CN111631133A - 快速培育耐盐芦竹种苗的方法 - Google Patents

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CN111631133A CN202010419377.6A CN202010419377A CN111631133A CN 111631133 A CN111631133 A CN 111631133A CN 202010419377 A CN202010419377 A CN 202010419377A CN 111631133 A CN111631133 A CN 111631133A
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韩小红
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Wuhan Lando Biotechnology Co ltd
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Abstract

本发明公开了快速培育耐盐芦竹种苗的方法，包括：(1)将芦竹带腋芽茎段进行消毒；(2)将消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74gMS和2.0～3.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.2～0.5mg的IBA、4～7g琼脂和20～30g蔗糖，腋芽诱导培养基pH为5.6～6.0；(3)将腋芽接种到增殖培养基上，获得丛生芽；基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74g MS和3.0～4.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.5～1.0mgIBA、0.5～1.0g氮磷钾复合肥、50～100g果蔬汁、4～7g琼脂和20～30g蔗糖，增殖培养基的pH为5.6～6.0；(4)将丛生芽接种至壮苗生根培养基上，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g 1/2MS和0.5～1.0mg IBA、0.5～0.8g氮磷钾复合肥、2～3g活性炭、50～100g的果蔬汁、4～7g琼脂和20～30g蔗糖，壮苗生根培养基的pH为5.6～6.0。

Description

快速培育耐盐芦竹种苗的方法
技术领域
本发明属于植物细胞工程中离体快速繁殖技术领域，具体涉及一种快速培育耐盐芦竹种苗的方法。
背景技术
芦竹(Arundo donax)为禾本科芦竹属多年生草本植物，茎秆高大粗壮，具有生物量大、根系发达、适应性强等特点。芦竹耐盐碱、地下根系盘根错节，可以用来固堤和农田防护，也可以富集土壤中的重金属，同时可以增加土壤含碳量及有机质含量，具有很大的生态效益。花叶芦竹叶片上有黄白色宽窄不等的条纹，是观赏植物中的珍品，园林绿化上很好的观赏植物。利用多年生牧草开发能源草业是在当今能源紧张和环境保护的背景下能源工业发展的一个新方向。芦竹作为能源牧草，生态适应性强，在滩涂山坡等边际土地能够很好生长，不会占用耕地，同时种植费用低，易于维护，且纤维素含量较高，木质素和灰分含量较低，热解值高，是理想的取代化石能源的可再生的生物质能源植物。
然而芦竹种子是不育的，自然条件下通过无性繁殖，常规的繁殖方式为分蘖繁殖，但繁殖系数低，不能满足产业的需求。所以，具有繁殖速度快、周期短、可以规模化生产等优点的植物组织培养技术是芦竹快速繁殖的一条有效且重要的途径。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种快速培育耐盐芦竹种苗的方法，该方法可以解决现有技术中耐盐芦竹种苗繁殖过程中启动增殖慢，丛生芽生长不整齐而导致的组织培养周期长、生产成本高的问题。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种快速培育耐盐芦竹种苗的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：
(1)将芦竹带腋芽茎段进行消毒；
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，其中，基于1L的所述腋芽诱导培养基，所述腋芽诱导培养基包括：4.74g MS和2.0～3.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.2～0.5mg IBA、4～7g的琼脂和20～30g蔗糖，并且所述腋芽诱导培养基的pH为5.6～6.0；
(3)将步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，获得丛生芽；其中，基于1L的所述增殖培养基，所述增殖培养基包括：4.74g MS和3.0～4.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.5～1.0mg IBA、0.5～1.0g的氮磷钾复合肥、50～100g的果蔬汁、4～7g的琼脂和20～30g蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.6～6.0；
(4)将步骤(3)得到的所述丛生芽接种至壮苗生根培养基上培养，其中，基于1L的所述壮苗生根培养基，所述壮苗生根培养基包括：2.73g 1/2MS和0.5～1.0mg IBA、0.5～0.8g的氮磷钾复合肥、2～3g的活性炭、50～100g的果蔬汁、4～7g的琼脂和20～30g的蔗糖，并且所述壮苗生根培养基的pH为5.6～6.0。
