CN116298313A - 甲状腺球蛋白测定试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及体外诊断技术领域，提出了甲状腺球蛋白测定试剂盒及其制备方法，所述甲状腺球蛋白测定试剂盒，包括试剂Ra、试剂Rb、试剂RM，所述试剂Ra包括吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；所述试剂Rb包括生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；所述试剂RM包括链霉亲和素磁珠。通过上述技术方案，解决了现有技术中甲状腺检测试剂盒检测甲状腺球蛋白的灵敏度低、准确度差、试剂成本高的问题。

Description

甲状腺球蛋白测定试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体的，涉及甲状腺球蛋白测定试剂盒及其制备方法。
背景技术
甲状腺球蛋白(Thyroglobulin，TG)，是甲状腺滤泡上皮分泌的660ku糖蛋白，每个TG约有2个甲状腺素(T4)和0.5个三碘甲腺原氨酸(T3)分子，储存在滤泡腔中。溶酶体水解TG表面T4、T3并使之释放入血，同时少量的TG也释放入血，部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除。刺激TG的分泌因素包括促甲状腺素(TSH)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)；抑制因子是γ-干扰素、α-肿瘤坏死因子和维甲酸。TG的分泌率为100mg/(60kg·d)，其血浆半衰期为(29.6±2.8)h。
TG在血清中的含量可由多种甲状腺相关疾病影响，包括桥本氏症(甲状腺炎)、Graves病(弥漫性甲状腺肿)、亚急性甲状腺炎、甲状腺功能亢进以及甲状腺瘤等。在先天性甲状腺功能缺陷的患者中，甲状腺球蛋白含量的检测可以鉴别甲状腺完全缺失、甲状腺发育不全以及其他病理情况。另外，甲状腺滤泡壁的损伤也可导致大量的TG进入血液，也被认为是甲状腺体形态完整性的特殊标志物。甲状腺被认为是甲状腺球蛋白的唯一来源。因此，对接受甲状腺全切除手术患者血清中TG水平的检测，在预示疾病的复发情况上也有着重要的作用。
目前，甲状腺球蛋白的检测方法主要有：放射免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附分析法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、电化学发光法(ECLIA)和化学发光免疫分析法(CLIA)等。RIA和ELISA由于污染性、灵敏度低、时间长等缺点，已不再居主导地位。ECLIA和CLIA由于灵敏度高、动力学范围宽、适于自动化操作等优点，被多数厂家采用，成为当前甲状腺球蛋白检测最主要的发展技术。TRFIA也能达到与CLIA相当的灵敏度，但由于其检测模块较复杂，目前的市场应用不如化学发光。
CLIA按化学反应类型分类，可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、黄嘌呤氧化酶(XOD)系统、碱性磷酸酶(ALP)系统等，但其应用于化学发光免疫分析(CLIA)时需要使用催化剂及增强剂，这将导致背景发光增强，使测量本底升高，从而限制了这一技术的灵敏度和它的应用及发展。非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等，而其中吖啶酯因发光效率高而被广泛应用，其优点主要表现为：(1)易与蛋白质联结且联结后光子产率不减少；(2)不需要加入催化剂，发光释放快速集中，且信号稳定；(3)干扰因素少，本底信号低；(4)吖啶酯分子量小，避免影响抗体结合位点。将高灵敏度的化学发光物质吖啶酯与高特异性的免疫分析结合起来，通过检测光信号，即可知道待检测的生物活性分子的含量。
在国内，甲状腺球蛋白检测在临床上以化学发光免疫分析法为主，如：灵敏度较低，试剂成本高。但此项目一般只在三甲医院有开展，在三甲以下医院开展较少，因此有待开发对甲状腺球蛋白检测灵敏度高、准确度好并且能降低检测成本的检测技术。
发明内容
本发明提出甲状腺球蛋白测定试剂盒及其制备方法，解决了现有技术的甲状腺检测试剂盒检测甲状腺球蛋白的灵敏度低、准确度差、试剂成本高的问题。
本发明的技术方案如下：
一种甲状腺球蛋白测定试剂盒，包括试剂Ra、试剂Rb、试剂RM，
所述试剂Ra包括吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；
所述试剂Rb包括生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；
