CN115097122A - 抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用 - Google Patents

抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗缪勒氏管激素抗体‑酶标记物的制备方法，包括以下步骤：碱性磷酸酶的马来酰胺化、AMH抗体的巯基化、交联、封闭、纯化，该制备方法优化改良了常规的采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤，所述方法中采用超滤的方式纯化马来酰胺化的碱性磷酸酶、巯基化的AMH抗体及标记后的AMH抗体‑碱性磷酸酶标记物，取代常规的透析方式的纯化，不仅省去了透析的繁杂过程，缩短了酶标抗体的制备时间，还可以减少原料损耗；还公开了利用该制备方法制得的抗缪勒氏管激素抗体‑酶标记物及利用所述抗缪勒氏管激素抗体‑酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的应用，其制得的AMH酶标抗体检测试剂检测AMH灵敏度高，稳定性好。

Description

抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及医疗诊断技术领域，特别是涉及一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用。
背景技术
抗缪勒管激素(Anti-mullerian hormone，AMH)是一种属于转化生长因子β(TGFβ)家族的二聚体糖蛋白。AMH最早的商业化试剂盒是由Anshlabs公司研发的酶免试剂盒，并且该试剂盒是应用Anshlab公司AMH专利抗体研发的N端-配C端鼠单克隆抗体酶免试剂盒。对于已经注册的酶联免疫法、量子点荧光、荧光层析法，酶联免疫法需要手动操作，或者半手动操作，步骤繁琐，耗时耗力，并且容易人为因素导致交叉污染；胶体金侧向免疫层析法操作简单快捷，但是由于方法本身的限制，其灵敏度低，且容易导致批间，批内差异较大。
现有技术中存在化学发光类信号强度指示剂标记AMH抗体时引起抗体灵敏度下降、发光强度不理想、标记复合物不稳定等问题。抗体和所有蛋白一样，是由氨基酸残基组成的。蛋白的氨基基团(包括赖氨酸侧链和氨基端)通常被用于共价链接标记物。尽管在文献中报道了多种多样的标记方法，但实际上只有4种最常用的标记方法，且不同之处仅在于标记物被转换为反应性衍生物的方式。无论何种方法，几乎毫无例外的都是将标记物共价连接到抗体分子的赖氨酸残基上。四种常用标记方法包括高碘酸钠、琥珀酰酯(NHS)、碳二亚胺、同型或异型双功能试剂，当标记物为蛋白分子(如碱性磷酸酶ALP)时，由于抗体和标记分子具有多个胺，因此抗体标记流程略为复杂。
在酶促化学发光免疫分析检测中，抗原或抗体酶标记物对免疫分析的灵敏度及特异性具有重要的作用，是酶促化学发光免疫分析检测中的关键试剂。碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，是一种酶促化学发光免疫诊断试剂应用广泛的酶，通过某些技术手段将其与抗体结合，是酶促化学发光免疫诊断试剂开发中非常重要的一步。一般情况下，碱性磷酸酶与抗体交联的方法主要有如下几种：戊二醛法、高碘酸钠法、异双官能团法。
碱性磷酸酶作为一种标记酶，广泛应用于临床免疫的定量诊断中。碱性磷酸酶的标记物溶液是体外诊断试剂盒的组分之一，碱性磷酸酶的酶活稳定性成为试剂盒质量性能的重要影响因素。同其他生物酶一样，碱性磷酸酶半衰期短、易失活。酸、碱、盐离子、温度条件的变化都会改变甚至使酶完全失去活性。碱性磷酸酶在溶液中的长期稳定保存技术是体外诊断试剂盒产品的关键技术。提高酶稳定性技术包括化学修饰技术和添加剂技术。然而现有技术存在以下缺陷：
采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤常使用透析的方法纯化中间品及产物，过程繁杂，用时长，且原料损耗较大；
2)现有酶标抗体稀释液制备方法不能满足不同方法制备的酶标抗体稳定性需求，市场上鲜有通用的碱性磷酸酶酶标记物稳定剂，缺乏具有针对性的稳定稀释液制备方法。
因此亟需提供一种新型的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法及其应用来解决上述问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗缪勒氏管激素抗体酶标记物及其制备方法和应用，优化改良了常规的采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤，缩短了酶标抗体的制备时间，制得的AMH酶标抗体检测试剂检测AMH灵敏度高，稳定性好。
为解决上述技术问题，本发明采用的第一个技术方案是：提供一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，包括以下步骤：
(1)碱性磷酸酶的马来酰胺化
配制GMBS工作液，将ALP溶液与GMBS工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化2～3次；
(2)AMH抗体的巯基化
配制DTT工作液，将AMH抗体溶液与DTT工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化3～5次；
(3)交联、封闭
将马来酰胺化的碱性磷酸酶与巯基化的AMH抗体混合，室温避光反应1～2h；反应结束后，按一定浓度先后加入N-乙基马来酰亚胺和L-半胱氨酸，放置于室温，避光反应30min～60min，进行封闭；
(4)纯化
将步骤(3)制备的交联产物采用超滤离心管离心纯化3～5次，将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。
在本发明一个较佳实施例中，步骤(1)的具体步骤包括：
(11)配置0.9mg/ml GMBS工作液，避光
将0.0060g GMBS加入600ul DMSO，混匀，取100ul加入1ml pH为7.45的PBS中混匀；
(12)将配制好的0.9mg/ml GMBS工作液加入5mg/ml ALP中，室温避光反应30～60min，GMBS：ALP的摩尔比为10:1-50:1；
