CN116263436A - 一种米拉贝隆中基毒杂质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种米拉贝隆中基毒杂质的检测方法。本发明方法包括如下步骤：取米拉贝隆供试品的溶液和基毒杂质标准品的溶液分别采用高效液相色谱‑质谱联用进行分离检测，通过得到的质谱图中离子峰对比，如所述米拉贝隆供试品的溶液的质谱图中存在与所述基毒杂质标准品的溶液相同的定量/定性离子峰，则所述米拉贝隆供试品中存在基毒杂质；否则不存在。本发明检测结果准确，精密度高，适用米拉贝隆成品中基因毒性杂质的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种米拉贝隆中基毒杂质的检测方法，属于药物分析领域。
背景技术
米拉贝隆由安斯泰来(Astellas)公司研发，于2011年7月1日获日本医药品医疗器械综合机构(PMDA)批准上市，之后于2012年6月28日获美国食品药品管理局(FDA)批准上市，于2012年12月20日获欧洲药物管理局(EMA)批准上市，于2017年9月29日获得中国国家食品药品监督管理局(CFDA)批注上市。由安斯泰来在日本上市销售，商品名为
米拉贝隆是一种选择性β3肾上腺素受体(ADRB3)激动剂，用于治疗包括尿失禁、尿急和尿频在内的膀胱过度活动症(OAB)。其合成路线如下路线1所示：
路线1：
在其合成过程中多个中间体及其衍生化杂质均含有硝基芳香、氨基芳香等警示结构(如路线1中所示的化合物IM-1、IM-2，路线2中所示的化合物IM-1-IM01、IM-2-IM01、IM-3-IM01或如式Ⅵ所示化合物IM-K、式Ⅶ所示化合物IM-L)，这些杂质都可能具有潜在的致突变性，极大程度的影响成品质量，因此需要建立相应的检测方法对其进行极其严格的控制。
路线2：
发明内容
本发明的目的是提供一种米拉贝隆中基毒杂质的检测方法。
本发明提供的一种米拉贝隆中基毒杂质的检测方法，包括如下步骤：取米拉贝隆供试品的溶液和基毒杂质标准品的溶液分别采用高效液相色谱-质谱联用进行分离检测，通过得到的质谱图中离子峰对比，如所述米拉贝隆供试品的溶液的质谱图中存在与所述基毒杂质标准品的溶液相同的定量/定性离子峰，则所述米拉贝隆供试品中存在基毒杂质；否则不存在；
所述基毒杂质标准品包括如下式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01、式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L；
上述的方法中，所述的方法中，还包括通过所述高效液相色谱测定所述米拉贝隆供试品的溶液与所述基毒杂质标准品的溶液的色谱图，通过外标法以峰面积计算，以对所述米拉贝隆供试品中所述基毒杂质进行定量的步骤。
本发明所述的方法中，所述高效液相色谱通过外标法以峰面积计算，对所述米拉贝隆供试品中所述基毒杂质进行定量的具体步骤如下：
(1)将待测的米拉贝隆配制成米拉贝隆供试品的溶液，将所述基毒杂质标准品配制成不同浓度的基毒杂质标准品的溶液；
(2)将所述基毒杂质标准品的溶液分别进行高效液相色谱检测，分别以所述基毒杂质标准品(具体包括式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01、式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L)的色谱峰面积作为纵坐标，分别以所述基毒杂质标准品的溶液中式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01、式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L的浓度作为横坐标制作标准曲线；
(3)将所述米拉贝隆供试品的溶液进行所述高效液相色谱检测，得到所述供试品溶液中基毒杂质(式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01、式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L)的峰面积，根据所述标准曲线，即得到米拉贝隆供试品中式Ⅰ所示基毒杂质的含量。
上述的方法中，当所述基毒杂质标准品包括如下式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01时，所述高效液相色谱-质谱中，
高效液相色谱的检测条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(具体为Waters XBridge
4.6×150mm，5μm)；
流动相：乙腈与0.05％三氟乙酸水溶液，体积比为40:60；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
柱温：35℃；
进样体积：2μl；
采集时间：15min；
空白溶剂：甲醇；
质谱的检测条件如下：
离子源：ESI源(电喷雾电离源)；
探头温度：600℃；
采集速率：10点/秒；
气流量：20L/min。
上述的方法中，所述基毒杂质标准品的质谱选择离子监测参数如下：
所述式Ⅰ所示化合物IM-1的定量/定性离子为301.01m/z，正值，锥孔电压为16V，毛细管电压为0.8KV；
所述式Ⅱ所示化合物IM-2的定量/定性离子为287.07m/z，正值，锥孔电压为15V，毛细管电压为0.8KV；
所述式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01的定量/定性离子为285.06m/z，正值，锥孔电压为15V，毛细管电压为0.8KV；