所述试剂RM包括链霉亲和素磁珠。
作为进一步的技术方案，所述甲状腺球蛋白测定试剂盒还包括校准品和质控品，校准品包括甲状腺球蛋白抗原，所述质控品包括甲状腺球蛋白抗原。
作为进一步的技术方案，所述甲状腺球蛋白测定试剂盒还包括配套试剂，所述配套试剂包括浓缩清洗液、底物A和底物B。
作为进一步的技术方案，所述浓缩清洗液包括Tween-20和Proclin-300；
所述底物A为含有H2O2的酸性溶液；
所述底物B为含有曲拉通的碱性溶液。
作为进一步的技术方案，所述酸性溶液为硝酸溶液，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液。
作为进一步的技术方案，所述吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备方法如下：取甲状腺蛋白单克隆抗体，用吖啶酯标记缓冲液稀释后，加入吖啶酯溶液混匀，避光反应1-2h，加入吖啶酯封闭液，混匀后封闭30-60min，透析，得到吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体。
作为进一步的技术方案，所述生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备方法如下：取甲状腺球蛋白单克隆抗体，加入生物素标记缓冲液混匀，避光反应1-2h，透析，得到生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体。
本发明还提出了所述甲状腺球蛋白测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
S1、制备试剂Ra：将吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体与Ra稀释液混合，得到试剂Ra；
S2、制备试剂Rb：将生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体与Rb稀释液混合，得到试剂Rb；
S3、制备试剂RM：将链霉亲和素磁珠原液与磁珠稀释液混匀，得到试剂RM；
S4、制备校准品：将甲状腺球蛋白抗原与校准品稀释液混合，得到校准品；
S5、制备质控品：将甲状腺球蛋白抗原与质控品稀释液混合，得到质控品。
作为进一步的技术方案，所述制备方法还包括以下步骤：
S6、制备浓缩清洗液：将1％的Tween-20和0.1％的Proclin300加入磷酸盐缓冲溶液中，调节pH至7.2，得到浓缩清洗液。
S7、制备底物A：将H2O2加入硝酸溶液中，加入纯化水混合均匀，得到底物A；
S8、制备底物B：将曲拉通X100加入氢氧化钠溶液中，混合均匀，得到底物B。
本发明还提出了所述甲状腺球蛋白测定试剂盒的使用方法，包括以下步骤：在检测仪器中依次加入试剂Ra、待测样品、试剂Rb、试剂RM，反应14-16分钟后，用清洗液清洗，加入底物A和底物B，检测发光信号。
本发明中，甲状腺球蛋白测定试剂盒在使用时，采用全自动加样模式，相对于其他手工加样的试剂盒，排除了人为加样存在的误差，在一定程度上可以将人为干扰因素降到最低，人为干扰因素小。
本发明的工作原理及有益效果为：
1、本发明中，甲状腺球蛋白测定试剂盒使用链霉亲和素磁珠-生物素标记抗体-吖啶酯标记抗原体系，采用链霉亲和素磁珠与生物素标记的类似物可以牢牢的结合在一起，减少非特异性吸附，提高测试样本的准确度，抗干扰能力强，选择吖啶酯为化学发光免疫分析系统的标记材料，该材料由激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要酶的参与，节约时间及成本。采用该试剂盒进行TG的检测具有较高的灵敏度和特异性，获得检测结果的准确性更高、时间更短、操作更方便。
2、本发明的甲状腺球蛋白测定试剂盒具有以下优势：(1)灵敏度高：最低检出限低于0.1ng/mL，灵敏度可达0.05ng/mL；(2)准确度高：检测国际标准品的偏差均小于10％；(3)线性范围广：线性范围为0.4～1000ng/mL；(4)重复性强：检测高低浓度样本的变异系数CV值均小于8％；(5)特异性高：检测高浓度TSH、FSH、T3、T4样本均无交叉反应；(6)稳定性好：在37℃加速破坏14天，发光值降幅在10％以内；在4℃冰箱保存13个月，发光值降幅在10％以内；(7)相关性好：与罗氏测值相关系数R2为0.985。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明性能测试8中本试剂盒临床比对相关性；
图2为本发明性能测试8中对比试剂盒临床比对相关性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本发明保护的范围。