根据本发明实施例的快速培育耐盐芦竹种苗的方法通过在增殖培养基内添加果蔬汁、细胞分裂素和氮磷钾复合肥，使得腋芽增殖启动快且增殖系数提升，基本增殖系数可以达到6～8，减少大规模生产环节多次继代，节约成本，并且添加的果蔬汁及氮磷钾复合肥，丰富了维生素、氨基酸和矿物质及氮磷钾，使得丛生芽生长整齐并且，且壮苗生根培养基中含有的果蔬汁及氮磷钾复合肥，可以使得壮苗生根环节合二为一，缩短培养周期，种苗生长粗壮、根系良好，适合于芦竹的工厂化育苗，解决其传统繁殖效率低、周期长等问题。
另外，根据本发明上述实施例的快速培育耐盐芦竹种苗的方法还可以具有如下附加的技术特征：
在本发明的一些实施例中，步骤(1)是按照下列步骤进行的：先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用70～80％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.1％～0.2％W/V升汞中浸泡8～10min，最后无菌水洗3～5次。
在本发明的一些实施例中，在步骤(2)中，培养温度23～27℃，光照3000～4000Lx，14～18h/d，RH 50～60％，培养10～15天。
在本发明的一些实施例中，在步骤(2)中，所述腋芽诱导培养基按照下列步骤制备得到：取蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖和MS，搅拌至溶解完全，加入BA，定容到1L，调节pH为5.6～6.0，分装到培养瓶，灭菌后加入过滤除菌的细胞分裂素。
在本发明的一些实施例中，在步骤(3)中，培养室温度23～27℃，光照3000～4000Lx，14～18h/d，RH 50-60％，培养28～32天。
在本发明的一些实施例中，在步骤(3)中，所述增殖培养基按照下列步骤制备得到：取蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖、氮磷钾复合肥和MS，搅拌至溶解完全，加入BA、IBA，得到制备液，同时将果蔬去皮后切成小块煮沸，过滤的果蔬汁液加入所述制备液，定容到1L，调节pH为5.6～6.0，分装到培养瓶，灭菌后加入过滤除菌的细胞分裂素。
在本发明的一些实施例中，在步骤(3)中，所述细胞分裂素为选自玉米素和油菜素内酯中的至少之一。
在本发明的一些实施例中，在步骤(4)中，培养室温度23～27℃，光照2900～3100Lx，10～14h/d，RH 50～60％，培养25～30天。
在本发明的一些实施例中，在步骤(4)中，所述壮苗生根培养基按照下列步骤制备得到：取蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖、氮磷钾复合肥和1/2MS，搅拌至溶解完全，加入IBA，得到制备液；同时将果蔬去皮后切成小块煮沸，过滤的果蔬汁液加入所述制备液，定容到1L，加入活性炭，搅拌均匀，调节pH为5.6～6.0。
在本发明的一些实施例中，在步骤(3)和(4)中，所述果蔬汁为选自，马铃薯汁、香蕉汁、胡萝卜汁和苹果汁中的至少之一。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本发明的一个方面，本发明提出了一种速培育耐盐芦竹种苗的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：
S100：将芦竹带腋芽茎段进行消毒
该步骤中，先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用70～80％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.1％～0.2％W/V升汞中浸泡8～10min，最后用无菌水洗3～5次，优选采用75％的酒精擦拭。
S200：将步骤S100得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养
该步骤中，将步骤S100得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，培养室温度23～27℃，优选25℃，光照3000-4000Lx，14～18h/d，优选16h/d，RH 50-60％，约10天后开始有腋芽萌动，培养至10-15天后腋芽长至3-4cm，其中，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74g MS和2.0～3.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.2～0.5mg IBA、4～7g的琼脂和20～30g蔗糖，并且所述腋芽诱导培养基的pH为5.6～6.0，优选pH为5.8。具体的，腋芽诱导培养基按照下列步骤制备得到：以配置1L腋芽诱导培养基为例，取300L蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖和MS，搅拌至溶解完全，加入BA，定容到1L，调节pH为5.6～6.0，分装到培养瓶，灭菌后加入过滤除菌的细胞分裂素。
S300：将步骤S200得到的腋芽接种到增殖培养基上培养
该步骤中，将步骤S200得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，培养室温度23～27℃，优选25℃，光照3000-4000Lx，14～18h/d，优选16h/d，RH 50-60％，培养至28～32天后获得丛生芽。其中，基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74g MS和3.0～4.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.5～1.0mg IBA、0.5～1.0g的氮磷钾复合肥、50～100g的果蔬汁、4～7g的琼脂和20～30g蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.6～6.0，优选pH为5.8。发明人发现，通过在增殖培养基内添加果蔬汁、细胞分裂素和氮磷钾复合肥，使得腋芽增殖启动快且增殖系数提升，基本增殖系数可以达到6～8，减少大规模生产环节多次继代，节约成本，并且果蔬汁及氮磷钾复合肥，丰富了维生素、氨基酸和矿物质及氮磷钾，使得丛生芽生长整齐。优选的，细胞分裂素为选自玉米素和油菜素内酯中的至少之一，果蔬汁为选自马铃薯汁、香蕉汁、胡萝卜汁和苹果汁中的至少之一。
