤＲ３ハプロタイプは、ＤＲＢ１＊０３：０１、ＤＲＢ１＊０３：０２、ＤＲＢ１＊０３：０３、及びＤＲＢ１＊０３：０４を含む；６）ＤＲ４ハプロタイプは、ＤＲＢ１＊０４：０１～ＤＲＢ１＊０４：１３を含む；ＡＨ＝先祖ハプロタイプ；７）Ｓｉｍｍｏｎｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．７６：１５７－１６３，（２００５）（表１参照）、１．５超のオッズ比を有するＨＬＡには、以下のＤＲＢ１、ＤＡＢ１、及びＤＱＡ１アレルが含まれる：ＤＲＢ１＊－０３：０１～０５、－１０：０１、－０８：０１～１１、－１６：０１～６、－１１：０１～２１、－０１：０１～０４、－０４：０１～２２、及び－１５：０１～０５；ＤＱＢ１＊－０２、－０４、－０３：０１、－０３：０４、－０５、－０６：０１～０９、及び－０３：０２；ならびにＨＬＡ－ＤＱＡ１＊－０５：０１～０２、－０６：０１、－０４：０１、－０１：０１、－０１：０４、－０１：０２、－０１：０３、－０３：１１、及び－０３：１２；８）Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｄ Ｒｅｐ．；１７（５）：６５３３－６５４１（２０１８）は以下を含む自己抗原からのエピトープについて注記している：ＳＭＤ１（ＮＣＢＩアクセッション：ＣＡＥ１１８９７．１）；ＳＭＤ２（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＣ１３７７６．１）；ＳＭＤ３（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＡ５７０３４．１）；増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＰ＿８７２５９０．１）；酸性リボソームリンタンパク質（Ｐ１）（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＡ３６４７１．１）；酸性リボソームリンタンパク質（Ｐ２）（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＡ３６４７２．１）；ｓｎＲＮＰ－Ｂ／Ｂ’（ＮＣＢＩアクセッション：Ｐ１４６７８．２）；Ｕ１－ｓｎＲＮＰ－Ｃ（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＰ＿００３０８４．１）；Ｕ１－ｓｎＲＮＰ－Ａ（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＰ＿００４５８７．１）；ヌクレオリン（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＡ５９９５４．１）；酸性リボソームリンタンパク質（Ｐ０）（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＡ３６４７０．１）；ＤＮＡトポイソメラーゼ１（切り詰め型）（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＰ＿００３２７７．１）；ＤＮＡトポイソメラーゼ１（完全長）（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＰ＿００３２７７．１）；ならびにＵ１－ＳｎＲＮＰ ６８／７０ＫＤａ（ＮＣＢＩアクセッション：Ｐ０８６２１．２）。
骨格ポリペプチド
本開示のＴＭＰは、ヘテロ二量体ＴＭＰであれ一本鎖ＴＭＰであれ、免疫グロブリンまたは非免疫グロブリン骨格を含み得る。本開示のＴＭＰポリペプチドは、ヘテロ二量体ＴＭＰであれ一本鎖ＴＭＰであれ、Ｆｃポリペプチドを含み得るか、別の好適な骨格ポリペプチドを含み得る。
本開示のＴＭＰは、ヘテロ二量体ＴＭＰであれ一本鎖ＴＭＰであれ、免疫グロブリンまたは非免疫グロブリン骨格を含み得る。本開示のＴＭＰポリペプチドは、ヘテロ二量体ＴＭＰであれ一本鎖ＴＭＰであれ、Ｆｃポリペプチドを含み得るか、別の好適な骨格ポリペプチドを含み得る。
好適な骨格ポリペプチドには、抗体ベースの骨格ポリペプチド及び非抗体ベースの骨格が含まれる。非抗体ベースの骨格には、例えば、アルブミン、ＸＴＥＮ（延長組み換え）ポリペプチド、トランスフェリン、Ｆｃ受容体ポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（例えば、Ｈａｓｓｏｕｎｅｈ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２：２１５参照；例えば、（Ｖａｌ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ－Ｘ－Ｇｌｙ；配列番号２２７）（配列中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）のペンタペプチド反復単位を含むポリペプチド）、アルブミン結合ポリペプチド、シルク様ポリペプチド（例えば、Ｖａｌｌｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｈｉｌｏｓ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．３５７：１６５参照）、シルクエラスチン様ポリペプチド（ＳＥＬＰ；例えば、Ｍｅｇｅｅｄ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．５４：１０７５参照）などが含まれる。好適なＸＴＥＮポリペプチドには、例えば、ＷＯ２００９／０２３２７０、ＷＯ２０１０／０９１１２２、ＷＯ２００７／１０３５１５、ＵＳ２０１０／０１８９６８２、及びＵＳ２００９／００９２５８２に開示されているものが含まれる。また、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２７：１１８６）も参照されたい。好適なアルブミンポリペプチドには、例えば、ヒト血清アルブミンが含まれる。
好適な骨格ポリペプチドは、いくつかの場合において、半減期延長ポリペプチドである。したがって、いくつかの場合において、好適な骨格ポリペプチドは、骨格ポリペプチドを欠く対照ポリペプチドと比較して、ポリペプチド（例えば、ＴＭＰ）のｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を増大させる。例えば、いくつかの場合において、骨格ポリペプチドは、骨格ポリペプチドを欠く対照ポリペプチドと比較して、ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍を超えて増大させる。一例として、いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチドを欠く対照ポリペプチドと比較して、ポリペプチドのｉｎ ｖｉｖｏ半減期（例えば、血清半減期）を、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、または１００倍を超えて増大させる。
Ｆｃポリペプチド
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む。Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、本明細書中、「Ｆｃポリペプチド」とも称される。ＴＭＰのＩｇ Ｆｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃなど、または野生型Ｉｇ Ｆｃポリペプチドのバリアントであり得る。バリアントは、天然バリアント、非天然バリアント、及びこれらの組み合わせを含む。例示的なＩｇ Ｆｃポリペプチドについては後述されるが、そのいずれも、所望により、相互特異的結合配列を更に含み得る。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含む。Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、本明細書中、「Ｆｃポリペプチド」とも称される。ＴＭＰのＩｇ Ｆｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃなど、または野生型Ｉｇ Ｆｃポリペプチドのバリアントであり得る。バリアントは、天然バリアント、非天然バリアント、及びこれらの組み合わせを含む。例示的なＩｇ Ｆｃポリペプチドについては後述されるが、そのいずれも、所望により、相互特異的結合配列を更に含み得る。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ａ～２１Ｍのいずれか１つに示されるＦｃアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドのバリアントである。例えば、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ａに示されるヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｂに示されるＦｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置１４にＡｌａ、位置１５にＡｌａを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｎ７７置換を有し得、すなわち、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置７７にＡｓｎ以外のアミノ酸を有し得、いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置７７にＡｌａを有する。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ａに示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｂに示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド、またはＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドのバリアントであり、バリアントは、天然バリアント、非天然バリアント、及びこれらの組み合わせを含む。例えば、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｃに示されるヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置１３６にＧｌｕ、位置１３８にＭｅｔを含む。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｄに示されるヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置１４及び１５にＡｌａを有し、Ｆｃポリペプチドは、位置１３６にＧｌｕ、位置１３８にＭｅｔを含む。上の実施形態のいずれかにおいて、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、Ｎ７７置換を有し得、すなわち、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置７７にＡｓｎ以外のアミノ酸を有し得、いくつかの場合において、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、位置７７にＡｌａを有する。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｃに示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｄに示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、図２１Ｅに示されるアミノ酸配列（Ｌ２３４Ｆ置換、Ｌ２３５Ｅ置換、及びＰ３３１Ｓ置換を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ；Ｌ２３４は、図２１Ｅに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１４に対応し、Ｌ２３５は、図２１Ｅに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１５に対応し、Ｐ３３１は、図２１Ｅに示されるアミノ酸配列のアミノ酸１１１に対応する）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、Ｎ２７９Ａ（図２１Ｆに示されるアミノ酸配列のＮ７７Ａ）置換を含む、図２１Ｆに示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｇに示されるヒトＩｇＧ２ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｇに示されるヒトＩｇＧ２ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸９９～３２５（例えば、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、約２２７アミノ酸の長さを有する）に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｈに示されるヒトＩｇＧ３ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｈに示されるヒトＩｇＧ３ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１９～２４６（例えば、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、約２２８アミノ酸の長さを有する）に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｊに示されるヒトＩｇＭ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｊに示されるヒトＩｇＭ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１～２７６に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｋに示されるヒトＩｇＡ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、例えば、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｋに示されるヒトＩｇＡ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１～２３４に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｍに示されるヒトＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチドに対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの場合において、Ｆｃポリペプチドは、図２１Ｍに示されるヒトＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸１００～３２７（例えば、Ｉｇ Ｆｃポリペプチドは、約２２８アミノ酸の長さを有する）に対して、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの場合において、ＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチドは、次のアミノ酸配列を含む：ＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２２８）。
いくつかの場合において、ＴＭＰに採用されるＩｇ Ｆｃは、Ｉｇ Ｆｃが細胞溶解を実質的に誘導しないように、野生型配列にアミノ酸の１つ以上の置換を含む。例えば、いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＦｃポリペプチドは、Ｌ２３４（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４）のロイシン以外のアミノ酸による置換、またはＬ２３５（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１５）のロイシン以外のアミノ酸による置換を除き、図２１Ａに示されるアミノ酸配列（ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ）を含む。例としては、Ｌ２３４Ａ（Ｌ１４Ａ）置換及びＬ２３５Ａ（Ｌ１５Ａ）置換が挙げられる。
ＴＧＦ－βポリペプチド
上述のように、本開示のＴＭＰは、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合するポリペプチド（「マスキングポリペプチド」）によって可逆的にマスキングされた少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチドを含み、これらは、一緒になってマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを形成する。マスキングポリペプチドは、例えば、ＴＭＰ中に存在するＴＧＦ－βポリペプチドを可逆的にマスキングするように機能するＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗体であり得、ＴＧＦ－βポリペプチドは、それ以外は、細胞ＴＧＦ受容体のアゴニストとして作用することが可能である。マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤは、活性型ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－βシグナル伝達経路アゴニスト）を提供する。ＴＧＦ－βポリペプチドとマスキングポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β受容体断片）は互いに相互作用して可逆的にＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングし、それにより、ＴＧＦ－βポリペプチドがその細胞受容体と相互作用することを可能にする。加えて、マスキング配列は、非シグナル伝達ＴβＲＩＩＩなどのＴＧＦ－βをスカベンジすることができる細胞受容体と競合し、それにより、ＴＧＦ－β ＭＯＤ（及びしたがって、ＴＭＰ）は、活性型ＴＧＦ－βアゴニストを標的細胞に効率的に送達することが可能となる。本明細書で考察されるＴＭＰコンストラクトは、可逆的にマスキングされたＴＧＦ－βのエピトープを標的Ｔ細胞に特異的に提示することを可能にするが、１つ以上の追加のＭＯＤを提示する部位も提供する。このように、１つ以上の追加のＭＯＤを含めることができるＴＭＰコンストラクトの能力により、ＴＧＦ－βと追加のＭＯＤ（複数可）を組み合わせて提示し、実質的にエピトープ特異的／選択的な様式で標的Ｔ細胞の応答を誘導し、標的Ｔ細胞の調節をもたらすことが可能となる。それにより、ＴＭＰは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤをエピトープ選択的（例えば、依存的／特異的）な様式で送達することができ、（ｉ）エピトープに選択的なＣＤ４＋細胞などの標的Ｔ細胞と活性型免疫シナプスを形成し、（ｉｉ）エピトープに対する標的Ｔ細胞の応答を調節（例えば、コントロール／制御）することが可能となる。Ｔ細胞のＴＣＲに結合した場合、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含有するＴＭＰのＴ細胞に対する作用は、任意の追加のＭＯＤがＴＭＰの一部として存在するかどうかに依存し、存在するのであれば、どの追加のＭＯＤ（複数可）が存在するかに依存する。
上述のように、本開示のＴＭＰは、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合するポリペプチド（「マスキングポリペプチド」）によって可逆的にマスキングされた少なくとも１つのＴＧＦ－βポリペプチドを含み、これらは、一緒になってマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを形成する。マスキングポリペプチドは、例えば、ＴＭＰ中に存在するＴＧＦ－βポリペプチドを可逆的にマスキングするように機能するＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗体であり得、ＴＧＦ－βポリペプチドは、それ以外は、細胞ＴＧＦ受容体のアゴニストとして作用することが可能である。マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤは、活性型ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－βシグナル伝達経路アゴニスト）を提供する。ＴＧＦ－βポリペプチドとマスキングポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β受容体断片）は互いに相互作用して可逆的にＴＧＦ－βポリペプチドをマスキングし、それにより、ＴＧＦ－βポリペプチドがその細胞受容体と相互作用することを可能にする。加えて、マスキング配列は、非シグナル伝達ＴβＲＩＩＩなどのＴＧＦ－βをスカベンジすることができる細胞受容体と競合し、それにより、ＴＧＦ－β ＭＯＤ（及びしたがって、ＴＭＰ）は、活性型ＴＧＦ－βアゴニストを標的細胞に効率的に送達することが可能となる。本明細書で考察されるＴＭＰコンストラクトは、可逆的にマスキングされたＴＧＦ－βのエピトープを標的Ｔ細胞に特異的に提示することを可能にするが、１つ以上の追加のＭＯＤを提示する部位も提供する。このように、１つ以上の追加のＭＯＤを含めることができるＴＭＰコンストラクトの能力により、ＴＧＦ－βと追加のＭＯＤ（複数可）を組み合わせて提示し、実質的にエピトープ特異的／選択的な様式で標的Ｔ細胞の応答を誘導し、標的Ｔ細胞の調節をもたらすことが可能となる。それにより、ＴＭＰは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤをエピトープ選択的（例えば、依存的／特異的）な様式で送達することができ、（ｉ）エピトープに選択的なＣＤ４＋細胞などの標的Ｔ細胞と活性型免疫シナプスを形成し、（ｉｉ）エピトープに対する標的Ｔ細胞の応答を調節（例えば、コントロール／制御）することが可能となる。Ｔ細胞のＴＣＲに結合した場合、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含有するＴＭＰのＴ細胞に対する作用は、任意の追加のＭＯＤがＴＭＰの一部として存在するかどうかに依存し、存在するのであれば、どの追加のＭＯＤ（複数可）が存在するかに依存する。
更に、本開示のＴＭＰは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤと、野生型またはバリアントＩＬ－２、ＰＤ－Ｌ１及び／または４－１ＢＢＬ ＭＯＤ（上述されるもの）などの１つ以上の追加のＭＯＤの両方を含み得るが、所望により、本開示のＴＭＰは、１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤのみを含んでもよい。すなわち、野生型またはバリアントＩＬ－２、ＰＤ－Ｌ１及び／または４－１ＢＢＬ ＭＯＤなどの１つ以上の追加のＭＯＤは、本開示のＴＭＰに含まれる必要はない。マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含有する本開示のＴＭＰは、ＴＧＦ－β駆動型Ｔ細胞応答をもたらす手段として機能することができる。例えば、ＴＧＦ－βは、それ自体が、Ｔ細胞のエフェクター細胞機能の発達を阻害し、マクロファージを活性化し、及び／または局所的な免疫性及び炎症性作用が収まった後の組織修復を促進することができる。
マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤは、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドを含むが、このＴＧＦ－βポリペプチドマスキング複合体は、可逆的であり、ＴＧＦ－ベータポリペプチドが細胞受容体に対して利用可能なオープン状態と、ＴＧＦ－βポリペプチドにマスクが結合しているクローズ状態との間で「呼吸」するため、ＴＧＦ－βポリペプチドは、依然としてＴβＲアゴニストとして作用することができる。したがって、マスキングポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドと結合し、それが、例えば、さもなければ遊離ＴＧＦ－βをスカベンジすることができるユビキタスな非シグナル伝達ＴβＲ３分子と強固な複合体になるのを防ぐように機能する。更に、ＴＧＦ－βの活性型がＴＢＲ３に対してより高い親和性を有する二量体であるため、当該受容体によるスカベンジを回避するために、二量体化を制限する置換（例えば、位置７７のシステインをセリンにより置換するＣ７７Ｓ置換）をＴＧＦ－β配列に組み込むことができる。
マスキング配列の１つの作用は、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３ポリペプチドのＴβＲに対する効果的な親和性を低下させることである。同時に、マスキングポリペプチドのＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を変更させ、ＴＧＦ－βポリペプチドから容易に解離するようにし、細胞ＴβＲタンパク質に対するＴＧＦ－βポリペプチドの利用可能性を高めることができる。すなわち、マスキングポリペプチドのＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性が低下している場合、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤは、オープン状態でいる時間が長くなる。ＴＧＦ－βポリペプチドは、オープン状態で細胞受容体に結合可能であるが、ＴβＲＩＩタンパク質が、概して、ＴＧＦ－βと相互作用するヘテロ二量体ＴβＲ１／ＴβＲ２シグナル伝達複合体の第１のペプチドであるため、ＴＧＦ－βポリペプチドのＴβＲＩＩに対する親和性を制御することで、ＴＧＦ－βが活性型シグナル伝達複合体になることを効果的に制御することができる。例えば、ＴＧＦ－β２のＬｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４（またはＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β３の対応する位置）のうちの１つ以上、２つ以上、または３つ全てに置換を組み込むことで、ＴβＲＩＩポリペプチドに対する親和性が低下する。親和性の低下により、標的細胞のＴＣＲとＴＭＰ ＭＨＣポリペプチド及びエピトープとの間の相互作用が可能になり、結合を効果的に制御し、標的細胞に特異的な相互作用が可能となる。
ＴβＲＩＩポリペプチドがマスキングポリペプチドとして使用される場合、細胞ＴβＲＩ受容体との直接的な相互作用及びオフターゲットシグナル伝達の可能性は、マスキング配列の適切な修飾によって対処することができる。マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドによるＴβＲＩを介したシグナル伝達を遮断／制限すること、及び／またはマスキングＴβＲＩＩポリペプチドのＴＧＦ－βに対する親和性を改変する（例えば、低下させる）ことが望ましい場合、マスキングＴβＲＩＩポリペプチドにＮ末端欠失及び／またはアミノ酸置換を組み込むことが可能である。行うことができる修飾には、Ｎ末端アミノ酸の欠失（例えば、Ｎ末端Δ１４またはΔ２５欠失）、及び／またはＬ２７、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ４９、Ｉ５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｉ５３、Ｅ５５、Ｖ７７、Ｄ１１８、及び／またはＥ１１９のうちの１つ以上における置換が含まれる。ＴβＲＩとＴβＲＩＩの会合の低下及びＴＧＦ－βに対する親和性の低下をもたらすいくつかの特定のＴβＲＩＩ修飾には、Ｌ２７Ａ、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ４９Ａ、Ｉ５０Ａ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５２Ａ、Ｓ５２Ｌ、Ｉ５３Ａ、Ｅ５５Ａ、Ｖ７７Ａ、Ｄ１１８Ａ、Ｄ１１８Ｒ、Ｅ１１９Ａ、及び／またはＥ１１９Ｑのいずれか１つ以上が含まれる。
ＴＭＰ中に存在するＴＧＦ－βポリペプチドは、いくつかの場合において、バリアントＴＧＦ－βポリペプチドであり、例えば、野生型ＴＧＦ－βポリペプチドと比較して、少なくとも１つのクラスのＴＧＦ－β受容体に対する親和性が低下しているか、または少なくとも１つのクラスのＴＧＦ－β受容体に対して選択的である、バリアントＴＧＦ－βポリペプチドである。
マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドの一部として、ＴＧＦ－β１ポリペプチド、ＴＧＦ－β２ポリペプチド、またはＴＧＦ－β３ポリペプチドをＴＭＰに組み込むことができるが、特定のＴＧＦ－βポリペプチドの選択、ならびに採用される特定の配列及びアミノ酸置換には、様々な因子が影響し得る。例えば、ＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３ポリペプチドは、ある特定の哺乳動物細胞株（例えば、ＣＨＯ細胞）で発現させると、そのアミノ酸配列が「クリッピング」を受ける。加えて、二量体化したＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β２）は、ＴβＲ２受容体よりもＴβＲ３（ベータグリカン受容体）に対する親和性が高く、オフターゲット結合を生じたり、生物学的に活性なマスキングされたタンパク質の損失が生じて非シグナル伝達ＴβＲ３分子の巨大なｉｎ ｖｉｖｏプールにつながる可能性がある。ＴβＲ３に対する高親和性オフターゲット結合を最小限に抑えるために、ジスルフィド結合によって接続された二量体ＴＧＦ－β分子をもたらす残基を置換することが望ましい場合がある。したがって、システイン７７（Ｃ７７）をシステイン以外のアミノ酸（例えば、Ｃ７７Ｓ置換を形成するセリン）で置換してもよい。
ＴＧＦ－βポリペプチドのアミノ酸配列は、当該技術分野において知られている。いくつかの場合において、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド中に存在するＴＧＦ－βポリペプチドは、ＴＧＦ－β１ポリペプチドである。いくつかの場合において、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド中に存在するＴＧＦ－βポリペプチドは、ＴＧＦ－β２ポリペプチドである。いくつかの場合において、マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチド中に存在するＴＧＦ－βポリペプチドは、ＴＧＦ－β３ポリペプチドである。
好適なＴＧＦ－βポリペプチドは、約７０アミノ酸～約１２５アミノ酸の長さを有し得、例えば、好適なＴＧＦ－βポリペプチドは、約７０アミノ酸～約８０アミノ酸、約８０アミノ酸～約９０アミノ酸、約９０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１０５アミノ酸、約１０５アミノ酸～約１１０アミノ酸、約１１０アミノ酸～約１１２アミノ酸、約１１３アミノ酸～約１２０アミノ酸、または約１２０アミノ酸～約１２５アミノ酸の長さを有し得る。好適なＴＧＦ－βポリペプチドは、ヒトＴＧＦ－β１ポリペプチド、ヒトＴＧＦ－β２ポリペプチド、またはヒトＴＧＦ－β３ポリペプチドの成熟型の少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
図２３Ａ～２３Ｇは、ＴＧＦ－βポリペプチドのアミノ酸配列を提供し、ＴＧＦ－β１プレプロタンパク質（図２３Ａ）、ＴＧＦ－β２プレタンパク質（図２３Ｃ）、及びＴＧＦ－β３プレタンパク質（図２３Ｅ）、ＴＧＦ－β１成熟型（図２３Ｂ）、ＴＧＦβ２成熟型（図２３Ｄ）、及びＴＧＦβ３成熟型（図２３Ｆ）を含む。Ｃ７７Ｓ置換を含むＴＧＦ－β３の成熟型は、図２３Ｇに提供される。Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓのＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３ポリペプチドのアミノ酸配列のアラインメントは、図２４に提供される。
（ｉ）ＴＧＦ－β１ポリペプチド
好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β１アミノ酸配列：
（配列番号１３３；１１２アミノ酸長）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ＴＧＦ－β１ポリペプチドは、約１１２アミノ酸の長さを有する。ＴＧＦ－β１プレプロタンパク質は、図２３Ａに示される。図２３Ａにおいて、アミノ酸Ｒ２５、Ｃ７７、Ｖ９２及びＲ９４が太字及び斜体で示されている。
好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β１アミノ酸配列：
いくつかの場合において、好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、Ｃ７７Ｓ置換を含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＴＧＦ－β１ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β１アミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７７は、Ｓｅｒである。位置２５、７７、９２及び９４が太字及び斜体で示されている。
（ｉｉ）ＴＧＦ－β２ポリペプチド
好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β２アミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ＴＧＦ－β２ポリペプチドは、約１１２アミノ酸の長さを有する。ＴＧＦ－β２プレプロタンパク質は、図２３Ｃに示される。図２３Ｃにおいて、残基Ｌｙｓ２５、Ｃｙｓ７７、Ｉｌｅ９２、及びＬｙｓ９４が太字及び斜体で示されている。
好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β２アミノ酸配列：