所述式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01的定量/定性离子为271.06m/z，正值，锥孔电压为15V，毛细管电压为0.8KV。
上述的方法中，当所述基毒杂质标准品包括如下式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01时，所述高效液相色谱-质谱中，
配制所述米拉贝隆供试品的溶液的步骤如下：准确称取米拉贝隆，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液；
配制所述基毒杂质标准品的溶液的步骤如下：准确称取IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各含0.3μg的混合溶液。
上述的方法中，当所述基毒杂质标准品包括式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L时，所述高效液相色谱-质谱中，
高效液相色谱的检测条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(具体可为Waters XBridgeShield
4.6×150mm，3.5μm，编号：1546-171)；
流动相：乙腈与10mM乙酸铵体积比为30:70，乙酸调pH 6.5；
检测波长：251nm；
流速：0.8ml/min；
柱温：35℃；
进样体积：10μl；
采集时间：12min；
质谱的检测条件如下：
离子源：ESI源(电喷雾电离源)；
探头温度：600℃；
采集速率：10点/秒；
气流量：20L/min。
上述的方法中，所述基毒杂质标准品的质谱选择离子监测参数如下：
式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01的定量/定性离子为241.20m/z，正值，锥孔电压为20V，毛细管电压为0.8KV；
式Ⅵ所示化合物IM-K的定量/定性离子为397.25m/z，正值，锥孔电压为20V，毛细管电压为0.8KV；
式Ⅶ所示化合物IM-L的定量/定性离子为397.25m/z，正值，锥孔电压为20V，毛细管电压为0.8KV。
上述的方法中，当所述基毒杂质标准品包括式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L时，所述高效液相色谱-质谱中，
配制所述米拉贝隆供试品的溶液的步骤如下：准确称取米拉贝隆，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含3mg的溶液；
配制所述基毒杂质标准品的溶液的步骤如下：准确称取IM-3-IM01、IM-K、IM-L，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各含0.1μg的混合溶液。
本发明具有以下优点：
本发明检测结果准确，精密度高，适用米拉贝隆成品中基因毒性杂质的质量控制。
附图说明
图1为IM-1-IM01质谱定位图。
图2为IM-1质谱定位图。
图3为IM-2-IM01质谱定位图。
图4为IM-2质谱定位图。
图5为IM-3-IM01质谱定位图。
图6为IM-K+L质谱定位图。
图7为IM-1定量限。
图8为IM-1-IM01定量限。
图9为IM-2定量限。
图10为IM-2-IM01定量限。
图11为IM-1检测限。
图12为IM-1-IM01检测限。
图13为IM-2检测限。
图14为IM-2-IM01检测限。
图15为IM-1检测专属性-空白溶剂(SIR为301.01)。
图16为IM-1检测专属性-对照品溶液(SIR为301.01)。
图17为IM-1-IM01检测专属性-空白溶剂(SIR为285.06)。
图18为IM-1-IM01检测专属性-对照品溶液(SIR为285.06)。
图19为IM-2检测专属性-空白溶剂(SIR为287.07)。
图20为IM-2检测专属性-对照品溶液(SIR为287.07)。
图21为IM-2-IM01检测专属性-空白溶剂(SIR为271.06)。
图22为IM-2-IM01检测专属性-对照品溶液(SIR为271.06)。
图23为IM-1线性关系与范围。
图24为IM-1-IM01线性关系与范围。
图25为IM-2线性关系与范围。
图26为IM-2-IM01线性关系与范围。
图27为IM-K定量限。
图28为IM-L定量限。
图29为MLB-3-IM01定量限。
图30为IM-K检测限。
图31为IM-L检测限。
图32为MLB-3-IM01检测限。
图33为IM-K、IM-L专属性-空白溶剂(SIR为397.25)。
图34为IM-K、IM-L专属性-对照品溶液(SIR为397.25)。
图35为IM-3-IM01专属性-空白溶剂(SIR为241.20)。
图36为IM-3-IM01专属性-对照品溶液(SIR为241.20)。
图37为IM-K+IM-L线性关系与范围。
图38为IM-3-IM01线性关系与范围。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一、检测方法1
高效液相色谱的检测条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Waters XBridge
4.6×150mm，5μm)；
流动相：乙腈-水(0.05％三氟乙酸)(40:60)；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