实施例1
甲状腺球蛋白测定试剂盒，包括试剂Ra、试剂Rb、试剂RM、校准品、质控品：
试剂Ra包括吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；
试剂Rb包括生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；
试剂RM包括链霉亲和素磁珠；
校准品包括甲状腺球蛋白抗原；
质控品包括甲状腺球蛋白抗原；
还包括配套试剂，配套试剂包括浓缩清洗液、底物A和底物B：
底物A为含有H2O2的硝酸溶液；
底物B为含有曲拉通的氢氧化钠溶液；
上述甲状腺球蛋白测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
S1、制备试剂Ra：
(1)取0.1mg甲状腺球蛋白单克隆抗体，用吖啶酯标记缓冲液稀释至0.5mg/mL，加入5μL浓度为4mM的吖啶酯溶液，用数显涡旋混匀仪混匀20秒，混匀速率为15r/min，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上70r/min避光混匀反应1h；
其中，吖啶酯标记缓冲液为0.1M PB、0.15M NaCl、0.05％Proclin300，pH为8.0，以配制1L吖啶酯标记缓冲液为例，配方如下：NaH2PO4·2H2O 0.83g，Na2HPO4·2H2O 33.92g，NaCl8.77g，Proclin300 0.5mL，纯化水定容至1L；
(2)加入50μL吖啶酯封闭液，用移液器吹打混匀10次，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上70r/min避光混匀封闭30min；
其中，吖啶酯封闭液为0.1M PB、0.15M NaCl、1％赖氨酸、0.05％ Proclin300，pH为8.0；以配制1L吖啶酯封闭液为例，配方如下：NaH2PO4·2H2O 0.83g，Na2HPO4·2H2O33.92g，NaCl8.77g，Proclin300 0.5mL，L-赖氨酸10g，纯化水定容至1L；
(3)取出透析袋，用洁净无尘纸拭去纯化水，用透析夹将透析袋底端夹紧，将封闭后的抗体溶液转移至透析袋中，用透析夹将透析袋顶端夹紧，袋内溶液上方留出一段空气；将整个透析装置放入盛有1000mL的吖啶酯透析缓冲液的烧杯中，于2℃～8℃层析柜中搅拌透析，搅拌转速250～300r/min；每2小时更换一次透析缓冲液，直至发光值小于10万，第一次过夜透析前至少换液2次，取出透析装置，用洁净无尘纸尽量拭去表面所有水分，打开透析夹，收集透析袋内的标记溶液，测量体积，再加入等体积甘油，吹打混匀后得到吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体，避光2℃～8℃保存；
其中，吖啶酯透析缓冲液为0.1M PB、0.15M NaCl、0.1％Proclin300，pH为6.3；以配制1L吖啶酯透析缓冲液为例，配方如下：NaH2PO4 9.306g，Na2HPO4 3.195g，NaCl 8.77g，Proclin300 1mL，纯化水定容至1L；
(4)将吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体与Ra稀释液按体积比1:200混合均匀，得到试剂Ra；
其中，Ra稀释液为0.02M PBS、0.3％Tween20、5％BSA、0.1％Proclin300，pH为7.2；以配制1LRa稀释液为例，配方如下：NaH2PO4 2.0442g，Na2HPO4 0.6719g，NaCl 9g，Tween203mL，BSA 50g，Proclin300 1mL，纯化水定容至1L；
S2、制备试剂Rb：
(1)取0.1mg甲状腺球蛋白单克隆抗体，用生物素标记缓冲液稀释至1mg/mL，加入3.5μL浓度为1mg/mL的生物素溶液，用数显涡旋混匀仪混匀0.3min，混匀速率为15r/min，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上70r/min避光混匀反应1h；
其中，生物素标记缓冲溶液为0.05M CB，pH为9.6；以配制1LRa生物素标记缓冲溶液为例，配方如下：NaH2PO4 0.6719g，Na2HPO4 2.0442g，NaCl 9g，纯化水定容至1L；
