CN116334072A - 一种磁珠保存液、制备方法及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种磁珠保存液，包括保存液A和保存液B；其中，所述保存液A包括缓冲液、蛋白质、增稠剂A、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂；所述保存液B包括有机溶剂、增稠剂B；所述增稠剂A为蛋白胨；所述增稠剂B为硅酸铝土、蒙脱土、膨润土中的一种或多种；采用由缓冲液、蛋白质、增稠剂A、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂组成的保存液A，以及，由有机溶剂、增稠剂B组成的保存液B作为磁珠保存液，同时采用一种磁珠保存液的使用方法，保障了磁珠长期储存后的分散性、不易结块，提取效率也比较稳定，为磁珠的长期储存提供保障。
Description
技术领域
本发明涉及核酸提取技术领域，特别涉及一种磁珠保存液、制备方法及其使用方法。
背景技术
磁珠法核酸提取试剂是通过将生物技术和纳米材料技术相结合的产品，其中核酸提取磁珠是对具有超顺磁性的微粒表面进行化学修饰，使之与可以在一定的环境下与核酸结合，并利用纳米微球的超顺磁性，在外加磁场作用下，从血液、组织、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在临床诊断、法医鉴定、微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。
磁珠一般是放入纯水或者添加了抑菌剂的缓冲液中保存，这两种保存的效果均非常有限，纯水中保存的保存期一般只有一周左右，添加了抑菌剂的缓冲液的保存期限也只有10天左右，之后磁珠会逐渐出现结块的现象，分散性变差，同时基团含量、磁饱和强度会下降，导致提取效果会快速的降低，为此，提出一种能够对磁珠进行长效保存的磁珠保存液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种磁珠保存液，以解决现有技术中的问题。具体技术方案如下：
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种磁珠保存液，包括保存液A和保存液B；其中，
所述保存液A包括缓冲液、蛋白质、增稠剂A、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂；
所述保存液B包括有机溶剂、增稠剂B；
所述增稠剂A为蛋白胨；
所述增稠剂B为硅酸铝土、蒙脱土、膨润土中的一种或多种；
所述磁珠保存液由保存液A和保存液B混合制得，pH值在7.0-8.0。
优选的，所述保存液A的各组分的浓度为：20-100mmol/L缓冲液、5-50g/L蛋白质、100-160g/L增稠剂A、5-10g/L表面活性剂、20-40g/L甲基丙烯酸十二酯和适量的防腐剂；
所述保存液B由有机溶剂和增稠剂B按质量比1:1~4:1的比例混合制得；
所述保存液A和所述保存液B按质量比2:1~-6:1的比例混合制得所述磁珠保存液。
优选的，所述缓冲液独立为Tris-HCl缓冲液，缓冲液浓度为40-50mmol/L。
优选的，所述蛋白质具体为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶蛋白中的任意一种或多种，蛋白质的浓度为20-35g/L。
优选的，所述表面活性剂为曲拉通x-100、曲拉通x-405、吐温-20、吐温-80中的任意一种或多种，表面活性剂的浓度为1-2g/L。
优选的，所述防腐剂独立为Proclin300，防腐剂的浓度为1-2g/L。
优选的，所述保存液A中还包括有保护剂鲸蜡硬脂醇聚醚-25。
优选的，所述保护剂鲸蜡硬脂醇聚醚-25的浓度为1-10g/L。
本发明还提供了一种磁珠保存液的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将缓冲液、蛋白质、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂分别加入到水中，搅拌混匀，制得半成品；
步骤2：在步骤1制备的半成品中加入增稠剂A和蛋白质，并对半成品进行水浴加热至60℃，充分震荡混匀，完成保存液A的制备；
步骤3：将增稠剂B加入到试剂瓶中，将有机溶剂缓慢倒入增稠剂B中制备保存液B；
步骤4：将保存液B倒入到被加热的保存液A中，充分混合，制得所述磁珠保存液。
本发明还提供了一种磁珠保存液的使用方法，包括以下步骤：
步骤1：将磁珠加入到上述的保存液B中，保存液B的温度控制在5-10℃；
步骤2：上述的保存液A加热至60℃使其充分溶化，再将放有磁珠的保存液B快速倒入保存液A中，完成磁珠的保存。
本发明提供的一种磁珠保存液、制备方法及其使用方法，具有以下有益效果：
本发明提供的一种磁珠保存液采用由缓冲液、蛋白质、增稠剂A、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂组成的保存液A，以及，由有机溶剂、增稠剂B组成的保存液B作为磁珠保存液，同时采用一种磁珠保存液的使用方法，保障了磁珠长期储存后的分散性、不易结块，提取效率也比较稳定，为磁珠的长期储存提供保障。
实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