いくつかの場合において、好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、Ｃ７７Ｓ置換を含む。したがって、いくつかの場合において、好適なＴＧＦ－β２ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β２アミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸７７は、Ｓｅｒで置換されている。Ｓｅｒ７７が太字及び斜体で示されている。
（ｉｉｉ）ＴＧＦ－β３ポリペプチド
好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β３アミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、ＴＧＦ－β３ポリペプチドは、約１１２アミノ酸の長さを有する。ＴＧＦ－β３アイソフォーム１プレプロタンパク質は、図２３Ｅに示される。図２３Ｅにおいて、位置２５、９２及び９４が太字及び斜体で示されている。
好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β３アミノ酸配列：
いくつかの場合において、好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、Ｃ７７Ｓ置換を含む。いくつかの場合において、好適なＴＧＦ－β３ポリペプチドは、次のＴＧＦ－β３アミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得、アミノ酸７７は、Ｓｅｒである。位置２５、９２及び９４が太字及び斜体で示されている。
（ｉｖ）追加のＴＧＦ－βポリペプチド配列変化
ＴＧＦ－βの二量体化を変化させる配列変化（例えば、Ｃ７７Ｓなどのシステイン７７置換）に加えて、親和性及び他の特性に影響を与える配列変化を有するＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３ポリペプチドを、ＴＧＦ－βポリペプチドに組み込むことができる。ＴＧＦ－βポリペプチド中に、マスキングポリペプチド（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドなどのＴβＲポリペプチド）に対する親和性が低下したバリアントＴＧＦ－βが存在する場合、それらの構成成分は容易に解離するため、細胞ＴβＲタンパク質に対するＴＧＦ－βポリペプチドの利用可能性が高まる。ＴβＲＩＩタンパク質が、概して、ＴＧＦ－βと相互作用するヘテロ二量体ＴβＲシグナル伝達複合体の第１のペプチドであるため、ＴβＲＩＩとの相互作用は、ＴＧＦ－βが活性型シグナル伝達複合体になることを効果的に制御する。したがって、ＴＧＦ－βのＴβＲＩＩに対する親和性を制御するバリアントは、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤが活性型シグナル伝達複合体になるのを効果的に制御する。
ＴＧＦ－βの二量体化を変化させる配列変化（例えば、Ｃ７７Ｓなどのシステイン７７置換）に加えて、親和性及び他の特性に影響を与える配列変化を有するＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３ポリペプチドを、ＴＧＦ－βポリペプチドに組み込むことができる。ＴＧＦ－βポリペプチド中に、マスキングポリペプチド（例えば、ＴβＲＩＩポリペプチドなどのＴβＲポリペプチド）に対する親和性が低下したバリアントＴＧＦ－βが存在する場合、それらの構成成分は容易に解離するため、細胞ＴβＲタンパク質に対するＴＧＦ－βポリペプチドの利用可能性が高まる。ＴβＲＩＩタンパク質が、概して、ＴＧＦ－βと相互作用するヘテロ二量体ＴβＲシグナル伝達複合体の第１のペプチドであるため、ＴβＲＩＩとの相互作用は、ＴＧＦ－βが活性型シグナル伝達複合体になることを効果的に制御する。したがって、ＴＧＦ－βのＴβＲＩＩに対する親和性を制御するバリアントは、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤが活性型シグナル伝達複合体になるのを効果的に制御する。
本開示は、バリアントマスキングＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチド配列及び／またはバリアントＴＧＦ－βポリペプチドを含み、これらは、互いに対する親和性が（配列変化（複数可）を含まない以外は同一のＴＧＦ－βポリペプチドと比べて）変更されている（例えば、低下している）、ＴＭＰを提供する。ＴＧＦ－βポリペプチドとＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチドとの間の親和性は、ＭＯＤ及びそのｃｏ－ＭＯＤについて上記されるように、（ＢＬＩ）を使用して決定され得る。
（ａ）追加のＴＧＦ－β２配列バリアント
本開示は、野生型（ｗｔ）またはバリアントのいずれかのＴＧＦ－β２ポリペプチドを含むＴＭＰを提供し、バリアントポリペプチドは、ＴＭＰ中に存在するマスキングＴβＲに対する親和性が（配列変化を含まない以外は同一の野生型ＴＧＦ－βポリペプチドと比べて）低下している。
本開示は、野生型（ｗｔ）またはバリアントのいずれかのＴＧＦ－β２ポリペプチドを含むＴＭＰを提供し、バリアントポリペプチドは、ＴＭＰ中に存在するマスキングＴβＲに対する親和性が（配列変化を含まない以外は同一の野生型ＴＧＦ－βポリペプチドと比べて）低下している。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、図２３Ｄに示されるアミノ酸配列の少なくとも１００の連続するアミノ酸に対して、８５％を超える（例えば、９０％、９５％、９８％または９９％を超える）配列同一性を有し、ＴβＲＩＩ受容体配列に対するバリアントＴＧＦ－β２ポリペプチドの親和性を低下させる置換を含む、バリアントＴＧＦ－β２ポリペプチドを含む。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ｌｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４のうちの１つ以上、２つ以上または３つ全ての置換を含むバリアントＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β２）ポリペプチドを含む（残基の位置については図２３Ｄ、ＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３の対応する残基については図２４参照）。これらのアミノ酸残基は、ＴβＲＩＩポリペプチドに対するＴＧＦ－β２の親和性に影響を与えることが示されている（Ｃｒｅｓｃｅｎｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５５：４７－６２（２００６）参照）。一例として、ＴＭＰは、位置２５にＬｙｓまたはＡｒｇ以外のアミノ酸を有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含む（図２３Ｄ）。ＴＭＰは、図２３Ｄに示されるアミノ酸配列の位置９２にＩｌｅまたはＶａｌ以外のアミノ酸（または位置９２にＩｌｅ、Ｖａｌ、もしくはＬｅｕ以外のアミノ酸）を有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得る。ＴＭＰは、図２３Ｄに示されるアミノ酸配列の位置９４にＬｙｓまたはＡｒｇ以外のアミノ酸を有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得る。ＴＭＰは、図２３Ｄに示されるアミノ酸配列のＬｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４のうちの１つ以上、２つ以上または３つ全てに置換を含むＴＧＦ－β２ポリペプチドを含み得る。
（ｂ）追加のＴＧＦ－β１及びＴＧＦ－β３配列バリアント
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＴＧＦ－β２のＬｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４に対応するアミノ酸位置のうちの１つ以上、２つ以上または３つ全てに置換を含むバリアントＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３ポリペプチドを含む。ＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３において、対応するアミノ酸は、Ｌｙｓ２５がＡｒｇ２５であり、Ｉｌｅ９２がＶａｌ９２であり、Ｌｙｓ９４がＡｒｇ９４であり、そのそれぞれは、保存的置換である。例えば、ＴＧＦ－β１（成熟型）については図２３Ｂ、ＴＧＦ－β３（成熟型）については図２３Ｆを参照されたい。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＴＧＦ－β２のＬｙｓ２５、Ｉｌｅ９２、及び／またはＬｙｓ９４に対応するアミノ酸位置のうちの１つ以上、２つ以上または３つ全てに置換を含むバリアントＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３ポリペプチドを含む。ＴＧＦ－β１またはＴＧＦ－β３において、対応するアミノ酸は、Ｌｙｓ２５がＡｒｇ２５であり、Ｉｌｅ９２がＶａｌ９２であり、Ｌｙｓ９４がＡｒｇ９４であり、そのそれぞれは、保存的置換である。例えば、ＴＧＦ－β１（成熟型）については図２３Ｂ、ＴＧＦ－β３（成熟型）については図２３Ｆを参照されたい。
一例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、位置２５にＡｒｇまたはＬｙｓ以外のアミノ酸を有するＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含む。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、位置９２にＶａｌまたはＩｌｅ以外のアミノ酸（または位置９２にＩｌｅ、Ｖａｌ、またはＬｅｕ以外のアミノ酸）を有するＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含む。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＡｒｇまたはＬｙｓ以外のアミノ酸を有するＴＧＦ－β２ポリペプチドを含む。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ａｒｇ２５、Ｖａｌ９２、及び／またはＡｒｇ９４のうちの１つ以上、２つ以上または３つ全てに置換を含むＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含む。別の例として、いくつかの場合において、ＴＭＰは、Ａｒｇ２５、Ｖａｌ９２、及び／またはＡｒｇ９４のうちの１つ以上、２つ以上または３つ全てに置換を含むＴＧＦ－β１またはβ３ポリペプチドを含む。
マスキングポリペプチド
上記のとおり、本開示のＴＭＰは、ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドを含む。ＴＧＦ－βポリペプチドに結合してマスキングするポリペプチドまたはポリペプチド複合体（「マスキングポリペプチド」）は、様々な形態を取ることができ、例えば、ＴＧＦ－βＲＩ（「ＴβＲＩ」）、ＴＧＦ－βＩＩ（「ＴβＲＩＩ」）、ＴＧＦ－βＲＩＩＩ（「ＴβＲＩＩＩ」）、及び抗ＴＧＦ－β抗体が含まれる。
上記のとおり、本開示のＴＭＰは、ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドを含む。ＴＧＦ－βポリペプチドに結合してマスキングするポリペプチドまたはポリペプチド複合体（「マスキングポリペプチド」）は、様々な形態を取ることができ、例えば、ＴＧＦ－βＲＩ（「ＴβＲＩ」）、ＴＧＦ－βＩＩ（「ＴβＲＩＩ」）、ＴＧＦ－βＲＩＩＩ（「ＴβＲＩＩＩ」）、及び抗ＴＧＦ－β抗体が含まれる。
ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド
マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドにおけるＴＧＦ－βのマスキングは、ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２またはＴＧＦ－β３）への結合に十分なポリペプチド配列を含むＴＧＦ－β受容体断片（例えば、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩまたはＴβＲＩＩＩのエクトドメイン配列）を利用することによって、達成され得る。一実施形態において、マスキング配列は、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、またはＴβＲＩＩＩエクトドメインの全部または一部を含む。ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドのアミノ酸配列の例は、図２５Ａ～２５Ｎに提供される。ＴβＲＩエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は、図２５Ｂに示される。ＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は、図２５Ｄ及び図２５Ｆ～Ｊに示される。
マスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドにおけるＴＧＦ－βのマスキングは、ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２またはＴＧＦ－β３）への結合に十分なポリペプチド配列を含むＴＧＦ－β受容体断片（例えば、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩまたはＴβＲＩＩＩのエクトドメイン配列）を利用することによって、達成され得る。一実施形態において、マスキング配列は、ＴβＲＩ、ＴβＲＩＩ、またはＴβＲＩＩＩエクトドメインの全部または一部を含む。ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドのアミノ酸配列の例は、図２５Ａ～２５Ｎに提供される。ＴβＲＩエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は、図２５Ｂに示される。ＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドのアミノ酸配列は、図２５Ｄ及び図２５Ｆ～Ｊに示される。
（１）ＴＧＦ－β受容体Ｉ（ＴβＲＩ）
マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩ（例えば、アイソフォーム１；配列番号１４１）に由来し得、ＴβＲＩエクトドメイン（アミノ酸３４～１２６）の全部または一部を含み得る。ＴＧＦ－βのマスキングに好適なＴβＲＩポリペプチドは、次のＴβＲＩエクトドメインアミノ酸配列：ＬＱＣＦＣＨＬ ＣＴＫＤＮＦＴＣＶＴ ＤＧＬＣＦＶＳＶＴＥ ＴＴＤＫＶＩＨＮＳＭ ＣＩＡＥＩＤＬＩＰＲ ＤＲＰＦＶＣＡＰＳＳ ＫＴＧＳＶＴＴＴＹＣ ＣＮＱＤＨＣＮＫＩＥ ＬＰＴＴＶＫＳＳＰＧ ＬＧＰＶＥＬ（配列番号１４２）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩ（例えば、アイソフォーム１；配列番号１４１）に由来し得、ＴβＲＩエクトドメイン（アミノ酸３４～１２６）の全部または一部を含み得る。ＴＧＦ－βのマスキングに好適なＴβＲＩポリペプチドは、次のＴβＲＩエクトドメインアミノ酸配列：ＬＱＣＦＣＨＬ ＣＴＫＤＮＦＴＣＶＴ ＤＧＬＣＦＶＳＶＴＥ ＴＴＤＫＶＩＨＮＳＭ ＣＩＡＥＩＤＬＩＰＲ ＤＲＰＦＶＣＡＰＳＳ ＫＴＧＳＶＴＴＴＹＣ ＣＮＱＤＨＣＮＫＩＥ ＬＰＴＴＶＫＳＳＰＧ ＬＧＰＶＥＬ（配列番号１４２）の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０３のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。
（２）ＴＧＦ－β受容体ＩＩ（ＴβＲＩＩ）
マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩ（例えば、アイソフォームＡ）に由来し得、ＴβＲＩＩエクトドメイン配列（アミノ酸２４～１７７）の全部または一部を含み得る。ＴＧＦ－βのマスキングに好適なＴβＲＩＩアイソフォームＡポリペプチドは、次のＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインアミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０または少なくとも１５４のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ＢアイソフォームのＤ１１８に対応するアスパラギン酸残基の位置が太字及び斜体で示されている。
マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩ（例えば、アイソフォームＡ）に由来し得、ＴβＲＩＩエクトドメイン配列（アミノ酸２４～１７７）の全部または一部を含み得る。ＴＧＦ－βのマスキングに好適なＴβＲＩＩアイソフォームＡポリペプチドは、次のＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインアミノ酸配列：
マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩアイソフォームＢ配列番号１４５）に由来し得、ＴβＲＩＩエクトドメイン配列（アミノ酸２４～１６６）の全部または一部を含み得る。ＴＧＦ－βのマスキングに好適なＴβＲＩＩアイソフォームＢポリペプチドは、ＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインアミノ酸配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、または１４３のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。後述されるように、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８（斜体及び太字）のうちのいずれか１つ以上は、当該位置の天然アミノ酸以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換を含み得る。マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上と、を含み得る。
ＴβＲＩＩのエクトドメインがマスキングポリペプチドとして利用され得るが、このタンパク質の領域は、荷電した疎水性パッチを有しているため、好ましくないｐＩをもたらし、当該ポリペプチドを発現している細胞に対して毒性であり得る。加えて、ＴβＲＩＩエクトドメインと活性型ＴＧＦ－βポリペプチドを組み合わせることで、細胞表面のＴβＲＩと結合し、シグナル伝達受容体の活性化（例えば、Ｓｍａｄ経路を介したシグナル伝達）をもたらすことができる複合体が形成され得る。ＴβＲＩの会合に関与する配列を除去または変更することによって、ＴＧＦ－βのマスキングに使用されるＴβＲＩＩエクトドメイン配列を修飾することで、自らの細胞表面ヘテロ二量体であるＴβＲＩ／ＴβＲＩＩ複合体を介するものを除き、マスキングされたＴＧＦ－βによる意図しない細胞刺激を回避することができる。また、ＴβＲＩＩの修飾により、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）に対するＴβＲＩＩの親和性を変更する（例えば、低下させる）ことができ、それにより、ＴＧＦ－βの脱マスキングの制御及びそのシグナル伝達分子としての利用可能性を可能にすることができる。ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）に対する親和性が最も高いＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ペプチドを含むポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドを最も強固にマスキングするため、同じ効果を達成するには、より高い用量を必要とする。対照的に、親和性を低くするＴβＲＩＩのアミノ酸置換は、ＴＧＦ－βポリペプチドを脱マスキングし、低用量で生物学的に有効である。
したがって、ＴβＲＩを介したＴＧＦ－βポリペプチドによるシグナル伝達を遮断／制限すること、及び／またはマスキングＴβＲＩＩポリペプチドのＴＧＦ－βに対する親和性を改変する（例えば、低下させる）ことが望ましい場合、ＴβＲＩＩポリペプチド配列に多くのＴβＲＩＩの改変を組み込んでもよい。行うことができる修飾には、上述のＮ末端アミノ酸、例えば、１４もしくは２５のＮ末端アミノ酸の欠失（１～１４アミノ酸または１～２５アミノ酸；Δ１４、Δ２５修飾）、及び／またはＬ２７、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ４９、Ｉ５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｉ５３、Ｅ５５、Ｖ７７、Ｄ１１８、及び／またはＥ１１９のうちの１つ以上における置換が含まれる。ＴβＲＩとＴβＲＩＩの会合の低下及びＴＧＦ－βに対する親和性の低下をもたらすいくつかの特定のＴβＲＩＩ修飾には、図２５Ｆに示されるアミノ酸配列のアミノ酸ナンバリングに基づいて、Ｌ２７Ａ、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ４９Ａ、Ｉ５０Ａ、Ｔ５１Ａ、Ｓ５２Ａ、Ｓ５２Ｌ、Ｉ５３Ａ、Ｅ５５Ａ、Ｖ７７Ａ、Ｄ１１８Ａ、Ｄ１１８Ｒ、Ｅ１１９Ａ、及び／またはＥ１１９Ｑのいずれか１つ以上が含まれる。これらの置換がＴＧＦ－β３－ＴβＲＩＩ及びＴβＲＩ－ＴβＲＩＩ複合体に与える影響については、例えば、Ｊ．Ｇｒｏｐｐｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ２９，１５７－１６８，（２００８）及びＤｅ Ｃｒｅｓｃｅｎｚｏ ｅｔ ａｌ．ＪＭＢ ３５５，４７－６２（２００６）を参照されたい。Ｎ末端Δ２５欠失及び／またはＦ２４における置換（例えば、Ｆ２４Ａ置換）を含むＴβＲＩＩの修飾により、古典的ＳＭＡＤシグナル伝達経路）を介したシグナルが実質的または完全に遮断される。一態様において、成熟ＴβＲＩＩ Ｂアイソフォーム（例えば、図２５Ｆに示されるアミノ酸配列）の位置１１８（Ｄ１１８）におけるアスパラギン酸は、ＡｓｐまたはＧｌｕ以外のアミノ酸、例えば、「Ｄ１１８Ａ」置換を生じるＡｌａまたはＤ１１８Ｒ置換を生じるＡｒｇによって置き換えられる。Ｄ１１８に対応するＡｓｐ残基は、図２５Ｆにおいて、太字及び下線で示される。１～２５アミノ酸長のＮ末端欠失（例えば、Δ２５欠失）及び／またはＦ２４における置換（例えば、Ｆ２４Ａ置換）は、Ｄ１１８置換（例えば、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ）と組み合わせてもよい。１～２５アミノ酸長のＮ末端欠失（例えば、Δ２５欠失）及び／またはＦ２４における置換（例えば、Ｆ２４Ａ置換）はまた、Ｌ２７、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ４９、１５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｉ５３、Ｅ５５、Ｖ７７、Ｄ１１８、及び／またはＥ１１９（例えば、Ｄ１１８Ａ）置換のいずれかにおける置換、特に図２５Ｆに示される親和性を改変する上述のアミノ酸配列の位置について列挙した特定の置換のいずれかと組み合わせてもよい。
ＴβＲＩＩポリペプチドのＮ末端の欠失はまた、ＴβＲＩとの相互作用を喪失させ、ＴβＲＩＩポリペプチドを含むマスキングされたＴＧＦ－βポリペプチドが構成的に活性な複合体として作用し、ＴβＲＩシグナル伝達に関与して活性化するのを防止することができる。ＴβＲＩＩポリペプチドの１４アミノ酸欠失（Δ１４）は、当該タンパク質とＴβＲＩの相互作用を実質的に低下させ、ＴβＲＩＩのΔ２５アミノ酸欠失は、ＴβＲＩとの相互作用を完全に無効にすると思われる。Ｎ末端欠失はまた、タンパク質のｐＩを実質的に変化させ、Δ１４のＴβＲＩＩエクトドメイン変異体は、約４．５～５．０（例えば、約４．７４）のｐＩを示す。したがって、マスキングポリペプチドは、１４～２５アミノ酸（例えば、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸）などのＮ末端欠失を有するＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドを含み得る。ＴＧＦ－βポリペプチドのマスキングに利用され得る修飾エクトドメイン配列は、ＴβＲＩとの相互作用を制限するものを含め、以下の段落に記載される。
一実施形態において、マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメイン配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、または１４２のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む。Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８（斜体及び太字）のうちのいずれか１つ以上は、当該位置の天然アミノ酸以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ置換を持つＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインを含む。一実施形態において、ＴＧＦ－βをマスキングする配列は、Ｄ１１８Ａ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上と、を持つＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメイン配列を含む。
マスキングされたＴＧＦ－β／ＴβＲＩＩ複合体がＴβＲＩと相互作用することによる意図しない細胞シグナル伝達を遮断する１４～２５アミノ酸（例えば、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸）などのＴβＲＩＩのＮ末端欠失の組み合わせは、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、及び／またはＤ１１８のいずれか１つ以上におけるものを含む他のＴβＲＩＩエクトドメイン置換と組み合わせてもよい。欠失と置換の組み合わせは、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤが、細胞膜結合したＴβＲＩとＴβＲＩＩ受容体を介したもの以外の細胞シグナル伝達を引き起こさないことを確実にする。
一実施形態において、マスキングポリペプチドは、アミノ酸１～１４（Δ１４）が欠失されているＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメイン配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１４のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む。Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８（斜体及び太字）のうちのいずれか１つ以上は、当該位置の天然アミノ酸以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ置換を有するＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインを含む。一実施形態において、配列マスキングＴＧＦ－βは、アミノ酸配列
を含み、Ｄ１１８Ａ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上と、を持つ。
一実施形態において、マスキングポリペプチドは、アミノ酸１～２５（Δ２５）が欠失されている配列：
の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１０４のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、またはＤ１１８（斜体及び太字）のうちのいずれか１つ以上は、当該位置の天然アミノ酸以外のアミノ酸（例えば、アラニン）によって置換され得る。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ置換を有する。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ置換と、Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及び／またはＥ５５Ａ置換のうちの１つ以上と、を有する。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ及びＦ３０Ａ置換を有する。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ及びＤ３２Ｎ置換を有する。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ及びＳ５２Ｌ置換を有する。一実施形態において、マスキングポリペプチドは、Ｄ１１８Ａ及びＥ５５Ａを有する。
（３）ＴＧＦ－β受容体ＩＩＩ（ＴβＲＩＩＩ）
一実施形態において、マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩＩに由来し得、ＴβＲＩＩＩエクトドメイン（Ａアイソフォームのアミノ酸２７～７８７またはＢアイソフォームの２７～７８６）の全部または一部を含み得る。いくつかの場合において、好適なマスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩＩ ＡアイソフォームまたはＢアイソフォームエクトドメイン配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１２０のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一実施形態において、マスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩＩに由来し得、ＴβＲＩＩＩエクトドメイン（Ａアイソフォームのアミノ酸２７～７８７またはＢアイソフォームの２７～７８６）の全部または一部を含み得る。いくつかの場合において、好適なマスキングポリペプチドは、ＴβＲＩＩＩ ＡアイソフォームまたはＢアイソフォームエクトドメイン配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または１２０のアミノ酸に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
（ｃ）抗体
ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド（例えば、エクトドメイン配列）は、ＴＭＰ中のＴＧＦ－βポリペプチドに結合してマスキングするように機能し得るが、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合する他のポリペプチドもマスキングポリペプチドとして採用することができる。ＴＧＦ－βのマスキングに使用することができる好適なポリペプチドとしては、ＴＧＦ－βに対する親和性を持つ抗体（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３のうちの１つ以上に特異的な抗体）があり、抗体には、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を持つナノボディなどの抗体断片、及び一本鎖抗ＴＧＦ－β抗体が含まれる（例えば、いずれもヒト化され得る）。ＴＧＦ－βに結合して中和する、ｓｃＦｖ抗体を含むいくつかの抗体が記載されている。例えば、ＵＳ９，０９０，６８５を参照されたい。本開示に記載される実施形態及び／または態様を通して、ＴＧＦ－βポリペプチドのマスキングに使用されるＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を有するマスキング抗体（例えば、ｓｃＦｖまたはナノボディ）に置き換えることができる。
ＴＧＦ－β受容体ポリペプチド（例えば、エクトドメイン配列）は、ＴＭＰ中のＴＧＦ－βポリペプチドに結合してマスキングするように機能し得るが、ＴＧＦ－βポリペプチドに結合する他のポリペプチドもマスキングポリペプチドとして採用することができる。ＴＧＦ－βのマスキングに使用することができる好適なポリペプチドとしては、ＴＧＦ－βに対する親和性を持つ抗体（例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、またはＴＧＦ－β３のうちの１つ以上に特異的な抗体）があり、抗体には、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を持つナノボディなどの抗体断片、及び一本鎖抗ＴＧＦ－β抗体が含まれる（例えば、いずれもヒト化され得る）。ＴＧＦ－βに結合して中和する、ｓｃＦｖ抗体を含むいくつかの抗体が記載されている。例えば、ＵＳ９，０９０，６８５を参照されたい。本開示に記載される実施形態及び／または態様を通して、ＴＧＦ－βポリペプチドのマスキングに使用されるＴβＲ（例えば、ＴβＲＩＩ）ポリペプチドは、ＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性を有するマスキング抗体（例えば、ｓｃＦｖまたはナノボディ）に置き換えることができる。
いくつかの場合において、抗体（例えば、一本鎖抗体）をマスキングポリペプチドとして使用することができ、抗体は、マスキングされるＴＧＦ－βポリペプチド（複数可）のアイソフォームに限定され得る。例として、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ中にＴＧＦ－βアイソフォームが存在する場合、ＴＧＦ－β１に対するメテリムマブ（ＣＡＴ１９２）をベースにした一本鎖抗体（例えば、Ｌｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １０（３）：４４４－４５２（２０１８））を使用してそれをマスキングすることができる。別の実施形態において、ＴＧＦ－β２に特異的な一本鎖抗体を使用して、ＴＧＦ－βアイソフォームをマスキングする。別の実施形態において、ＴＧＦ－β３に特異的な一本鎖抗体を使用して、ＴＧＦ－βアイソフォームをマスキングする。一本鎖抗体はまた、ＴＧＦ－βアイソフォームの組み合わせ（例えば、ＴＧＦ－β１＆ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β１＆ＴＧＦ－β３、及びＴＧＦ－β２＆ＴＧＦ－β３からなる群から選択されるエクトドメインに対して特異的であってもよい。一本鎖抗体はまた、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ中に存在するＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、及びＴＧＦ－β３エクトドメイン配列に対して汎特異的であってもよい。例えば、ＷＯ２０１４／１６４７０９を参照されたい。ＴＧＦ－βアイソフォームに対する所望の特異性及び親和性を有する抗体及び一本鎖抗体は、ハイブリドーマのスクリーニング及び／または標的ＴＧＦ－βポリペプチド配列に対して親和性を有する抗体の可変領域配列に対する修飾（例えば、コンビナトリアル修飾）を含む様々な方法によって調製することができる。