(2)取出透析袋，用洁净无尘纸拭去纯化水，用透析夹将透析袋底端夹紧，将混匀后的抗体溶液转移至透析袋中，用透析夹将透析袋顶端夹紧，袋内溶液上方留出一段空气；将整个透析装置放入盛有1000mL的生物素透析缓冲液的烧杯中，于2℃～8℃层析柜中搅拌透析，搅拌转速250～300r/min；每2小时更换一次透析缓冲液，换液次数为5次，取出透析装置，用洁净无尘纸尽量拭去表面所有水分，打开透析夹，收集透析袋内的标记溶液，测量体积，再加入等体积甘油，吹打混匀后得到生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体，避光2℃～8℃保存；
其中，生物素透析缓冲液为0.02M PBS，pH为7.2；
(3)将生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体与Rb稀释液按体积比1:200混合均匀，得到试剂Rb；
其中，Rb稀释液为0.02M PBS、0.02M KCl、2.5％蔗糖、0.5％水解明胶、8％甘油、0.1％Tween20、0.1％Proclin300、10％绵羊血清，pH为7.4；以配制1LRb稀释液为例，配方如下：NaH2PO4·2H2O 0.5928g，Na2HPO4 2.2998g，NaCl 8.77g，KCl 1.52g，蔗糖25g，水解明胶5g，甘油80mL，Tween20 1mL，Proclin300 1mL，绵羊血清100mL，纯化水定容至1L；
S3、制备试剂RM：
(1)将浓度为100mg/mL的链霉亲和素磁珠原液置于血液混匀仪上，70r/min混匀至磁珠分散均匀无凝集，得到混匀后的链霉亲和素磁珠原液重悬磁珠；
(2)取499mL磁珠稀释液加入到润洗后的玻璃瓶中，加入1mL混匀后的链霉亲和素磁珠原液重悬磁珠，放入生化培养箱中25℃血液混匀仪上70r/min混匀30min，得到试剂RM，放于2℃～8℃冰箱内保存；
其中，磁珠稀释液为0.02M PBS，2.5％蔗糖，1％BSA，8％甘油，0.1％Tween20，0.1％Proclin300，pH为7.2，以配制1L磁珠稀释液为例，配方如下：NaH2PO4·2H2O 0.874g，Na2HPO4 2.0442g，NaCl 9g，蔗糖25g，BSA 10g，甘油80mL，Tween20 1mL，Proclin300 1mL，纯化水定容至1L。
S4、制备校准品：
用校准品稀释液将甲状腺球蛋白抗原配制成浓度为0ng/mL、10ng/mL、80ng/mL的校准品0、校准品1和校准品2；
其中，校准品稀释液为0.02M PBS、5％BSA、5％蔗糖、1％ Tween20、0.5％Proclin-300，pH为7.2，以配制1L校准品稀释液为例，配方如下：NaH2PO4 0.6719g，Na2HPO42.0442g，NaCl 9g，BSA 50g，蔗糖50g，Tween20 10mL，Proclin300 5mL，纯化水定容至1L；甲状腺球蛋白抗原购自武汉奥科博泰生物科技有限公司；
S5、制备质控品：
用质控品稀释液将甲状腺球蛋白抗原配制成浓度为20ng/mL、80ng/mL的质控品1和质控品2；
其中，质控品稀释液的配方与标准品稀释液相同。
S6、制备浓缩清洗液：
称量4gNaH2PO4、22.99gNa2HPO4和180gNaCl至1000mL的容器中，再加入1％的Tween-20、0.1％的Proclin300和少量纯化水，搅拌混匀，将pH调至7.2，最后使用纯化水定容至1000mL，得到浓缩清洗液，保存备用；
使用前将浓缩清洗液用纯化水按1：19进行稀释后使用。
S7、制备底物A：
量取1000mL纯化水至棕色玻璃瓶中，然后量取6.9mL浓硝酸将其缓慢倒入，倒入的过程中边倒入边搅拌，再量取28.6mL的H2O2将其缓慢倒入，最后量取963mL纯化水将其倒入混合均匀，得到底物A，用棕色瓶分装成100mL/支，2～8℃保存备用。
S8、制备底物B：量取1994mL的纯化水，将其倒入到玻璃瓶中，再称量24gNaOH，将其倒入溶解混匀，最后量取6.4mL的曲拉通X100倒入混合均匀，得到底物B，用白色瓶分装成100mL/支，2～8℃保存备用。
实施例2甲状腺球蛋白测定试剂盒的使用方法
检测方法：在检测仪器中依次加入50μL Ra、15μL样品、50μL Rb和50μL RM，反应15min后，加入清洗液300μL，重复清洗3次，加入100μL底物A、100μL底物B，检测发光信号。
对实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒按照如下方法进行性能测试：
测试时，采用全自动化学发光免疫分析仪扫描读取试剂盒的校准信息，通过使用校准品0、校准品1和校准品2校正该项目的校准主曲线，并用质控品1和质控品2进行验证；
其中，全自动化学发光免疫分析仪型号为Shine i2910，厂家为深圳迎凯生物科技有限公司；
检测方法：仪器依次加入50μL Ra、15μL样品、50μL Rb和50μL RM，反应15min后，清洗，加入底物液A、底物液B检测发光信号。