如背景技术所提到的，在实际应用中，磁珠一般是放入纯水或者添加了抑菌剂的缓冲液中保存，这两种保存的效果均非常有限，纯水中保存的保存期一般只有一周左右，添加了抑菌剂的缓冲液的保存期限也只有10天左右，之后磁珠会逐渐出现结块的现象，分散性变差，同时基团含量、磁饱和强度和提取效果会快速的降低。
为此，在本申请中发明人对磁珠保存液的成分进行了研发，发明了一种能够对磁珠进行长效保存的磁珠保存液。
在本申请第一种典型的实施方式中，一种磁珠保存液，包括保存液A和保存液B；其中，保存液A包括缓冲液、蛋白质、增稠剂A、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂；保存液B包括有机溶剂、增稠剂B；增稠剂A为蛋白胨；增稠剂B为硅酸铝土、蒙脱土、膨润土中的一种或多种；磁珠保存液由保存液A和保存液B混合制得，pH值在7.0-8.0。
在一种优选的实施例中，保存液A的各组分的浓度为：20-100mmol/L缓冲液、5-50g/L蛋白质、100-160g/L增稠剂A、5-10g/L表面活性剂、20-40g/L甲基丙烯酸十二酯和适量的防腐剂；保存液B由有机溶剂和增稠剂B按质量比1-4:1的比例混合制得；保存液A和保存液B按质量比2-6:1的比例混合制得磁珠保存液。
在一种优选的实施例中，缓冲液独立为Tris-HCl缓冲液，缓冲液浓度为40-50mmol/L。
在一种优选的实施例中，蛋白质具体为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶蛋白中的任意一种或多种，蛋白质的浓度为20-35g/L。
在一种优选的实施例中，表面活性剂为曲拉通x-100、曲拉通x-405、吐温-20、吐温-80中的任意一种或多种，表面活性剂的浓度为1-2g/L。
在一种优选的实施例中，防腐剂独立为Proclin300，防腐剂的浓度为1-2g/L。
在一种优选的实施例中，保存液A中还包括有保护剂鲸蜡硬脂醇聚醚-25。
在一种优选的实施例中，保护剂鲸蜡硬脂醇聚醚-25的浓度为1-10g/L。
在本申请第二种典型的实施方式中，提供了一种磁珠保存液的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：将缓冲液、蛋白质、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂分别加入到水中，搅拌混匀，制得半成品；
步骤2：在步骤1制备的半成品中加入增稠剂A和蛋白质，并对半成品进行水浴加热至60℃，充分震荡混匀，完成保存液A的制备；
步骤3：将增稠剂B加入到试剂瓶中，将有机溶剂缓慢倒入增稠剂B中制备保存液B；
步骤4：将保存液B倒入到被加热的保存液A中，充分混合，制得磁珠保存液。
在本申请第三种典型的实施方式中，提供了一种磁珠保存液的使用方法，包括以下步骤：
步骤1：将磁珠加入到权利要求1-8任一项的保存液B中，保存液B的温度控制在5-10℃；
步骤2：将上述的保存液A加热至60℃使其充分溶化，再将放有磁珠的保存液B快速倒入保存液A中，完成磁珠的保存。
下面将结合具体的实施例来进一步详细解释本申请的有益效果：
实施例
磁珠保存液按照表1所示不同配方进行备样，并按照上述的一种磁珠保存液的制备方法进行配制，制备保存液A和保存液B；
表1、磁珠保存液的配方
实验例:对例1-4以及对照1-2中制备的保存液A和保存液B中进行试验，磁珠采用金准智造生物科技的核酸提取磁珠，货号为10104，检测用的核酸提取仪采用中科拜尔公司的全自动核酸提取纯化仪ZK-01；
对于例1-4，将市面购买的磁珠放入到上述的保存液B中，将保存液A水浴加热至60℃使其充分溶化，最后将保存液B快速的倒入保存液A中，保存液B中的磁珠进入到保存液A中后会随着流体分散开，同时保存液A遇到温度较低的保存液B后，会快速降温，使得保存液A和保存液B混合后的磁珠保存液能够快速的凝固，从而让磁珠长期保持分散状态，避免结块；
对于对照例1-2，直接将磁珠放入到保护液中即可。
对例1-4以及对照1-2对应的保存后的磁珠保存液进行观察，结果如下：
表2、例1-4以及对照1-2对应的保存后的磁珠保存液的观察结果
| 7天 | 15天 | 1个月 | 3个月 | 6个月 | 12个月 | |
| 例1 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 |
| 例2 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 |
| 例3 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 |
| 例4 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 | 无结块，分散性高 |
| 对照1 | 无结块，分散性差 | 无结块，分散性差 | 出现少量结块，分散性差 | 出现少量结块，分散性差 | 出现少量结块，分散性差 | 出现大量结块，分散性差 |
| 对照2 | 无结块，分散性差 | 出现少量结块，分散性差 | 出现少量结块，分散性差 | 出现大量结块，分散性差 | 出现大量结块，分散性差 | 出现大量结块，分散性差 |
由表2可以看出，例1-4对应的磁珠保存液可以在12个月时依然保持良好的保存效果，分散程度高，没有出现结块的现象，而对照1在1个月时开始出现了少量的结块，对照2在15天时就出现了结块现象，由此可以看出，例1-4的磁珠保存液能够长时间的保证磁珠不出现结块现象，采用保存液B倒入保存液A中的使用方法，能够大大提高磁珠保存时的分散性，分散性较好。