一実施形態において、マスキングポリペプチドは、ＴＧＦ－β（例えば、ＴＧＦ－β３）をマスキングする一本鎖抗体を含む。そのような一実施形態において、一本鎖アミノ酸配列は、Ｃ７７Ｓ置換を含むＴＧＦ－β３に特異的である。
リンカー
上述のとおり、本開示のＴＭＰは、ＴＭＰの第１及び第２のポリペプチドの構成成分の間、例えば、ＡＩペプチドとＭＨＣポリペプチドとの間、ＭＨＣポリペプチドとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、第１のＭＨＣポリペプチドと第２のＭＨＣポリペプチドとの間、ＭＯＤとＭＨＣポリペプチドとの間などに１つ以上のリンカーペプチドを含み得る。本明細書で使用される場合、「ＴＭＰの構成成分のいずれか２つの間の任意選択のペプチドリンカー」という表現は、ＴＭＰ内の任意の２つの隣接するポリペプチド間のペプチドリンカーを指す。例えば、本明細書で使用される場合、「ＴＭＰの構成成分のいずれか２つの間の任意選択のペプチドリンカー」という表現は、ｉ）ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間、ｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、ｉｖ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとマスキングポリペプチドとの間、ｖ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、ｖｉ）Ｉｇ ＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、ｖｉｉ）Ｉｇ ＦｃポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、ｖｉｉｉ）第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間、ｉｘ）マスキングポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、及びｘ）ＴＧＦ－βポリペプチドとＭＯＤとの間のうちの１つ以上の間のペプチドリンカーを指す。
上述のとおり、本開示のＴＭＰは、ＴＭＰの第１及び第２のポリペプチドの構成成分の間、例えば、ＡＩペプチドとＭＨＣポリペプチドとの間、ＭＨＣポリペプチドとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、第１のＭＨＣポリペプチドと第２のＭＨＣポリペプチドとの間、ＭＯＤとＭＨＣポリペプチドとの間などに１つ以上のリンカーペプチドを含み得る。本明細書で使用される場合、「ＴＭＰの構成成分のいずれか２つの間の任意選択のペプチドリンカー」という表現は、ＴＭＰ内の任意の２つの隣接するポリペプチド間のペプチドリンカーを指す。例えば、本明細書で使用される場合、「ＴＭＰの構成成分のいずれか２つの間の任意選択のペプチドリンカー」という表現は、ｉ）ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間、ｉｉ）第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドと第２のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間、ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとＩｇ Ｆｃポリペプチドとの間、ｉｖ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとマスキングポリペプチドとの間、ｖ）ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、ｖｉ）Ｉｇ ＦｃポリペプチドとＭＯＤとの間、ｖｉｉ）Ｉｇ ＦｃポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、ｖｉｉｉ）第１のＭＯＤと第２のＭＯＤとの間、ｉｘ）マスキングポリペプチドとＴＧＦ－βポリペプチドとの間、及びｘ）ＴＧＦ－βポリペプチドとＭＯＤとの間のうちの１つ以上の間のペプチドリンカーを指す。
また、上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間、例えば、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとの間にＣｙｓ含有ペプチドリンカーを含み得る。一般に、Ｃｙｓ含有ペプチドリンカーは、リンカーと他のポリペプチド上の所望の部位との間のジスルフィド結合の形成を意図的に促進するために、ＴＭＰの第１または第２のポリペプチドのいずれかに使用される。Ｃｙｓ含有リンカーがＴＭＰの一方のポリペプチドに挿入される場合、ＴＭＰ中の残りのリンカーは、ＴＭＰの不必要な部位でのジスルフィド結合の形成を防ぐために、Ｃｙｓを含まない。ただし、リンカー間に形成されるジスルフィド結合により第１及び第２のポリペプチドを連結することが望まれる場合は、例外として、第１及び第２のポリペプチドのそれぞれにＣｙｓ含有リンカーを使用することができる。したがって、ＴＭＰは、ａ）ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチドとの間、例えば、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとの間のＣｙｓ含有ペプチドリンカーと、ｂ）Ｃｙｓを含まない少なくとも１つの追加ペプチドリンカーと、を含み得る。
好適なリンカー（「スペーサー」とも称される）は、容易に選択することができ、１アミノ酸～２５アミノ酸、３アミノ酸～２０アミノ酸、２アミノ酸～１５アミノ酸、３アミノ酸～１２アミノ酸など、また４アミノ酸～１０アミノ酸、５アミノ酸～９アミノ酸、６アミノ酸～８アミノ酸、または７アミノ酸～８アミノ酸を含む、多くの好適な長さのいずれかであってよい。好適なリンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５アミノ酸長であり得る。好適なリンカーは、２５～３５アミノ酸長であり得る。好適なリンカーは、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、または３５アミノ酸長であり得る。好適なリンカーは、３５～４５アミノ酸長であり得る。好適なリンカーは、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または４５アミノ酸長であり得る。好適なリンカーは、４５～５０アミノ酸長であり得る。好適なリンカーは、４５、４６、４７、４８、４９、または５０アミノ酸長であり得る。
Ｃｙｓを含有するリンカー
Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。いくつかの場合において、本開示のＴＭＰは、第１及び第２のポリペプチドを含むヘテロ二量体であって、第１のポリペプチドは、ＡＩペプチド及びＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド）を含み、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド）との間にリンカーを含み、リンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）、ヘテロ二量体を含む。
Ｃｙｓを含むペプチドリンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含むことができ、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）。いくつかの場合において、本開示のＴＭＰは、第１及び第２のポリペプチドを含むヘテロ二量体であって、第１のポリペプチドは、ＡＩペプチド及びＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド）を含み、ＡＩペプチドとＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド）との間にリンカーを含み、リンカーは、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～１０の整数である（例えば、式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）、ヘテロ二量体を含む。
Ｃｙｓを含有しないリンカー
例示的なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２３３）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３４）（式中、ｎは、少なくとも１つの整数である）を含む）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野において知られている他の柔軟性のあるリンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン－セリンポリマーが使用され得、ＧｌｙとＳｅｒはいずれも比較的非構造的であることから、構成成分間の中間テザーとして機能することができる。グリシンポリマーは、グリシンが更にアラニンよりも極めて多くのΦ－Ψ空間を利用でき、長い側鎖を持つ残基よりも制限が少ないため、使用され得る（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）参照）。例示的なリンカーは、限定するものではないが、ＧＧＳＧ（配列番号２３５）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２３６）、ＧＳＧＳＧ（配列番号２３７）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２３８）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２３９）、ＧＳＳＳＧ（配列番号２４０）などを含む、アミノ酸配列を含み得る。例示的なリンカーは、例えば、Ｇｌｙ（Ｓｅｒ４）ｎ、（配列番号２４１）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）を含み得る。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）ｎ（配列番号２４２）（式中、ｎは、４である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）ｎ（配列番号２４３）（式中、ｎは、５である）を含む。例示的なリンカーは、例えば、（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号２４４）（「Ｇ４Ｓ」リンカーとも称される）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）を含み得る。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４５）（式中、ｎは、１である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４６）（式中、ｎは、２である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１６０）（式中、ｎは、３である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７１）（式中、ｎは、４である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１６１）（式中、ｎは、５である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４７）（式中、ｎは、６である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４８）（式中、ｎは、７である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４９）（式中、ｎは、８である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５０）（式中、ｎは、９である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５９）（式中、ｎは、１０である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列ＡＡＡＧＧ（配列番号１８４）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列ＧＧＳＡＡＡＧＧ（配列番号１７５）を含む。ＡＡＡＧＧ（配列番号１８４）及びＧＧＳＡＡＡＧＧ（配列番号１７５）リンカーは、例えば、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチド（例えば、ＤＲＡクラスＩＩポリペプチド）をＩｇ Ｆｃポリペプチドに連結するのに有用であることがわかっている。
例示的なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２３３）及び（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２３４）（式中、ｎは、少なくとも１つの整数である）を含む）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、及び当該技術分野において知られている他の柔軟性のあるリンカーが挙げられる。グリシン及びグリシン－セリンポリマーが使用され得、ＧｌｙとＳｅｒはいずれも比較的非構造的であることから、構成成分間の中間テザーとして機能することができる。グリシンポリマーは、グリシンが更にアラニンよりも極めて多くのΦ－Ψ空間を利用でき、長い側鎖を持つ残基よりも制限が少ないため、使用され得る（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１１７３－１４２（１９９２）参照）。例示的なリンカーは、限定するものではないが、ＧＧＳＧ（配列番号２３５）、ＧＧＳＧＧ（配列番号２３６）、ＧＳＧＳＧ（配列番号２３７）、ＧＳＧＧＧ（配列番号２３８）、ＧＧＧＳＧ（配列番号２３９）、ＧＳＳＳＧ（配列番号２４０）などを含む、アミノ酸配列を含み得る。例示的なリンカーは、例えば、Ｇｌｙ（Ｓｅｒ４）ｎ、（配列番号２４１）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）を含み得る。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）ｎ（配列番号２４２）（式中、ｎは、４である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＳＳＳＳ）ｎ（配列番号２４３）（式中、ｎは、５である）を含む。例示的なリンカーは、例えば、（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）ｎ（配列番号２４４）（「Ｇ４Ｓ」リンカーとも称される）（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）を含み得る。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４５）（式中、ｎは、１である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４６）（式中、ｎは、２である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１６０）（式中、ｎは、３である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７１）（式中、ｎは、４である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１６１）（式中、ｎは、５である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４７）（式中、ｎは、６である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４８）（式中、ｎは、７である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２４９）（式中、ｎは、８である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５０）（式中、ｎは、９である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２５９）（式中、ｎは、１０である）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列ＡＡＡＧＧ（配列番号１８４）を含む。いくつかの場合において、リンカーは、アミノ酸配列ＧＧＳＡＡＡＧＧ（配列番号１７５）を含む。ＡＡＡＧＧ（配列番号１８４）及びＧＧＳＡＡＡＧＧ（配列番号１７５）リンカーは、例えば、ＭＨＣクラスＩＩアルファ鎖ポリペプチド（例えば、ＤＲＡクラスＩＩポリペプチド）をＩｇ Ｆｃポリペプチドに連結するのに有用であることがわかっている。
ＡＩペプチド
本明細書で使用される場合、「ＡＩペプチド」は、本開示のＴＭＰ中に存在する場合、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲが結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチドである。ＡＩペプチドは、約４アミノ酸～約２５アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＡＩペプチドは、４アミノ酸（ａａ）～１０アミノ酸、８アミノ酸～１２アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１２アミノ酸～２０アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、１５アミノ酸～２５アミノ酸、または２０アミノ酸～２５アミノ酸の長さを有し得る。例えば、本開示のＴＭＰ中に存在するＡＩペプチドは、４アミノ酸（ａａ）、５アミノ酸、６アミノ酸、７、アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、２０アミノ酸、２１アミノ酸、２２アミノ酸、２３アミノ酸、２４アミノ酸、または２５アミノ酸の長さを有し得る。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＡＩペプチドは、８アミノ酸～２０アミノ酸、例えば、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸の長さを有する。
本明細書で使用される場合、「ＡＩペプチド」は、本開示のＴＭＰ中に存在する場合、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲが結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチドである。ＡＩペプチドは、約４アミノ酸～約２５アミノ酸の長さを有し得、例えば、ＡＩペプチドは、４アミノ酸（ａａ）～１０アミノ酸、８アミノ酸～１２アミノ酸、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１２アミノ酸～２０アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、１５アミノ酸～２５アミノ酸、または２０アミノ酸～２５アミノ酸の長さを有し得る。例えば、本開示のＴＭＰ中に存在するＡＩペプチドは、４アミノ酸（ａａ）、５アミノ酸、６アミノ酸、７、アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、２０アミノ酸、２１アミノ酸、２２アミノ酸、２３アミノ酸、２４アミノ酸、または２５アミノ酸の長さを有し得る。いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＡＩペプチドは、８アミノ酸～２０アミノ酸、例えば、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、または２０アミノ酸の長さを有する。
ＴＭＰ中に存在するＡＩペプチドには、Ｔ細胞が特異的に結合し、すなわち、当該エピトープには、エピトープ特異的Ｔ細胞が特異的に結合する。エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するエピトープ提示ペプチドに結合するが、参照アミノ酸配列とは異なるエピトープには実質的に結合しない。例えば、エピトープ特異的Ｔ細胞は、参照アミノ酸配列を有するＡＩペプチドに結合し、参照アミノ酸配列とは異なるエピトープには、結合したとしても、その親和性は１０－６Ｍ未満、１０－５Ｍ未満、または１０－４Ｍ未満である。エピトープ特異的Ｔ細胞は、それが特異性をもつエピトープ提示ペプチドに、少なくとも１０－７Ｍ、少なくとも１０－８Ｍ、少なくとも１０－９Ｍ、または少なくとも１０－１０Ｍの親和性で結合することができる。
ＡＩペプチドは、「自己」抗原（自己抗原）に関連するかまたはそれに存在するエピトープを提示し得る。自己免疫疾患に関連する抗原は、アジソン病（自己免疫性副腎炎、Ｍｏｒｂｕｓ Ａｄｄｉｓｏｎ）、円形脱毛症、アジソン貧血（Ｍｏｒｂｕｓ Ｂｉｅｒｍｅｒ）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、冷式の自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（寒冷凝集素症（ｃｏｌｄ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ）、冷式自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（寒冷凝集素症（ｃｏｌｄ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ））、（ＣＨＡＤ））、温式の自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）（温式ＡＩＨＡ、温式自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ））、自己免疫性溶血性ドナート・ランドスタイナー貧血（発作性寒冷ヘモグロビン尿症）、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性関節炎、側頭動脈炎、高安動脈炎（高安病、大動脈弓疾患）、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、自己免疫性慢性胃炎、自己免疫性不妊症、内耳自己免疫病（ＡＩＥＤ）、バセドウ病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｂａｓｅｄｏｗ）、ベヒテレフ病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｂｅｃｈｔｅｒｅｗ、強直性脊椎炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ）、強直性脊椎炎（ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ ａｎｋｙｌｏｓａｎｓ））、ベーチェット症候群（Ｍｏｒｂｕｓ Ｂｅｈｃｅｔ）、自己免疫性炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎（Ｍｏｒｂｕｓ Ｃｒｏｈｎ、クローン病）を含む）を含む腸疾患、自己免疫性心筋症、特発性拡張型心筋症（ＤＣＭ）、慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎（ＣＩＤＰ）、慢性多発性関節炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、ＣＲＥＳＴ症候群（皮膚石灰沈着症、レイノー現象、食道運動障害、強指症（ｓｋｌｅｒｏｄａｋｔｙｌｉａ）、及び毛細血管拡張症を伴う症候群）、クローン病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｃｒｏｈｎ、潰瘍性大腸炎）、ジューリング疱疹状皮膚炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｈｅｒｐｅｔｉｆｏｒｍｉｓ ｄｕｒｉｎｇ）、自己免疫性皮膚疾患、皮膚筋炎、本態性混合型クリオグロブリン血症、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症、線維筋炎、グッドパスチャー症候群（抗ＧＢＭ媒介糸球体腎炎）、移植片対宿主病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＭ、多発性神経根炎）、自己免疫性血液疾患、橋本甲状腺炎、血友病、後天性血友病、自己免疫性肝炎、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、特発性血小板減少性紫斑病、免疫性血小板減少性紫斑病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｗｅｒｌｈｏｆ、ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、自己免疫性不妊症、若年性関節リウマチ（Ｍｏｒｂｕｓ Ｓｔｉｌｌ、スティル症候群）、ランバート・イートン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、紅斑性狼瘡（円板状）、ライム関節炎（ライム病、ボレリア関節炎）、メニエール病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｍｅｎｉｅｒｅ）；混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、多発性硬化症（ＭＳ、播種性脳脊髄炎、シャルコー病）、重症筋無力症（筋無力症、ＭＧ）、筋炎、多発性筋炎、神経自己免疫疾患、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、多腺性（自己免疫性）症候群（ＰＧＡ症候群、シュミット症候群）、リウマチ性多発筋痛症、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性自己免疫性胆管炎、進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、関節リウマチ（ＲＡ、慢性多発性関節炎、関節のリウマチ性疾患、リウマチ熱）、サルコイドーシス（Ｍｏｒｂｕｓ Ｂｏｅｃｋ、ベニエ・ベック・シャウマン病）、スティッフマン症候群、強皮症（Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍｉａ）、強皮症（Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ）、シェーグレン症候群、自己免疫性ブドウ膜炎、及びウェゲナー病（Ｍｏｒｂｕｓ Ｗｅｇｎｅｒ、ウェゲナー肉芽腫症）などの自己免疫疾患に関連する自己抗原であり得る。
いくつかの場合において、ＴＭＰ中に存在するＡＩペプチドは、アジソン病、円形脱毛症、強直性脊椎炎、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫関連不妊症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、水疱性類天疱瘡、クローン病、グッドパスチャー症候群、糸球体腎炎（例えば、半月体形成性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、混合性結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症（ＭＧ）、天疱瘡（例えば、尋常性天疱瘡）、悪性貧血、多発性筋炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血管炎、または白斑に関連するペプチドである。
自己抗原には、例えば、アグリカン、アラニル－ｔＲＮＡ合成酵素（ＰＬ－１２）、アルファベータクリスタリン、アルファフォドリン（Ｓｐｔａｎ １）、アルファ－アクチニン、α１抗キモトリプシン、α１アンチトリプシン、α１マイクログロブリン、アルドラーゼ、アミノアシル－ｔＲＮＡ合成酵素、アミロイド、アネキシン、アポリポタンパク質、アクアポリン、殺菌性／透過性増加タンパク質（ＢＰＩ）、β－グロビン前駆体ＢＰ１、β－アクチン、β－ラクトグロブリンＡ、β－２－糖タンパク質Ｉ、β２－マイクログロブリン、血液型抗原、Ｃ反応性タンパク（ＣＲＰ）、カルモジュリン、カルレティキュリン、カルジオリピン、カタラーゼ、カテプシンＢ、セントロメアタンパク質、コンドロイチン硫酸、クロマチン、コラーゲン、補体成分、シトクロムＣ、シトクロムＰ４５０ ２Ｄ６、サイトケラチン、デコリン、デルマタン硫酸、ＤＮＡトポイソメラーゼＩ、エラスチン、エプスタイン・バー核抗原１（ＥＢＮＡ１）、エラスチン、エンタクチン、可溶性核抗原、Ｉ因子、Ｐ因子、Ｂ因子、Ｄ因子、Ｈ因子、Ｘ因子、フィブリノゲン、フィブロネクチン、ホルムイミノトランスフェラーゼシクロデアミナーゼ（ＬＣ－１）、ｇｐ２１０核エンベロープタンパク質、ＧＰ２（主要チモーゲン顆粒膜糖タンパク質）、グルテニン、糖タンパク質ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、糖化アルブミン、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、ハプトグロビンＡ２、熱ショックタンパク質、ヘモシアニン、ヘパリン、ヒストン、ヒスチジル－ｔＲＮＡ合成酵素（Ｊｏ－１）、ホルデイン、ヒアルロニダーゼ、免疫グロブリン、インテグリン、間質性レチノール結合タンパク質３、内因子、Ｋｕ（ｐ７０／ｐ８０）、乳酸脱水素酵素、ラミニン、肝サイトゾル抗原１型（ＬＣ１）、肝／腎ミクロソーム抗原１（ＬＫＭ１）、リゾチーム、黒色腫分化関連タンパク質５（ＭＤＡＳ）、Ｍｉ－２（クロモドメインヘリカーゼＤＮＡ結合タンパク質４）、ミトコンドリアタンパク質、ムスカリン受容体、ミエリン関連糖タンパク質、ミオシン、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンプロテオリピドタンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）、リウマトイド因子（ＩｇＭ抗ＩｇＧ）、神経特異エノラーゼ、ニコチン性アセチルコリン受容体Ａ鎖、ヌクレオリン、ヌクレオポリン、ヌクレオソーム抗原、ＰＭ／Ｓｃｌ１００、ＰＭ／Ｓｃｌ ７５、膵β細胞抗原、ペプシノゲン、ペルオキシレドキシン１、グルコースリン酸イソメラーゼ、リン脂質、ホスファチジルイノシトール、血小板由来増殖因子、ポリメラーゼベータ（ＰＯＬＢ）、カリウムチャネルＫＩＲ４．１、増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）、プロテイナーゼ－３、プロテオリピドタンパク質、プロテオグリカン、プロトロンビン、リカバリン、ロドプシン、リボヌクレアーゼ、リボ核タンパク質、リボソーム、リボソームリンタンパク質、ＲＮＡ、Ｓｍタンパク質、Ｓｐ１００核タンパク質、ＳＲＰ５４（シグナル認識粒子５４ｋＤａ）、セレクチン、平滑筋タンパク質、スフィンゴミエリン、レンサ球菌抗原、スーパーオキシドジスムターゼ、滑膜関節タンパク質、Ｔ１Ｆ１ガンマコラーゲン、トレオニル－ｔＲＮＡ合成酵素（ＰＬ－７）、組織トランスグルタミナーゼ、甲状腺ペルオキシダーゼ、サイログロブリン、甲状腺刺激ホルモン受容体、トランスフェリン、トリオースリン酸イソメラーゼ、チューブリン、腫瘍壊死因子－アルファ、トポイソメラーゼ、Ｕ１－ｄｎＲＮＰ ６８／７０ｋＤａ、Ｕ１－ｓｎＲＮＰ Ａ、Ｕ１－ｓｎＲＮＰ Ｃ、Ｕ－ｓｎＲＮＰ Ｂ／Ｂ’、ユビキチン、血管内皮増殖因子、ビメンチン、及びビトロネクチンが含まれる。
ＴＭＰ中に含まれるＡＩペプチドは、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）及びセリアック病以外の（またはそれに加えた）自己免疫疾患の治療に有用なものである。したがって、本開示は、セリアック病またはＴ１Ｄ以外の（またはそれに加えた）自己免疫疾患の治療に有用な抗原／エピトープを含むタンパク質構築物（例えば、ＴＭＰ）、及びタンパク質構築物（例えば、ＴＭＰ）（ならびにそのようなタンパク質構築物を含む組成物）を調製する方法を包含するにすぎない。同様に、本開示は、Ｔ１Ｄまたはセリアック病以外の（またはそれに加えた）自己免疫疾患を治療する方法、及びその治療を包含するにすぎない。明確を期すために、Ｔ１Ｄ及び／またはセリアック病以外の自己免疫疾患の治療に有用なＡＩペプチドを含むＴＭＰは、それがまたＴ１Ｄ及び／またはセリアック病の治療に対して何らかの治療上の有益性を提供し得る場合、本開示の範囲から除外されない。同様に、Ｔ１Ｄ及び／またはセリアック病以外の自己免疫疾患を治療する方法、またはその治療は、それがまたＴ１Ｄまたはセリアック病を治療する方法またはその治療としての用途を有し得る場合、本開示の範囲から除外されない。
円形脱毛症（自己免疫性脱毛症）に関連する自己抗原には、例えば、毛包ケラチノサイトポリペプチド、メラニン形成関連自己抗原、及びメラノサイトポリペプチドが含まれる。メラノサイト自己抗原の一例は、チロシナーゼである。自己免疫性脱毛症に関連する自己抗原にはまた、トリコヒアリン（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ．９：５１５３）及びケラチン１６も含まれる。本開示のＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の毛包ケラチノサイトポリペプチド、メラノサイトポリペプチド、メラニン形成関連ポリペプチド、チロシナーゼ、トリコヒアリン、またはケラチン１６のエピトープ提示ペプチドであり得る。