(13)将反应液用超10kD超滤离心管，10000r/min，10min/次，浓缩纯化2～3次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得马来酰胺化的碱性磷酸酶。
在本发明一个较佳实施例中，步骤(2)的具体步骤包括：
(21)配置10mM DTT工作液，避光
将0.0154g DTT溶于1ml 10mM pH为7.1的PBS中，混匀，取100ul加入900ul PBS7.1中，得10mM DTT；
(22)将10mM DTT工作液加入2mg/ml AMH抗体中，室温避光反应30-60min，DTT：AMH抗体的摩尔比为100：1～600:1；
(23)将反应液用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得巯基化的AMH抗体。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(3)中，加入N-乙基马来酰亚胺的浓度为按照每毫克蛋白加入1mgN-乙基马来酰亚胺；加入L-半胱氨酸的浓度为按照每毫克蛋白加入1mgL-半胱氨酸。
在本发明一个较佳实施例中，步骤(4)的具体步骤包括：
将步骤(3)制备的交联产物用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液；将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。
进一步的，抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备过程中所述交联剂GMBS可替换为Sulfo-GMBS、SMCC、Sulfo-SMCC、SMPB、Sulfo-SMPB、SPDP、LC-SPDP、EMCS、AMAS、SIAB、Sulfo-SIAB等异型双功能交联剂(氨基-巯基)；
所述还原剂可以是TCEP、DTT、巯基乙醇、硫代硫酸钠中的一种或多种。
为解决上述技术问题，本发明采用的第二个技术方案是：提供一种由如上任一项所述方法制备的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物。
为解决上述技术问题，本发明采用的第三个技术方案是：提供一种利用如上所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的应用。
在本发明一个较佳实施例中，制备AMH酶标抗体检测试剂的方法包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000041
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至6.0～7.2，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
进一步的，所述缓冲盐采用MES、HEPES、乙酸/乙酸钠中的一种或几种。
进一步的，所述表面活性剂采用Brij35或/和S9。
进一步的，所述多元醇采用山梨醇、肌醇、木糖醇中的一种或几种。
进一步的，所述非还原糖采用海藻糖或/和蔗糖。
进一步的，所述防腐剂采用Proclin300。
本发明的有益效果是：
(1)本发明提供了一种碱性磷酸酶标记AMH抗体的制备方法，优化改良了常规的采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤，所述方法中采用超滤的方式纯化马来酰胺化的碱性磷酸酶、巯基化的AMH抗体及标记后的AMH抗体-碱性磷酸酶标记物，取代常规的透析方式的纯化，不仅省去了透析的繁杂过程，缩短了酶标抗体的制备时间，还可以减少原料损耗；
(2)本发明所述酶标抗体稀释液在传统稀释液配方成分的基础上引入2,6-吡啶二羧酸并对配方进行优化，该稀释液适用于GMBS法制备的酶标抗体，具备专属性，填补了GMBS法制备的AMH抗体-碱性磷酸酶酶标抗体所需稳定稀释液的制备方法的空白；
(3)本发明还提供了一种于磁微粒化学发光法检测抗缪勒氏管激素的酶标抗体试剂的制备方法，应用该试剂检测AMH，灵敏度高，稳定性好。
附图说明
图1是所述AMH酶标抗体检测试剂校准品的线性曲线图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例1：
一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，包括以下步骤：
(1)碱性磷酸酶的马来酰胺化：
(11)配置0.9mg/ml GMBS工作液，避光
将0.0060g GMBS加入600ul DMSO，混匀，取100ul加入1ml pH为7.45的PBS中混匀；
(12)将配制好的0.9mg/ml GMBS工作液加入5mg/ml ALP中，室温避光反应30～60min，标记比例(GMBS：ALP的摩尔比)为10:1～50:1；
(13)将反应液用超10kD超滤离心管，10000r/min，10min/次，浓缩纯化2～3次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得马来酰胺化的碱性磷酸酶。
(2)AMH抗体的巯基化：
配制DTT工作液，将AMH抗体溶液与DTT工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化3～5次；
(21)配置10mM DTT工作液，避光
将0.0154g DTT溶于1ml 10mM pH为7.1的PBS中，混匀，取100ul加入900ul PBS7.1中，得10mM DTT；
(22)将10mM DTT工作液加入2mg/ml AMH抗体中，室温避光反应30～60min，标记比例(DTT：AMH抗体的摩尔比)为100：1～600:1；
(23)将反应液用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得巯基化的AMH抗体。
(3)交联、封闭：
将马来酰胺化的碱性磷酸酶与巯基化的AMH抗体混合，室温避光反应1～2h；反应结束后，按照每毫克蛋白加入1mg N-乙基马来酰亚胺，放置于室温，避光反应30min～60min封闭未反应的巯基；再按照每毫克蛋白加入1mg的L-半胱氨酸，放置于室温，避光反应30min～60min封闭未反应的马来酰亚胺基团；