性能测试1、最低检出限
重复测定零浓度校准品20次，得到20次测定结果的发光值(RLU)，计算其平均值M和标准差SD，得出M+2SD所对应的RLU值，根据零浓度校准品与相邻浓度校准品之间的浓度-RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD所对应的RLU值带入上述方程中，计算得出对应的浓度，即为最低检出限，测试结果如下表所示：
表1最低检出限测试结果
Figure SMS_1
从表1中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒的最低检出限为0.05ng/mL，低于0.1ng/mL。
性能检测2、准确度
测浓度为10ng/mL和100ng/mL两个浓度的甲状腺球蛋白国际标准品，其结果记为M，根据公式：测量偏差＝(M-理论值)/理论值×100％，分别计算测量偏差，测试结果如下表所示：
表2准确度测试结果
Figure SMS_2
从表2中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒检测国际标准品的偏差在-6.10％-5.90％，均小于10％。
性能检测3、线性
将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度，其中低值浓度的样本必须接近线性范围的下限。将每一浓度的样本重复检测3次，计算平均值，将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数r，r应≥0.99，测试结果如下表所示：
表3线性测试结果
Figure SMS_3
从表3中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒在0.4～1000ng/mL范围内，线性相关系数为0.9987。
性能测试4、重复性
用高低浓度的样本各重复检测10次，计算10次测量结果的平均值(M)和标准差(SD)，根据公式(1)得出变异系数(CV)。
CV＝SD/M×100％………………………(1)
式中：CV——变异系数
M——10次测量结果的平均值
SD——10次测量结果的标准差
测试结果如下表所示：
表4重复性测试结果
Figure SMS_4
Figure SMS_5
从表4中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒检测低浓度样本的变异系数CV为3.31％，检测高浓度样本的变异系数CV为3.81％，检测高低浓度样本的变异系数CV值均小于8％。
性能测试5、特异性
检测浓度为1000mIU/L TSH、200ng/mL FSH、10000ng/mL T3、10000ng/mL T4，检测结果如下表所示：
表5特异性测试结果
Figure SMS_6
从表5中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒检测高浓度TSH、FSH、T3、T4样本均无交叉反应，特异性高。
性能测试6、热加速稳定性
将试剂盒置于37℃加速破坏的环境，在第3天，第7天和第14天分别取出，测校准品发光值。测试结果如下表所示：
表6热加速稳定性测试结果
校准品 浓度(ng/mL) 初值 第3天 降幅 第7天 降幅 第14天 降幅
S0 0 1180 1153 -2.29％ 1154 -2.20％ 1110 -5.93％
S1 1 4256 4224 -0.75％ 4237 -0.45％ 4002 -5.97％
S2 4 12126 11930 -1.62％ 11826 -2.47％ 11214 -7.52％
S3 16 47071 46277 -1.69％ 46085 -2.09％ 45222 -3.93％
S4 60 171300 168922 -1.39％ 166574 -2.76％ 163867 -4.34％
S5 250 497239 482575 -2.95％ 488236 -1.81％ 467280 -6.03％
S6 1000 912832 901593 -1.23％ 890370 -2.46％ 878310 -3.78％
从表6中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒在37℃加速破坏14天后的发光值降幅在10％以内。
性能测试7、长期稳定性
将试剂盒置于4℃冰箱保存，在第3个月，第7个月，第12个月和第13个月分别取出测试校准品发光值。测试结果如下表所示：
表7长期稳定性测试结果
Figure SMS_7