アジソン病に関連する自己抗原には、例えば、２１－ヒドロキシラーゼが含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の２１－ヒドロキシラーゼのエピトープ提示ペプチドであり得る。
自己免疫性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）に関連する自己抗原には、例えば、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨ受容体）、甲状腺ヨウ素輸送体Ｎａ＋／Ｉ共輸送体（ＮＩＳ）、ペンドリンなどが含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の橋本甲状腺炎関連ポリペプチドのうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
クローン病に関連する自己抗原には、例えば、膵分泌顆粒膜糖タンパク質－２（ＧＰ２）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＧＰ２のエピトープ提示ペプチドであり得る。
グッドパスチャー病に関連する自己抗原には、例えば、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖、例えば、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖のアミノ酸１３５～１４５が含まれる（Ｐｅｎａｄｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２９：７５４；Ｋａｌｌｕｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：６２０１）。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＩＶ型コラーゲンのα３鎖のエピトープ提示ペプチドであり得る。
グレーブス病に関連する自己抗原には、例えば、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ、及びチロトロピン受容体（ＴＳＨ－Ｒ）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述のグレーブス病関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
混合性結合組織病に関連する自己抗原には、例えば、Ｕ１リボ核タンパク質（Ｕ１－ＲＮＰ）ポリペプチド（別名ｓｎＲＮＰ７０）が含まれる（Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０６：５５）。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＵ１－ＲＮＰポリペプチドのＡＩペプチドであり得る。
多発性硬化症に関連する自己抗原には、例えば、ミエリン塩基性タンパク質、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質、及びミエリンプロテオリピドタンパク質が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の多発性硬化症関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。非限定的な一例として、ＡＩペプチドは、アミノ酸配列ＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲ（配列番号１５６）を含み得る。いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＤＲＢ１＊１５：０１ ＭＨＣクラスＩＩ β鎖と、アミノ酸配列ＥＮＰＶＶＨＦＦＫＮＩＶＴＰＲ（配列番号１５６）のペプチドエピトープとを含む。
重症筋無力症に関連する自己抗原には、例えば、アセチルコリン受容体（ＡｃｈＲ；例えば、Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ（２０００）Ｍｕｓｃｌｅ ＆ Ｎｅｒｖｅ ２３：４５３を参照されたい）、筋特異的チロシンキナーゼ、及び低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質－４が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の重症筋無力症関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。いくつかの場合において、ＴＭＰに含めるのに好適なエピトープ提示ペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＡｃｈＲのエピトープ提示ペプチドである。
パーキンソン病に関連する自己抗原には、例えば、α－シヌクレインが含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のα－シヌクレインのエピトープ提示ペプチドであり得る。例えば、ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドには、５アミノ酸～完全長の以下のもののうちのいずれか１つのペプチドが含まれる：
（式中、
は、ホスホセリンを表す）。
天疱瘡（例えば、尋常性天疱瘡、落葉性天疱瘡、水疱性類天疱瘡）に関連する自己抗原には、デスモソームカドヘリンデスモグレイン３（Ｄｓｇ３）などの尋常性天疱瘡免疫原；Ｄｓｇ１などの落葉性天疱瘡免疫原；ＢＰ２３０抗原、ＧＰＡＧ１ａ、及びＢＰＡＧ１ｂを含むヘミデスモソームペプチドなどの水疱性類天疱瘡免疫原が含まれる。例えば、Ｃｉｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２１：３７７を参照されたい。水疱性類天疱瘡に関連する自己抗原には、水疱性類天疱瘡抗原１（ＢＰＡＧ１；別名ＢＰ２３０またはジストニン）、水疱性類天疱瘡抗原２（ＢＰＡＧ２；別名ＢＰ１８０またはＸＶＩＩ型コラーゲン）、ならびにヒトインテグリンのサブユニットα－５及びβ－４が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の天疱瘡関連抗原のうちのいずれかのエピトープ提示ペプチドであり得る。
筋炎（例えば、多発性筋炎；皮膚筋炎）に関連する自己抗原には、例えば、ヒスチジルｔＲＮＡ合成酵素が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のヒスチジルｔＲＮＡ合成酵素のエピトープ提示ペプチドであり得る。
関節リウマチに関連する自己抗原には、例えば、コラーゲン、ビメンチン、アグリカン、フィブリノゲン、環状シトルリン化ペプチド、α－エノラーゼ、ヒストンポリペプチド、ラクトフェリン、カタラーゼ、アクチニン、及びアクチン（細胞質１及び２（β／γ）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の関節リウマチ関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
強皮症に関連する自己抗原には、核抗原が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の強皮症に関連する核抗原のエピトープ提示ペプチドであり得る。
シェーグレン症候群に関連する自己抗原には、例えば、Ｒｏ／Ｌａリボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体、アルファ－フォドリン、ベータ－フォドリン、膵島細胞自己抗原、ポリ（ＡＤＰ）リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、核有糸分裂装置（ＮｕＭＡ）、ＮＯＲ－９０、Ｒｏ６０ｋＤ自己抗原、Ｒｏ５２抗原、Ｌａ抗原（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１２８１０７４．１を参照されたい）、及びｐ２７抗原が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述のシェーグレン症候群関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）に関連する自己抗原には、例えば、Ｒｏ６０自己抗原、低密度リポタンパク質、Ｕ－１核内低分子リボ核タンパク質複合体のＳｍ抗原（Ｂ／Ｂ’、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｅ、Ｆ、Ｇ）、α－アクチン１、α－アクチン４、アネキシンＡＩ、Ｃ１ｑ／腫瘍壊死因子関連タンパク質、カタラーゼ、ディフェンシン、クロマチン、ヒストンタンパク質、トランスケトラーゼ、ｈＣＡＰ１８／ＬＬ３７、及びリボ核タンパク質（ＲＮＰ）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述のＳＬＥ関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
血小板減少性紫斑病に関連する自己抗原には、ＡＤＡＭＴＳ１３（トロンボスポンジン１型モチーフ第１３番を有するディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ）、及びフォン・ヴィレブランド因子開裂プロテアーゼ（ＶＷＦＣＰ）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＡＤＡＭＴＳ１３ポリペプチドまたはＶＷＦＣＰポリペプチドのエピトープ提示ペプチドであり得る。
血管炎に関連する自己抗原には、プロテイナーゼ－３、リゾチームＣ、ラクトフェリン、白血球エラスターゼ、カテプシンＧ、及びアズロシジンが含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の血管炎関連抗原のうちのいずれかのエピトープ提示ペプチドであり得る。
白斑に関連する自己抗原には、ＳＯＸ９、ＳＯＸ１０、ＰＭＥＬ（プレメラノソームタンパク質）、チロシナーゼ、ＴＹＲＰ１（チロシン関連タンパク質１）、ＤＤＴ（Ｄ－ドパクロムトートメラーゼ）、Ｒａｂ３８、及びＭＣＨＲ１（メラニン凝集受容体）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の白斑関連ポリペプチドのうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
自己免疫性ブドウ膜炎に関連する自己抗原には、例えば、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）が含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＩＲＢＰのエピトープ提示ペプチドであり得る。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
多腺性自己免疫症候群に関連する自己抗原には、例えば、１７－アルファヒドロキシラーゼ、ヒスチジンデカルボキシラーゼ、トリプトファンヒドロキシラーゼ、及びチロシンヒドロキシラーゼが含まれる。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長の前述の多腺性自己免疫症候群関連抗原のうちのいずれか１つのエピトープ提示ペプチドであり得る。
乾癬に関連する自己抗原には、ＡＤＡＭＴＳ１５が含まれる。例えば、Ｐｒｉｎｚ（２０１７）Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ １６：９７０を参照されたい。ＴＭＰに含めるのに好適なＡＩペプチドは、４アミノ酸～約２５アミノ酸長のＡＤＡＭＴＳ１５ポリペプチドのエピトープ提示ペプチドであり得る。
上述のＡＩペプチドのうちのいずれかは、図２８Ａ～２８Ｂ、図２９Ａ～２９Ｂ、図３０Ａ～３０Ｂ、図３１Ａ～３１Ｂ、及び図３２Ａ～３２Ｂにおいて「Ｘｎ」により表され得、式中、ｎは、４～２５の整数（例えば、４アミノ酸（ａａ）、５アミノ酸、６アミノ酸、７、アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、１０アミノ酸、１１アミノ酸、１２アミノ酸、１３アミノ酸、１４アミノ酸、１５アミノ酸、１６アミノ酸、１７アミノ酸、１８アミノ酸、１９アミノ酸、２０アミノ酸、２１アミノ酸、２２アミノ酸、２３アミノ酸、２４アミノ酸、または２５アミノ酸）である。
核酸
本開示は、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、ＴＭＰが２つの異なるポリペプチド鎖を含む場合、本開示は、ＴＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの両方をコードするヌクレオチド配列を含む、単一の核酸を提供する。別の場合において、ＴＭＰが２つの異なるポリペプチド鎖を含む場合、本開示は、ａ）ＴＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸、及びｂ）ＴＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸を提供する。他の場合において、ＴＭＰが一本鎖ＴＭＰである場合、本開示は、一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、核酸は、組み換え発現ベクターであり、したがって、本開示は、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む組み換え発現ベクターを提供する。
本開示は、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、ＴＭＰが２つの異なるポリペプチド鎖を含む場合、本開示は、ＴＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの両方をコードするヌクレオチド配列を含む、単一の核酸を提供する。別の場合において、ＴＭＰが２つの異なるポリペプチド鎖を含む場合、本開示は、ａ）ＴＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第１の核酸、及びｂ）ＴＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第２の核酸を提供する。他の場合において、ＴＭＰが一本鎖ＴＭＰである場合、本開示は、一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、核酸は、組み換え発現ベクターであり、したがって、本開示は、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む組み換え発現ベクターを提供する。
ＴＭＰの個々のポリペプチド鎖をコードする別個の核酸
本開示は、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰが２つの異なるポリペプチド鎖を含む場合、ＴＭＰの個々のポリペプチド鎖は、別個の核酸にコードされる。いくつかの場合において、ＴＭＰの別個のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素、例えば、プロモーター（真核細胞において機能するプロモーターなど）に作動可能に連結され、プロモーターは、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。
本開示は、本開示のＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰが２つの異なるポリペプチド鎖を含む場合、ＴＭＰの個々のポリペプチド鎖は、別個の核酸にコードされる。いくつかの場合において、ＴＭＰの別個のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素、例えば、プロモーター（真核細胞において機能するプロモーターなど）に作動可能に連結され、プロモーターは、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。
例えば、本開示は、第１の核酸及び第２の核酸を提供し、ここで、第１の核酸は、ＴＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸は、ＴＭＰの第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの場合において、第１及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、転写制御要素に作動可能に連結される。いくつかの場合において、転写制御要素は、真核細胞において機能するプロモーターである。いくつかの場合において、核酸は、別個の発現ベクター中に存在する。
ＴＭＰ中に存在する２つ以上のポリペプチドをコードする単一の核酸
本開示は、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、タンパク質分解により切断可能なリンカーを含む。いくつかの場合において、ＴＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、リボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性加水分解酵素要素、ＣＨＹＳＥＬ）を含む。ＴＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間にタンパク質分解により切断可能なリンカーが提供される核酸の例は、以下に記載され、これらの実施形態のいずれにおいても、タンパク質分解により切断可能なリンカーをコードするヌクレオチド配列の代わりに、ＩＲＥＳまたはリボソームスキッピングシグナルを使用することができる。
本開示は、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、ＴＭＰの第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、タンパク質分解により切断可能なリンカーを含む。いくつかの場合において、ＴＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰの第１のポリペプチドと第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間に挿入された、リボソームスキッピングシグナル（またはシス作用性加水分解酵素要素、ＣＨＹＳＥＬ）を含む。ＴＭＰの第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列との間にタンパク質分解により切断可能なリンカーが提供される核酸の例は、以下に記載され、これらの実施形態のいずれにおいても、タンパク質分解により切断可能なリンカーをコードするヌクレオチド配列の代わりに、ＩＲＥＳまたはリボソームスキッピングシグナルを使用することができる。
いくつかの場合において、第１の核酸（例えば、組み換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、ＴＭＰの第１のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含み、第２の核酸（例えば、組み換え発現ベクター、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡなど）は、ＴＭＰの第２のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。いくつかの場合において、第１のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、及び第２のポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列はそれぞれ、転写制御要素、例えば、プロモーター（真核細胞において機能するプロモーターなど）に作動可能に連結され、プロモーターは、構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。
一本鎖ＴＭＰをコードする核酸
本開示は、本明細書に記載される一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列は、１つ以上の転写制御要素に作動可能に連結される。いくつかの場合において、転写制御要素は、真核細胞において機能するプロモーターである。
本開示は、本明細書に記載される一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。いくつかの場合において、一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列は、１つ以上の転写制御要素に作動可能に連結される。いくつかの場合において、転写制御要素は、真核細胞において機能するプロモーターである。
組み換え発現ベクター
本開示は、本開示の核酸を含む、組み換え発現ベクターを提供する。いくつかの場合において、組み換え発現ベクターは、非ウイルスベクターである。いくつかの場合において、組み換え発現ベクターは、ウイルスコンストラクト、例えば、組み換えアデノ随伴ウイルスコンストラクト（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号参照）、組み換えアデノウイルスコンストラクト、組み換えレンチウイルスコンストラクト、組み換えレトロウイルスコンストラクト、非組み込み型ウイルスベクターなどである。
本開示は、本開示の核酸を含む、組み換え発現ベクターを提供する。いくつかの場合において、組み換え発現ベクターは、非ウイルスベクターである。いくつかの場合において、組み換え発現ベクターは、ウイルスコンストラクト、例えば、組み換えアデノ随伴ウイルスコンストラクト（例えば、米国特許第７，０７８，３８７号参照）、組み換えアデノウイルスコンストラクト、組み換えレンチウイルスコンストラクト、組み換えレトロウイルスコンストラクト、非組み込み型ウイルスベクターなどである。
好適な発現ベクターには、ウイルスベクター（例えば、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、アデノウイルスをベースにするウイルスベクター（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ３５：２５４３ ２５４９，１９９４；Ｂｏｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ６：５１５ ５２４，１９９９；Ｌｉ ａｎｄ Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ ９２：７７００ ７７０４，１９９５；Ｓａｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ５：１０８８ １０９７，１９９９；ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９、ＷＯ９３／１９１９１、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９５／１１９８４及びＷＯ９５／００６５５参照）、アデノ随伴ウイルス（例えば、Ａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ９：８１ ８６，１９９８、Ｆｌａｎｎｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９４：６９１６ ６９２１，１９９７；Ｂｅｎｎｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ３８：２８５７ ２８６３，１９９７；Ｊｏｍａｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ４：６８３ ６９０，１９９７、Ｒｏｌｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １０：６４１ ６４８，１９９９；Ａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ ５：５９１ ５９４，１９９６；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ＷＯ９３／０９２３９、Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒ．（１９８９）６３：３８２２－３８２８；Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．（１９８８）１６６：１５４－１６５；及びＦｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ（１９９３）９０：１０６１３－１０６１７参照）、ＳＶ４０、単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９４：１０３１９ ２３，１９９７；Ｔａｋａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７３：７８１２ ７８１６，１９９９参照）、レトロウイルスベクター（例えば、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ならびにラウス肉腫ウイルス、Ｈａｒｖｅｙ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス及び乳腺腫瘍ウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクター）などが含まれるが、これらに限定されない。多数の好適な発現ベクターが当業者に知られており、多くが市販されている。
使用される宿主／ベクター系に応じて、構成性及び誘導性プロモーター、転写エンハンサー要素、転写ターミネーターなどを含む多数の好適な転写及び翻訳制御要素のいずれかを発現ベクターに使用することができる（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５３：５１６－５４４参照）。
いくつかの場合において、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列は、制御要素、例えば、プロモーターなどの転写制御要素に作動可能に連結される。転写制御要素は、真核細胞（例えば、哺乳類細胞）または原核細胞（例えば、細菌または古細菌細胞）のいずれかで機能的であり得る。いくつかの場合において、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列は、当該ヌクレオチド配列を原核細胞及び真核細胞の両方で発現させることが可能な複数の制御要素に作動可能に連結される。
好適な真核生物プロモーター（真核細胞で機能するプロモーター）の非限定的な例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）前初期単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ、前期及び後期ＳＶ４０、レトロウイルス由来の長い末端反復（ＬＴＲ）、ならびにマウスメタロチオネイン－Ｉに由来するものが挙げられる。適切なベクター及びプロモーターの選択は、十分に当業者の技術レベルの範囲内である。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位及び転写ターミネーターを含有する。発現ベクターはまた、発現の増幅に適切な配列を含み得る。
遺伝子改変された宿主細胞
本開示は、遺伝子改変された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、本開示の核酸（複数可）で遺伝子改変されている。本開示は、遺伝子改変された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、本開示の組み換え発現ベクターで遺伝子改変されている。
本開示は、遺伝子改変された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、本開示の核酸（複数可）で遺伝子改変されている。本開示は、遺伝子改変された宿主細胞を提供し、当該宿主細胞は、本開示の組み換え発現ベクターで遺伝子改変されている。
好適な宿主細胞には、酵母細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞などの真核細胞が含まれる。いくつかの場合において、宿主細胞は、哺乳類細胞株の細胞である。好適な哺乳類細胞株には、ヒト細胞株、非ヒト霊長類細胞株、げっ歯類（例えば、マウス、ラット）細胞株などが含まれる。好適な哺乳類細胞株には、ＨｅＬａ細胞（例えば、米国培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）番号ＣＣＬ－２）、ＣＨＯ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ９６１８、ＣＣＬ６１、ＣＲＬ９０９６）、２９３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１５７３）、Ｖｅｒｏ細胞、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ－１６５８）、Ｈｕｈ－７細胞、ＢＨＫ細胞（例えば、ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ１０）、ＰＣ１２細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１７２１）、ＣＯＳ細胞、ＣＯＳ－７細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１６５１）、ＲＡＴ１細胞、マウスＬ細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＣＬＩ．３）、ヒト胎児腎細胞（ＨＥＫ）細胞（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）、ＨＬＨｅｐＧ２細胞などが含まれるが、これらに限定されない。
遺伝子改変された宿主細胞を使用して、ＴＭＰを産生することができる。ポリペプチド（複数可）をコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む発現ベクター（複数可）を宿主細胞に導入して、遺伝子改変された宿主細胞を生成し、その遺伝子改変された宿主細胞がポリペプチド（複数可）を産生する。例えば、遺伝子改変された宿主細胞によってＴＭＰが合成されるような条件下で、遺伝子改変された宿主細胞を好適な培養培地中で培養する。その後、遺伝子改変された宿主細胞の培養培地及び／またはライセートからＴＭＰを得ることができる。ＴＭＰは、細胞培養培地及び／または細胞ライセートから精製することができる。
ＴＭＰを産生する方法
本開示は、本開示のＴＭＰを産生する方法を提供する。方法は、概して、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む組み換え発現ベクター（複数可）で遺伝子改変された宿主細胞（例えば、本開示の遺伝子改変された宿主細胞）を培養培地中で培養することと、遺伝子改変された宿主細胞及び／または培養培地からＴＭＰを単離することと、を含む。上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰの個々のポリペプチド鎖は、別個の組み換え発現ベクターにコードされる。いくつかの場合において、ＴＭＰの全てのポリペプチド鎖は、１つの組み換え発現ベクターにコードされる。ＴＭＰが一本鎖ＴＭＰである場合、１つの組み換え発現ベクターが一本鎖ＴＭＰをコードする。
本開示は、本開示のＴＭＰを産生する方法を提供する。方法は、概して、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む組み換え発現ベクター（複数可）で遺伝子改変された宿主細胞（例えば、本開示の遺伝子改変された宿主細胞）を培養培地中で培養することと、遺伝子改変された宿主細胞及び／または培養培地からＴＭＰを単離することと、を含む。上記のとおり、いくつかの場合において、ＴＭＰの個々のポリペプチド鎖は、別個の組み換え発現ベクターにコードされる。いくつかの場合において、ＴＭＰの全てのポリペプチド鎖は、１つの組み換え発現ベクターにコードされる。ＴＭＰが一本鎖ＴＭＰである場合、１つの組み換え発現ベクターが一本鎖ＴＭＰをコードする。
発現宿主細胞（例えば、遺伝子改変した宿主細胞のライセート）及び／または宿主細胞を培養した培養培地からのＴＭＰの単離は、標準的なタンパク質精製方法を用いて実施することができる。
例えば、発現宿主のライセートを調製し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー）、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、または他の精製技術を用いてライセートを精製することができる。あるいは、ＴＭＰが発現宿主細胞から培養培地中に分泌される場合、ＴＭＰは、ＨＰＬＣ、排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、または他の精製技術を用いて培養培地から精製することができる。いくつかの場合において、ＴＭＰは、精製され、例えば、産生物の調製及びその精製の方法に関連する夾雑物に対して、少なくとも８０重量％、少なくとも約８５重量％、少なくとも約９５重量％、または少なくとも約９９．５重量％のＴＭＰを含む組成物が生成される。百分率は、総タンパク質に基づき得る。
いくつかの場合において、例えば、ＴＭＰがアフィニティータグを含む場合、ＴＭＰは、アフィニティータグの固定化結合パートナーを用いて精製することができる。例えば、ＴＭＰがＩｇ Ｆｃポリペプチドを含む場合、ＴＭＰは、遺伝子改変された哺乳動物宿主細胞及び／または哺乳動物細胞を培養した培養培地から単離することができ、ＴＭＰまたはＡＰＰの単離は、アフィニティークロマトグラフィー、例えば、プロテインＡカラム、プロテインＧカラムなどによって行うことができる。好適な哺乳動物細胞の一例は、ＣＨＯ細胞、例えば、Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ－Ｓ（商標）細胞（例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，カタログ番号Ａ２９１２７）である。
いくつかの場合において、ＴＭＰの第１及び第２のポリペプチドは、第１及び第２のポリペプチド中の上述のＣｙｓ残基間にジスルフィド結合を自発的に形成することによって、ヘテロ二量体に自己アセンブリする。また、上記のとおり、両方のヘテロ二量体がＩｇ Ｆｃポリペプチドを含む場合、それぞれのＩｇ Ｆｃポリペプチドの間にジスルフィド結合が自発的に形成され、２つのヘテロ二量体を互いに共有結合的に連結する。
組成物