(4)纯化：
将步骤(3)制备的交联产物用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液；将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。
实施例2：
一种利用实施例1所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的方法，包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000061
Figure BDA0003696431320000071
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至7.2，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
实施例3：
一种利用实施例1所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的方法，包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000072
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至7.2，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
试验发现，与实施例2相比，2,6-吡啶二羧酸对AMH抗体-碱性磷酸酶标记物的活性保存存在很大的影响。
实施例4：
一种利用实施例1所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的方法，包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000081
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至6.5，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
试验发现，与实施例3相比，AMH抗体-碱性磷酸酶标记物在偏酸性的稀释液中保存更稳定。
实施例5：
一种利用实施例1所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的方法，包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000082
Figure BDA0003696431320000091
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至6.5，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
试验发现，与实施例4相比，BSA浓度由1％变为3％，结果显示稳定效果提升不明显。
实施例6：
一种利用实施例1所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的方法，包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000092
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至6.5，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
试验发现，与实施例5相比，溶液中山梨醇浓度由1％变为5％，结果显示该实例的稳定效果有明显提升，山梨醇对AMH抗体-碱性磷酸酶标记物的活性保存存在很大的影响。
实施例7：
一种利用实施例1所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的方法，包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure BDA0003696431320000101
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至6.5，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
试验发现，与实施例6相比，溶液中海藻糖浓度由1％变为10％，结果显示该实例的稳定效果有明显提升，海藻糖浓度对AMH抗体-碱性磷酸酶标记物的活性保存存在很大的影响。
利用所述制得的AMH酶标抗体检测试剂检测AMH的实施方式：
所需试剂：校准品/样本、AMH抗体包被磁珠工作液、AMH酶标抗体工作液、样本稀释液、清洗液、底物。采用本发明所述AMH检测酶标抗体试剂，以APS-5为发光底物。
检测过程：将样本在全自动化学发光免疫分析仪上进行(夹心化学发光免疫分析法)，其检验原理如下：
第一步：将样本与包被着抗AMH单克隆抗体的超顺磁性微粒(磁珠)、抗AMH单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵育，样本中AMH和包被在磁珠上的抗AMH单克隆抗体结合，同时抗AMH单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中AMH另一位点结合，形成抗原抗体夹心免疫复合物。反应完成后，通过清洗步骤洗去未结合的物质。
第二步：将化学发光底物液(APS-5)添加到反应管中，发光底物被碱性磷酸酶分解，产生化学发光，由广电倍增管对反应所产生的光子数进行测量，所产生的光子数与样本内AMH的浓度成正比，通过检测仪的定标曲线计算得到样本中AMH的浓度。
性能评价
(1)线性：
对配制好的AMH校准品进行测定，得到校准品曲线如图1所示，线性度良好。
校准品数据：
Figure BDA0003696431320000111
(2)灵敏度：
取0ng/mL的标定液，用同一批次试剂重复测试20次，得到发光值平均值M和标准偏差SD，以0ng/ml AMH和0.5ng/ml之间的浓度对应发光值进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD所对应的发光值代入上述方程中，求出对应的浓度值，即为检测试剂的最低检测限，通过计算为0.0373ng/mL。
