CN116267602A - 一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于剑叶芦竹繁殖技术领域，公开了一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法，包括以下步骤：1）将消毒冲洗后的茎段切成1.5~2.5cm长的带腋芽茎段作为外植体；2）将外植体接种至诱导培养基上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行芽丛诱导培养，获得丛生芽；3）将单个丛生芽接种至继代培养基上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行继代培养，获得无根苗；4）将无根苗转接至生根培养基上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行无根苗的生根培养；5）移栽：将5cm的生根苗炼苗一周，清洗，消毒，移栽。本发明提供组培方法，可培育得到的剑叶芦竹种苗无菌健壮、质量高、移栽后成活率高，有利于剑叶芦竹种苗的工厂化生产。
Description
技术领域
本发明属于剑叶芦竹繁殖技术领域，涉及一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法。
背景技术
剑叶芦竹，商用名：肥肥草，是芦竹的一种，属于禾本科芦竹属，剑叶芦竹亚型，为多年生草本植物，具发达根状茎，茎秆粗大，生物量大。剑叶芦竹适应性强，具有蛋白质含量高，可以用于家畜家禽的饲料；耐盐碱、耐贫瘠、耐干旱、耐涝等特点，在防治土壤退化和生态治理修复上有较大潜力。此外，剑叶芦竹还可以用于生产纸张、板材及生物质能源，利用途径多样，发展前景广阔。随着剑叶芦竹功能的逐渐开发，其种苗需求量越来越大。如何快速繁殖大量种苗成为其应用推广的关键问题。
由于剑叶芦竹不能靠种子繁育，只能通过无性繁殖进行繁育。常规的方法是分蘖埋根或茎秆分节扦插，但这种方法存在繁殖系数低、增殖速度慢、种苗质量差、种植后分蘖少等问题，难以满足剑叶芦竹生产发展的需要。
植物组织培养技术具有繁殖系数高、繁殖速度快、种苗质量高、可以规模化工厂生产等优点，可以培育大量整齐一致的优质无病种苗，能够有效地解决剑叶芦竹优质种苗供应紧张的问题，满足社会对剑叶芦竹生产发展的需求。
发明内容
本发明针对现有技术中剑叶芦竹繁殖速度慢、种苗质量不齐的技术问题，提供一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法，培育得到的剑叶芦竹（肥肥草）种苗无菌健壮、质量高、移栽后成活率高，有利于剑叶芦竹（肥肥草）种苗的工厂化生产。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法，包括以下步骤：
1）外植体消毒：取幼嫩的剑叶芦竹茎秆，去掉叶片及叶鞘，截成小段，先用洗洁精稀释液浸泡15min，再用流水冲洗3h，再在超净工作台中将茎段用75%乙醇浸泡30s、5%次氯酸钠消毒6min，无菌水冲洗5次，每次冲洗2~3min；将消毒冲洗后的茎段切成1.5~2.5cm长的带腋芽茎段作为外植体，带腋芽茎段的节下长0.5~1.0cm、节上长1.0~1.5cm；
2）初代培养：将外植体接种至诱导培养基上，诱导培养基组分如下：MS+3~5mg/L6-BA+0.9~1.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行芽丛诱导培养，获得丛生芽；
3）继代培养：将步骤2获得的单个丛生芽接种至继代培养基上，继代培养基组分如下：MS+5~7mg/L6-BA+0.9~1.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行继代培养，获得无根苗；一个丛生芽继代4次，继代培养的光照培养箱的培养条件和步骤2）初代培养的光照培养箱的培养条件相同；
4）生根培养：将步骤3）获得的无根苗转接至生根培养基上，生根培养基组分如下：1/2MS+0.1~0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行无根苗的生根培养；生根培养的光照培养箱的培养条件和步骤2）初代培养的光照培养箱的培养条件相同；
5）移栽：将5cm的生根苗炼苗一周，清洗，消毒，移栽。
在一个技术方案中，所述带腋芽茎段的节下呈斜切面，节上呈平切面。
在一个技术方案中，步骤2）中培养条件为：温度25℃，光照时间为9~11h，光照强度为18000~20000lux，湿度为60%。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明提供的剑叶芦竹（肥肥草）种苗的组培方法，可以在短时间内获得大量整齐一致的优质种苗，培育得到的剑叶芦竹（肥肥草）种苗无菌健壮、质量高、移栽后成活率高，有利于剑叶芦竹（肥肥草）种苗的工厂化生产。
附图说明
图1为本发明实施例1中培育的剑叶芦竹丛生芽照片；
图2为本发明实施例1中培育的剑叶芦竹无根苗照片；
图3为本发明实施例1中培育的剑叶芦竹生根苗照片；
图4为本发明实施例1中培育的剑叶芦竹移栽生长后种苗照片。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限定本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。