本開示は、本開示のＴＭＰを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。本開示は、本開示の核酸または組み換え発現ベクターを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。
本開示は、本開示のＴＭＰを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。本開示は、本開示の核酸または組み換え発現ベクターを含む組成物（医薬組成物を含む）を提供する。
ＴＭＰを含む組成物
本開示の組成物は、ＴＭＰに加えて、１つ以上の薬学的に許容される構成成分／賦形剤：塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４など；緩衝剤、例えば、Ｔｒｉｓ緩衝液、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（２－エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－トリス［ヒドロキシメチル］メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－２０などの非イオン性界面活性剤；プロテアーゼ阻害剤；グリセロールなどを含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ Ｅｄ．（１９９５）または最新版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ；Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．を含む、様々な公開物中に十分記載されている。
本開示の組成物は、ＴＭＰに加えて、１つ以上の薬学的に許容される構成成分／賦形剤：塩、例えば、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４など；緩衝剤、例えば、Ｔｒｉｓ緩衝液、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－Ｎ’－（２－エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム塩（ＭＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ－トリス［ヒドロキシメチル］メチル－３－アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）など；可溶化剤；界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－２０などの非イオン性界面活性剤；プロテアーゼ阻害剤；グリセロールなどを含み得る。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，１９ｔｈ Ｅｄ．（１９９５）または最新版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ；Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃ．を含む、様々な公開物中に十分記載されている。
医薬組成物は、ｉ）本開示のＴＭＰと、ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤と、を含み得る。いくつかの場合において、主題の医薬組成物は、対象への投与に好適なものであり、例えば、無菌である。例えば、いくつかの場合において、主題の医薬組成物は、ヒト対象への投与に好適なものであり、例えば、組成物は、無菌であり、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含まないか、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素の量が許容限界を下回るものである。
例えば、組成物は、水溶液、粉末形態、顆粒剤、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル剤、懸濁剤、スプレーなどを含み得る。組成物は、以下に記載される様々な投与経路に応じて製剤化され得る。
ＴＭＰが注射剤として組織に直接投与される場合（例えば、皮下、腹腔内、筋肉内、リンパ管内、及び／または静脈内投与）、製剤は、即時使用可能な剤形として、または非水性形態（例えば、再構成可能な貯蔵安定性粉末）もしくは薬学的に許容される担体及び賦形剤で構成される液剤などの水性形態として、提供することができる。タンパク質含有製剤はまた、投与後の主題タンパク質の血清半減期を延長するように提供することもできる。例えば、タンパク質は、コロイドとして調製されたリポソーム製剤、または血清半減期を延長する他の従来技術で提供され得る。リポソームの調製には、例えば、Ｓｚｏｋａ ｅｔ ａｌ．１９８０ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７、米国特許第４，２３５，８７１号，同第４，５０１，７２８号及び同第４，８３７，０２８号に記載されるような様々な方法が利用可能である。調製物はまた、制御放出形態または徐放性形態で提供されてもよい。
いくつかの場合において、本開示の組成物は、ａ）ＴＭＰと、ｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）と、を含む。いくつかの場合において、組成物は、無菌である。いくつかの場合において、組成物は、ヒト対象への投与に好適なものであり、例えば、組成物は、無菌であり、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含まない。したがって、本開示は、ａ）本開示のＴＭＰと、ｂ）生理食塩水（例えば、０．９％ＮａＣｌ）とを含む、組成物を提供し、当該組成物は、無菌であり、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素を含まないか、検出可能な発熱物質及び／または他の毒素が許容限界を下回るものである。製剤中におけるＴＭＰの濃度は、大きく変えることができ（例えば、約０．１％未満（通常、約２％または少なくとも約２％）から２０重量％～５０重量％までまたはそれ以上）、選択された特定の投与様式及び患者の必要性に従って、主に、液量、粘度、及び患者による因子に基づいて通常選択される。
本開示は、本開示の組成物、例えば、液体組成物を含む、容器を提供する。容器は、例えば、シリンジ、アンプルなどであってよい。いくつかの場合において、容器は、無菌である。いくつかの場合において、容器も組成物も無菌である。
核酸または組み換え発現ベクターを含む組成物
本開示は、本開示の核酸または組み換え発現ベクターを含む組成物、例えば、医薬組成物を提供する。薬学的に許容される賦形剤は、多種多様なものが当該技術分野において知られており、本明細書で詳細に論じる必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃを含む、様々な公開物中に十分記載されている。
本開示は、本開示の核酸または組み換え発現ベクターを含む組成物、例えば、医薬組成物を提供する。薬学的に許容される賦形剤は、多種多様なものが当該技術分野において知られており、本明細書で詳細に論じる必要はない。薬学的に許容される賦形剤は、例えば、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９９９）Ｈ．Ｃ．Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ ７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；及びＨａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（２０００）Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，３ｒｄ ｅｄ．Ａｍｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃを含む、様々な公開物中に十分記載されている。
本開示の医薬製剤は、核酸または組み換え発現ベクターを、約０．００１％～約９０％（ｗ／ｗ）の量で含み得る。製剤の以下の記載において、「主題の核酸または組み換え発現ベクター」は核酸または組み換え発現ベクターを含むことが理解される。例えば、いくつかの場合において、主題の製剤は、核酸または組み換え発現ベクターを含む。
主題の核酸または組み換え発現ベクターは、他の化合物または化合物の混合物との混合、カプセル化、コンジュゲート、または別の方法による会合が可能であり、かかる化合物には、例えば、リポソームまたは受容体標的分子が含まれ得る。主題の核酸または組み換え発現ベクターは、取り込み、分布及び／または吸収を助ける１つ以上の成分と組み合わせて製剤にすることができる。
方法
本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節する方法であって、一般に、標的Ｔ細胞を本開示のＴＭＰに接触させることを伴う、方法を提供する。
本開示のＴＭＰは、Ｔ細胞の活性の調節に有用である。したがって、本開示は、Ｔ細胞の活性を調節する方法であって、一般に、標的Ｔ細胞を本開示のＴＭＰに接触させることを伴う、方法を提供する。
本開示は、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、Ｔ細胞をＴＭＰに接触させることを含み、Ｔ細胞をＴＭＰに接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、方法を提供する。いくつかの場合において、接触は、ｉｎ ｖｉｖｏで生じる。いくつかの場合において、接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生じる。
したがって、本開示は、ＴＧＦ－βポリペプチドをエピトープ特異的標的Ｔ細胞に選択的に送達する方法であって、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含むＴＭＰとＴ細胞を接触させることを含み、マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含むＴＭＰとエピトープ特異的Ｔ細胞を接触させることにより、エピトープ特異的Ｔ細胞にＴＧＦ－β調節を選択的にもたらす、方法も提供する。いくつかの場合において、接触は、ｉｎ ｖｉｖｏで生じる。いくつかの場合において、接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生じる。本明細書で使用される場合、「選択的に送達する」及び「選択的に提供する」という表現は、ＴＭＰがＴＧＦ－β調節をもたらすＴ細胞の大部分が、ＴＭＰのエピトープに特異的または優先的に結合するＴＣＲを含んでいることを意味する。
いくつかの場合において、ＴＭＰは、自己反応性Ｔ細胞及び／または自己反応性Ｂ細胞の活性を低下させる。いくつかの場合において、ＴＭＰは、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数及び／または活性を増大させ、これにより、自己反応性Ｔ細胞及び／または自己反応性Ｂ細胞の活性の低下をもたらす。
いくつかの場合において、ＴＭＰに接触させるＴ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）である。Ｔｒｅｇは、ＣＤ４＋、ＦＯＸＰ３＋、及びＣＤ２５＋である。Ｔｒｅｇは、自己反応性Ｔ細胞を抑制することができる。いくつかの場合において、本開示の方法は、Ｔｒｅｇを活性化し、それにより、自己反応性Ｔ細胞の活性を低下させる。
本開示は、Ｔｒｅｇの増殖を増加させる方法であって、ＴｒｅｇをＴＭＰに接触させることを含み、当該接触させることは、Ｔｒｅｇの増殖を増加させる、方法を提供する。本開示は、個体におけるＴｒｅｇの数を増加させる方法であって、個体にＴＭＰを投与することを含み、当該投与することにより、個体におけるＴｒｅｇの数の増加をもたらす、方法を提供する。例えば、Ｔｒｅｇの数は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または１０倍を超えて増加し得る。
治療方法
本開示は、治療方法であって、個体におけるエピトープ特異的（例えば、ＡＩペプチド特異的）Ｔ細胞の活性を選択的に調節し、個体を治療するのに有効な量の本開示のＴＭＰ、またはＴＭＰをコードする１つ以上の核酸もしくは発現ベクターを個体に投与することを含む、治療方法を提供する。いくつかの場合において、本開示の治療方法は、それを必要とする個体に、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の組み換え発現ベクターを投与すること含む。いくつかの場合において、治療方法は、それを必要とする個体に、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上のｍＲＮＡ分子を投与することを含む。いくつかの場合において、本開示の治療方法は、それを必要とする個体に、ＴＭＰを投与することを含む。ＴＭＰは、自己免疫疾患の治療に有用である。ＴＭＰはまた、代謝疾患及び障害の治療にも有用である。
本開示は、治療方法であって、個体におけるエピトープ特異的（例えば、ＡＩペプチド特異的）Ｔ細胞の活性を選択的に調節し、個体を治療するのに有効な量の本開示のＴＭＰ、またはＴＭＰをコードする１つ以上の核酸もしくは発現ベクターを個体に投与することを含む、治療方法を提供する。いくつかの場合において、本開示の治療方法は、それを必要とする個体に、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の組み換え発現ベクターを投与すること含む。いくつかの場合において、治療方法は、それを必要とする個体に、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上のｍＲＮＡ分子を投与することを含む。いくつかの場合において、本開示の治療方法は、それを必要とする個体に、ＴＭＰを投与することを含む。ＴＭＰは、自己免疫疾患の治療に有用である。ＴＭＰはまた、代謝疾患及び障害の治療にも有用である。
エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を調節する方法
本開示は、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、個体に、有効量のＴＭＰ、またはＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を投与することを含み、ＴＭＰは、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、方法を提供する。エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節することは、個体の疾患または障害を治療することができる。したがって、本開示は、治療方法であって、それを必要とする個体に、有効量のＴＭＰを投与すること含む、治療方法を提供する。有効量のＴＭＰを投与することを含む本開示の治療方法は、自己免疫疾患の治療に好適である。
本開示は、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する方法であって、個体に、有効量のＴＭＰ、またはＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸（例えば、発現ベクター、ｍＲＮＡなど）を投与することを含み、ＴＭＰは、個体におけるエピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節する、方法を提供する。エピトープ特異的Ｔ細胞の活性を選択的に調節することは、個体の疾患または障害を治療することができる。したがって、本開示は、治療方法であって、それを必要とする個体に、有効量のＴＭＰを投与すること含む、治療方法を提供する。有効量のＴＭＰを投与することを含む本開示の治療方法は、自己免疫疾患の治療に好適である。
自己免疫疾患を治療する方法
本開示は、個体の自己免疫疾患を治療する方法であって、個体に、有効量のＴＭＰ、またはＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を投与することを含み、ＴＭＰは、ＡＩペプチド（上記のとおり）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰの「有効量」は、それを必要とする個体に１以上の用量で投与されたとき、自己反応性（すなわち、自己免疫疾患関連抗原と反応する）ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の数が、ＴＭＰの投与前、またはＴＭＰによる投与のない状態の個体における自己反応性Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少する量である。いくつかの場合において、ＴＭＰの「有効量」は、それを必要とする個体に１以上の用量で投与されたとき、当該個体におけるＴｈ２サイトカインの産生が減少する量である。いくつかの場合において、ＴＭＰの「有効量」は、それを必要とする個体に１以上の用量で投与されたとき、当該個体の自己免疫疾患に関連する１つ以上の症状を改善する量である。いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＣＤ４＋自己反応性Ｔ細胞の数（すなわち、自己免疫疾患関連抗原と反応するＣＤ４＋Ｔ細胞の数）を減少させ、それにより、ＣＤ８＋自己反応性Ｔ細胞の減少が生じる。いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの数を増加させ、それにより、ＣＤ４＋自己反応性Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ自己反応性Ｔ細胞の数が減少する。
本開示は、個体の自己免疫疾患を治療する方法であって、個体に、有効量のＴＭＰ、またはＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸を投与することを含み、ＴＭＰは、ＡＩペプチド（上記のとおり）を含む。いくつかの場合において、ＴＭＰの「有効量」は、それを必要とする個体に１以上の用量で投与されたとき、自己反応性（すなわち、自己免疫疾患関連抗原と反応する）ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の数が、ＴＭＰの投与前、またはＴＭＰによる投与のない状態の個体における自己反応性Ｔ細胞の数と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％減少する量である。いくつかの場合において、ＴＭＰの「有効量」は、それを必要とする個体に１以上の用量で投与されたとき、当該個体におけるＴｈ２サイトカインの産生が減少する量である。いくつかの場合において、ＴＭＰの「有効量」は、それを必要とする個体に１以上の用量で投与されたとき、当該個体の自己免疫疾患に関連する１つ以上の症状を改善する量である。いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＣＤ４＋自己反応性Ｔ細胞の数（すなわち、自己免疫疾患関連抗原と反応するＣＤ４＋Ｔ細胞の数）を減少させ、それにより、ＣＤ８＋自己反応性Ｔ細胞の減少が生じる。いくつかの場合において、ＴＭＰは、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇの数を増加させ、それにより、ＣＤ４＋自己反応性Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ自己反応性Ｔ細胞の数が減少する。
上記のとおり、いくつかの場合において、主題の治療方法の実施にあたり、ＴＭＰは、それを必要とする個体に、ポリペプチドそのものとして投与される。他の場合において、主題の治療方法の実施にあたり、ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む１つ以上の核酸が、それを必要とする個体に投与される。したがって、他の場合において、本開示の１つ以上の核酸、例えば、本開示の１つ以上の組み換え発現ベクターが、それを必要とする個体に投与される。
代謝疾患及び障害を治療する方法
本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含むＴＭＰ、及び／または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含むＴＭＰをコードする１つ以上の核酸（例えば、組み換え発現ベクター）を使用して、代謝疾患及び障害を治療してもよい。
本明細書に記載のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含むＴＭＰ、及び／または１つ以上のマスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤを含むＴＭＰをコードする１つ以上の核酸（例えば、組み換え発現ベクター）を使用して、代謝疾患及び障害を治療してもよい。
代謝は、食物を、身体を生き永らえさせる燃料に変換するために身体が使用する化学プロセスである。栄養素（食物）は、タンパク質、炭水化物、及び脂肪からなる。これらの物質は、消化系の酵素によって分解され、次いで細胞に運搬されて、細胞でそれらが燃料として使用され得る。身体は、これらの物質を直ちに使用するか、またはそれらを後の使用のために肝臓、体脂肪、及び筋組織に貯蔵する。先天性または後天性のいずれでもあり得る代謝障害は、身体の代謝が妨げられる障害であり、身体によるタンパク質、脂肪、及び炭水化物などの多量栄養素のプロセシング及び分布を有害な方向に変化させ得る。代謝障害は、体内の異常な化学反応が正常な代謝プロセスを変化させる場合に起こり得る。
遺伝的欠陥によって引き起こされる数百種の先天性代謝障害が存在する。例としては、家族性高コレステロール血症、ゴーシェ病、ハンター症候群、クラッベ病、メープルシロップ尿症、異染性白質ジストロフィー、嚢胞性線維症、ミトコンドリア脳筋症、乳酸アシドーシス、脳卒中様発作（ＭＥＬＡＳ）、ニーマン・ピック、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、ポルフィリン症、鎌状赤血球貧血、テイサックス病、及びウィルソン病が挙げられる。
人の生涯の間に後天的に起こる代謝障害である後天性代謝障害は、様々な因子からもたらされ得る。そのような障害には、例えば、インスリン耐性及び／またはインスリン分泌不全からもたらされ得る２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）；肥満、前Ｔ２Ｄ及びＴ２Ｄに密接に関連するＮＡＦＬＤの重症型である非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）が含まれる。
マスキングされたＴＧＦ－β ＭＯＤ、及び任意選択により上述のバリアントＩＬ－２ ＭＯＤなどの追加のＭＯＤを含む、ＴＭＰは、Ｔｒｅｇ及び他の免疫調節タンパク質の産生を刺激することができるため、そのようなＴＭＰを使用して、とりわけＴ２Ｄ及びＮＡＳＨなどのＮＡＦＬＤを含む、そのような先天性及び後天性代謝障害を治療してもよい。
用量
好適な用量は、様々な臨床学的因子に基づき、主治医または他の有資格医療関係者によって決定され得る。医療分野においてよく知られているように、任意のある患者に対する用量は、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与の時間及び経路、全般的な健康状態、ならびに同時に投与される他の薬物を含む、多くの因子に依存する。ＴＭＰ（単一のヘテロ二量体として；一緒に連結された２つのヘテロ二量体を含むホモ二量体として；一緒に連結された２つのヘテロ二量体を含むヘテロ二量体として；一本鎖ＴＭＰとして；一緒に連結された２つの一本鎖ＴＭＰを含むホモ二量体として；または一緒に連結された２つの一本鎖ＴＭＰを含むヘテロ二量体として）は、１用量あたり１ｎｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～０．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～１ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重～１５ｍｇ／ｋｇ体重、及び１５ｍｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与され得るが、前述の因子を特に考慮した上で、０．１ｍｇ／ｋｇ体重を下回る用量または２０ｍｇ／ｋｇを上回る用量も想定される。したがって、量には、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重が含まれる。レジメンが持続注入である場合、１μｇ～１０ｍｇ／ｋｇ体重／分の範囲内であってもよい。
好適な用量は、様々な臨床学的因子に基づき、主治医または他の有資格医療関係者によって決定され得る。医療分野においてよく知られているように、任意のある患者に対する用量は、患者の体格、体表面積、年齢、投与される特定のポリペプチドまたは核酸、患者の性別、投与の時間及び経路、全般的な健康状態、ならびに同時に投与される他の薬物を含む、多くの因子に依存する。ＴＭＰ（単一のヘテロ二量体として；一緒に連結された２つのヘテロ二量体を含むホモ二量体として；一緒に連結された２つのヘテロ二量体を含むヘテロ二量体として；一本鎖ＴＭＰとして；一緒に連結された２つの一本鎖ＴＭＰを含むホモ二量体として；または一緒に連結された２つの一本鎖ＴＭＰを含むヘテロ二量体として）は、１用量あたり１ｎｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～０．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～１ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重～５ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重～１０ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重～１５ｍｇ／ｋｇ体重、及び１５ｍｇ／ｋｇ体重～２０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与され得るが、前述の因子を特に考慮した上で、０．１ｍｇ／ｋｇ体重を下回る用量または２０ｍｇ／ｋｇを上回る用量も想定される。したがって、量には、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重が含まれる。レジメンが持続注入である場合、１μｇ～１０ｍｇ／ｋｇ体重／分の範囲内であってもよい。
当業者であれば、体液または組織において測定された投与薬剤の滞留時間及び濃度に基づいて、反復投与頻度を容易に推定することができる。治療が成功した後、自己免疫疾患状態の再発を予防するために、患者に維持療法を受けさせることが望ましい場合もあり、この場合、ＴＭＰは、上に列挙される範囲、すなわち、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の維持用量で投与される。
当業者であれば、用量レベルが、具体的なＴＭＰ、症状の重症度、及び副作用に対する対象の感受性に応じて変わり得ることは容易に理解するであろう。所与の化合物に好ましい用量は、様々な手段により、当業者によって容易に決定される。
いくつかの場合において、複数回用量のＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターが投与される。ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターの投与頻度は、様々な因子のいずれか、例えば、症状の重症度、患者の応答などに応じて変わり得る。例えば、いくつかの場合において、ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターは、月１回よりも少ない頻度、例えば、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、もしくは１２ヶ月に１回、月１回、月２回、月３回、隔週（ｑｏｗ）、３週間に１回、４週間に１回、週１回（ｑｗ）、週２回（ｂｉｗ）、週３回（ｔｉｗ）、週４回、週５回、週６回、隔日（ｑｏｄ）、１日１回（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）投与される。
ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターの投与継続期間、例えば、ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターが投与される期間は、様々な因子のいずれか、例えば、患者の応答などに応じて変わり得る。例えば、ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターは、約１日～約１週間、約２週間～約４週間、約１ヶ月～約２ヶ月、約２ヶ月～約４ヶ月、約４ヶ月～約６ヶ月、約６ヶ月～約８ヶ月、約８ヶ月～約１年、約１年～約２年、もしくは約２年～約４年またはそれ以上に及ぶ期間にわたって投与され得、患者の生涯にわたる連続投与を含む。
治療が一定の継続期間のものである場合、治療が成功した後、自己免疫疾患状態の再発を予防するために、患者に維持療法を受けさせることが望ましい場合もあり、この場合、ＴＭＰは、上に列挙される範囲、すなわち、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約０．５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重～約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約２０ｍｇ／ｋｇ体重～約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約２５ｍｇ／ｋｇ体重～約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約３０ｍｇ／ｋｇ体重～約３５ｍｇ／ｋｇ体重、約３５ｍｇ／ｋｇ体重～約４０ｍｇ／ｋｇ体重、または約４０ｍｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の維持用量で投与される。
投与経路
活性剤（ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクター）は、ｉｎ ｖｉｖｏ法及びｉｎ ｖｉｔｒｏ法、ならびに全身及び局所投与経路を含む、薬物送達に好適な任意の利用可能な方法及び経路を使用して個体に投与される。ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターは、全身または局所経路を含む、従来の薬物の送達に好適な任意の利用可能な従来の方法及び経路を使用して宿主に投与することができる。一般に、本開示の方法での使用が企図される投与経路には、経腸、非経口及び吸入経路が含まれるが、必ずしもこれらに限定されない。
活性剤（ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクター）は、ｉｎ ｖｉｖｏ法及びｉｎ ｖｉｔｒｏ法、ならびに全身及び局所投与経路を含む、薬物送達に好適な任意の利用可能な方法及び経路を使用して個体に投与される。ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターは、全身または局所経路を含む、従来の薬物の送達に好適な任意の利用可能な従来の方法及び経路を使用して宿主に投与することができる。一般に、本開示の方法での使用が企図される投与経路には、経腸、非経口及び吸入経路が含まれるが、必ずしもこれらに限定されない。
従来の薬学的に許容される投与経路には、筋肉内、気管内、リンパ管内、皮下、皮内、局所適用、静脈内、動脈内、経直腸、経鼻、経口、ならびに他の経腸及び非経口の投与経路が含まれる。このうち、静脈内、筋肉内及び皮下がより一般的に採用され得る。投与経路は、ＴＭＰ及び／または所望の効果に応じて、組み合わされてもよいし、所望により調節されてもよい。ＴＭＰ、または核酸もしくは組み換え発現ベクターは、単回投与または複数回投与で投与され得る。
いくつかの場合において、ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターは、静脈内投与される。いくつかの場合において、ＴＭＰ、核酸、または組み換え発現ベクターは、筋肉内投与される。いくつかの場合において、ＴＭＰ、本開示の核酸、または組み換え発現ベクターは、リンパ管内投与される。いくつかの場合において、ＴＭＰ、本開示の核酸、または組み換え発現ベクターは、皮下投与される。
治療に好適な対象
本開示の方法による治療に好適な対象には、自己免疫疾患を有する個体が含まれ、これには、自己免疫疾患であると診断された個体、及び自己免疫疾患に対する治療を受けたが、当該治療に応答しなかった個体が含まれる。好適な対象には、自己免疫疾患を発症する可能性があると診断された個体、または自己免疫疾患の発症が差し迫っていることを示す症状を有する個体も含まれ得る。
本開示の方法による治療に好適な対象には、自己免疫疾患を有する個体が含まれ、これには、自己免疫疾患であると診断された個体、及び自己免疫疾患に対する治療を受けたが、当該治療に応答しなかった個体が含まれる。好適な対象には、自己免疫疾患を発症する可能性があると診断された個体、または自己免疫疾患の発症が差し迫っていることを示す症状を有する個体も含まれ得る。
本開示の方法による治療に好適な対象には、とりわけＴ２Ｄ及びＮＡＳＨなどのＮＡＦＬＤを含む、先天性及び後天性代謝障害を有する個体が含まれる。
本開示の非限定的態様の例
態様セットＡ
上に記載される本主題の実施形態を含む態様は、単独でも、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態との組み合わせでも有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様が以下に記載される。本開示を読めば当業者には明らかであるように、個々に番号が付された態様のそれぞれは、個々に番号が付された先行の態様または後述の態様のいずれかとともに使用または組み合わせられてもよい。これは、全てのそのような態様の組み合わせに対する裏付けを提供することを意図しており、以下に明示的に記載される態様の組み合わせに限定されるものではない。
態様セットＡ
上に記載される本主題の実施形態を含む態様は、単独でも、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態との組み合わせでも有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様が以下に記載される。本開示を読めば当業者には明らかであるように、個々に番号が付された態様のそれぞれは、個々に番号が付された先行の態様または後述の態様のいずれかとともに使用または組み合わせられてもよい。これは、全てのそのような態様の組み合わせに対する裏付けを提供することを意図しており、以下に明示的に記載される態様の組み合わせに限定されるものではない。