柱温：35℃；
进样体积：2μl；
采集时间：15min；
空白溶剂：甲醇。
化合物IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01的离子监测参数如表1所示。
表1 4种目标化合物质谱选择离子监测参数
| 化合物名称 | 定量/定性离子(m/z) | 正/负极性 | 锥孔电压(V) | 毛细管电压(KV) |
| IM-1 | 301.01 | 正值 | 16 | 0.8 |
| IM-2 | 287.07 | 正值 | 15 | 0.8 |
| IM-1-IM01 | 285.06 | 正值 | 15 | 0.8 |
| IM-2-IM01 | 271.06 | 正值 | 15 | 0.8 |
质谱的检测条件如下：
离子源：ESI源(电喷雾电离源)；
探头温度：600℃；
采集速率：10点/秒；
气流量：20L/min。
测定法：米拉贝隆供试品溶液的配制，步骤如下：准确称取米拉贝隆，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含3mg的溶液；
基毒杂质标准品的液的配制步骤如下：准确称取IM-3-IM01、IM-K、IM-L，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各含0.1μg的混合溶液。
精密量取上述供试品溶液和对照品溶液各2μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
化合物IM-1-IM01、IM-1、IM-2-IM01、IM-2的质谱定位图分别如图1、图2、图3、图4所示。
二、检测方法2
高效液相色谱的检测条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(Waters XBridge Shield
4.6×150mm，3.5μm)；(编号：1546-171)
流动相：乙腈–10mM乙酸铵(乙酸调PH 6.5)(30:70)；
检测波长：251nm；
流速：0.8ml/min；
柱温：35℃；
进样体积：10μl；
采集时间：12min；
化合物IM-3-IM01、IM-K+L的离子监测参数如表2所示。
表2 3种基因毒化合物质谱选择离子监测参数
质谱的检测条件如下：
离子源：ESI源(电喷雾电离源)；
探头温度：600℃；
采集速率：10点/秒；
气流量：20L/min。
测定法：米拉贝隆供试品溶液的配制步骤如下：准确称取米拉贝隆适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液；
基毒杂质标准品溶液配制的步骤如下：分别准确称取IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各含0.3μg的混合溶液；
精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
化合物IM-3-IM01、IM-K+L的质谱定位图分别如图5、图6所示。
三、分析方法验证结论
米拉贝隆成品基毒杂质检测方法分别从定量限、检测限、系统适用性、专属性、线性、准确度、精密度、溶液稳定性方面对检测方法进行验证：
(一)对检测方法1的方法学考察实验
1、定量限
分别量取IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01 4种杂质对照品贮备液适量，将此溶液用甲醇逐级稀释至适宜浓度，在上述色谱条件下，以信噪比为10:1时注入色谱仪的量确定定量限。IM-1定量限浓度为0.250μg/ml；IM-2定量限浓度为0.0027μg/ml；IM-1-IM01定量限浓度为0.017μg/ml；IM-2-IM01定量限浓度为0.001μg/ml。
化合物IM-1、IM-1-IM01、IM-2、IM-2-IM01的定量限图分别如图7、图8、图9、图10所示。
2、检测限
分取量取IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01 4种基因毒杂质对照品贮备液适量，将此溶液用甲醇逐级稀释至适宜浓度，在上述色谱条件下，以信噪比为3：1时注入色谱仪的量确定检测限。IM-1检测限浓度为0.0833μg/ml；IM-2检测限浓度为0.0009μg/ml；IM-1-IM01检测限浓度为0.0057μg/ml；IM-2-IM01检测限浓度为0.0003μg/ml。
化合物IM-1、IM-1-IM01、IM-2、IM-2-IM01的检测限图分别如图11、图12、图13、图14所示。
3、系统适用性
连续进样6针，IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01的保留时间RSD值分别为0.45％、0.27％、0.62％、0.35％，峰面积RSD值分别为3.22％、4.07％、2.99％、4.38％。
4、专属性
空白溶剂不干扰IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01 4种杂质的检测。
化合物IM-1、IM-1-IM01、IM-2、IM-2-IM01的专属性图分别如图15、图16、图17、图18、图19、图20、图21、图22所示。
5、线性