Figure BDA0003696431320000112
(3)精密度：
取线性范围内浓度为32ng/mL，0.5ng/mL的两个AMH样本，用三批试剂进行测试，分别计算批内及批间差，结果表明，试剂盒批间差，批内差均小于5％。
Figure BDA0003696431320000121
Figure BDA0003696431320000122
(4)热稳定性试验
将实施例7制备的酶标工作液，放入37℃恒温恒湿(40～60％相对湿度)培养箱，进行加速稳定性实验。以32ng/ml AMH校准品为样本，测定放入前以及连续7天检测发光值(配合AMH检测所需的其他组分)，计算溶液中酶标抗体活性剩余比例(加速试验后的检测发光值与放入37℃保存前检测发光值的比率)
检测过程：将样本在全自动化学发光免疫分析仪上进行(夹心化学发光免疫分析法)加速天数第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天
活性剩余比例102.1％98.5％101.2％97.5％98.3％97.1％97.2％
由上表结果可知，AMH酶标抗体试剂经过加速，7天后酶标抗体活性损失为2.8％。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims (10)

1.一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)碱性磷酸酶的马来酰胺化
配制GMBS工作液，将ALP溶液与GMBS工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化2～3次；
(2)AMH抗体的巯基化
配制DTT工作液，将AMH抗体溶液与DTT工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化3～5次；
(3)交联、封闭
将马来酰胺化的碱性磷酸酶与巯基化的AMH抗体混合，室温避光反应1～2h；反应结束后，按一定浓度先后加入N-乙基马来酰亚胺和L-半胱氨酸，放置于室温，避光反应30min～60min，进行封闭；
(4)纯化
将步骤(3)制备的交联产物采用超滤离心管离心纯化3～5次，将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。
2.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤包括：
(11)配置0.9mg/ml GMBS工作液，避光
将0.0060g GMBS加入600ul DMSO，混匀，取100ul加入1ml pH为7.45的PBS中混匀；
(12)将配制好的0.9mg/ml GMBS工作液加入5mg/ml ALP中，室温避光反应30～60min，GMBS：ALP的摩尔比为10:1-50:1；
(13)将反应液用超10kD超滤离心管，10000r/min，10min/次，浓缩纯化2～3次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得马来酰胺化的碱性磷酸酶。
3.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤包括：
(21)配置10mM DTT工作液，避光
将0.0154g DTT溶于1ml 10mM pH为7.1的PBS中，混匀，取100ul加入900ul PBS 7.1中，得10mM DTT；
(22)将10mM DTT工作液加入2mg/ml AMH抗体中，室温避光反应30-60min，DTT：AMH抗体的摩尔比为100：1～600:1；
(23)将反应液用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得巯基化的AMH抗体。
4.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，加入N-乙基马来酰亚胺的浓度为按照每毫克蛋白加入1mgN-乙基马来酰亚胺；加入L-半胱氨酸的浓度为按照每毫克蛋白加入1mg L-半胱氨酸。
5.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，步骤(4)的具体步骤包括：
将步骤(3)制备的交联产物用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液；将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。
6.一种由如权利要求1至5任一项所述方法制备的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物。
7.一种利用如权利要求6所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，制备AMH酶标抗体检测试剂的方法包括以下步骤：
(1)配置酶标抗体稀释液，按质量分数包括以下组分：
Figure FDA0003696431310000021
Figure FDA0003696431310000031
将上述各组分溶解于纯水中，并调节pH至6.0～7.2，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液；
(2)将所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物储存液，用上述步骤(1)制备的酶标抗体稀释液，按1:600～1:4000稀释到所需要的浓度，得到AMH酶标抗体检测试剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述多元醇采用山梨醇、肌醇、木糖醇中的一种或几种。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述非还原糖采用海藻糖或/和蔗糖。
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