態様１．ａ）Ｔ細胞受容体が結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチド（「ＡＩペプチド」）と、
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、
ｃ）マスキングポリペプチドであって、任意選択により、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、前記マスキングポリペプチドと、
ｄ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、
ｅ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、
ｆ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と
を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、
任意選択により、前記ＴＭＰは、骨格ポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ＴＭＰは、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む、
前記ＴＭＰ。
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、
ｃ）マスキングポリペプチドであって、任意選択により、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、前記マスキングポリペプチドと、
ｄ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、
ｅ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、
ｆ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と
を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、
任意選択により、前記ＴＭＰは、骨格ポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ＴＭＰは、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む、
前記ＴＭＰ。
態様２．前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、ＩＬ－２ポリペプチド、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド、４－１ＢＢＬポリペプチド、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１に記載のＴＭＰ。
態様３．前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドであり、任意選択により、前記ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドは、ＰＤ－Ｌ１ポリペプチド細胞外ドメインを含む、態様１または２に記載のＴＭＰ。
態様４．前記ＰＤ－Ｌ１ポリペプチドが、図２２Ｄに示されるＰＤ－Ｌ１アミノ酸配列に対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、約２１５アミノ酸～約２２０アミノ酸の長さを有する、態様３に記載のＴＭＰ。
態様５．前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、４－１ＢＢＬポリペプチドである、態様１または２に記載のＴＭＰ。
態様６．前記４－１ＢＢＬポリペプチドが、図２２Ｅに示される４－１ＢＢＬアミノ酸配列に対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、約１６０アミノ酸～約１７０アミノ酸の長さを有する、態様５に記載のＴＭＰ。
態様７．前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、バリアントＩＬ－２ポリペプチドであり、任意選択により、前記１つ以上のバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体に対する結合親和性を呈し、そのような１つ以上のバリアントＩＬ－２ポリペプチドの前記結合親和性は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイで同じ条件下でアッセイした場合、同じＩＬ－２受容体に対する野生型ヒトＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性よりも低い、態様１～５のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様８．前記少なくとも１つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドが、ＩＬ－２受容体のα鎖及び／またはＩＬ－２受容体のβ鎖に対する結合の低下を呈し、任意選択により、前記少なくとも１つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドが、ＩＬ－２受容体のα鎖とＩＬ－２受容体のβ鎖の両方に対する結合の低下を呈する、態様７に記載のＴＭＰ。
態様９．ＩＬ－２受容体のα鎖及びＩＬ－２受容体のβ鎖に対する結合の低下を呈する２つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドを含む、態様８に記載のＴＭＰ。
態様１０．前記バリアントＩＬ－２ポリペプチドが、ｉ）Ｈ１６Ａ置換及びＦ４２Ａ置換、またはｉｉ）Ｈ１６Ｔ置換及びＦ４２Ａ置換を含む、態様８または９に記載のＴＭＰ。
態様１１．前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、４－１ＢＢＬポリペプチドである、態様１に記載のＴＭＰ。
態様１２．前記ＡＩペプチドが、約４アミノ酸～約２５アミノ酸の長さを有する、態様１～１１のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様１３．前記ＡＩペプチドが、約８アミノ酸～約２０アミノ酸の長さを有する、態様１～１１のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様１４．前記ＡＩペプチドが、
ａ）多発性硬化症関連ペプチド、または
ｂ）関節リウマチ関連ペプチド、または
ｃ）全身性エリテマトーデス関連ペプチド、または
ｄ）アジソン病関連ペプチド、または
ｅ）重症筋無力症関連ペプチド、または
ｆ）シェーグレン症候群関連ペプチド、または
ｇ）乾癬関連ペプチドである、態様１～１３のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
ａ）多発性硬化症関連ペプチド、または
ｂ）関節リウマチ関連ペプチド、または
ｃ）全身性エリテマトーデス関連ペプチド、または
ｄ）アジソン病関連ペプチド、または
ｅ）重症筋無力症関連ペプチド、または
ｆ）シェーグレン症候群関連ペプチド、または
ｇ）乾癬関連ペプチドである、態様１～１３のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様１５．前記マスキングポリペプチドが、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチドを含む、態様１～１４のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様１６．前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲ Ｉ型（ＴβＲＩ）ポリペプチド、ＴβＲ ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）ポリペプチド、またはＴβＲ ＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ポリペプチドの少なくとも一部を含む、態様１５に記載のＴＭＰ。
態様１７．前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲＩポリペプチド、ＴβＲＩＩポリペプチド、またはＴβＲＩＩＩポリペプチドのエクトドメインの少なくとも一部を含む、態様１６に記載のＴＭＰ。
態様１８．任意選択により、前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲＩＩアイソフォームＡポリペプチドのエクトドメインまたはＴβＲＩＩアイソフォームＢポリペプチドのエクトドメインの少なくとも一部を含む、態様１７に記載のＴＭＰ。
態様１９．前記ＴβＲポリペプチドが、対応する野生型ＴβＲポリペプチドと比べて１つ以上の配列変化を含み、前記ＴβＲポリペプチドが、前記対応する野生型ＴβＲポリペプチドと比べてＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性の低下を呈する、態様１５～１８のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様２０．前記１つ以上の配列変化が、欠失、挿入、置換、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、態様１９に記載のＴＭＰ。
態様２１．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、ＴＧＦ－β１ポリペプチド、ＴＧＦ－β２ポリペプチドまたはＴＧＦ－β３ポリペプチドの少なくとも一部を含む、態様１５～２０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様２２．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、ＴＧＦ－β３ポリペプチドの少なくとも一部を含む、態様２１に記載のＴＭＰ。
態様２３．前記ＴβＲポリペプチドが、図２５Ｂ、２５Ｄ、及び２５Ｆ～２５Ｊのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１８または態様１９に記載のＴＭＰ。
態様２４．前記ＴＧＦ－β３ポリペプチドが、図２３Ｆに示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様２２に記載のＴＭＰ。
態様２５．前記骨格ポリペプチドが、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドを含む、態様１～２４のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様２６．前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、野生型ポリペプチドと比べて１つ以上の配列変化を含むバリアントＩｇ Ｆｃポリペプチドであり、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介した細胞溶解を誘導する前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの能力が、低下または実質的に排除されている、態様２５に記載のＴＭＰ。
態様２７．前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、Ｌ２３４Ａ及び／またはＬ２３５Ａ置換（図２１Ａに示されるアミノ酸配列のＬ１４及びＬ１５）を含むバリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチドである、態様２６に記載のＴＭＰ。
態様２８．前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、図２１Ａに示されるアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃの少なくとも１２５の連続するアミノ酸（少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、または少なくとも２２０の連続するアミノ酸）に対して、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を含むバリアントＩｇ Ｆｃポリペプチドである、態様２５～２７のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様２９．前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、図２１Ａ～２１Ｍのいずれか１つに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のアミノ酸配列同一性を含むＩｇ Ｆｃポリペプチドである、態様２５に記載のＴＭＰ。
態様３０．前記ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドが、ＤＲＡ１＊０１：０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドが、ＤＲＢ１＊０４：０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～２９のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様３１．前記ＴＭＰが、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、
ａ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｖ）前記第１のポリペプチドの前記相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列は、前記ヘテロ二量体において互いに相互作用し、前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、前記第１のポリペプチドの構成成分及び／または前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、態様１～３０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
ａ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｖ）前記第１のポリペプチドの前記相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列は、前記ヘテロ二量体において互いに相互作用し、前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、前記第１のポリペプチドの構成成分及び／または前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、態様１～３０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様３２．
ａ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドが前記第１のポリペプチド上にあり、前記マスキングポリペプチドが前記第２のポリペプチド上にあるか、または
ｂ）前記マスキングポリペプチドが前記第１のポリペプチド上にあり、前記ＴＧＦ－βポリペプチドが前記第２のポリペプチド上にある、態様３１に記載のＴＭＰ。
ａ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドが前記第１のポリペプチド上にあり、前記マスキングポリペプチドが前記第２のポリペプチド上にあるか、または
ｂ）前記マスキングポリペプチドが前記第１のポリペプチド上にあり、前記ＴＧＦ－βポリペプチドが前記第２のポリペプチド上にある、態様３１に記載のＴＭＰ。
態様３３．
前記１つ以上のＭＯＤ及び前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、両方とも同じポリペプチド上にあるか、または
前記１つ以上のＭＯＤ及び前記マスキングポリペプチドが、両方とも同じポリペプチド上にある、態様３２に記載のＴＭＰ。
前記１つ以上のＭＯＤ及び前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、両方とも同じポリペプチド上にあるか、または
前記１つ以上のＭＯＤ及び前記マスキングポリペプチドが、両方とも同じポリペプチド上にある、態様３２に記載のＴＭＰ。
態様３４．前記ＴＧＦ－βポリペプチド及び前記マスキングポリペプチドが、両方とも同じポリペプチド上にある、態様３１に記載のＴＭＰ。
態様３５．前記１つ以上のＭＯＤが、前記ＴＧＦ－βポリペプチド及びマスキングポリペプチドと同じポリペプチド上にある、態様３４に記載のＴＭＰ。
態様３６．
ａ）前記１つ以上のＭＯＤが前記第１のポリペプチド上にあり、前記ＴＧＦ－βポリペプチド及び前記マスキングポリペプチドが前記第２のポリペプチド上にあるか、または
ｂ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド及び前記マスキングポリペプチドが前記第１のポリペプチド上にあり、前記１つ以上のＭＯＤが前記第２のポリペプチド上にある、態様３４に記載のＴＭＰ。
ａ）前記１つ以上のＭＯＤが前記第１のポリペプチド上にあり、前記ＴＧＦ－βポリペプチド及び前記マスキングポリペプチドが前記第２のポリペプチド上にあるか、または
ｂ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド及び前記マスキングポリペプチドが前記第１のポリペプチド上にあり、前記１つ以上のＭＯＤが前記第２のポリペプチド上にある、態様３４に記載のＴＭＰ。
態様３７．前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列が、ノブ・イン・ホール配列を含む、態様３１～３６のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様３８．前記ＴＭＰが、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、各ヘテロ二量体は、
ａ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、及び
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、及び
ｉｉｉ）任意選択により、前記ＡＩペプチドを前記第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、またはｉｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、前記ヘテロ二量体の前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている、態様１～３０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
ａ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、及び
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、及び
ｉｉｉ）任意選択により、前記ＡＩペプチドを前記第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、またはｉｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む、第２のポリペプチドと、を含み、前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、任意選択により、前記ヘテロ二量体の前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている、態様１～３０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様３９．前記第１のポリペプチドが、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む、態様３８に記載のＴＭＰ。
態様４０．
ａ１）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含み、
ｂ１）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記マスキングポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ａ２）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチドを含み、
ｂ２）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ａ３）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
ｂ３）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤを含むか、または
ａ４）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤを含み、
ｂ４）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ａ５）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
ｂ５）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含むか、または
ａ６）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｖ）前記マスキングポリペプチド、
ｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
ｂ６）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドを含み、
上記ＴＭＰのいずれかにおいて、前記第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよく、前記第２のポリペプチドは、２つ以上の構成成分を含み、前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、態様３８に記載のＴＭＰ。
ａ１）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドを含み、
ｂ１）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記マスキングポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ａ２）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、及び
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチドを含み、
ｂ２）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ａ３）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
ｂ３）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤを含むか、または
ａ４）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤを含み、
ｂ４）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ａ５）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
ｂ５）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含む場合は前記マスキングポリペプチド、もしくは前記第１のポリペプチドが前記マスキングポリペプチドを含む場合は前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含むか、または
ａ６）前記第１のポリペプチドが、
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｉｖ）前記マスキングポリペプチド、
ｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
ｂ６）前記第２のポリペプチドが、
ｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドを含み、
上記ＴＭＰのいずれかにおいて、前記第１のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよく、前記第２のポリペプチドは、２つ以上の構成成分を含み、前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、態様３８に記載のＴＭＰ。
態様４１．前記ＴＭＰが、前記ＡＩペプチドと前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとの間にＣｙｓ含有リンカーを含み、
前記リンカー中の前記Ｃｙｓと前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド中のＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成されている、態様３９または４０に記載のＴＭＰ。
前記リンカー中の前記Ｃｙｓと前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド中のＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成されている、態様３９または４０に記載のＴＭＰ。
態様４２．前記リンカーが、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～１０の整数である、態様４１に記載のＴＭＰ。
態様４３．前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドである、態様３８～４２のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様４４．前記バリアントＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドのバリアントである、態様４３に記載のＴＭＰ。
態様４５．前記非天然Ｃｙｓ残基が、前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドのアミノ酸５５～１１０のアミノ酸残基に位置する、態様４３または４４に記載のＴＭＰ。
態様４６．前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、図１９Ａに示されるアミノ酸ナンバリングに基づいて、位置７２または７５にＣｙｓを含むバリアントＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである、態様４３または４４に記載のＴＭＰ。
態様４７．前記バリアントＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドが、Ｋ７５Ｃ置換を含む、態様４６に記載のＴＭＰ。
態様４８．前記バリアントＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドが、Ｉ７２Ｃ置換を含む、態様４６に記載のＴＭＰ。
態様４９．前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド中のＣｙｓと前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド中のＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成されている、態様３８～４０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様５０．前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドが、非天然Ｃｙｓ残基を含むバリアントＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである、態様４９に記載のＴＭＰ。
態様５１．前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドが、Ｐ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｑ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである、態様４９または５０に記載のＴＭＰ。
態様５２．前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、Ｅ３Ｃ、Ｅ４Ｃ、Ｆ１２Ｃ、Ｇ２８Ｃ、Ｄ２９Ｃ、Ｉ７２Ｃ、Ｋ７５Ｃ、Ｔ８０Ｃ、Ｐ８１Ｃ、Ｉ８２Ｃ、Ｔ９３Ｃ、Ｎ９４Ｃ、及びＳ９５Ｃから選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである、態様４９～５１のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様５３．
ａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｃ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｄ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、
ｅ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃであるか、
ｆ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｇ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｈ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｉ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１０Ｃであるか、
ｊ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｋ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｌ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであるか、
ｍ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｎ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｏ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｐ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｑ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｒ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｓ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｔ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｕ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｖ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｗ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ｙ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｚ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ａａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、または
ｂｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃである、態様５２に記載のＴＭＰ。
ａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｃ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｄ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、
ｅ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃであるか、
ｆ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｇ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｈ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｉ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１０Ｃであるか、
ｊ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｋ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｌ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであるか、