混合母液：准确称量IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各约含1μg的溶液。并取此混合溶液0.15、0.3、1.5、2.4、3.0、4.5、6.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别按照上述检测方法1的高效液相色谱的色谱条件依次进样，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(y)，对照品质量浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程及线性范围如表3所示。
表3线性关系考察结果
由表3中结果表明，本发明高效液相色谱方法，各对照品在各自质量浓度范围内线性关系良好。
化合物IM-1、IM-1-IM01、IM-2、IM-2-IM01的线性图分别如图23、图24、图25、图26所示。
6、准确度
以0.3μg/ml作为100％限度浓度，分别设计50％、100％、150％等3种不同浓度，每种浓度分别制备3份供试品溶液进行测定，用9份样品的测定结果评价方法的准确度。准确度结果如表4所示。
表4准确度考察结果
由表4中结果表明，本发明方法的回收率高。杂质IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01在本方法下的含量测定结果准确。
7、精密度
重复性
取米拉贝隆对照品，加入一定量的杂质IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01；平行配制6份。考察方法重复性。结果表明，IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01测定结果的RSD分别为4.42％、4.76％、2.80％、3.78％。
中间精密度
照重复性项下，平行配制6份样品，与重复性共12份样品IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01测定结果的RSD分别为7.78％、18.10％、3.76％、3.29％。
8、溶液稳定性
对照品溶液室温放置12小时，IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01峰面积的RSD值分别为6.84％、4.27％、3.90％、6.20％。
试验例2、检测方法2方法学考察实验
1、定量限
分别量取IM-3-IM01、IM-K、IM-L 3种杂质对照品贮备液适量，将此溶液用甲醇逐级稀释至适宜浓度，在上述色谱条件下，以信噪比为10:1时注入色谱仪的量确定定量限。IM-3-IM01定量限浓度为0.01μg/ml；IM-K定量限浓度为0.01μg/ml；IM-L定量限浓度为0.006μg/ml。
化合物IM-K、IM-L、IM-3-IM01的定量限图分别如图27、图28、图29所示。
2、检测限
分取量取IM-3-IM01、IM-K、IM-L 3种基因毒杂质对照品贮备液适量，将此溶液用甲醇逐级稀释至适宜浓度，在上述色谱条件下，以信噪比为3︰1时注入色谱仪的量确定检测限。IM-3-IM01检测限浓度为0.00333μg/ml；IM-K检测限浓度为0.00333μg/ml；IM-L检测限浓度为0.002μg/ml。
化合物IM-K、IM-L、IM-3-IM01的检测限图分别如图30、图31、图32所示。
3、系统适用性
连续进样6针，IM-3-IM01、IM-K、IM-L保留时间RSD值分别为0.29％、0.72％，峰面积RSD值分别为2.51％、3.63％。
4、专属性
空白溶剂不干扰IM-3-IM01、IM-K、IM-L 3种杂质的检测。
化合物IM-K、IM-L、IM-3-IM01的专属性图分别如图33、图34、图35、图36所示。
5、线性
混合母液：准确称量IM-3-IM01、IM-K、IM-L各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各约含1μg的溶液。并取此混合溶液0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、1.5、2.0ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，分别按照检测方法2的色谱条件依次进样，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标(y)，对照品质量浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，进行线性回归。回归方程及线性范围见表5。
表5线性关系考察结果
由表5中结果表明，本发明高效液相色谱方法，各对照品在各自质量浓度范围内线性关系良好。
化合物IM-K+IM-L、IM-3-IM01的线性图分别如图37、图38所示。
6、准确度
以0.1μg/ml作为100％限度浓度，分别设计50％、100％、150％等3种不同浓度，每种浓度分别制备3份供试品溶液进行测定，用9份样品的测定结果评价方法的准确度。准确度结果如表6所示。
表6准确度考察结果
结果表明，本发明方法的回收率高。杂质IM-3-IM01、IM-K、IM-L在本方法下的含量测定结果准确。
7、精密度
重复性：
取米拉贝隆对照品，加入一定量的杂质IM-3-IM01、IM-K、IM-L；平行配制6份。考察方法重复性。结果表明，IM-3-IM01、IM-K+IM-L测定结果的RSD分别为1.56％、6.19％。
中间精密度：
照重复性项下，平行配制6份样品，与重复性共12份样品IM-3-IM01、IM-K+IM-L测定结果的RSD分别为4.59％、10.46％。
8、溶液稳定性
对照品溶液室温放置8小时，IM-3-IM01、IM-K+IM-L峰面积的RSD值分别为7.97％、3.85％。