采用全自动核酸提取纯化仪ZK-01对乙型肝炎病毒样本进行核酸提取，提取所采用的磁珠分别在例1-4和对照1-2浸泡了相同的时间，然后进行提取性能测试，结果如表3所示；
表3、不同磁珠保存液在20℃室温条件下保存稳定性测试
| Ct值 | 7天 | 15天 | 1个月 | 3个月 | 6个月 | 12个月 |
| 例1 | 29.15 | 29.91 | 29.44 | 29.98 | 30.25 | 30.29 |
| 例2 | 28.51 | 28.63 | 28.79 | 28.78 | 29.07 | 29.12 |
| 例3 | 29.21 | 29.25 | 29.38 | 29.96 | 29.99 | 30.25 |
| 例4 | 29.47 | 29.63 | 29.31 | 29.70 | 29.89 | 29.95 |
| 对照1 | 29.84 | 29.75 | 30.22 | 30.79 | 31.35 | 32.81 |
| 对照2 | 29.09 | 29.63 | 30.48 | 30.97 | 31.69 | 33.15 |
由表3可以看出，例1-4的在20℃的室温环境中有着良好的稳定性，在第六个月左右，提取效率略有下降的趋势，其中采用例2配方的磁珠保存液的提取效率最好，也最稳定，在12个月时也没有出现明显下降的趋势，而对照1中，第一个月时开始出现提取效率下降的趋势，对照2中，在15天时开始出现提取效率下降的趋势。
综上所述，可以看出，本发明采用保存液A和保存液B作为磁珠保存液，并对保存液A和保存液B的配方进行改进，提高了磁珠保存时的分散性和提取效率，为磁珠的长期储存提供保障。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种磁珠保存液，其特征在于，包括保存液A和保存液B；其中，
所述保存液A包括缓冲液、蛋白质、增稠剂A、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂；
所述保存液B包括有机溶剂、增稠剂B；
所述增稠剂A为蛋白胨；
所述增稠剂B为硅酸铝土、蒙脱土、膨润土中的一种或多种；
所述磁珠保存液由保存液A和保存液B混合制得，pH值在7.0-8.0。
2.如权利要求1所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述保存液A的各组分的浓度为：20-100mmol/L缓冲液、5-50g/L蛋白质、100-160g/L增稠剂A、5-10g/L表面活性剂、20-40g/L甲基丙烯酸十二酯和适量的防腐剂；
所述保存液B由有机溶剂和增稠剂B按质量比1:1~4:1的比例混合制得；
所述保存液A和所述保存液B按质量比2:1~-6:1的比例混合制得所述磁珠保存液。
3.如权利要求2所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述缓冲液独立为Tris-HCl缓冲液，缓冲液浓度为40-50mmol/L。
4.如权利要求2所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述蛋白质具体为牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶蛋白中的任意一种或多种，蛋白质的浓度为20-35g/L。
5.如权利要求2所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述表面活性剂为曲拉通x-100、曲拉通x-405、吐温-20、吐温-80中的任意一种或多种，表面活性剂的浓度为1-2g/L。
6.如权利要求2所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述防腐剂独立为Proclin300，防腐剂的浓度为1-2g/L。
7.如权利要求1所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述保存液A中还包括有保护剂鲸蜡硬脂醇聚醚-25。
8.如权利要求7所述的磁珠保存液，其特征在于，
所述保护剂鲸蜡硬脂醇聚醚-25的浓度为1-10g/L。
9.一种磁珠保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将缓冲液、蛋白质、表面活性剂、甲基丙烯酸十二酯和防腐剂分别加入到水中，搅拌混匀，制得半成品；
步骤2：在步骤1制备的半成品中加入增稠剂A和蛋白质，并对半成品进行水浴加热至60℃，充分震荡混匀，完成保存液A的制备；
步骤3：将增稠剂B加入到试剂瓶中，将有机溶剂缓慢倒入增稠剂B中制备保存液B；
步骤4：将保存液B倒入到被加热的保存液A中，充分混合，制得所述磁珠保存液。
10.一种磁珠保存液的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将磁珠加入到权利要求1-8任一项所述的保存液B中，保存液B的温度控制在5-10℃；
步骤2：将权利要求1-8任一项所述的保存液A加热至60℃使其充分溶化，再将放有磁珠的保存液B快速倒入保存液A中，完成磁珠的保存。
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