ｍ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｎ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｏ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｐ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｑ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｒ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｓ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｔ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｕ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｖ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｗ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ｙ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｚ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ａａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、または
ｂｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃである、態様５２に記載のＴＭＰ。
態様５４．態様３８～５３のいずれか１つに記載の２つのヘテロ二量体ＴＭＰのホモ二量体を含む、ＴＭＰ。
態様５５．単一ポリペプチド鎖を含む、態様１～３０のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様５６．前記単一ポリペプチド鎖が、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を含み、その構成成分が、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、態様５５に記載のＴＭＰ。
態様５７．前記単一ポリペプチド鎖が、Ｎ末端からＣ末端の順に、
ａ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤ、または
ｂ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｖｉ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、または
ｃ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、及び
ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、または
ｄ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、
ｖｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、または
ｅ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、
ｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、または
ｆ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、及び
ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、または
ｇ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、
ｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤを含む、態様５５または５６に記載のＴＭＰ。
ａ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｖｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤ、または
ｂ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、
ｖｉ）前記１つ以上のＭＯＤ、及び
ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、または
ｃ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、及び
ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、または
ｄ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、
ｖｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、または
ｅ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、
ｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖｉ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、または
ｆ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）前記１つ以上のＭＯＤ、
ｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、及び
ｖｉｉ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、または
ｇ）
ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、
ｉｖ）Ｉｇ Ｆｃポリペプチド、
ｖ）前記ＴＧＦ－βポリペプチドもしくは前記マスキングポリペプチド、
ｖｉ）前記マスキングポリペプチドもしくは前記ＴＧＦ－βポリペプチド、及び
ｖｉｉ）前記１つ以上のＭＯＤを含む、態様５５または５６に記載のＴＭＰ。
態様５８．態様５５～５７のいずれか１つに記載の２つの一本鎖ＴＭＰのホモ二量体を含む、ＴＭＰ。
態様５９．態様３１～５４のいずれか１つに記載の前記第１及び／または前記第２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
態様６０．態様５５～５７のいずれか１つに記載の一本鎖ＴＭＰをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
態様６１．態様５９に記載の核酸を含む、発現ベクター。
態様６２．態様６０に記載の核酸を含む、発現ベクター。
態様６３．態様５９に記載の核酸または態様６１に記載の発現ベクターで遺伝子改変されている、遺伝子改変宿主細胞。
態様６４．態様６０に記載の核酸または態様６２に記載の発現ベクターで遺伝子改変されている、遺伝子改変宿主細胞。
態様６５．態様６３に記載の遺伝子改変宿主細胞を、前記宿主細胞がＴＭＰを合成するような条件下で、培養培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏ培養する工程を含む、ＴＭＰを作製する方法。
態様６６．態様６４に記載の遺伝子改変宿主細胞を、前記宿主細胞がＴＭＰを合成するような条件下で、培養培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏ培養する工程を含む、ＴＭＰを作製する方法。
態様６７．態様１～５８のいずれか１つに記載のＴＭＰを含む、医薬組成物。
態様６８．有効量の態様１～５８のいずれか１つに記載のＴＭＰまたは態様６７に記載の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数を増加させる方法。
態様６９．有効量の態様１～５８のいずれか１つに記載のＴＭＰのＴＭＰまたは態様６７に記載の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体の自己免疫疾患を治療する方法。
態様７０．前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列が、表１に示されるＫｉＨ、ＫｉＨｓ－ｓ、ＨＡ－ＴＦ、ＺＷ－１、７．８．６０、ＤＤ－ＫＫ、ＥＷ－ＲＶＴ、ＥＷ－ＲＶＴｓ－ｓ、及びＡ１０７配列ペアからなる群から選択される相互特異的結合配列と対応する相互特異的結合配列のペアである、態様３１～３７のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様７１．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの一方が、Ｔ３６６Ｙ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含み、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方が、Ｙ４０７Ｔ置換、または他の相互特異的Ｉｇ Ｆｃポリペプチド（例えば、相互特異的結合配列を含むＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチド）における対応する置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
態様７２．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの一方が、Ｔ３６６Ｗ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含み、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ置換、または他の相互特異的Ｉｇ Ｆｃポリペプチド（例えば、相互特異的結合配列を含むＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチド）における対応する置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
態様７３．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの一方が、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含み、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方が、Ｓ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ置換、または他の相互特異的Ｉｇ Ｆｃポリペプチド（例えば、相互特異的結合配列を含むＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチド）における対応する置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
態様７４．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの一方が、Ｔ１４６Ｗ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含み、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方が、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、及びＹ１８７Ｖ置換、または他の相互特異的Ｉｇ Ｆｃポリペプチド（例えば、相互特異的結合配列を含むＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチド）における対応する置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
態様７５．前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの一方が、Ｔ１４６Ｗ及びＳ１３４Ｃ置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含み、前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドの他方が、Ｔ１４６Ｓ、Ｌ１４８Ａ、Ｙ１８７Ｖ及びＹ１２９Ｃ置換、または他の相互特異的Ｉｇ Ｆｃポリペプチド（例えば、相互特異的結合配列を含むＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃポリペプチド）における対応する置換を含む相互特異的ＩｇＧ１ Ｆｃポリペプチド（例えば、図２１Ａに示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチド）を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
態様７６．
ｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｓ１４４Ｈ及びＦ１８５Ａ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｙ１２９Ｔ及びＴ１７４Ｆ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｔ１３０Ｖ、Ｌ１３１Ｙ、Ｆ１８５Ａ、及びＹ１８７Ｖ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、１３０Ｖ、Ｔ１４６Ｌ、Ｋ１７２Ｌ、及びＴ１７４Ｗ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１４０Ｄ、Ｄ１７９Ｍ、及びＹ１８７Ａ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｅ１２５Ｒ、Ｑ１２７Ｒ、Ｔ１４６Ｖ、及びＫ１８９Ｖ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｉｖ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１８９Ｄ、及びＫ１７２Ｄ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｄ１７９Ｋ及びＥ１３６Ｋ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｖ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１４０Ｅ及びＫ１８９Ｗ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５Ｔ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｖｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１４０Ｅ、Ｋ１８９Ｗ、及びＹ１２９Ｃ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、Ｆ１８５Ｔ、及びＳ１３４Ｃ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１５０Ｅ及びＫ１８９Ｗ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｅ１３７Ｎ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５Ｔ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、図２１Ａに示されるＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列の少なくとも１７０（例えば、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
ｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｓ１４４Ｈ及びＦ１８５Ａ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｙ１２９Ｔ及びＴ１７４Ｆ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｉｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｔ１３０Ｖ、Ｌ１３１Ｙ、Ｆ１８５Ａ、及びＹ１８７Ｖ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、１３０Ｖ、Ｔ１４６Ｌ、Ｋ１７２Ｌ、及びＴ１７４Ｗ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｉｉｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１４０Ｄ、Ｄ１７９Ｍ、及びＹ１８７Ａ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｅ１２５Ｒ、Ｑ１２７Ｒ、Ｔ１４６Ｖ、及びＫ１８９Ｖ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｉｖ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１８９Ｄ、及びＫ１７２Ｄ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｄ１７９Ｋ及びＥ１３６Ｋ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｖ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１４０Ｅ及びＫ１８９Ｗ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５Ｔ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｖｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１４０Ｅ、Ｋ１８９Ｗ、及びＹ１２９Ｃ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｑ１２７Ｒ、Ｄ１７９Ｖ、Ｆ１８５Ｔ、及びＳ１３４Ｃ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含むか、または
ｖｉｉ）前記第１のポリペプチドが、Ｋ１５０Ｅ及びＫ１８９Ｗ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、前記第２のポリペプチドが、Ｅ１３７Ｎ、Ｄ１７９Ｖ、及びＦ１８５Ｔ置換を有するＩｇ Ｆｃポリペプチドを含み、
前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、図２１Ａに示されるＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列の少なくとも１７０（例えば、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、または２２７全て）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様７０に記載のＴＭＰ。
態様７７．前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの一方または両方が、Ｌ１４及びＬ１５置換及び／またはＮ７７置換（図２１Ａに示されるＩｇ Ｆｃポリペプチドのアミノ酸ナンバリングに基づく）を含むか、またはどちらも含まない、態様７０～７６のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様７８．前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲ Ｉ型（ＴβＲＩ）、ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）またはＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）のエクトドメイン断片を含むＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチドである、態様１～５８及び７０～７６のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様７９．前記マスキングポリペプチドが、図２５Ｄに示されるＴβＲＩＩアイソフォームＡエクトドメインアミノ酸配列の少なくとも９０（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または１５４）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドである、態様７８に記載のＴＭＰ。
態様８０．前記マスキングポリペプチドが、図２５Ｆに示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインアミノ酸配列の少なくとも９０（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または１５４）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドである、態様７８に記載のＴＭＰ。
態様８１．前記マスキングポリペプチドが、図２５Ｇに示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインアミノ酸配列の少なくとも９０（例えば、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、または１４３）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドである、態様７８に記載のＴＭＰ。
態様８２．前記マスキングポリペプチドが、ｉ）図２５Ｈに示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインポリペプチドΔ１４（デルタ１４）アミノ酸配列、またはｉｉ）図２５Ｉに示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインポリペプチドΔ２５（デルタ２５）アミノ酸配列、またはｉｉｉ）図２５Ｊに示されるＴβＲＩＩアイソフォームＢエクトドメインポリペプチドΔ２５（デルタ２５）アミノ酸配列の少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１８）の連続するアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドである、態様７８に記載のＴＭＰ。
態様８３．前記ＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドが、Ｆ３０、Ｄ３２、Ｓ５２、Ｅ５５、及びＤ１１８からなる群から選択される１、２、３、４、または５つの置換（例えば、アラニンまたはアルギニンによる）の置換を含む、態様７９～８２のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様８４．前記ＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドが、ｉ）Ｄ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒ置換、またはｉｉ）Ｄ１１８ＡもしくはＤ１１８Ｒ置換、及びＦ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及びＥ５５Ａからなる群から選択される１、２、３、もしくは４つの置換を含む、態様８３に記載のＴＭＰ。
態様８５．前記ＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドが、図２５Ｆもしくは図２５Ｇに示されるアミノ酸配列の最大１４アミノ酸のＮ末端欠失（Δ１４アミノ酸欠失）（例えば、図２５Ｈ参照）及びＤ１１８置換（例えば、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ）、またはそれらのＴβＲＩＩポリペプチドのいずれかの少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１８）のアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様８３または８４に記載のＴＭＰ。
態様８６．Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及びＥ５５Ａからなる群から選択される１、２、３、または４つの置換を更に含む、態様８５に記載のＴＭＰ。
態様８７．前記ＴβＲＩＩエクトドメインポリペプチドが、図２５Ｆもしくは図２５Ｇに示されるアミノ酸配列の最大２５アミノ酸のＮ末端欠失（Δ２５アミノ酸欠失）及びＤ１１８置換（例えば、Ｄ１１８ＡまたはＤ１１８Ｒ、配列番号１４８参照）、またはそれらのＴβＲＩＩポリペプチドのいずれかの少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有する配列を含む、態様８３～８６のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様８８．Ｆ３０Ａ、Ｄ３２Ｎ、Ｓ５２Ｌ及びＥ５５Ａからなる群から選択される１、２、３、もしくは４つの置換を更に含む、態様８７に記載のＴＭＰ。
態様８９．前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲＩエクトドメインポリペプチドである、態様７８に記載のＴＭＰ。
態様９０．前記ＴβＲＩエクトドメインポリペプチドが、図２５Ｂに示されるアミノ酸配列の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、または９３）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様８９に記載のＴＭＰ。
態様９１．前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲＩＩＩエクトドメインポリペプチドである、態様７８に記載のＴＭＰ。
態様９２．前記ＴβＲＩ ＩＩＩエクトドメインポリペプチドが、図２５Ｌに示されるＡアイソフォームアミノ酸配列または図２５Ｎに示されるＢアイソフォームアミノ酸配列の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００または６００）の連続するアミノ酸に対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様９１に記載のＴＭＰ。
態様９３．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、ヒトＴＧＦ－β１ポリペプチド（例えば、図２３Ｂ）、ヒトＴＧＦ－β２ポリペプチド（例えば、図２３Ｄ）、またはヒトＴＧＦ－β３ポリペプチド（例えば、図２３Ｆ）の成熟型の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、または少なくとも１１０）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１～５８及び７０～９２のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様９４．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、図２３Ｂに示されるアミノ酸配列（ＴＧＦβ１成熟型）の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様９３に記載のＴＭＰ。
態様９５．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、図２３Ｂに示されるアミノ酸配列の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｃ７７Ｓ置換を含む（すなわち、前記ＴＧＦ－βポリペプチドは、位置７７にＳｅｒを含む、態様９３に記載のＴＭＰ。
態様９６．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、図２３Ｄに示されるアミノ酸配列（ＴＧＦβ２成熟型）の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様９３に記載のＴＭＰ。
態様９７．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、図２３Ｄに示されるアミノ酸配列の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｃ７７Ｓ置換を含む（すなわち、前記ＴＧＦ－βポリペプチドは、位置７７にＳｅｒを含む、態様９３に記載のＴＭＰ。
態様９８．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、図２３Ｆに示されるアミノ酸配列（ＴＧＦβ３成熟型）の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様９３に記載のＴＭＰ。
態様９９．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、図２３Ｆに示されるアミノ酸配列の少なくとも７０（例えば、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、または１１２）の連続するアミノ酸を含むポリペプチドに対して、少なくとも６０％（例えば、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、Ｃ７７Ｓ置換を含む（すなわち、前記ＴＧＦ－βポリペプチドは、位置７７にＳｅｒを含む、態様９３に記載のＴＭＰ。
態様１００．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、前記成熟ＴＧＦ－βポリペプチド（例えば、図２３Ｂ、図２３Ｄ、または図２３Ｆに示されるアミノ酸配列）の位置２５、９２及び／または９４のうちの１つ以上に置換を含む、態様９３～９９のいずれか１つに記載のＴＭＰ。
態様１０１．前記ＴＧＦ－βポリペプチドが、
（ｉ）位置２５にＬｙｓもしくはＡｒｇ以外のアミノ酸、
（ｉｉ）位置９２にＩｌｅもしくはＶａｌ以外のアミノ酸；及び／または
（ｉｉｉ）位置９４にＬｙｓもしくはＡｒｇ以外のアミノ酸（例えば、図２３Ｂ、図２３Ｄ、または図２３Ｆに示されるアミノ酸配列に基づく）を含む、態様１００に記載のＴＭＰ。
（ｉ）位置２５にＬｙｓもしくはＡｒｇ以外のアミノ酸、
（ｉｉ）位置９２にＩｌｅもしくはＶａｌ以外のアミノ酸；及び／または
（ｉｉｉ）位置９４にＬｙｓもしくはＡｒｇ以外のアミノ酸（例えば、図２３Ｂ、図２３Ｄ、または図２３Ｆに示されるアミノ酸配列に基づく）を含む、態様１００に記載のＴＭＰ。
態様１０２．有効量の態様１～５８のいずれか１つに記載のＴＭＰのＴＭＰまたは態様６７に記載の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体の先天性または後天性代謝疾患または障害を治療する方法。
態様１０３．前記先天性または前記後天性代謝疾患または障害が、２型糖尿病または非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である、態様１０２に記載の方法。
態様１０４．前記ＮＡＦＬＤが、非アルコール性脂肪性肝炎である、態様１０３に記載の方法。
態様セットＢ
上に記載される本主題の実施形態を含む態様は、単独でも、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態との組み合わせでも有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様が以下に記載される。本開示を読めば当業者には明らかであるように、個々に番号が付された態様のそれぞれは、個々に番号が付された先行の態様または後述の態様のいずれかとともに使用または組み合わせられてもよい。これは、全てのそのような態様の組み合わせに対する裏付けを提供することを意図しており、以下に明示的に記載される態様の組み合わせに限定されるものではない。
上に記載される本主題の実施形態を含む態様は、単独でも、または１つ以上の他の態様もしくは実施形態との組み合わせでも有益であり得る。前述の説明を限定することなく、本開示の特定の非限定的な態様が以下に記載される。本開示を読めば当業者には明らかであるように、個々に番号が付された態様のそれぞれは、個々に番号が付された先行の態様または後述の態様のいずれかとともに使用または組み合わせられてもよい。これは、全てのそのような態様の組み合わせに対する裏付けを提供することを意図しており、以下に明示的に記載される態様の組み合わせに限定されるものではない。
態様１．ａ）Ｔ細胞受容体が結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチド（「ＡＩペプチド」）と、
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、
ｃ）マスキングポリペプチドであって、任意選択により、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、前記マスキングポリペプチドと、
ｄ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、
ｅ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、
ｆ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と
を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、
任意選択により、前記ＴＭＰは、骨格ポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ＴＭＰは、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む、
前記ＴＭＰ。
ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、
ｃ）マスキングポリペプチドであって、任意選択により、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、前記マスキングポリペプチドと、
ｄ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、