具体的，增殖培养基按照下列步骤制备得到：以配置1L增殖培养基为例，以取300蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖、氮磷钾复合肥和MS，搅拌至溶解完全，加入BA、IBA，得到制备液，同时将果蔬去皮后切成小块煮沸，过滤的果蔬汁液加入所述制备液，定容到1L，调节pH为5.6～6.0，分装到培养瓶，灭菌后加入过滤除菌的细胞分裂素。
S400：将步骤S300得到的丛生芽接种至壮苗生根培养基上培养
该步骤中，将步骤S300得到的丛生芽将丛生芽分开3株一丛，接种至壮苗生根培养基上培养，培养温度23～27℃，优选25℃，光照2900～3100Lx，优选3000Lx，10～14h/d，优选12h/d，RH 50-60％，培养25-30天后试管苗长至8-10cm，根长4-5cm，可供炼苗出瓶移栽。其中，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g 1/2MS和0.5～1.0mg IBA、0.5～0.8g的氮磷钾复合肥、2～3g的活性炭、50～100g的果蔬汁、4～7g的琼脂和20～30g的蔗糖，并且壮苗生根培养基的pH为5.6～6.0，优选5.8。发明人发现，通过在壮苗生根培养基中加入果蔬汁及氮磷钾复合肥，可以使得壮苗生根环节合二为一，缩短培养周期，种苗生长粗壮、根系良好，适合于芦竹的工厂化育苗，解决其传统繁殖效率低、周期长等问题。
具体的，壮苗生根培养基按照下列步骤制备得到：以1L壮苗生根培养基为例，取300mL蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖、氮磷钾复合肥和1/2MS，搅拌至溶解完全，加入IBA，得到制备液；同时将果蔬去皮后切成小块煮沸，过滤的果蔬汁液加入所述制备液，定容到1L，加入活性炭，搅拌均匀，调节pH为5.6～6.0。
根据本发明实施例的快速培育耐盐芦竹种苗的方法通过在增殖培养基内添加果蔬汁、细胞分裂素和氮磷钾复合肥，使得腋芽增殖启动快且增殖系数提升，基本增殖系数可以达到6～8，减少大规模生产环节多次继代，节约成本，并且添加的果蔬汁及氮磷钾复合肥，丰富了维生素、氨基酸和矿物质及氮磷钾，使得丛生芽生长整齐并且，且壮苗生根培养基中含有的果蔬汁及氮磷钾复合肥，可以使得壮苗生根环节合二为一，缩短培养周期，种苗生长粗壮、根系良好，适合于芦竹的工厂化育苗，解决其传统繁殖效率低、周期长等问题。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1
(1)先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用70％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.2％W/V升汞中浸泡8min，最后用无菌水洗5次。
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，培养室温度23℃，光照4000Lx，18h/d，RH 60％，约13天后开始有腋芽萌动，培养至17天后腋芽长至3-4cm，其中，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74gMS和3.0mg BA、0.2mg玉米素、0.5mg IBA、4g的琼脂和20g的蔗糖，并且腋芽诱导培养基的pH为5.6。
(3)该步骤中，将步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，培养室温度27℃，光照3000Lx，14h/d，RH 60％，培养至32天后获得丛生芽。其中，基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74gMS和4.0mg BA、0.2mg的玉米素、1.0mg的IBA、0.5g的氮磷钾复合肥、100g的马铃薯汁、4.5g的琼脂和25g的蔗糖，并且增殖培养基的pH为6.0。
(4)将步骤(3)得到的丛生芽将丛生芽分开3株一丛，接种至壮苗生根培养基上培养，培养温度23℃，光照2900Lx，14h/d，RH 50％，培养32天后试管苗长至8-10cm，根长4-5cm，可供炼苗出瓶移栽。其中，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g的1/2MS和1.0mg IBA0.5g的氮磷钾复合肥、2g的活性炭、100g的马铃薯汁、4.5g的琼脂和20g的蔗糖，并且壮苗生根培养基的pH为6.0。
实施例2
(1)先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用80％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.1％W/V升汞中浸泡10min，最后用无菌水洗3次。
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，培养室温度27℃，光照3000Lx，14h/d，RH 50％，约11天后开始有腋芽萌动，培养至16天后腋芽长至3-4cm，其中，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74gMS和2.0mg BA、0.3mg油菜素内酯、0.2mg IBA、4.5g的琼脂和25g的蔗糖，并且腋芽诱导培养基的pH为6.0。