从表7中可以看出，实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒在4℃冰箱保存13个月后的发光值降幅在10％以内。
性能测试8、临床比对
将实施例1的甲状腺球蛋白测定试剂盒(以下简称本试剂盒)与迈克生物股份有限公司生产的甲状腺球蛋白检测试剂盒(以下简称对比试剂盒)以及罗氏诊断公司生产的甲状腺球蛋白检测试剂盒(以下简称罗氏)检测同一样本，测试结果见下表：
表8临床比对测试结果
Figure SMS_8
Figure SMS_9
根据临床测试结果分别验证其相关性，结果如图1-2所示，从图中可以看出，以罗氏测值为标准，本试剂盒的R2为0.985，对比试剂盒的R2为0.9368，本试剂盒的相关性明显优于对比试剂盒。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，包括试剂Ra、试剂Rb、试剂RM，
所述试剂Ra包括吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；
所述试剂Rb包括生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体；
所述试剂RM包括链霉亲和素磁珠。
2.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，还包括校准品和质控品，校准品包括甲状腺球蛋白抗原，所述质控品包括甲状腺球蛋白抗原。
3.根据权利要求2所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，还包括配套试剂，所述配套试剂包括浓缩清洗液、底物A和底物B。
4.根据权利要求3所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述浓缩清洗液包括Tween-20和Proclin-300；
所述底物A为含有H2O2的酸性溶液；
所述底物B为含有曲拉通的碱性溶液。
5.根据权利要求4所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述酸性溶液为硝酸溶液，所述碱性溶液为氢氧化钠溶液。
6.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备方法如下：取甲状腺蛋白单克隆抗体，用吖啶酯标记缓冲液稀释后，加入吖啶酯溶液混匀，避光反应1-2h，加入吖啶酯封闭液，混匀后封闭30-60min，透析，得到吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体。
7.根据权利要求1所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体的制备方法如下：取甲状腺球蛋白单克隆抗体，加入生物素标记缓冲液混匀，避光反应1-2h，透析，得到生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体。
8.如权利要求1所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、制备试剂Ra：将吖啶酯标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体与Ra稀释液混合，得到试剂Ra；
S2、制备试剂Rb：将生物素标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体与Rb稀释液混合，得到试剂Rb；
S3、制备试剂RM：将链霉亲和素磁珠原液与磁珠稀释液混匀，得到试剂RM；
S4、制备校准品：将甲状腺球蛋白抗原与校准品稀释液混合，得到校准品；
S5、制备质控品：将甲状腺球蛋白抗原与质控品稀释液混合，得到质控品。
9.根据权利要求8所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：
S6、制备浓缩清洗液：将1％的Tween-20和0.1％的Proclin300加入磷酸盐缓冲溶液中，调节pH至7.2，得到浓缩清洗液。
S7、制备底物A：将H2O2加入硝酸溶液中，加入纯化水混合均匀，得到底物A；
S8、制备底物B：将曲拉通X100加入氢氧化钠溶液中，混合均匀，得到底物B。
10.如权利要求1-7任意一项所述的甲状腺球蛋白测定试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：在检测仪器中依次加入试剂Ra、待测样品、试剂Rb、试剂RM，反应14-16分钟后，用清洗液清洗，加入底物A和底物B，检测发光信号。
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