ｅ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、
ｆ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と
を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、
任意選択により、前記ＴＭＰは、骨格ポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ＴＭＰは、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む、
前記ＴＭＰ。
態様２．前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、バリアントＩＬ－２ポリペプチドであり、任意選択により、前記１つ以上のバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体に対する結合親和性を呈し、そのような１つ以上のバリアントＩＬ－２ポリペプチドの前記結合親和性は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイで同じ条件下でアッセイした場合、同じＩＬ－２受容体に対する野生型ヒトＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性よりも低く、任意選択により、前記少なくとも１つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体のα鎖及び／またはＩＬ－２受容体のβ鎖に対する結合の低下を呈し、任意選択により、前記少なくとも１つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体のα鎖及びＩＬ－２受容体のβ鎖の両方に対する結合の低下を呈する、態様１に記載のＴＭＰ。
態様３．前記ＡＩペプチドが、ａ）多発性硬化症関連ペプチド、またはｂ）関節リウマチ関連ペプチド、またはｃ）全身性エリテマトーデス関連ペプチド、またはｄ）アジソン病関連ペプチド、またはｅ）重症筋無力症関連ペプチド、またはｆ）シェーグレン症候群関連ペプチド、またはｇ）乾癬関連ペプチドである、態様１に記載のＴＭＰ。
態様４．前記マスキングポリペプチドが、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチドを含み、任意選択により、前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲ Ｉ型（ＴβＲＩ）ポリペプチド、ＴβＲ ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）ポリペプチド、またはＴβＲ ＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ポリペプチドのエクトドメインの少なくとも一部を含む、態様１に記載のＴＭＰ。
態様５．前記ＴβＲポリペプチドが、対応する野生型ＴβＲポリペプチドと比べて１つ以上の配列変化を含み、前記ＴβＲポリペプチドが、前記対応する野生型ＴβＲポリペプチドと比べてＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性の低下を呈する、態様１に記載のＴＭＰ。
態様６．前記ＴＭＰが、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドである骨格ポリペプチドを含み、任意選択により、前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、野生型ポリペプチドと比べて１つ以上の配列変化を含むバリアントＩｇ Ｆｃポリペプチドであり、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介した細胞溶解を誘導する前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの能力が、低下または実質的に排除されている、態様１に記載のＴＭＰ。
態様７．前記ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドが、ＤＲＡ１＊０１：０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドが、ＤＲＢ１＊０４：０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様１に記載のＴＭＰ。
態様８．前記ＴＭＰが、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、
各ヘテロ二量体は、
ａ）ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ならびに
ｉｖ）前記第１のポリペプチドの前記相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドであって、前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列が前記ヘテロ二量体において互いに相互作用する、前記第２の骨格ポリペプチド
を含む、第２のポリペプチドと
を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、
前記第１のポリペプチドの構成成分及び／または前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、
態様１に記載のＴＭＰ。
各ヘテロ二量体は、
ａ）ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチドを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）前記ＡＩペプチド、
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ならびに
ｉｖ）前記第１のポリペプチドの前記相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドであって、前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列が前記ヘテロ二量体において互いに相互作用する、前記第２の骨格ポリペプチド
を含む、第２のポリペプチドと
を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、
前記第１のポリペプチドの構成成分及び／または前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、
態様１に記載のＴＭＰ。
態様９．前記ＴＭＰが、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、
各ヘテロ二量体は、
ａ）ｉ）前記ＡＩペプチド、及び
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、及び
ｉｉｉ）任意選択により、前記ＡＩペプチドを前記第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、または
ｉｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド
を含む、第２のポリペプチドと
を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ヘテロ二量体の前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている、
態様１に記載のＴＭＰ。
各ヘテロ二量体は、
ａ）ｉ）前記ＡＩペプチド、及び
ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、及び
ｉｉｉ）任意選択により、前記ＡＩペプチドを前記第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカーを含む、第１のポリペプチドと、
ｂ）ｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、または
ｉｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド
を含む、第２のポリペプチドと
を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ヘテロ二量体の前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている、
態様１に記載のＴＭＰ。
態様１０．前記ＴＭＰが、前記ＡＩペプチドと前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとの間にＣｙｓ含有リンカーを含み、前記リンカー中の前記Ｃｙｓと前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド中のＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成されており、任意選択により、前記リンカーが、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～１０の整数である、態様８または９に記載のＴＭＰ。
態様１１．前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドが、Ｐ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｑ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、ならびに／または前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、Ｅ３Ｃ、Ｅ４Ｃ、Ｆ１２Ｃ、Ｇ２８Ｃ、Ｄ２９Ｃ、Ｉ７２Ｃ、Ｋ７５Ｃ、Ｔ８０Ｃ、Ｐ８１Ｃ、Ｉ８２Ｃ、Ｔ９３Ｃ、Ｎ９４Ｃ、及びＳ９５Ｃから選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである、態様１に記載のＴＭＰ。
態様１２．
ａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｃ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｄ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、
ｅ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃであるか、
ｆ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｇ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｈ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｉ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１０Ｃであるか、
ｊ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｋ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｌ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであるか、
ｍ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｎ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｏ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｐ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｑ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｒ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｓ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｔ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｕ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｖ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｗ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ｙ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｚ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ａａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、または
ｂｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃである、
態様１１に記載のＴＭＰ。
ａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｃ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｄ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、
ｅ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃであるか、
ｆ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｇ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｈ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｉ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１０Ｃであるか、
ｊ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｋ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｌ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであるか、
ｍ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
ｎ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
ｏ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
ｐ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｑ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｒ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｓ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
ｔ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
ｕ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
ｖ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｗ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ｙ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
ｚ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
ａａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、または
ｂｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃである、
態様１１に記載のＴＭＰ。
態様１３．態様８または態様９に記載のＴＭＰ２つのホモ二量体を含む、ＴＭＰ。
態様１４．態様８または態様９に記載のＴＭＰの前記第１及び／または前記第２のポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、１つ以上の核酸。
態様１５．態様１４に記載の核酸を含む、発現ベクター。
態様１６．態様１４に記載の１つ以上の核酸または態様１５に記載の発現ベクターで遺伝子改変されている、遺伝子改変宿主細胞。
態様１７．態様１６に記載の遺伝子改変宿主細胞を、前記宿主細胞がＴＭＰを合成するような条件下で、培養培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏ培養する工程を含む、ＴＭＰを作製する方法。
態様１８．態様１～９のいずれか１つに記載のＴＭＰを含む、医薬組成物。
態様１９．有効量の態様１８に記載の医薬組成物のＴＭＰを個体に投与する工程を含む、個体の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数を増加させる方法。
態様２０．有効量の態様１８に記載の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体の自己免疫疾患を治療する方法。
本開示について、その具体的な実施形態を参照しながら説明してきたが、当業者であれば、本開示の本来の趣旨及び範囲から逸脱することなく、種々の変更を行うことができ、等価物を代わりに使用できることが理解されよう。更に、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、１つまたは複数のプロセスステップを本開示の目的、趣旨及び範囲に適合させるように、多くの改変を行ってもよい。こうした改変は全て、本明細書に添付される特許請求の範囲に含まれるものとする。
Claims (20)
- （ａ）Ｔ細胞受容体が結合することが可能な自己免疫疾患関連エピトープを提示するペプチド（「ＡＩペプチド」）と、
（ｂ）ＴＧＦ－βポリペプチドと、
（ｃ）マスキングポリペプチドであって、任意選択により、ＴＧＦ－β受容体ポリペプチドまたは抗ＴＧＦ－βポリペプチドを含む、前記マスキングポリペプチドと、
（ｄ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドと、
（ｅ）ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドと、
（ｆ）１つ以上の免疫調節ポリペプチド（ＭＯＤ）と
を含む、Ｔ細胞調節ポリペプチド（ＴＭＰ）であって、
任意選択により、前記ＴＭＰは、骨格ポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ＴＭＰは、１つ以上の独立して選択されるリンカーポリペプチドを含む、
前記ＴＭＰ。 - 前記１つ以上のＭＯＤのうちの少なくとも１つが、バリアントＩＬ－２ポリペプチドであり、任意選択により、前記１つ以上のバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体に対する結合親和性を呈し、そのような１つ以上のバリアントＩＬ－２ポリペプチドの前記結合親和性は、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイで同じ条件下でアッセイした場合、同じＩＬ－２受容体に対する野生型ヒトＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性よりも低く、任意選択により、前記少なくとも１つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体のα鎖及び／またはＩＬ－２受容体のβ鎖に対する結合の低下を呈し、任意選択により、前記少なくとも１つのバリアントＩＬ－２ポリペプチドは、ＩＬ－２受容体のα鎖及びＩＬ－２受容体のβ鎖の両方に対する結合の低下を呈する、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＡＩペプチドが、
（ａ）多発性硬化症関連ペプチド、または
（ｂ）関節リウマチ関連ペプチド、または
（ｃ）全身性エリテマトーデス関連ペプチド、または
（ｄ）アジソン病関連ペプチド、または
（ｅ）重症筋無力症関連ペプチド、または
（ｆ）シェーグレン症候群関連ペプチド、または
（ｇ）乾癬関連ペプチド
である、
請求項１に記載のＴＭＰ。 - 前記マスキングポリペプチドが、ＴＧＦ－β受容体（「ＴβＲ」）ポリペプチドを含み、任意選択により、前記マスキングポリペプチドが、ＴβＲ Ｉ型（ＴβＲＩ）ポリペプチド、ＴβＲ ＩＩ型（ＴβＲＩＩ）ポリペプチド、またはＴβＲ ＩＩＩ型（ＴβＲＩＩＩ）ポリペプチドのエクトドメインの少なくとも一部を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＴβＲポリペプチドが、対応する野生型ＴβＲポリペプチドと比べて１つ以上の配列変化を含み、前記ＴβＲポリペプチドが、前記対応する野生型ＴβＲポリペプチドと比べてＴＧＦ－βポリペプチドに対する親和性の低下を呈する、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＴＭＰが、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃポリペプチドである骨格ポリペプチドを含み、任意選択により、前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドが、野生型ポリペプチドと比べて１つ以上の配列変化を含むバリアントＩｇ Ｆｃポリペプチドであり、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び／または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介した細胞溶解を誘導する前記Ｉｇ Ｆｃポリペプチドの能力が、低下または実質的に排除されている、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチドが、ＤＲＡ１＊０１：０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチドが、ＤＲＢ１＊０４：０１ポリペプチドに対して少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＴＭＰ。
- 前記ＴＭＰが、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、
各ヘテロ二量体は、
（ａ）（ｉ）前記ＡＩペプチド、
（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
（ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、及び
（ｉｖ）第１の相互特異的結合配列を含む第１の骨格ポリペプチド
を含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）（ｉ）前記ＡＩペプチド、
（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ βポリペプチド、
（ｉｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ αポリペプチド、ならびに
（ｉｖ）前記第１のポリペプチドの前記相互特異的結合配列に対応する相互特異的結合配列を含む第２の骨格ポリペプチドであって、前記相互特異的結合配列及び前記対応する相互特異的結合配列が前記ヘテロ二量体において互いに相互作用する、前記第２の骨格ポリペプチド
を含む、第２のポリペプチドと
を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、
前記第１のポリペプチドの構成成分及び／または前記第２のポリペプチドの構成成分は、任意選択により、１つ以上の独立して選択されるリンカーによって接続されていてもよい、
請求項１に記載のＴＭＰ。 - 前記ＴＭＰが、少なくとも１つのヘテロ二量体を含み、
各ヘテロ二量体は、
（ａ）（ｉ）前記ＡＩペプチド、及び
（ｉｉ）ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドまたはＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド、及び
（ｉｉｉ）任意選択により、前記ＡＩペプチドを前記第１のＭＨＣクラスＩＩポリペプチドに連結するリンカー
を含む、第１のポリペプチドと、
（ｂ）（ｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド、または
（ｉｉ）前記第１のポリペプチドがＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドを含む場合、ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチド
を含む、第２のポリペプチドと
を含み、
前記第１及び／または前記第２のポリペプチドは、前記１つ以上のＭＯＤを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記ＴＧＦ－βポリペプチドを含み、
前記第１または前記第２のポリペプチドは、前記マスキングポリペプチドを含み、
任意選択により、前記ヘテロ二量体の前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドは、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して互いに共有結合的に連結されている、
請求項１に記載のＴＭＰ。 - 前記ＴＭＰが、前記ＡＩペプチドと前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドとの間にＣｙｓ含有リンカーを含み、
前記リンカー中の前記Ｃｙｓと前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチド中のＣｙｓとの間にジスルフィド結合が形成されており、
任意選択により、前記リンカーが、（ＣＧＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７８）、（ＧＣＧＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１７９）、（ＧＧＣＧＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８０）、（ＧＧＧＣＳ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８１）、及び（ＧＧＧＧＣ）（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１８２）から選択されるアミノ酸配列を含み、式中、ｎは、１～１０の整数である、
請求項８または９に記載のＴＭＰ。 - 前記ＭＨＣクラスＩＩ β鎖ポリペプチドが、Ｐ５Ｃ、Ｆ７Ｃ、Ｑ１０Ｃ、Ｎ１９Ｃ、Ｇ２０Ｃ、Ｈ３３Ｃ、Ｇ１５１Ｃ、Ｄ１５２Ｃ、及びＷ１５３Ｃからなる群から選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドであり、ならびに／または前記ＭＨＣクラスＩＩ α鎖ポリペプチドが、Ｅ３Ｃ、Ｅ４Ｃ、Ｆ１２Ｃ、Ｇ２８Ｃ、Ｄ２９Ｃ、Ｉ７２Ｃ、Ｋ７５Ｃ、Ｔ８０Ｃ、Ｐ８１Ｃ、Ｉ８２Ｃ、Ｔ９３Ｃ、Ｎ９４Ｃ、及びＳ９５Ｃから選択されるアミノ酸置換を含むバリアントＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチドである、請求項１に記載のＴＭＰ。
- （ａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
（ｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
（ｃ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ８１Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
（ｄ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、
（ｅ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃであるか、
（ｆ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
（ｇ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ９３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
（ｈ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
（ｉ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ１２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１０Ｃであるか、
（ｊ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
（ｋ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
（ｌ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＴ８０Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであるか、
（ｍ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＦ７Ｃであるか、
（ｎ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＰ５Ｃであるか、
（ｏ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＩ８２Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＨ３３Ｃであるか、
（ｐ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
（ｑ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
（ｒ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２８Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
（ｓ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ１５１Ｃであるか、
（ｔ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ１５２Ｃであるか、
（ｕ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＤ２９Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＷ１５３Ｃであるか、
（ｖ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
（ｗ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ９４Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
（ｙ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＱ１５６Ｃであるか、
（ｚ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＳ９５Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１２０Ｃであるか、
（ａａ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＮ１９Ｃであるか、または
（ｂｂ）前記ＤＲＡ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＥ３Ｃであり、前記ＤＲＢ ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド中の前記アミノ酸置換がＧ２０Ｃである、
請求項１１に記載のＴＭＰ。 - 請求項８または請求項９に記載のＴＭＰ２つのホモ二量体を含む、ＴＭＰ。
- 請求項８または請求項９に記載のＴＭＰの前記第１及び／または前記第２のポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、１つ以上の核酸。
- 請求項１４に記載の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項１４に記載の１つ以上の核酸または請求項１５に記載の発現ベクターで遺伝子改変されている、遺伝子改変宿主細胞。
- 請求項１６に記載の遺伝子改変宿主細胞を、前記宿主細胞がＴＭＰを合成するような条件下で、培養培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏ培養する工程を含む、ＴＭＰを作製する方法。
- 請求項１～９のいずれか１項に記載のＴＭＰを含む、医薬組成物。
- 有効量の請求項１８に記載の医薬組成物のＴＭＰを個体に投与する工程を含む、個体の制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の数を増加させる方法。
- 有効量の請求項１８に記載の医薬組成物を個体に投与する工程を含む、個体の自己免疫疾患を治療する方法。
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- 2023-10-02 US US18/375,853 patent/US20240139298A1/en active Pending
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