本发明实施例中剑叶芦竹材料来源于华中农业大学提供。
实施例1
1）外植体的准备及消毒：
选取幼嫩的剑叶芦竹茎秆，将叶片及叶鞘去掉后截成小段，先用洗洁精稀释液浸泡15 min，再用流水冲洗3h将其冲洗干净；再在超净工作台中将茎段用75%乙醇浸泡30s，5%次氯酸钠消毒6min，无菌水冲洗5次，每次冲洗2~3min；取消毒后冲洗干净的茎段，将其切成1.5~2.5cm长的带腋芽茎段作为组织培养的外植体，带腋芽茎段的节下长约0.5~1.0cm、节上长约1.0~1.5cm，节下呈斜切面、节上呈平切面。
2）初代培养：
将上述外植体接种至诱导培养基MS+4mg/L 6-BA+1mg/L IBA+30g/L蔗糖+7 g/L琼脂上，培养基pH=6.2，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行芽丛诱导培养，获得丛生芽。培养条件为温度25℃，光照时间为10h，光照强度为20000 lux，湿度为60%。培养1个月后，经统计丛生芽个数平均为5.8个，本实施例获得剑叶芦竹丛生芽照片如图1所示。
3）继代培养：
将初代培养得到的丛生芽从茎秆上切下，接种至培养基MS+6mg/L 6-BA+1mg/LIBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上，培养基pH=6.2，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行继代培养。继代培养的光照培养箱培养条件和步骤2）初代培养步骤相同。获得的无根苗分株后转接到继代培养基上继续进行增殖培养以增大繁殖系数，一个月后，经统计每个丛生芽可增殖出15.2个芽，一个月重复继代一次，一个丛生芽可以继代4次。本实施例获得剑叶芦竹无根苗照片如图2所示。
4）生根培养：
将继代培养得到的无根苗转接至培养基1/2 MS+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7 g/L琼脂上，培养基pH=6.2，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行无根苗的生根培养。光照培养箱培养条件和步骤2）初代培养步骤相同。生根培养一周后开始生根，生根率在90%以上。一个月后，经统计根长平均可达5.3cm，本实施例获得剑叶芦竹生根苗照片如图3所示。
5）移栽：
当剑叶芦竹组培苗长至5cm左右时，炼苗一周，清洗掉附着于根系的培养基，将组培苗在1%的多菌灵溶液中浸泡5min，冲洗干净后进行移栽。移栽成活率接近100%。本实施例获得剑叶芦竹移栽生长后种苗照片如图4所示。
以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理上所作的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。
Claims (3)
1.一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）外植体消毒：取幼嫩的剑叶芦竹茎秆，去掉叶片及叶鞘，截成小段，先用洗洁精稀释液浸泡15min，再用流水冲洗3h，再在超净工作台中将茎段用75%乙醇浸泡30s、5%次氯酸钠消毒6min，无菌水冲洗5次，每次冲洗2~3min；将消毒冲洗后的茎段切成1.5~2.5cm长的带腋芽茎段作为外植体，带腋芽茎段的节下长0.5~1.0cm、节上长1.0~1.5cm；
2）初代培养：将外植体接种至诱导培养基上，诱导培养基组分如下：MS+3~5mg/L 6-BA+0.9~1.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行芽丛诱导培养，获得丛生芽；
3）继代培养：将步骤2获得的单个丛生芽接种至继代培养基上，继代培养基组分如下：MS+5~7mg/L6-BA+0.9~1.1mg/L IBA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行继代培养，获得无根苗；一个丛生芽继代4次，继代培养的光照培养箱的培养条件和步骤2）初代培养的光照培养箱的培养条件相同；
4）生根培养：将步骤3）获得的无根苗转接至生根培养基上，生根培养基组分如下：1/2MS+0.1~0.3mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上，之后将培养瓶置于光照培养箱中进行无根苗的生根培养；生根培养的光照培养箱的培养条件和步骤2）初代培养的光照培养箱的培养条件相同；
5）移栽：将5cm的生根苗炼苗一周，清洗，消毒，移栽。
2.根据权利要求1所述的一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法，其特征在于，所述带腋芽茎段的节下呈斜切面，节上呈平切面。
3.根据权利要求1所述的一种快速培育剑叶芦竹种苗的组培方法，其特征在于，步骤2）中培养条件为：温度25℃，光照时间为9~11h，光照强度为18000~20000lux，湿度为60%。
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