(3)该步骤中，将步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，培养室温度23℃，光照4000Lx，18h/d，RH 50％，培养至34天后获得丛生芽。其中，基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74g MS和3.0mg BA、0.5mg的油菜素内酯、0.5mg的IBA、1.0g的氮磷钾复合肥、50g的胡萝卜汁、5g的琼脂和20g的蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.6。
(4)将步骤(3)得到的丛生芽将丛生芽分开3株一丛，接种至壮苗生根培养基上培养，培养温度27℃，光照3100Lx，10h/d，RH 60％，培养36天后试管苗长至8-10cm，根长4-5cm，可供炼苗出瓶移栽。其中，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g的1/2MS和0.5mg IBA、0.8g的氮磷钾复合肥、3g的活性炭、50g的胡萝卜汁、5.5g的琼脂和30g的蔗糖，并且壮苗生根培养基的pH为5.6。
实施例3
(1)先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用75％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.15％W/V升汞中浸泡9min，最后用无菌水洗4次。
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，培养室温度25℃，光照3500Lx，16h/d，RH 55％，约11天后开始有腋芽萌动，培养至18天后腋芽长至3-4cm，其中，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74gMS和2.5mg BA、0.4mg玉米素、0.3mg的IBA、5g的琼脂和25g的蔗糖，并且腋芽诱导培养基的pH为5.8。
(3)该步骤中，将步骤S200得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，培养室温度25℃，光照3500Lx，16h/d，RH 55％，培养至35天后获得丛生芽。其中，基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74g MS和3.5mg BA、0.4mg的玉米素、0.75mg的IBA、0.75g的氮磷钾复合肥、75g的马铃薯汁、6g的琼脂和25g的蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.8。
(4)将步骤(3)得到的丛生芽将丛生芽分开3株一丛，接种至壮苗生根培养基上培养，培养温度25℃，光照3000Lx，12h/d，RH 50-60％，培养31天后试管苗长至8-10cm，根长4-5cm，可供炼苗出瓶移栽。其中，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g的1/2MS和0.75mg IBA、0.6g的氮磷钾复合肥、2.5g的活性炭、75g的马铃薯汁、5g的琼脂和25g的蔗糖，并且壮苗生根培养基的pH为5.8。
实施例4
(1)先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用73％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.18％W/V升汞中浸泡9min，最后用无菌水洗5次。
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，培养室温度24℃，光照3200Lx，15h/d，RH 53％，约16天后开始有腋芽萌动，培养至23天后腋芽长至3-4cm，其中，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74gMS和2.3mg BA、0.5mg油菜素内酯、0.4mg的IBA、6g的琼脂和25g的蔗糖，并且腋芽诱导培养基的pH为5.7。
(3)该步骤中，将步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，培养室温度24℃，光照3600Lx，17h/d，RH 58％，培养至41天后获得丛生芽。其中，基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74g MS和3.2mg BA、0.4mg的油菜素内酯、0.8mg的IBA、0.7g的氮磷钾复合肥、80g的苹果汁、6.5g的琼脂和25g的蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.7。
(4)将步骤(3)得到的丛生芽将丛生芽分开3株一丛，接种至壮苗生根培养基上培养，培养温度26℃，光照3000Lx，13h/d，RH 56％，培养37天后试管苗长至8-10cm，根长4-5cm，可供炼苗出瓶移栽。其中，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g的1/2MS和0.6mg的IBA、0.7g的氮磷钾复合肥、2.3g的活性炭、65g的苹果汁、7g的琼脂和30g的蔗糖，并且壮苗生根培养基的pH为5.7。
实施例5
(1)先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用78％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.13％W/V升汞中浸泡9min，最后用无菌水洗4次。