本次试验过程中未发生偏差和变更，试验结果均符合既定的标准要求。证明本发明检测方法适用米拉贝隆成品中基因毒性杂质的质量控制。
Claims (8)
1.一种米拉贝隆中基毒杂质的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：取米拉贝隆供试品的溶液和基毒杂质标准品的溶液分别采用高效液相色谱-质谱联用进行分离检测，通过得到的质谱图中离子峰对比，如所述米拉贝隆供试品的溶液的质谱图中存在与所述基毒杂质标准品的溶液相同的定量/定性离子峰，则所述米拉贝隆供试品中存在基毒杂质；否则不存在；
所述基毒杂质标准品包括如下式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01、式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的方法中，还包括通过高效液相色谱测定所述米拉贝隆供试品的溶液与所述基毒杂质标准品的溶液的色谱图，通过外标法以峰面积计算，以对所述米拉贝隆供试品中所述基毒杂质进行定量的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：当所述基毒杂质标准品包括如下式Ⅰ所示化合物IM-1、式Ⅱ所示化合物IM-2、式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01、式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01时，所述高效液相色谱-质谱中，
高效液相色谱的检测条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相：乙腈与0.05％三氟乙酸水溶液，体积比为40:60；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
柱温：35℃；
进样体积：2μl；
采集时间：15min；
空白溶剂：甲醇；
质谱的检测条件如下：
离子源：ESI源；
探头温度：600℃；
采集速率：10点/秒；
气流量：20L/min。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述基毒杂质标准品的质谱选择离子监测参数如下：
所述式Ⅰ所示化合物IM-1的定量/定性离子为301.01m/z，正值，锥孔电压为16V，毛细管电压为0.8KV；
所述式Ⅱ所示化合物IM-2的定量/定性离子为287.07m/z，正值，锥孔电压为15V，毛细管电压为0.8KV；
所述式Ⅲ所示化合物IM-1-IM01的定量/定性离子为285.06m/z，正值，锥孔电压为15V，毛细管电压为0.8KV；
所述式Ⅳ所示化合物IM-2-IM01的定量/定性离子为271.06m/z，正值，锥孔电压为15V，毛细管电压为0.8KV。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：配制所述米拉贝隆供试品的溶液的步骤如下：准确称取米拉贝隆，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液；
配制所述基毒杂质标准品的溶液的步骤如下：准确称取IM-1、IM-2、IM-1-IM01、IM-2-IM01，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各含0.3μg的混合溶液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：当所述基毒杂质标准品包括式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01、式Ⅵ所示化合物IM-K或式Ⅶ所示化合物IM-L时，所述高效液相色谱-质谱中，
高效液相色谱的检测条件如下：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
流动相：乙腈与10mM乙酸铵体积比为30:70，乙酸调pH 6.5；
检测波长：251nm；
流速：0.8ml/min；
柱温：35℃；
进样体积：10μL；
采集时间：12min；
质谱的检测条件如下：
离子源：ESI源；
探头温度：600℃；
采集速率：10点/秒；
气流量：20L/min。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述基毒杂质标准品的质谱选择离子监测参数如下：
式Ⅴ所示化合物IM-3-IM01的定量/定性离子为241.20m/z，正值，锥孔电压为20V，毛细管电压为0.8KV；
式Ⅵ所示化合物IM-K的定量/定性离子为397.25m/z，正值，锥孔电压为20V，毛细管电压为0.8KV；
式Ⅶ所示化合物IM-L的定量/定性离子为397.25m/z，正值，锥孔电压为20V，毛细管电压为0.8KV。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：配制所述米拉贝隆供试品的溶液的步骤如下：准确称取米拉贝隆，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中含3mg的溶液；
配制所述基毒杂质标准品的溶液的步骤如下：准确称取IM-3-IM01、IM-K、IM-L，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各含0.1μg的混合溶液。
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