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，培养室温度26℃，光照3800Lx，17h/d，RH 58％，约20天后开始有腋芽萌动，培养至25天后腋芽长至3-4cm，其中，基于1L的腋芽诱导培养基，腋芽诱导培养基包括：4.74gMS和2.8mg BA、0.5mg玉米素、0.3mg的IBA、7g的琼脂和20g的蔗糖，并且腋芽诱导培养基的pH为5.9。
(3)该步骤中，将步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，培养室温度26℃，光照3200Lx，15，RH 53％，培养至38天后获得丛生芽。其中，基于1L的增殖培养基，增殖培养基包括：4.74g MS和3.5mg BA、0.3mg的玉米素、0.6mg的IBA、0.6g的氮磷钾复合肥、60g的马铃薯汁、6.5g的琼脂和20g的蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.9。
(4)将步骤(3)得到的丛生芽将丛生芽分开3株一丛，接种至壮苗生根培养基上培养，培养温度24℃，光照3000Lx，11h/d，RH 53％，培养35天后试管苗长至8-10cm，根长4-5cm，可供炼苗出瓶移栽。其中，基于1L的壮苗生根培养基，壮苗生根培养基包括：2.73g的1/2MS和0.9mg IBA、0.6g的氮磷钾复合肥、2.8g的活性炭、85g的马铃薯汁、4.5g的琼脂和30g的蔗糖，并且壮苗生根培养基的pH为5.9。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种快速培育耐盐芦竹种苗的方法，其特征在于，包括：
(1)将芦竹带腋芽茎段进行消毒；
(2)将步骤(1)得到的消毒后的芦竹带腋芽茎段接种至腋芽诱导培养基上培养，其中，基于1L的所述腋芽诱导培养基，所述腋芽诱导培养基包括：4.74g MS和2.0～3.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.2～0.5mg IBA、4～7g琼脂和20～30g蔗糖，并且所述腋芽诱导培养基的pH为5.6～6.0；
(3)将步骤(2)得到的腋芽接种到增殖培养基上培养，获得丛生芽；其中，基于1L的所述增殖培养基，所述增殖培养基包括：4.74g MS和3.0～4.0mg BA、0.2～0.5mg细胞分裂素、0.5～1.0mg IBA、0.5～1.0g的氮磷钾复合肥、50～100g的果蔬汁、4～7g的琼脂和20～30g蔗糖，并且所述增殖培养基的pH为5.6～6.0；
(4)将步骤(3)得到的所述丛生芽接种至壮苗生根培养基上培养，其中，基于1L的所述壮苗生根培养基，所述壮苗生根培养基包括：2.73g 1/2MS和0.5～1.0mg IBA、0.5～0.8g的氮磷钾复合肥、2～3g的活性炭、50～100g的果蔬汁、4～7g的琼脂和20～30g的蔗糖，并且所述壮苗生根培养基的pH为5.6～6.0。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)是按照下列步骤进行的：先用水冲洗芦竹带腋芽茎段，然后用70～80％酒精擦拭，移入超净工作台，在浓度为0.1％～0.2％W/V升汞中浸泡8～10min，最后无菌水洗3～5次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，培养温度23～27℃，光照3000～4000Lx，14～18h/d，RH 50～60％，培养10～15天。
4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述腋芽诱导培养基按照下列步骤制备得到：取蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖和MS，搅拌至溶解完全，加入BA，定容到1L，调节pH为5.6～6.0，分装到培养瓶，灭菌后加入过滤除菌的细胞分裂素。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，培养室温度23～27℃，光照3000～4000Lx，14～18h/d，RH 50-60％，培养28～32天。
6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述增殖培养基按照下列步骤制备得到：取蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖、氮磷钾复合肥和MS，搅拌至溶解完全，加入BA、IBA，得到制备液，同时将果蔬去皮后切成小块煮沸，过滤的果蔬汁液加入所述制备液，定容到1L，调节pH为5.6～6.0，分装到培养瓶，灭菌后加入过滤除菌的细胞分裂素。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述细胞分裂素为选自玉米素和油菜素内酯中的至少之一。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，培养室温度23～27℃，光照2900～3100Lx，10～14h/d，RH 50～60％，培养25～30天。
9.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述壮苗生根培养基按照下列步骤制备得到：取蒸馏水加热，加入琼脂，搅拌均匀，溶解完全后，再加入蔗糖、氮磷钾复合肥和1/2MS，搅拌至溶解完全，加入IBA，得到制备液；同时将果蔬去皮后切成小块煮沸，过滤的果蔬汁液加入所述制备液，定容到1L，加入活性炭，搅拌均匀，调节pH为5.6～6.0。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)和(4)中，所述果蔬汁为选自，马铃薯汁、香蕉汁、胡萝卜汁和苹果汁中的至少之一。
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